專利名稱：：用于檢測和/或鑒別細菌的介質的制作方法用于檢測和/或鑒別細菌的介質本發明領域涉及微生物生物化學分析領域，特別涉及細菌的檢測與鑒別。病原性細菌、特別是革蘭氏陰性菌如腸桿菌(w"ra^"eW^)、弧菌(J^n'owace"e)或者假單胞菌(/^wcfowoway)與每年的許多疾病、流行病等相關。假單胞菌是遍在細菌，存在于土壤中、植物上，特別是在淡水和海水中。許多菌株可以在低溫下生長，因此污染冰箱中貯存的食物，并且與胃腸道感染相關。它們也與醫院內感染相關。通常在臨床細菌學中分離的腸桿菌屬于檸檬酸桿菌屬(C^o^rfw)、腸桿菌屬(E"tera^cfe^、埃希氏菌屬^Eyc/zen'c/H^、哈夫尼菌屬(/7a/"/a)、克雷伯氏菌屬(《/efe/e〃a)、摩根氏菌屬(Mwga"e〃力、變形桿菌屬(尸rafew"、普羅威登斯菌屬CPrav^fe"c/a)、沙門氏菌屬(5b/mowe〃a)、沙雷氏菌屬OSerra^)、志賀氏菌屬(57^6//0)和耶爾森氏菌屬(1^^>^)。大腸桿菌(Eco/O是主要存在于消化道中的需氧菌。然而，水中存在該細菌表示糞便污染，而且某些菌株是病原性的并導致腹膜、膽、闌尾或者生殖器化膿。沙門氏菌屬細菌是脊椎動物和鳥類的腸道寄生物并且通過污染的食物傳播至人。然后導致胃腸炎和傷寒以及副傷寒。最后檸檬酸桿菌如弗氏檸檬酸桿菌(C^o^"w/"m7^7)是人和動物消化道的共生菌，其可以分離自尿液、呼吸道分泌物或者甚至從血液中分離，并且與免疫抑制個體中的感染相關。對于這些革蘭氏陰性菌的早期和特異性檢測使得可以提供在治療方面消除污染的合適溶液等。現有許多檢測革蘭氏陰性菌的介質。這種檢測可特別基于使用對希望檢測的細菌的代謝活性如酶活性是特異的特定底物通過選擇底物，根據是否有反應而可以鑒定微生物的性質。可特別提及的是UriSelect4介質(Bio-Rad)，其使用P-半乳糖苷酶底物組合P-葡糖苷酶底物并且組合檢測色氨酸酶以檢測大腸桿菌菌株以及分離(3-半乳糖苷酶陽性/(3-葡糖苷酶陰性檸檬酸桿菌屬菌株。也可提及的是UTI介質(oxoid)，其使用(3-半乳糖苷酶底物組合P-葡糖苷酶底物并且組合檢測色氨酸酶以檢測大腸桿菌菌株以及分離P-半乳糖苷酶陽性/p-葡糖苷酶陰性檸檬酸桿菌屬菌株。CPSID3介質(bioM6rieux)使用P-葡糖醛酸糖苷酶底物組合P-葡糖苷酶底物，任選組合檢測色氨酸酶以檢測大腸桿菌菌株。BBLCHROMagarOrientation介質(Becton-Dickinson)使用卩-半乳糖苷酶底物組合(3-葡糖苷酶底物并且組合檢測色氨酸酶以檢測大腸桿菌菌株以及分離(3-半乳糖苷酶陽性/(3-葡糖苷酶陰性檸檬酸桿菌屬菌株。最后，UrineSpecificAgar介質(AESLaboratoire)使用p-葡糖醛酸糖苷酶底物組合檢測色氨酸酶以檢測大腸桿菌菌株，并將其與檸檬酸桿菌屬菌株區分。然而，使用p-葡糖醛酸糖苷酶底物檢測大腸桿菌的顯色介質呈現極佳的特異性，但是由于不表達這種活性的少部分(5-10%)大腸桿菌菌株的存在而導致靈敏性不佳。此外，一些檸檬酸桿菌屬菌株也可產生P-葡糖醛酸糖苷酶陽性菌落，具有與大腸桿菌相同的顏色。對于使用P-半乳糖苷酶底物檢測大腸桿菌的顯色介質，需要通過進行區分大腸桿菌與其它表達(3-半乳糖苷酶活性、但不表達或者微弱表達P-葡糖苷酶活性的腸桿菌特別是某些檸檬酸桿菌屬菌株的額外檢測證實鑒定結果。