專利名稱：一株表達腺苷蛋氨酸合成酶的重組大腸埃希氏菌的制作方法
技術領域：
本發明涉及生物技術領域，具體地涉及一株表達腺苷蛋氨酸合成酶的重 組大腸埃希氏菌及其應用。
背景技術：
中國是人口大國，同時也是"肝炎大國"。據1992年全國病毒性肝炎流 行病學調査，全國約有1.2億人攜帶乙型肝炎病毒，丙型肝炎在一般人群中 感染率為3.1%。我國現有2000萬例慢性乙型肝炎患者，其中部分有可能轉
化為肝硬化，甚至肝癌。
腺苷蛋氨酸(SAM)是人體內一種極為重要的中間代謝產物。它可以通過
轉硫途徑生成體內關鍵的抗氧化及解毒物質一一半胱氨酸，再生成另 一種關 鍵的抗氧化和解毒物質一一谷胱甘肽，解除肝內的氧化物應激狀態，從而達 到防治肝病的目的。另外SAM還可W促進依賴性脂磷脂的合成，降低膽固醇 和磷脂的比例，恢復細胞膜的流動性，促進膽汁的主動轉運和甘油酸三脂的 分泌。因此SAM對肝內膽汁郁積、各種急、慢性肝炎以及脂肪肝、肝硬化等 肝臟疾病有很好的療效。SAM于20世紀80年代出現在歐洲醫藥巿場上，1999 年美國FDA正式批準SAM上巿，使其迅速成為暢銷的營養保健品之一，年銷 售額超過10億美元。由于其療機理清楚、效顯著、起效快、副作用小，近年 來在國內的需求量也越來越大，有廣闊的巿場前景。
目前，SAM的生產方法主要有化學合成法、發酵法和酶促轉化法3種。 化學合成法釆用S —腺苷同型半胱氨酸(S-adenosythomocysteine)和 甲基供體(CH3I)合成，腺苷蛋氨酸有(+)和(一)兩種構型，只有(一)構型才有 生物活性，但合成產物中含有大量(+)腺昔蛋氨酸，且難以分離。發酵法采用 在培養基中添加L-甲硫氨酸，用酵母發酵生產(一)型腺苷蛋氨酸，是60年 代至80年代生產腺普蛋氨酸的主要方法。酶促轉化法主要利用腺苷蛋氨酸合
成酶催化底物L 一甲硫氨酸和ATP生成(一)型腺昔蛋氨酸。酶作為生物催化 劑具有快速、專一的特點，因此酶促轉化法生產腺苷蛋氨酸具有高效、工藝 簡單、產品生物活性高且無污染的優勢。
要將酶促合成法應用于工業化生產，大量獲得催化用的腺苷蛋氨酸合成 酶成為關鍵，規模化生產腺苷蛋氨酸合成酶的難題一直困擾著酶促轉化法的 工業化應用。本發明釆用基因工程重組技術，獲得了高效表達腺苷蛋氨酸合 成酶的工程菌，對酶促催化腺苷蛋氨酸的工業化生產具有重要意義。
發明內容
(一) 要解決的技術問題
本發明的目的是提供一株表達腺苷蛋氨酸合成酶的重組大腸埃希氏菌及 其應用，本發明的又一目的是提供一種腺苷蛋氨酸合成酶的重組表達載體及 其應用。
(二) 技術方案
本發明提供了 一株表達腺苷蛋氨酸合成酶的重組大腸埃希氏菌
(^yc/^Wc/n'a co//) CGMCC No.2299。該菌株已于2007年12月26曰被保藏于 中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，簡稱CGMCC，保藏編號 為CGMCCNo.2299。
該重組大腸埃希氏菌的構建方法包括如下步驟
(1) 用PCR法擴增編碼大腸埃希長菌腺苷蛋氨酸合成酶的m"K基因；
(2) 將得到的PCR產物克隆到連接載體pBR322上，得到重組表達載體 pMETK;
(3) 將重組表達載體pMETK轉化大腸埃希氏菌DH5oc，篩選陽性轉化子，
得到表達腺苷蛋氨酸合成酶的重組大腸埃希氏菌。
本發明還提供了一種腺苷蛋氨酸合成酶的重組表達載體pMETK，它是將 編碼大腸埃希氏菌腺苷蛋氨酸合成酶的柳"i:基因克隆到連接載體pBR322上 得到的。
本發明所述的重組大腸埃希氏菌(Esc/zen'c/2/a co/z〕 CGMCC No.2299
能高效表達腺苷蛋氨酸合成酶，可應用于工業化合成腺苷蛋氨酸。
本發明所述的重組表達載體pMETK也可應用于工業化合成腺苷蛋氨酸。
(三)有益效果
本發明提供的表達腺苷蛋氨酸合成酶的重組大腸埃希氏菌(五sc/zen'c/2/a co/z') CGMCC No.2299,其腺苷蛋氨酸合成酶的表達量占菌體可溶性蛋白的 31.36%,比野生菌高16倍;表達的腺苷蛋氨酸合成酶活性高達7.38U/ml，比
野生菌高22倍。 ，
本發明所述的菌株已于2007年12月26日被保藏于中國微生物菌種保藏管 理委員會普通微生物中心，簡稱CGMCC,保藏編號為CGMCCNo.2299。
圖1是重組表達載體pMETK的結構圖2是Pst I和EcoR I雙酶切重組表達載體pMETK的電泳圖，其中1表 示樣品； '
圖3 SDS-PAGE檢測蛋白表達量的電泳圖，其中，l和3表示樣品，2 表示SDS-PAGE低分子量蛋白Marker。
具體實施例方式
以下實施例用于說明本發明，但不用來限制本發明的范圍。
實驗中所用到的主要試劑及設備 1、主要材料
