作為受損傷口愈合組合物的抗連接蛋白多核苷酸的制作方法

專利名稱：：作為受損傷口愈合組合物的抗連接蛋白多核苷酸的制作方法
技術領域：
：本發明涉及間隙連接以及傷口和傷口愈合，具體地涉及不以預期速率愈合的傷口，如延遲愈合傷口、不完全愈合傷口、慢性傷口、以及裂開傷口。
背景技術：
：以下包括可能有益于理解本發明的信息。這并不是承認，本文提供的任何信息是現有技術，或與目前描述的或要求保護的發明有關，或具體或含蓄提及的任何出版物或文獻是現有技術。在人類和其他哺乳動物中，傷口損傷觸發細胞和生化事件的有組織的復雜級聯，其在大多數情況下將導致愈合傷口。理想的愈合傷口是這樣的一種愈合傷口，其可以在細胞、組織、器官、和生物體水平恢復正常解剖結構、功能、以及外觀。傷口愈合，不管是由創傷、微生物還是異物(或雜質，foreignmaterials)所引起的，其借助于復雜過程來進行，該復雜過程涵蓋許多重疊階段，包括發炎、上皮形成、血管生成以及基質沉積。通常，這些過程導致成熟的傷口和一定程度的瘢痕形成。雖然炎癥和修復大多數沿著規定歷程發生，但過程的敏感性依賴于各種傷口愈合調節因子的平衡，包括例如，調節細胞因子和生長因子的復雜網絡。間隙連接是促進直接的細胞間通信的細胞膜結構。間隙連接通道由兩個連接子(半通道)形成，每個連接子由6個連接蛋白亞單位組成。每個六聚體連接子停靠于在相對膜中的連接子以形成單間隙連接。間隙連接通道被報道為存在于整個體內。組織如角膜上皮，例如，具有6至8個細胞層，而在不同層中表現不同的間隙連接通道，其中連接蛋白43在基底層中而連接蛋白26在基底至中間翼細胞層(wingcelllayer)中。通常，連接蛋白是通常按照它們的分子量命名或在系統發育的基礎上分為《、0、以及Y亞類的蛋白質家族。已鑒定了至少20種人和19種小鼠同種型。不同的組織和細胞類型被報道為具有連接蛋白表達的特征模式并且組織如角膜已表明在損傷或移植以后可以改變連接蛋白表達模式(Quietal.(2003)CurrentBiology,131967-1703granderetal.(2004)，J.InvestDermatol.122:1310-20)。已經報道了，異常的連接蛋白功能可能與某些疾病狀態(例如心臟病)有關(A.C.deCarvalho,etal.(1994)JCardiovascElectrophysiol5:686)。在某些連接蛋白中，通過加入外源劑(exogenousagent)可以誘導周轉和運輸性能的改變，其中外源劑可以影響間隙連接細胞間通信的水平(Darrowetal.(1995)CircRes76381；Linetal.(2001)JCellBiol154(4):815)。還報道了反義技術已用于調節與病毒、真菌和代謝性疾病有關的基因的表達。參見例如，美國專利第5，166，195號(HIV的寡核苷酸抑制劑(oligonucleotideinhibitorsofHIV))、美國專利第5，004，810號(低聚物，用于雜交于單純抱疫病毒Vmw65mRNA禾口ffll制復制(oligomersforhybridizingtoherpessimplexvirusVmw65mRNAandinhibitingreplication))。還參見授權給Becker禾口Green的美國專利第7,098，190號(包含連接蛋白的反義核苷酸的制劑(formulationscomprisingantisensenucleotidestoconnexins))。還已經報道了間隙連接和半通道的肽抑制劑。參見例如，Berthoudetal.(2000)AmJ.Physiol.LungCellMol.Physiol.279:L619-L622；Evans,W.H.andBoitano,S.Biochem.Soc.Trans.29:606_612,以及DeVrieseA.S.,etal.(2001)KidneyInt.61:177-185。還參見GreenandBecker，W02006/134494(“抗連接蛋白化合物禾口應用方法(Anti-connexincompoundsandmethodsofuse)，，)。雖然在理解構成傷口愈合過程基礎的原理方面有進展，但在用于傷口護理，包括不以預期速率愈合的傷口，如延遲愈合的傷口、不完全愈合傷口、以及慢性傷口的適宜的治療選擇方面仍然存在顯著的未滿足的需要。本文描述了并要求保護這樣的治療組合物以及治療。
發明內容本文描述和要求保護的發明具有許多特性和實施方式，包括但不限于在本
發明內容部分列出的或描述的或提及的那些。本文描述的并要求保護的發明不限于本
發明內容中限定的特點或實施方式或者被本
發明內容中限定的特點或實施方式限制，使用這些特點和實施方式僅僅是為了說明的目的而非限制的目的。本發明通常涉及包括例如連接蛋白反義多核苷酸的抗連接蛋白多核苷酸、以及組合物和方法在用于治療不以預期速率愈合的傷口，如延遲愈合的傷口、不完全愈合傷口、以及慢性傷口中的應用。通過使用一種或多種連接蛋白反義多核苷酸，本發明用來提高和改善不以預期速率愈合的傷口如延遲愈合的傷口、不完全愈合傷口、以及慢性傷口的愈合。它們還涉及與敷料、繃帶、基質以及覆蓋物組合來使用抗連接蛋白多核苷酸。在一個方面，本發明包括一種合成或天然存在的傷口愈合基質，其包含抗連接蛋白多核苷酸。在某些實施方式中，抗連接蛋白多核苷酸是抗連接蛋白43多核苷酸，例如，抗連接蛋白43多核苷酸。優選的抗連接蛋白多核苷酸包括抗連接蛋白寡脫氧核苷酸，如抗連接蛋白43寡脫氧核苷酸。它們還涉及在重復應用(例如，每周一次)中單獨或與敷料、繃帶、基質以及覆蓋物組合來使用抗連接蛋白多核苷酸直到愈合完全或如達到所期望的。描述和要求保護本發明的組合物和方法，其采用包括連接蛋白反義多核苷酸的抗連接蛋白多核苷酸。在一個方面，本發明提供了一種藥物組合物，該藥物組合物包含一種或多種連接蛋白反義多核苷酸。優選地，該藥物組合物進一步包含藥用載體、稀釋劑或賦形劑。例如，本發明包括藥物組合物，其包含(a)治療有效量的藥用連接蛋白反義多核苷酸以及(b)藥用載體或稀釋劑。在一個方面，本發明包括藥物組合物，該藥物組合物包括局部遞送形式和制劑(劑型，formulations)，其包含藥用載體和治療有效量的抗連接蛋白多核苷酸，優選連接蛋白反義多核苷酸，并且最優選連接蛋白43反義多核苷酸。連接蛋白反義多核苷酸的實例包括抗連接蛋白寡脫氧核苷酸(ODN)，其包括反義(包括修飾和未修飾的主鏈反義(backboneantisense)；例如，結合于連接蛋白mRNA的DNA反義多核苷酸)、RNAi、以及siRNA多核苷酸。適宜的連接蛋白反義多核苷酸包括例如，相對于連接蛋白43(Cx43)、連接蛋白26(Cx26)、連接蛋白37(Cx37)、連接蛋白30(Cx30)、連接蛋白31.l(Cx31.1)以及連接蛋白32(Cx32)的反義0DN。在某些實施方式中，適合的組合物包括組合的多種連接蛋白反義多核苷酸，其包括例如，靶向Cx43、26、30、以及31.1的多核苷酸。優選的連接蛋白反義多核苷酸靶向連接蛋白43。因此，在另一個方面，本發明提供了一種制劑，其包含相對于連接蛋白的至少一種連接蛋白反義多核苷酸以及藥用載體或媒介物(vehicle)。在一種優選的形式中，該制劑包含僅相對于一種連接蛋白(cormexinprotein)的多核苷酸。最優選地，這種連接蛋白是連接蛋白43。可替換地，該制劑包含相對于多于一種的連接蛋白的寡脫氧核苷酸。本發明包括一種制劑，該制劑包含可有效促進受治療者傷口愈合的量的藥用抗連接蛋白多核苷酸，例如，連接蛋白反義多核苷酸，其中受治療者具有慢性傷口或特征為延遲愈合的傷口、或不以預期速率愈合的其他傷口。這樣的制劑包括，例如，局部遞送形式和制劑(或劑型，formulations)。優選的抗連接蛋白多核苷酸和連接蛋白反義多核苷酸是抗連接蛋白43多核苷酸和連接蛋白43反義多核苷酸。優選地，寡脫氧核苷酸導向(directto)的連接蛋白之一是連接蛋白43。寡脫氧核苷酸導向的其他連接蛋白包括連接蛋白26、連接蛋白31.1以及連接蛋白32。適宜地，對于連接蛋白43的寡脫氧核苷酸選自GTAATTGCGGCAAGAAGAATTGTTTCTGTC(SEQ.ID.NO1)；GTAATTGCGGCAGGAGGAATTGTTTCTGTC(SEQ.ID.NO:2)；GGCAAGAGACACCAAAGACACTACCAGCAT(SEQ.ID.NO:3)，與SEQ.ID.NO:1、2、或3具有至少約70%的同源性的多核苷酸或在中等至高度嚴格的條件下雜交于連接蛋白43mRNA的多核苷酸。