關于沙門氏菌屬的檢測，可以提及的是SMID介質，其使用葡糖醛酸和P-半乳糖苷酶底物。然而，需要進行生物化學和/或血清學證實以檢測沙門氏菌屬菌株并將其與其它腸桿菌特別是檸檬酸桿菌屬菌株加以區分。最后，關于假單胞菌屬，可以提及的是Cetrimide介質，其使用Cetrimide并且通過檢測綠膿菌素以檢測銅綠假單胞菌(尸w^/owowosaen^'mw")菌株，并將其與其它革蘭氏陰性菌區分。然而，這種介質特異性方面的改良將會具有優勢。本發明計劃通過提供新的介質解決現有技術中存在的問題，所述新的介質特別適于快速且廉價以及以易于執行的方式鑒別革蘭氏陰性菌。6了包含代謝活性底物與誘導劑的特定組合的介質使得可以快速且便利地檢測革蘭氏陰性菌。更特別地，本發明人特別揭示了碳水化合物、特別是纖維二糖對p-葡糖苷酶的誘導，使得可以減少產生與大腸桿菌相同顏色的菌落的檸檬酸桿菌屬菌株的數目，從而可以極佳地分離這兩種菌種。在進行本發明之前，提供如下定義以便于理解本發明。術語Mlib匿是指包含微生物存活和/或生長所需的所有元素的介質。這種檢測介質可以僅作為檢測介質，或者作為培養和檢測介質。在第一種情況中，微生物的培養在接種之前進行；在第二種情況中，檢測介質也組成培養介質。本發明的培養介質可含有其它可能的添加劑，例如胨或者組織提取物，一或多種生長因子，碳水化合物，一或多種選擇劑，緩沖液，一或多種膠凝劑等。這種培養介質可以是液體形式或者易于使用的凝膠，即易于接種在試管或燒瓶中或者培養皿上。對于本發明，檢測可以在液體介質中、條帶(strip)上或者另一種固體支持物上進行。術語革蘭氏陰性菌是指在通過革蘭氏染色法染色期間不保持結晶紫色而呈現粉紅色的細菌菌群。這種革蘭氏陰性菌群可特別包含或者特別由腸桿菌屬、沙門氏菌屬、銅綠假單胞菌組成。作為革蘭氏陰性菌，可以特別提及的是腸桿菌科，弧菌科如霍亂弧菌(W6n'oc/zo/erae),或者假單胞菌，特別是銅綠假單胞菌。作為腸桿菌，可以特別提及的是如下屬爿fc/^wa"e〃a,'爿/^racoccw;J《w/mcwas,'爿raw/co/a,.殺左隹菌屬(」/^ewo//20ww5O，'Jzo//v/rga,'^/oc/zmaww/afba"^Wafw^,.Sw"eWa,巴克納氏菌屬(Swc/wera);布戴約維采菌屬(5w(iWc/a);布丘氏菌屬(B城/"Mxe〃a);鞘桿菌屬(C"/yw歸to6flc^/謹)；西地西菌屬(Ce^CM);檸檬酸桿菌屬，，D/Cfe^";愛德華氏菌屬腸桿菌屬；歐文氏菌屬(五nWw'")，例如解淀粉歐文氏菌flm_y/ovora);±矣希氏菌屬，例如大腸桿菌；愛文氏菌屬(￡>W"ge//a);哈夫尼菌屬；克雷伯氏菌屬，例如肺炎克雷伯氏菌(ii:/eZwW/ap"ewmo"/ae),'克呂沃爾氏菌屬(X/wyvera),'勒克氏菌屬(丄ec/ercz'a),勒米i若氏菌屬(丄emz'"ore〃a),'萊文氏菌屬(Lev/wea),'米勒氏菌屬(A/oe〃ere〃a),.摩根氏菌屬；肥桿菌屬(O^ywm^c&n'wm);泛菌屬(尸朋toea);果膠桿菌屬(PectoZacm-廳)；尸/2/cw06acterfb朋(i油加」,光桿狀菌屬(P/70toAaWw)，.