專利名稱：截短側耳素的發酵方法
技術領域：
本發明涉及一種截短側耳素的發酵方法。
背景技術：
目前生產沃尼妙林中間體——截短側耳素發酵生產工藝中，各廠都 是采取補料分批發酵法，即液氮冷凍管菌種接種至試管斜面，經15天 培養，將生長好的斜面菌種接入搖瓶，經8-9天搖床震蕩培養，再接入 種子罐，通常采用二級種子罐培養，需要四天時間，接入發酵罐以后， 根據菌體生長代謝的需要，不斷補入葡萄糖、豆油、堿、水等物料，發
酵300小時左右，效價在9000-10000u/ml放罐，發酵液供截短側耳素 提取。分批發酵法發酵罐利用率低，發酵罐利用率只有75%左右，菌種 的生產能力沒有得到充分發揮。
發明內容
本發明的目的在于提供一種可以有效提高發酵罐利用率、菌種的生 產能力的截短側耳素的發酵方法。
本發明的技術解決方案是
一種截短側耳素的發酵方法，其特征是包括將菌種接種至試管斜
面，經15天培養后，將生長好的斜面菌種接入搖瓶，經8 9天搖床震 蕩培養后再接入種子罐，接入種子罐的接種量為發酵罐液體容量的15 。％，經三級培養后自發酵，發酵30 50小時至還原糖降至1.0%時，連續流加30% 40%V/V的葡萄糖液，使發酵液中葡萄糖含量為0.8 1.0%，，并用NaOH溶液調節發酵液PH值至6.8 7.0;發酵至120 150
小時時，觀察菌絲生長狀況，當菌絲美蘭染色由深變淡時，補入發酵罐 液體容量1.0%的玉米漿及發酵罐液體容量0.2%的豆餅粉，發酵時間為 210 230小時，發酵至效價為9000 10000u/ml，發酵液體積達發酵罐 液體容量的70% 80%時，放出相當于發酵罐液體容量100%的發酵液， 再補入發酵罐液體容量1.0%的玉米漿及發酵罐液體容量0.2%的豆餅 粉，及發酵罐液體容量8.8%的無菌水，并連續流加30% 40%V/V的 葡萄糖液，使發酵液中葡萄糖含量為0.5 0.8%,，并用NaOH溶液調節 發酵液PH值至6.8 7.0;發酵時間為240 260小時，至效價在9500 10500時，再次放出相當于發酵罐液體容量10%的發酵液，并補入相當 于發酵罐液體容量10%的無菌水，并連續流加30。％ 40%V/V的葡萄 糖液，使發酵液中葡萄糖含量為0.4 0.6%，，并用NaOH溶液調節發酵 液PH值至6.8 7.0;發酵至270 290小時時，放出相當于發酵罐液體 容量10%的發酵液，再補入發酵罐液體容量1.0%的玉米漿及發酵罐液 體容量0.2%的豆餅粉，及發酵罐液體容量8.8%的無菌水，并連續流加 30X 40XV/V的葡萄糖液，使發酵液中葡萄糖含量為0.4 0.6%,，并 用NaOH溶液調節發酵液PH值至6.8 7.0;發酵至300-320小時，效 價達10000-11000u/ml，發酵體積為發酵罐液體容量的75-80%，發酵指 數為0. 036十億/nAh。
本發明可以有效提高發酵罐利用率、菌種的生產能力。截短側耳素 發酵菌種屬擔子菌綱側耳菌屬(pleurotusmutilus)，截短側耳素是脂溶性化合物，存在于菌絲體內。采用補料并定時放料分批發酵法菌體的 平均生產速率比一般的補料分批發酵提高10.0%，從而使罐批產量增 加，主要是由于中間帶放料使菌體代謝盡可能處于原有的平衡狀態，使 菌體比生產速率增加，相應地增加了比生產速率及生產速率。因在整個 發酵過程中空氣不斷通過發酵液帶走發酵液中的水分，水分在不斷蒸 發，取無菌樣和測生化樣減少少量體積，因此在每次帶放料后除補充同 體積的新鮮培養基或水以外，發酵過程中蒸發的水分和取樣減少的體積 主要由流加的糖液、調PH的堿液及菌體對基質氧化及產物合成產生的 水來補充的，因調PH的堿液用量及菌體對基質氧化及產物合成產生的 水很少，所以發酵液減少的體積主要由流加的糖液中的水來補充的。蒸 發量與通氣量成正比，與空氣密度成正比，與空氣濕度成反比，所以蒸 發量受季節影響較大，冬季由于空氣濕度的較低，流加糖的濃度通常在
30%左右，夏季為40%，同時也要根據發酵液的體積、泡沫狀況及菌 體濃度，實時補入無菌水，使發酵液體積維持在75-80%。本發明效 價可達10000-11000u/ml，發酵體積75-80%,罐利用率可達95-105%， 發酵指數由0. 025十億/m3. h提高到0. 036十億/m3. h。
下面結合實施例對本發明作進一步說明。
具體實施例方式