適宜地，對于連接蛋白26的寡脫氧核苷酸是TCCTGAGCAATACCTAACGAACAAATA(SEQ.ID.NO:4)，與SEQ.ID.NO4具有至少約70%的同源性的多核苷酸；或在中等至高度嚴格條件下雜交于連接蛋白26mRNA的多核苷酸。適宜地，對于連接蛋白31.1的寡脫氧核苷酸是:CGTCCGAGCCCAGAAAGATGAGGTC(SEQ.ID.NO:9)，與SEQ.ID.NO:9具有至少約70%的同源性的多核苷酸；或在中等至高度嚴格條件下雜交于連接蛋白31.lmRNA的多核苷酸。適宜地，對于連接蛋白32的寡脫氧核苷酸是TTTCTTTTCTATGTGCTGTTGGTGA(SEQ.ID.NO:12)，與SEQ.ID.NO12具有至少約70%的同源性的多核苷酸；或在中等至高度嚴格條件下雜交于連接蛋白32mRNA的多核苷酸。根據本發明的方法可用的其他連接蛋白反義多核苷酸序列包括5'CATCTCCTTGGTGCTCAACC3'(連接蛋白37)(SEQIDN05)5'CTGAAGTCGACTTGGCTTGG3'(連接蛋白37)(SEQIDN06)5'CTCAGATAGTGGCCAGAATGC3‘(連接蛋白30)(SEQIDN0:7)5'TTGTCCAGGTGACTCCAAGG3'(連接蛋白30)(SEQIDN08)5'AGAGGCGCACGTGAGACAC3'(連接蛋白31.1)(SEQIDN010)5'TGAAGACAATGAAGATGTT3'(連接蛋白31.1)(SEQIDN011)優選局部給予反義多核苷酉1(在待治療部位和/或在待治療部位周圍)使反義多核苷酸與藥用載體、媒介物或稀釋劑組合以提供藥物組合物。適合的藥用載體或媒介物包括常用于局部給予的那些中的任意一種。局部制劑可以為，例如，乳膏劑、軟膏劑、凝膠劑、乳劑、洗劑、噴霧劑、泡沫或涂劑的形式。本發明的制劑還可以浸漬敷料的形式存在。優選地，藥用載體或媒介物是凝膠，適當地為非離子型聚氧化乙烯-聚氧化丙烯共聚物凝膠，例如，Pluronic凝膠，優選PluronicF_127(BASFCorp.)。該凝膠在低溫下可以作為液體使用，但在生理溫度下快速凝結，其可以有助于將抗連接蛋白寡核苷酸成分的釋放限制于施加部位或緊靠該部位。其中抗連接蛋白寡核苷酸隨時間被釋放的緩釋凝膠劑優選用于局部施加。因此，可以配制藥物組合物以提供抗連接蛋白多核苷酸例如反義多核苷酸的持續釋放。優選的抗連接蛋白多核苷酸和連接蛋白反義多核苷酸是抗連接蛋白43多核苷酸和連接蛋白43反義多核苷酸。在另一個方面，本發明包括用于將治療有效量的一種或多種藥用連接蛋白反義多核苷酸給予受治療者的方法，其中一種或多種藥用連接蛋白反義多核苷酸配制在延遲釋放配制物、緩釋配制物、延長釋放配制物、控釋配制物、和/或重復作用配制物中，并且其中受治療者患有全部或部分特征在于延遲或不完全傷口愈合的傷口、或不以預期速率愈合的其他傷口。這樣的制劑特別有利于不以預期速率愈合的傷口，如慢性傷口。在某些其他方面，本發明還涉及應用這樣的組合物來治療受治療者的方法，其中受治療者患有與不以預期速率愈合的傷口如延遲愈合傷口、不完全愈合傷口、或慢性傷口有關的各種疾病、障礙和病癥。在又一方面，本發明包括用于治療受治療者的方法，其中受治療者患有或懷疑患有全部或部分特征在于慢性傷口或延遲或不完全傷口愈合、或不以預期速率愈合的其他傷口的任何疾病、障礙和/或病癥。這樣的組合物包括，例如，局部遞送形式和制劑。優選的抗連接蛋白多核苷酸和連接蛋白反義多核苷酸是抗連接蛋白43多核苷酸和連接蛋白43反義多核苷酸。在另一方面，本發明包括透皮貼劑、敷料、墊(或護墊，pads)、包裹物、基質以及繃帶，其能夠附著于或以其他方式結合于受治療者的皮膚，并且所述制品能夠遞送治療有效量的一種或多種藥用抗連接蛋白多核苷酸，例如，連接蛋白反義多核苷酸。本發明包括包含治療有效量的一種或多種藥用抗連接蛋白多核苷酸例如連接蛋白反義多核苷酸的裝置，例如，封裝藥物貯器(reservoir)的速率控制膜和整體基質裝置(monolithicmatrixdevice)0這些裝置可以用于治療需要其的受治療者，如本文所披露的。適當地，提供傷口敷料或基質，其包括固體基質(或基層，substrate)的形式，其中抗連接蛋白多核苷酸，例如，連接蛋白反義多核苷酸，分散在固體基質上或固體基質中。在一種實施方式中，與傷口敷料或傷口愈合促進基質組合提供了本發明的藥物產品。優選的抗連接蛋白多核苷酸和連接蛋白反義多核苷酸是抗連接蛋白43多核苷酸和連接蛋白43反義多核苷酸。在另一個方面，本發明提供了一種在具有延遲愈合傷口或慢性傷口的患者中促進傷口愈合的方法，該方法包括以下步驟將如本文所定義的制劑以在所述傷口部位和緊鄰所述傷口部位可有效地負調節(或下調)連接蛋白表達的量給予所述傷口。重復施加(或應用，applications)包括在本發明內。連接蛋白43的負調節是優選的。本發明的一個方面涉及一種治療具有延遲愈合或慢性傷口、或不以預期速率愈合的其他傷口的受治療者的方法，該方法包括給予有效量的抗連接蛋白多核苷酸，例如，抗連接蛋白多核苷酸。適合的抗連接蛋白多核苷酸可以選自由連接蛋白反義多核苷酸(例如，結合于連接蛋白mRNA的DNA反義多核苷酸)、RNAi多核苷酸、以及siRNA多核苷酸構成的組。優選的抗連接蛋白多核苷酸可以阻止或抑制連接蛋白43的表達。重復施加包括在本發明內。在一個方面，本發明提供了一種對具有延遲或不完全愈合傷口或慢性傷口、或不以預期速率愈合的其他傷口的受治療者進行治療的方法，該方法包括將有效量的連接蛋白43反義多核苷酸持續給予傷口。適宜地，給予或遞送反義多核苷酸至少約0.5小時、約1-2小時、約2-4小時、約4-6小時、或約6-8小時，但可以給予更長時間，例如，長達24小時，或更長時間。1-2小時、2-3小時、以及4-8小時施加或遞送目前是優選的。根據一種實施方式，受治療者是糖尿病患者。在其他實施方式中，患者(病人)患有糖尿病性潰瘍、糖尿病性足潰瘍、血管炎性潰瘍、靜脈性潰瘍、靜脈淤滯性潰瘍(venousstasisulcer)、動脈性潰瘍、壓力(或壓迫)性潰瘍、褥瘡性潰瘍、感染性潰瘍、創傷引發性潰瘍、燒傷性潰瘍、與壞疽性膿皮病有關的潰瘍、或混合性潰瘍或多種潰瘍。重復施加包括在本發明內。優選的是重復施加直到看到傷口閉合正進行，接著在傷口愈合再次變得停頓或延遲的情況下重復施加一次(或施加多次)。根據一個可替換的方面，本發明提供了一種對具有延遲或不完全愈合傷口或慢性傷口、或不以預期速率愈合的其他傷口的受治療者進行治療的方法，該方法包括將連接蛋白43反義多核苷酸持續給予傷口(或傷口區域內或周圍的區域)，從而在一段持續時間內負調節(下調)連接蛋白43的表達。適宜地，連接蛋白43表達被負調節至少約0.5小時、約1-2小時、約2-4小時、約4-6小時、或約6-8小時，但可以給予更長時間，例如，長達24小時，或更長時間。0.5小時、1-2小時、以及4-8小時持續給予目前是優選的。適合的受治療者包括糖尿病受治療者。在其他實施方式中，患者患有糖尿病性潰瘍、糖尿病性足潰瘍、血管炎性潰瘍、靜脈性潰瘍、靜脈淤滯性潰瘍、動脈性潰瘍、壓力(或壓迫)性潰瘍、褥瘡性潰瘍、感染性潰瘍、創傷引發性潰瘍、燒傷性潰瘍、與壞疽性膿皮病有關的潰瘍、或混合性潰瘍或多種潰瘍。重復施加包括在本發明內。優選的是重復施加直至看到傷口閉合正進行，接著在傷口愈合再次變得停頓或延遲的情況下重復施加一次(或施加多次)。根據另一方面，提供了將可在一段持續時間內有效負調節連接蛋白43表達的量的連接蛋白43反義多核苷酸持續給予傷口。另外根據該方面，可以促進不以預期速率愈合的傷口包括延遲愈合傷口、受損愈合傷口、以及慢性傷口的傷口愈合。在一種實施方式中，傷口是糖尿病性潰瘍、糖尿病性足潰瘍、血管炎性潰瘍、靜脈性潰瘍、靜脈淤滯性潰瘍、動脈性潰瘍、壓力(壓迫)性潰瘍、褥瘡性潰瘍、感染性潰瘍、創傷引發性潰瘍、燒傷性潰瘍、與壞疽性膿皮病有關的潰瘍、或混合性潰瘍或多種潰瘍。重復施加包括在本發明內。優選的是重復施加直至看到傷口閉合正進行，接著在傷口愈合再次變得停頓或延遲的情況下重復施加一次(或施加多次)。根據本發明的其他方面，可以促進傷口再上皮化(再上皮形成，re-epithelialization)和/或肉芽組織的形成。在另外的方面，本發明提供了一種在具有不以預期速率愈合的傷口(包括延遲愈合傷口或不完全愈合傷口或慢性傷口)的受治療者中促進傷口愈合的方法，該方法包括持續給予連接蛋白43反義多核苷酸和連接蛋白31.1反義多核苷酸。