專利名稱：：活性乳酸菌飲料中菌落總數的檢測方法活性乳酸菌飲料中菌落總數的檢測方法
技術領域：
：本發明涉及一種微生物檢測方法。
背景技術：
：隨著消費群體對食品安全的日益重視，國家對食品安全的監測與控制及要求也越來越嚴格，各食品廠家對生產關鍵環節與控制點也加強了監控措施。均要求對產品的細菌總數進行檢測，《食品衛生微生物學檢驗》(GB/T4789-2008)規定了多類食品的菌落總數的檢驗方法，只有活性乳酸菌制品尚沒有統一的菌落總數檢驗方法。乳酸菌是一類能夠利用可發酵性糖產生大量乳酸的細菌通稱。其共同特征是革蘭氏染色陽性，過氧化氫酶陰性，兼性厭氧，營養要求復雜，需要碳水化合物、氨基酸、肽類、無機鹽、維生素等多種營養物質和生長因子才能正常生長和代謝。乳酸菌對人體的保健作用不斷被人們所認識，酸奶制品發展迅速，越來越多的具有特殊益生功能的乳酸菌被添加到乳品中，以酸乳為代表的活性乳酸菌飲料已成為人們日常飲品。德氏乳桿菌保加利亞種、嗜熱鏈球菌、嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌、雙歧桿菌等為發酵菌種，被單獨應用或多株菌聯合發酵或后混合方式來生產益生菌酸奶。乳酸菌數量是評價該類產品營養價值與保健作用的重要依據。因此，該類產品質量評價常用活菌計數法評定.酸乳國家標準中規定，乳酸菌數不得低于IX106cfu/mL。目前市場流通的產品中乳酸菌的含量多數達到109cfu/mL左右。菌落總數的測定，可以了解產品在生產中，從原料加工到成品包裝及貯存運輸等環節受外界污染的情況，也可以觀測產品中細菌的性質以及細菌在產品中繁殖動態，可以對被檢樣品進行衛生學評價時提供科學依據，菌落總數是檢測產品衛生狀況的重要指標。大量實驗證明，乳酸菌飲料中的污染菌在產品貨架期內可以存活，對消費者的健康造成潛在的威脅。因此，必須對活性乳酸菌飲料的污染菌總數進行檢測。活性乳酸菌飲料由于本身含有大量的活性乳酸菌，對菌落總數檢測形成極大干擾。其菌落總數的檢測難題一直困擾著生產者和衛生監督者。我國目前還沒有統一的活性乳酸菌飲料菌落總數的測定方法，國際上有ISO13559:2002(E)《黃油、發酵奶制品和鮮奶酪.污染微生物的計數.在3(TC時的菌落計數法》及日本《乳酸菌粉末清涼飲料菌落總數測定》。IS013559:2002(E)由于采用涂布法，檢驗精度受到一定影響，而且檢測時間長；日本《乳酸菌粉末清涼飲料菌落總數測定》，用添加青霉素G鉀的葡萄糖瓊脂培養基與添加4%氯化鈉的BCP平板計數瓊脂培養基上生長菌落數的差值作為菌落總數，操作繁瑣，由于培養基添加的選擇性抑制成分對檢測的影響復雜，降低了結果的準確度，同時也存在檢測靈敏度不夠的問題。
發明內容本發明旨在提供一種檢測結果準確，檢測周期短的活性乳酸菌飲料中菌落總數的檢測方法。其中所述的活性乳酸菌飲料菌落總數是指活性乳酸菌飲料中除乳酸菌之外的其它菌落的總數。因此，該菌落總數不包括乳酸菌在內。本發明所述的活性乳酸菌飲料中菌落總數的檢測方法，其使用濾膜過濾活性乳酸菌飲料的稀釋液，然后用生理鹽水沖洗濾膜，將沖洗后的濾膜濾面朝上貼于TTC營養瓊脂平板上，37t:下倒置培養48士2h后計數。在一個優選的實施例中，濾膜的孔徑為0.45iim。在另一個優選的實施例中，TTC營養瓊脂中TTC的含量為2.5mg/100mL。采用本發明所述的方法，可準確、簡便及快速的對活性乳酸菌飲料中的污染細菌菌落總數進行檢測，從而為檢查活性乳酸菌飲料的衛生質量提供有效方法。具體實施方式實施例1:TTC營養瓊脂配制稱取33g營養瓊脂，加入蒸餾水或去離子水1升，分裝三角瓶，攪拌加熱煮沸溶解，12rC高壓滅菌15min。滅菌后，待培養基冷卻至45。C左右時，加入無菌TTC，使TTC濃度達到2.5mg/100ml，混勻，倒平板。