專利名稱：一種用于桃的生物保鮮劑及其制備方法和應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種水果保鮮劑，具體涉及一種用于桃的生物保鮮劑及其制備方法和 應用，屬于水果保鮮劑的技術領域。
背景技術：
桃以其汁多甜潤、營養豐富而深受廣大消費者喜愛。但桃的果肉質軟、含水量和含 糖量高，極易腐爛；采收期正值高溫季節，果實采收成熟衰老進程很快，極不耐貯存和運輸。目前桃采用的防腐保鮮措施主要有冰窖貯藏、熱激處理、電子技術保鮮法、微波 保鮮法、自發氣調法、減壓貯藏、使用化學殺菌劑等等。但是目前的現有技術存在這樣或那 樣的缺點冷庫貯藏，極易發生冷害，條件不易控制；熱激處理、電子技術保鮮法和微波保鮮法目前僅處于研究階段，有很多技術關鍵 沒有解決，未能進入實際生產應用；氣調貯藏和減壓貯藏是效果相對較好，但成本較高；使用化學殺菌劑會產生藥物殘留，嚴重影響消費者健康和產品出口。因此，桃采后保鮮急需一種具有操作簡單、高效無毒、天然安全并且價格低廉等特 點的保鮮技術。
發明內容
本發明就是為了解決上述問題，克服桃的果實病原菌的生長、繁殖，防止桃貯存過 程中的腐爛、褐變，延緩桃衰老過程的問題，提供一種用于桃的生物保鮮劑及其制備方法和 應用。該發明適用于桃，尤其適用于水蜜桃，也可用于其它水果和蔬菜。本發明是為了解決上述現有技術的不足之處，提供一種高效、安全、價格低廉的生 物保鮮劑。本發明是從豆制品中分離的食品微生物枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis), 由加拿大農業及農業食品部，食品研究中心提供的代謝產物制成，安全性高。另外，它是 微生物的分泌物而不是微生物細胞本身，因而具有高安全性。此微生物生命力強，生長速度 快，對生長條件要求不高，可在簡單的培養基中生長，成本低。本發明所需要解決的技術問題，可以通過以下技術方案來實現作為本發明的第一發面，一種用于桃的生物保鮮劑，其特征在于，包括按照重量 份數計，微生物產生的代謝產物995-999份，吐溫20 1-5份；所述微生物是枯草芽孢桿菌 (Bacillus subtilis)，所述微生物的菌體濃度 IXlO8 ~ IX IO9 個/ml。所述用于桃的生物保鮮劑，包括微生物產生的代謝產物999重量份，吐溫20為1 重量份。所述微生物是枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)，本生物保鮮劑來源新，本發明 是利用枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)的代謝產物。本發明所用培養基為改良的LB培養基，通過稀釋倒皿法和平板劃線法(兩者結合用)從發酵的豆制產品中分離出的有效的食品微生物，純化后利用平板對峙法篩選拮抗菌 株。上述改良LB培養基配方葡萄糖5g/L，蛋白胨10g/L，酵母膏5g/L，氯化鈉5g/L， 磷酸二氫鉀 0. 25g/L，碳酸鈣 0. 25g/L，瓊脂 18g/L，水 1L，ρΗ7· 0。上述的稀釋倒平板法先將待分離的材料用無菌水依次作一系列的10倍稀釋液 (如1 10、1 100、1 1000、1 10000...)，然后分別從每一個濃度梯度吸取ImL稀釋液加入已滅菌的培養皿中，再倒入已溶化并冷卻至55°C左右的改良LB培養基，混合均勻， 待瓊脂凝固后，30°C培養Mh。挑取在平板表面或瓊脂培養基中分散的單個菌落，或重復以 上操作數次，便可得到純培養。上述的平板劃線分離法由接種環以菌操作沾取少許待分離材料，在無菌平板表 面進行平行劃線或扇形劃線，微生物細胞數量將隨著劃線次數的增加而減少，并逐步分散 開來，如果劃線適宜的話，微生物能逐個分散，經培養后，可在平板表面得到單菌落。上述平板對峙法在固體PDA培養基上，中間接種平板劃線法純化得到并已培養 好的直徑0. 5cm的菌塊，兩側接種直徑為0. 