重復施加包括在本發明內。本發明的一個可替換方面涉及一種促進皮膚傷口的再上皮化的方法，該方法包括將可有效促進再上皮化的量的抗連接蛋白多核苷酸，例如，抗連接蛋白多核苷酸給予患有不以預期速率愈合的傷口(包括，例如，延遲愈合或不完全愈合傷口或慢性傷口)的受治療者。抗連接蛋白多核苷酸可以靶向選自連接蛋白26、連接蛋白30、連接蛋白31.1以及連接蛋白43的連接蛋白。適合的多核苷酸可以選自修飾或未修飾的主鏈連接蛋白反義多核苷酸(例如，結合于連接蛋白mRNA的DNA反義多核苷酸)、RNAi多核苷酸以及siRNA多核苷酸。重復施加包括在本發明內。連接蛋白43目前是優選的靶標。在另外的方面，本發明提供了一種在具有不以預期速率愈合的傷口(包括，例如，延遲愈合傷口或不完全愈合傷口或慢性傷口)的受治療者中促進傷口愈合的方法，該方法包括持續給予可有效調節上皮基底細胞分裂和生長的抗連接蛋白多核苷酸，例如，連接蛋白反義多核苷酸；以及可有效調節外層角蛋白分泌的抗連接蛋白多核苷酸，例如，連接蛋白反義多核苷酸。在一種實施方式中，可有效調節上皮基底細胞分裂或生長的抗連接蛋白多核苷酸，例如，連接蛋白反義多核苷酸是連接蛋白26反義多核苷酸或連接蛋白43反義多核苷酸或它們的混合物。根據一種可替換的實施方式，被給予以調節外層角質化的抗連接蛋白多核苷酸(例如，連接蛋白反義多核苷酸)是連接蛋白31.1反義多核苷酸。重復施加包括在本發明內。在另一種實施方式中，慢性傷口是慢性皮膚傷口并且將抗連接蛋白多核苷酸給予所述受治療者的皮膚或與皮膚有關的組織有效的一段時間。適合于治療的慢性皮膚傷口可以，例如，選自壓力(壓迫)性潰瘍、褥瘡性潰瘍、糖尿病性潰瘍、糖尿病性足潰瘍、靜脈性潰瘍、靜脈淤滯性潰瘍、動脈性潰瘍、血管炎性潰瘍、感染性潰瘍、創傷引發性潰瘍、燒傷性潰瘍、與壞疽性膿皮病有關的潰瘍、以及混合性潰瘍構成的組。慢性傷口可以是動脈性潰瘍，其包括由完全或部分動脈阻塞引起的潰瘍。慢性傷口可以是靜脈性潰瘍或靜脈淤滯性潰瘍，其包括由靜脈瓣功能障礙以及關聯的血管疾病引起的潰瘍。慢性傷口可以是創傷引發性潰瘍。重復施加包括在本發明內。根據另一個方面，本發明提供了一種在具有不以預期速率愈合的傷口(包括延遲愈合傷口、不完全愈合傷口、以及慢性傷口)的受治療者中提高傷口愈合或閉合速率的方法，該方法包括給予受治療者有效量的抗連接蛋白多核苷酸。適合的多核苷酸選自連接蛋白反義多核苷酸(例如，結合于連接蛋白mRNA的DNA反義多核苷酸)、RNA多核苷酸以及siRNA多核苷酸。適合的連接蛋白反義多核苷酸是連接蛋白43多核苷酸。特別適合的多核苷酸具有約18至約32個核苷酸。重復施加包括在本發明內。一種目前優選的寡核苷酸是SEQ.ID.NO1。本發明包括在藥物或劑型制備中使用治療有效量的一種或多種藥用抗連接蛋白多核苷酸(包括連接蛋白反義多核苷酸)的方法。這樣的藥物、制劑和劑型包括，例如，局部遞送形式和制劑。這樣的藥物包括那些用于治療如本文所披露的受治療者的藥物。優選的抗連接蛋白多核苷酸和連接蛋白反義多核苷酸是抗連接蛋白43多核苷酸和連接蛋白43反義多核苷酸。優選地，藥物、制劑或劑型是泡沫、乳膏劑、噴霧劑或凝膠劑。在另一個方面，本發明包括一種制品(articleofmanufacture)，該制品包括容器，其包含治療有效量的一種或多種藥用抗連接蛋白多核苷酸，例如，連接蛋白反義多核苷酸，以及使用說明書。這樣的說明書可以包括關于用于治療患有慢性傷口或特征在于延遲愈合的傷口的受治療者的說明書。說明書可以包括針對不以預期速率愈合的傷口(如延遲愈合傷口、不完全愈合傷口以及慢性傷口)的使用說明書。優選的抗連接蛋白多核苷酸和連接蛋白反義多核苷酸是抗連接蛋白43多核苷酸和連接蛋白43反義多核苷酸。本發明包括一種制品，該制品包括包裝材料，其包含一種或多種劑型，該劑型包含一種或多種藥用抗連接蛋白多核苷酸，例如，連接蛋白反義多核苷酸，其中包裝材料具有標簽，其說明該劑型可以用于這樣的受治療者，其患有或懷疑患有或易患本文描述或提及的任何疾病、障礙和/或病癥，包括全部或部分特征在于受損或延遲傷口愈合或慢性傷口、或不以預期速率愈合的其他傷口的疾病、障礙和/或病癥。這樣的劑型包括，例如，局部遞送形式和劑型制劑。優選的抗連接蛋白多核苷酸和連接蛋白反義多核苷酸是抗連接蛋白43多核苷酸和連接蛋白43反義多核苷酸。在某個其他方面，本發明提供了一種包裝，該包裝包括抗連接蛋白多核苷酸，例如，連接蛋白反義多核苷酸，以及用于促進(例如，減少愈合時間、使傷口結果更好)延遲或不完全愈合傷口或慢性傷口的傷口愈合的使用說明書。在本發明的所有方面，抗連接蛋白多核苷酸優選是抗連接蛋白43多核苷酸，連接蛋白反義多核苷酸優選是連接蛋白43反義多核苷酸，并且連接蛋白反義寡脫氧核苷酸優選是連接蛋白43寡脫氧核苷酸。以下提供了本發明的這些和其他方面，其并不限于在本
發明內容中的信息或受本
發明內容中的信息所限制。圖1A至圖1D示出了在真皮成纖維細胞、毛囊、血管以及附屬物(appendage)中的連接蛋白免疫染色。圖1A示出了在誘導糖尿病后兩周，在正常(空心柱)和糖尿病性皮膚(實心柱)表皮和真皮中連接蛋白43的染色以及表皮中連接蛋白26的染色。圖1B示出了在STZ誘導糖尿病以后8周對連接蛋白表達的影響。圖1C示出了在8周在對照(C)和糖尿病患者(D)中的連接蛋白免疫染色，其中箭頭表示表皮和真皮之間的邊界。圖1D示出了在非糖尿病性(空心柱)和糖尿病性(實心柱)表皮和真皮中在5分鐘內間隙連接持久染料通過組織的染料轉移的距離的定量。圖2A至圖2D示出了通過在受傷后測量連接蛋白染色所獲得的再上皮化率以及連接蛋白43和連接蛋白26蛋白水平的反應。圖2A示出了其中量化了在角質細胞中的連接蛋白染色的區域傷口邊緣(WE)、離開500iim的鄰近區(AD)以及前沿(leadingedge，LE)。在受傷后一天和兩天，對在WE和AD處的連接蛋白染色進行量化。在5天后，對LE角質細胞進行成像。圖2B示出了在對照(C)和糖尿病性(D)皮膚中在受傷后的第1、2以及5天的再上皮化率。圖2C示出了在對照(空心柱)和糖尿病性(實心柱)動物中，在受傷后的第1、2以及5天，在TO、AD以及LE中的連接蛋白43染色。圖2D示出了在對照(空心柱)和糖尿病性(實心柱)動物中，在受傷后的第1、2以及5天，在TO、AD以及LE區中的連接蛋白26染色。圖3a至圖3f以及圖3a’至圖3f’示出了在對照和糖尿病動物中，在受傷后第1、2以及5天的連接蛋白染色。圖3a、圖3c和圖3e(對照)以及圖3a’、圖3c’和3e，(糖尿病患者)示出了受傷后第1天(圖3a和圖3a’)、第2天(圖3c和圖3c’)以及第5天11(圖3e和圖3e，)的連接蛋白43染色。圖3b、圖3d和圖3f(對照)以及圖3b，、3d，和圖3f'(糖尿病患者)示出了在受傷后的第1天(圖3b和圖3b’)、第2天(圖3d和圖3d’)以及第5天(圖3f和圖3f’)的連接蛋白26染色。圖4A至圖4C示出了施加連接蛋白43反義寡脫氧核苷酸組合物對連接蛋白43表達和傷口愈合的影響。圖4A(正義對照)和圖4B(連接蛋白43反義)示出了在糖尿病性WE角質細胞中連接蛋白43的表達。圖4C示出了在對照(C)和糖尿病性(D)傷口中，在受傷后的第1、2以及5天的再上皮化百分比，其中用正義(“S”)和連接蛋白43反義(“as”)多核苷酸加以治療。具體實施例方式不以預期速率愈合的傷口(包括慢愈合傷口、延遲愈合傷口、不完全愈合傷口、裂開傷口、以及慢性傷口)經常導致感染并可能導致截肢或死亡。通過間隙連接的細胞間通信在傷口愈合中起關鍵作用。已發現，使用某些化合物(其包括本文中所描述或提及的那些化合物)可以阻斷、抑制、或改變細胞通信，其促進不以預期速率愈合的傷口(包括慢愈合傷口、延遲愈合傷口、不完全愈合傷口、裂開傷口、以及慢性傷口)的閉合和愈合。對于所有應用，連接蛋白43間隙連接調節劑是優選的。如在本文中所使用的，“障礙”是任何將受益于促進傷口愈合和/或減少瘢痕形成的藥劑(agent)的障礙、疾病、或病癥。例如，包括與神經病、缺血病、以及微血管病病理學有關的傷口相關性異常；對骨區域[尾骨(骶骨)、髖關節(轉子的)、臀(坐骨的)、或足跟]的壓力(壓迫)；再灌注損傷；以及與瓣膜反流病因和相關病癥有關的病癥。如在本文中所使用的，“受治療者”是指任何哺乳動物，包括人類、家養和農場動物(或家畜)、以及動物園動物、體育動物、或寵物，如狗、馬、貓、羊、豬、牛等。