用于胃癌和胃癌組織轉移的分子檢測方法和試劑盒的制作方法

文檔序號：563785閱讀：477來源：國知局

專利名稱：用于胃癌和胃癌組織轉移的分子檢測方法和試劑盒的制作方法
技術領域：
本發明屬于生物技術和醫學領域；更具體的，本發明涉及一種胃癌標志基因及其用途，檢測胃癌標志基因的試劑或試劑盒及其用途。
背景技術：
在所有惡性腫瘤中，每年全世界胃癌死亡人數約650， 000人，致死率僅次于肺癌，居于惡性腫瘤第二位。在中國，胃癌發病率和死亡率均居消化系統惡性腫瘤的首位，每年死于胃癌者約36萬人，占世界同期胃癌死亡人數的40%，五年生存率僅5%-15%。
目前中國臨床診斷中多為癥狀性篩選，即出現腹部不適、隱痛、泛酸、噯氣或消痩、黑便等癥狀后進行內鏡、胃鋇餐等檢查，最終檢出的胃癌絕大部分為進展期胃癌。現有的診斷方法如血清學免疫檢測通常使用的標志物如CEA、CA系列抗原，普遍存在靈敏度低、特異性差，尤其是對早期胃癌檢出率、有效性都很低。常用的細胞學檢測雖然低廉簡便，靈敏度同樣偏低，而影像學檢測僅對有較大占位的惡變腫瘤有很高的診斷率。中國是發展中的人口大國，經濟條件欠發達，開展全民性的胃癌普査篩選困難重重。
目前臨床最有效的診斷方法是胃鏡結合病理的方法，具有較高的胃癌診斷率。但由于絕大多數胃癌患者早期并無明顯癥狀，約70%的病人就診初期往往只有胃炎癥狀而被接受質子泵抑制劑的抑酸療法，這種療法容易使病變邊緣正常細胞增生并掩蓋惡變細胞，導致胃鏡和胃鏡取樣組織后病理的觀察存在較大的誤診/漏診率。日本等國因此規定胃鏡下活檢病理報告為中度不典型增生及以上患者，需重復多次胃鏡及活檢為免延誤診斷。這種方法既費人力、財力又增加患者的痛苦，難以在中國推廣。更重要的是，目前常規的胃鏡檢査和病理學診斷均基于形態學的判斷，對于操作人員的經驗技術有較高的要求。在實際應用中，這種非客觀、非標準化的檢測發生漏診和誤診的現象不是少數，而且對有不典型增生、早期胃癌、胃癌進展期等組織學特征進行的區分，目前尚難以有明確的界限。對于早期胃癌的判斷標準，臨床上還是以手術切除后進行病理檢查發現癌細胞為標準，缺乏在手術前的依據，這在很大程度上依賴與胃鏡檢查的醫生的經驗，難以做到標準化。客觀上需要有在胃鏡下取材進行病理學檢查時的輔助手段或指標，能夠幫助醫生進行胃癌尤其是早期胃癌的判斷，提高診斷的準確率，減少漏診。其次，由于多數癌癥患者臨床確診時已屬中晚期，如何用分子診斷方法進行手術后病人預后的監測和有效治療方法的選擇，是改善預后的有效方法。
發展具有高靈敏性、特異性強的胃癌分子診斷技術和產品，是提高中國胃癌早期檢出率、改善患者預后的關鍵之一。S100A2是EF-手性鈣結合蛋白S100超家族成員。Sl00蛋白是一組分子量10 12kD的鈣結合蛋白，氨基酸序列在脊椎動物中高度保守，目前共發現有20種結構與功能相似、存在于不同部位的可以調節細胞內和細胞外Ca"的S100蛋白。S100蛋白家族成員具有廣泛的生物學活性，通過鈣離子信號轉導、影響激素分泌和抑制微管蛋白的組裝及抑制蛋白激酶C介導的磷酸化等途徑，在細胞增殖、分化、肌肉收縮、基因表達、分泌、及細胞凋亡中發揮重要作用。多個S100家族成員被發現和人類癌癥的發生發展相關，其中S100A2 在腫瘤中的作用和臨床意義仍然存在一些爭議。在乳腺癌S100A2通常下調表達，以致被描述為潛在的腫瘤抑制基因。也有報道認為肺癌中S100A2下調或檢測不到，而其它一些研究認為肺癌中S100A2 mRNA和蛋白水平均呈現過表達，且和預后相關。多項研究發現在宮頸癌、黑色素瘤、淋巴瘤、膀胱癌及皮膚上皮瘤中S100A2過表達。S100A2在胰腺癌中過表達已發現和腫瘤進展、預后不良密切相關。
綜上，盡管已知然S100A2在某些腫瘤中有異常表達，然而本領域目前對于S100A2在腫瘤中的作用仍然存在爭議，且其在不同種類腫瘤中的作用也應該是不同的，因此本領域迫切需要深入細致地研究和大規模驗證S100A2與特定腫瘤的相關性，并開發出可臨床應用的檢測試劑。