5cm的病原菌二8°C培養3_6天，每天3次測定 病原菌直徑和拮抗菌直徑，對照中間接種無菌培養基塊，通過測定其抑制能力篩選拮抗性 能好的菌株。作為本發明的第二方面，一種用于桃的生物保鮮劑的制備方法，其特征在于，包括 以下步驟(1)拮抗菌的活化細菌固體培養基做試管斜面，將拮抗菌株枯草芽孢桿菌 (Bacillus subtilis)轉接在斜面上擴大培養；(2)枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)拮抗菌搖床發酵菌體轉接至液體培養 基中搖床發酵；(3)離心除菌體搖床發酵好的菌液低速離心除去菌體，保存上清液以備用；(4)樣品檢測測定發酵上清液對病原菌的孢子萌發抑制率；(5)包裝按每瓶IOOOml規格要求進行塑料瓶包裝。其中，步驟(1)中所述細菌固體培養基為改良的LB培養基制成的試管斜面，將拮 抗菌株枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)轉接在斜面上28 30°C培養M 48小時。其中，改良LB培養基配方葡萄糖5g/L，蛋白胨10g/L，酵母膏5g/L，氯化鈉5g/L， 磷酸二氫鉀 0. 25g/L，碳酸鈣 0. 25g/L，瓊脂 18g/L，水 1L，ρΗ7· 0。其中，步驟O)中發酵培養基為馬鈴薯液體培養基，發酵參數為搖床115轉/分 鐘，溫度22 25°C，發酵時間7-10天，菌體濃度1 X IO8 1 X IO9個/ml。其中，步驟(3)中所述離心是在4500轉/分鐘條件下離心30分鐘，保存上清液的 溫度為4°C。作為本發明的第三方面，一種用于桃的生物保鮮劑的應用，其特征在于，包括以下 步驟(1)桃分揀挑選無病蟲害、無機械損傷、150 250g的八分熟桃子；(2)噴霧處理將配制好的保鮮劑均勻的噴在桃表面；(3)風干噴霧處理過的桃子用風扇吹干或自然風干；(4)裝箱、預冷處理、保存將應經風干的桃子裝有單層保鮮盒的保鮮箱里，避免擠壓；先放置在冷庫中預冷，再將冷庫溫度調到桃貯藏溫度。其中，步驟( 所述噴霧處理，使用前將保鮮劑與吐溫20配制成1000 1的溶液， 細孔噴霧器噴霧處理桃，每個桃子用5ml保鮮劑。其中，步驟(4)所述預冷溫度6 10°C、濕度85% 90%、預冷時間12-14小時， 所述桃貯藏溫度0 rc。本發明的有益效果本生物保鮮劑來源新，本發明是從發酵的豆制產品中分離出的食品微生物作為拮 抗菌株，所述微生物是枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)，本發明是利用枯草芽孢桿菌 (Bacillus subtilis)的代謝產物，不添加其他化學防腐成分。由于該保鮮劑不是微生物本 身，而是微生物的代謝產物，一定時間后可自動分解，更使得此保鮮劑綠色環保、無污染、無 殘留，保證了其保鮮食品的安全性。本發明具有防止桃腐爛變質、保持水分、延緩其衰老的作用，其保鮮效果明顯高于 其他國內生物保鮮劑。本發明的保鮮劑制備工藝先進，可操作性強。另外，本發明的應用方法簡便，保鮮效果好，產品成本低，易于產業化生產和推廣。
以下結合附圖和具體實施方式
來進一步說明本發明。
圖1 10°C下保鮮劑對桃好果率的影響圖2 25°C下保鮮劑對桃好果率的影響
具體實施例方式為了使本發明的技術手段、創作特征、達成目的與功效易于明白了解，下面結合具 體圖示，進一步闡述本發明。菌種的來源和制備。本發明是由豆制品中分離的食品微生物枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)，由 加拿大農業及農業食品部，食品研究中心提供的代謝產物制成。微生物是枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)，本發明所用培養基為改良的LB培 養基，通過稀釋倒皿法和平板劃線法(兩者結合用)從發酵的豆制產品中分離出的有效的 食品微生物，純化后利用平板對峙法篩選拮抗菌株。