涉及hmgcr蛋白的治療預測的制作方法

專利名稱：涉及hmgcr蛋白的治療預測的制作方法
技術領域：
本披露涉及乳癌治療以及治療預測的領域。還涉及在這種治療或治療預測中可以 采用的手段。背景癌癥癌癥是在西方世界中疾病和死亡的最普通的原因之一。通常，對于癌癥的大多數 形式，發病率隨著年齡而增加。隨著人類種群持續活得更長，由于一般健康狀態的增進，癌 癥可能影響個體數量的增加。雖然在環境因素(飲食、吸煙、紫外線輻射等等)連同遺傳因 素(“癌基因”如p53、APC、BRCAl、XP等的種系突變)與癌癥的發生風險之間提供一種聯系 的知識體有增加，最普通癌癥類型的病因大部分仍然是未知的。從一種細胞生物學觀點看沒有完全令人滿意的癌癥的定義，盡管事實上癌癥基本 上是一種細胞疾病并且被定義為具有凈細胞生長以及抗群體行為的一種轉化細胞群體。惡 性轉化代表基于不可逆的遺傳改變以向一種惡性表型的轉變。雖然這還沒有正式證明，惡 性轉化是被認為是發生在一個細胞中，隨后從該細胞發展出的腫瘤開始了( “癌癥的克隆 性”教義)。致癌作用是通過它產生癌癥的過程并且通常被認為包括最后導致惡性腫瘤生 長的多個事件。這種多級過程包括若干限速步驟，如突變以及還可能的次生事件的加入，其 導致在癌前期增殖階段之后癌癥的形成。這些分級改變涉及決定細胞分裂、不合群行為、以 及細胞死亡的重要調節通路的錯誤(突變)的累積。與周圍的細胞相比，每一種這些改變 可以提供一種選擇性達爾文生長優勢，導致在腫瘤細胞群中的凈生長。一種惡性腫瘤不僅 必需由這些轉化腫瘤細胞它們本身組成，而且周圍正常細胞充當為一種支持性基質。這種 募集的癌癥基質包括結締組織、血管、以及各種其他的正常細胞例如炎癥細胞，它們一致地 起作用從而為這些轉化腫瘤細胞提供持續腫瘤生長必需的信號。最常見的癌癥的形式出現在體細胞中并且主要是上皮細胞起源的，如前列腺、乳 房、結腸、尿道以及皮膚；隨后是從造血系起源的癌癥如白血病和淋巴瘤、從神經外胚層起 源的癌癥如惡性膠質瘤、以及軟組織腫瘤如肉瘤。癌癥診斷和預測取自腫瘤的一種組織切片的顯微鏡評價仍然是確定一種癌癥的診斷的金標準。例 如，對于顯微鏡診斷，收集來自可疑腫瘤的活組織檢查材料并且在顯微鏡下檢查。為了獲得 一個確定的診斷，將該腫瘤組織在福爾馬林中固定、組織學處理、并且石蠟包埋。從該生成 的石蠟塊，可以產生組織切片并且使用組織化學(即蘇木精-伊紅染色)染色以及免疫組 織化學法二者。然后用病理學技術(包括肉眼分析以及顯微鏡分析)評價該外科標本。這 種分析通常形成用于給定一個特異性診斷的基礎，即進行腫瘤類型的分類以及一種腫瘤的 惡性程度的分級。根據對于各癌癥類型特異的分類法可以將惡性腫瘤分成若干階段。用于實體瘤的 最常見的分類系統是腫瘤-淋巴結-轉移(TNM)分期系統。T階段說明原發性腫瘤的局部 范圍，即該腫瘤已經侵襲并且強加地生長進入周圍組織到什么程度，而N階段以及M階段說明該腫瘤已經怎樣發生轉移，N階段說明該腫瘤擴散到淋巴結，并且M階段說明在其他遠隔 器官中腫瘤的生長。早期包括T0-1、NO、M0，表示具淋巴結陰性的局部性腫瘤。更晚期包 括T2-4、NO、M0，表示具有更廣泛生長的局部性腫瘤，以及Tl-4、Nl_3、MO表示已經轉移到 淋巴結的腫瘤，并且T1-4、N1-3、M1表示具有在遠隔器官中檢出的轉移的腫瘤。腫瘤的分期 通常是基于檢查的若干形式，包括外科、放射學以及組織病理學分析。除了分期之外，還有 一種對大多數腫瘤類型的惡性級別進行分級的分類系統。該分級系統依賴于一種腫瘤組織 樣品的形態學評估，并且以在一種給定的腫瘤中發現的微觀特征為基礎。這些分級系統可 以是基于腫瘤細胞的分化、增殖、以及非典型外觀。通常采用的分級系統的實例包括用于前 列腺癌的Gleason分級以及用于乳腺癌的Nottingham組織學等級(NHG)分級。準確的分期以及分級對于一種正確的診斷是重要的，并且可以提供一種預測預后 的工具。對于一種特異腫瘤的診斷和預測信息其后決定了一種對于給定的癌癥患者的適當 的治療策略。除組織切片的組織化學染色之外，為了獲得關于一種腫瘤的更多信息的一種 通常使用的方法是免疫組織化學染色。IHC允許使用特異性抗體檢測在組織和細胞中的蛋 白質表達譜。除了從組織化學染色的腫瘤組織切片評估的關于組織結構和細胞形態學的信 息之外，IHC在臨床診斷學中的用途允許檢測在不同的細胞群中的免疫反應性。IHC可以 涉及支持準確的診斷，包括一種原發性腫瘤的分期和分級連同未知起源的轉移的診斷。在 當今臨床實踐中最通常使用的抗體包括對抗細胞類型“特異性”蛋白，例如PSA(前列腺)、 MelanA(黑色素細胞)、以及甲狀腺球蛋白(甲狀腺)的抗體，以及識別中間絲的抗體(上 皮細胞、間充質、神經膠質)、分化群(CD)抗原(造血細胞、淋巴樣細胞的亞類)、以及惡性 潛能的標志物(例如Ki67 (增殖)、p53 (通常突變的腫瘤抑制基因)以及HER-2 (生長因子 受體)。除了 IHC以外，用于檢測基因擴增的原位雜交以及用于突變分析的基因測序的使 用是癌癥診斷內的展開技術。另外，所有轉錄物、蛋白質、或代謝物的整體分析增加了有關 信息。然而，大多數的這些分析仍然代表基礎研究并且對于在臨床醫學中的使用還有待評 價和標準化。乳癌乳癌是全世界癌癥的第二最常見的形式，并且到目前為止是女性最頻繁發生的癌 癥。來自由Parkin等人提出的GL0B0CAM2002數據庫的資料揭示在2002年有115萬個新 病例并且在同一期間有41萬個死亡病例(Parkin DM et al. (2005)CA Cancer J Clin 55， 74-108)。如果在一個早期檢測出，則對于生活在一個發達國家中的患者預后是相對好的， 與在一個發展中國家中的57%相比，具有73%的總體五年生存率。該發病率正在緩慢增 加，并且在發達國家中大約每九個女性中有一個在她的一生中被認為患上乳癌。雖然與雌 性類固醇激素相關的生活方式改變(包括暴露于外源性激素)影響發展乳癌的風險，這些 因素僅僅構成了病因學的一小部分，并且預防操作的益處被認為是低的。死亡率的降低主 要是由于通過乳房X線照相術篩選的早期檢測以及現代輔助全身療法的使用。乳癌的治療自從在七十年代后期它的引進，保乳治療(結合乳房保留手術以及手術后放射治 療)已經成為在女性中的第一位的治療選擇，其中腫瘤的根治性切除可以與一種好的美容 結果相結合。乳房切除術在一些患者即具有小乳房、大腫瘤(> km)或多病灶/多中心疾病的女性中仍然是優選的。腋窩切開主要是用于診斷目的而進行的，并且將至少10個淋巴結去除以給出一 種具有97%至98%敏感性的好的分期指導(Axelsson CK et al. (1992)Eur J Cancer 28A :1415-8 ；Recht A and Houlihan MJ(1995)Cancer 6(9) :1491-1512) 然而，對于原發 癌的治療中的微創手術的下一步已經引進了具有腋窩淋巴結定位而不是腋窩淋巴結清掃 (它與高的并發癥相關)的前哨淋巴結活檢技術。這種技術作為認識的結果而被引入，即認 識到從乳房到腋窩的大多數淋巴引流最初通過一個(或少數)淋巴結(前哨淋巴結)，其支 持這個淋巴結可能是腋窩淋巴結狀況的一種充分指示的分析(Veronesi U et al. (2003) New Engl J Med349(6) :546-53)。乳癌作為一種全身性疾病的概念，即在診斷時播散性微轉移的存在可以解釋在區 域治療后的治療失敗，為在七十年代輔助隨機試驗(包括內分泌療法和化學療法)鋪平了 道路。輔助的綜合化學療法是對于激素受體陰性的具有高復發風險的患者(不論淋巴結狀 況)的標準療法。已經證明尤其是在絕經前期患者中對總生存率以及無復發生存率二者的 有益效果(EBCTCG (1998) LanCet352 (913 :930-4 。對于具有激素應答疾病(例如雌激 素受體(ER)和/或孕酮受體(PR)陽性疾病)的患者，輔助的綜合化學療法已經與內分泌 療法相組合作為序貫化學內分泌療法而給予。并且，輔助化學治療通常引起閉經，引起除細 胞毒性之外的二次內分泌效應(Pagani 0 et al. (1998)Eur J Cancer 34(5) :632-40)。內分泌療法已經被推薦用于具有激素受體陽性腫瘤的患者(不論年齡、階段以及 絕經狀況)。在激素應答絕經前患者中，通過手術或照射去除卵巢或通過LHRH激動劑抑制 卵巢是有效的輔助治療方式(Emens LA and Davidson NA (2003) Cl in Ca Res(l Pt 2) 468S-94S)。在絕經后患者中，卵巢去除沒有位置，因為雌激素的原始來源不是從卵巢合成 而是來自在包括乳房的外周組織中的雄留烯二酮向雌酮和雌二醇的轉變。它莫西芬是一種具有對ER有拮抗作用的選擇性雌激素受體調節劑(SERM)，它促 成了一種在絕經前以及絕經后女性二者中用于晚期乳癌的適當的治療。研究已經顯示在具 有ER陽性(ER+)腫瘤的患者(不論淋巴結狀況)中在初期手術后給予五年的它莫西芬作 為輔助治療減少了乳癌的死亡率(EBCTCG(1998)Lancet 351 (9114) :1451-67)。雖然它莫 西芬具有一種免于心血管疾病的保護效應，由于對在子宮粘膜中的ER的拮抗作用，發展子 宮內膜癌的風險增加了 (EBCTCG(2005)Lancet 365(9472) :1687-717)。芳香酶抑制劑(Als)通過抑制芳香酶而起作用，該酶將雄激素轉換成雌激素。 例如，AIs可以作為輔助治療單獨地或繼它莫西芬治療之后給予絕經后女性，并且已經 顯示它們顯著降低了死亡率，如果單獨給予可能更好(Howell A et al. (1995)Lancet 345(8941) :29-30 ；Ellis MJ and Rigden CE(2006)Curr Med Res Opin 22(12) :2479-87; Coates AS et al. (2007) J Clin Oncol 25(5) :486-92)。然而，這種療法是相對新的并且 長期副作用還沒有完全認識(Buzdar A et al. (2006) Lancet Oncol 7(8) :633-43)，但最 重要的是心血管并發癥以及骨質疏松癥。新近研制的完全阻滯ER的純抗雌激素如氟維司群，目前僅僅用于晚期乳癌而不 在該輔助方案中(Rutqvist LE(2004)Best Pract Res Clin Endocrinol Metabl8(l) 81-95)。
雖然一些研究表明一些ER陰性的即ERa陰性(ERa-)腫瘤對它莫西芬治療有 應答，輔助內分泌療法被認為在激素受體陰性乳癌中沒有位置(EBCTCG (1998) Lancet 351 1451-1467)。在所有乳癌的約20 %并且在低分化乳癌中高達70 %過量表達HER2/neu基因 (Berger MS 等人(1988) Cancer Res 48(5) :1238-43 ；Borg Aet al. (1990) Cancer Res 50(14) :4332-7)。具有HER2過量表達的腫瘤患者可能受益于用單克隆抗體曲妥珠單抗的 治療。雖然臨床資料是不一致的(BorgAetal. (1994)Cancer Lett 81(2) 137-44， DePlacido S et al. (2003)Clin Ca Res 9(3) :1039-46, Ryden L et al. (2005) J Clin 0ncol23 (21) :4695-704)，實驗數據支持HER2過量表達與對內分泌治療的抗性之間的一種 關系(Shou J et al. (2004) J Natl Cancer Inst 96(12) :926-35) 乳癌診斷形態學標準通常仍然被認為在確立乳癌診斷(原位癌以及浸潤性癌二者)中是 重要的。在浸潤性乳腺癌中，浸潤性導管癌是最常見的腫瘤類型(約80%)，并且小葉癌 是第二大實體(約10%到15% )。小管癌以及髓樣癌是具有較低患病率的其他的獨特 類型(WHO, Histological typing of breast tumors, in International histological classification of tumors no :2,1981, WHO, Geneva)。乳癌預后和治療預測因素腫瘤類型的正確組織學分類可以是預后關聯性的，因為某些亞型如髓樣癌總體上 具有一種更好的預后。然而，使用Nottingham組織學分級(NHG)系統對組織學等級的評估 仍然是一種預后的手段(Elston Cff and Ellis 10(1991) 19(5) :403-10 ；Sundquist M et al. (1999)Breast Cancer Res Treat 53(1) :1_8)。大多數乳癌是激素受體應答的，即表達ER和/或ra。雌激素的作用是通過ER α 和ERi3 二種受體介導的。常規地評估ERa和I3R以選擇內分泌療法的患者，并且根據一個 標準，具有> 10%核陽性的腫瘤被認為是陽性的。ERa當今被認為是它莫西芬應答的一 種預報因子。然而，有研究表明I3R陽性甚至可能是一種比ERa更強的它莫西芬應答的預 報因子。將絕經前期患者隨機化至它莫西芬或沒有輔助內分泌治療的一項研究揭示在它莫 西芬治療的患者中，PR的高表達(> 75%核的部分)顯著地與無復發總生存率的增加相 關(不考慮ER α的狀況)。在一個較低的I3R水平(<75% )，沒有觀察到來自它莫西芬 治療的正面效果(Stendahl M et al. (2006)Clin Cancer Res 12:4614-18)。Yu 等人最 近研究了 I3R對于輔助內分泌療法的預測值，并且發現當具有ERa +/PR+腫瘤的年老的患者 O 60歲)用它莫西芬治療時與沒有接受輔助治療的那些患者相比，具有一種顯著較長的 無瘤生存率。在較年輕的患者中(<60歲)，沒有觀察到顯著作用(Yu KD et al. (2007) The Breast 16 :307-315)。有趣的是，來自ATAC試驗(用瑞寧得、它莫西芬、或它們的組合治療 的絕經后的女性)的一個報告顯示出與用它莫西芬治療的患者相比，經過6年的隨訪期對 于阿那曲唑治療的患有ERa+/PR-腫瘤的患者其復發率減半(Dowsett M et al. (2005) J Clin 0ncol23(30) :7512-7)。在乳癌中ERi3的作用仍然沒有完全弄清楚，雖然最近的研究暗示ERi3表達可 能與一種更好的它莫西芬應答相關(Borgquist S et al, (2008) J Clin Pathol61(2)197-203)，特別是在 ER α-腫瘤中(Gruvberger-Saal SK et al. (2007) Clin Cancer Res 13:1987-1994)。然而，ERi3的測定當今通常認為是臨床上不相關的。當今主要的問題是30% -40%的ERa陽性(ERa +)患者不響應于它莫西芬治療 (Riggins RB et al. (2007)Cancer Letters 1:1-24, Gruvberger-Saal SK et al. (2007) Clin Cancer Res 13 :1987-1994)，這一問題導致了不必要的治療。此外，一部分ERa-患 者響應于它莫西芬治療，并且對此的原因目前是未知的。Gruvberger-Saal提示ER β表 達可能是在ERa-患者中它莫西芬應答的一種陽性預報因子(Gruvberger-Saal SK et al. (2007)Clin Cancer Res 13:1987-1994)。還常規評估(主要通過IHC)HER2狀況，并且在具有適度表達的情形下，通過 熒光原位雜交(FISH)分析確定基因擴增狀況。具有一種HER2陽性腫瘤的患者可能受益于 用曲妥珠單抗的治療。乳癌是一種真正的異質性疾病，并且盡管對其性質的了解增加，可用的預后性和 治療預測性標志物的武器庫仍然是不足的并且一些患者可能因此接受不必要的治療，而其 他的患者可能得到不充分的或甚至無效的治療。為了更好地定義不同的亞型的乳癌并且增 加對于定制的療法的選項，需要另外的分子標志。終點分析端點分析用于評價對于癌癥的輔助治療的試驗，因為這給出這些患者怎樣響應某 一種療法的信息。端點分析還可能對于潛在的生物標記的研究是有用的。總生存數(OS)已經被認為是標準的主要的終點。OS考慮到死亡時間，而不論原 因，例如是否該死亡是由于癌癥或不是由于癌癥。檢查了失訪，并且忽略了區域性復發、遠 處轉移、第二原發乳癌、以及第二其他的原發癌。至今，在許多類型的癌癥中可用的有效治 療的數量的增加已經導致對于替代性終點的需要以允許更好地評價輔助治療的效果。因 此，要求長得多的隨訪以證明輔助治療改進OS通常與是其他的臨床終點(對于治療是如何 成功給出一種較早的指示)互補的。對于這些觀察，可以分析研究無復發生存率(RFS)以 及乳癌特異性生存率(BCSQ。RFS包括與同樣的癌癥相關的任何事件的時間，即來自同樣 的所有癌癥復發以及死亡是事件。考慮了遠處、局部、以及區域轉移連同乳癌特異性死亡。 另一方面，忽略了第二原發的同樣的癌癥及其他原發癌連同對側乳癌。由于其他的癌癥的 死亡、非癌癥相關的死亡、治療相關的死亡、以及失訪是截尾觀察。乳癌特異性生存(BCSS) 包括由于最初腫瘤的乳癌引起的到死亡時間。二者的終點是相關的，因為相似或差異可以 反映不同的腫瘤生物學行為。與一種局部侵襲行為相關的生物標志物可以例如對RFS(比 BCSS)具有更大的影響，而與遠處轉移的發展相關的生物標志物可以反映在RFS和BCSS 二 者中。說明書本披露的一些方面的一個目的是提供關于患有一種乳癌的哺乳動物受試者的在 治療預測(尤其是乳癌治療預測)中有用的手段、方法、和/或用途。本披露的一些其他方面的一個目的是提供在這樣一個受試者的治療中有用的手 段、方法、和/或用途。因此，作為本發明的第一方面的一種第一構型，提供了用于確定是否患有一種乳 癌的哺乳動物受試者可能受益于一種內分泌治療的方法，該方法包括以下步驟