發明內容
本發明的目的在于提供一種S100A2基因的用途，其可作為胃癌和胃癌組織轉移的標志基因。
本發明的另一目的在于提供檢測胃癌標志基因的試劑或試劑盒。
在本發明的第一方面，提供一種S100A2基因的用途，用于制備檢測胃癌或胃癌組織轉移的試劑或試劑盒。
一種用于檢測胃癌或胃癌組織轉移的試劑(或材料)，所述的試劑選自下組
4(1) S100A2基因或轉錄本的特異性引物；和/或
(2) S100A2基因或轉錄本的特異性識別探針或表面固定有所述探針的芯片。在另一優選例中，所述的試劑是引物，所述的引物是針對S100A2外顯子的引物。
在另一優選例中，所述的引物是針對S100A2基因的外顯子2(Exon2)和外顯子3 (Exon3)的特異性引物(即擴增產物跨越外顯子2和外顯子3);或
所述的引物是針對S100A2基因的外顯子l(Exonl)和外顯子2(Exon2)的特異性引物(即擴增產物跨越外顯子l和外顯子2);或
所述的引物是針對S100A2基因的外顯子l(Exonl)和外顯子3(Exon3)的特異性引物(即擴增產物跨越外顯子1和外顯子3)。
優選的，所述的引物是針對S100A2基因的外顯子2和外顯子3的特異性引物。
在另一優選例中，所述的特異性引物是具有SEQ ID NO: 1和SEQ ID NO: 2 所示的序列的引物對。
在本發明的第二方面，提供前面任一所述的試劑(或材料)的用途，用于制備檢測胃癌或胃癌組織轉移的試劑盒。
在本發明的第三方面，提供一種檢測胃癌或胃癌組織轉移的試劑盒，所述的試劑盒中含有前面任一所述的試劑。
在另一優選例中，所述的試劑盒中還含有正常組織表達的S100A2基因或轉錄本(優選mRNA)的參照品。
在另一優選例中，所述的試劑盒中還含有
核酸提取試劑；
聚合酶聯反應(PCR)試劑；或
描述檢測胃癌或胃癌組織轉移的方法的說明書。
在另一優選例中，所述的試劑裝于容器中。
在本發明的第四方面，提供一種檢測受試者(優選體外檢測)是否存在胃癌或胃癌組織轉移的方法，所述方法包括檢測受試者組織樣品中S100A2基因或轉錄本(優選mRNA)的表達，若表達量在統計學上高于(如高2倍以上，優選高5倍以上，
5更優選高10倍以上，最優選高30倍以上)正常水平，則該受試者存在胃癌或胃癌組織轉移。
在另一優選例中，所述的組織樣品選自外周血、骨髓、淋巴結、腹腔清洗液、胃壁細胞或胃液。
本發明的其它方面由于本文的公開內容，對本領域的技術人員而言是顯而易見的。

圖1顯示了生物標記基因S100A2的序列，該基因包括三個外顯子(Exon)，分別稱為Exonl、 Exon2和Exon3。
圖2顯示了 S100A2在人體正常組織中的表達情況。所述組織包括除去紅細胞和血小板的外周血細胞、胃粘膜、心臟、肺、前列腺、脾、腎、肝、乳腺、子宮內膜、膀胱和骨髓。
圖3顯示了通過Real-time PCR技術評估S100A2基因在胃癌/癌旁組織中mRNA 表達比值。
圖4顯示了通過Real-time PCR技術診斷胃鏡下標本的胃癌或胃炎/正常粘膜 mRNA表達比值。
圖5顯示了通過Real-time PCR檢測胃癌在陽性淋巴結和陰性淋巴結中表達差異。
圖6顯示了通過Real-time PCR檢測外周血中游離胃癌細胞的準確度與細胞學檢測的對比。
圖7顯示了通過Real-time PCR方法檢測胃癌骨髓轉移的準確度與細胞學檢測的對比。
具體實施例方式
本發明人經過深入的研究，首次發現S100A2基因表達水平的改變與胃癌或胃癌組織轉移密切相關。具體地，S100A2基因表達的上調與胃癌或胃癌組織轉移密切相關。因此可以通過檢測S100A2基因表達(特別是S100A2 mRNA表達) 來診斷胃癌或胃癌組織轉移。S100A2基因屬于EF-手性鈣結合蛋白S100超家族成員，其含有三個外顯子 (圖l): Exonl (SEQ ID NO: 5)， Exon2 (SEQ ID NO: 6)， Exon3 (SEQ ID NO: 7)。
