專利名稱：：生產中藥材蛹蟲草的規范化操作方法
技術領域：
：本發明涉及一種中藥材蛹蟲草生產的標準方法及專用干燥裝置。
背景技術：
：蛹蟲草(Corc(Fce/5"啦7its/^(L.)Link.)，又稱北冬蟲夏草、北蟲草、蛹草，是一種正在開發之中的中藥材。蟲草是一種長在蟲體或蛹體上的棒狀真菌，蟲體(包括幼蟲和成蟲)或蛹體只是這種真菌的培養基。蟲草是蟲體(蛹體)與真菌的復合體。'昆蟲感染蟲草真菌后，蟲草真菌在其體內逐步生長，直到充滿幼蟲(蛹)體，使幼蟲變成菌核而外形不變。之后，從幼蟲(蛹)體長出子實體，如草狀，故名蟲草。蟲草見諸于國內外文獻記載已經有三百五十多種。有的生長在幼蟲體上，有的長在蛹上，有的生長在成蟲體上。蛹蟲草又稱蛹草、北蟲草、北冬蟲夏草，主產于云南，吉林的山林之中，多生于闊葉林或雜交林表土層中的鱗翅目昆蟲的蛹體上。蛹蟲草與冬蟲夏草同屬蟲草屬(C辦c印s)，蛹蟲草是這個屬的模式種。蟲草的質量區別標準主要是特有成份的含量，如蟲草素，青海產的冬蟲夏草每100克中含有100毫克以下，而蛹蟲草一般為200-300毫克以上。三十年來，冬蟲夏草的價格上漲了幾十倍。當前，禮品級的冬蟲夏草零售價已經達到每公斤50萬元，統貨也達15萬元左右。冬蟲夏草價格上漲的原因源于它的治療價值。自80年代初起，醫學界以現代生物醫學的視角重新發現了冬蟲夏草。至今，已經有大量的臨床研究報告表明，冬蟲夏草對腎衰、肺病等多種疾病有確切的治療作用。冬蟲夏草的臨床意義不僅在于對抗性治療，而且在于對人體各臟器功能的治療、保護和協調作用，涉及心、肝、肺、腎、神經、血管、皮膚、骨骼、免疫等系統。因此冬蟲夏草對于重患、老年或疑難病患，特別是以西醫藥治療為主，療效欠佳者尤顯珍貴。冬蟲夏草之所以珍貴，說到底是因為它具備特殊的有效成份。蟲草的特異性物質是蟲草素(cOTdyc印in)是一種具有抗菌活性的核苷類物質，對核多聚腺苷酸聚合酶有很強的抑制作用。在DNA轉錄raRNA過程中使mRNA成熟障礙，抑制癌細胞的生長。蟲草多糖是一種高度分枝的半乳甘露聚糖，能促進淋巴細胞轉化，提高血清IgG的抗體含量和機體的免疫功能，增強機體自身抗癌抑癌的能力。S0D(超氧化物歧化酶)可以消除機體內超氧自由基，具有抗衰老、抗癌抑癌的作用。而蛹蟲草之所以受到重視也在于，它的各種有效成份相當于的冬蟲夏草，但其中蟲草素含量卻高于冬蟲夏草幾倍到十幾倍。為了開發蛹蟲草，國內外學者開展了多方位的研究工作，涉及生物學(蛹蟲草形態、生態、分布、宿主、生理等)、栽培培養方法(蛹蟲草液體發酵生產、代料固體培養、生物宿主生態培養等)、藥物化學(蛹蟲草有效成份分析、有效成份比較等)、毒理學(蛹蟲草急性毒性、亞急性、長期毒性等)、藥理學(蛹蟲草抗腫瘤、腎小管修復、降低血糖、免疫調節、改善性功能障礙、抗疲勞、抗氧化抗衰老等)、臨床治療(蛹蟲草治療腫瘤、腎病、肝纖維化、高血壓、糖尿病、老年慢性支氣管炎、經常性感冒、外傷性神經恢復、運動疲勞等)，這些研究的結果表明，蛹蟲草的藥用價值是確切的、公認的、不容置疑的。至今，蛹蟲草的開發利用已經二十年了，蛹蟲草菌絲發酵產品(蛹蟲草菌絲膠囊)已經取得了正式生產批準文號(國藥準字Z20030034/35)，蛹蟲草保健食品(國食健字G20060617)也已經獲批。做為地產中藥材，蛹蟲草組方在民間臨床組方或協議方也已經有十年之久。今后，發展中成藥已經成為蛹蟲草開發的必然趨勢。二十年來，蛹蟲草的開發形成了在食用菌概念指導下的、在微生物制藥概念指導下的和在中藥材概念指導下的三個不同取向。A:在食用菌概念指導下的，以代用培養料為基質，將蛹蟲草當成一種蘑菇進行栽培。表現為僅以子實體為培養目標，常以大米為主要原料，蛹蟲草子實體或直接食用，或進而開發成食品、藥膳食品或復方保健食品。B:在微生物制藥概念指導下的，以液體發酵罐為手段，以蛹蟲草菌絲體為培養目標，迸而開發成藥品、保健食品。C:在中藥材概念指導下的，以蟲體或蟲蛹為基質，以完整蛹蟲草全草為培養目標，或直接食用、藥用，或進而開發成食品、藥膳食品或保健食品。以蟲或蛹為基質進行蛹蟲草培養的，在當前也分做三個發展方向以桑蠶為基質、以柞蠶為基質或以其他昆蟲(如松毛蟲、黃粉蟲)為基質。由于基質昆蟲的不同，其藥用價值有差異。以桑蠶為基質進行蛹蟲草培養，當前也發展成四個不同的分枝以老齡桑蠶幼蟲為基質、以鮮活桑蠶蛹(剖繭蛹)為基質、以烘干桑蠶蛹為基質或以鮮或干蠶蛹的提取物加其他成份組成合成培養基。這些差異導致相應的蛹蟲草生產工藝不同，生產成本不同，其藥用價值之間也存在不同。二十年來，將蛹蟲草子實體當成一種蘑菇進行栽培，已經積累了相當豐富的栽培經驗，形成了整套的方法學，并且發展成規模生產規范化管理。