a)提供一種較早從所述受試者獲得的樣品；b)評價存在于至少部分所述樣品中HMGCR蛋白的量，并且確定一個與所述量對應 的樣品值；c)將在步驟b)中獲得的樣品值與一種參考值相比較；以及，如果所述樣品值是高于所述參考值的，d)則做出該受試者可能受益于一種內分泌治療的結論。關于本披露的這些方法的步驟b)，HMGCR蛋白的量的增加典型地導致了樣品值的 增加而不是相反。然而，在一些實施方案中，該評價的量可以與離散樣品值的任何一個預設 的數量對應。在這類實施方案中，第一個量和第二個增加的量可以與該同樣的樣品值對應。 無論如何，在本披露的情況下，HMGCR蛋白的量的增加將不會導致該樣品值的減少。雖然不便，但在一個等效的方式中，如果在步驟C)與d)之間的條件是“如果該樣 品量低于該參考值”，則該評價的量可能與樣品值逆相關(見以上方法)。細節上作必要的 修改，這應用于本披露的其他方法方面、構型、以及實施方案。在本披露的情況下，“可能受益于一種內分泌治療”是指如果經歷一種內分泌治療 比如果不經歷一種內分泌治療具有一個更高的生存或恢復的機率。在這種情況下，“恢復” 是指從一種乳癌狀態返回一種無乳癌狀態。該“生存率”可以是一種無復發生存率或一種 乳癌特異性生存率。此外，該“恢復”可以是一種無復發的恢復。此外，該“更高的機率”可 以是至少5% (如至少10% )的在五年、十年或15年的一種機率利益。本披露的第一方面是基于以前未被認識的事實，即在獲自患有一種乳癌的受試者 的一種樣品中，HMGCR蛋白的表達可以作為在該受試者中對內分泌治療的應答的一種指示 物。更特別的是，諸位發明人已經鑒定出在遭受乳癌的患者中，HMGCR蛋白的值(在一方面) 與內分泌治療后的生存率(在另一方面)之間的一種相關性。典型地，高HMGCR蛋白值在 此顯示出與內分泌治療的應答有關。基于HMGCR蛋白表達作為一種乳癌治療指示物，本披 露提供了許多益處。首先，它提供了一種另外的或替代的用于預測是否一位患者可能應答 于內分泌治療的手段。其次它鑒別了激素受體陰性患者的一個亞群(與早期的信念相反， 受益于內分泌治療)。因此，本披露可以提供一種先前治療不充分群體的準確治療。第三， 本披露鑒別了一個總體上不受益于內分泌治療的乳癌患者的亞群。傳統上，具有激素受體陰性乳癌(尤其是ER-乳癌)的受試者沒有接受到系統性 內分泌治療。然而，如本披露所示，用內分泌治療提高了在具有激素受體陰性(如ER-或 PR-、ER-、PR-、或ER-并且PR-)的具有高HMGCR值的乳癌受試者的亞群中的生存率。因此， 諸位發明人已經鑒定出可以用一種內分泌治療進行治療的受試者的新的亞群。因此，本披 露的不同方面可以是特別與患有激素受體陰性癌癥的受試者相關的。作為該第一方面的一個第二構型，提供了用于確定是否患有一種乳癌的哺乳動物 受試者應該經歷一種內分泌治療的方法，該方法包括以下步驟a)提供一種較早從所述受試者獲得的樣品；b)評價存在于至少部分的所述樣品中的HMGCR蛋白的量，并且確定與所述量對應 的一個樣品值；c)將在步驟b)中獲得的樣品值與一種參考值相比較；以及，如果所述樣品值是高 于所述參考值的，
d)則做出該受試者應該經歷一種內分泌治療的結論。作為一個本發明的第一方面的第三構型，提供了對于患有一種乳癌的哺乳動物受 試者的一種非治療策略的方法，該方法包括a)提供一種較早從所述受試者獲得的樣品；b)評價存在于至少部分所述樣品中的HMGCR蛋白的量，并且確定與所述量對應的 一個樣品值；c)將在步驟b)中獲得的樣品值與一個參考值相比較；以及，如果所述樣品值是低于或等于所述參考值的，d)則避免用一種內分泌治療治療所述受試者。例如，步驟d)的避免可以是在至少距離完成步驟a)-C)的一個星期，如至少距 離完成步驟a)_c)的一個月、如至少距離完成步驟a)_c)的三個月、如至少距離完成步驟 a)-c)的六個月、如至少距離完成步驟a)-c)的一年、如至少距離完成步驟a)-c)的兩年的 期間避免。可替代地，步驟d)的避免可以是直到下一次進行該方法或直到一種乳癌腫瘤的 復發時避免。在該第一方面的一個到三個構型的實施方案中，該乳癌可以是一種激素受體陰性 乳癌，如一種ER-或PR-乳癌、一種ER-乳癌、一種PR-乳癌、或一種ER-并且PR-乳癌。例 如，該乳癌可以是先前診斷為激素受體陰性的。通常，激素受體狀況如ER狀況或冊狀況，可以根據任何本領域熟練的技術人員已 知的方法而評定，并且本領域的技術人員知道如何獲得一個患者的ER和/或ra狀況。例 如，這類信息可以從使用可商購獲得的ER/PR PharmDX試劑盒(DakoCytomation)的一個測 試的結果而獲得。作為另一個實例，可以用披露于Allred等人(1998)Mod Pathol 11(2), 155)的方法獲得總評分(Allred評分)，并且對于ER和I3R 二者，比二者高的一個Allred 評分被認為是陽性的，而比二者低的一個Allred評分被認為是陰性的。可替代地，當對于 在一種樣品作為對于ER或ra是陽性或陰性進行分類時，可以使用10%陽性細胞的一個截 斷值，其被認為是在本領域內的一個限度。在本領域的普通技術人員知道如何獲得一位患者的ER和/或I3R狀況。例如，這 類信息可以從使用可商購獲得的ER/ra PharmDX試劑盒(DakoCytomation)的一個測試的 結果而獲得。作為另一個實例，可以用披露于Allred等人(1998) Mod Pathol 11(2),155) 的方法獲得總評分(Allred評分)，并且用于ER和I3R 二者，比二者高的一種Allred評分 被認為是陽性的，并且比二者低的一種Allred評分被認為是陰性的。可替代地，當對于在 一種樣品作為對于ER或ra是陽性或陰性進行分類時，可以使用10%陽性細胞的一個截止 值，其被認為是在本領域內的一個限度。如果沒有另外說明，在本披露的情況下“ER”是指“Era ”。作為本發明的第一方面的一個第四構型，提供了用于確定是否患有一種乳癌的哺 乳動物受試者可能受益于一種內分泌治療的方法，該方法包括以下步驟a)提供一種較早從所述受試者獲得的樣品；b)評價存在于至少部分所述樣品中HMGCR蛋白的量，并且確定與所述量對應的一 個樣品值；
c)將在步驟C)中獲得的樣品值與一個參考值相比較；以及由此確定所述受試者 的HMGCR狀況；d)獲得對于所述受試者的ER狀況；以及如果所述ER狀況或所述HMGCR狀況是陽性的，el)則做出該受試者可能受益于一種內分泌治療的結論，或如果所述ER狀況以及所述HMGCR狀況是陰性的，e2)則做出該受試者不可能受益于一種內分泌治療的結論。然而由同樣的概念的密切相關和覆蓋，el)和提供了兩個可替代的結論選項。 因此，該第一方面的第四構型的方法可以回答是否患有一種乳癌的受試者可能受益于一種 內分泌治療的問題或者是否患有一種乳癌的受試者不可能受益于一種內分泌治療的問題。 因此，該第一方面的該第四構型的方法可以(但不是必需的)包括步驟el)連同其所附的 條件(“if短語”)以及步驟&)連同其所附的條件(“if短語”)二者。例如，在步驟c)中，如果該樣品值是高于該參考值則該HMGCR狀況可以被認為是 陽性的，并且如果該樣品值是低于或等于該參考值則該HMGCR狀況可以被認為是陰性的。來自受試者的一種單一樣品可以例如借助于免疫組織化學提供ER狀況和HMGCR 狀況二者。因此，在本披露的這些方法方面的實施方案中，該ER狀況可以從步驟a)的樣品 獲得。此外，該ER狀況可以從一種組織材料獲得，從該組織材料還獲得了步驟a)的樣品。 因此，可以將來自該受試者的所需活組織檢查的數量或生物材料的量保持較低。作為本披露的第一方面的一個第五構型，提供了一種方法，該方法用于確定是否 與存在于至少部分的一種樣品(較早獲自患有一種乳癌的一個哺乳動物受試者)中的 HMGCR蛋白的量對應的一個樣品值支持向該受試者施加一種內分泌治療的決定，該方法包 括以下步驟a)提供較早從所述受試者獲得的樣品；b)評價存在于該樣品的至少部分中的HMGCR蛋白的量，并且確定與該量對應的一 個樣品值；c)將在步驟b)中獲得的樣品值與一個參考值相比較；以及，如果所述樣品值是高于該參考值的，dl)則做出該樣品值支持用一種內分泌治療來治療該受試者的決定的結論，和/ 或如果該樣品值是低于或等于該參考值的，d2)則做出該樣品值支持避免用一種內分泌治療來對該受試者進行治療的決定的結論。然而由同樣的概念的密切相關和覆蓋，該第一方面的該第五構型的dl)和d2)提 供了兩個可替代的結論選項。因此，該方法可以回答是否該樣品值支持避免用一種內分泌 治療對該受試者進行治療的一個決定的問題，或是否該樣品值支持用一種內分泌治療對該 受試者治療的一個決定的問題。因此，該第一方面的該第五構型的方法可以(但不是必需 的)包括步驟dl)連同其所附的條件(“if短語”)以及步驟業)連同其所附的條件(“if 短語” )-~ 者ο在決定對于患有乳癌的患者的一個適當的治療策略時，對于該治療負責的醫師可以考慮若干參數，如一種免疫組織化學評價的結果、患者年齡、激素受體狀況、總體狀況、醫 療史(如乳癌史)以及遺傳特征(如在該受試者的家族中是否存在乳癌的病史)。為在這 種決定中被指導，該醫師可以進行一個HMGCR蛋白試驗，或根據該第一方面命令執行一個 HMGCR蛋白試驗。在這種情形下，根據該第一方面的第五構型的一種方法可能是特別相關 的。此外，該醫師可以命令其他人，如實驗室人員執行根據本披露的一種方法的部分， 如步驟a)到c)，并且由他親自執行剩余部分如步驟d)或e)。作為該第一方面的第六構型，提供了用于確定關于患有一種乳癌的哺乳動物受試 者的一種內分泌治療預測的方法a)提供來自所述受試者的一種樣品；b)評價存在于該樣品的至少部分中的HMGCR蛋白的量，并且確定與所述量對應的 一個樣品值；c)使步驟b)的該樣品值與用于該受試者的內分泌治療預測相關。在以上方法的一個實施方案中，該樣品可以是一種較早獲得的樣品。步驟c)的相關性是指使生存率資料與獲得的樣品值相關聯的的任何途徑以建立 該治療預測。在高HMGCR蛋白表達與對內分泌治療的應答性之間的鑒定的相關性還可以形成 一個用于對于該受試者的治療的一個特異性方案的基礎。因此，本披露的第二方面的第一 構型提供了一種在對其有需要的哺乳動物受試者中的治療方法，其中所述受試者患有一種 乳癌，該方法包括以下這些步驟a)提供來自所述受試者的一種樣品；b)評價存在于所述樣品的至少部分中的HMGCR蛋白的量，并且確定與所述量對應 的一個樣品值；C)將在步驟b)中獲得的樣品值與一個參考值相比較；以及，如果所述樣品值是高于所述參考值的，d)則用一種內分泌治療方案治療所述受試者。在該第二方面的第一構型的實施方案中，該乳癌可以是一種激素受體陰性乳癌， 如一種ER-或PR-乳癌、一種ER-乳癌、一種PR-乳癌、或一種ER-并且PR-乳癌。例如，該 乳癌可以是先前診斷為激素受體陰性的。作為該第二方面的第二構型，提供了一種對其有需要的哺乳動物受試者中的治療 方法，其中所述受試者患有一種乳癌，該方法包括以下這些步驟a)提供來自所述受試者的一種樣品；b)評價存在于所述樣品的至少部分中的HMGCR蛋白的量，并且確定與所述量對應 的一個樣品值；c)將在步驟c)中獲得的樣品值與一個參考值相比較；以及由此確定所述受試者 的HMGCR狀況；d)獲得對于所述受試者的ER狀況；以及如果所述ER狀況或所述HMGCR狀況是陽性的，el)則用一種內分泌治療方案治療所述受試者，或
如果所述ER狀況以及所述HMGCR狀況是陰性的，e2)則用一種非內分泌治療方案治療所述受試者。然而由同樣的概念的密切相關和覆蓋，該第二方面的第二構型的el)和e2)提供 了兩個可替代的結論選項。因此，該方法可以涉及一種內分泌治療方案或一種非內分泌治 療方案。因此，該第二方面的第二構型的方法可以(但不是必需的)包括步驟el)連同其 所附的條件(“if短語”)以及步驟&)連同其所附的條件(“if短語”)二者。通常關于本披露的治療方面的方法，對該受試者的治療負責的醫師可以由他親自 執行步驟a)到c)，或指示其他人如實驗室人員去執行它們。在本披露的情況下，一種“內分泌治療”是指具有一種抗雌激素作用的一種全身療 法。此外，“抗雌激素作用”是指在身體內雌激素產生的抑制或雌激素效應的抑制。在本領 域中，一種內分泌治療有時被稱為一種抗激素治療。本披露的“內分泌治療”可以選自下組，其組成為一種選擇性雌激素受體調節劑 (SERM)治療、一種芳香酶抑制劑治療、以及一種留體雌激素受體拮抗劑治療。該SERM治療 例如可以選自一種托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬、阿佐昔芬、以及它莫西芬治療。該芳香酶 抑制劑治療例如可以選自阿那曲唑、來曲唑、以及依西美坦治療。此外，該留體雌激素受體 拮抗劑治療可以是一種用氟維司群的治療。取決于該靶組織，一種SERM可能具有一種激動或拮抗作用。例如，一種SERM可以 作為在乳房中的一種拮抗劑并且作為在子宮中的一種激動劑。在本披露的實例部分中，提出了用SERM它莫西芬治療的不同的結果。這些結果顯 示HMGCR蛋白表達的水平與預測這些受試者對它莫西芬治療是否應答是相關的。因此，在 本披露優選的實施方案中，該內分泌治療是它莫西芬治療。例如，本披露的“非內分泌治療”可以是選自化學療法、放射療法、以及它們的組 合。這些化學療法包括單一或綜合化學療法，如用CMF (環磷酰胺、甲氨喋呤、5-氟尿嘧啶)、 FEC(氟尿嘧啶、表柔比星、環磷酰胺)、和/或紫杉烷類的治療。此外，如果該乳癌是HER2 陽性(HER2+)的，則該非內分泌治療可以是一種抗HER2治療，如用一種抗HER2抗體例如曲 妥珠單抗的治療在本披露的情況下，“患有一種乳癌的哺乳動物受試者”是指患有一種原發或繼發 乳房腫瘤的哺乳動物受試者或已經從乳房去除腫瘤的哺乳動物受試者，其中該腫瘤的去除 是指通過任何類型的手術或療法殺死或去除該腫瘤。在這個后者實例中，該腫瘤例如可以 已經在前一年內被去除。例如，已經通過手術將一種乳房腫瘤去除并且即將接受輔助治療 的一個受試者在本披露的情況下被認為是“患有一種乳癌”。“乳房腫瘤”包括導管原位癌 (DCIS)。在本披露的方法和用途方面中，“患有一種乳癌的哺乳動物受試者”還包括其中該 哺乳動物受試者在執行該用途或方法的時候被懷疑患有一種乳癌并且隨后確立乳癌診斷 的情形。在本披露的這些方法方面的情況下，“較早獲得”是指在執行該方法之前獲得。因 此，如果在一種方法中提供了較早從一個受試者獲得的一種樣品，該方法不涉及從該受試 者中獲得該樣品，即該樣品是在與該方法分離的一個步驟中從該受試者在先獲得的。因此，本披露的所有方法和用途可以完全在體外進行，除非另有說明。以上方面的這些方法的步驟b)涉及評價存在于該樣品的至少部分中的HMGCR蛋白的量并且確定與該量對應的一個樣品值。該“該樣品的至少部分”是指該樣品的一個相 關部分或多個相關部分，用于建立治療預測或得出關于適當治療的結論。本領域的技術人 員了解在呈現當執行該方法的情況下哪個或哪些部分是相關的。例如，如果該樣品包括腫 瘤和非腫瘤細胞，該技術人員可以僅僅考慮這些腫瘤細胞，并且僅僅考慮該樣品的這些腫 瘤細胞的細胞質。此外，在步驟b)中評價了一個量，并且確定了與該量對應的一個樣品值。因此，用 于獲得該樣品值不要求精確地測量HMGCR蛋白的量。例如，可以通過目測一種染色組織樣 品來評價HMGCR蛋白的量，并且然后可以將該樣品值進行分類為高或低(例如基于該評價 的量)。本領域的普通技術人員了解如何執行這類評價和測定。仍然進一步在本披露的情形下，該“參考值”是指一個預定值，該值是與作出關于 治療或治療預測的決定或結論相關的。本披露的資料是基于人類女性的群體。因此，在本披露的實施方案中，該“哺乳動 物受試者”可以是一個人。此外，在本披露的實施方案中，該“哺乳動物受試者”可以是一位 女性如一位絕經前或絕經后的女性。將內分泌治療給予絕經前或絕經后的受試者二者。通 常認為絕經前的女性是更響應于它莫西芬治療的。因此，在某些實施方案中，尤其是在它莫 西芬被選為內分泌治療的那些患者中，絕經前期人類女性受試者可以是一種特定相關的群 體。本披露的這些診斷的或治療的腫瘤可以在任何期。然而，如說明在部分4的實例 中的研究的這些受試者患有II期浸潤性乳癌。根據 !分期系統，II期是指pT2 NO MO或 pTl-2 Nl M0。因此，在本披露的實施方案中，該“乳癌”可以是一種II期乳癌。此外，在本披露的實施方案中，該“乳癌”可以是一種淋巴結陰性或一種淋巴結陽 性的乳癌(例如參見圖4)。“淋巴結陰性癌癥”和“淋巴結陽性癌癥”分別是指已經和還未 擴散到淋巴結的一種癌癥。如圖4至圖7以及圖9所見，特別強調了在淋巴結陽性乳癌中HMGCR蛋白表達的 治療預測作用。因此，在本披露的實施方案中，該乳癌可以是淋巴結陽性的。在以上方面的這些方法的實施方案中，該樣品可以是一種體液樣品，如血液、血 漿、血清、腦脊液、淋巴液、尿液、或滲出液物的一種樣品。優選地，該體液樣品是血液、血漿、 血清、腦脊液、或淋巴液的一種樣品。可替代地，該樣品可以是一種細胞學樣品或一種糞便 樣品。優選地HMGCR蛋白表達的水平可以是在細胞內測量的。因此，該體液、細胞學或糞 便樣品可以是例如包括細胞，如腫瘤細胞。在以上方面的這些方法的進一步的實施方案中，該樣品可以是一種組織樣品，如 一種腫瘤組織樣品。作為一個實例，該組織樣品可以來源于一種原發乳房腫瘤，如一種原位 或浸潤性癌或一種繼發腫瘤(轉移)。借助于免疫組織化學，這些組織樣品促進HMGCR蛋白 表達分析。諸位發明人已經發現相關的HMGCR蛋白表達主要在細胞質。因此在本披露的這些 方法的實施方案中，步驟b)的評價可能限于該樣品的細胞(如腫瘤細胞)的細胞質。當該 評價限于細胞質時，僅有細胞質的的特征如HMGCR蛋白表達考慮在該評價中。可以例如通 過免疫組織化學染色來輔助這類評價。