DNA抽提試劑盒購于QIAGEN公司(DNeasy Tissue Kit，產品目錄號 69504);克隆載體pBR322、大腸埃希氏菌DH5a購于Xenogen公司；限制性
內切酶PstI 、 EcoRl ， TaqDNA聚合酶，T4DNA連接酶，溶菌酶及相關緩 沖液購于Promega公司；LB培養基所用蛋白胨、酵母粉購于OXOID公司； 其余試劑巿購，均為分析純。 2、主要設備
臺式離心機Sigma公司；恒溫搖床Infors公司；電泳儀Bio - Rad 公司；紫外投射儀及其成像裝置法瑪西亞公司；PCR擴增儀美國應用生 物系統公司。
實施例l表達腺苷蛋氨酸合成酶的重組大腸埃希氏菌的構建
一、重組表達載體pMETK的構建
me基因在文獻中已公開(J.Biol. Chem.259(23),14505-14507(1984))
(1) 將五.co/z'DH5a接種到LB固體培養基上，37。C培養18小時，然 后用滅菌的牙簽挑取單菌落接種到50ml LB液體培養基中，37°C、 180rpm 搖床培養過夜，然后用DNA抽提試劑盒提取其基因組DNA。
(2) 委托上海生工生物工程有限公司合成以下引物 正向引物序列
5 ，-AACTGCAGAGTCGTGGTAGGATCCGCTACCACA-3'，
反向引物序列
5，-GGAATTCATCTGCAATAAACGGCAGTGCGC國3,;
(3 )取DNA模版l嗎，分別加入，步驟(2 )中的引物各2|imol/L， Taq DNA 聚合酶5IU， dNTPs200pmol/L， lxPCR緩沖液20(iL,混合均勻，按以下方 法進行PCR擴增94。C變性lmin,循環30次(94°C 30s， 55°C 30s， 72°C 2,5min)，然后延伸10min。按《分子克隆》的常規方法回收目的基因m"K。
(4)取含有l昭上述目的基因的溶液，依次加入10x尸wl酶切緩沖液 2^1， I酶切緩沖液2pl，用無菌水定容至18^d,再分別加入尸W I限制
性內切酶(5U4il) 限制性內切酶(5U/jil) l(il，混合均勻，置于
37'C水洛中保溫3小時；
(5)電泳回收步驟(4)的反應液中的m"K基因片段； (6 )取l|ig質粒pBR322,依次加入10x尸w I酶切緩沖液2^1,I 酶切緩沖液2pil，用無菌水定容至18^1,再分別加入尸W I限制性內切酶(5U/pl) l|il，五coi I限制性內切酶(5U/pl) 1^1，混合均句，置于37'C水洛中保溫3 小時；
(7) 電泳回收酶切后的pBR322質粒；
(8) 取O.l昭經過上述雙酶切的質粒pBR322與0.12嗎步驟(4)回收 的附e/K基因均句混合，加入無菌水8pL， 45。C保溫5min,然后加入10x T4 DNA連接酶緩沖液lpiL、 T4DNA連接酶(5U/iil)0.5jiL,混合均勻后于16°C 保溫24小時，得到重組表達載體pMETK,其結構圖如附圖l所示；
二、重組大腸埃希氏菌的構建
(1 )從LB固體培養基平板上挑取凡cWDH5a單菌落，接種于5ml LB 液體培養基中，37"C搖床培養12小時，然后以l: 50接種于100ml LB液體 培養基中，37。C搖床培養3小時，至OD600-0.5左右；
(2)將培養液置于冰浴中冷卻10min， 3000rpm離心收集菌體，用預冷 的0.05mol/L的CaCl2溶液10ml輕輕懸浮菌體，再置于冰洛中冷卻30min， 3000rpm收集菌體，然后用4ml含有'15。/。 0.05mol/LCaCl2溶液懸浮細胞，置 于冰洛中待用；
(3 )取上述重組表達載體pMETK2^L與200|iL步驟(2 )得到的感受態 細胞混懸液均勻混合，冰洛30min，然后轉移到37。C水洛中加熱5min，再置 于冰洛中冷卻5min;
(4) 取lOO^L轉化反應原液，用無菌玻璃棒涂布在含有200嗎/ml氧化 四環素的LB固體培養基上，37t:培養半小時，直至液體完全吸收；
(5) 倒置平板，37"C恒溫培養16小時，待出現明顯而又未互相重疊的 單菌落時取出平板，挑取平板上的單菌落，篩選腺苷蛋氨酸合成酶表達量最 高的陽性轉化子(酶表達量的測定方法見實施例2),最后篩得本發明所述的 表達腺苷蛋氨酸合成酶的重組大腸埃希氏菌C^c/zeWc/^ co") CGMCC
l
61 1 2 1 1 8 1 241 301 361 42 1 48 1 54 1 601 661 72 1 781 841
No.2299。
其中，陽性轉化子的鑒定方法如下
① 雙酶切鑒定
a. 取步驟(5)中挑取的轉化子，用LB液體培養，得到的菌液1.5ml, 12000rpm離心30秒，棄去上清，用'120ml STET緩沖液(O.lmol/L NaCl; 10mmol/LTris-Cl, PH8.0; 10mmol/L EDTA， PH8.0; 5% Triton X — 100 )重