將蛹蟲草菌絲當成一種制藥中間體進行培養，也已經形成了數十噸的生產能力，其產品已經作為新藥上市場。但是，用做中藥材概念指導下的，以完整蛹蟲草全草為培養目的物進行規模化、規范化生產者，本發明尚屬首例。什么是蛹蟲草(又稱北蟲草)？不同的人給出不同的答案；什么樣的蛹蟲草是中藥材蛹蟲草？答案也有所不同。行業中甚至出現這樣一種概念同一個蛹蟲草菌種，長在大米上的叫北蟲草，長在蛹上的叫蛹蟲草，長在柞蠶蛹上的與長在桑蠶蛹上的沒區別，等等。面對這樣一種混亂局面，中藥師何以適從，中醫師何以敢用！至于何以判斷其中優劣、哪個地道，則更是無法可依，無從談起。規范化種植標準操作規程(SOP)是發展地道中藥材的基礎和前提。對于正在開發之中的蛹蟲草來說，S0P的意義除了蛹蟲草地道化的需要以外，還是推動蛹蟲草中藥材臨床使用和進一步開發復方蛹蟲草中成藥的前提，這也是蛹蟲草開發進程的必然。建立蛹蟲草的中藥材生產標準操作規程(S0P)，無疑將有助于使蛹蟲草栽培生產的規范化，進而促進蛹蟲草成為中藥材新藥的進程。
發明內容本發明的目的在于提供一種規范化生產中藥材蛹蟲草的標準方法及專用干燥裝置。本發明的技術解決方案是一種規范化規模栽培用作中藥材的蛹蟲草的方法，其特征是包括下列步驟-A:采用有機桑蠶蛹，包括自有機蠶桑基地取得蠶繭，然后自蠶蛹收、儲和加工場地獲得蠶蛹，作為中藥材蛹蟲草所用的培養基；B:采用適合中藥材蛹蟲草的菌種，是經過選育、凍干保藏、激活、通過菌種檢驗的菌種；C:采用規范化培養方法，包括前培養方法、后培養方法；D:采用規范化后處理方法，包括采收干燥方法，包裝儲運方法；E:采用中藥材蛹蟲草質量保障方法，包括中藥材蛹蟲草質量標準、中藥材蛹蟲草質量檢測方法，即建立Q/320691DJK01-2007標準。步驟A中，對蠶繭迸行剖繭、檢測蠶蛹重金屬，衡量蠶繭品質鉛(以Pb計，干重，下同)不高于kig/kg、砷(以As計)不高于O.5mg/kg，汞(以Hg計)不高于O.2mg/kg;中藥材蛹蟲草所用的培養基采用桑蠶繭繅絲后濕(或經冷凍)的完整蠶蛹；所述繅絲后濕蠶蛹按如下指定工藝加工一級分揀-二級分揀-三級分揀-清洗-漂燙-冷卻-用于生產或速凍-包裝暫存；經過繅絲等加工程序后，該蠶蛹重金屬污染指標仍符合鉛不高于lmg/kg、砷不高于0.5mg/kg，汞不高于O.2mg/kg的標準。步驟B中經過選育、凍干保藏、激活等禾呈序所得菌種是否可用于中藥材蛹蟲草生產，取決于最終所得蛹蟲草是否符合Q/320691DJK01-2007標準。步驟C中前培養是將濕蠶蛹或經冷;東的完整蠶蛹裝入透明小容器，進行滅菌、接種，然后置于前培養室至前培養結束，透明的小容器中裝料量以占3/5(L/L)以下，接種時用不超過48小時菌齡的液體菌種進行接種，在100級凈化條件下將液體菌種許^灑在滅過菌的蠶蛹上。接種比10:1至10:3(蠶蛹液體菌種，V/V);前培養溫度控制在10。C到25。C之間，20天至60天；步驟C中后培養容器采用透光塑料筐，且透明塑料筐用食品保鮮膜五面或六面包襯，后培養環境溫度控制在i5t:到3(rc之間，日溫差1(TC，還要控制環境濕度為85%、自然散射光或人工光源，照度200至2000勒克司；培養所得中藥材蛹蟲草，符合Q/320691DJK01-2007標準。步驟D的干燥采用低溫穿流式熱風干火喿，熱風溫度控制在55。C到65。C之間，干燥6至8小時。所述低溫穿流式熱風干燥采用簡易f氐溫穿流式熱風干燥器，包括風機，風機上設置換熱器，換熱器上設置多層料盤，料盤上方設置排氣罩，換熱器熱水泵上接有一個熱敏頭伸入料盤中的控溫儀。步驟D包裝儲運時用塑料袋雙層雙封R^潮包裝，避光、5。C以下冷藏。在經過步驟D處理之后、或再經兩年以上保存之后，蛹蟲草仍符合Q/320691DJK01-2007標準。以蟲草素含量作為檢測中藥材蛹蟲草的指標之一，蟲草素含量不低于lmg/g。本發明的優點一、解決蛹蟲草中藥材的規范化種植中的培養基質選擇問題蛹蟲草中藥材的規范化種植培養基質要滿足以下條件在可滿足規模生產、來源可靠、質量可控的前提下，要使所得蛹蟲草具備完整的、中藥材鑒別外觀特征和較豐富的有效成份含量。1.本方法與以下發明專利及類似公知技術中的蛹蟲草栽培方法不同如"東北蟲草的培養方法及其制品(C093117581.X)"、"抗病高產蛹蟲草栽培方法(C096115115)"、"北冬蟲夏草子實體的培養方法(C099124200.9)"。上述方法僅以子實體為栽培目標，以大米為主要原料，得不到中藥材蛹蟲草完整外觀，有效成份含量較低。2.