本文中優選的哺乳動物是人，包括成人、兒童、以及老人。如在本文中所使用的，“預防”是指預防(全部或部分地)、或改善或控制。如在本文中所使用的，關于本發明的化合物或組合物的“治療有效量”是指足以誘導所期望的生物、藥物、或治療結果的量。所述結果可以是疾病或障礙或病癥的征兆、癥狀、或原因的減輕，或生物系統的任何其他期望的改變。在本發明中，結果將涉及傷口愈合，包括傷口愈合率和傷口的閉合(全部或部分)的促進和/或改善。其他益處包括腫脹、炎癥和/或瘢痕形成的全部或部分減小。如在本文中所使用的，術語“治療”是指治療性治療和預防性(prophylacticorpreventative)措施。如在本文中所使用的，“同時”用來指同時給予一種或多種抗連接蛋白多核苷酸，例如，反義多核苷酸，而術語“組合(incombination)”用來指在一段時間范圍內“順序地”給予它們(如果不是同時或以物理組合方式)，使得它們均可有效發揮治療作用。因此，“順序地”給予可以允許在給予其他制劑以后在數分鐘(例如，1、2、3、4、5、10、15、20、25、30分鐘)或大約數小時、數天、數周或數月內給予一種藥劑(agent)，只要一種或多種抗連接蛋白多核苷酸同時以有效量存在。給予成分之間的時間延遲將根據成分的確切性質、成分之間的相互作用、以及它們相應的半衰期而變化。如在本文中所使用的，“抗連接蛋白多核苷酸”減少或抑制連接蛋白mRNA和/或蛋白質的表達。抗連接蛋白多核苷酸包括但不限于反義化合物如反義多核苷酸、其他多核苷酸(如具有siRNA或核酶功能的多核苷酸)。抗連接蛋白多核苷酸的適合實例包括連接蛋白的反義多核苷酸。因此，適合的抗連接蛋白多核苷酸包括，例如，反義多核苷酸(例如，連接蛋白43反義多核苷酸)，其在所選組織、細胞、以及受治療者中調節連接蛋白和間隙連接的表達或活性。術語“傷口敷料”是指用于局部施加到傷口的敷料并且排除適合于系統給予的組合物。例如，可以將一種或多種抗連接蛋白多核苷酸(如連接蛋白反義多核苷酸)分散在傷口接觸材料如編織或非編織紡織材料的固體片材之中或之上，或分散在泡沫如聚氨酯泡沫層中，或分散在水凝膠如聚氨酯水凝膠、聚丙烯酸酯水凝膠、明膠、羧甲基纖維素、果膠、藻酸鹽、和/或透明質酸水凝膠中，例如分散在凝膠或軟膏中。在某些實施方式中，一種或多種抗連接蛋白多核苷酸被分散在生物可降解的片材(其提供活性組分持續釋放到傷口中)之中或之上，例如凍干膠原、凍干膠原/藻酸鹽混合物(可獲自Johnson&JohnsonMedicalLimited，注冊商標為FIBRAC0L)或凍干膠原/氧化再生纖維素(可獲自Johnson&JohnsonMedicalLimited，注冊商標為PR0M0GRAN)片材。如在本文中所使用的，“傷口促進基質，，包括例如，合成或天然存在的基質如膠原、非細胞基質、交聯生物支架分子、基于組織的生物工程結構框架、生物制備的生物假體、以及其他植入結構如例如，適合于細胞浸潤和增殖的血管移植物，其可用于促進傷口愈合。另外適合的生物基質材料可以包括化學修飾的膠原組織以降低抗原性和免疫原性。其他適合的實例包括用于傷口敷料的膠原片材、無抗原或抗原減少的非細胞基質(WilsonGJetal.(1990)TransAmSocArtifIntern36:340-343)或其他生物基質，其已被設計成降低對異種移植材料的抗原反應。可用于促進傷口愈合的其他基質可以包括例如，經加工的牛心包蛋白，其包括不溶性膠原和彈性蛋白(CourtmanDffetal.(1994)JBiomedMaterRes28655-666)和其他非細胞組織，其可以用于為宿主細胞遷移提供自然微環境以加速組織再生(MaloneJMetal.(1984)JVascSurg1181-91)。本發明設想合成或天然基質，其包含本文所描述的一種或多種抗連接蛋白多肽，包括抗連接蛋白43多肽。連接蛋白43反義寡脫氧核苷酸是優選的。如在本文中所使用的，術語“傷口”包括對任何組織的損傷，其包括例如，延遲或難以愈合傷口、以及慢性傷口。傷口的實例可以包括開放性和閉合性傷口。術語“傷口”還可以包括例如對皮膚和皮下組織的損傷，其是以不同方式引發的(例如，起因于長期臥床休息的褥瘡以及由創傷引起的傷口)并具有不同特性。取決于傷口的深度，傷口可歸類于四個等級之一:i)等級I(I級)傷口，限于上皮；ii)等級II傷口，延伸到真皮；iii)等級III傷口，延伸到皮下組織；以及iv)等級IV(或全厚度傷口，full-thicknesswounds)傷口，其中骨頭外露(例如，骨壓點如更大轉子或骶骨)。術語“部分厚度傷口”是指包括等級I-III的傷口。部分厚度傷口的實例包括褥瘡、靜脈淤滯性潰瘍、以及糖尿病性潰瘍。本發明設想治療不以預期速率愈合類型的所有傷口，其包括延遲愈合傷口、不完全愈合傷口、以及慢性傷口。“不以預期速率愈合的傷口，，是指對任何組織的損傷，其包括延遲或難以愈合傷口(包括延遲或不完全愈合傷口)、以及慢性傷口。不以預期速率愈合的傷口的實例包括潰瘍，如糖尿病性潰瘍、糖尿病性足潰瘍、血管炎性潰瘍(脈管炎性潰瘍，vasculticulcers)、動脈性潰瘍、靜脈性潰瘍、靜脈淤滯性潰瘍、壓力性潰瘍、褥瘡性潰瘍、感染性潰瘍、創傷引發性潰瘍、燒傷性潰瘍、與壞疽性膿皮病有關的潰瘍、以及混合性潰瘍。不以預期速率愈合的其他傷口包括裂開傷口。如在本文中所使用的，延遲或難以愈合傷口可以包括，例如，這樣的傷口，其至少部分特征在于1)長期炎癥階段，2)緩慢形成細胞外基質，和/或3)降低的上皮形成或閉合率。術語“慢性傷口，，通常是指沒有愈合的傷口。在三個月內還未愈合的傷口例如被認為是慢性的。慢性傷口包括靜脈性潰瘍、靜脈淤滯性潰瘍、動脈性潰瘍、壓力性潰瘍、糖尿病性潰瘍、糖尿病性足潰瘍、血管炎性潰瘍、褥瘡性潰瘍、燒傷性潰瘍、創傷引發性潰瘍、感染性潰瘍、混合性潰瘍、以及壞疽性膿皮病。慢性傷口可以是動脈性潰瘍，其包括起因于完全或部分動脈阻塞的潰瘍。慢性傷口可以是靜脈性或靜脈淤滯性潰瘍，其包括起因于靜脈瓣功能障礙和有關血管疾病的潰瘍。在某些實施方式中，提供了一種治療慢性傷口的方法，其中慢性傷口的特征在于以下壓力性潰瘍的AHCPR階段中的一個或多個階段1、階段2、階段3、和/或階段4。如在本文中所使用的，慢性傷口可以指，例如，這樣的傷口，其特征至少部分在于以下中的一種或多種(1)傷口炎癥的慢性自保持(或自身延續，self-perpetuating)狀態，⑵不足和缺陷的傷口細胞外基質，⑶不良反應(衰老)的傷口細胞，尤其是成纖維細胞，其限制細胞外基質產生，和/或(4)再上皮化的失敗，部分起因于缺乏必要的細胞外基質編排(matrixorchestration)和缺乏用于遷移的支架。慢性傷口的特征還在于1)長期的炎癥和蛋白水解活性，其導致潰瘍性病變，包括例如，糖尿病性、壓力性(褥瘡性)、靜脈性、以及動脈性潰瘍；2)基質在受影響區域中的逐步沉積，3)更長的修復時間，4)更小傷口收縮，5)更慢的再上皮化，以及6)增加的肉芽組織厚度。示例性的慢性傷口可以包括“壓力性(壓迫性)潰瘍”。基于AHCPR(衛生保健政策與研究署(AgencyforHealthCarePolicyandResearch)，美國衛生與公眾服務部(U.S.DepartmentofHealthandHumanServices))準則，示例性的壓力性潰瘍可分為4個階段。階段I壓力性潰瘍是完好皮膚的明顯的壓力相關改變，與身體上的相鄰或相對區域相比，其指標可以包括以下一種或多種的變化皮膚溫度(溫暖或涼爽)、組織堅稠度(堅實或軟而濕的感覺)和/或感覺(疼痛、瘙癢)。潰瘍在淺色素皮膚中顯示為持續發紅的限定區域，而在較深的膚色中潰瘍可以顯示為持久的紅色、藍色、或紫色色調。階段1潰瘍可以包括完好皮膚的不可褪色的紅斑和皮膚潰瘍的前驅病變。在具有較深膚色的個體中，皮膚變色、溫暖、水腫、硬化、或硬度也可以是階段1潰瘍的指標。階段2潰瘍的特點可以是部分厚度皮膚損失，其涉及表皮、真皮、或兩者。該潰瘍是表面的并且臨床表現為擦傷、水皰、或淺口(或淺凹陷)。階段3潰瘍的特點可以是全厚度皮膚損失，其涉及皮下組織的損傷或壞死，其可以向下延伸到、但不穿過基本筋膜。該潰瘍臨床上表現為存在或不存在相鄰組織破壞的深口(或深凹陷)。階段4潰瘍的特點可以是全厚度皮膚損失，其具有廣泛的破壞、組織壞死、或對肌肉、骨骼、或支撐結構(例如，腱、關節囊)的損傷。在某些實施方式中，提供了一種治療慢性傷口的方法，其中慢性傷口的特征在于壓力性潰瘍的以下AHCPR階段中的一個或多個階段1、階段2、階段3、和/或階段4。