諸位發明人已經發現遭受乳癌并且基本上沒有HMGCR蛋白表達的受試者通常在 內分泌治療后具有差的生存(參見實例，部分4和圖)。因此，確定是否該受試者是“HMGCR 高”或“HMGCR低”的“截止值”可以是0。因此，在本披露的這些方法的實施方案中，步驟b)的樣品值可以是1(對應于在該 樣品中可檢出的HMGCR蛋白)，或0 ((對應于在該樣品中沒有可檢出的HMGCR蛋白)。因此， 在這類實施方案中，該樣品的評價是數字的HMGCR蛋白被認為是或者存在或者缺乏的。在 本披露的情形下，“沒有可檢出的HMGCR蛋白”是指HMGCR蛋白的量是如此低以至于在正常 的操作情況期間它通過執行根據以上方面的任一項的方法一個人或一個器具是不可檢出 的。該“正常的操作情況”是指本領域的技術人員將發現的用于完成本發明的實驗室方法 和技術。因此，在本披露的這些方法的實施方案中，步驟C)的參考值可以是0。并且由此得 出結論.，在本披露的這些方法的進一步的實施方案中，步驟c)的參考值可以與不具有可 檢出的HMGCR蛋白的一個參比樣品相對應(見下文)。一個比該參考值高的HMGCR蛋白的樣品值或一個獲得這樣的樣品值的受試者，有 時在此稱為“HMGCR蛋白高的”。此外，一個比該參考值低的或與之相等的HMGCR蛋白的樣 品值或一個獲得這樣的樣品值的受試者，有時在此稱為“HMGCR蛋白低的”。在本披露的情況下，應當廣義地解釋術語“樣品值”以及“參考值”。為了獲得這些 值的HMGCR蛋白的定量可以通過自動裝置，通過一個基于樣品的視覺或顯微檢查的評分系 統，或通過它們的組合而完成。然而，對于一位技術人員如組織病理學領域的一位技術人員 還可能的是，僅僅通過例如用于HMGCR蛋白表達的已經染色的組織切片的檢查就確定該樣 品值和參考值。比該參考值高的該樣品值的測定可以因此對應于在視覺或顯微檢驗上的測 定(比在一個參比組織切片的情況下樣品組織切片染色更致密和/或展示了染色細胞的一 個更大的部分)。還可以將該樣品值與由一篇文字引用給予的一個參考值(如以文本編輯 或由一個參考圖像說明的一個參考值)相比。因此，該樣品和/或參考值在一些情況下可 以是技術人員在檢查和比較上確定的精神值。例如，這些技術人員可以將一個樣品分類為HMGCR蛋白高或低，其中如果該樣品 含有比一個先前檢查的參比樣品更多的HMGCR蛋白，則該樣品被分類為高；如果該樣品含 有比一個先前檢查的參比樣品少或與之幾乎相等的HMGCR蛋白，則該樣品被分類為低。可 以通過染色該樣品來輔助這樣的評價，并且如果有必要，將一個參比樣品用包括如對于 HMGCR蛋白有選擇性的抗體的一種染色液進行染色。可以不同的方式來提供發現與作出關于乳癌受試者的治療決定相關的一個參考 值(用于與來自該受試者的樣品值進行比較)。用本披露的這些傳授內容的知識，技術人員 可以在無需不適當的負擔下提供用于執行本披露的這些方法的相關參考值。執行以上方面的這些方法的人員例如可以使該參考值適應于所希望的信息。例 如，可以使該參考值適應于產生最顯著的治療預測信息，例如在HMGCR蛋白高生存曲線與 HMGCR蛋白低生存曲線之間的最大間距(參見例如

圖1)。可以產生一種大間距的一個參考 值的一個實例是一種缺乏的細胞質強度。在以上方面的這些方法的實施方案中，該參考值可以對應于在一種健康組織(如 該方法的受試者的一種健康乳房組織或基質組織)中的HMGCR蛋白表達的的量。作為另一個實例，該參考值可以通過在來自另一個可比較的受試者的正常組織的一種標準樣品中 測量的HMGCR蛋白表達的量而提供。作為另一個實例，該參考值可以通過在一種包括腫瘤 細胞的參比樣品如一種包括腫瘤組織(例如乳癌組織)的參比樣品中測量的HMGCR蛋白表 達的量而提供。可優選地，該參比樣品的蛋白表達的量是先前確定的。因此，該參考值可以 通過在包括表達一種預定量的HMGCR蛋白的細胞的參比樣品中測量的HMGCR蛋白的量而提 {共。此外，該參考值例如可以通過在一種包括表達一個預定或控制量的HMGCR蛋白的 細胞系(如癌細胞系)的參比樣品中測量的HMGCR蛋白表達的量而提供。本領域的普通技 術人員了解如何提供這類細胞系，例如由Rhodes等(2006)The biomedical scientist, ρ 515-520的披露引導。因此，在本披露的這些方法的實施方案中，該參考值可以是與在一個參比樣品中 HMGCR蛋白表達的量相對應的一個預定值。然而，如以下進一步論述的，在這個參比樣品中HMGCR蛋白的量不必直接與該參 考值相對應。該參比樣品還可以提供一個HMGCR蛋白的量，這個量有助于一個執行該方法 的人員評定不同的參考值。例如，該一種或多種參比樣品可以有助于通過提供一個“陽性” 參考值和/或一個“陰性”參考值來創造該參考值的一個精神圖像(mental image) 0對于在一個樣品(如從該受試者較早獲得的樣品或參比樣品)中的HMGCR蛋白 表達的定量的一個替代方案，是確定在顯示出HMGCR蛋白表達超過某一水平的樣品中的細 胞的部分。該部分例如可以是一種“細胞部分”，其中整個細胞的HMGCR蛋白表達被考慮； 一種“細胞質部分”，其中僅僅這些細胞的細胞質的HMGCR蛋白表達被考慮；或一種“核部 分”，其中僅僅這些細胞的細胞核的HMGCR蛋白表達被考慮。該細胞質部分可以分類為例如 < 2^^2%至25%、> 25%至75%、或> 75%的有關細胞群體的免疫反應細胞。該“細胞 質部分”對應于在細胞質中顯示出陽性染色的樣品中的相關細胞的百分比，其中一種在細 胞質中的中等的或顯著而強烈的免疫反應性被認為是陽性的，并且在細胞質中沒有或微弱 的免疫反應性被認為是陰性的。病理學領域的技術人員了解存在于當執行該方法的條件下 哪些細胞是有關的，并且可以基于他的常識和本披露的教導而確定一種細胞質部分。這些 有關的細胞可以是例如腫瘤細胞。此外，技術人員了解如何采用該“細胞部分”或該“核部 分”執行對應的測量。對于在一個樣品(如從該受試者較早獲得的樣品或參比樣品)中的HMGCR蛋白表 達的定量的另一個替代方案，是確定該樣品的總的染色強度。該強度例如可以是一種“細 胞強度”，其中整個細胞的HMGCR蛋白表達被考慮；一種“細胞質強度”，其中僅僅這些細胞 的細胞質的HMGCR蛋白表達被考慮；或一種“核強度”，其中僅僅這些細胞的細胞核的HMGCR 蛋白表達被考慮。細胞質強度是依照臨床組織病理學診斷上使用的標準而被主觀評價的。 一種細胞質強度測定的結果可以被分類為缺乏的=在該樣品的相關細胞的細胞質中沒有 總體免疫反應性，微弱的=在該樣品的相關細胞的細胞質中微弱的總體免疫反應性，中等 的=在該樣品的相關細胞的細胞質中的中等的總體免疫反應性，或強的=在該樣品的相關 細胞的細胞質中顯著而強烈的總體免疫反應性。本領域的普通技術人員了解存在于當執行 該方法的條件下哪些細胞是有關的，并且可以基于他的常識和本披露的教導而確定一種細 胞質強度。這些有關的細胞可以是，例如腫瘤細胞。例如可以如在以下部分4的實例中說明的“細胞質強度”的定義而進行細胞質強度的確定。此外，技術人員了解如何采用“細胞 強度”或“核強度”執行對應的測量。諸位本發明人已經發現HMGCR蛋白的細胞質表達特別與作出治療預測有關。因 此，在以上方面的這些方法的實施方案中，該參考值可以是一種細胞質部分、一種細胞質強 度或它們的一種組合。因此，該樣品值可以是一種細胞質部分、一種細胞質強度或它們的一 種組合。優選地，該樣品值以及該參考值二者都是相同類型的值。在以上方面的這些方法的實施方案中，用于在步驟d)中的結論的標準是HMGCR蛋 白陽性細胞的細胞質部分的一個樣品值，即一種“細胞質部分”，該細胞質部分高于0 %，如 高于1%，如高于2%，如高于5%，如高于10%，如高于15%，如高于20%，如高于25%，如 高于30%，如高于35%，如高于40%，如高于50%，如高于60%，如高于70%，如高于75%， 如高于80%，如高于90%。在以上方面的這些方法的可替代的或補充的實施方案中，步驟C)的參考值是 95 %或更低，如90 %或更低，如85 %或更低，如80 %或更低，如75 %或更低，如70 %或更低， 如65 %或更低，如60 %或更低，如55 %或更低，如50 %或更低，如45 %或更低，如40 %或更 低，如35%或更低，如30%或更低，如25%或更低，如20%或更低，如15%或更低，如10% 或更低，如5 %或更低，如2 %或更低，如1 %或更低，如0 %的一種細胞質部分。諸位發明人已經認識到低截止值(如為0的值)與治療預測是特別有關的。然 而，他們已經進一步注意到這些檢查的腫瘤樣品總體上顯示出高于50%的一種細胞質部分 或或更低的一種細胞質部分，其中前者組與對它莫西芬的應答相關聯。因此，如果該參 考值是一種細胞質部分，它優選是50 %或更低，如25 %或更低，如20 %或更低，如15 %或更 低。最優選的是10 %或更低，如5 %或更低，如2 %或更低，如1 %或更低的，如0 %。此外，在以上方面的這些方法的實施方案中，用于在步驟d)中的結論的標準可以 是對于一種樣品的染色強度的一個樣品值，即一種細胞質強度，該細胞質強度高于缺乏的 細胞質強度，如高于微弱的細胞質強度，如高于中等的細胞質強度。在以上方面的這些方法 的可替代的或補充實施方案中，步驟c)的參考值可以是HMGCR蛋白表達的中等或更低的細 胞質強度，如HMGCR蛋白表達的一種微弱的或更低的細胞質強度，如一種缺乏的細胞質強 度。在這些實例部分中，采用了截止值“缺乏的”細胞質強度。因此，如果該參考值是 一種細胞質強度，優選是低的如微弱的或更低的。最優選的是缺乏的。此外，在以上方面的這些方法的實施方案中，該參考值可以由兩個值組成，其中對 于在步驟d)中的結論的標準是一個比該兩個值的任何一個高的樣品值。這樣的一個參考 值的一個實例是25%或更低的一種細胞質部分以及一種微弱的或更低的細胞質強度。可替代地，在以上方面的這些方法的實施方案中，該參考值可以是一種部分值與 一種強度值(如一種細胞質部分值與一種細胞質強度值)的組合。此外，在以上方面的這些方法的實施方案中，該參考值可以是一種細胞質部分值 與一種細胞質強度值的函數。例如，這樣一種函數可以是一種染色評分。如在實例、部分3、 以及以下表1中所說明計算該“染色評分”。例如，該參考值可以是2或更低(如1或更低 的，如0)的一種染色評分。
本領域的普通技術人員認識到作為一種強度值或一種部分值的其他參考值也落 在本發明的范圍內。同樣，本領域的一名普通技術人員認識到多個部分和強度的其他組合 也落在本發明的范圍內。因此，該參考值可以包括兩個以及可能更多個標準。總體上，作為該參考值的一種細胞質強度值和/或一種細胞質部分值可以取決于 染色步驟，如取決于采用的抗HMGCR抗體以及取決于染色試劑。由本披露指導，本領域的普通技術人員例如一位病理學家，了解如何執行該評價 產生一種部分，如一種細胞的、細胞質的、或核的部分，或一種強度，如一種細胞的、細胞質 的、或核的強度。例如，技術人員可以使用一個包括預定量的HMGCR蛋白的參比樣品用于建 立某些部分或強度的外觀。然而，一個參比樣品可能不僅用于提供實際參考值，而且還被用于提供一種樣品 (具有比對應于該參考值的量更高的HMGCR蛋白的量)的一個實例。作為一個實例，在組織 化學染色中(如在免疫組織化學染色中)，技術人員可以使用一個參比樣品用于建立具有 高量的HMGCR蛋白的一種染色樣品的外觀，例如一個陽性參考。隨后，技術人員可以評定具 有較低量的HMGCR蛋白的樣品的外觀，如具有與該參考值對應的HMGCR蛋白的量的一種樣 品的外觀。換言之，技術人員可以使用一個參比樣品以創造對應于HMGCR蛋白的量(低于 該參比樣品)的一個參考值的精神圖像。可替代的或作為一種補充的實例，技術人員可以 使用具有一個低量的HMGCR蛋白或缺乏可檢出的HMGCR蛋白的另一個參比樣品，用于建立 這種樣品的外觀，例如作為一種陰性對照。例如，如果使用了 10%細胞質部分的一個參考值，可以采用兩個參比樣品一個 不具有可檢出的HMGCR蛋白的第一參比樣品(并且因此對應于0的一種細胞質部分)，其小 于該參考值；以及一個第二參比樣品(具有對應于75%或更高的一種細胞質部分的HMGCR 蛋白的量)，其大于該參考值。因此，在評估中，技術人員可以使用一個參比樣品用于建立具有高量的HMGCR蛋 白的一種樣品的外觀。這類參比樣品可以是一種樣品，其包括表達一種高量的HMGCR蛋白 的組織，如包括乳房腫瘤組織(具有一種預先建立的HMGCR蛋白的高表達)的一種樣品。因此，該參比樣品可以提供一種強的細胞質強度(Cl)的一個實例。用一種樣品 (具有強的Cl)的外觀的知識，技術人員然后可以將樣品分成缺乏的、微弱的、中等的、以及 強的CI類別。可以通過缺乏可檢出的HMGCR蛋白的一個參比樣品(陰性參考)，即提供一 種缺乏的細胞質強度的一個參比樣品而進一步輔助這種區分。此外，該參比樣品可以提供 具有75%或更高的一種細胞質部分(CF)的樣品的一個實例。用一種具有超過75%陽性細 胞的樣品的外觀的知識，技術人員然后可以評價例如具有一個更低百分比的陽性細胞的其 他樣品的細胞質部分。可以通過缺乏可檢出的HMGCR蛋白的一個參比樣品(陰性參考)，即 提供一種低的CF(例如< 5%，如< 2% )或0的CF的一個參比樣品而進一步輔助這種區 分。如上述，表達一種控制量的HMGCR蛋白的細胞系可以用作該參比，尤其是用作一 種陽性參考。還可以提供一個或多個圖片作為“參比樣品”。例如，這種圖片可以是一種在顯示 某一細胞強度和/或部分的某些條件期間用某一抗體染色的腫瘤組織切片的一個實例。細 節上作必要的修改，以上關于“參比樣品”的討論應用于圖片。
此外，技術人員應當認識到的是根據以上方面的這些方法的有用性不局限于存在 于所討論的受試者中的HMGCR蛋白的任何具體的變體的定量，只要該蛋白是由有關的基因 編碼的并且呈現出表達的有關模式。作為一個非限制性實例，該HMGCR蛋白包括或其組成 為選自以下的一個序列i)SEQ ID NO :1 ；以及ii) 一個與SEQ ID NO 1有至少85%相同的序列。在一些實施方案中，以上序列ii)是與SEQ ID NO 1至少90%相同的、至少91% 相同的、至少92%相同的、至少93%相同的、至少94%相同的、至少95%相同的、至少96% 相同的、至少97%相同的、至少98%相同的、或至少99%相同的。作為另一個非限制性實例，該HMGCR蛋白包括或其組成為選自以下的一個序列i)SEQ ID NO :2 ；以及ii) 一種與SEQ ID NO 2有至少85%相同的序列。在一些實施方案中，以上序列ii)是與SEQ ID NO 2至少90%相同的、至少91% 相同的、至少92%相同的、至少93%相同的、至少94%相同的、至少95%相同的、至少96% 相同的、至少97%相同的、至少98%相同的、或至少99%相同的。如在本披露的情況下使用的術語“％相同的”，是如以下計算的。使用CLUSTAL W 算法(Thompson, J. D. , Higgins, D. G. and Gibson, Τ. J. , Nucleic Acids Research, 22 4673-4680(1994))將查詢序列與靶序列比對。將在各位置的氨基酸殘基進行比較，并且將 在該查詢序列中與在該靶序列中相同對應的位置的百分比報告為％相同。此外，該靶序列 確定被比較的位置的數量。因此，在本披露的情況下，比該靶序列短的一個查詢序列決不會 與該靶序列100%相同。例如，一個85個氨基酸的查詢序列至多可以是與一個100個氨基 酸的靶序列85%相同的。在以上方面的這些方法的實施方案中，可以通過對該樣品應用一種可檢出的和/ 或可以計量的親和配體來檢測和/或定量該HMGCR蛋白，該可以計量的親和配體能夠與該 HMGCR蛋白選擇性地相互作用。該親和配體的應用是在能夠使該親和配體與在該樣品中任 何HMGCR蛋白相結合的條件下進行的。為了具體化，在上述方面的這些方法的實施方案中，步驟b)可以包括bl)對所述樣品應用一種能夠選擇性地與該有待評價的HMGCR蛋白相互作用的可 以計量的親和配體，所述應用是在能夠使所述親和配體結合至存在于所述樣品中的HMGCR 蛋白的條件之下進行的；b2)去除未結合的親和配體；以及b3)定量該保持與所述樣品締合的親和配體以評價所述量。“保持與所述樣品締合的親和配體”是指在步驟1^2)中沒有去除的親和配體，例如 結合到該樣品的該親和配體。在此，例如該結合可以是在抗體與抗原之間的相互作用。然而，在一些實施方案中，根據1^2)的未結合的親和配體的去除(例如洗滌)可能 不是必需的。因此，在以上方面的這些方法的一些實施方案中，步驟b)可以包括bl)對所述樣品應用一種能夠選擇性地與該有待評價的HMGCR蛋白相互作用的可 以計量的親和配體，所述應用是在能夠使所述親和配體結合至存在于所述樣品中的HMGCR 蛋白的條件之下進行的；