懸菌體；
b. 在菌體混懸液中加入10mg/ml的溶菌酶溶液10ml,振蕩3秒后置于 沸水中加熱50秒，12000rpm離心，棄去上清和菌體碎片；
c. 在上述沉淀中依次加入10x iV I酶切緩沖液2^1， ， ￡coR I酶切緩沖 液2pl，，用無菌水定容至18^1,再分別加入尸Wl限制性內切酶(5U/|xl) 1^1， 五"/ I限制性內切酶(5U/pl) 1^1,混合均勻，置于37。C水浴中保溫3小時；
d. 將以上酶切反應液進行電泳餘測，得到大小約為1.8kb和3.6kb的兩 條帶(見附圖2),與預期結果完全一致。
② 基因測序鑒定
按《分子克隆》所述的經典方法提取中轉化子中的重組表達質粒PMETK， 送人類基因組北方中心進行全序列分析，測得總長5407bp,與預期結果完全 一致。具體結果如下
廠GGTCCCGCCACCAAACG<formula>formula see original document page 9</formula>
3961 4021 408 1 4 14 1 420 1 4261 4 3 2 1
4 3 8 1 4441 450 1 45 6 1 462 1 468 1 474 1 480 1 486
492 1 49 8 1
5 04 1 5 10 1 5161 522 1 528 1 5 3 4 1
GGTTCTGAGCGCTATCGGCAA
AGTAATCTTTCTTCACCTGCGT TTCACGCCGCATCCGGC
AT丁ATTCGGTTTTCACAG丁TGTTAi GCGTTTAATCTATGATGATATAAC 1 CAATTATTTTC ATGC ACTTAAATCATA ACTAAGAT
5401
TGAATT
實施例2構建的重組大腸埃希氏菌腺苷蛋氨酸合成酶的表達量及活性測定 實驗
(1) 腺苷蛋氨酸合成酶表達量的測定
挑取實施例1得到的重組大腸埃希氏菌C&c/zen'c/n'a co/f) CGMCC No.2299的單菌落，接種到10ml液體LB培養基(含25iag/ml的氧化四環素)， 搖床培養6小時，取樣用SDS-PAGE聚丙烯酰胺電泳測定其中腺苷蛋氨酸 合成酶的表達量，電泳結果如附圖3所示，SAM合成酶的表達量占菌體可溶 性蛋白的31.36%。
(2) 腺苷蛋氨酸合成酶的活性測定
配制反應液由75mmol Tris — HCl( PH8.0 )、250mmol KCl、9mmol MgCl2、
60nmol蛋氨酸、5mmo1 ATP和lml粗酶液組成100ml的反應體系，37。C反 應30min后，加入高氯酸至終濃度為0.3%使反應中止，用HPLC外標法測定 反應液中腺苷蛋氨酸的量。酶的活力單位定義為在以上反應條件下，30min 催化形成lpmol腺苷蛋氨酸所需要的酶量為一個活力單位。
經測量，重組大腸埃希氏菌C&c/zehc/z/a co//) CGMCC No.2299表達的腺 苷蛋氨酸合成酶的活性為7.38U/ml。
序列表
<110>北京凱因生物技術有限公司
<120> —株表達腺苷蛋氨酸合成酶的重組大腸埃希氏菌 <130> K0801 <160> 1
< 170> Patentln version 3.2
<210> 1 <211> 5046 <212> DNA
<213> 大腸埃希氏菌(Escherichia coli) <400> 1
tcatgtttga cagcttatca tcgataagct ttaatgcggt agtttatcac agttaaattg 60 ctaacgcagt caggcaccgt gtatgaaatc taacaatgcg ctcatcgtca tcctcggcac 120 cgtcaccctg gatgctgtag gcataggctt ggttatgccg gtactgccgg gcctcttgcg 180 ggatatcgtc cattccgaca gcatcgccag tcactatggc gtgctgctag cgctatatgc 240 gttgatgcaa tttctatgcg cacccgttct cggagcactg tccgaccgct ttggccgccg 300
cccagtcctg ctcgcttcgc tacttggagc cactategac tacgcgatca tggcgaccac 360
acccgtcctg tggatcctct acgccggacg catcgtggcc ggcatcaccg gcgccacagg 420
tgcggttgct ggcgcctata tcgccgacat caccgatggg gaagatcggg ctcgccactt 480