示例性的慢性傷口還可以包括“褥瘡性潰瘍”。示例性的褥瘡性潰瘍可以由對骨隆起(bonyprominence)的長期和未緩解壓力(其導致缺血)所引起。該傷口傾向于在不能改變本身的位置以卸下重量的患者中發生，如癱瘓、無意識或嚴重殘疾的人。如由美國衛生與公眾服務部(U.S.DepartmentofHealthandHumanServices)所定義的，主要預防措施包括高危患者的確定；經常評估；以及預防措施如定期改變位置、適當的減壓寢具、防濕層、以及適當的營養狀況。治療選項可以包括例如，減壓、手術和酶促清創、潮濕傷口護理、以及細菌負荷的控制。在某些實施方式中，提供了一種治療慢性傷口的方法，其中慢性傷口的特征在于褥瘡性潰瘍或潰瘍形成，其來自對骨隆起的長期、未緩解的壓力(其導致缺血)。慢性傷口還可以包括“動脈性潰瘍”。慢性動脈性潰瘍通常應理解為伴隨動脈硬化和高血壓心血管疾病的潰瘍。它們是疼痛的、尖銳邊緣的(sharplymarginated)，并且經常存在于側下肢和腳趾。動脈性潰瘍的特點可以是完全或部分動脈阻塞，其可以導致組織壞死和/或潰瘍。動脈性潰瘍的征兆可以包括，例如，四肢無脈；疼痛的潰瘍；小、點狀潰瘍，其通常被很好地限定范圍；涼或冷皮膚；延遲的毛細管返回時間(快速擠壓腳趾末端并釋放，正常的顏色應在約3秒或更短時間內返回到腳趾)；萎縮外觀皮膚(例如，發亮、薄、干)；以及手指和足毛發的損失。在某些實施方式中，提供了一種治療慢性傷口的方法，其中慢性傷口的特點是由完全或部分動脈阻塞引起的動脈性潰瘍或潰瘍形成。示例性的慢性傷口可以包括“靜脈性潰瘍”。示例性的靜脈性潰瘍是最常見類型的影響下肢的潰瘍并且其特征可以在于靜脈瓣功能障礙。正常靜脈具有防止血液回流的瓣膜。當這些瓣膜能力喪失時，靜脈血的回流引起靜脈充血。來自紅細胞的血紅蛋白逃逸并滲漏到血管外腔隙中，引起通常注意到的褐色變色。已表明，靜脈性潰瘍周圍的皮膚的經皮氧壓力被降低，這提示存在阻礙該區域正常血管分布的力。淋巴引流和流動也在這些潰瘍中起作用。靜脈性潰瘍可以出現在內踝附近并且通常與水腫和硬結性下肢結合出現；它可以較淺、不太疼并且可以呈現為從受影響部位的漏液排出。在某些實施方式中，提供了一種治療慢性傷口的方法，其中慢性傷口的特征在于由靜脈瓣功能障礙和有關血管疾病引起的靜脈性潰瘍或潰瘍形成。在某些實施方式中，提供了一種治療慢性傷口的方法，其中慢性傷口的特征在于由完全或部分動脈阻塞引起的動脈性潰瘍或潰瘍形成。示例性的慢性傷口可以包括“靜脈淤滯性潰瘍”。淤滯性潰瘍是與靜脈功能不全有關的病變，并且更通常存在于內踝上，通常具有壓凹性水腫、靜脈曲張、斑點狀色素沉著、紅斑、以及不可觸及的瘀點和紫癜。淤滯性皮炎和潰瘍通常是搔癢而不是疼痛的。示例性的靜脈淤滯性潰瘍的特點可以是下肢的慢性被動性靜脈充血，其導致局部缺氧。這些傷口的一種可能的發病機制包括阻礙氧穿過厚血管周圍纖維蛋白套囊擴散到組織中。另一種機制是，滲漏到血管周圍組織中的大分子捕獲為保持皮膚完整性所需要的生長因子。另外，由于靜脈充血，較大白細胞的流動會減慢，從而阻斷毛細血管，成為激活狀態，并損傷血管內皮，從而傾向于潰瘍形成。在某些實施方式中，提供了一種治療慢性傷口的方法，其中慢性傷口的特征在于由靜脈瓣功能障礙和相關血管疾病引起的靜脈性潰瘍或潰瘍形成。在某些實施方式中，提供了一種治療慢性傷口的方法，其中慢性傷口的特征在于由下肢的慢性被動性靜脈充血和/或形成的局部缺氧引起的靜脈淤滯性潰瘍或潰瘍形成。示例性的慢性傷口可以包括“糖尿病性潰瘍”。糖尿病患者易患潰瘍，包括足部潰瘍，這起因于神經和血管并發癥。周圍神經病變可以引起腳和/或腿部改變的或完全喪失的感覺。患有晚期神經病變的糖尿病患者減弱所有敏捷-遲鈍辨別的能力。在神經病變患者中對足部的任何創口或創傷可能會完全被忽視數天或數周。并不少見的是，當事實上潰瘍已存在相當長的一段時間時，神經病變患者才注意到潰瘍“剛剛出現”。對于神經病變患者，已表明嚴格的血糖控制可以減慢該疾病的進展。由于降低感覺，夏爾科(Charcot)足部畸形還可以發生。在其足部具有“正常”感覺的人具有自動感覺何時太大的壓力正施加于足部區域的能力。一旦確定，我們的身體本能地移動位置以釋放該應力。患有晚期神經病變的患者會減弱這種感覺持續的壓力損害的能力，因而，可以發生組織缺血和壞死，導致例如足底潰瘍。另外，在足骨中的微小骨折，如果未注意且未治療，可以導致外形損傷、慢性腫脹以及另外的骨隆起。微血管疾病是糖尿病患者的重大并發癥之一，其還可以導致潰瘍形成。在某些實施方式中，提供了一種治療慢性傷口的方法，其中慢性傷口的特征在于由糖尿病的神經和血管并發癥引起的糖尿病性足潰瘍和/或潰瘍形成。示例性的慢性傷口可以包括“創傷性潰瘍”。創傷性潰瘍的形成可以起因于對身體的創傷性損傷。這些損傷包括，例如，對動脈、靜脈或淋巴系統的損害；對骨骼的骨結構的改變；組織層表皮、真皮、皮下軟組織、肌肉或骨的損失；對身體部位或器官的損害以及身體部位或器官的損失。在某些實施方式中，提供了一種治療慢性傷口的方法，其中慢性傷口的特征在于與對身體的創傷性損傷有關的潰瘍形成。示例性的慢性傷口可以包括“燒傷性潰瘍”，其包括I度燒傷(即，皮膚的表面的、變紅區域)；II度燒傷(水皰損傷部位，在已除去水皰液以后，其可以自發治愈)；III度燒傷(貫穿整個皮膚的燒傷并且通常需要外科干預用于傷口愈合)；燙傷(可以起因于滾燙的熱水、油脂或散熱器液)；熱燒傷(可以起因于火焰，通常是深度燒傷)；化學燒傷(可以起因于酸和堿，通常是深度燒傷)；電燒傷(房屋周圍的低電壓或工作中的高壓)；爆炸焰(通常是表面損傷)；以及接觸燒傷(通常是深度燒傷并且可以起因于消聲器尾管(mufflertailpipes)、熱熨斗以及爐灶)。在某些實施方式中，提供了一種治療慢性傷口的方法，其中慢性傷口的特征在于與對身體的燒傷性損傷有關的潰瘍形成。示例性的慢性傷口可以包括“血管炎性潰瘍”。血管炎性潰瘍還發生在下肢上并且是疼痛的、尖銳邊緣的病變，其可以具有有關的可觸知的紫癜以及出血性大皰。膠原疾病、敗血癥、以及各種血液疾病(例如，血小板減少癥、異常蛋白血癥)可以是這種嚴重的、急性病癥的原因。示例性的慢性傷口可以包括壞疽性膿皮病。壞疽性膿皮病以小腿的單個或多個非常未成熟潰瘍的形式存在。深紅色至紫色的破壞邊界圍繞化膿性中央缺損。活組織檢查通常不能揭示血管炎。在一半患者中，它伴隨全身性疾病如潰瘍性結腸炎、節段性回腸炎、或白血病。在某些實施方式中，提供了一種治療慢性傷口的方法，其中慢性傷口的特征在于與壞疽性膿皮病有關的潰瘍形成。示例性的慢性傷口可以包括感染性潰瘍。感染性潰瘍在直接接種各種生物體后發生并且可以伴隨重要的區域腺病。實例是分枝桿菌感染、炭疽病、白喉癥、皮炎芽生菌病(blastomyosis)、孢子絲菌病、兔熱病、以及貓抓熱。一期梅毒的生殖器潰瘍通常為非觸痛性的并具有清潔的、堅實的基礎。軟下疳和腹股溝肉芽腫的那些生殖器潰瘍傾向于是粗糙的、骯臟的、以及更加過度(extravagant)的病變。在某些實施方式中，提供了一種治療慢性傷口的方法，其中慢性傷口的特征在于與感染有關的潰瘍形成。如在本文中所使用的，術語“裂開傷口，，是指具有破裂或裂開的開口的傷口，通常是手術傷口。在某些實施方式中，提供了一種治療不以預期速率愈合的傷口的方法，其中傷口的特征在于裂開。抗連接蛋白多核苷酸抗連接蛋白多核苷酸包括連接蛋白反義多核苷酸以及具有功能性可使它們能夠負調節連接蛋白表達(例如，通過負調節mRNA轉錄或翻譯)的多核苷酸。在負調節的情況下，通過在連接蛋白表達被負調節的部位的間隙連接，這將具有減少直接的細胞間通信的效果。適合的抗連接蛋白多核苷酸包括RNAi多核苷酸和SiRNA多核苷酸。反義多核苷酸和其他抗連接蛋白多核苷酸如RNAi、siRNA、以及核酶多核苷酸以及具有修飾和混合主鏈的多核苷酸的合成，是本領域技術人員已知的。參見例如，SteinC.A.andKriegΑ.Μ.(eds),AppliedAntisenseOligonucleotideTechnology,1998(Wiley-Liss)。根據一個方面，連接蛋白表達的負調節可以通常基于利用反義多核苷酸(如DNA或RNA多核苷酸)的反義方法，并且更特別地基于使用反義寡脫氧核苷酸(ODN)。這些多核苷酸(例如，0DN)靶向待負調節的(一種或多種)連接蛋白。通常多核苷酸是單鏈的，但可以是雙鏈的。反義多核苷酸可以抑制連接蛋白的轉錄和/或翻譯。