鄰單胞菌屬(尸ks/owoww)，例如類志賀鄰單胞菌(尸/ew'omo"osA/ge〃oWas);布拉格菌屬(尸rag/a),變形桿菌屬，例如普通變形桿菌(尸rato^vw/gan》,普羅威登斯菌屬,.拉恩氏菌屬(ia/me〃a);7aowte〃(3;糖桿菌屬(&cc/zan6acfer);沙門氏菌屬；iS函s謹'",.沙雷氏菌屬，例如粘質沙雷氏菌(6^ra"awwc"cera),志賀氏菌屬,So&fc;塔特姆氏菌屬(T^簡e〃a);77zo庶〃/a，特拉布斯氏菌屬(rra6油zW/a),.附^g/eswoW/^;致病桿菌屬(^e"c^/za6c/w:s);耶爾森氏菌屬，例如鼠疫耶爾森氏菌(&ra她預研菌屬(M:騰〃a)。術語包含檸檬酸桿菌的菌群是指包含屬于檸檬酸桿菌屬的細菌的菌群。這個菌群也包含其它種。因此，優選的包含檸檬酸桿菌的菌群是包含或者由檸檬酸桿菌屬、腸桿菌屬、克雷伯氏菌屬和沙雷氏菌屬細菌組成的菌群(也稱作KESC菌群)。術語iiM是指由于微生物的酶或者代謝活性而能直接或者間接產生可檢測信號的任何分子。所述底物可以特別是與指示劑偶聯的代謝底物如碳源或者氮源，所述指示劑在存在代謝產物之一的條件下產生顏色。所述底物也可以是酶底物，即可以被酶水解產生能直接或者間接檢測微生物的產物的底物。這種底物可以特別包含第一部分和第二部分，所述第一部分對要被揭示的酶活性是特異的，所述第二部分作為標記，在后文稱作標記部分。這個標記部分可以是生色的、熒光的、發光的等。作為適于固體支持物(濾膜、瓊脂、電泳凝膠)的生色底物，可以提及的是基于吲哚酚及其衍生物的底物，以及基于羥基喹啉或者七葉亭及其衍生物的底物，其可以檢測osidase和酯酶活性。還可以提及的是基于硝基酚和硝基苯胺及衍生物的底物，其用于在基于硝基酚的底物的情況中檢測osidase和酯酶活性，以及在基于硝基苯胺的底物的情況中檢測肽酶活性。最后，可以提及的是基于萘酚和萘胺及其衍生物的底物，其可以通過萘酚檢測osidase和酯酶活性，以及通過萘胺檢測肽酶活性。這種底物可以特別地但以非限制性的方式使得可以檢測酶活性如osidase、肽酶、酯酶等的活性。酶底物也可以是天然底物，其水解產物可以被直接或者間接檢測。作為天然底物，可以特別提及的是色氨酸，用以檢測色氨酸酶或者脫氨酶活性；環形氨基酸(色氨酸、苯丙氨酸、組氨酸、酪氨酸)，用以檢測脫氨酶活性；磷脂酰肌醇，用以檢測磷脂酶活性等。根據本發明，所述底物優選選自基于如下成分的底物吲哚酚(3-吲哚酚、5-溴-3』引哚酚、4-氯-3』引哚酚、5-碘代-3-卩引哚酚、5-溴-4-氯-3』引哚酚、5-溴-6-氯-3』引噪酚、6-溴-3』引哚酚、6-氯-3』引哚酚、6-氟-3』引哚酚、5-溴-4-氯-N-甲基-3』引哚酚、N-甲基-3』引哚酚等)；傘形酮(4-甲基傘形酮、環己并七葉亭(cyclohexenoesculetin)等)；茜素；對萘酚基苯甲醇；硝基酚(正硝基酚、對硝基酚等)；萘酚(oc-萘酚、2-萘酚、萘酚-ASBI等)；氨基苯酚(對氨基苯酚、二氯氨基苯酚等)；羥基喹啉；鄰苯二酚(鄰苯二酚、二羥基黃酮、羥基黃酮等)；試鹵靈；氯酚紅；熒光素；氨基香豆素(7-氨基-4-甲基-香豆素等)；萘胺；吖啶(氨基苯基吖啶)；或者氨基吩噁嗪術語fiiiMJi是指在細菌中發生的化學反應的總稱。這些化學反應可以與一或多種酶活性、與分子的降解、合成或者修飾關聯。