本發明人通過對大量的胃癌或胃癌組織轉移患者的組織進行研究，并與胃炎患者的組織或正常對照等進行比較，從而有力地證實了S100A2基因與胃癌或胃癌組織轉移的相關性。在本發明的實施例中，首先，本發明人比較了人體不同組織中S100A2 mRNA的表達，發現除腎組織以外的人體正常組織中S100A2均低度表達，因此對于S100A2用于病理條件下檢測極為有利。然后，本發明分別比較了胃癌與癌旁組織、胃癌與胃炎、胃癌轉移陽性淋巴結與陰性淋巴結中 S100A2 mRNA的差異表達，結果發現胃癌中S100A2的表達比癌旁組織、胃炎顯著增高，轉移陽性淋巴結也比陰性淋巴結顯著增高。因此，S100A2在惡性胃組織中異常高表達而在正常組織和胃炎組織不表達或很低表達。以S100A2作為診斷標志物，靈敏度高(可高于95%)且特異性良好(可達到100%)。
因此，基于本發明人的新發現，可以利用S100A2基因(i)進行胃癌或胃癌組織轉移的鑒別診斷、禾P/或易感性分析；(ii)評估相關人群的胃癌或胃癌組織轉移治療藥物、藥物療效、預后，以及選擇合適的治療方法；(iii)早期評估相關人群胃癌或胃癌組織轉移患病風險，早期監測早期預防。
本發明還提供了用于檢測胃癌或胃癌組織轉移的試劑。所述的試劑可以是S100A2基因或轉錄本的特異性(與人體其它基因沒有序列重復或互補)引物；或S100A2基因或轉錄本的特異性(不識別人體其它基因)識別探針；或表面固定有所述探針的芯片。
作為本發明的優選方式，所述的試劑是引物，所述的引物是針對S100A2 基因外顯子的引物，更佳的是針對S100A2的外顯子2(Exon2)和外顯子3(Exon3) 的特異性引物(即擴增產物跨越外顯子2和外顯子3);或是針對S100A2基因的外顯子l(Exonl)和外顯子2(Exon2)的特異性引物(即擴增產物跨越外顯子1和外顯子2);或是針對S100A2基因的外顯子l(Exonl)和外顯子3(Exon3)的特異
性引物(即擴增產物跨越外顯子l和外顯子3)。
作為本發明的更優選的方式，所述的引物是針對S100A2基因的外顯子2 和外顯子3的特異性引物，跨越外顯子2和外顯子3的引物對于PCR擴增是有
7利的。更優選的，所述的特異性引物是具有SEQ ID NO: 1和SEQ ID NO: 2所示的序列的引物對，所述引物特異性好，擴增效果良好。
本發明還提供一種檢測胃癌或胃癌組織轉移的試劑盒，所述的試劑盒比巳有胃癌檢測試劑盒具有更好的特異性和選擇性。所述的試劑盒中含有用于檢測胃癌或胃癌組織轉移的試劑。所述的試劑可以是S100A2基因或轉錄本的特異性引物；或S100A2基因或轉錄本的特異性識別探針；或同時包括引物和探針。通常，所述的試劑存在于適當的容器中。可使用稀釋劑如去離子水將每種所述引物或探針調整到至少一種需要量的濃度，分裝于容器中。
為了便于進行分析和比對，作為本發明的優選方式，所述的試劑盒中還含有正常組織表達的S100A2基因或轉錄本(優選mRNA)的參照品。
此外，所述的試劑盒中還可包括用于提取核酸的試劑，用于PCR的試劑，用于染色或顯色的試劑等。例如，這些試劑包括但不限于抽提液、擴增液、雜交液、顯色液、洗液等。
此外，所述的試劑盒中還可包括描述檢測胃癌或胃癌組織轉移的方法的說明書和/或芯片圖像分析軟件等。
本發明所述的試劑盒可包含適于實用(如針對于不同的檢測方法)的多種不同的試劑，并不限于目前所列舉的試劑，只要是基于S100A2基因或轉錄本的檢測來判斷胃癌及轉移的產品均包含在本發明范圍內。
所述的檢測試劑也可以是S100A2基因或轉錄本的特異性識別探針或表面固定有所述探針的芯片。探針或芯片的制備方法是本領域的常規技術，制備方法例如可參照王申五主編的《基因診斷技術-非放射性操作手冊》；J. L. erisi, V. R. Iyer, P,O.BROWN. Exploring the metabolic and genetic control of gene expression on a genomic scale. Science, 1997; 278:680和馬立人、蔣中華主編，《生物芯片》，北京化學工業出版社，2000， 1-130。
