專利名稱：多功能培養觀察池的制作方法
技術領域：
本實用新型涉及一種培養觀察池。
背景技術：
目前，醫學界普遍采用的激光掃描共聚焦顯微鏡專用培養觀察皿是在底
板1上開一個直徑為10mm左右的圓孔1-1，再用膠粘上一個0.13mm 0.17mm 厚蓋玻片2，圓孔1-1的壁與蓋玻片2之間形成圓柱形空槽用于觀察細胞， 熒光探針標記也在圓柱形空槽中進行(如圖1所示)。上述培養觀察皿存在如 下缺點 一、培養觀察皿的深度較淺，定量加入的觀察液極易流出來，而后 向觀察液中加入藥物，因觀察液流出使預先計算好的藥物濃度發生改變，從 而降低了實驗精度；二、培養觀察皿的深度較淺還會在灌流時產生虹吸現象； 三、細胞貼壁所需時間長，且無法使血液原代細胞和懸浮細胞貼壁；四、實 驗時間長。
實用新型內容
本實用新型的目的是為了解決現有的激光掃描共聚焦顯微鏡專用培養觀 察皿存在的實驗精度低、易產生虹吸現象、細胞貼壁所需時間長，且無法使 血液原代細胞和懸浮細胞貼壁以及實驗時間長的問題，進而提供一種多功能
培養觀察池。
本實用新型的技術方案是多功能培養觀察池由至少兩個培養觀察皿和 固定臺組成，每個培養觀察皿包括皿壁板、皿底板和細胞生長基質涂層，所 述皿壁板和皿底板由上至下制成一體構成皿體，.所述皿底板的上端面上沿培 養觀察皿的軸向開有培養觀察槽，.所述皿底板的上端面上沿培養觀察皿的軸 向還開有兩個灌流槽，所述兩個灌流槽沿培養觀察槽的軸線對稱設置，所述 兩個灌流槽均與培養觀察槽連通，且兩個灌流槽的深度h均小于培養觀察槽 的深度H，所述培養觀察槽的底面到皿底板的下端面的距離5為 0.1mm lmm，每個培養觀察皿分別安裝在固定臺上開設的相應的安裝槽內， 所述培養觀察槽的底面上涂有細胞生長基質涂層。.本實用新型與現有技術相比具有以下有益效果本實用新型的培養觀察 槽與兩個灌流槽連通，可定時或隨時對培養觀察皿進行灌流更換觀察液，控 制觀察液量，避免了細胞觀察液的流失，給細胞生長提供一個良好環境，從 而保證了預先計算好的藥物濃度恒定，提高了實驗精度；本實用新型的培養 觀察槽與兩個灌流槽連通還有效避免了虹吸現象的發生；本實用新型的培養 觀察槽的底面上的細胞生長基質涂層，縮短了細胞貼壁所需的時間，促使血 液原代細胞和懸浮細胞完全貼壁；另外本實用新型還避免了激光掃描共聚焦 顯微鏡的反復對焦，縮短了實驗時間。
圖l是現有的激光掃描共聚焦顯微鏡專用培養觀察皿的結構示意圖，圖2 是本實用新型的主視剖視圖，圖3是圖2的俯視圖，圖4是圖2的a處周部放大圖。
具體實施方式
具體實施方式
一(參見圖2 圖4)本實施方式的多功能培養觀察池由
至少兩個培養觀察皿8和固定臺7組成，每個培養觀察皿8包括皿壁板4、 皿底板5和細胞生長基質涂層9，所述皿壁板4和皿底板5由上至下制成一 體構成皿體3，所述皿底板5的上端面上沿培養觀察皿8的軸向開有培養觀 察槽5-1，所述皿底板5的上端面上沿培養觀察皿8的軸向還開有兩個灌流 槽5-2，所述兩個灌流槽5-2沿培養觀察槽5-l的軸線對稱設置，所述兩個灌 流槽5-2均與培養觀察槽5-1連通，且兩個灌流槽5-2的深度h均小于培養觀 察槽5-1的深度H，所述培養觀察槽5-1的底面到皿底板5的下端面的距離5 為0.1mm lmm，每個培養觀察皿8.分別安裝在固定臺7上開設的相應的安 裝槽7-l內，所述培養觀察槽5-l的底面上涂有細胞生長基質涂層9。
具體實施方式