短語革蘭氏陰性菌菌群特異性代謝活性是指由該革蘭氏陰性菌群優先產生的代謝活性。對于包含或者由大腸桿菌組成的菌群而言，可以特別提及的是!3-葡糖醛酸糖苷酶、(3-半乳糖苷酶、a-半乳糖苷酶、乳糖的酸化、色氨酸酶、|3-核糖苷酶(p-ribosidase)、磷酸酶、L-丙氨酸氨肽酶以及L-亮氨酸氨肽酶。優選所述代謝活性是p-葡糖醛酸糖苷酶或者(3-半乳糖苷酶。用于檢測P-葡糖醛酸糖苷酶活性的底物可以特別是4-甲基傘形基-(3-葡糖苷酸(4-M6thylumbelliftryl-beta-glucuronide)、5-溴-4-氯-3』引哚基-p-葡糖苷酸、5-溴-6-氯-3-吲哚基-(3-葡糖苷酸、6-氯-3-吲哚基-(3-葡糖苷酸、茜素-P-葡糖苷酸或者環己并七葉亭-P-葡糖苷酸或者其鹽，濃度優選在10至1000mg/1之間。用于檢測P-半乳糖苷酶活性的底物可以特別是4-甲基傘形基-P-半乳糖苷、5-溴-4-氯-3-剛哚基-P-半乳糖苷、5-溴-6-氯-3-吲哚基-P-半乳糖苷、6-可以提及的是oc-半乳糖苷酶、酯酶、葡糖醛酸鹽/酯(glucuronate)的酸化、山梨糖醇、丙二醇、蜜二糖和甘露醇。作為a-半乳糖苷酶底物，可以提及的是4-甲基傘形基-oc-半乳糖苷、5-溴-4-氯-3-吲哚基-a-半乳糖苷、5-溴-6-氯-3-剛哚基-oc-半乳糖苷、6-氯-3-吲哚基-ot-半乳糖苷、茜素-oc-半乳糖苷或者硝基苯基-oc-半乳糖苷，濃度在10至1000mg/l之間。在酯酶底物中，可以提及的是4-甲基傘形基辛酸酯、5-溴-4-氯-3-吲哚酚辛酸酯、5-溴-4-氯-3』引哚酚壬酸酯、5-溴-6-氯-3』引哚酚辛酸酯、5-溴-6-氯-3』引哚酚己酸酯、6-氯-3』引哚酚辛酸酯或者茜素辛酸酯，濃度在20至1000mg/1之間。對于包含或者由銅綠假單胞菌組成的菌群，也可以提及的是酯酶、氨肽酶或者氧化酶。在酯酶底物中，可以提及的是4-甲基傘形基辛酸酯、5-溴-4-氯-3-吲哚酚辛酸酯、5-溴-4-氯-3』引哚酚壬酸酯、5-溴-6-氯-3』引哚酚辛酸酯、5-溴-6-氯-3-吲哚酚己酸酯、6-氯-3-吲哚酚辛酸酯或者茜素辛酸酯，濃度在20至1000mg/1之間。在氨肽酶底物中，可以特別提及的是P-丙氨酰酰胺苯酚(beta-Alanyl-amidoph6no1)、P-丙氨酰二氯酰胺苯酚、P-丙氨酰-對硝基酰苯胺、P-丙氨酰-P-萘胺、7-N-(p-丙氨酰)氨基吩噁嗪-1-戊基-3_酮或者7-N-(L-焦谷氨酰)氨基吩噁嗪-l-戊基-3-酮，濃度在10至1000mg/1之間。術語MMH是指誘導靶向的代謝活性表達增加的化合物；所有實驗條件均相同，當以適當濃度應用誘導劑時，與無所述誘導劑或者應用不合適濃度的誘導劑時相比代謝活性更強。可以特別提及的是，對于(3-葡糖苷酶或纖維二糖苷酶，由在P-位置與葡萄糖相連的碳水化合物組成的碳水化合物，或者具有(3-葡糖苷亞基的碳水化合物，特別是纖維二糖、纖維素、淀粉、纖維三糖或者海藻糖。也可以提及的是甲基-P-葡糖苷、異丙基-P-硫代葡糖苷、B引哚酚-p-葡糖苷或者甲基-P-硫代葡糖苷；對于p-葡糖醛酸糖苷酶，葡糖醛酸鹽/酯，甲基-p-葡糖苷酸或者其它卩-葡糖苷酸；，對于(3-半乳糖苷酶，乳糖，異丙基-P-硫代半乳糖苷或者其它(3-半乳糖苷。非限制性地，特別適合本發明的濃度在100ng/l至10g/l之間，優選在10mg/l至3g/l之間。