bll)定量該與所述樣品結合的親和性以評價所述量。一旦通過本披露的教導了解 了在HMGCR蛋白與對于乳癌治療預測之間的關系，選擇或制造適當的親和配體并且選擇用 于檢測和/或定量的適當形式和條件視為是在本領域的普通技術人員的能力范圍之內的。 盡管如此，為了說明，以下給出了可以證明有用的親和配體的實例連同用于檢測和/或定 量的形式和條件的實例。因此，在本披露的實施方案中，該親和配體可以是選自下組，其組成為抗體、其 片段以及其衍生物，即基于一種免疫球蛋白支架的親和配體。這些抗體以及它們的片段 或衍生物可以是分離的和/或單特異性的。抗體包括任何起源的單克隆和多克隆抗體， 包括鼠類的、兔的、人的、以及其他抗體，連同包括來自不同物種的序列的嵌合抗體，如部 分人源化的抗體例如部分人源化的鼠抗體。通過用選擇的抗原免疫動物生產了多克隆 抗體。可以使用由K6hler和Milstein研制的雜交瘤技術生產限定特異性的單克隆抗體 (KOhlerG 和 MilsteinC(1976)Eur. J. Immunol. 6 :511-519)。本披露的這些抗體片段以 及衍生物與產生這些抗體片段或衍生物的抗體對其抗原(例如HMGCR蛋白)是能夠同樣 地進行選擇性相互作用。抗體片段以及衍生物包括Fab片段，包括一種完整的免疫球蛋 白的重鏈的第一恒定域(CH1)、輕鏈的恒定域(CL)、重鏈的可變域(VH)、以及輕鏈的可變 域(VL) ；Fv 片段，包括兩個可變抗體域 VH 和 VL (Skerra A 和 PlUckthun A (1988) Science 240 :1038-1041)；單鏈Fv片段(scFv)，包括通過一種柔性肽接頭連接在一起的兩個VH 和 VL 域(Bird RE 和 Walker Bff(1991)Trends Biotechnol. 9 132-137) ；Bence Jones 二 聚體(Stevens FJ et al. (1991)Biochemistry 30 :6803-6805)；駱駝科動物重鏈二聚體 (Hamers-Casterman C et al. (1993) Nature 363:446-448)以及單可變域(Cai X和 Garen A (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. Α. 93 :6280-6285 ；Masat L et al. (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. Α. 91 :893-896)，以及單域支架，像例如來自護士鯊(nurse shark)的新抗 原受體(NAR) (Dooley H et al. (2003)Mol. Immunol. 40 :25-33)以及基于一種可變重鏈域 的微型抗體(minibodies) (Skerra A 和 PlUckthun A (1988) Science 240 :1038-1041)。將SEQ ID NO 1設計為用于免疫，例如設計成缺乏跨膜區域以確保在大腸桿菌 中有效表達，以及缺乏任何信號肽，因為那些在成熟蛋白中裂開。因此，根據本披露的一種 抗體或其片段或衍生物例如可以是通過一種方法可獲得的一種，該方法包括用一種蛋白質 (其氨基酸序列包括，優選包括序列SEQ IDNO=I)免疫一種動物(如一種兔)的一個步驟。 例如，該免疫方法可以包括用在弗氏完全佐劑中的蛋白質的初次免疫。此外，該免疫方法可 以進一步包括用在弗氏完全佐劑中的蛋白質以2-6星期的間隔增強至少兩次。對抗一種給 定的靶標的抗體或片段或它們的衍生物的生產方法在本領域中是已知的，并且可以與本披 露的這個方面結合應用。在本披露的情況下，一種“單特異性抗體”是多克隆抗體的群體的一種，其依靠自 己的抗原已經親合純化，由此從其他的抗血清蛋白以及非特異性抗體分離這類單特異性抗 體。這種親和純化產生了與其抗原選擇性地結合的抗體。在本披露的情況下，這些多克隆 抗血清是通過基于一種兩步法免疫親和性的科學試驗計劃而純化的以獲得對該靶蛋白選 擇性的單特異性抗體。使用固化標簽蛋白作為捕獲劑，在一個初次消耗步驟中將定向針對 抗原片段的屬類親和標簽的抗體去除。繼該第一消耗步驟之后，將該血清荷載到第二親和 柱(具有該抗原作為捕獲劑)上，以便富集對于該抗原特異性的抗體(還見Nilsson P etal. (2005) Proteomics 5:4327-4337)。多克隆和單克隆抗體連同它們的片段和衍生物，代表了在要求選擇性生物分子識 別的應用中親和配體的傳統選擇，如在根據以上方法方面的HMGCR蛋白的檢測和/或定量 中。然而，在本領域中的那些普通技術人員知道由于選擇性結合配體的高流通量產生以及 低成本生產系統的要求增加，已經在近十年期間研發了新的生物分子多樣性技術。這已經 能夠使免疫球蛋白連同非免疫球蛋白(已經證明作為結合配體在生物分子識別應用中同 樣有用，并且可以代替或與免疫球蛋白一起使用)二者起源的新類型的親和配體的產生。需要用于親和配體選擇的生物分子多樣性可以通過多種可能的支架分子之一 的組合工程而產生，并且然后使用一種適當的選擇平臺選擇特異性和/或選擇性親和配 體。該支架分子可以是免疫球蛋白起源的(Bradbury AR和Marks JD (2004) J. Immunol. MethsJ90 :29-49)，非免疫球蛋白起源的(Nygren pA和 Skerra A (2004) J. Immunol. Meths.四0 :3-28)，或一種寡核苷酸起源的(Gold L et al. (1995) Annu. Rev. Biochem. 64 763-797)。在新穎的結合蛋白的研制中已經將許多非免疫球蛋白蛋白支架用作支持結構。 對生成針對HMGCR蛋白的親和配體有用的以用于根據本披露的用途的這類結構的非限制 性實例是葡萄球菌蛋白A和其域以及這些域的衍生物，如蛋白Z(Nord K et al. (1997) Nat. Biotechnol. 15 :772-777)；脂質運載蛋白(Beste G et al. (1999)Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. Α. 96 1898-1903)；錨蛋白重復域(Binz HK et al. (2003) J. Mol. Biol. 332 489-503)；纖維素結合域(CBD) (Smith GP et al. (1998) J. Mol. Biol. 277 :317-332 ；Lehtio J et al. (2000) Proteins 41 :316-322) ； γ 晶型(Fiedler U 禾口 Rudolph R，W001/04144)； 綠色熒光蛋白(GFP) (PeelIe Bet al. (2001)Chem. Biol. 8 :521-534)；人細胞毒性 T 淋巴 細胞相關抗原 4(CTLA-4) (Hufton SE et al. (2000)FEBS Lett. 475 :225-231 ；Irving RA et al. (2001) J. Immunol. Meth. 248 :31-45)；蛋白酶抑制劑，如 Knottin 蛋白(ffentzel A et al. (2001) J. Bacteriol. 183 :7273-7284 ；Baggio R et al. (2002) J. Mol. Recognit. 15 126-134)以及Kunitz域(Roberts BL et al. (1992)Gene 121 9-15 ；Dennis MS和Lazarus RA(1994)J. Biol. Chem. 269 :22137-22144) ；PDZ 域(Schneider S et al. (1999)Nat. Biotechnol. 17 :170-175)；肽適體，如硫氧還蛋白(Lu Z et al. (1995) Biotechnology 13 366-372 ；Klevenz B et al. (2002) Cell. Mol. Life Sci. 59 1993-1998)；葡萄球菌核酸酶 (Norman TC et al. (1999)Science 285 :591-595)；淀粉酶抑肽(tendamistats) (McConell SJ 和 Hoess RH(1995) J. Mol. Biol. 250 :460-479 ；Li R et al. (2003)Protein Eng. 16 65-72)；基于纖連蛋白 III型域的 trinectins(Koide A et al. (1998) J. Mol. Biol. 284 1141-1151 ；Xu L et al. (2002)Chem. Biol. 9 :933-942)；以及鋅指結構(Bianchi E et al. (1995) J. Mol. Biol. 247 :154-160 ；Klug A(1999) J. Mol. Biol. 293 :215-218 ；Segal DJ et al. (2003)Biochemistry 42:2137—2148)。以上提到的非免疫球蛋白支架的實例包括呈現有用于新穎的結合特異性的產 生的一種單隨機化環(single randomized loop)的支架蛋白，具有一種剛性次級結構 的蛋白支架，其中從該蛋白表面突出的側鏈被隨機化以用于新穎的結合特異性的產生， 以及展示有用于新穎的結合特異性的產生的一種非鄰接高可變環區域(non-contiguous hyper-variable loop region)白勺支架。
除非免疫球蛋白之外，寡核苷酸也可以用作親和配體。單鏈核酸被稱為適體或假 目標(decoys)，折疊成輪廓分明的三維結構并且以高親合性和特異性結合至它們的靶標。 (Ellington AD 禾口 Szostak Jff (1990)Nature 346 :818-822 ；Brody EN 和 Gold L(2000) J. Biotechnol. 74 5-13 ；Mayer G 和 Jenne A (2004) BioDrugsl8 :351-359) 這些寡聚核苷 酸配體可以是RNA或DNA，并且可以結合至寬范圍的靶分子類別。為了從任何上述支架結構的變體的集合體(pool)選擇所希望的親和配體，許多 選擇平臺可用于分離一種特異的新穎的配體(針對選擇的一種靶蛋白)。選擇平臺包括但 不局限于噬菌體展示(Smith GP(1985)Science228 1315-1317)、核糖體展示(Hanes J和 Pluckthun A (1997) Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. Α. 94 :4937-4942)、酵母雙雜交系統(Fields S 和 Song 0(1989)Nature 340 :245-246)、酵母展示(Gai SA 和 Wittrup KD(2007)Curr Opin Struct Biol 17 :467-473)、mRNA 展示(Roberts RW 和 kostak Jff (1997) Proc. Natl. Acad. ki. U. S. A. 94 :12297-12302)、細菌展示(Daugherty PS(2007)Curr Opin Struct Biol 17 474-480> Kronqvist N et al. (2008)Protein Eng Des Sel 1-9> Harvey BR et al. (2004)PNAS 101(25) :913-9198)、微珠粒展示(Nord 0 et al. (2003) J Biotechnol 106 1-13> W001/05808)> SELEX(System Evolution of Ligands by Exponential Enrichment) (Tuerk C 和 Gold L(1990) Science249 :505-510)、以及蛋白質片斷互補測定 (PCA) (Remy I 和 Michnick Sff (1999) Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. Α. 96 :5394-5399)。因此，在本披露的實施方案中，該親和配體可以是源自任何以上所列出的蛋白支 架或一種寡核苷酸分子的一種非免疫球蛋白親和配體。該HMGCR蛋白SEQ ID NO 1被設計為包括一種獨特的序列，該序列具有與其他人 類蛋白低的同源性，并且使產生的親和試劑的交叉反應性最小化。因此，在本披露的實施方 案中，該親和配體可以能夠與由序列SEQ ID NO :1組成的一種多肽選擇性地相互作用。在以下實例中，采用了結合至一種具有序列SEQ ID NO :4的HMGCR表位的抗體。 SEQ ID NO 4 是指氨基酸序列 CKDNPGENARQLAR(即 EnsEMBL 登錄號 ENSP00000287936 的 827-840氨基酸)。這種抗體導致了強染色。因此，在本披露的進一步的實施方案中，該可 以計量的親和配體可以能夠與一種HMGCR蛋白選擇性地相互作用的，該HMGCR蛋白包括或 其組成為序列SEQID NO :4。在本披露的一些實施方案中，可以與該HMGCR蛋白選擇性地相互作用的一種親和 配體是可檢出的和/或可以計量的。這種親和配體的檢測和/或定量可以按技術人員已知 的用于在基于生物學相互作用的測定中的結合試劑的檢測和/或定量的任何方式來完成。 因此，如以上所說明的任何親和配體可以用于定性或定量檢測該HMGCR蛋白的存在。這些 “第一”親和配體可以用不同的標志物將它們自身標記或可以進而由第二標記的親和配體 檢出，以允許檢測、可視化和/或定量。這可以使用許多標記的任何一種或多種來完成，這 些標記可以使用技術人員已知的許多技術的任何一種或多種(而不像涉及任何過度實驗 的那樣)而被結合至能夠與HMGCR蛋白相互作用的親和配體或結合至任何第二親和配體。可以結合至第一和/或第二親和配體的標記物的非限制性實例包括熒光染料類 或金屬類(例如熒光素、若丹明、藻紅蛋白、胺熒)、發色染料類(例如視紫紅質)、化學發光 化合物類(例如魯米那、咪唑)、以及生物發光蛋白類(例如螢光素、熒光素酶)、半抗原類 (例如生物素)。許多種其他的有用的熒光劑以及發色團說明于(Stryer L(1968) Science162 :526-533 以及 Brand L 和 Gohlke JR(1972)Annu. Rev. Biochem. 41 :843-868)中。還可 以用酶(例如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶、β-內酰胺酶)、放射性同位素(例如咕、14(、 32P、35S、或125I)以及顆粒(例如金)來標記親和配體。在本披露的情形下，“顆粒”是指適 合于分子的標記的顆粒，如金屬顆粒。此外，還可以用熒光半導體納米晶體(量子點)來標 記這些親和配體。量子點具有優越的量子產率并且相比于有機熒光團是更耐光的，并且因 此更容易被檢出(Chan et al. (2002)Curr Opi Biotech. 13 :40-46)。可以使用不同的化 學作用(例如胺反應或硫醇反應)將這些不同類型的標記物結合至一種親和配體。然而， 除了胺和硫醇外，可以使用其他的反應基團，例如醛、羧酸以及谷氨酰胺。可以將以上方法方面使用在任何若干已知的形式和結構中，其中一種非限制性的 選擇在以下論述。在基于組織學的一種結構中，結合到其HMGCR蛋白靶標上的一種標記的親和配體 的檢測、定位、和/或定量可以包括可視化技術，如光學顯微術或免疫熒光顯微術。其他的 方法可以包括經由流式細胞術或發光測定法的檢測。可以將一種生物樣品，如一種腫瘤組織樣品(活組織檢查)例如來自已經從受試 者移出的乳房組織用于HMGCR蛋白的檢測和/或定量。該生物樣品如該活組織檢查，可以 是一種較早獲得的樣品。如果在一種方法中使用一種較早獲得的樣品，沒有該方法在人或 動物體上實踐的步驟。可以將親和配體應用到該生物樣品用于HMGCR蛋白的檢測和/或定 量。這種過程不僅使得能夠檢測HMGCR蛋白，而且可以另外顯示其表達的相對水平以及分 布。在親和配體上的標記的可視化的方法可以包括但不局限于熒光測定、發光測定和 /或酶的技術。通過將熒光標記暴露于一種特定波長的光下而將熒光檢測和/或定量，并且 其后在一個特定波長區域中檢測和/或定量發射的光。可以通過在一種化學反應期間發生 的熒光而檢測和/或定量一種熒光標記的親和配體的存在。一種酶促反應的檢測是由于在 樣品中起于化學反應的一種色移。在本領域中的那些普通技術人員知道可以改進許多種不 同的科學試驗計劃以便用于適當的檢測和/或定量。在以上方面的這些方法的實施方案中，一種生物樣品可以被固化到一種固相支持 物或載體上，如硝酸纖維素或任何其他的能夠固化存在于應用于它的生物樣品中的HMGCR 蛋白的固體支持基質。在本發明中有用的一些眾所周知的固態支持材料包括玻璃、碳水化 合物(例如kpharose)、尼龍、塑料、羊毛、聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯、右旋糖酐、淀粉酶、薄 膜、樹脂、纖維素、聚丙烯酰胺、瓊脂糖、氧化鋁、輝長巖、以及磁鐵礦。在該生物樣品固定之 后，可以應用對HMGCR蛋白特異性的第一親和配體，例如在本披露的實例、部分3、4或5中 所說明。如果該第一親和配體沒有完全地被標記，可以用在本領域中已知的一種或多種適 當的緩沖液洗滌該支持基質，隨后暴露于一種第二標記的親和配體，并且再一次用緩沖液 洗滌以除去未結合的親和配體。其后，可以用常規方法將選擇性親和配體檢測和/或定量。 對于一種親和配體的結合性質可能在一個固態支持物與另一個之間不同，但那些在本領域 中的普通技術人員將能夠通過常規實驗確定對于每一測定有效的和最適的測定條件。因此，在以上方面的這些方法的實施方案中，bl)的可以計量的親和配體可以使用 能夠識別該可以計量的親和配體的一種第二親和配體進行檢測。的定量因此可以借助 于一種第二親和配體(具有對于該可以計量的親和配體的親合性)來進行。