本方法與發明專利"人工栽培北冬蟲夏草提高其生理活性物質含量的方法(C002109304.0)"及類似公知技術中的蛹蟲草培養方法不同。上述方法是在液體發酵條件下，以生產蛹蟲草菌粉為培養目的物，得不到有鑒別特征的蛹蟲草。3.本方法與發明專利"一種用柞蠶蛹培養蛹蟲草入藥的方法(C094106100)"、"蠶蛹蟲草工業化生產方法(C00130381.3)"及類似公知技術中的蛹蟲草栽培方法不同。上述技術方法是以鮮活柞蠶(或桑蠶)蛹作培養基，而得到鮮活柞蠶(或桑蠶)蛹要剖開蠶繭，造成不必要的成本損失。4.本方法與發明專利"烘干蠶蛹人工培育蟲草的方法(C093102809)"及類似公知技術中的蛹蟲草栽培方法不同。上述技術方法是以烘干的桑蠶蛹作培養基。市售干蠶蛹或自然曬干、或煤火烘干而得，多用于詞料，前者多雜質、多酸敗，后者多鉛含量高，不宜使用。5.本方法與發明專利"蛹蟲草等蟲草的人工培養方法(C097113190)"及類似公知技術中的蛹蟲草栽培方法不同。該方法采用蛹的提取物加其他成份組成人工培養基，最終得不到有外觀鑒別特征的蛹蟲草。本發明的目的之一，是規避以上原料的缺欠，選擇適當的培養原料，使培養物有完整的蛹蟲草外觀鑒別特征，有效成份(如蟲草素)含量較高，且質量數量可控人、可滿足大量、規模生產的需要。籍此解決蛹蟲草中藥材的規范化種植中的培養基質材料的選擇問題。二、規范用作中藥材的蛹蟲草培養基質材料來源如上所述，本發明方法采用完整的繅絲后桑蠶蛹作為培養原料。這種原料有其諸多優點，但為了保證生產出合格的中藥材蛹蟲草，還必需將其限定在無公害綠色或有機的范圍內。當前，除了專門為栽培蛹蟲草刻意培養的以外，各種蠶(蛹)，包括老齡蠶、鮮蛹、干燥蠶蛹、繅絲后桑蠶蛹，都有來源不確定性。以繅絲后桑蠶蛹為例，繅絲廠的蠶繭檔口(批次)經常因為種種原因而變化，至于蠶繭原產地的環境情況，是否受到某種污染，則沒人說得清楚。這種現狀對中藥材蛹蟲草的規模生產，保持中藥材蛹蟲草質量的穩定十分不利。為此，有必要設計一整套可行的管理辦法和相應的技術措施，用以規范用作中藥材蛹蟲草培養材料來源。三、改善用于以上培養料的菌種和菌種使用方法蟲草類真菌是寄生與腐生兼性真菌。在自然感染昆蟲的過程中，先進行寄生生活，而后(在昆蟲死亡之后)進行腐生生活。蠶蛹活體表面接種或蠶蛹活體穿刺接種是利用它的寄生性，也在利用活體自身的天然抗病能力(抵抗雜菌污染)。本發明利用完整的繅絲后桑蠶蛹，具有含水量高，容易酸敗等問題，且沒有天然抗病能力可以利用，因此需要與其他培養料不同的蛹蟲草培養工藝條件。本發明與"蛹蟲草等蟲草的人工培養方法(C097113190)"及類似公知技術中的蛹蟲草栽培方法不同。此類技術中用活體桑蠶(或蛹)栽培蛹蟲草，需要以固體菌種或液體菌種，在表面滅菌條件下注射接種在活體桑蠶(或蛹)上，或者將表面滅菌的活體桑蠶(或蛹)投放到固體菌種或液體菌種中，令其自然侵染。這種以活體桑蠶(或蛹)為核心的接種技術因為不能徹底滅菌，所以不能排除潛在感染，還很難排除培養期間的交叉再感染。活體接種技術不適于繅絲后桑蠶蛹。四、解決適用于中藥材蛹蟲草中的栽培方法問題蛹蟲草中藥材的規范化種植標準操作規程(SOP)，要求培養出的蛹蟲草保留中藥材鑒別外觀特征，有效成份比含量較高。為此，提出將中藥材蛹蟲草栽培分為"前培養"和"后培養"兩個階段。已有技術沒有涉及到這種專用方法。五、提出適用于中藥材蛹蟲草的規范化種植的質量管理方法已有技術也沒有涉及到中藥材蛹蟲草質量標準及其檢測方法問題。我們建立了中藥材蛹蟲草質量標準，奠定了蛹蟲草的進入中藥材序列，促進蛹蟲草中成藥發展的質量基礎。六、提出適用于中藥材蛹蟲草的規范化種植的后處理方法中藥材蛹蟲草需要良好的后處理方法。中藥材蛹蟲草比蛹蟲草子實體內部水份擴散距離長，常常有干燥不達標，長期保管變色甚至生霉、化粉(蟎害)。中藥材蛹蟲草盡管比冬蟲夏草價格低，但畢竟是一種珍貴藥材，因此不宜用中藥材常規方法來保管、儲存和運輸。為此本發明擬從中藥材蛹蟲草采收、干燥設備和蛹蟲草保存三個角度解決這一問題。七、降低中藥材蛹蟲草的生產成本為了使蛹蟲草中藥材及中成藥大眾化，平民化，提高中藥材蛹蟲草的市場競爭能力，本發明通過改變原料，改進工藝，進一步降低了成本。總之，本發明將為實施"蛹蟲草中藥材的規范化種植標準操作方法(SOP)"提供了核心技術。結合本發明，建立中藥材蛹蟲草生產標準操作方法(SOP)包括A:建立有機桑蠶蛹供應體系的方法。B:中藥材蛹蟲草菌種保障體系和方法。C:中藥材蛹蟲草質量保障體系和方法。D:中藥材蛹蟲草工廠化規模生產中的栽培方法。E:中藥材蛹蟲草后處理體系和方法。