優選地，多核苷酸是來自連接蛋白基因或mRNA的轉錄和/或翻譯的特異性抑制劑，但并不抑制來自其他基因或mRNA的轉錄和/或翻譯。產物可以結合至連接蛋白基因或mRNA，(i)5'至編碼序列、和/或(ii)至編碼序列，和/或(iii)3'至編碼序列。反義多核苷酸相對于連接蛋白mRNA通常是反義的。這樣的多核苷酸可能能夠雜交于連接蛋白mRNA并且因此可能抑制連接蛋白的表達，其中通過干擾連接蛋白mRNA代謝的一個或多個方面，其包括轉錄、mRNA加工、從細胞核的mRNA轉運、翻譯或mRNA降解。反義多核苷酸通常雜交于連接蛋白mRNA以形成雙鏈體，其可以引起mRNA的翻譯和/或去穩定作用的直接抑制。這樣的雙鏈體可能易于被核酸酶降解。反義多核苷酸可以雜交于所有或部分的連接蛋白mRNA。通常反義多核苷酸雜交于連接蛋白mRNA的核糖體結合區或編碼區。多核苷酸可以互補于連接蛋白mRNA的全部或一個區域。例如，多核苷酸可以是所有或部分連接蛋白mRNA的精確互補體。然而，并不需要完全互補性，并且具有足夠互補性以形成在生理條件下解鏈溫度大于約20°C、3(TC或40°C的雙鏈體的多核苷酸特別適用于本發明。因此多核苷酸通常是互補于mRNA的序列的同源物(或同系物，homologue)。多核苷酸可以是在中等至高度嚴格的條件如0.03M氯化鈉和0.03M檸檬酸鈉下、在約50°C至約60°C下雜交于連接蛋白mRNA的多核苷酸。對于某些方面，適合的多核苷酸的長度通常為約6至40個核苷酸。優選地多核苷酸的長度可以為約12至約35個核苷酸，或可替換地長度為約12至約20個核苷酸，或更優選長度為約18至約32個核苷酸。根據一個可替換方面，多核苷酸的長度可以為至少約40個，例如至少約60個或至少約80個核苷酸以及多達約100個、約200個、約300個、約400個、約500個、約1000個、約2000個或約3000個或更多個核苷酸。由多核苷酸靶向的一種或多種連接蛋白將取決于要實施負調節的位點。就連接蛋白亞單位組成而論，這反映了整個身體中在不同位點的(一個或多個)間隙連接的非均勻構造(構成)。連接蛋白是在一個方面自然發生在人或動物中或自然發生在其中要降低連接蛋白表達或活性的組織中的連接蛋白。連接蛋白基因(包括編碼序列)通常與本文提及的特定連接蛋白中的一個或多個的編碼序列具有同源性，如與表2所示的連接蛋白43編碼序列的同源性。連接蛋白通常是α或β連接蛋白。優選地，連接蛋白是α連接蛋白并且表達在要治療的組織中。然而，就在組織中的分布而論，某些連接蛋白(cormexinproteins)比其他連接蛋白更普遍存在。最廣泛存在的連接蛋白之一是連接蛋白43。靶向連接蛋白43的多核苷酸特別適用于本發明。在其他方面，靶向其他連接蛋白。在一個優選的方面，反義多核苷酸僅靶向一種連接蛋白的mRNA。最優選地，這種連接蛋白是連接蛋白43。在另一個方面，連接蛋白是連接蛋白26、30、31.1、32、36、37、40、或45。在其他方面，連接蛋白是連接蛋白30.3,31,40.1、或46.6。還設想，組合使用靶向單獨的連接蛋白的多核苷酸(例如，可以靶向1、2、3、4或更多種不同的連接蛋白)。例如，可以組合使用靶向連接蛋白43、以及連接蛋白家族的一個或更多其他成員(如連接蛋白26、30、30.3、31.1、32、36、37、40、40.1、45、以及46.6)的多核苷酸。可替換地，反義多核苷酸可以是組合物的一部分，其可以包含靶向多于一種的連接蛋白的多核苷酸。優選地，多核苷酸所導向的連接蛋白之一是連接蛋白43。寡脫氧核苷酸導向的其他連接蛋白可以包括，例如，連接蛋白26,30,30.3,31.1、32、36、37、40、40.1、45、以及46.6。導向各種連接蛋白的適合的示例性多核苷酸(以及0DN)列在表1中。單獨的反義多核苷酸對于特定的連接蛋白可以是特異性的，或可以靶向1、2、3或更多種不同的連接蛋白。特異性多核苷酸將通常靶向連接蛋白基因或mRNA中的序列，其在連接蛋白之間不是保守的，而非特異性多核苷酸將靶向各種連接蛋白的保守序列。用于本發明的多核苷酸可以適當地是未修飾的磷酸二酯低聚物。這樣的寡脫氧核苷酸在長度上可以不同。已發現，一種30聚體多核苷酸是特別適合的。描述本發明中關于寡脫氧核苷酸的許多方面。然而，應當理解，其他適合的多核苷酸(如RNA多核苷酸)可以用于這些方面。可以化學修飾反義多核苷酸。這可以增強它們對核酸酶的抗性并且可以增強它們進入細胞的能力。例如，可以使用硫代磷酸寡核苷酸。其他脫氧核苷酸類似物包括甲基膦酸酯、氨基磷酸酯、二硫代磷酸酯、N3'P5'-氨基磷酸酯和寡核糖核苷酸硫代磷酸酯以及它們的2'-0-烷基類似物和2'-0-甲基核糖核苷酸甲基膦酸酯。可替換地，可以使用混合的主鏈寡核苷酸(“MBO”)。MBO包含硫代磷酸酯寡脫氧核苷酸的節段以及適當位置的修飾寡脫氧核苷酸或寡核糖核苷酸的節段。MBO具有硫代磷酸酯鍵的節段和其他修飾的寡核苷酸的其他節段，如甲基膦酸酯，其是非離子型的，并且非常耐核酸酶或2‘-0-烷基寡核糖核苷酸。制備修飾主鏈和混合主鏈寡核苷酸的方法在本領域是已知的。本發明中使用的反義多核苷酸的精確序列將取決于靶連接蛋白。在一種實施方式中，適合的連接蛋白反義多核苷酸可以包括多核苷酸如寡脫氧核苷酸，其選自以下表1中所列出的序列表1<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>用于制備本文描述的組合多核苷酸組合物的適合的多核苷酸包括例如，用于連接蛋白43的多核苷酸以及用于連接蛋白26、30、31.1、32以及37的多核苷酸，如在上面表1中所描述的。雖然在本發明中使用的反義多核苷酸的精確序列將取決于靶連接蛋白，但對于連接蛋白43，已發現具有以下序列的反義多核苷酸是特別適合的GTAATTGCGGCAAGAAGAATTGTTTCTGTC(SEQ.ID.NO1)；GTAATTGCGGCAGGAGGAATTGTTTCTGTC(SEQ.ID.NO2)；以及GGCAAGAGACACCAAAGACACTACCAGCAT(SEQ.ID.NO:3)。例如，用于連接蛋白26、31.1以及32的適合的反義多核苷酸具有以下序列5'TCCTGAGCAATACCTAACGAACAAATA(連接蛋白26)(SEQ.ID.NO4)；5'CGTCCGAGCCCAGAAAGATGAGGTC(連接蛋白31.1)(SEQ.ID.NO9)；以及5'TTTCTTTTCTATGTGCTGTTGGTGA(連接蛋白32)(SEQ.ID.NO12)。根據本發明的方法有用的其他連接蛋白反義多核苷酸序列包括5'CATCTCCTTGGTGCTCAACC3'(連接蛋白37)(SEQ.ID.NO5)；5'CTGAAGTCGACTTGGCTTGG3'(連接蛋白37)(SEQ.ID.NO6)；5'CTCAGATAGTGGCCAGAATGC3'(連接蛋白30)(SEQ.ID.NO7)；5'TTGTCCAGGTGACTCCAAGG3'(連接蛋白30)(SEQ.ID.NO8)；5'AGAGGCGCACGTGAGACAC3'(連接蛋白31.1)(SEQ.ID.NO10)；以及5'TGAAGACAATGAAGATGTT3'(連接蛋白31.1)(SEQ.ID.NO:11)。就它們的核苷酸序列而論，可以通過任何方便和常規的方式來選擇導向連接蛋白的多核苷酸，包括0DN。例如，可以使用計算機程序MacVector和OligoTech(來自Oligos等，尤金，俄勒R，美國)。在選擇以后，可以利用DNA合成儀來合成0DN。多核苷酸同源物本文討論了同源性和同源物(例如，多核苷酸可以是連接蛋白mRNA中序列的互補體的同源物)。這樣的多核苷酸與相關序列通常具有至少約70%的同源性、優選至少約80%、至少約90%、至少約95%、至少約97%或至少約99%的同源性，例如在至少約15、至少約20、至少約40、至少約100個更多(同源序列的)連續核苷酸的區域上。可以基于本領域的任何方法來計算同源性。例如UWGCGPackage提供了BESTFIT程序，其可以用來計算同源性(例如基于其默認設置使用)(Devereuxetal.(1984)NucleicAcidsResearchl2,p387_395)。PILEUP和BLAST算法可以用來計算同源性或對齊序列(通常基于它們的默認設置)，例如如在AltschulS.F.(1993)JMoIEvol36:290-300;Altschul,S,Fetal(1990)JMolBiol215:403_10中所描述的。