作為一種實例，該第二親和配體可以是一種抗體或其一種片段或一種衍生物。作為一種實例，用于該HMGCR蛋白的檢測和/或定量的一個可用的方法是通過連 接該親和配體到一種酶，然后可以在一種酶免疫測定(如一種EIA或ELISA)中檢測和/或 定量該酶。很好地建立了這類技術，并且它們的實現對于技術人員不存在任何過度的困難。 在這類方法中，使該生物樣品與一種固體材料接觸或與一種結合至針對該HMGCR蛋白的親 和配體的一種固體材料接觸，然后用一種酶標記的第二親和配體進行檢測和/或定量。此 后，加入一種適當的底物，在具有這種酶性標記的適當的緩沖液中反應以產生一種化學部 分，例如使用一種分光光度計、熒光計、光度計或通過直觀的方式將該化學部分檢測和/或 定量。如上所述，可以用放射性同位素標記第一和任何第二親和配體以使其能夠檢測和 /或定量。在本披露中適當的放射性標記的非限制性的實例是3H、14C、32P、MS或125L該標 記的親和配體的比活性取決于該放射性標記的半衰期、同位素純度、以及該標記如何已經 結合進入該親和配體中。優選地使用眾所周知的技術將親和配體標記(Wensel TG和Meares CF (1983) in :Radioimmunoimaging 禾口 Radioimmunotherapy (Burchiel Sff and Rhodes BA eds. )Elsevier，New York, ppl85_196)。一種如此放射性標記的親和配體可用于通過在體 內或體外放射性的檢測來可視化HMGCR蛋白。放射性核素掃描，如用Y照相機、磁共振波 譜學或發射斷層術功能用于體內以及體外檢測，同時還在體外使用Υ/β計數器、閃爍計 數器、以及放射線照相術。作為本披露的第三方面，提供了一種用于進行根據以上方面的一種方法的試劑 盒，該試劑盒包括a)能夠與一種HMGCR蛋白選擇性地相互作用的一種可以計量的親和配體；以及b)用于對該親和配體的量進行定量必需的試劑。根據第三方面的試劑盒的不同的組分可以結合以上本披露的方法方面的說明而 選擇并且限定。因此，根據本披露的試劑盒包括針對一種HMGCR蛋白的一種親和配體，連同其他 的有助于定量該特異性的和/或選擇性親和配體(在它已經特異性和/或選擇性地結合 到該HMGCR蛋白之后)的手段。例如，該試劑盒可以包含一種第二親和配體，用于檢測和/ 或定量一種由該HMGCR蛋白與該親和配體(能夠選擇性地與該HMGCR蛋白相互作用)形成 的絡合物。該試劑盒還可以包含除親和配體以外的不同的助劑物質，以使該試劑盒能夠容 易并且有效地使用。助劑物質的實例包括用于進行溶解或復原該試劑盒的凍干蛋白組分 的溶劑、洗滌緩沖液、用于對酶活性進行測量(在一種酶被用作一種標記物的情況下)的底 物、在使用石蠟或福爾馬林固定組織樣品的情況下為提高對抗原的可接近性的靶標恢復溶 液、以及在免疫測定試劑盒中通常使用的物質如反應阻止劑，例如為降低背景染色的內源 性酶封閉溶液和/或為增加染色對比的復染溶液。在試劑盒方面的實施方案中，親和配體可以選自結合如以上這些方法方面的說 明。此外，根據結合以上這些方法方面的說明，在該試劑盒方面的實施方案中該可檢 出的親和配體可以包括一種選自下組的標記物，該組的組成為熒光染料和金屬、發色染 料、化學發光化合物和生物發光蛋白、酶、放射性同位素、顆粒以及量子點。可替代地，用于定量該親和配體的量所必需的試劑包括一種能夠識別該可以計量的親和配體的第二親和 配體。作為一個實例，能夠識別該可以計量的親和配體的該第二親和配體包括選自下組的 一種標記物，該組的組成為熒光染料和金屬、發色染料、化學發光化合物和生物發光蛋白、 酶、放射性同位素、顆粒以及量子點。根據該試劑盒方面的試劑盒還可以有利地包括用于提供或產生參考值(有待用 于與樣品值比較)的一種參比樣品。例如，該參比樣品可以包括一個預定量的HMGCR蛋白。 這種參比樣品例如可以由一種具有該預定量的HMGCR蛋白的組織樣品組成。然后，在被研 究的樣品中的HMGCR表達狀態的測定中，該組織參比樣品可以被本領域中的一個普通技術 人員通過手工使用(如用眼)或自動化比較在該參比組織樣品與該受試者樣品中的表達水 平。作為另一個實例，該參比樣品可以包括細胞系，如表達一個預定或控制量的HMGCR蛋 白的癌細胞系。本領域的技術人員了解如何提供這類細胞系，例如按照Miodes等披露的 (2006)The biomedical scientists 515-520的指導。作為一種實例，可以用福爾馬林將 這些細胞系固定。此外，可以用石蠟將這類福爾馬林固定的細胞系包埋。術語“用于提供該參考值的參比樣品”在本披露的情況下應當被寬泛地解釋。該 參比樣品可以包括實際上與該參考值對應的量的HMGCR蛋白，但是它也可以包括與高于該 參考值的一個值對應的一個量的HMGCR蛋白。在后者情況下，該“高”值可以被一個執行該 方法的人員用作一個上參照(陽性參照)用于評定例如低于該“高”值的一個參考值的外 觀。免疫組織化學領域的技術人員了解如何做這樣一種評定。此外，作為一種可替代的或 一種補充的實例，該技術人員可以使用包括一個低量的HMGCR蛋白的另一個參比樣品例如 作為一個陰性參照用于提供在這樣一種評估中的一個“低”值，。結合這些方法方面在以上 進一步論述了這種情況。因此，在該試劑盒方面的實施方案中，該參比樣品可以包括與該參考值對應的量 的HMGCR蛋白。作為一個實例，該參比樣品可以包括與95 %或更低(如90 %或更低、如85 % 或更低、如80%或更低、如75%或更低、如70%或更低、如65%或更低、如60%或更低、如 55 %或更低、如50 %或更低、如45 %或更低、如40 %或更低、如35 %或更低、如30 %或更低、 如25%或更低、如20%或更低、如15%或更低、如10%或更低、如5%或更低、如2%或更 低、如或更低、如0% )的一種細胞質部分對應的一個量的HMGCR蛋白。如以上提及的，諸位本發明人已經認識到低截止值(如一個0的值)對于該治療 預測是特別相關的。然而，他們已經進一步注意到這些檢查的腫瘤樣品通常顯示一種高于 50%的細胞質部分或一種或更低的細胞質部分，其中前者組與對它莫西芬的應答相關 聯。因此，在優選的實施方案中，該參比樣品可以包括與50%或更低(如25%或更低、 如20%或更低、如15%或更低、如10%或更低、如5%或更低、如2%或更低、如或更低、 如0% )的一種細胞質部分對應的一個量的HMGCR蛋白。可替代地，或作為一種補充，該參比樣品可以包括與一種中等或更低的HMGCR蛋 白表達的細胞質強度(如一種微弱或更低的HMGCR蛋白表達的細胞質強度)對應的一個量 的HMGCR蛋白。如這些附圖所示，一種低細胞質強度(如一種缺乏的細胞質強度)是一個 相關截止值。因此，在一個實施方案中，該參比樣品可以包括與一種微弱或更低的細胞質強 度(如一種缺乏的細胞質強度)對應的一個量的HMGCR蛋白。
此外，該參比樣品可以包括與一個0、1或2(優選0)的染色評分對應的一個量的 HMGCR蛋白。結合方法方面以上論述了細胞質部分值或細胞質強度值的規定。此外，在試劑盒方面的可替代的或補充的實施方案中，該試劑盒可以包括一個參 比樣品，該參比樣品包括與高于該參考值的一個值對應的一個量的HMGCR蛋白。在這些實 施方案中，該參比樣品例如可以包括與75%或更高的一種細胞質部分和/或核表達的一種 強的細胞質強度對應的一個量的HMGCR蛋白。在該試劑盒方面的另一個可替代的或補充的實施方案中，該試劑盒可以包括一個 參比樣品，該參比樣品包括與低于或等于該參考值的一個值對應的一個量的HMGCR蛋白， 例如彡1 % HMGCR蛋白陽性細胞(如0% HMGCR蛋白陽性細胞)的一種缺乏的細胞質強度 和/或細胞質部分。該試劑盒因此可以包括一個包括與預定的參考值對應的一個量的HMGCR蛋白的 參比樣品；一個包括與高于預定的參考值的值對應的一個量的HMGCR蛋白的參比樣品；和/ 或一個包括與低于或等于預定的參考值的值對應的一個量的HMGCR蛋白的參比樣品。因此，該試劑盒的實施方案可以包括第一參比樣品，該參比樣品包括高于預定的 參考值的一個量的HMGCR蛋白；以及第二參比樣品，該參比樣品包括低于或等于該預定的 參考值的一個量的HMGCR蛋白。在試劑盒方面的實施方案中，該參比樣品可以是一種組織樣品，如適合于用眼或 顯微鏡評價的一種組織樣品。作為一個實例，該組織參比樣品可以被固定在石蠟或在緩沖 福爾馬林中和/或組織處理為裝在顯微載玻片上的Pm薄切片。該組織參比樣品可以進一 步適應于用親和配體(如針對HMGCR蛋白的抗體)染色。因此，在試劑盒方面的實施方案中，該參比樣品可以被適應于直接或間接提供任 何相關的參考值，如任何一個以上論述的參考值。因此，結合該參考值和這些方法方面的參比樣品，以上論述了在該試劑盒方面的 該參比樣品的進一步的實施方案。如以上進一步論述，HMGCR蛋白表達的一個水平與激素受體狀況的組合可以提供 用于做出關于一個乳癌受試者治療預測的結論相關的信息。由于以上說明的原因，在第三方面以及以下說明的進一步的方面中的“乳癌”可以 是一種激素受體陰性乳癌，如一種ER-或PR-乳癌、一種ER-乳癌、一種PR-乳癌、或一種 ER-并且PR-乳癌。例如，該乳癌可以是先前診斷為激素受體陰性的。因此，該試劑盒還可以包括用于建立一個受試者的激素受體狀況的手段。因此，在該試劑盒方面的實施方案中，該試劑盒可以進一步包括a’ ) 一種能夠與雌激素受體選擇性地相互作用的可以計量的親和配體，b’ )以及 用于定量這種親和配體的量必需的試劑；和/或a”)一種能夠與孕酮受體選擇性地相互作用的可以計量的親和配體，b”)以及用 于定量這種親和配體的量必需的試劑。提供了 a’ )和a”)的可以計量的親和配體用于分別測定該ER狀況和I3R狀況。b)、b’ )以及b”)的試劑可以是相同或不同的。分別適合于步驟a’ )和a”)的可以計量的親和配體是技術人員熟知的并且是可商購獲得的。因此，該試劑盒可以包括一些手段，這些手段用于提供根據本披露的這些方法方 面的一些實施方案做出結論所必需的激素狀態信息。繼以上提出的這些發現之后，諸位發明人已經認識到該HMGCR蛋白的若干用途。因此，作為本披露的第四方面的第一構型，提供了 HMGCR蛋白用作患有一種乳癌 的哺乳動物受試者的內分泌治療的指示標志物的用途。在本披露的情況下，“內分泌治療指示標志物”是指一種某材料，該材料的存在表 明一種內分泌治療的適合性。這種標志物因此可以是一種生物標志物，如一種人類蛋白。作為第四方面的第二構型，提供了一種HMGCR蛋白或其一種抗原活性片段用于對 于患有一種乳癌的哺乳動物受試者的內分泌治療指示標志物的生產、選擇、或純化的用途。在本披露的情況下，“內分泌治療指示標志物”是指一種試劑，這種試劑具有至少 一個性質，該性質在用于建立例如在患有一種乳癌的哺乳動物受試者的內分泌治療的治療 預測中是有價值的。例如，該指示劑可以是能夠與該指示標志物選擇性地相互作用的。該內分泌治療指示標志物可以是一種能夠與該HMGCR蛋白或其一種抗原活性片 段選擇性地相互作用的親和配體。結合這些方法方面以上論述了這類親和配體的實例。根據本披露的教導，本領域的技術人員了解如何在內分泌治療指示標志物的生 產、選擇、或純化中使用HMGCR蛋白。例如，該使用可以包括在一種固相支持物(其上已經 固定HMGCR蛋白)上的親和純化。例如可以將該固相支持物安排在一個柱中。此外，這種 使用可以包括使用一種固相支持物(其上已經固化HMGCR蛋白)選擇對HMGCR蛋白具有特 異性的親和配體。這樣的固相支持物可以是孔板(如96孔板)、磁珠、瓊脂糖珠粒、或瓊脂 糖凝膠珠粒。此外，這種使用可以包括在一種可溶基質上親和配體的分析，例如使用一種右 旋糖酐基質或在一種表面等離子共振儀(如一種Biacore 儀)中的使用，其中該分析例如 可以包括監控許多種潛在親和配體的固定的HMGCR蛋白的親合性。此外，對于生產內分泌治療指示標志物或治療預測試劑，該HMGCR蛋白可以用于 免疫一種動物。這種用途可以涉及一種方法，該方法包括以下這些步驟i)使用HMGCR蛋白作為抗原免疫一種動物；ii)從該免疫的動物獲得含有內分泌治療指示標志物的血清；以及，任選地，
iii)從該血清分離該內分泌治療指示標志物。可替代地，該第一步驟后的步驟可以是ii’ )從該免疫動物獲得細胞，這些細胞包括編碼該內分泌治療指示標志物的 DNA。iii’ )使這些細胞與骨髓瘤細胞融合以獲得至少一個克隆，以及iv’ )獲得由該克隆表達的內分泌治療指示標志物。在第四方面的實施方案中，該HMGCR蛋白的氨基酸序列可以包括一個選自以下的 序列i)SEQ ID NO :1 ；以及ii) 一個與SEQ ID NO 1至少有85%相同的序列。在一些實施方案中，序列ii)與SEQ ID NO 1是至少90%相同的、至少91%相同的、至少92%相同的、至少93%相同的、至少94%相同的、至少95%相同的、至少96%相同 的、至少97%相同的、至少98%相同的、或至少99%相同的。此外，在第四方面的實施方案中，該HMGCR蛋白的氨基酸序列可以包括一個選自 以下的序列i)SEQ ID NO :2 ；以及ii) 一個與SEQ ID NO 2至少有85%相同的序列。在一些實施方案中，序列ii)與SEQ ID NO 2是至少90%相同的、至少91%相同 的、至少92%相同的、至少93%相同的、至少94%相同的、至少95%相同的、至少96%相同 的、至少97%相同的、至少98%相同的、或至少99%相同的。作為本披露的第五方面，提供了能夠與一種HMGCR蛋白選擇性地相互作用的一種 親和配體。結合這些方法方面以上論述了這類親和配體的實例。該親和配體可以用于體內診斷，如體內成像。因此，作為第五方面的第一構型，提供了能夠與一種HMGCR蛋白選擇性地相互作 用的親和配體，用于在患有一種乳癌的哺乳動物受試者中用作一種內分泌治療指示標志物 的體內用途。因此，在一個實施方案中，該親和配體可以用于一種體內方法中，該方法用于建立 對于患有一種乳癌(如ER陰性乳癌)的哺乳動物受試者的一種內分泌治療(如它莫西芬 治療)結果的預測。一個受試者的內分泌治療結果的預測的建立例如可以是是否該受試者 可能受益于該內分泌治療的一個確定。在這類實施方案中，可以標記該親和配體以使之能 夠成像，即用一種可檢出的標記物標記。用于標記親和配體的適當標記物(如抗體)對技 術人員是熟知的。用于建立對于患有一種乳癌的哺乳動物受試者的治療預測的體內方法例 如可以揭示在體內腫瘤中的HMGCR蛋白表達，進而可以形成一種治療決定的基礎。以上進 一步論述了可以用于這種實施方案的情況下的不同的體內方法、標記物以及檢測技術。在第五方面的一種相似構型中，提供了一種能夠與HMGCR蛋白選擇性地相互作用 的親和配體，用于體內評估在患有一種乳癌的受試者中的HMGCR蛋白的量。例如，可以評估 在乳癌腫瘤中HMGCR表達的水平。作為本披露的第六方面，提供了根據該第五方面的一種親和配體用于患有一種乳 癌的哺乳動物受試者作為一種內分泌治療指示標志物的用途。因此，該親和配體可以用于 指示是否患有一種乳癌的哺乳動物受試者將受益于一種內分泌治療。這種用途例如可以在 體外進行，如涉及在從該受試者較早獲得的一種樣品的至少部分中的HMGCR的量的測定。在本披露中，內分泌治療，尤其SERM治療(如它莫西芬治療)對那些HMGCR陽性 受試者特別地顯示出益處(參見實例，部分4以及圖)。在內分泌治療的情況下，HMGCR陽 性乳癌受試者是一個先前未被識別的亞群。因此，作為本披露的第七方面，提供了用于在患有一種乳癌的哺乳動物受試者的 治療中使用的一種內分泌治療產品，其中所述受試者是HMGCR蛋白陽性的。作為本披露的第八方面，提供了一種內分泌治療產品在用于治療患有一種乳癌的 哺乳動物受試者的藥物的制造中的用途，其中所述受試者是HMGCR蛋白陽性的。如果來源于所述受試者的任何HMGCR蛋白參數表明該受試者可能受益于一種內分泌治療，則該受試者是“HMGCR蛋白陽性”，。例如，如果已經發現來自該受試者的一種相 關生物樣品含有與一個樣品值(高于一個相關參考值)對應的一個量的HMGCR蛋白，則該 受試者可以被認為是HMGCR蛋白陽性的。結合這些方法方面以上論述了相關樣品和相關 值。因此，如果一種相關樣品(如來自一種原發或繼發瘤的一種組織樣品)顯示出在該樣 品的相關部分中(如在腫瘤細胞中)可檢出的HMGCR蛋白表達，則該乳癌受試者例如可以 被認為是HMGCR蛋白陽性的。此外，如果這種樣品含有與一種高于缺乏的細胞質強度或一 種高于的細胞質部分對應的一個量的HMGCR，則該乳癌受試者例如可以被認為是HMGCR 蛋白陽性的。本領域的技術人員(如一位病理學家)從本披露了解如何確定該受試者是否 HMGCR蛋白陽性。在本披露的實施方案中，該“內分泌治療產品”可以選自下組，其組成為一種選 擇性雌激素受體調節劑(SERM)、一種芳香酶抑制劑、以及一種留體雌激素受體拮抗劑。該 SERM例如可以選自下組，其組成為托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬、阿佐昔芬、以及它莫西 芬。該芳香酶抑制劑例如可以選自阿那曲唑、來曲唑、以及依西美坦。該留體雌激素受體拮 抗劑例如可以是氟維司群。在優選的實施方案中，該內分泌治療產品是一種SERM，如它莫西 芬。即使HMGCR表達是在所有乳癌受試者組中對內分泌治療應答的一種有力的(獨立 的)指示劑，它可能被認為是對于患有ER-乳癌的這些受試者特別相關的，因為它們已經慣 例地被認為是對這樣的治療是無應答的。因此，在第七和第八方面的實施方案中，該乳癌可以是ER-的。它莫西芬最近25年來一直是輔助內分泌療法的支柱，并且存在很多證據支持其 在乳癌治療中的作用，不論更年期狀況。當與無輔助治療進行比較時，一種薈萃分析的結果 已經證明5年的它莫西芬治療顯著降低了疾病復發(41%)以及乳癌特異性死亡率(34%) 二者(EBCTG (2005) Lancet 365 :1687-717)。HMGCR蛋白作為一種限速酶在甲羥戊酸途徑(mevalonate pathway)中起作用。雖 然膽固醇代表這條通路的主要產物，它還產生許多非留醇類異戊二烯副產物，已經它們是 血管生成、增殖、以及遷移的重要調節劑(Liao JK(2002) J Clin Invest 110 :285-8,Wejde J, et al(1992)Anticancer Res 12:317—24)。盡管不斷增長的文獻量說明了他汀的抗腫瘤性質，總體上關于它們的的防癌(尤 其是抗乳癌)的效果的流行病學資料仍然是非結論性的。部分鑒于本披露的教導，諸位發 明人相信甲羥戊酸途徑在某些乳癌中(尤其是ER陰性和/或淋巴結陽性腫瘤中)起著關 鍵作用。體外研究已經證明了他汀誘導的甲羥戊酸酯耗竭導致了在中國倉鼠卵巢細胞 (Goldstein JL 禾口 Brown MS (1990) Nature 343:425-30)中 HMGCR 蛋白表達的一種適應性 誘導(Duncan RE, et al (2005) Cancer Lett 224:221-8)。用美伐他汀對 MCF-7 細胞的處 理導致了 HMGCR活性的10到15倍的誘導，其與HMGCRmRNA表達的2. 5到3. 5倍誘導相關聯。基于該事實和他汀已經顯示出誘導了 HMGCR蛋白的表達，以及在ER陽性以及ER 陰性腫瘤二者中HMGCR表達水平的增加與改進的對它莫西芬的應答有關的發現，諸位發明 人推斷一種內分泌治療產品與一種或多種他汀的組合是一種新的治療選擇。