具體可以是-一建立有機桑蠶蛹供應體系的方法1:有機蠶桑基地規范2:桑園管理和養蠶規程3:專用蠶繭采收加工規程4:專用蠶蛹加工規程5:專用蠶蛹貯藏和運輸規程6:有機蠶桑基地內部檢査規程二中藥材蛹蟲草菌種保障體系和方法1:用常規組織分離方法自野生蛹蟲草或單株篩選蛹蟲草2:用常規菌種選育方法，多代重復至性狀穩定3:用常規低溫菌種保藏，經常檢查并做出菇實驗，防止退化4:常規制做液體菌種5:適合中藥材蛹蟲草的菌種檢驗程序；三中藥材蛹蟲草質量保障體系和方法1:中藥材蛹蟲草質量標準2:中藥材蛹蟲草理化指標蟲草素鑒別、含量測定方法(TLCHPLC法)(附件2)四中藥材蛹蟲草工廠化規模生產中的栽培方法1:中藥材蛹蟲草前培養方法、本發明中前培養，是培養原料在透明小容器中完成發菌(走菌)的全過程。1.1培養基采用合格的，繅絲后濕蠶蛹或再經冷凍的濕桑蠶蛹。1.2繅絲后濕桑蠶蛹裝入透明的小容器中，裝料量以占3/5(L/L)以下。透明小容器可以是玻璃瓶，也可以是塑料瓶或袋。1.3常規封口，滅菌，冷卻。1.4以液體菌種或固體菌種，在100級凈化條件下，用淋、撒的方法，接種在濕桑蠶蛹上。1.5本發明中使用的液體菌種培養周期不超過48小時。固體菌種接種比l:20至1:30(w/w)，液體菌種接種比l:10至1:30(ml/ml)。1.6前培養溫度控制在l(TC到25r之間，20天至60天。2:中藥材蛹蟲草后培養方法。本發明中的后培養，是指將前培養產物再培養成中藥材蛹蟲草，具備合格的外觀性狀和蛹蟲草鑒別鑒定其他特征。2.l前培養后，桑蠶蛹充滿蛹蟲草菌絲，并因菌絲的擴展結成團塊。本發明首先將前培養后的桑蠶蛹分散到后培養箱中。2.2.分散要在比較潔凈的環境中進行，靠手工完成。工作人員要做衛生防護并防止雜物混入。2.3本發明中的后培養箱采用特制的透光塑料箱，塑料箱用半透氣塑料膜(如食品保鮮膜)五面或六面包襯。2.4后培養用的培養室要求有散射光，自然散射光或人工光源，照度200至2000勒克司(Lux)。2.5后培養室溫度控制在15。C到3(TC之間，溫差10°C.2.6后培養室環境濕度控制在85%以上。3:中藥材蛹蟲草前、后培養方法的過程控制3.l當有緊急情況發生，必須及時匯報，不得擅自采取處理措施。3.2若有任何系統上的改變或新器材的增設時，生產負責人應第一時間匯報情況。五中藥材蛹蟲草后處理方法1:中藥材蛹蟲草采收、干燥、包裝方法。1.1中藥材蛹蟲草所謂采收，只是將成熟的蛹蟲草移出培養箱，或除去培養箱側面的塑料膜，移到通風室內或加強通風，以減少表面水份。1.2中藥材蛹蟲草干燥方法，根據需要可采用低溫干燥，低溫真空干燥或冷凍干燥法。1.3采用低溫穿流式熱風干燥，熱風溫度控制在55'C到65"C之間，6至8小時。1.4設計了一種低溫穿流式熱風干燥器，設計圖見(附圖2)。1.5中藥材蛹蟲草的干燥標準，含水量控制在7%以下。1.6干燥后的蛹蟲草裝入雙層塑料袋、封口，要求塑料袋要安全無毒害，厚度不小于2.5絲，否則容易刺穿，失效。2:中藥材蛹蟲草儲、運方法。2.1封裝入塑料袋的蛹蟲草要5'C避光冷藏。2.2儲藏、運輸時，外層用塑料箱或紙箱盛裝，要防止塑料袋割傷，擦破。3:中藥材蛹蟲草采收、包裝、儲運的過程控制4.l當有緊急情況發生，必須及時匯報，不得擅自采取處理措施。4.2若有任何系統上的改變或新器材的增設時，生產負責人應第一時間匯報情況。本發明的優點還在于一踴蟲草中藥材的規范化種植標準操作規程(SOP)是發展地道蛹蟲草中藥材的前提，也是蛹蟲草開發進程的必然。已有技術沒有涉及到建立蛹蟲草中藥材的規范化種植標準操作規程(SOP)問題。本發明為蛹蟲草中藥材的規范化種植標準操作規程(SOP)提供了核心技術。二傳統中藥界認為，冬蟲夏草的"蟲(蛹)"為陰，"草"為陽，陰陽互補，合用為佳。運用以代用培養料為基質，或以液體發酵罐為手段，不能生產出符合中藥冬蟲夏草傳統外觀概念的蛹蟲草，即有"蟲(蛹)"有"草"的蛹蟲草。而本發明方法培養出的蛹蟲草可以得到中藥界的認同，這是本發明的首要優點。三建立無公害、有機桑蠶蛹供應體系，規范用作中藥材的蛹蟲草培養材料來源將無公害、有機蠶桑基地當作中藥材蛹蟲草生產的"第一車間"，將專繅、精選、專儲當作中藥材蛹蟲草生產的"第二車間"，這是規范化規模栽培中藥材蛹蟲草的基礎。如此蠶繭原產地的環境情況明了，加工流程清淅，農殘問題和重金屬超標問題可防患未然，這對中藥材蛹蟲草的規模生產，保持中藥材蛹蟲草質量的穩定，樹立蛹蟲草地道中藥材品牌十分有利。四原料選擇中的技術優勢1:運用柞蠶蛹為基質，或以其他昆蟲幼蟲或蛹培養出的蛹蟲草，其藥性與桑蠶蛹為基質的蛹蟲草藥性不同。