通過美國國家生物技術信息中心(NationalCenterforBiotechnologyInformation)(http//www,ncbi.nlm.nih.rov/)可公開獲得用于進行BLAST分析的軟件。該算法涉及當與數據庫序列中的相同長度的字串(word)進行序列對比時通過確定在查詢序列(其匹配或滿足一定的正值閾值評分T)中的長度W的短字串來首先確定高得分序列對(HSP)。T稱作相鄰字串得分閾值(Altschuletal，上文)。這些最初的相鄰字串匹配(或字串命中，wordhits)作為開始搜索的種子以發現包含它們的HSP。沿著每個序列在兩個方向延伸字串匹配直到可以增加累積對齊評分。當累積對齊評分偏離其獲得的最大值為量X時；當累計評分變成零以下時(這是由于一個或多個負得分殘基對齊的積累)；或當達到任一序列的末端時，停止在每個方向的字串匹配的延伸。BLAST算法參數W、T以及X決定了序列對比的敏感性和速度。BLAST程序使用作為默認值的字串長度(W)，BL0SUM62得分矩陣(參見HenikoffandHenikoff(1992)Proc.Natl.Acad.SciUSA8910915-10919)，50個序列對比(B)，10的期望值(E)、M=5、N=4，以及兩種鏈的比較。BLAST算法進行兩個序列之間的相似性的統計分析；參見例如，KarlinandAltschul(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:5873_5787。由BLAST算法提供的相似性的一種度量是最小和概率(或最小概率總和，smallestsumprobability)(P(N))，其提供概率的一種指示，兩個核苷酸或氨基酸序列之間的匹配將以此概率偶然發生。例如，如果第一序列與第二序列相比，最小和概率小于約1，優選小于約0.1，更優選小于約0.01，以及最優選小于約0.001，則認為一個序列類似于另一個序列。同源序列通常與相關序列相差至少約(或相差不大于約)2個、5個、10個、15個、20個更多突變(其可以是取代、缺失或插入)。可以在上面提及的與計算同源性有關的任何區域上來測量這些突變。同源序列通常在顯著高于本底的水平選擇性地雜交于原始序列。通常利用中等至高度嚴格條件(例如0.03M氯化鈉和0.03M檸檬酸鈉，約50°C至約60°C)來實現選擇性雜交。然而，可以在本領域已知的任何適合條件下進行這樣的雜交(參見Sambrooketal.(1989),MolecularCloning:ALaboratoryManual)。例如，如果需要高度嚴格性，則適合的條件包括在60°C下的0.2XSSC0如果需要較低嚴格性，則適合的條件包括在60°C下的2XSSC0劑型和制劑以及給藥可以將本發明的藥劑給予需要治療的受治療者，如患有任何本文所提及傷口的受治療者。因此可以改善受治療者的病癥。通過治療，抗連接蛋白多核苷酸可以用于受治療者身體的治療。它們可以用于制備用來治療任何本文所提及的傷口的藥物。抗連接蛋白多核苷酸可以以基本上分離的形式存在。應當理解，產品可以與載體或稀釋劑混合，所述載體或稀釋劑將不會干擾產品所期望的用途，并且仍然被看作是基本上分離的。本發明的產品還可以具有基本上純化的形式，在這種情況下，它將通常包括約80%、85%、或90%，其中包括，例如，至少約95%、至少約98%或至少約99%的多核苷酸或制劑的干重(drymass)。取決于預定的給予途徑，本發明的醫藥產品(pharmaceuticalproduct)、藥物組合物、復合制備物(combinedpreparation)以及藥物可以，例如，采取溶液、混懸劑、滴注劑、噴霧劑、軟膏(salve)、乳膏劑、凝膠劑、泡沫、軟膏劑、乳劑、洗劑、涂劑、緩釋制劑、或散劑的形式，并且通常包含約0.01%至約的(一種或多種)活性組分、約的(一種或多種)活性組分、約2%-60%的(一種或多種)活性組分、約2%-70%的(一種或多種)活性組分、或多達約90%的(一種或多種)活性組分。其他適合的制劑包括基于pluronic凝膠的制劑、基于羧甲基纖維素(CMC)的制劑、以及基于羥丙基甲基纖維素(HPMC)的制劑。其他有用的制劑包括緩釋制備物或延遲釋放制備物。可以利用適合的膠凝劑來制備凝膠劑或膠凍劑，其中適合的膠凝劑包括但不限于明膠、黃蓍膠、或纖維素衍生物，并且可以包括甘油作為保濕劑、軟化劑、以及防腐劑。軟膏劑是半固體制劑，其由加入到脂肪、蠟、或合成基質中的活性組分組成。適合的乳膏劑的實例包括但不限于油包水和水包油乳劑。油包水乳膏劑可以通過使用適合的乳化劑加以配制，其中乳化劑的性能類似于但不限于脂肪醇(如十六醇或鯨硬脂醇(C18-16脂肪醇，cetostearylalcohol))和乳化蠟的性能。水包油乳膏劑可以利用乳化劑如聚西托醇乳化蠟來配制。適合的性能包括能夠改善乳劑的粘度以及在廣泛的PH范圍內的物理和化學穩定性。水溶性或可混溶性膏基(膏用底物)可以包含防腐劑系統并且還可以進行緩沖以保持可接受的生理PH。可以配制泡沫制劑以借助于適合的施加器并利用惰性推進劑從加壓氣霧罐進行遞送。用于配制泡沫基質的適合的賦形劑包括但不限于丙二醇、乳化蠟、十六醇、以及硬脂酸甘油酯。潛在的防腐劑包括對羥基苯甲酸甲酯和對羥基苯甲酸丙酯。優選地，本發明的藥劑與藥用載體或稀釋劑組合以產生藥物組合物。適合的載體和稀釋劑包括等滲鹽水溶液，例如磷酸緩沖鹽溶液。適合的稀釋劑和賦形劑還包括，例如，水、鹽水、葡萄糖、甘油等、以及它們的組合。此外，如果期望，還可以存在諸如潤濕劑或乳化齊U、穩定劑或PH緩沖劑的物質。術語“藥用載體”是指任何藥物載體，其本身并不誘導對接受組合物的個體有害的抗體的產生，并且其可以被給予而沒有不適當的毒性。適合的載體可以是較大的、緩慢代謝的大分子如蛋白質、多糖、聚乳酸、聚乙醇酸、聚合氨基酸、以及氨基酸共聚物。藥用鹽也可以存在，例如，無機酸鹽如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽等；以及有機酸的鹽如醋酸鹽、丙酸鹽、丙二酸鹽、苯甲酸鹽等。適合的載體材料包括任何載體或媒介物，其通常用作乳膏劑、洗劑、噴霧劑、泡沫、凝膠劑、乳劑、洗劑或涂劑(用于局部給予)的基質。實例包括乳化劑、惰性載體(包括碳氫化合物基質)、乳化基質、非毒性溶劑或水溶性基質。特別適合的實例包括pluronics、HPMC、CMC以及其他纖維素基組分、羊毛脂、硬石蠟、液體石蠟、軟黃石蠟或軟白石蠟、白蜂蠟、黃蜂蠟、鯨硬脂醇(cetostearyl)、十六醇、二甲硅油、乳化蠟、十四酸異丙酯(肉豆蔻酸異丙酯)、微晶蠟、油醇以及硬脂醇。優選地，藥用載體或媒介物是凝膠，適宜地為非離子型聚氧化乙烯-聚氧化丙烯共聚物凝膠，例如，Pluronic凝膠，優選PluronicF-127(BASFCorp.)。該凝膠是特別優選的，因為它在低溫下是液體，但在生理溫度下快速凝結，其將制劑的釋放限制于施加部位或緊靠于該部位。助劑如酪蛋白、明膠、白蛋白、膠、海藻酸鈉、羧甲基纖維素、甲基纖維素、羥乙基纖維素或聚乙烯醇也可以包括在本發明的制劑中。其他適合的制劑包括基于pluronic凝膠的制劑、基于羧甲基纖維素(CMC)的制齊U、以及基于羥丙基甲基纖維素(HPMC)的制劑。組合物可以配制用于任何期望的遞送形式，其包括局部給予、滴注給予、胃腸道外給予、肌內給予、皮下給予、或透皮給予。其他有用的制劑包括緩釋制備物或延遲釋放制備物。給予的制劑可以包含轉染劑。這樣的制劑的實例包括陽離子劑(例如磷酸鈣和DEAE-右旋糖酐)和脂轉染劑(Iipofectant)(例如lipofectam和transfectam)，以及表面活性劑。在一種實施方式中，制劑進一步包括表面活性劑以幫助多核苷酸細胞滲透或者制劑可以包含任何適合的填充劑(或負荷劑，loadingagent)0可以包括任何適合的非毒性表面活性劑，如DMS0。可替換地，可以包括透皮滲透劑如尿素。用于給定受治療者的有效劑量優選處于這樣的劑量內，其對于至少50%群體是治療有效的，并且其在該水平呈現很少毒性或沒有毒性。在本發明的方法和組合物中采用的每種抗連接蛋白多核苷酸的有效劑量可以根據多種因素而變化，這些因素包括所采用的特定的抗連接蛋白多核苷酸、給予方式、給予頻率、待治療的傷口、待治療傷口的嚴重性、給予途徑、待治療患者亞群體的需要或個別患者的需要，其不同的需要可以起因于年齡、性別、體重、患者特有的相關醫學傷口。