術語生物學樣品是指得自生物學體液樣品的臨床樣品，或者得自任何類型食物的食物樣品，或者環境樣品如表面樣品、水樣品、空氣樣品等。這種樣品因此可以是液體或者固體，可以非限制性提及的是來自血液、血漿、尿液或糞便的臨床樣品，取自鼻、咽喉、皮膚、傷口或者腦脊液的樣品，得自水或者飲料如奶或者果汁的食物樣品；得自酸奶、肉、蛋、蔬菜、蛋黃醬或者奶酪的樣品；得自魚等的樣品，或者得自動物飼料的食物樣品，例如得自動物食物的樣品。本發明還涉及檢測介質，其包含一革蘭氏陰性菌菌群特異性代謝活性的底物；P-葡糖苷酶或纖維二糖苷酶底物；P-葡糖苷酶或纖維二糖苷酶誘導劑，所述誘導劑是由在p-位置與葡萄糖相連的碳水化合物組成的碳水化合物，或者具有P-葡糖苷亞基的碳水化合物。用于檢測(3-葡糖苷酶活性的底物可特別是4-甲基傘形基-P-葡糖苷、5-溴畫4-氯—3-卩引哚基-p-葡糖苷、5-溴-6-氯-3-卩引哚基-P-葡糖苷、6-氯-3』引哚基畫卩-葡糖苷、茜素-P-葡糖苷、環己并七葉亭-(3-葡糖苷、硝基苯基-(3-葡糖苷或者二氯氨基苯基葡糖苷或者其鹽，濃度優選在IO至1000mg/l之間。作為纖維二糖苷酶底物，可以提及的是4-甲基傘形基-P-纖維二糖苷、5-溴-4-氯-3-吲哚基-P-纖維二糖苷、5-溴-6-氯-3-吲哚基-(3-纖維二糖苷、6扁氯-3-吲哚基-P—纖維二糖苷或者硝基苯基-P-纖維二糖苷。根據本發明一個優選的實施方案，P-葡糖苷酶或纖維二糖苷酶誘導劑的濃度在100ng/1至10g/1之間，優選在10mg/1至3g/1之間。優選地，誘導劑選自纖維二糖、纖維素、淀粉、纖維三糖和海藻糖。li根據本發明一個優選的實施方案，P-葡糖苷酶或纖維二糖苷酶誘導劑是纖維二糖。優選地，纖維二糖的濃度在100ng/l至10g/l之間，甚至更優選在10mg/l至3g/l之間。根據本發明一個優選的實施方案，所述革蘭氏陰性菌群包含腸桿菌。根據本發明一個更優選的實施方案，所述革蘭氏陰性菌群由腸桿菌組成。根據本發明一個優選的實施方案，所述腸桿菌是大腸桿菌。因此，所述腸桿菌群可包含或者由大腸桿菌組成。在這個實施方案中，所述代謝活性的底物是大腸桿菌特異的并且優選選自(3-葡糖醛酸糖苷酶的底物、p-半乳糖苷酶的底物或者a-半乳糖苷酶的底物、乳糖酸化的底物、或者色氨酸酶的底物、P-核糖苷酶的底物、磷酸酶的底物、L-丙氨酸氨肽酶的底物或者L-亮氨酸氨肽酶的底物。優選地，所述底物是P-葡糖醛酸糖苷酶的底物或者P-半乳糖苷酶的底物。根據本發明另一個優選的實施方案，所述腸桿菌是沙門氏菌。因此，所述腸桿菌群可包含或者由沙門氏菌組成。在這個實施方案中，所述代謝活性的底物是沙門氏菌特異性的且優選選自a-半乳糖苷酶的底物、酯酶的底物或者葡糖醛酸鹽/酯酸化的底物、或者山梨糖醇、丙二醇、蜜二糖或者甘露醇。根據本發明另一個優選的實施方案，所述革蘭氏陰性菌群包含或者由銅綠假單胞菌組成。優選地，所述代謝活性的底物是銅綠假單胞菌特異的且選自酯酶的底物、氨肽酶的底物或者氧化酶的底物。根據本發明一個優選的實施方案，所述檢測介質還包含所述革蘭氏陰性菌群特異性代謝活性的誘導劑，所述革蘭氏陰性菌群優選包含腸桿菌。根據本發明一個特定的實施方案，(3-葡糖醛酸糖苷酶的誘導劑優選選自葡糖醛酸、甲基-P-葡糖苷酸或者其它P-葡糖苷酸。