一種截短側耳素的發酵方法，包括將菌種接種至試管斜面，經15 天培養后，將生長好的斜面菌種接入搖瓶，經8 9天搖床震蕩培養后 再接入種子罐，接入種子罐的接種量為發酵罐液體容量的15%,經三級 培養后自發酵，發酵30 50小時至還原糖降至1.0%時，連續流加30X 40XV/V的葡萄糖液，使發酵液中葡萄糖含量為0.8 1.0°/。,，并用 NaOH溶液調節發酵液PH值至6.8 7.0;發酵至120 150小時時，觀 察菌絲生長狀況，當菌絲美蘭染色由深變淡時，補入發酵罐液體容量1.0 %的玉米漿及發酵罐液體容量0.2%的豆餅粉，發酵時間為210 230小 時，發酵至效價為9000 10000u/ml，發酵液體積達發酵罐液體容量的 70% 80%時，放出相當于發酵罐液體容量10%的發酵液，再補入發酵 罐液體容量1.0%的玉米漿及發酵罐液體容量0.2%的豆餅粉，及發酵罐 液體容量8.8。^的無菌水，并連續流加30X 40Q^V/V的葡萄糖液，使 發酵液中葡萄糖含量為0.5 0.8%,，并用NaOH溶液調節發酵液PH值 至6.8 7.0;發酵時間為240 260小時，至效價在9500 10500時，再 次放出相當于發酵罐液體容量10%的發酵液，并補入相當于發酵罐液體 容量10%的無菌水，并連續流加30% 40%V/V的葡萄糖液，使發酵 液中葡萄糖含量為0.4 0.6%,，并用NaOH溶液調節發酵液PH值至 6.8 7.0;發酵至270 2卯小時時，放出相當于發酵罐液體容量10%的 發酵液，再補入發酵罐液體容量1.0%的玉米漿及發酵罐液體容量0.2。％ 的豆餅粉，及發酵罐液體容量8.8%的無菌水，并連續流加30% 40% V/V的葡萄糖液，使發酵液中葡萄糖含量為0.4 0.6%，，并用NaOH溶 液調節發酵液PH值至6.8 7.0;發酵至300-320小時，效價達 10000-11000u/ml，發酵體積為發酵罐液體容量的75-80%，發酵指數為 0. 036十億/m3. h。
權利要求
1、一種截短側耳素的發酵方法，其特征是包括將菌種接種至試管斜面，經15天培養后，將生長好的斜面菌種接入搖瓶，經8～9天搖床震蕩培養后再接入種子罐，接入種子罐的接種量為發酵罐液體容量的15％，經三級培養后自發酵，發酵30～50小時至還原糖降至1.0％時，連續流加30％～40％V/V的葡萄糖液，使發酵液中葡萄糖含量為0.8～1.0％，，并用NaOH溶液調節發酵液PH值至6.8～7.0；發酵至120～150小時時，觀察菌絲生長狀況，當菌絲美蘭染色由深變淡時，補入發酵罐液體容量1.0％的玉米漿及發酵罐液體容量0.2％的豆餅粉，發酵時間為210～230小時，發酵至效價為9000～10000u/ml，發酵液體積達發酵罐液體容量的70％～80％時，放出相當于發酵罐液體容量10％的發酵液，再補入發酵罐液體容量1.0％的玉米漿及發酵罐液體容量0.2％的豆餅粉，及發酵罐液體容量8.8％的無菌水，并連續流加30％～40％V/V的葡萄糖液，使發酵液中葡萄糖含量為0.5～0.8％，，并用NaOH溶液調節發酵液PH值至6.8～7.0；發酵時間為240～260小時，至效價在9500～10500時，再次放出相當于發酵罐液體容量10％的發酵液，并補入相當于發酵罐液體容量10％的無菌水，并連續流加30％～40％V/V的葡萄糖液，使發酵液中葡萄糖含量為0.4～0.6％，，并用NaOH溶液調節發酵液PH值至6.8～7.0；發酵至270～290小時時，放出相當于發酵罐液體容量10％的發酵液，再補入發酵罐液體容量1.0％的玉米漿及發酵罐液體容量0.2％的豆餅粉，及發酵罐液體容量8.8％的無菌水，并連續流加30％～40％V/V的葡萄糖液，使發酵液中葡萄糖含量為0.4～0.6％，，并用NaOH溶液調節發酵液PH值至6.8～7.0；發酵至300-320小時，效價達10000-11000u/ml，發酵體積為發酵罐液體容量的75-80％，發酵指數為0.036十億/m3.h。
全文摘要
本發明公開了一種截短側耳素的發酵方法，采用補料帶放料分批發酵法，種子罐菌種培養由二級改為三級。本發明可以有效提高發酵罐利用率、菌種的生產能力。
文檔編號C12R1/645GK101319234SQ20081002297
公開日2008年12月10日 申請日期2008年7月4日 優先權日2008年7月4日
發明者冒永松, 沈春梅, 賈永飛, 陳劍慧, 韓勤更 申請人:江蘇賽奧生化有限公司