cgggctoatg agcgcttgtt tcggcgtggg tatggtggca ggccccgagg ccgggggact 540
gttgggcgcc atctccttgc atgcaccatt ccttgcggcg gcggtgctca acggcctcaa 600
cctactactg ggctgcttcc taatgcagga gtcgcataag ggagagcgtc gaccgatgcc 660
cttgagagcc ttcaacccag tcagctcctt ccggtgggcg cggggcatga ctatcgtcgc 720
cgcacttatg actgtcttct ttateatgca actcgtagga caggtgccgg cagcgctctg 780
ggtcattttc ggcgaggacc gctttcgctg gagcgcgacg atgatcggcc tgtcgcttgc 840
ggtattcgga atcttgcacg ccctcgctca agccttcgtc actggtcccg ccaccaaacg 900
tttcggcgag aagcaggcca ttatcgccgg catggcggcc gacgcgctgg gctacgtctt 960
gctggcgttc gcgacgcgag gctggatggc cttccccatt atgattcttc tcgcttccgg 1020
cggcateggg atgcccgcgt tgcaggccat gctgtccagg caggtagatg acgaccatca 1080
gggacagctt caaggatcgc tcgcggctct taccagccta acttcgatca ttggaccgct 1140
gatcgtcacg gcgatttatg ccgcctcggc gagcacatgg aacgggttgg catggattgt1200
鄉cgccgcc ctataccttg tctgcctccc cgcgttgcgt cgcggtgcat ggagccgggc 1260
cacctogacc tgaatggaag ccggcggcac ctcgctaacg gattcaccac tccaagaatt 1320
ggagccaatc aattcttgcg gagaactgtg aatgcgcaaa ccaacccttg gcagaacata 1380
tccatcgcgt ccgccatctc cagcagccgc acgcggcgca tctcgggcag cgttgggtcc 1440
tggccacggg tgcgcatgat cgtgctcctg tcgttgagga cccggctagg ctggcggggt1500
tgccttactg gttagcagaa tgaatcaccg attcgcgagc gaacgtgaag cgactgctgc 1560
tgcaaaacgt ctgcgacctg agcaacaaca tgaatggtct tcggtttccg tgtttcgtaa 1620
agtctggaaa cgcggaagtc agcgccctgc accattatgt tccggatctg catcgcagga 1680
tgctgctggc taccctgtgg aacacctaca tctgtattaa cgaagcgctg gcattgaccc 1740
tgagtgattt ttctctggtc ccgccgcatc cataccgcca gttgtttacc ctcacaacgt 1800
tccagtaacc gggcatgttc atcatcagta acccgtatcg tgagcatcct ctctcgtttc 1860
atcggtatca ttacccccat gaacagaaat cccccttaca cggaggcatc agtgaccaaa 1920
caggaaaaaa ccgcccttaa catggcccgc tttatcagaa gccagacatt aacgcttctg 1980
gagaaactca acgagctgga cgcggatgaa caggcagaca tctgtgaatc gcttcacgac 2040
cacgctgatg agctttaccg cagctgcctc gcgcgtttcg gtgatgacgg tgaaaacctc 2100
tgacacatgc agctcccgga gacggtcaca gcttgtctgt aagcggatgc cgggagcaga 2160
caagcccgtc agggcgcgtc agcgggtgtt ggcgggtgtc ggggcgcagc catgacccag 2220