其中，改良LB培養基配方葡萄糖5g/L，蛋白胨10g/L，酵母膏5g/L，氯化鈉5g/L， 磷酸二氫鉀 0. 25g/L，碳酸鈣 0. 25g/L，瓊脂 18g/L，水 1L，ρΗ7· 0。其中，稀釋倒平板法先將待分離的材料用無菌水依次作一系列的10倍稀釋液 (如1 10、1 100、1 1000、1 10000...)，然后分別從每一個濃度梯度吸取ImL稀釋液加入已滅菌的培養皿中，再倒入已溶化并冷卻至55°C左右的改良LB培養基，混合均勻， 待瓊脂凝固后，28°C培養Mh。挑取在平板表面或瓊脂培養基中分散的單個菌落，或重復以 上操作數次，便可得到純培養。其中，平板劃線分離法由接種環以菌操作沾取少許待分離材料，在無菌平板表面 進行平行劃線或扇形劃線，微生物細胞數量將隨著劃線次數的增加而減少，并逐步分散開5來，如果劃線適宜的話，微生物能逐個分散，經培養后，可在平板表面得到單菌落。其中，平板對峙法在固體PDA培養基上，中間接種平板劃線法純化得到并已培養 好的直徑0. 5cm的菌塊，兩側接種直徑為0. 5cm的病原菌二8°C培養3_6天，每天3次測定 病原菌直徑和拮抗菌直徑，對照中間接種無菌培養基塊，通過測定其抑制能力篩選拮抗性 能好的菌株。一種用于桃的生物保鮮劑的制備方法，包括以下操作步驟(1)拮抗菌的活化挑取篩選好的菌株接種在改良的LB培養基(葡萄糖5g/L，蛋 白胨10g/L，酵母膏5g/L，氯化鈉5g/L，磷酸二氫鉀0. 25g/L，碳酸鈣0. 25g/L，瓊脂18g/L， 水1L，pH7. 0)的試管斜面上，觀 30°C培養M 48小時，待用；(2)拮抗菌搖床發酵將已活化的拮抗菌接種在馬鈴薯液體培養基中，搖床115 130轉/分鐘，溫度22 25°C，發酵時間7-10天，菌體濃度1 X IO8 1 X IO9個/mL ；(3)離心除菌體發酵液用4500轉/分鐘的轉速離心30分鐘除去菌體，4°C保存 上清液以備用；(4)樣品檢測測定上清液對病原菌的孢子萌發或者絲核萌發的抑制率，以確定 樣品的穩定性；(5)包裝按每瓶IOOOml規格要求進行塑料瓶包裝。一種用于桃的生物保鮮劑的應用，包括以下操作步驟(1)桃分揀挑選無病蟲害、無機械損傷、150 250g的八分熟桃子；(2)噴霧處理使用前將保鮮劑與吐溫20配制成1000 1的溶液，將配制好的溶 液用細孔噴霧器均勻的噴在桃表面，每個桃子5mL ；(3)風干噴霧處理過的桃子用風扇吹干或自然風干；(4)裝箱、預冷處理、保存將應經風干的桃子裝有單層保鮮盒的保鮮箱里，避免 擠壓，放置在溫度6 10°C、濕度85% 90%的冷庫中預冷12 14小時，再將冷庫溫度調 到桃貯藏溫度0 1°C。上述制備及應用過程應注意離心過的上清液要4°C保存；應用時，噴霧要均勻、 完全，桃子的各個部位都要噴到。以下為本發明與其他保鮮劑的比較結果如圖1所示，10°C下保鮮劑對桃好果率的影響如圖2所示，25°C下保鮮劑對桃好果率的影響注C06為本發明的桃生物保鮮劑，BOl為國內另一家使用量較大的果蔬生物保鮮 劑。試驗結果表明，參見圖1和圖2，本發明在常溫和低溫條件下的保鮮效果明顯高于 生物保鮮劑B01，其好果率、感官等口味等各項指標均優于生物保鮮劑B01。本發明屬于生物保鮮劑，該生物保鮮劑，是利用改良的LB培養基通過稀釋倒皿法 和平板劃線法，從豆制品中分離出的食品微生物產生的代謝產物，具有防腐功能的食品微 生物，不添加其他化學防腐成分。特別適合于對桃等核果類水果在貯藏和運輸過程中的保 鮮。此生物保鮮劑是一種它可抑制桃的主要病原菌的生長、繁殖，防止桃貯存過程中的腐 爛、褐變，延緩桃衰老過程，用于水蜜桃保鮮，效果更佳。由于本保鮮劑成分是微生物的分泌 物而不是微生物細胞本身，因而具有高安全性。其保鮮劑來源新，安全無毒、無害、無污染，6制備工藝簡單、成本低廉、易產業化生產，其應用方法也較為簡便，利于推廣。