原則上，"柞蠶蛹蛹蟲草"或"XX蟲蛹蟲草"應該視為另一種中藥材，且已經證明桑蠶蛹蛹蟲草的藥用價值優于柞蠶蛹蛹蟲草。2:與其他用作原料的昆蟲相比，桑蠶容易批量獲得，因而容易控制來源，數量和質量。3:與用桑蠶老熟幼蟲作原料相比，或與用活體(常規的或無菌的)桑蠶蛹作原料相比，用桑蠶蛹不會與蠶絲業爭原料，或者說不會破壞蠶絲，從而降低成本，并且減少了養蠶周期對蛹蟲草栽培的制約。4:市售烘干桑蠶蛹容易裏入雜物臟物，重金屬含量常常偏高，增大了質量事故發生的可能。與烘干桑蠶蛹作原料相比，用繅絲后桑蠶蛹栽培蛹蟲草減少了鑿孔工序，也不需要補充營養液或水，降低了操作成本，同時也降低了質量事故發生的可能。5:用蠶蛹的提取物加其他成份組成人工培養基，得不到符合中藥材觀念的完整的蛹蟲草。總之，本發明與上述技術方法相比的優勢在于利用繅絲后(或經冷凍的)完整的桑蠶蛹滿足了培養合格的中藥材蛹蟲草的原料需求。五中藥材蛹蟲草菌種保障體系和方法中的技術優勢蟲草類真菌是寄生與腐生兼性真菌。在自然感染昆蟲的過程中，先進行寄生生活，而后(在昆蟲死亡之后)進行腐生生活。蠶蛹活體表面接種或蠶蛹活體穿刺接種是利用它的寄生性，本發明利用蟲草菌的腐生原理設計。1:與利用桑蠶蛹培養蛹蟲草的現有相關接種技術有2:A:以固體菌種或液體菌種，在表面滅菌條件下注射接種在活體桑蠶(或蛹)上。此方法因為不能泄底滅菌，尤其不能排除活蠶事前已經發生感染，因此污染率較高，成功率較低。B:在表面滅菌條件下以活體桑蠶(或蛹)上投放到固體菌種或液體菌種中，令其自然侵染。因為不能沏底滅菌，尤其不能排除活蠶事前已經發生感染或己經被寄生，此方法污染率較高，成功率較低。此法還很難排除培養期間的交叉再感染。本發明是以液體菌種或固體菌種，在無菌條件下接種在完整的繅絲后鮮(凍)濕桑蠶蛹上。與現有技術方法相比的區別在于不是"將菌株接種于以蠶蛹的組成成分為主要成分的液體培養基上"，也不是接種于"用人工飼料無菌養蠶法得到的蠶蛹上"。在此基礎上，本方法與以下發明專利不同"蛹蟲草等蟲草的人工培養方法(C097113190)"。六栽培方法中的技術優勢1.本發明中前培養，是培養原料在透明小容器中完成發菌的全過程。采用透明小容器好處多多。本發明中前培養在透明小容器中完成滅菌后至發菌(走菌)結束。強調透明的小容器中裝料量以占2/5容積以下。透明小容器可以是玻璃瓶，也可以是塑料瓶或袋。要求透明的目的是為了方便觀察前培養生長情況，要求容器容積要小是為了方便于接種操作，同時方便于處理異常情況，減少交叉污染損失。2.將繅絲后濕蠶蛹裝入透明的小容器中，裝料量以占3/5(L/L)以下，優點是保留混勻空間，有助于菌液接觸均衡，同步發菌。3.不超過48小時菌齡的液體菌種菌齡和適當的接種比，有助于形成生長優勢，也有助于同步發菌。4.前培養溫度控制在l(TC到25t:之間，20天至60天。低溫發菌(走菌)污染少，品質好。5.后培養容器采用用半透氣塑料膜包襯的特制的透光塑料箱。在充分利用后培養室空間的同時，保障了此間蛹蟲草所需要的充分而適度的光照，也提供了充足的氣體交換。6.后培養室溫度控制在15"C到3(TC之間，日溫差1(TC。較大的溫差模擬了林間自然條件，有利于蛹蟲草子實體的形成和蟲草素的合成。7.利用本發明中所提供的中藥材蛹蟲草培養方法，其效果最終表現在，可以培養出外觀性狀符合中藥學概念的，有蟲有草的蛹蟲草，其有效成份(蟲草素)高于其他方法數倍至數十倍，符合蛹蟲草鑒別鑒定所具備的各種特征。七質量管理中的技術優勢1:蛹蟲草中藥材的規范化種植標準操作規程(SOP)是蛹蟲草中成藥開發的前提條件，也是蛹蟲草開發進程的必然。本發明是建立蛹蟲草中藥材的規范化種植標準操作規程(SOP)的技術核心。現有技術沒有涉及到這一層次。2:為了建立蛹蟲草中藥材的規范化種植標準操作規程(SOP)，提出，蛹蟲草中藥材的規范化種植需要建立"穩定的原料專供體系，包括有機蠶桑基地、專用蠶蛹收、儲方法"。現有技術沒有涉及到穩定的原料專供體系問題。3:為了建立蛹蟲草中藥材的規范化種植標準操作規程(SOP)，提出，建立"中藥材蛹蟲草質量保障體系，包括中藥材蛹蟲草質量標準Q/320691DJK01-2007、中藥材蛹蟲草質量檢測方法"。首次確立了以菌核與子實體相結合的中藥材蛹蟲草形態標準；首次確立了以蟲草素含量為主要指標的中藥材蛹蟲草理化指標。現有技術沒有涉及到中藥材蛹蟲草質量標準及其檢測方法。八中藥材蛹蟲草后處理的技術優勢1:本發明展示的低溫穿流式熱風干燥器，熱風溫度控制在55"C到65"C之間，6至8小時。其優點是結構可簡可繁、造價較低、工作效率高。2:中藥材蛹蟲草包裝儲運方法中，蛹蟲草用塑料袋雙層雙封防潮、避光、5X:冷藏。