根據本發明另一個優選的實施方案，P-半乳糖苷酶的誘導劑優選選自乳糖、異丙基-(3-硫代半乳糖苷或者其它卩-半乳糖苷。根據本發明一個優選的實施方案，所述檢測介質還包含第二種P-葡糖苷酶或纖維二糖苷酶誘導劑，如甲基-卩-葡糖苷、異丙基-P-硫代葡糖苷、吲哚酚-P-葡糖苷或者甲基-p-硫代葡糖苷。優選地，所述誘導劑是甲基-(3-葡糖苷。優選地，所述第二種誘導劑的濃度在100ng/1至10g/1之間，優選在100mg/1至3g/1之間，更優選在50至200mg/1之間。本發明還涉及上述介質在區分包含檸檬酸桿菌的菌群與另一革蘭氏陰性菌群中的應用。根據本發明的一個優選實施方案，所述介質用于區分包含或者由檸檬酸桿菌組成的菌群與包含或者由大腸桿菌組成的菌群。根據本發明的另一個優選實施方案，所述介質用于區分包含或者由擰檬酸桿菌組成的菌群與包含或者由沙門氏菌組成的菌群。根據本發明的另一個優選實施方案，所述介質用于區分包含或者由檸檬酸桿菌組成的菌群與包含或者由銅綠假單胞菌組成的菌群。本發明還涉及包含如下成分的培養介質卩-葡糖苷酶底物；P-葡糖苷酶或纖維二糖苷酶誘導劑，所述誘導劑是由在P-位置與葡萄糖相連的碳水化合物組成的碳水化合物，或者具有P-葡糖苷亞基的碳水化合物，優選選自纖維二糖、纖維素、淀粉、纖維三糖和海藻糖，濃度在10mg/1至10g/l之間。這個介質特別適于區分包含或者由檸檬酸桿菌組成的菌群與另一革蘭氏陰性菌群。在此方面，本發明還涉及上述介質在區分包含檸檬酸桿菌的菌群與另一革蘭氏陰性菌群中的應用。優選地，本發明涉及上述介質在區分如下菌群中的應用包含或由檸檬酸桿菌組成的菌群與包含或者由大腸桿菌組成的菌群;*包含或由檸檬酸桿菌組成的菌群與包含或者由沙門氏菌組成的菌群;包含或由擰檬酸桿菌組成的菌群與包含或者由銅綠假單胞菌組成的菌群。本發明還涉及包含如下成分的介質在區分包含檸檬酸桿菌的菌群與另一革蘭氏陰性菌群中的應用P-葡糖苷酶底物；^-葡糖苷酶或纖維二糖苷酶誘導劑，所述誘導劑是由在(3-位置與葡萄糖相連的碳水化合物組成的碳水化合物，或者具有P-葡糖苷亞基的碳水化合物，優選選自纖維二糖、纖維素、淀粉和纖維三糖，所述介質優選用于區分，包含或由檸檬酸桿菌組成的菌群與包含或者由大腸桿菌組成的菌群;包含或由檸檬酸桿菌組成的菌群與包含或者由沙門氏菌組成的菌群；包含或由檸檬酸桿菌組成的菌群與包含或者由銅綠假單胞菌組成的菌群。本發明還涉及區分生物學樣品中包含檸檬酸桿菌的菌群與革蘭氏陰性菌群的方法，所述方法包括如下步驟將生物學樣品接種于上述檢測介質上以獲得細菌菌落；或者接種于包含p-葡糖苷酶底物和p-葡糖苷酶或纖維二糖苷酶誘導劑的介質上以獲得細菌菌落，所述誘導劑是由在p-位置與葡萄糖相連的碳水化合物組成的碳水化合物，或者具有(3-葡糖苷亞基的碳水化合物，優選選自纖維二糖、纖維素、淀粉和纖維三糖；將與所述P-葡糖苷酶底物反應的菌落鑒別為屬于包含或者由檸檬酸桿菌組成的菌群，與所述革蘭氏陰性菌特異性底物反應的菌落鑒別為革蘭氏陰性菌。優選地，所述方法用于區分包含或由檸檬酸桿菌組成的菌群與包含或者由大腸桿菌組成的菌群；-包含或由檸檬酸桿菌組成的菌群與包含或者由沙門氏菌組成的菌群；包含或由檸檬酸桿菌組成的菌群與包含或者由銅綠假單胞菌組成的菌群。微生物接種可以通過本領域技術人員己知的任何接種技術進行。保溫步驟可以在對于希望檢測的酶活性是最佳的溫度下進行，本領域技術人員根據檢測的酶活性可易于選擇所述溫度。