本發明還提供一種檢測受試者是否存在胃癌或胃癌組織轉移的方法，所述方
法準確性良好，對于早期胃癌也可準確地診斷。所述方法包括利用所述的檢測
胃癌或胃癌組織轉移的試劑檢測受試者組織樣品中S100A2基因或轉錄本(優選 mRNA)的表達，若表達量在統計學上高于正常水平，則該受試者存在胃癌或胃癌組織轉移。優選的，還設置檢測對照，所述的對照可以是人正常胃粘膜組織的總mRNA, 優選多人份正常胃粘膜組織混合的mRNA樣品。
檢測受試者組織樣品中S100A2基因或轉錄本的表達的方法優選Real time PCR方法。
一種檢測方法是獲得組織樣品，從所述樣品分離RNA;使用S100A2的特異性引物從RNA樣品中擴增cDNA拷貝，量化擴增的cDNA拷貝，使用量化的擴增的cDNA拷貝來評估胃癌疾病進展或治療效果。
檢測S100A2mRNA表達的方法還有很多種，包括可以用名為基于核酸序列擴增法(Nucleic Acid based Amplification, NASBA)的體外RNA擴增技術。當然， RNA體外擴增技術不限于NASBA，其它已知的RNA擴增方法和即刻的方法和試劑盒也是可用的。非限制性例子有多聚酶鏈式反應(polymerase chain reaction, PCR),轉錄酶介導的擴增(transcriptase mediated amplification, TMA)，連接酶鏈反應(ligase chain reaction, LCR)。擴增產物通過Beacon方法用熒光探針在均勻相中被檢測，或產物可通過熒光或測熱法(fluorescent or calorimetric method)在固相中檢測。根據當前發明檢測和/或定量靶基因RNA，多種熒光、測熱或酶法可以被應用。最佳的是，基于特殊熒光探針的實時PCR 技術，其中熒光探針可以是標記了熒光的特異互補于S100A2的序列，也可以是非特異性的雙核苷酸染料如SYBR Green。
組織樣品的獲得是本領域的常規技術，優選可選擇非侵入性或具有最低程度侵入性的方法獲得。所述的組織樣品可以是(但不限于)外周血、骨髓、淋巴結、腹腔清洗液、胃壁細胞或胃液。
此外，還可應用多變量統計學分析，將待測樣品的數據與多種儲液的對照數據比較，作出關于胃癌的診斷、進展或治療效果的判斷。
本發明的方法準確性高，可以在胃鏡下或擦拭獲取的看似正常的胃粘膜組織樣品中檢測編碼S100A2的mRNA以診斷胃癌；可以確診胃癌病人非胃組織中胃癌細胞轉移尤其是微轉移。
本發明的主要優點在于
(1)首次發現并證實S100A2基因與胃癌或胃癌組織轉移的密切相關性，驗證的樣本量多，結果準確。該相關性的提出為胃癌或胃癌組織轉移的診斷與治
9療提供了新的途徑。
(2)開發出了適合于進行胃癌或胃癌組織轉移檢測的試劑或試劑盒，檢測靈敏度良好。
下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用于說
明本發明而不用于限制本發明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件如Sambrook等人，分子克隆實驗室指南(New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則百分比和份數按重量計算。
實施例l.胃癌及轉移組織的準備
實施例中所用標本均與病人簽署知情同意書后按醫院規定途徑獲取。胃鏡下獲取的病理部位標本和非病理部位樣本作為對比，也可是非胃鏡方式
如手術或胃壁擦拭法獲取的細胞、手術中獲取的淋巴結等樣本應立即存放于含液氮
或RANlater(ambion公司產品)中儲存。
外周血、骨髓或腹腔灌洗液的樣本首先通過離心機1000-2000 rpm/分鐘進行
10分鐘離心，收取離心后的細胞沉淀物，置于液氮或RNAlater中儲存。