因此，作為本披露的第九方面，提供了包括一種內分泌治療產品以及一種他汀，作 為一種組合制劑在治療(如乳癌治療)中同時、分開、或序貫使用。這兩個產品的組合可以被提供為一個“組件產品”或一種制造物品的形式，它可以 包括用于在治療(如乳癌治療)中同時、分開、或序貫使用的說明書。因此，作為本披露的第十方面，提供了包括一種內分泌治療產品和一種他汀的組 件產品。例如，這種組件產品可以用于治療中，如乳癌治療。在該第九或第十方面的實施方案中，該乳癌治療可以是一種ER-和/或淋巴結陽 性乳癌的治療。此外，作為本披露的第十一方面，提供了對其有需要的哺乳動物受試者的治療方 法，其中所述受試者患有一種乳癌，該治療方法包括一種他汀和一種內分泌治療產品的同 時、分開、或序貫給藥。在本披露的該第十一方面，該乳癌可以是ER-和/或淋巴結陽性的乳癌。本披露的他汀可以是選自下組，其組成為親脂性的/疏水性他汀以及疏水性他 汀。該親脂性的/疏水性他汀包括氟伐他汀、洛伐他汀、辛伐他汀、阿托伐他汀、以及西立伐 他汀。該疏水性他汀包括普伐他汀和羅蘇伐他汀。附圖簡要說明關于圖1至圖7，將腫瘤組織對于高或低HMGCR水平進行評分，其中一種高HMGCR 水平是CI =微弱的、中等的和強的并且一種低HMGCR水平是一種CI =缺乏的。在圖1至 圖2中、圖4至圖5以及圖7中，一種實線代表HMGCR高的受試者，并且虛線代表HMGCR低 的受試者。圖1顯示了基于診斷為患有浸潤性乳腺癌的受試者的免疫組織化學染色的生存 率分析的結果。圖Ia顯示了在用輔助它莫西芬治療的患者中的無復發生存率。圖Ib顯示 了在未接受輔助內分泌治療的患者中的無復發生存率。圖2顯示了基于診斷為患有浸潤性乳腺癌的ER陽性受試者的免疫組織化學染色 的生存率分析的結果。ER > 10%的部分評分被認為是陽性的。圖加顯示了在用輔助它莫 西芬治療的患者中的無復發生存率。圖2b顯示了在未接受輔助內分泌治療的患者中的無 復發生存率。圖3顯示如果用HMGCR蛋白表達狀況與ER狀況的不同的組合將受試者進行分組 對生存率的影響。簡要地，基于HMGCR狀況以及ER狀況將全部受試者分成四組，即HMGCR 陽性并且ER陽性的受試者，HMGCR陽性并且ER陰性的受試者，HMGCR陰性并且ER陽性的受 試者，或HMGCR陰性并且ER陰性的受試者。ER陽性=部分評分> 10%并且ER陰性=部分 評分<10%。圖3a顯示了在用輔助它莫西芬治療的患者中的無復發生存率。圖北顯示了 在未接受輔助內分泌治療的患者中的無復發生存率。圖4顯示了基于診斷為患有浸潤性乳腺癌的受試者的免疫組織化學染色的生存 率分析的結果。圖如顯示了在用輔助它莫西芬治療的淋巴結陽性受試者中的無復發生存 率。圖4b顯示了在用輔助它莫西芬治療的淋巴結陰性受試者中的無復發生存率。圖5顯示了基于診斷為患有浸潤性乳腺癌的ER陽性受試者的免疫組織化學染色 的生存率分析的結果。ER的部分評分> 10%被認為是陽性的。圖如顯示了在用輔助它莫西芬治療的淋巴結陽性受試者中的無復發生存率。圖恥顯示了在用輔助它莫西芬治療的 淋巴結陰性受試者中的無復發生存率。圖6顯示如果用HMGCR蛋白表達狀況與ER狀況的不同組合將受試者進行分組對 生存率的影響。簡要地，基于HMGCR狀況以及ER狀況將全部受試者分成四組，即HMGCR陽 性并且ER陽性的受試者，HMGCR陽性并且ER陰性的受試者，HMGCR陰性并且ER陽性的受試 者，或HMGCR陰性并且ER陰性的受試者。ER陽性=部分評分> 10%并且ER陰性=部分評 分< 10%。圖6a顯示了在用輔助它莫西芬治療的淋巴結陽性受試者中的無復發生存率。 圖6b顯示了在用輔助它莫西芬治療的淋巴結陰性受試者中的無復發生存率。圖7顯示了基于診斷為患有浸潤性乳腺癌的ER陰性受試者的免疫組織化學染色 的生存率分析的結果。ER表達> 10%的部分評分被認為是陽性的。圖7a顯示了在用輔助 它莫西芬治療的受試者中的無復發生存率。圖7b顯示了在用輔助它莫西芬治療的受試者 中的無復發生存率。關于圖8至圖12，對于高或低HMGCR水平將組織核評分，其中一種高HMGCR水平是 CI >缺乏的，并且一種低HMGCR水平是一種CI =缺乏的。此外，一種實線代表給予輔助它 莫西芬的一組受試者，并且虛線代表未接受輔助內分泌治療的患者。圖8顯示了基于診斷為患有浸潤性乳腺癌的受試者的免疫組織化學染色的生存 率分析的結果。圖8a顯示了在高HMGCR患者中的無復發生存率。圖8b顯示了在低HMGCR 患者中的無復發生存率。圖9顯示了基于診斷為患有浸潤性乳腺癌的HMGCR陽性并且ER陰性的受試者的 免疫組織化學染色的生存率分析的結果。ER表達> 10%的部分評分被認為是陽性的。圖 9a顯示了無復發生存率。圖9b顯示了在淋巴結陽性患者中的無復發生存率。圖10顯示了基于診斷為患有浸潤性乳腺癌的受試者的免疫組織化學染色的生存 率分析的結果。將受試者分為ER陽性或ER陰性的，其中部分評分> 10%被認為是陽性的 并且部分評分< 10%被認為是陰性的。圖IOa顯示了在在HMGCR陽性或ER陽性受試者中 的無復發生存率。圖IOb顯示了在HMGCR陰性并且ER陰性受試者中的無復發生存率。圖11顯示了基于診斷為患有浸潤性乳腺癌的受試者的免疫組織化學染色的生存 率分析的結果。將受試者分為ra陽性或ra陰性的，其中部分評分> ιο%被認為是陽性的 并且部分評分< 10%被認為是陰性的。圖IOa顯示了在HMGCR陽性或ra陽性受試者中的 無復發生存率。圖IOb顯示了在HMGCR陰性或ra陰性受試者中的無復發生存率。圖12顯示了診斷為患有浸潤性乳腺癌的HMGCR陽性以及I3R陰性受試者的無復發 生存率。ra表達> ιο%的部分評分被認為是陽性的。SM針對HMGCR的單特異性抗體的產生以及它們在ιΗ常和癌性樣品中檢出HMGCR的用 途1.抗原的產生a)材料和方法用人基因組序列作為模板使用生物信息學工具選擇了由EnsEMBL基因IDENSG 00000113161 編碼的靴蛋白的一種適當的片段(Lindskog M et al. (2005)Biotechniques 38 :723-727，EnsEMBL，www. ensembl. org)。該片段用作用于生產與 HMGCR 蛋白(SEQ ID NO:2 ;EnsEMBL 登陸號 ENSP00000287936)的氨基酸 742-881 (SEQ ID NO 1)對應的一種 140 個
氨基酸長度片段的模板。通過一種Superscript —步RT-PCR擴增試劑盒(具有Platinum 標簽 (Invitrogen))以及一種總的人 RNA 池組作為模板(Human Total RNA Panel IV, BD Biosciences Clontech)分離 了含有 EnsEMBL 登錄號 ENST0000(^87936 (SEQ ID NO 3)的核苷酸2274-2693的HMGCR基因轉錄產物的一種片段。通過PCR擴增引物將 側翼限制酶切位點NotI和AscI引入該片段以允許框內克隆進入表達載體(正向引 物ATGGCTGGGAGCATAGGAG，反向引物TCCTTGGAGGTCTTGTAAATTG)。然后，生物素酰 化下游引物以允許如前說明進行固相克隆，并且將該生成的生物素酰化的PCR產物 固化在 DynabeadsI\C80 鏈霉親和素上(Dynal Biotech) (Larsson M et al. (2000) J. Biotechnol. 80 :143-157)。通過 NotI-AscI 消化(New England Biolabs)使該片段從 該固相支持物釋放，連接進入框內pAff8c載體(Larsson M et al, supra)，該載體具有一 種雙親和標簽，其組成為用于固定化金屬離子層析(IMAC)純化的六組氨酸標簽以及來自 鏈球菌G蛋白的一種免疫增強白蛋白結合蛋白(immunopotentiating albumin binding protein, ABP) ( Sjolander A et al. (1997) J. Immunol. Methods201 :115-123 ； Stahl S et al. (1999)Encyclopedia of Bioprocess Technology :Fermentation, Biocatalysis 禾口 Bioseparation(Fleckinger MC 禾口 Drew Sff, eds) John Wiley 禾口 Sons Inc. , New York, PP 49-63)，并且轉化進入大腸桿菌BL21(DE3)細胞(Novagen)。根據制造商的建議，使用 TempliPhiDNA測序擴增試劑盒(GEHealthcare, Uppsala, Sweden)，通過質粒DNA擴增的染 料終止循環測序驗證這些克隆的序列。通過添加在相同培養基中的Iml的一種過夜培養物，將包含有該表達載體的 BL21(DE3)細胞接種在IOOml的30g/l大豆胰蛋白酶肉湯中，該大豆胰蛋白酶肉湯補充 有5g/l酵母提取物(Merck KGaA)以及50mg/l卡那霉素(Sigma-Aldrich)。在37°C以及 150rpm下將該細胞培養物在1公升搖瓶中孵育直到在600nm下的光密度達到0. 5-1. 5。然 后通過添加異丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷至一個ImM的終濃度誘導蛋白表達，并且在 25°C和150rpm繼續孵育過夜。通過在MOOg離心收獲細胞，并且將片狀沉淀物再懸浮在 5ml 溶解緩沖液中(7M 鹽酸胍、47mM Na2HPO4,2. 65mM NaH2PO4UOmM Tris-HClUOOmM NaCl, 20mM β-巰基乙醇；pH = 8. 0)，并且在37°C和150rpm下孵育2小時。在!35300g下離心以 后，收集包含變性并且溶解的蛋白的上清液。使用一個自動化蛋白純化步驟(SteenJ et al. (2006)Protein Expr. Purif. 46 173-178)在一種ASPEC XL4 (Gilson)上，通過在具有Iml Talon 金屬(Co2+)親合樹脂的 柱子(BD Biosciences Clontech)上進行固定化金屬離子親和層析(IMAC)純化見知標簽 的融合蛋白。用20ml變性洗滌緩沖液(6M鹽酸胍、46. 6mM Na2HPO4,3. 4mM NaH2PO4,300mM NaCl、pH 8.0-8. 將該樹脂平衡。然后，將澄清的細胞溶解產物加至該柱子上。其后，將 該樹脂在 2. 5ml 洗脫緩沖液(6M 脲、50mM NaH2PO4UOOmM NaCl、30mM 乙酸、70mM 乙酸 Na、pH 5. 0)洗滌之前用不少于31. 5ml的洗滌緩沖液洗滌。將洗脫的材料在500、700、以及1300 μ 1 的三個池中分離。將含有抗原的700 μ 1部分、以及匯集的500 μ 1以及1300 μ 1的部分儲 存以用于進一步的使用。將該抗原部分用磷酸鹽緩沖鹽水(PBS；1. 9mM NaH2PO4,8. ImMNa2HPO4U54mM NaCl)
40稀釋到IM脲的終濃度，隨后使用具有7500Da截留分子量的VivapOrel0/20ml濃縮器的一 個濃縮步驟以增加該蛋白質的濃度(Vivascience AG)。根據制造商的推薦使用一種具有牛 血清白蛋白標準品的一種雙金雞寧酸(BCA)微測定科學試驗計劃(Pierce)測定該蛋白質 的濃度。使用蛋白50或200測定法(Agilent Technologies)在Bioanalyzer儀器上分析 該蛋白質的質量。b)結果通過使用對于該蛋白片段特異的引物，通過RT-PCR從一個人RNA池成功分離了一 種對應于該HMGCR基因的長轉錄物(SEQ ID NO 3)的核苷酸2274-2693并且編碼一種肽 (SEQ ID NO 1)的基因片段，該肽由該靶蛋白HMGCR(SEQ ID NO 2)的742至881位氨基酸 組成。將該靶蛋白(SEQ ID NO 2)的140氨基酸片段(SEQ ID NO=D設計成缺乏跨膜區 域以確保在大腸桿菌中有效表達，并且缺乏任何信號肽，因為那些在成熟蛋白中被裂開。另 外，將該蛋白片段設計成包括一種與其他的人蛋白具有低的同源性的單一序列，以將產生 的親合試劑的交叉反應性最小化，并且設計成一種適當的大小以允許構象表位的形成，并 且仍然允許在細菌系統中的有效克隆和表達。將編碼該正確的氨基酸序列的一個克隆進行鑒定，并且在大腸桿菌中表達產生這 種正確大小的一種單一蛋白質，并且隨后使用固定化金屬離子層析進行純化。將該洗脫的 樣品稀釋到IM脲的終濃度并且濃縮該樣品到Iml以后，測定該蛋白片段的濃度為11. 7mg/ ml以及84. 2%純度(根據純度分析)。2.抗體的產生a)材料和方法根據國家指南(瑞典許可號A84-02)將如以上獲得的純化的HMGCR片段用作抗原 以免疫一種兔。用在弗氏完全佐劑中的200 μ g的抗原肌肉注射免疫該兔作為初次免疫，并 且用在弗氏不完全佐劑中的100 μ g的抗原以四星期的間隔加強三次。通過一個三步驟的基于免疫親和性的科學試驗計劃將來自該免疫的動物的抗 血清進行純化(Agaton C et al. (2004) J. Chromatogr. A 1043 33-40 ；Nilsson P et al. (2005)Proteomics 5 :4327-4337)。在第一步驟中，將 7ml 的總的抗血清用 IOx PBS 緩 沖至Ij Ix PBS 的終濃度(1. 9mM NaH2PO4,8. ImM Na2HPO4,154mMNaCl)，使用一種 0. 45 μ m 孔徑 大小的過濾器過濾(Acrodisc ，Life Science)并且施加到一個親和柱上，該親和柱含有 5ml的N-羥基琥珀酰亞胺活化的kpharoseTM4i^ast Flow (GE Healthcare)，其結合到表達 自pAffSc載體的并且以如上說明的與用于該抗原蛋白片段同樣的方式純化的雙親和標簽 蛋白HiS6-ABP ( 一種六組氨酰標簽以及一種白蛋白結合蛋白標簽)。在第二步驟中，以一個 0. 5ml/min的流率將流經消耗該雙親和標簽Hk6-ABP的抗體荷載到Iml Hi-TrapNHS活化 的HP柱子(GE Healthcare)上，該柱子與用作抗原用于免疫的HMGCR蛋白(SEQ ID NO 1) 結合。如制造商的推薦將該Hk6-ABP蛋白以及該蛋白片段抗原結合到該NHS活化的基質。 用Ix PBST(lx PBS,0. 1% Tween 20、pH 7. 25)將未結合的材料洗去，并且使用一種低pH甘 氨酸緩沖液(0. 2M glycine、ImM EGTA、pH 2. 5)洗脫俘獲的抗體。自動收集該洗脫的抗體 部分，并且荷載到兩個串聯的5ml HiTrap 脫鹽柱子上(GE Healthcare)以用于在第三步 驟中有效的緩沖液更換。在AKTAxpress 平臺(GE Healthcare)上運行該第二以及第三 純化步驟。用PBS緩沖液洗脫該抗原選擇性(單特異性)抗體(msAbs)，該PBS緩沖液補充有用于在_20°C下長期存儲的終濃度分別為40%和0.02%的甘油和NaN3 (Nilsson P et al. (2005) Proteomics 5:4327-4337)。在一種蛋白陣列裝置中，通過針對該抗原本身以及針對383個其他的人蛋白 片段的結合分析，分析了該親合性純化的抗體部分的特異性和選擇性(Nilsson P et al. (2005)Proteomics 5 :4327-4337)。在0. IM脲和 Ix PBS(pH7. 4)中將這些蛋白片段稀釋 到4(^8/!111，并且將5(^1的各片段轉移到一種96孔點滴板的孔中。使用一種針和環狀陣 列(pin-and-ring arrayer) (Affymetrix427)將這些蛋白片段一式兩份點樣并且固化在環 氧樹脂載玻片上(SuperEpoxy，TeleChem)。