實踐證明，這種方法效果良好。保存兩年以上的中藥材蛹蟲草，其理化指標和外觀特征沒有明顯的變化。九成本管理中的技術優勢1:實施本發明培養中藥材蛹蟲草中的，蟲草素含量高達13.5mg/g，高出幾十倍或幾百倍。以蟲草素含量進行價格比較冬蟲夏草統貨(蟲草素含量lmg/g)目前市價10萬元/kg，本發明生產的蛹蟲草的市場價格應為135萬元/kg;反之，若以本發明生產的蛹蟲草的市場價格2000元/kg計，冬蟲夏草統貨目前市價應為150元/kg;而液體發酵罐為手段生產出的冬蟲夏草菌粉原料藥(蟲草素含量0.lmg/g以下)目前市價應為15元/kg，而不應該是150元/kg-200元/kg。冬蟲夏草菌粉商品(藥品或保健食品)目前市價應該是100元/kg-300元/kg，而不應該是2000元/kg-5000元/kg，。本發明的實施，將使廣大工薪層享用蟲草成為可能，其社會效益由此可見一斑。2:本發明解決了用鮮活桑蠶蛹培養蛹蟲草與桑蠶業爭奪繭絲資源的問題。運用活體桑蠶蛹為基質，或者用桑蠶幼蟲為基質生產蛹蟲草，勢必要破壞蠶繭，影響蠶絲的生產(剪開的蠶繭繅絲不值錢)，本發明節約了繭絲資源，降低蛹蟲草原料成本。3:蛹蟲草栽培物是有"蟲(蛹)"有"草"，整株的蛹蟲草，因此按單位加工容積折算，實施本發明生產的中藥材蛹蟲草產量比以代用培養料為基質提高二十倍以上，其直接生產成本因此下降數倍。本發明為蛹蟲草中成藥開發的成本管理，以及大眾化，平民化的市場操作提供了有利條件，提高了中藥材蛹蟲草的成本優勢和市場競爭能力。下面結合附圖和實施例對此作進一步說明圖1是本發明的流程圖。圖2是本發明專用干燥裝置的結構示圖。具體實施例方式一種規范化規模栽培用作中藥材的蛹蟲草的方法，包括下列步驟A:采用有機桑蠶蛹，包括自有機蠶桑基地取得蠶繭，然后自蠶蛹收、儲和加工場地獲得蠶蛹，作為中藥材蛹蟲草所用的培養基；B:采用適合中藥材蛹蟲草的菌種，是經過選育、凍干保藏、激活、通過菌種檢驗的菌種；C:采用規范化培養方法，包括前培養方法、后培養方法；D:采用規范化后處理方法，包括采收干燥方法，包裝儲運方法；E:采用中藥材蛹蟲草質量保障方法，包括中藥材蛹蟲草質量標準、中藥材蛹蟲草質量檢測方法，即建立Q/320691DJK01-2007標準。步驟A中，對蠶繭進行剖繭、檢測蠶蛹重金屬，衡量蠶繭品質鉛(以Pb計，干重，下同)不高于lmg/kg、砷(以As計)不高于O.5mg/kg，汞(以Hg計)不高于O.2mg/kg;中藥材蛹蟲草所用的培養基采用桑蠶繭繅絲后濕(或經冷凍)的完整蠶蛹；所述繅絲后濕蠶蛹按如下指定工藝加工一級分揀-二級分揀-三級分揀-清洗-漂燙-冷卻-用于生產或速凍-包裝暫存；經過繅絲等加工程序后，該蠶蛹重金屬污染指標仍符合鉛不高于lmg/kg、砷不高于0.5mg/kg，汞不高于O.2mg/kg的標準。步驟B中經過選育、凍干保藏、激活等程序所得菌種是否可用于中藥材蛹蟲草生產，取決于最終所得蛹蟲草是否符合Q/320691DJK01-2007標準。步驟C中前培養是將濕蠶蛹或經冷凍的完整蠶蛹裝入透明小容器，進行滅菌、接種，然后置于前培養室至前培養結束，透明的小容器中裝料量以占3/5(L/L)以下，接種時用不超過48小時菌齡的液體菌種進行接種，在100級凈化條件下將液體菌種淋灑在滅過菌的蠶蛹上。接種比10:1至10:3(蠶蛹液體菌種，V/V);前培養溫度控制在10。C到25。C之間，20天至60天；步驟C中后培養容器采用透光塑料筐，且透明塑料筐用食品保鮮膜五面或六面包襯，后培養環境溫度控制在15C到3(TC之間，日溫差1(TC，還要控制環境濕度為85%、自然散射光或人工光源，照度200至2000勒克司；培養所得中藥材蛹蟲草，符合Q/320691DJK01-2007標準。步驟D的干燥采用低溫穿流式熱風干燥，熱風溫度控制在55。C到65r之間，干燥6至8小時。步驟D包裝儲運時用塑料袋雙層雙封防潮包裝，避光、5'C以下冷藏。在經過步驟D處理之后、或再經兩年以上保存之后，蛹蟲草仍符合Q/320691DJK01-2007標準。本發明得到的蛹蟲草外觀性狀為細長子座和菌核的復合體，菌核周圍布滿菌絲，大部份菌絲呈現桔紅色，深淺不均；蛹蟲草理化指標中，用HBLC進行蟲草素鑒別陽性、含量在1.0mg/g至15.0mg/g之間。專用干燥裝置包括風機10，風機上設置換熱器9，換熱器上設置多層料盤l、2、3、4、5、6、7、8，料盤上方設置排氣罩0，換熱器熱水(汽)管16上接有一個熱敏頭13伸入料盤中的控溫儀11。圖中還有電源線12、物料隔篩14、把手15、回水(汽)管17。