以上顯示和描述了本發明的基本原理、主要特征和本發明的優點。本行業的技術 人員應該了解，本發明不受上述實施例的限制，上述實施例和說明書中描述的只是說明本 發明的原理，在不脫離本發明精神和范圍的前提下本發明還會有各種變化和改進，這些變 化和改進都落入要求保護的本發明范圍內。本發明要求保護范圍由所附的權利要求書及其 等同物界定。
權利要求
1.一種用于桃的生物保鮮劑，其特征在于，包括按照重量份數計，微生物產生的代謝產 物995-999份，吐溫201-5份；所述微生物是枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)，所述微 生物的菌體濃度1 X IO8 1 X IO9個/ml。
2.根據權利要求1所述的一種用于桃的生物保鮮劑，其特征在于，所述用于桃的生物 保鮮劑，包括微生物產生的代謝產物999重量份，吐溫20為1重量份。
3.—種如權利要求1所述的用于桃的生物保鮮劑的制備方法，其特征在于，包括以下 步驟(1)拮抗菌的活化細菌固體培養基做試管斜面，將拮抗菌株枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)轉接在斜面上擴大培養；(2)枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)拮抗菌搖床發酵菌體轉接至液體培養基中 搖床發酵；(3)離心除菌體搖床發酵好的菌液低速離心除去菌體，保存上清液以備用；(4)樣品檢測測定發酵上清液對病原菌的孢子萌發抑制率；(5)包裝按每瓶IOOOml規格要求進行塑料瓶包裝。
4.根據權利要求3所述的一種用于桃的生物保鮮劑的制備方法，其特征在于，步驟(2) 中發酵培養基為馬鈴薯液體培養基，發酵參數為搖床115轉/分鐘，溫度22 25°C，發酵時 間7-10天，菌體濃度1 X IO8 1 X IO9個/ml。
5.根據權利要求3所述的一種用于桃的生物保鮮劑的制備方法，其特征在于，步驟(3) 中所述離心是在4500轉/分鐘條件下離心30分鐘，保存上清液的溫度為4°C。
6.一種如權利要求1所述的用于桃的生物保鮮劑的應用，其特征在于，包括以下步驟(1)桃分揀挑選無病蟲害、無機械損傷、150 250g的八分熟桃子；(2)噴霧處理將配制好的保鮮劑均勻的噴在桃表面；(3)風干噴霧處理過的桃子用風扇吹干或自然風干；(4)裝箱、預冷處理、保存將應經風干的桃子裝有單層保鮮盒的保鮮箱里，避免擠壓； 先放置在冷庫中預冷，再將冷庫溫度調到桃貯藏溫度。
7.根據權利要求6所述的一種用于桃的生物保鮮劑的應用，其特征在于，步驟(2)所述 噴霧處理，使用前將保鮮劑與吐溫20配制成1000 1的溶液，細孔噴霧器噴霧處理桃，每 個桃子用5ml保鮮劑。
8.根據權利要求6所述的一種用于桃的生物保鮮劑的應用，其特征在于，步驟(4)所述 預冷溫度6 10°C、濕度85% 90%、預冷時間12-14小時，所述桃貯藏溫度0 1°C。
全文摘要
一種用于桃的生物保鮮劑，包括枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)的代謝產物995-999份，吐溫20 1-5份；菌體濃度1×108～1×109個/mL。該保鮮劑的制備方法，包括以下步驟拮抗菌株的活化、拮抗菌株搖床發酵、離心除菌體、樣品檢測、包裝；該保鮮劑的應用包括桃分揀、噴霧處理、風干、裝箱。本發明適合于對桃等核果類水果在貯藏和運輸過程中的保鮮。它可抑菌，防止腐爛、褐變，延緩桃衰老過程，用于水蜜桃保鮮，效果更佳。由于本保鮮劑成分是微生物的分泌物而不是微生物細胞本身，具有高安全性，制備工藝簡單、成本低廉、易產業化生產，其應用也較為簡便，利于推廣。
文檔編號A23B7/155GK102047951SQ20091020978
公開日2011年5月11日 申請日期2009年10月29日 優先權日2009年10月29日
發明者何惠霞, 方毅, 曹玉明, 高海燕 申請人:上海佳邁農業技術服務有限公司