實施例2:人工污染樣品菌落總數檢測取大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌、蠟樣芽孢桿菌新鮮培養物，以無菌生理鹽水稀釋至0.5麥氏比濁管濃度，然后10倍系列稀釋，將三種菌的適宜稀釋度菌液分別加入無菌的樣品A、B、C、D中，使樣品中各污染菌濃度達到1000cfu/ml左右。取lml加菌后樣品至9ml無菌生理鹽水中混勻，制成10倍稀釋液，取lml稀釋液至適量(25ml)無菌生理鹽水中混勻，通過O.45iim濾膜過濾，再用25ml生理鹽水沖洗濾膜，沖洗后濾膜濾面朝上貼于實施例1所述的TTC營養瓊脂平板。37t:、48士2h倒置培養。其計數情況如下樣品本底乳酸菌量加入污染菌加入污染菌量檢出值(cfu/ml)(cfu/ml)(cfu/ml)(cfu/ml)樣品A1.2X1010大腸埃希氏菌9592金黃色葡萄球菌156145蠟樣芽孢桿菌8688樣品B5.2X109大腸埃希氏菌9595金黃色葡萄球菌156154蠟樣芽孢桿菌8685樣品c2.1X1010大腸埃希氏菌9590金黃色葡萄球菌156159蠟樣芽孢桿菌8682樣品D3.9Xi09大腸埃希氏菌9597金黃色葡萄球菌156151蠟樣芽孢桿菌8679由上表可知，本發明方法在高濃度本底乳酸菌存在情況下，可以正確計數菌落總數。實施例3:本發明與ISO13559:2002(E)《黃油、發酵奶制品和鮮奶酪.污染微生物的計數.在3(TC時的菌落計數法》的比較市場購買30種酸奶樣品，分別采取本發明和ISO13559:2002(E)《黃油、發酵奶制品和鮮奶酪.污染微生物的計數.在3(TC時的菌落計數法》方法，對菌落總數進行檢驗。本發明檢出2份樣品菌落總數陽性，IS0方法檢出1份。本發明，10倍稀釋濃度，28份樣品在濾膜上沒有菌落生長，樣品1生長3個菌落，經鑒定，均不是乳酸菌，可以計入菌落總數，樣品l的菌落總數為30cfu/ml。ISO方法沒有檢出。樣品2，10倍稀釋濃度，菌落數多不可計，稀釋至1000倍時80個菌落，鑒定結果均非乳酸菌，樣品2菌落總數8.0X104cfu/ml，與ISO方法相當。具體見表4本發明、ISO方法檢驗結果相當；樣品中菌數較少時，本發明準確度要高于ISO方法。本發明在樣品中菌落總數>10cfu/ml時，就可以正確計數，檢測下限達到10cfu/ml。本發明檢測時間為48h，ISO方法為72h。<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>權利要求活性乳酸菌飲料中菌落總數的檢測方法，其特征在于使用濾膜過濾活性乳酸菌飲料的稀釋液，然后用生理鹽水沖洗濾膜，將沖洗后的濾膜濾面朝上貼于TTC營養瓊脂平板上，37℃下倒置培養48±2h后計數。2.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于濾膜的孔徑為0.45m。3.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于所述的TTC營養瓊脂中TTC的含量為2.5mg/100mL。全文摘要本發明所述的活性乳酸菌飲料中菌落總數的檢測方法涉及一種微生物檢測方法。其使用濾膜過濾活性乳酸菌飲料的稀釋液，然后用生理鹽水沖洗濾膜，將沖洗后的濾膜濾面朝上貼于TTC營養瓊脂平板上，37℃下倒置培養48±2h后計數。采用本發明所述的方法，可準確、簡便及快速的對活性乳酸菌飲料中的污染細菌菌落總數進行檢測，從而為檢查活性乳酸菌飲料的衛生質量提供有效方法。文檔編號C12Q1/06GK101717813SQ20091021429公開日2010年6月2日申請日期2009年12月28日優先權日2009年12月28日發明者何天文,吳清平,蔡芷荷,馬德良申請人:廣東環凱微生物科技有限公司