干燥時l:設備安裝，烘干準備1.l接通控溫儀(11)對熱水泵(10)的輸出線。1.2接通控溫儀電源線。1.3接通風機電源線(12)。1.4接通控溫儀熱敏線(13)。1.5檢査控溫儀(11)工作是否正常。1.6將熱水箱出水管接通散熱器(9)的熱水入口(16)。1.7將熱水箱回水管接通散熱器(9)的回水口(17)。1.8接通熱水器電源，或蒸汽管。2:烘干2.l移開或吊起排風管罩(0)。2.2移下料盤(1)-(8)。2.3帶好乳膠手套，將濕蛹蟲草鋪放到料盤(8)……(1)，單層鋪放，略有空隙。2.4將料盤壘起，蓋好排風管罩(0)。2.5打開將熱水箱出水管和散熱器熱水入口間的控制閥門。2.6打開控溫儀工作按鈕。2.7將控溫儀熱敏頭置于料盤(7)的料層中。2.8記錄，計時。2.96小時左右，打開排風管罩(0)，檢查料盤(8)內蛹蟲草干燥情況。2.10含水量檢査，低于8%后，收料盤(8)-(1)中的蛹蟲草干品。用此方法，2000年6月在江蘇，南通，2002年至2007年在江蘇，無錫，班加工量8kg，蛹蟲草硬、脆，有剌手感，外形外觀良好，實測含水量7%以下。結合本發明，可以建立下列標準中藥材蛹蟲草標準1.中藥材蛹蟲草性狀標準本品為細長子座和菌核的復合體。子座細長園柱形，自菌核生出，著生體位不確定，單生或群生，直立或彎曲，長0.5-15CM.直徑0.1-0.5CM，表面橙黃色或橙紅色，少分枝，有細縱皺紋，頭部稍膨大成橢園形，頂端鈍園，長0.5-5CM，直徑0.2-0.7CM。質柔韌，斷面粗糙，邊緣橙黃色或橙紅色；其內黃色至深褐色，氣微腥，味微咸。菌核外形保持蛹形狀，表面被菌絲或節間見菌絲，菌絲黃白至橙黃，斷面粗糙，充滿絲狀菌絲，白色至黃白色；氣微腥，味微咸。2.中藥材蛹蟲草理化指標表l理化指標<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>中藥材蛹蟲草理化指標蟲草素鑒別、含量測定方法(TLCHPLC法)1原理和方法將蟲草素對照晶與蛹蟲草樣品液分別點樣于GF254薄層板，經丙酮一氯仿一正丁醇展開劑展開后，在紫外光反射儀下觀察斑點，根據樣品與對照品的斑點位置，進行樣品中蟲草素定性鑒別。2主要儀器及試劑(略)3對照品的制備精密稱取蟲草素對照4.5mg于10ml量瓶中，甲醇定容至刻度，搖勻。4樣品的制備取適量蛹蟲草，置干燥箱中60C干燥lh，精密稱取0.40g，置索氏提取器中，加乙醚50ml，60'C索氏提取15h，取出內容物常溫下2h揮干乙醚，置100ml圓底燒瓶中，加95%乙醇沸水回流三次(加乙醇量分別為30ml、20ml、20ml)每次回流lh抽濾，合并濾液，回收乙醇至約5ml，轉移至25ml量瓶中，以蒸餾水多次洗滌使內容物完全轉移至量瓶中，蒸餾水定容至刻度，搖勻后置冰箱冷藏12h，冷藏液離心20min(4500r/min)。取上清液4ml蒸去溶劑，用約2ml甲醇溶解。5樣品薄層定性鑒別5.1展開劑丙酮一氯仿一正丁醇—25%氨水(30:30:40;10)。5.2標準晶點樣5ul，樣品點5ul，各點間距2cm，置展開槽中展開到8cm處(約35min)，取出置室溫晾干，置紫外光反射儀下觀察(入=254nm)，結果顯示在與對照品相同Rf值處各樣品均有相同斑點。6蟲草素含量6.1原理和方法采用高效液相色譜法(中國藥典2002年版一部附錄VID)測定蟲草素含量。用十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑甲醇一水(12:88)為流動相檢測波長為260nib。理論板數按蟲草素峰計算應不低于3000。以外標兩點法測定蛹蟲草中蟲草素的含量。6.2主要儀器及試劑(略)6.3標準品溶液的制備對照品溶液的制備精密稱取蟲草素對照品4.5mg，置10ml量瓶中，加流動相定容，搖勻，精密吸取O.l、1.5ml于10ml量瓶中，流動相定容至刻度，搖勻，即得(每ml含蟲草素4.50ug和67.5ug)。6.4供試品溶液的制備取適量蛹蟲草，置干燥箱中60'C干燥lh，精密稱取0.40g，置索氏提取器中，加乙醚50ml，60'C索氏提取1.5h，取出內容物常溫下lh揮去乙醚，置100ml圓底燒瓶中，加90%乙醇沸水回流三次(加乙醇量分別為30ml、20ml、20ml)每次回流lh抽濾，合并濾液，回收乙醇至約5mL，轉移至25ml量瓶中，以蒸餾水多次洗滌使內容物完全轉移至呈瓶中，蒸餾水定容至刻度，搖勻后置冰箱冷藏12h，冷藏液離心10min(4500r/min)。取上清液過0.45um微孔濾膜，即得。6.5領!J定分別精密吸取對照品溶液與供試品各10ml，注入液相色譜儀測定即得。