將該載玻片在Ix PBS中洗滌(5分鐘)并且然 后將表面封閉(SuperBlock Pierce) 30分鐘。在加入這些單特異性抗體(在Ix PBST中 按1 2000稀釋到大致50ng/ml)之前將一種粘性16孔硅酮掩模(Schleicher &Schuell) 施加到該玻片上，并且在一種振蕩器上孵育60分鐘。將親和標簽特異性IgY抗體與這些單 特異性抗體共孵育以量化在各點中的蛋白的量。將該載玻片用Ix PBST和Ix PBS洗滌兩 次，每次10分鐘。將第二抗體(與Alexa647結合的羊抗兔抗體和與Alexa555結合的羊抗 雞抗體，Molecular Probes)在IxPBST中按1 60000稀釋到30ng/ml并且孵育60分鐘。 關于該第一次孵育，在相同的洗滌步驟之后，將該載玻片旋轉干燥并且掃描(G2565BA陣列 掃描儀，Agilent)，其后使用圖像分析軟件將影像定量(GenePix 5. 1，Axon Instruments) 0b)結果已經證明多克隆抗體制品的質量取決于在該抗體純化的嚴格程度，并且先前已經 顯示定向針對非起源于該靶蛋白的多種表位的抗體的耗盡是避免與其他的蛋白質以及背 景結合交叉反應性所必需的(Agaton C et al. (2004) J. Chromatogr. A 1043:33-40)。因 此，進行一種蛋白微陣列分析以保證高特異性的單特異性多克隆抗體已經通過耗盡定向針 對該Hk6標簽的抗體連同針對該ABP標簽的抗體而產生。為了對在該蛋白陣列的各點中的蛋白的量進行定量，使用了一種與第一以及第二 抗體的一種組合的雙色染料標記系統。用標記有Alexa 555熒光染料的一種第二羊抗母雞 抗體檢測了在母雞中產生的標簽特異性IgY抗體。用一種熒光Alexa 647標記的羊抗兔抗 體檢測了該兔msAb對它的在該陣列上的抗原的特異性結合。該蛋白陣列分析顯示出針對 HMGCR的該親合純化的單特異性抗體對這種正確的蛋白片段是高度選擇性的，并且對于在 該陣列上分析的所有其他的蛋白片段具有一種非常低的背景。3.通過免疫組織化學描繪組織輪廓a)材料和方法使用在實例部分2中獲得的單特異性抗體分析研究了全部576個包含人類組織的 石蠟核芯。按照當地倫理委員會的批準，將全部組織用作供體塊用于組織微陣列(TMA)的 產品從在Uppsala大學醫院病理學系的檔案中選出來。檢查用于TMA分析的所有組織切片 以確定診斷并且選擇在供體塊中的代表區域。將正常組織定義為顯微鏡正常(非腫瘤的) 并且最通常是選自從外科手術移出腫瘤的附近收集的標本。檢查癌組織用于診斷和分類。 將所有組織用福爾馬林固定、石蠟包埋、并且切片用于診斷目的。基本上如先前的說明進行TMA的生產(Kononen J et al. (1998) Nature Med. 4 844-847 ；Kallioniemi OP et al. (2001)Hum. Mol. Genet. 10 :657-662) 簡要地，在接受 TMA塊中制作一種孔，并且從該供體塊獲得一種圓柱形芯組織樣品并且放置在該接受TMAIfe中。Beecher Χ^ (ATA-27, Beecher Instruments, Sun Prairie, CA, USA)的一 種自動化組織陣列儀中重復這項操作直到產生一種完全的TMA設計為止。在進行切片之前 將TMA受體塊在42°C下烘焙2小時。多種TMA :s的設計集中于從大范圍的代表性的正常組織以及包括代表性的癌組 織獲得樣品。這已經在先前詳細地說明于Kampf C et al. (2004)Clin. Proteomics 1 285-3000簡要地，選擇了來自48個正常組織以及來自20個最常見的影響人類的癌癥類型 的樣品。生產了總共八個不同設計的TMAi夬，每一個含有72個具有Imm直徑的組織芯。這 些TMA中的兩個代表正常組織，其對應于來自不同個體的一式三份的48種不同的正常組 織。其余的6種TMA代表了來自20種不同類型的癌癥的癌組織。對于該20種癌癥類型中 的17種，將12個各不相同的腫瘤取樣，并且對于剩余的3種癌癥類型，將4個各不相同的 腫瘤取樣，來自相同腫瘤的全部為一式兩份。使用一種waterfall切片機(Leica)按4μπι 厚度將這些TMA塊切片，并且放置在SuperFrost(Roche AppliedScience)載玻片上用 于IHC分析。如先前的說明進行自動IHC(Kampf C et al. (2004)Clin. Proteomics 1 觀5-300)。簡要地，在60°C下將這些載玻片孵育45分鐘，在二甲苯中脫石蠟0x15分 鐘)，并且在梯度醇中水合。為了抗原恢復，將載玻片浸于TRS(靶標恢復溶液，pH 6.0， DakoCytomation) Φ^ ^ —ft Decloaking chamber (Biocare Medical) ψ ^ 125 "C 下煮沸4分鐘。將載玻片放置于該Autostainer (DakoCytomation)中并且開始用 H2O2 (DakoCytomation)封閉內源性過氧化物酶。在室溫下將這些載玻片與如在實例部分2 中獲得的第一抗體孵育30分鐘，隨后用結合Envision 的羊抗兔過氧化物酶在室溫下孵 育30分鐘。在所有步驟之間，將載玻片在洗滌緩沖液(DakoCytomation)中漂洗。最后，用 二氨基聯苯胺(DakoCytomation)作為色原體并且用Harris蘇木精(Sigma-Aldrich)進行 復染。用Pertex (Histolab)裝上這些載玻片。使用一T2自動化載玻片掃描系統(Aperio Technologies)掃描來 自這八個不同的TMA的所有免疫組織化學染色切片。為了呈現這八個TMA的總含量，產生 了 576個數字圖象。在20倍放大率下進行掃描。分離并且提取數字圖象作為單獨的標簽 圖像文件格式(TIFF)文件用于原始資料的存儲。為了能在一種基于網絡的注解系統中處 理這些圖像，將這些單獨的圖像從TIFF格式壓縮成為JPEG格式。在顯微鏡下人工評價免 疫組織化學染色的組織的全部圖像，并且由一位證明合格的病理學家或由專門教育的人員 注解，隨后由一位病理學家核實。使用一種用于IHC結果分類的簡化的方案對每一不同的正常組織以及癌組織進 行注解。對每一組織的代表性和免疫反應性進行檢查。對包含在每一正常組織類型中的不 同的組織特異性細胞類型進行注解。對每一癌癥的腫瘤細胞和基質進行注解。基本的注解 參數包括i)亞細胞定位(細胞核和/或細胞質/膜)，ii)染色強度(Si)，以及iii)染色細 胞的部分(FSC)的評價。根據臨床上組織病理學診斷使用的標準主觀地評價染色強度，并 且將結果分類為缺乏的=沒有免疫反應性，弱的=微弱的免疫反應性，中等的=中等免疫 反應性，或強的=顯著的而強烈的免疫反應性。估計染色細胞的部分并且分類為:< 2%, 2 %至25 %、> 25 %至75 %、或> 75 %的有關的細胞群的免疫反應性細胞。基于免疫反應性 細胞的強度和部分二者，對于每一組織樣品給出一種“染色評分”。O =陰性，1 =微弱的，2=中等的，并且3 =強的，N. R.表示不存在代表性的組織。詳細地，根據以下標準給出染色 評分如果SI =缺乏的或微弱的，并且FSC ( 25%，則給出0 ；如果SI =微弱的，并且FSC >25%或如果SI =中等的，并且FSC彡25%，則給出1 ；如果SI =中等的，并且FSC > 25% 或如果SI =強的，并且FSC彡25%，以及SI =中等的，則給出2 ；以及最后如果SI =強的， 并且FSC > 25%，則給出3。還參見表1。技術人員將會認識到該步驟與一種Allred評分 的計算是相似的，例如參見 Allred et al. (1998)Mod Pathol 11 ), 155。
表1:染色評分
權利要求
1.用于確定是否患有一種乳癌的哺乳動物受試者可能受益于一種內分泌治療的方法， 該方法包括以下步驟a)提供一種較早從所述受試者獲得的樣品；b)評價存在于至少部分的所述樣品中的HMGCR蛋白的量，并且確定與所述量對應的一 個樣品值；c)將在步驟b)中獲得的樣品值與一個參考值相比較；以及， 如果所述樣品值是高于所述參考值的，d)則做出該受試者可能受益于一種內分泌治療的結論。
2.對于患有一種乳癌的哺乳動物受試者的非治療策略方法，該方法包括a)提供一種較早從所述受試者獲得的樣品；b)評價存在于至少部分的所述樣品中的HMGCR蛋白的量，并且確定與所述量對應的一 個樣品值；c)將在步驟b)中獲得的樣品值與一個參考值相比較；以及， 如果所述樣品值是低于或等于所述參考值的，d)則避免用一種內分泌治療來治療所述受試者。
3.根據權利要求1和2的任一項所述的方法，其中所述乳癌是ER陰性的或冊陰性的。
4.根據權利要求3所述的方法，其中所述乳癌是ER陰性的。
5.用于確定是否患有一種乳癌的哺乳動物受試者可能受益于一種內分泌治療的方法， 該方法包括以下步驟a)提供一種較早從所述受試者獲得的樣品；b)評價存在于至少部分的所述樣品中的HMGCR蛋白的量，并且確定與所述量對應的一 個樣品值；c)將在步驟c)中獲得的樣品值與一個參考值相比較；以及由此確定所述受試者的 HMGCR狀況；d)獲得所述受試者的ER狀況；并且如果所述ER狀況或所述HMGCR狀況是陽性的，el)則做出該受試者可能受益于一種內分泌治療的結論，或如果所述ER狀況以及所述HMGCR狀況是陰性的，e2)則做出該受試者不可能受益于一種內分泌治療的結論。
6.根據權利要求5所述的方法，其中該ER狀況是獲自步驟a)的樣品。
7.根據以上權利要求的任一項所述的方法，其中所述內分泌治療是選自一種SERM治 療、一種芳香酶抑制劑治療、以及一種留體雌激素受體拮抗劑治療。
8.根據以上權利要求的任一項所述的方法，其中所述內分泌治療是一種SERM治療，并 且所述SERM是選自托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬、阿佐昔芬、以及它莫西芬。
9.根據以上權利要求的任一項所述的方法，其中所述內分泌治療是它莫西芬治療。
10.根據以上權利要求的任一項所述的方法，其中所述樣品是一種體液樣品。
11.根據權利要求10所述的方法，其中該體液是選自下組，其組成為血液、血漿、血 清、腦脊液、尿液、以及滲出物。
12.根據權利要求1至9的任一項所述的方法，其中所述樣品是一種細胞學樣品。
13.根據權利要求1至9的任一項所述的方法，其中所述樣品是一種糞便樣品。
14.根據以上權利要求的任一項所述的方法，其中所述樣品包括來自所述受試者的細胞。
15.根據以上權利要求的任一項所述的方法，其中所述樣品包括來自所述受試者的腫 瘤細胞。
16.根據權利要求1至9的任一項所述的方法，其中所述樣品是一種組織樣品。
17.根據權利要求16所述的方法，其中所述組織樣品是一種乳癌組織樣品。
18.根據權利要求14至17的任一項所述的方法，其中步驟b)的評價限于所述樣品的 細胞的細胞質。
19.根據權利要求18所述的方法，其中所述樣品的所述細胞是腫瘤細胞。
20.根據以上權利要求的任一項所述的方法，其中該受試者是一位人類女性。
21.根據以上權利要求的任一項所述的方法，其中所述受試者是一位絕經前的女性。
22.根據以上權利要求的任一項所述的方法，其中所述乳癌是一種II期乳癌。
23.根據以上權利要求的任一項所述的方法，其中所述乳癌是一種淋巴結陽性的乳癌。
24.根據以上權利要求的任一項所述的方法，其中所述參考值是一個與在參比樣品中 HMGCR蛋白的一個量對應的值。
25.根據以上權利要求的任一項所述的方法，其中步驟b)的所述樣品值被確定為1(對 應于在所述樣品中可檢出的HMGCR蛋白)或0(對應于在所述樣品中沒有可檢出的HMGCR 蛋白)。
26.根據以上權利要求的任一項所述的方法，其中步驟c)的所述參考值對應于不具有 可檢出的HMGCR蛋白的一個參比樣品。
27.根據以上權利要求的任一項所述的方法，其中步驟c)的所述參考值是0。
28.根據以上權利要求的任一項所述的方法，其中所述參考值是選自下組，其組成為 一種細胞質部分、一種細胞質強度、一種細胞質部分與一種細胞質強度的一種函數、一種細 胞核部分、一種細胞核強度、以及一種細胞核部分與一種細胞核強度的一種函數。
29.根據以上權利要求的任一項所述的方法，其中所述參考值是選自下組，其組成為 一種細胞質部分、一種細胞質強度、以及一種細胞質部分與一種細胞質強度的一種函數。
30.根據以上權利要求的任一項所述的方法，其中所述參考值是50%或更低的HMGCR 蛋白陽性細胞的一種細胞質部分。
31.根據以上權利要求的任一項所述的方法，其中所述參考值是25%或更低的HMGCR 蛋白陽性細胞的一種細胞質部分。
32.根據以上權利要求的任一項所述的方法，其中所述參考值是10%或更低的HMGCR 蛋白陽性細胞的一種細胞質部分。
33.根據權利要求1至四的任一項所述的方法，其中所述參考值是HMGCR蛋白表達的 一種弱的或更低的細胞質強度。
34.根據權利要求1至四以及33的任一項所述的方法，其中所述參考值是HMGCR蛋白 表達的一種缺乏的細胞質強度。
35.根據權利要求1至四的任一項所述的方法，其中所述參考值是25%或更低的 HMGCR蛋白的一種細胞質部分或HMGCR蛋白表達的弱的或更低的一種細胞質強度。
36.根據以上權利要求的任一項所述的方法，其中該HMGCR蛋白的氨基酸序列包括選 自以下的一個序列i)SEQID NO 1 ；以及ii)一個與SEQ ID NO 1有至少85%相同的序列。
37.根據以上權利要求的任一項所述的方法，其中HMGCR蛋白的氨基酸序列包括選自 以下的一個序列i)SEQID NO 2 ；以及ii)一個與SEQ ID NO 2有至少85%相同的序列。
38.根據以上權利要求的任一項所述的方法，其中步驟b)包括bl)對所述樣品應用一種能夠選擇性地與該有待評價的HMGCR蛋白相互作用的可以計 量的親和配體，所述應用是在能夠使所述親和配體結合至存在于所述樣品中的任何HMGCR 蛋白的條件之下進行的；b2)去除未結合的親和配體；以及b3)定量該保持與所述樣品締合的親和配體以評價所述量。
39.根據權利要求38所述的方法，其中所述可以計量的親和配體是選自下組，其組成 為抗體、它們的片段、以及它們的衍生物。
40.根據權利要求39所述的方法，其中所述可以計量的親和配體是通過一個方法能得 到的，該方法包括用一種蛋白質免疫一種動物的一個步驟，該蛋白質的氨基酸序列包括序 列 SEQ ID NO :1ο
41.根據權利要求40所述的方法，其中所述可以計量的親和配體是通過一個方法能得 到的，該方法包括用一種蛋白質免疫一種動物的一個步驟，該蛋白質的氨基酸序列包括氨 基酸序列SEQ ID NO :1ο
42.根據權利要求38所述的方法，其中所述可以計量的親和配體是一種衍生于選自下 組的一種支架的蛋白配體，該組的組成為葡萄球菌蛋白A和其域、脂質運載蛋白、錨蛋白 重復域、纖維素結合域、Y晶型、綠色熒光蛋白、人細胞毒性T淋巴細胞相關抗原4、蛋白酶 抑制劑、PDZ域、肽適體、葡萄球菌核酸酶、淀粉酶抑肽、纖連蛋白III型域以及鋅指結構。
43.根據權利要求38所述的方法，其中所述可以計量的親和配體是一種寡核苷酸分子。
44.根據權利要求38至43的任一項所述的方法，其中所述可以計量的親和配體是能 夠與一種HMGCR蛋白選擇性地相互作用，該HMGCR蛋白的氨基酸序列包括SEQ ID NO 1或 SEQ ID NO 4 的序列。
45.根據權利要求38至44的任一項所述的方法，其中所述可以計量的親和配體包括一 種選自下組的標記物，該組的組成為熒光染料類和金屬類、發色染料類、化學發光化合物 類和生物發光蛋白類、酶類、放射性同位素類、顆粒以及量子點。
46.根據權利要求38至45的任一項所述的方法，其中所述可以計量的親和配體是使用 能夠識別所述可以計量的親和配體的一種第二親和配體檢測的。
47.根據權利要求46所述的方法，其中所述第二親和配體能夠識別所述可以計量的親 和配體，該可以計量的親和配體包括一種選自下組的標記物，該組的組成為熒光染料類和 金屬類、發色染料類、化學發光化合物類和生物發光蛋白類、酶類、放射性同位素類、顆粒以及量子點。
48.用于進行根據以上權利要求中的任一項所述的方法的試劑盒，該試劑盒包括a)能夠與一種HMGCR蛋白選擇性地相互作用一種可以計量的親和配體；以及b)用于定量所述可以計量的親和配體必需的試劑。
49.根據權利要求48所述的試劑盒，其中所述可以計量的親和配體是選自下組，其組 成為抗體、它們的片段、以及它們的衍生物。
50.根據權利要求49所述的試劑盒，其中所述可以計量的親和配體是通過一個方法能 得到的，該方法包括用一種蛋白質免疫一種動物的一個步驟，該蛋白質的氨基酸序列包括 序列 SEQ ID NO 1。
51.根據權利要求49所述的試劑盒，其中所述可以計量的親和配體是通過一個方法能 得到的，該方法包括用一種蛋白質免疫一種動物的一個步驟，該蛋白質的氨基酸序列包括 序列 SEQ ID NO 1。
52.根據權利要求48的任一項所述的試劑盒，其中所述可以計量的親和配體是一種衍 生于選自下組的一種支架的蛋白配體，該組的組成為葡萄球菌蛋白A和其域、脂質運載蛋 白、錨蛋白重復域、纖維素結合域、Y晶型、綠色熒光蛋白、人細胞毒性T淋巴細胞相關抗原 4、蛋白酶抑制劑、PDZ域、肽適體、葡萄球菌核酸酶、淀粉酶抑肽、纖連蛋白III型域以及鋅指 結構。
53.根據權利要求48的任一項所述的試劑盒，其中所述可以計量的親和配體是一種寡 核苷酸分子。