實施例2.樣本中RNA抽提、逆轉錄和擴增
上述樣本用商業化的核酸抽提方法進行，一個常用的非限制性例子是酚/氯仿抽提方法，如用Invitrogen公司生產的Trizol方法抽提總RNA，并進行RNA質量鑒定，相關方法可參照《分子生物學實驗》等參考書描述。mRNA的逆轉錄過程采用商業化逆轉錄試劑盒并按操作說明書進行，所得cDNA按比例稀釋成需要的工作濃度。所用特異性引物經優化設計，上下游引物分別設計為可擴增跨越S100A2基因Exon2和Exon3部分序列的引物，見圖1。采用基于SYBR Green的熒光染料的Real-time PCR法進行耙基因S100A2的mRNA擴增。
針對S100A2基因的引物如下
上游引物GGAACTTCTGCACAAGGAGCTG(SEQ ID NO: 1);
下游引物CACCTGCTGGTCACTGTTCTCA(SEQ ID NO: 2);擴增長度為106bp。
以P-actin為對照基因，引物如下上游引物CCATCATGAAGTGTGTGACGTGG(SEQ ID NO: 3);
下游引物TCTGCATCCTGTCGGCAAT(SEQ ID NO: 4);擴增長度為魁p。
相對基因豐度用公式2^E72(Rn—w計算，其中，Rt是胃癌組織或轉移組織中f3-actin的Ct(threshold cycle number), Et是胃癌組織或轉移組織中S100A2的Ct; Rn是正常對照組織中P -actin的Ct， En是正常對照組織中S100A2的Ct。
實施例3.人體不同組織中S100A2 mRNA表達差異
所用人體組織標本除正常胃粘膜組織為發明人從合作醫院收集外，其它各組織均從商業化機構購買。采用Affymetrix的核苷酸芯片HG-U95Av進行各正常組織S100A2mRNA表達比較，操作過程參照產品說明書。本試驗的信號值是通過管家基因3 -actin熒光值進行歸一化處理后的標準化信號值，信號值10上下表示信號很弱，mRNA含量極低。100左右信號值表示信號中等，m脂A表達量中等。如〉1000表示信號相對比較強，mRNA表達豐度較高。
結果如圖2所示，除腎組織低度表達S100A2夕卜，其它組織S100A2表達量極低，說明S100A2 mRNA表達在正常背景值相當低，這對S100A2用于病理條件下檢測極為有利。
實施例4.手術胃癌及癌旁組織樣本20對S100A2的表達差異
通過手術取樣的樣本均經病理驗證后才進行RNA抽提和逆轉錄cDNA，Real-time PCR法鑒定S100A10在胃癌和癌旁組織中的表達差異，所用材料和方法同上，測試樣本數為20個(G1-G20)。
圖3的結果表明，胃惡性病理條件下特異性高表達S100A2rnRNA，而癌旁的正常組織低表達，差異倍數的中間值(media)達30-50倍，提示S100A2 mRNA可作為良好的胃癌分子標記物。
實施例5.胃鏡下取樣的胃癌、胃炎中S100A2表達差異
胃鏡下取樣與手術獲取的樣本具有較大的差別，主要表現在取樣組織中胃癌細胞的比例變動很大，有時可能只占取到整塊組織的很小一部分，為此本發明人專門評估了 S100A2是否具有足夠的靈敏度用于胃鏡樣本的輔助診斷。上述標本均通過病理證明。先取了胃癌細胞從約1%到50%比例胃癌24例、胃炎10例組織用于本次評估實驗，方法同樣釆用Real-time PCR相對定量方法，對照基因為P-actin，以本病人的非病變部位中S100A2 m脂A表達作為參照計算熒光相對強度。
圖4的結果表明，S100A2具有很高的靈敏度(95.8%)和100%的特異性用于在胃鏡取樣下胃癌的輔助診斷，可提高胃癌病理診斷的客觀性和準確率。
實施例6. S100A2 mRNA在胃癌轉移陽性淋巴結和陰性淋巴結中的表達差異
手術中獲得的經病理證明為胃癌轉移陽性的淋巴結9枚，且轉移灶大小不等。病理陰性淋巴結8枚主要取自早期胃癌病人，原因是盡可能減少病理診斷陰性但實際有微轉移存在的淋巴結，以避免實驗誤差。實驗采取Real-time PCR檢測方法，具體材料和過程同實施例2。