6.6結果計算按標準曲線計算樣品中蟲草素含量公式X(%)=(C*25/W*105)*100%式中X-—樣品中蟲草素的百分含量，單位為毫克每百克(mg/100g);C一外標二點法計算的蟲草素量，單位為微克每毫升(iig/ml):w—樣品的取樣量，單位為克(g)。計算結果保留4位有效數'權利要求1、一種規范化規模栽培用作中藥材的蛹蟲草的方法，其特征是包括下列步驟A采用有機桑蠶蛹，包括自有機蠶桑基地取得蠶繭，然后自專用的蠶蛹收、儲和加工場地獲得蠶蛹，作為中藥材蛹蟲草所用的培養基；B采用適合中藥材蛹蟲草的菌種，是經過選育、凍干保藏、激活、通過菌種檢驗的菌種；C采用規范化培養方法，包括前培養方法、后培養方法；D采用規范化后處理方法，包括采收干燥方法，包裝儲運方法；E采用中藥材蛹蟲草質量保障方法，包括中藥材蛹蟲草質量標準、中藥材蛹蟲草質量檢測方法，即建立Q/320691DJK01-2007標準。2、根據權利要求l所述的規范化栽培用作中藥材的蛹蟲草的方法，其特征在于步驟A中，對蠶繭進行剖繭、檢測蠶蛹重金屬，衡量蠶繭品質.'鉛(以Pb計，干重，下同)不高于lmg/kg、砷(以As計)不高于0.5mg/kg，汞(以Hg計)不高于0.2mg/kg。3、根據權利要求l所述的規范化栽培用作中藥材的蛹蟲草的方法，其特征在于中藥材蛹蟲草所用的培養基采用桑蠶繭繅絲后濕(或經冷凍)的完整蠶蛹；所述繅絲后濕蠶蛹按如下指定工藝加工一級分揀-二級分揀-三級分揀-清洗--漂燙-冷卻-用于生產或速凍-包裝暫存；經過繅絲等加工程序后，該蠶蛹重金屬污染指標仍符合鉛不高于lmg/kg、砷不高于O.5mg/kg，汞不高于O.2mg/kg的標準。4、根據權利要求l所述的規范化栽培用作中藥材的蛹蟲草的方法，其特征在于步驟B中經過選育、凍干保藏、激活等程序所得菌種是否可用于中藥材蛹蟲草生產，取決于最終所得蛹蟲草是否符合Q/320691DJK0l-2007標準。5、根據權利要求l所述的規范化栽培用作中藥材的蛹蟲草的方法，其特征在于步驟C中前培養是將濕蠶蛹或經冷凍的完整蠶蛹裝入透明小容器，進行滅菌、接種，然后置于前培養室至前培養結束，透明的小容器中裝料量以占3/5(V/V)以下，接種時用不超過48小時菌齡的液體菌種進行接種，在100級凈化條件下將液體菌種淋灑在滅過菌的蠶蛹上。接種比10:1至10:3(蠶蛹液體菌種，V/V);前培養溫度控制在1(TC到25"之間，20天至60天；步驟C中后培養容器采用透光塑料筐，且透明塑料筐用食品保鮮膜五面或六面包襯，后培養環境溫度控制在15。C到3(TC之間，日溫差1(TC，還要控制環境濕度為85%、自然散射光或人工光源，照度200至2000勒克司；培養所得中藥材蛹蟲草，符合Q/320691DJK01-2007標準。6、根據權利要求l所述的規范化栽培用作中藥材的蛹蟲草的方法，其特征在于步驟D的干燥采用低溫穿流式熱風干燥，熱風溫度控制在55"C到65"C之間，干燥6至8小時。7、根據權利要求6所述的規范化栽培用作中藥材的蛹蟲草的方法，其特征在于所述低溫穿流式熱風干燥采用簡易低溫穿流式熱風干燥器，包括風機，風機上設置換熱器，換熱器上設置多層料盤，料盤上方設置排氣罩，換熱器熱水管泵上接有一個熱敏頭伸入料盤中的控溫儀。8、根據權利要求l所述的規范化栽培用作中藥材的蛹蟲草的方法，其特征在于步驟D包裝儲運時用塑料袋雙層雙封防潮包裝，避光、5°C以下冷藏。9、根據權利要求l所述的規范化栽培用作中藥材的蛹蟲草的方法，其特征在于在經過步驟D處理之后、或再經兩年以上保存之后，蛹蟲草仍符合Q/320691DJK01-2007標準。10、根據權利要求1所述的規范化栽培用作中藥材的蛹蟲草的方法，其特征在于以蟲草素含量作為檢測中藥材蛹蟲草的指標之一，蟲草素含量不低于1mg/g。全文摘要本發明公開了一種規范化規模栽培用作中藥材的蛹蟲草的方法，包括采用有機桑蠶蛹，包括自有機蠶桑基地取得蠶繭，然后自專用蠶蛹收、儲和加工場地獲得蠶蛹，作為中藥材蛹蟲草所用的培養基；采用經過選育、凍干保藏、激活、通過菌種檢驗的菌種；采用規范化培養方法，包括前培養方法、后培養方法；采用規范化后處理方法，包括采收干燥方法，包裝儲運方法；采用中藥材蛹蟲草質量保障方法，包括中藥材蛹蟲草質量標準、中藥材蛹蟲草質量檢測方法，即建立Q/320691DJK01-2007標準。本發明可以規范化生產用作中藥材的蛹蟲草。文檔編號C12R1/645GK101338278SQ20081002170公開日2009年1月7日申請日期2008年8月7日優先權日2008年8月7日發明者王洪霞,王立臣申請人:王立臣;王洪霞