可以通過目測法或者通過比色法或熒光測定法進行鑒別。實施例如下實施例只是解釋了本發明而無限制本發明之意。通過如下實施例可以更清晰地理解本發明。實施例l:纖維二糖對區分大腸桿菌與檸檬酸桿菌的貢獻向CPSID3介質(bioM6rieux)中加入不同濃度的纖維二糖(0-100-350-1000mg/l)。這些介質含有250mg/1的6-氯-3-吲哚基-P-葡糖苷酸和50mg/1的5-溴-4-氯-3』引哚基-P-葡糖苷。將這些介質以20ml每個培養皿比例分布于培養皿中。將來自申請人收集的微生物接種于這些介質上，通過半定量分離0.5McFarland的10pl懸浮液，稀釋至1/20。將這些培養皿在37i:保溫48小時。在接種24小時和48小時之后目測形成的菌落。記錄這些菌落的顏色。結果在下表l中示出。表l:CPSID3介質中纖維二糖濃度對于菌落顏色的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>在上表1中可以看出在存在纖維二糖的條件下，檸檬酸桿菌菌株表達(3-葡糖苷酶活性，這通過菌落由綠色變為紫色而反映出，根據所述菌株是否平行表達(3-葡糖醛酸糖苷酶活性而定。因此，在不存在纖維二糖的條件下，弗氏檸檬酸桿菌022菌株(在24小時的粉紅色菌落)可以與大腸桿菌菌株混淆，而在存在纖維二糖的條件下不再出現這種情況。實施例2:纖維二糖濃度對區分檸檬酸桿菌與其它腸桿菌的影響向補加50mg/1的5-溴-6-氯-3』引哚基-P-半乳糖苷及50mg/1的5-溴-4-氯-3-吲哚基-P-葡糖苷的Trypticase大豆培養基(bioM6rieux)中加入不同濃度的纖維二糖(0-0.1-1-5-10g/l)。將這些培養基以20ml每個培養皿比例分布于培養皿中。將來自申請人收集的微生物接種于這些培養基上，通過半定量分離0.5McFarland的10pi懸浮液，稀釋至1/20。將這些培養皿在37°C保溫48小時。在接種24小時和48小時之后目測形成的菌落。記錄這些菌落的顏色。結果在下表2中示出。表2:補加5-溴-6-氯-3』引哚基-P-半乳糖苷和5-溴-4-氯-3』引哚基-P-葡糖苷的Trypticase大豆培養基中纖維二糖的濃度對于菌落顏色的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>在上表2中可以看出在存在纖維二糖的條件下，檸檬酸桿菌菌株表達卩-葡糖苷酶活性，這通過菌落的顏色由綠色變為紫色而反映出來，根據該菌株是否平行表達P-半乳糖苷酶活性而定。因此在不存在纖維二糖的條件下，弗氏擰檬酸桿菌菌株(在24小時的紫紅色菌落)可與大腸桿菌菌株混淆，在存在纖維二糖的條件下不再出現這種情況。然而，這種區分在纖維二糖濃度高于5g/l時不太明顯。權利要求1、一種檢測介質，其包含·革蘭氏陰性菌菌群特異性代謝活性的底物；·β-葡糖苷酶或纖維二糖糖苷酶底物；·β-葡糖苷酶或纖維二糖糖苷酶誘導劑，所述誘導劑是由在β-位置與葡萄糖相連的碳水化合物組成的碳水化合物，或者具有β-葡糖苷亞基的碳水化合物，優選選自纖維二糖、纖維素、淀粉、纖維三糖和海藻糖。2、權利要求1的介質，其中所述P-葡糖苷酶或纖維二糖糖苷酶誘導劑的濃度在100ng/l至10g/l之間，優選在10mg/l至3g/l之間。