二(參見圖4)本實施方式的培養觀察槽5-1的底面到皿 底板5的下端面的距離S為0.13mm。如此設置，實驗精度更高，激光掃描 共聚焦顯微鏡下的觀察圖清晰。其它組成和連接關系與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
三:(參見圖4)本實施方式的培養觀察槽5^1的底面到皿 底板5的下端面的距離S為0.17mm。如此設置，實驗精度更高，激光掃描 共聚焦顯微鏡下的觀察圖清晰。其它組成和連接關系與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
四(參見圖4)本實施方式的培養觀察槽5-l的底面上的細胞生長基質涂層9為多聚賴氨酸涂層。分子量為7 30 ku多聚賴氨酸 (poly-lysine)可以使細胞貼壁時間縮短至1小時，急性分離細胞貼壁時間 縮短至30分鐘；并促使血液原代細胞、懸浮細胞完全貼壁，血液原代細胞及 懸浮細胞的貼壁時間在10小時以內。其它組成和連接關系與具體實施方式
一 相同。
具體實施方式
五(參見圖4)本實施方式的培養觀察槽5-1的底面上的 細胞生長基質涂層9為纖維連接蛋白涂層。纖維連接蛋白(fibronectin)可 以使貼壁細胞貼壁時間縮短至4小時，急性分離細胞貼壁時間縮短至30分鐘； 并促使血液原代細胞、懸浮細胞完全貼壁，懸浮細胞的貼壁時間在12小時以 內，血液原代細胞貼壁時間在U小時以內。其它組成和連接關系與具體實施 方式一相同。 '
具體實施方式
六(參見圖4)本實施方式的培養觀察槽5-l的底面上的 細胞生長基質涂層9為層黏蛋白涂層。層黏蛋白(laminin)可以使貼壁細 胞貼壁時間縮短至3.5小時，急性分離細胞貼壁時間縮短至1小時；并促使 血液原代細胞、懸浮細胞完全貼壁，懸浮細胞的貼壁時間在7小時以內，血 液原代細胞貼壁時間在8小時以內。其它組成和連接關系與具體實施方式
一 相同。
具體實施方式
七(參見圖4)本實施方式的培養觀察槽5-1的底面上的 細胞生長基質涂層9為膠原涂層。膠原可以使貼壁細胞貼壁時間縮短至3.5 小時，急性分離細胞貼壁時間縮短至25分鐘；并促使血液原代細胞、懸浮細 胞完全貼壁，懸浮細胞的貼壁時間在8小時以內，血液原代細胞貼壁時間在 9小時以內。其它組成和連接關系與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
八(參見圖4)本實施方式的培養觀察槽5-1的底面上的 細胞生長基質涂層9為韌黏素涂層。韌黏素(tenascins)可以使貼壁細胞貼 壁時間縮短至5小時，急性分離細胞貼壁時間縮短至30分鐘；并促使血液原 代細胞、懸浮細胞完全貼壁，懸浮細胞的貼壁時間在9小時以內，血液原代 細胞貼壁時間在12小時以內。其它組成和連接關系與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
九(參見圖4)本實施方式的培養觀察槽5-1的底面上的 細胞生長基質涂層9為層粘蛋白涂層。層粘蛋白(vitronectin)可以使貼
5壁細胞貼壁時間縮短至4.5小時，急性分離細胞貼壁時間縮短至30分鐘；并 促使血液原代細胞、懸浮細胞完全貼壁，懸浮細胞的貼壁時間在8小時以內， 血液原代細胞貼壁時間在9小時以內。其它組成和連接關系與具體實施方式一相同。
具體實施方式
十(參見圖4)本實施方式的培養觀察皿8還增加有皿蓋 6，所述皿蓋6蓋裝在皿體3的上端面上。如此設置.，有效的腐止了藥物的揮 發，避免了預先計算好的藥物濃度因藥物揮發而發生改變，使得實驗精度更 精準。其它組成和連接關系與具體實施方式