tcacgtagcg atagcggagt gtatactggc ttaactatgc ggcatcagag cagattgtac 2280
tgagagtgca ccatatgcgg tgtgaaatac cgcacagatg cgtaaggaga aaataccgca 2340
teaggcgctc ttccgcttcc tcgctcactg actcgctgcg cteggtcgtt cggctgcggc 2400
gagcggtatc agctcactca aaggcggtaa tacggttatc cacagaatca ggggataacg 2460
caggaaagaa catgtgagca aaaggccagc aaaaggccag gaaccgtaaa aaggccgcgt 2520
tgctggcgtt tttccatagg ctccgccccc ctgacgagca teacaaaaat cgacgctcaa 2580
gtcagaggtg gcgaaacccg acaggactat aaagatacca ggcgtttccc cctggaagct 2640
ccctcgtgcg ctctcctgtt ccgaccctgc cgcttaccgg atacctgtcc gcctttctcc 2700
cttcgggaag cgtggcgctt tctcatagct cacgctgtag gtatctcagt tcggtgtagg 2760
tcgttcgctc caagctgggc tgtgtgcacg aaccccccgt tcagcccgac cgctgcgcct 2820
tatccggtaa ctatcgtctt gagtccaacc cggtaagaca cgacttatcg ccactggcag 2880
cagccactgg taacaggatt agcagagcga ggtatgtagg cggtgctaca gagttcttga 2940
agtggtggcc taactacggc tacactagaa ggacagtatt tggtatctgc gctctgctga 3000
agccagttac cttcggaaaa agagttggta gctcttgatc cggcaaacaa accaccgctg 3060
gtagcggtgg tttttttgtt tgcaagcagc agattacgcg cagaaaaaaa ggatctcaag 3120
aagatecttt gatcttttct acggggtctg acgctcagtg gaacgaaaac tcacgttaag 3180
ggattttggt catgagatta tcaaaaagga tcttcaccta gatcctttta aattaaaaat 3240
gaagttttaa atcaatctaa agtatatatg agtaaacttg gtctgacagt taccaatgct 3300
taatcagtga ggcacctatc tcagcgatct gtctatttcg ttcatccata gttgcctgac 3360
tccccgtcgt gtagataact acgatacggg agggcttacc atctggcccc agtgctgcaa 3420
tgataccgcg agacccacgc tcaccggctc cagatttatc agcaataaac cagccagccg 3480
gaagggccga gcgcagaagt ggtcctgcaa ctttatecgc ctccatccag tctattaatt 3540
caccgttcgc gaaattggct atgtgcattc cgacatgggc tttgacgcta actcctgtgc 3600
ggttctgagc gctateggca aacagtctcc tgacateaac cagggcgttg accgtgccga 3660
tccgctggaa cagggcgcgg gtgaccaggg tctgatgttt ggctacgcaa ctaatgaaac 3720
cgacgtgctg atgccagcac ctatcaccta tgcacaccgt ctggtacagc gtcaggctga 3780
agtgcgtaaa aacggcactc tgccgtggct gcgcccggac gcgaaaagcc aggtgacttt 3840
tcagtatgac gacggcaaaa tegttggtat cgatgctgtc gtgctttcca ctoagcactc 3900
tgaagagatc gaccagaaat cgctgcaaga agcggtaatg gaagagatca tcaagccaat 3960