3、權利要求1或2的介質，其中所述(3-葡糖苷酶或纖維二糖糖苷酶誘導劑是纖維二糖。4、權利要求l-3任一項的介質，其中所述革蘭氏陰性菌菌群包含腸桿菌。5、權利要求4的介質，其中所述腸桿菌是大腸桿菌。6、權利要求5的介質，其中所述代謝活性的底物是大腸桿菌特異的且選自P-葡糖醛酸糖苷酶的底物、(3-半乳糖苷酶的底物或者a-半乳糖苷酶的底物，乳糖酸化的底物，或者色氨酸酶的底物、P-核糖苷酶的底物、磷酸酶的底物、L-丙氨酸氨肽酶的底物或者L-亮氨酸氨肽酶的底物，優選P-葡糖醛酸糖苷酶的底物或者p-半乳糖苷酶的底物。7、權利要求4的介質，其中所述腸桿菌是沙門氏菌。8、權利要求7的介質，其中所述代謝活性的底物是沙門氏菌特異的且選自a-半乳糖苷酶的底物、酯酶的底物或者葡糖醛酸鹽/酯酸化的底物、或者山梨糖醇、丙二醇、蜜二糖或者甘露醇。9、權利要求1-3任一項的介質，其中所述革蘭氏陰性菌菌群包含銅綠假單胞菌。10、權利要求9的介質，其中所述代謝活性的底物是銅綠假單胞菌特異的且選自酯酶的底物、氨肽酶的底物或者氧化酶的底物。11、權利要求l-10任一項的介質，其中所述檢測介質還包含所述革蘭氏陰性菌特異性代謝活性的誘導劑。12、權利要求1-11任一項的介質，其中所述檢測介質還含有第二種(3-葡糖苷酶或纖維二糖糖苷酶誘導劑，如甲基-卩-葡糖苷、異丙基-卩-硫代葡糖苷、吲哚酚-P-葡糖苷或者甲基-卩-硫代葡糖苷。13、一種介質，其包含P-葡糖苷酶底物；P-葡糖苷酶或纖維二糖糖苷酶誘導劑，所述誘導劑是由在P-位置與葡萄糖相連的碳水化合物組成的碳水化合物，或者具有P-葡糖苷亞基的碳水化合物，優選選自纖維二糖、纖維素、淀粉、纖維三糖和海藻糖，濃度在10mg/l至3g/l之間。14、權利要求1-13任一項的介質在區分包含檸檬酸桿菌的菌群與另一革蘭氏陰性菌菌群中的應用。15、包含如下成分的介質在區分包含檸檬酸桿菌的菌群與另一革蘭氏陰性菌菌群中的應用(3-葡糖苷酶底物；P-葡糖苷酶或纖維二糖糖苷酶誘導劑，所述誘導劑是由在P-位置與葡萄糖相連的碳水化合物組成的碳水化合物，或者具有(3-葡糖苷亞基的碳水化合物，優選選自纖維二糖、纖維素、淀粉和纖維三糖。16、在生物學樣品中區分包含檸檬酸桿菌的菌群與另一革蘭氏陰性菌菌群的方法，其中1)將所述生物學樣品接種于權利要求1-12任一項的檢測介質上或者接種于包含如下成分的介質上以獲得細菌菌落P-葡糖苷酶底物；卩-葡糖苷酶或纖維二糖糖苷酶誘導劑，所述誘導劑是由在13-位置與葡萄糖相連的碳水化合物組成的碳水化合物，或者具有P-葡糖苷亞基的碳水化合物，優選選自纖維二糖、纖維素、淀粉和纖維三糖；2)將與所述P-葡糖苷酶底物反應的菌落鑒別為屬于包含或者由檸檬酸桿菌組成的菌群，與革蘭氏陰性菌特異性底物反應的菌落鑒別為革蘭氏陰性菌。全文摘要本發明涉及一種檢測介質，其包含特異于一革蘭氏陰性菌菌群的代謝活性的底物；β-葡糖苷酶或纖維二糖糖苷酶底物；β-葡糖苷酶或纖維二糖糖苷酶誘導劑，所述誘導劑是由在β-位置與葡萄糖相連的碳水化合物組成的碳水化合物，或者具有β-葡糖苷亞基的碳水化合物，優選選自纖維二糖、纖維素、淀粉、纖維三糖和海藻糖。文檔編號C12Q1/04GK101631874SQ200880004506公開日2010年1月20日申請日期2008年2月7日優先權日2007年2月8日發明者C·羅歇-達伯特,M·卡斯,S·歐倫加申請人:生物梅里埃公司