圖5的結果表明，S100A2mRNA在轉移陽性淋巴結中高表達，而在陰性淋巴結中只有很低表達。病理陰性淋巴結中有兩例檢測出S100A2陽性的淋巴結，經病理醫師連續切片細致觀察，鑒定有微轉移的存在。因此，從S100A2mRNA表達程度劃分不僅100%區分了細胞學檢測結果，而且能檢測細胞學不能檢出的有微轉移存在的淋巴結，相比細胞學檢測該檢測方法具有更高的靈敏度。
實施例7.定量PCR檢測外周血中游離胃癌細胞的準確度與細胞學檢測的對比
除去紅細胞和血小板的外周血細胞抽取RNA，經Real-time PCR方法定量檢測S100A2mRNA表達水平，通過和胃炎病人和正常人表達量的對比，判斷胃癌患者的外周血細胞中是否有游離胃癌細胞的存在，并和細胞學檢測比對。
圖6的結果表明，本發明的檢測方法100%確認細胞學鑒定的陽性結果，同時可檢測出細胞學鑒定為陰性的病例中有部分轉移病例，說明該方法比細胞學檢測具有更高的靈敏度，能檢測到細胞學無法檢測的微轉移存在。
實施例8.定量PCR方法檢測胃癌骨髓轉移與細胞學檢査結果的對比
穿刺等方法獲得的胃癌患者骨髓經Real-time PCR方法定量檢測S100A2 mRNA表達水平，通過和正常骨髓的比較判斷S100A2m脂A是否高表達，確認骨髓是否存在轉移和微轉移，并與細胞學結果進行比較。
圖7的結果表明，本發明的檢測方法能95%確認細胞學陽性的結果，同時陽性率高于細胞學結果，表明敏感性比細胞學檢測方法高。實施例9.檢測試劑盒
制備一試劑盒，所述的試劑盒中含有
(1) 引物對，包括
上游引物GGAACTTCTGCACAAGGAGCTG(SEQ ID NO: 1);下游引物CACCTGCTGGTCACTGTTCTCA(SEQ ID NO: 2)。
(2) 常規的核酸抽提液、dNTPs、 Taq酶、無RNA酶的H20(RNAase-free H20)、對照mRNA、逆轉錄酶、SYBR Green。
(3) 使用說明書。
在本發明提及的所有文獻都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻被單獨引用作為參考那樣。此外應理解，在閱讀了本發明的上述講授內容之后，本領域技術人員可以對本發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定的范圍。
13序列表
<110> 陳，菲
<120〉用于胃癌和胃癌組織轉移的分子檢測方法和試劑盒
<130〉 081275
<160〉 7
<170〉 Patentln version 3. 3
<210> 1
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<220>
〈221〉 misc—feature
<223〉引物
<400〉 1
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<211〉 23
<212〉 DNA
<213> 人工序列
<220〉
<221〉 misc_feature
<223> 引物
<400> 3ccatcatgaa gtgtgtgacg tgg 23
<210〉 4
〈211〉 19
<212> DNA <213〉人工序列
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〈400〉 4
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gtgagctcac catgtggggg tgaggctgag agaaaacaag tacacag 47
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〈213> 智人(Homo Sapiens) <400〉 6