一、二、三、四、五、六、七、 八或九相同。
采用現有的培養觀察皿及本實用新型在相同的條件下對急性早幼粒細 胞白血病NB4細胞，用臺氏液洗滌兩次，然后用.5nmol/L的Fluo-3/AM染色， 再加入0.03%PluronicF-127在37"C恒溫水浴中孵育45min，然后用臺氏液再 洗滌兩次去除細胞外殘留的Fluo-3/AM，最后在激光掃描共聚焦顯微鏡下觀 察。所述激光掃描共聚焦顯微鏡由日本奧林巴斯株會社(Olympus)生產， 其型號為Fluoview-FV3.00。采用現有的培養觀察皿得到的圖像模糊，而且其 中的細胞移動明顯；采用本實用新型得到的圖像清晰，細胞移動不明顯，可 見細胞已經完全貼在培養觀察皿壁上。
權利要求1、一種多功能培養觀察池，它由至少兩個培養觀察皿(8)和固定臺(7)組成，其特征在于每個培養觀察皿(8)包括皿壁板(4)、皿底板(5)和細胞生長基質涂層(9)，所述皿壁板(4)和皿底板(5)由上至下制成一體構成皿體(3)，所述皿底板(5)的上端面上沿培養觀察皿(8)的軸向開有培養觀察槽(5-1)，所述皿底板(5)的上端面上沿培養觀察皿(8)的軸向還開有兩個灌流槽(5-2)，所述兩個灌流槽(5-2)沿培養觀察槽(5-1)的軸線對稱設置，所述兩個灌流槽(5-2)均與培養觀察槽(5-1)連通，且兩個灌流槽(5-2)的深度h均小于培養觀察槽(5-1)的深度H，所述培養觀察槽(5-1)的底面到皿底板(5)的下端面的距離δ為0.1mm～1mm，每個培養觀察皿(8)分別安裝在固定臺(7)上開設的相應的安裝槽(7-1)內，所述培養觀察槽(5-1)的底面上涂有細胞生長基質涂層(9)。
2、 根據權利要求1所述多功能培養觀察池，其特征在于所述培養觀察 槽(5-1)的底面到皿底板(5)的下端面的距離5為0.13mm。
3、 根據權利要求1所述多功能培養觀察池，其特征在于所述培養觀察 槽(5-1)的底面到皿底板(5)的下端面的距離S為0.17mm。
4、 根據權利要求1所述多功能培養觀察池，其特征在于培養觀察槽 (5-1)的底面上的細胞生長基質涂層(9)為多聚賴氨酸涂層、纖維連接蛋白涂層、層黏蛋白涂層、膠原涂層、韌黏素涂層或層粘蛋白涂層。
5、 根據權利要求l、 2 、 3或4所述多功能培養觀察池，其特征在于 所述培養觀察皿(8)還包括皿蓋(6)，所述皿蓋(6)蓋裝在皿體(3)的上 端面上。
專利摘要一種多功能培養觀察池，它涉及一種培養觀察池。本實用新型的目的是為了解決現有的激光掃描共聚焦顯微鏡專用培養觀察皿存在的實驗精度低、易產生虹吸現象、細胞貼壁所需時間長，且無法使血液原代細胞和懸浮細胞貼壁以及實驗時間長的問題。本實用新型的皿底板的上端面上開有培養觀察槽，皿底板的上端面上還開有兩個灌流槽，兩個灌流槽沿培養觀察槽的軸線對稱設置，兩個灌流槽均與培養觀察槽連通，且兩個灌流槽的深度h均小于培養觀察槽的深度H，每個培養觀察皿均安裝在固定臺上開設的相應的安裝槽內，培養觀察槽的底面上涂有細胞生長基質涂層。本實用新型提高了實驗精度，避免了虹吸現象的發生，促使血液原代細胞和懸浮細胞貼壁并縮短了實驗時間。
文檔編號C12M3/04GK201378220SQ2009200993
公開日2010年1月6日 申請日期2009年3月16日 優先權日2009年3月16日
發明者晉 周, 巍 王, 肖建兵 申請人:周 晉;王 巍