54.根據權利要求48至53的任一項所述的試劑盒，其中所述可以計量的親和配體能夠 與一種HMGCR蛋白選擇性地相互作用，該HMGCR蛋白包括或或其組成為選自以下的一個序 列i)SEQID NO 1 ；以及ii)一個與SEQ ID NO 1有至少85%相同的序列。
55.根據權利要求48至M的任一項所述的試劑盒，其中所述可以計量的親和配體能 夠與一種HMGCR蛋白選擇性地相互作用，該HMGCR蛋白包括或其組成為選自以下的一個序 列i)SEQ ID NO 2 ；以及一個與SEQ ID NO :2有至少85%相同的序列。
56.根據權利要求48至55的任一項所述的試劑盒，其中所述可以計量的親和配體能夠 與一種HMGCR蛋白選擇性地相互作用，該HMGCR蛋白包括或其組成為序列SEQ ID NO :4。
57.根據權利要求48至56的任一項所述的試劑盒，其中所述可以計量的親和配體包括 一種選自下組的標記物，該組的組成為熒光染料類和金屬類、發色染料類、化學發光化合 物類和生物發光蛋白類、酶類、放射性同位素類、顆粒以及量子點。
58.根據權利要求48至57的任一項所述的試劑盒，其中用于對所述可以計量的親和配 體的所述量進行定量必需的所述試劑包括能夠識別所述可以計量的親和配體的一種第二 親和配體。
59.根據權利要求58所述的試劑盒，其中所述第二親和配體包括一種選自下組的標記 物，該組的組成為熒光染料類和金屬類、發色染料類、化學發光化合物類和生物發光蛋白類、酶類、放射性同位素類、顆粒以及量子點。
60.根據權利要求48至59的任一項所述的試劑盒，進一步包括至少一種參比樣品用于 提供一個參考值。
61.根據權利要求60所述的試劑盒，其中至少一種參比樣品是一種不含有可檢出的 HMGCR蛋白的組織樣品。
62.根據權利要求60或61所述的試劑盒，其中至少一種參比樣品包括HMGCR蛋白。
63.根據權利要求60至62的任一項所述的試劑盒，其中至少一種參比樣品包括對應于 50%或更低的細胞質部分的一個量的HMGCR蛋白。
64.根據權利要求63所述的試劑盒，其中至少一種參比樣品包括對應于25%或更低的 細胞質部分的一個量的HMGCR蛋白。
65.根據權利要求64所述的試劑盒，其中至少一種參比樣品包括對應于10%或更低的 細胞質部分的一個量的HMGCR蛋白。
66.根據權利要求65所述的試劑盒，其中至少一種參比樣品包括對應于或更低的 細胞質部分的一個量的HMGCR蛋白。
67.根據權利要求60至66的任一項所述的試劑盒，其中至少一種參比樣品包括對應于 一種弱的或更低的細胞質強度的一個量的HMGCR蛋白。
68.根據權利要求67所述的試劑盒，其中至少一種參比樣品包括對應于一種缺乏的細 胞質強度的一個量的HMGCR蛋白。
69.根據權利要求60至68的任一項所述的試劑盒，其中至少一種參比樣品包括對應于 高于所述參考值的一個值的一個量的HMGCR蛋白。
70.根據權利要求69所述的試劑盒，其中至少一種參比樣品包括對應于一種強的細胞 質強度的一個量的HMGCR蛋白。
71.根據權利要求69或70所述的試劑盒，其中至少一種參比樣品包括對應于75%或 更高的細胞質部分的一個量的HMGCR蛋白。
72.根據權利要求60至71的任一項所述的試劑盒，該試劑盒包括一種第一參比樣品，該參比樣品包括對應于高于一個參考值的一個值(陽性參考值) 的一個量的HMGCR蛋白；以及一種第二參比樣品，該參比樣品包括對應于低于或等于所述參考值的一個值(陰性參 考值)的一個量的HMGCR蛋白。
73.根據權利要求60至72的任一項所述的試劑盒，其中所述一種或多種參比樣品是一 種或多種組織樣品。
74.根據權利要求48至73的任一項所述的試劑盒，進一步包括a’ )能夠與一種雌激素受體選擇性地相互作用的一種可以計量的親和配體；以及b’ )用于定量a’ )的可以計量的親和配體的量必需的試劑。
75.根據權利要求48至74的任一項所述的試劑盒，進一步包括a”)能夠與一種孕酮受體選擇性地相互作用的一種可以計量的親和配體；以及b”)用于定量a")的可以計量的親和配體的量必需的試劑。
76.一種HMGCR蛋白作為用于對于患有一種乳癌的哺乳動物受試者的一種內分泌治療 指示標志物的用途。
77.—種HMGCR蛋白或其一種抗原活性片段用于制造對于患有一種乳癌的哺乳動物受 試者的一種內分泌治療指示劑的用途。
78.—種HMGCR蛋白或其一種抗原活性片段用于對于患有一種乳癌的哺乳動物受試者 的一種內分泌治療指示劑的生產、選擇或純化的用途。
79.根據權利要求78所述的用途，其中所述內分泌治療指示劑是一種能夠與該HMGCR 蛋白或其一種抗原活性片段選擇性地相互作用的親和配體。
80.根據權利要求79所述的用途，其中該親和配體能夠與一種由序列SEQID N0:1組 成的蛋白質選擇性地相互作用。
81.根據權利要求76至80的任一項所述的用途，其中該HMGCR蛋白的氨基酸序列包括 或其組成為選自以下的一個序列i)SEQID NO 1 ；以及ii)一個與SEQ ID NO :1有至少85%相同的序列。
82.根據權利要求76至80的任一項所述的用途，其中該HMGCR蛋白的氨基酸序列包括 或其組成為選自以下的一個序列i)SEQID NO 2 ；以及ii)一個與SEQ ID NO 2有至少85%相同的序列。
83.親和配體，該親和配體能夠與一種HMGCR蛋白選擇性地相互作用，在體內用作一種 用于在患有一種乳癌的哺乳動物受試者中的內分泌治療指示劑。
84.親和配體，該親和配體能夠與一種HMGCR蛋白選擇性地相互作用，在體內用于評價 在患有一種乳癌的哺乳動物受試者中的HMGCR蛋白的一個量。
85.根據權利要求83至84的任一項所述的親和配體，該親和配體是通過一個方法能得 到的，該方法包括用一種蛋白質免疫一種動物的一個步驟，該蛋白質的氨基酸序列包括序 列 SEQ ID NO :1ο
86.根據權利要求85所述的親和配體，該親和配體是通過一個方法能得到的，該方法 包括用一種蛋白質免疫一種動物的一個步驟，該蛋白質的氨基酸序列包括序列SEQ ID NO 1。
87.根據權利要求83至86的任一項所述的親和配體，該親和配體能夠與一種由序列 SEQ ID NO :1組成的肽選擇性地相互作用。
88.根據權利要求83至86的任一項所述的親和配體，該親和配體能夠與一種由序列 SEQ ID NO :4組成的肽選擇性地相互作用。
89.根據權利要求83至88的任一項所述的一種親和配體作為一種患有一種乳癌的哺 乳動物受試者的內分泌治療指示劑的體外用途。
90.根據權利要求83至88的任一項所述的一種親和配體用于指示是否患有一種乳癌 的哺乳動物受試者將受益于一種內分泌治療的體外用途。
91.根據權利要求83至88的任一項所述的親和配體在用于患有一種乳癌的哺乳動物 受試者的一種內分泌治療指示劑的制造中的用途。
92.內分泌治療產品，該內分泌治療產品用于患有一種乳癌的哺乳動物受試者的治療， 其中所述受試者是HMGCR陽性的。
93.根據權利要求92所述的內分泌治療產品，其中所述乳癌是ER陰性的或冊陰性的。
94.根據權利要求92或93所述的內分泌治療產品是它莫西芬。
95.一種內分泌治療產品在用于患有一種乳癌的哺乳動物受試者的治療的一種藥物的 制造中的用途，其中所述受試者是HMGCR陽性的。
96.根據權利要求95所述的用途，其中所述乳癌是ER陰性的或冊陰性的。
97.根據權利要求95或96所述的用途，其中該內分泌治療產品是它莫西芬。
98.組件產品，該組件產品包括一種內分泌治療產品和一種他汀。
99.根據權利要求98所述的用于治療中的組件產品。
100.根據權利要求99所述的用于乳癌治療中的組件產品。
101.多種產品，該多種產品包括一種內分泌治療產品和一種他汀作為一種組合制劑在 治療中同時、分開或序貫使用。
102.多種產品，該多種產品包括一種內分泌治療產品和一種他汀作為一種組合制劑在 乳癌治療中同時、分開或序貫使用。
103.治療對其有需要的哺乳動物受試者的方法，其中所述受試者患有一種乳癌，該方 法包括以下步驟a)提供來自所述受試者的一種樣品；b)評價存在于至少部分的所述樣品中的HMGCR蛋白的量，并且確定與所述量對應的一 個樣品值；c)將在步驟b)中獲得的樣品值與一個參考值相比較；并且如果所述樣品值高于所述 參考值，d)則用一種內分泌治療方案治療所述受試者。
104.根據權利要求103所述的方法，其中所述乳癌是ER陰性的或冊陰性的。
105.根據權利要求104所述的方法，其中所述乳癌是ER陰性的。
106.治療對其有需要的哺乳動物受試者的方法，其中所述受試者患有一種乳癌，該方 法包括以下步驟a)提供來自所述受試者的一種樣品；b)評價存在于至少部分的所述樣品中的HMGCR蛋白的量，并且確定與所述量對應的一 個樣品值；c)將在步驟c)中獲得的樣品值與一個參考值相比較；以及由此確定所述受試者的 HMGCR狀況；d)獲得對于所述受試者的ER狀況；并且如果所述ER狀況或所述HMGCR狀況是陽性的，el)則用一種內分泌治療方案治療所述受試者，或如果所述ER狀況以及所述HMGCR狀況是陰性的，e2)則用一種非內分泌治療方案治療所述受試者。
107.根據權利要求106所述的方法，其中該ER狀況是獲自步驟a)的樣品。
108.根據權利要求103至107的任一項所述的方法，其中所述內分泌治療選自一種 SERM治療、一種芳香酶抑制劑治療、以及一種留體雌激素受體拮抗劑治療。
109.根據權利要求103至108的任一項所述的方法，其中所述內分泌治療是一種SERM 治療，并且所述SERM選自托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬、阿佐昔芬、以及它莫西芬。
110.根據權利要求103至109的任一項所述的方法，其中所述內分泌治療是它莫西芬治療。
111.根據權利要求103至110的任一項所述的方法，其中所述樣品是一種體液樣品。
112.根據權利要求111所述的方法，其中該體液是選自下組，其組成為血液、血漿、血 清、腦脊液、尿液、以及滲出物。
113.根據權利要求103至110的任一項所述的方法，其中所述樣品是一種細胞學樣品。
114.根據權利要求103至110的任一項所述的方法，其中所述樣品是一種糞便樣品。
115.根據權利要求103至114的任一項所述的方法，其中所述樣品包括來自所述受試 者的細胞。
116.根據權利要求103至115的任一項所述的方法，其中所述樣品包括來自所述受試 者的腫瘤細胞。
117.根據權利要求103至110的任一項所述的方法，其中所述樣品是一種組織樣品。
118.根據權利要求117所述的方法，其中所述組織樣品是一種乳癌組織樣品。
119.根據權利要求115至118的任一項所述的方法，其中步驟b)的評價限于所述樣品 的細胞的細胞質。
120.根據權利要求119所述的方法，其中所述樣品的所述細胞是腫瘤細胞。
121.根據權利要求103至120的任一項所述的方法，其中所述受試者是一位人類女性。
122.根據權利要求103至121的任一項所述的方法，其中所述受試者是一位絕經前的 女性。
123.根據權利要求103至122的任一項所述的方法，其中所述乳癌是一種II期乳癌。
124.根據權利要求103至123的任一項所述的方法，其中所述乳癌是一種淋巴結陽性 的乳癌。
125.根據權利要求103至124的任一項所述的方法，其中所述參考值是一個與在參比 樣品中HMGCR蛋白的一個量對應的值。
126.根據權利要求103至125的任一項所述的方法，其中步驟b)的所述樣品值被確定 為1 (對應于在所述樣品中可檢出的HMGCR蛋白)或0 (對應于在所述樣品中沒有可檢出的 HMGCR 蛋白)。
127.根據權利要求103至1 的任一項所述的方法，其中步驟c)的所述參考值對應于 不具有可檢出的HMGCR蛋白的一個參比樣品。
128.根據權利要求103至127的任一項所述的方法，其中步驟c)的所述參考值是0。
129.根據權利要求103至128的任一項所述的方法，其中所述參考值是選自下組，其組 成為一種細胞質部分、一種細胞質強度、一種細胞質部分與一種細胞質強度的一種函數、 一種細胞核部分、一種細胞核強度、以及一種細胞核部分與一種細胞核強度的一種函數。
130.根據權利要求103至129的任一項所述的方法，其中所述參考值是選自下組，其組 成為一種細胞質部分、一種細胞質強度、以及一種細胞質部分與一種細胞質強度的一種函 數。
131.根據權利要求103至130的任一項所述的方法，其中所述參考值是50%或更低的 HMGCR蛋白陽性細胞的一種細胞質部分。
132.根據權利要求103至131的任一項所述的方法，其中所述參考值是25%或更低的HMGCR蛋白陽性細胞的一種細胞質部分。
133.根據權利要求103至132的任一項所述的方法，其中所述參考值是10%或更低的 HMGCR蛋白陽性細胞的一種細胞質部分。
134.根據權利要求103至130的任一項所述的方法，其中所述參考值是HMGCR蛋白表 達的一種弱的或更低的細胞質強度。
135.根據權利要求103至130以及134的任一項所述的方法，其中所述參考值是HMGCR 蛋白表達的一種缺乏的細胞質強度。
136.根據權利要求103至130的任一項所述的方法，其中所述參考值是25%或更低的 HMGCR蛋白的一種細胞質部分或HMGCR蛋白表達的弱的或更低的一種細胞質強度。
137.根據權利要求103至136的任一項所述的方法，其中該HMGCR蛋白的氨基酸序列 包括選自以下的一個序列i)SEQID NO 1 ；以及ii)一個與SEQ ID NO 1有至少85%相同的序列。
138.根據權利要求103至136的任一項所述的方法，其中該HMGCR蛋白的氨基酸序列 包括選自以下的一個序列i)SEQID NO 2 ；以及ii)一個與SEQ ID NO :2有至少85%相同的序列。
139.根據權利要求103至138的任一項所述的方法，其中步驟b)包括bl)對所述樣品應用一種能夠選擇性地與該有待評價的HMGCR蛋白相互作用的可以計 量的親和配體，所述應用是在能夠使所述親和配體結合至存在于所述樣品中的HMGCR蛋白 的條件之下進行的；b2)去除未結合的親和配體；以及b3)定量該保持與所述樣品締合的親和配體以評價所述量。
140.根據權利要求139所述的方法，其中所述可以計量的親和配體是選自下組，其組 成為抗體、它們的片段、以及它們的衍生物。
141.根據權利要求140所述的方法，其中所述可以計量的親和配體是通過一個方法能 得到的，該方法包括用一種蛋白質免疫一種動物的一個步驟，該蛋白質的氨基酸序列包括 序列 SEQ ID NO 1。
142.根據權利要求141所述的方法，其中所述可以計量的親和配體是通過一個方法能 得到的，該方法包括用一種蛋白質免疫一種動物的一個步驟，該蛋白質的氨基酸序列包括 氨基酸序列SEQ ID NO =I0
143.根據權利要求139所述的方法，其中所述可以計量的親和配體是一種衍生于選自 下組的一種支架的蛋白配體，該組的組成為葡萄球菌蛋白A和其域、脂質運載蛋白、錨蛋 白重復域、纖維素結合域、Y晶型、綠色熒光蛋白、人細胞毒性T淋巴細胞相關抗原4、蛋白 酶抑制劑、PDZ域、肽適體、葡萄球菌核酸酶、淀粉酶抑肽、纖連蛋白III型域以及鋅指結構。
144.根據權利要求139所述的方法，其中所述可以計量的親和配體是一種寡核苷酸分子。
145.根據權利要求139至144的任一項所述的方法，其中所述可以計量的親和配體能 夠與一種HMGCR蛋白選擇性地相互作用，該HMGCR蛋白的氨基酸序列由SEQ ID NO 1或SEQID NO 4的序列組成。
146.根據權利要求139至145的任一項所述的方法，其中所述可以計量的親和配體包 括一種選自下組的標記物，該組的組成為熒光染料類和金屬類、發色染料類、化學發光化 合物類和生物發光蛋白類、酶類、放射性同位素類、顆粒以及量子點。
147.根據權利要求139至146的任一項所述的方法，其中所述可以計量的親和配體是 使用能夠識別所述可以計量的親和配體的一種第二親和配體檢測的。
148.根據權利要求147所述的方法，其中所述第二親和配體能夠識別所述可以計量的 親和配體，其包括一種選自下組的標記物，該組的組成為熒光染料類和金屬類、發色染料 類、化學發光化合物類和生物發光蛋白類、酶類、放射性同位素類、顆粒以及量子點。
149.治療對其有需要的哺乳動物受試者的方法，其中所述受試者患有一種乳癌，該治 療方法包括一種他汀和一種內分泌治療產品的同時、分開或序貫給藥。
150.根據權利要求149所述的方法，其中該內分泌治療產品是一種SERM。
151.根據權利要求149或150所述的方法，其中該內分泌治療產品是它莫西芬。
152.根據權利要求149至151的任一項所述的方法，其中所述他汀是一種親脂性/疏 水的他汀或一種疏水的他汀。
153.根據權利要求152所述的方法，其中所述他汀是一種親脂性/疏水的他汀，其選自 氟伐他汀、洛伐他汀、辛伐他汀、阿托伐他汀、以及西立伐他汀。
全文摘要
本發明提供了一種方法，該方法用于確定是否患有一種乳癌的哺乳動物受試者可能受益于一種內分泌治療，該方法包括以下步驟提供一種較早從所述受試者獲得的樣品；評價存在于至少部分的所述樣品中的HMGCR蛋白的量，并且確定與所述量對應的一個樣品值；將在步驟b)中獲得的樣品值與一個參考值相比較；以及，如果所述樣品值是高于所述參考值的，則做出該受試者可能受益于一種內分泌治療的結論。此外，提供了一種對應的治療方法連同進一步的使用方法，以及可以與乳癌治療或治療預測結合使用的手段。
文檔編號C12Q1/26GK102089442SQ200980126851
公開日2011年6月8日 申請日期2009年1月30日 優先權日2008年5月16日
發明者F·龐蒂恩, K·杰斯坦, M·烏萊恩 申請人:阿特拉斯抗體有限公司