tctgcccgct gaatggctga cttctgccac caaattcttc atcaacccga ccggtcgttt 4020
cgttatcggt ggcccaatgg gtgactgcgg tctgactggt cgtaaaatta tcgttgatac 4080
ctacggcggc atggcgcgtc acggtggcgg tgcattctct ggtaaagatc catcaaaagt 4140
ggaccgttcc gcagcctacg cagcacgtta tgtcgcgaaa aacatcgttg ctgctggcct 4200
ggccgatcgt tgtgaaattc aggtttccta cgcaatcggc gtggctgaac cgacctccat 4260
catggtagaa actttcggta ctgagaaagt gccttctgaa caactgaccc tgctggtacg 4320
tgagttcttc gacctgcgcc catacggtct gattcagatg ctggatctgc tgcacccgat 4380
ctacaaagaa accgcagcat acggtcactt tggtegtgaa catttcccgt gggaaaaaac 4440
cgacaaagcg cagctgctgc gcgatgctgc cggtctgaag taatctttct tcacctgcgt 4500
tcaaaggcca gcctcgcgct ggcctttttc ttttggatag gcgttcacgc cgcatccggc 4560
aaaaaaaccg cccgcacaat aacatcattc ttcctgatca cgtttcaccg cagattatca 4620
tcacaactga aaccgattac accaaccaca acagacaaag atttgtaata ttttcatatt 4680
attattcggt tttcacagtt gttacatttc ttttcagtaa agtcttaatt gcagataaca 4740
gcgtttaatc tatgatgata taactcaatt attttcatgc acttaaatea taactaagat 4800
aaatgttagt gtaagcgatt acactgatgt gatttgcttc acatcttttt acgtcgtact 4860
cacctatctt aattcacaat aaaaaataac catattggag ggcatcatgc ctgacgctaa 4920
aaaacagggg cggtcaaaca aggcaatgac gtttttcgtc tgcttccttg ccgctctggc 4980
gggattactc tttggcctgg atateggtgt aattgctggc gcactgccgt ttattgcaga 5040
tgaatt 504權利要求
1、一株表達腺苷蛋氨酸合成酶的重組大腸埃希氏菌(Escherichia coli)CGMCC No.2299。
2、 一種腺苷蛋氨酸合成酶的重組表達載體pMETK,其特征在于它是將 編碼大腸埃希氏菌腺苷蛋氨酸合成酶的m"K基因克隆到連接載體pBR322上得到的。
3、 根據權利要求l所述的重組大腸埃希氏菌的構建方法，其特征在于它 包括如下步驟(1) 用PCR法擴增編碼大腸埃希氏菌腺苷蛋氨酸合成酶的md〖基因；(2) 將得到的PCR產物克隆到連接載體pBR322上，得到權利要求2所 述的重組表達載體pMETK;(3) 將重組表達載體pMETK轉化大腸埃希氏菌DH5a,篩選陽性轉化子，得到表達腺苷蛋氨酸合成酶的重組大腸埃希氏菌。
4、 根據權利要求1所述的重組大腸埃希氏菌在合成腺苷蛋氨酸中的應用。
5、 根據權利要求2所述的重組表達載體在合成腺苷蛋氨酸中的應用。
全文摘要
本發明提供了一株表達腺苷蛋氨酸合成酶的重組大腸埃希氏菌(Escherichia coli)CGMCC No.2299以及該重組大腸埃希氏菌的構建方法。本發明還提供了一種腺苷蛋氨酸合成酶的重組表達載體pMETK。本發明提供的表達腺苷蛋氨酸合成酶的重組大腸埃希氏菌(Escherichia coli)CGMCC No.2299，其腺苷蛋氨酸合成酶的表達量占菌體可溶性蛋白的31.36％，表達的腺苷蛋氨酸合成酶活性高達7.38U/ml，遠高于野生型菌株。
文檔編號C12N1/21GK101392230SQ20081005570
公開日2009年3月25日 申請日期2008年1月7日 優先權日2008年1月7日
發明者春 吉, 周德勝, 張春麗, 譚華征 申請人:北京凱因科技股份有限公司