ccacagatcc atgatgtgca gttctctgga gcaggcgctg gctgtgctgg tcactacctt 60 ccacaagtac tcctgccaag agggcgacaa gttcaagctg agtaaggggg aaatgaagga 120 acttctgcac aaggagctgc ccagctttgt gggg 154
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〈213〉智人(Homo Sapiens) <400〉 7
60 120 180 240 252
gagaaagtgg atgaggaggg gctgaagaag cagcaggtgg acttccagga gtatgctgtt gacttcttcc agggctgccc agaccgaccc atctcttggg cccaggactg ttgatgcctt
ctgatgggca gcctggatga gaacagtgac ttcctggcac tcatcactgt catgtgcaat tgaagcagaa ctcttgactt cctgccatgg tgagttttgt attcaataaa ctttttttgt
權利要求
1. 一種S100A2基因的用途，其特征在于，用于制備檢測胃癌或胃癌組織轉移的試劑或試劑盒。
2. —種用于檢測胃癌或胃癌組織轉移的試劑，其特征在于，所述的試劑選自下組(1) S100A2基因或轉錄本的特異性引物；和/或(2) S100A2基因或轉錄本的特異性識別探針或表面固定有所述探針的芯片。
3. 如權利要求2所述的試劑，其特征在于，所述的試劑是引物，所述的引物是針對S100A2外顯子的引物。
4. 如權利要求3所述的試劑，其特征在于，所述的引物是針對S100A2基因的外顯子2和外顯子3的特異性引物；或所述的引物是針對S100A2基因的外顯子1和外顯子2的特異性引物；或所述的引物是針對S100A2基因的外顯子1和外顯子3的特異性引物。
5. 如權利要求4所述的試劑，其特征在于，所述的特異性引物是具有SEQID N0: 1和SEQ ID NO: 2所示的序列的引物對。
6. 權利要求2-5任一所述的試劑的用途，其特征在于，用于制備檢測胃癌或胃癌組織轉移的試劑盒。
7. —種檢測胃癌或胃癌組織轉移的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒中含有權利要求2-5任一所述的試劑。
8. 如權利要求7所述的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒中還含有核酸提取試劑；聚合酶聯反應試劑；正常組織表達的S100A2基因或轉錄本的參照品；或描述檢測胃癌或胃癌組織轉移的方法的說明書。
9. 一種檢測受試者是否存在胃癌或胃癌組織轉移的方法，其特征在于，所述方法包括利用權利要求2-5任一所述的試劑檢測受試者組織樣品中S100A2基因或轉錄本的表達，若表達量在統計學上高于正常水平，則該受試者存在胃癌或胃癌組織轉移。
10. 如權利要求9所述的方法，其特征在于，所述的組織樣品選自外周血、骨髓、淋巴結、腹腔清洗液、胃壁細胞或胃液。
全文摘要
本發明屬于生物技術和醫學領域，公開了一種胃癌標志基因S100A2及其用途，其可作為檢測胃癌或胃癌組織轉移的標志物。本發明還公開了檢測胃癌標志基因的試劑或試劑盒及其用途。本發明首次發現并證實S100A2基因與胃癌或胃癌組織轉移的密切相關性，并開發了可用于臨床的試劑和試劑盒，從而為胃癌或胃癌組織轉移的診斷或治療提供了新的途徑。
文檔編號C12Q1/68GK101519686SQ20081003406
公開日2009年9月2日申請日期2008年2月29日優先權日2008年2月29日
發明者菲陳申請人:蘇州工業園區為真生物醫藥科技有限公司

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