適合的劑量可以是約0.001至約lmg/kg體重如約0.01至約0.4mg/kg體重。然而，適合的劑量可以是約0.001至約0.lmg/kg體重如約0.01至約0.050mg/kg體重。約1至100、200、300、400、以及500微克的劑量是合適的。如本文所述，可以設想重復施加。通常每周采用重復施加約一次，或當傷口愈合可能顯示為停頓或放慢時進行重復施加。本文還描述了每種制劑在約1納克(ng)/kg到約lmg/kg體重/天之間的其他劑量水平。在某些實施方式中，每種主題化合物的劑量將通常在約Ing至約1微克/kg體重、約Ing至約0.1微克/kg體重、約Ing至約10ng/kg體重、約IOng至約0.1微克/kg體重、約0.1微克至約1微克/kg體重、約20ng至約100ng/kg體重、約0.OOlmg至約100mg/kg體重、約0.Olmg至約10mg/kg體重、或約0.Img至約lmg/kg體重的范圍內。在某些實施方式中，每種主題化合物的劑量將通常在約0.OOlmg至約0.0lmg/kg體重、約0.Olmg至約0.lmg/kg體重、約0.Img至約lmg/kg體重、或約lmg/kg體重的范圍內。如果使用多于一種的抗連接蛋白多核苷酸，則每種抗連接蛋白多核苷酸的劑量無需與其他抗連接蛋白多核苷酸在相同的范圍內。例如，一種抗連接蛋白多核苷酸的劑量可以在約0.Olmg至約lmg/kg體重之間，而另一種抗連接蛋白多核苷酸的劑量可以在約0.Img至約lmg/kg體重之間。如本文所述，可以設想重復施加。通常每周采用重復施加約一次，或當傷口愈合可能顯示為停頓或放慢時進行重復施加。其他有用的劑量范圍是約1至約10微克/平方厘米傷口大小。某些劑量將是約1-2、約1-5、約2-4、約5-7、以及約8_10微克/平方厘米傷口大小。其他有用的劑量是大于約10微克/平方厘米傷口大小，包括約15微克/平方厘米傷口大小、約20微克/平方厘米傷口大小、約25微克/平方厘米傷口大小、約30微克/平方厘米傷口大小、約35微克/平方厘米傷口大小、約40微克/平方厘米傷口大小、約50微克/平方厘米傷口大小、以及約100微克/平方厘米傷口大小。其他有用的劑量是約150微克/平方厘米傷口大小、約200微克/平方厘米傷口大小、約250微克/平方厘米傷口大小、或約500微克/平方厘米傷口大小。如本文所述，可以設想重復施加。通常每周采用重復施加約一次，或當傷口愈合可能顯示為停頓或放慢時進行重復施加。例如，在某些實施方式中，可以在治療部位和/或鄰近治療部位以約0.01微摩爾(μΜ)或0.05μM至約200μM終濃度施加抗連接蛋白多核苷酸組合物。優選地，以約0.05μM至約100μM終濃度施加反義多核苷酸組合物，更優選地，以約1.0μM至約50μM終濃度施加抗連接蛋白多核苷酸組合物，以及更優選地，以約5-10μM至約30-50μM終濃度施加抗連接蛋白多核苷酸組合物。另外，以約8μM至約20μM終濃度施加抗連接蛋白多核苷酸組合物，以及可替換地以約10μM至約20μM終濃度、或以約10至約15μM終濃度施加抗連接蛋白多核苷酸組合物。在某些其他實施方式中，以約10μΜ終濃度施加抗連接蛋白多核苷酸。在又一種實施方式中，以約1-15μM終濃度施加抗連接蛋白多核苷酸組合物。抗連接蛋白多核苷酸劑量包括，例如，約0.1-1、1-2、2-3、3-4、或4-5微克(yg)、約5至約10μg、約10至約15μg、約15至約20μg、約20至約30μg、約30至約40μg、約40至約50μg、約50至約75μg、約75至約100μg、約100μg至約250μg、以及250μg至約500μg。如上所述，還提供了0.5至約1.0毫克或更大的劑量。劑量容積將取決于待治療部位的大小，并且可以是，例如，約25-100μL至約100-200μL、約200-500μL至約500-1000μL0(微升)劑量也適用于更大的治療部位。如本文所述，可以設想重復施加。通常每周采用重復施加約一次，或當傷口愈合可能顯示為停頓或放慢時進行重復施加。適宜地，給予足夠量的抗連接蛋白多核苷酸以在給予后負調節連接蛋白的表達，或調節間隙連接形成至少約0.5至1小時、至少約1-2小時、至少約2-4小時、至少約4-6小時、至少約6-8小時、至少約8-10小時、至少約12小時、或至少約24小時。在本發明的組合物和方法中的每種抗連接蛋白多核苷酸的劑量還可以通過參照相對于將施加區域的大小、長度、深度、面積或容積的組合物濃度加以確定。例如，在某些局部和其他用途，例如，滴注中，藥物組合物的劑量可以基于每施加區域的長度、深度、面積、或容積的藥物組合物的質量(例如微克)或濃度(例如yg/μ)加以計算。給予的最初和任何其后劑量將取決于本文所述的因素。取決于寡核苷酸，用于給予的劑量和方案將會變化，并且劑量還將取決于所選擇的給予方法，例如，局部(localortopical)給予。可以以單次或分開施加方式來給予劑量。可以一次給予劑量，或可以重復施加。可以通過相同或不同的途徑來給予一種或多種抗連接蛋白多核苷酸。本發明的各種制劑可以在治療過程中的不同時間分開給予，或以分開或單一組合形式同時給予。優選地，可用于傷口愈合的一種或多種抗連接蛋白多核苷酸通過局部給予(外周或直接到某個部位)來遞送，其包括但不限于利用固體載體(如敷料和其他基質)和藥用制劑(如凝膠劑、合劑、混懸劑以及軟膏劑)來局部給予。在一種實施方式中，固體載體包括進入治療部位的生物相容性膜或插入物。在另一種實施方式中，固體載體包括敷料或基質。在本發明的一種實施方式中，固體載體組合物可以是緩釋固體載體組合物，其中可用于傷口愈合的一種或多種抗連接蛋白多核苷酸被分散在緩釋固體基質中如藻酸鹽、膠原、或合成生物可吸收聚合物的基質。優選地，固體載體組合物是無菌的或低生物負載。在一種實施方式中，可以使用包括一種或多種抗連接蛋白多核苷酸的洗滌溶液。一種或多種抗連接蛋白多核苷酸的遞送可以發生在一段時間內，在某些情況下約0.5小時、1-2小時、約2-4小時、約4-6小時、約6_8小時、或約24小時或更長時間，對于更嚴重的傷口可以是特別有利的。在某些情況下，細胞損失可以延伸超過操作部位至周圍細胞。這樣的損失可以發生在最初操作的24小時內并由間隙連接細胞間通信所介導。(一種或多種)抗連接蛋白多核苷酸的給予將調節細胞間通信并將另外的細胞損失或損傷或損傷的結果降至最小程度。雖然遞送時間將取決于要誘導負調節的部位和所期望的治療效果，但提供了持續或緩釋遞送約0.5小時、約1-2小時、約2-4小時、約4-6小時、約6_8小時、或約24小時或更長時間。根據本發明，這可以通過在制劑中包括抗連接蛋白多核苷酸以及藥用載體或媒介物來實現，尤其是以用于持續或緩釋給予的制劑形式。如所指出的，例如，可以在受傷以前、受傷期間、緊接著在受傷以后，或者例如在受傷的約180或更長、約120、約90、約60、或約30天內，給予本發明的一種或多種制劑。本文描述的給予途徑和劑量僅作為指導，因為熟練的醫生將針對任何特定的患者和傷口決定給予的最佳途徑和劑量。本文提及或描述的治療患有或懷疑患有疾病、障礙、和/或傷口的受治療者的任何方法可以利用給予本文描述的任何劑量、劑型、制劑、和/或組合物。敷料和基質在一個方面，以敷料或基質形式提供了一種或多種抗連接蛋白多核苷酸。在某些實施方式中，以液體、半固體或固體組合物的形式提供了本發明的一種或多種制劑，用于直接施用，或將組合物施加至固體接觸層(如敷料紗布或基質)的表面或加入固體接觸層中。可以，例如，以液體或凝膠的形式提供敷料組合物。可以與常規藥物賦形劑結合提供一種或多種抗連接蛋白多核苷酸，用于局部施加。適合的載體包括=Pluronic凝膠、Polaxamer凝膠、包含纖維素衍生物的水凝膠，其中纖維素衍生物包括羥乙基纖維素、羥甲基纖維素、羧甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素以及它們的混合物；以及包含聚丙烯酸的水凝膠(Carbopols)。適合的載體還包括用于局部藥物制備物的乳膏/軟膏，例如，基于聚西托醇乳化軟膏的乳膏。上述載體可以包括藻酸鹽(作為增稠劑或刺激劑)、防腐劑如苯甲醇、用來控制pH的緩沖劑如磷酸氫二鈉/磷酸二氫鈉、用來調節滲量的制劑如氯化鈉、以及穩定劑如EDTA。在一種實施方式中，在天然或合成基質上給予一種或多種抗連接蛋白多核苷酸，例如連接蛋白43反義多核苷酸，優選連接蛋白43反義寡脫氧核苷酸。適合的敷料或基質可以包括，例如，以下具有一種或多種抗連接蛋白多核苷酸的敷料或基質。抗連接蛋白43寡核苷酸是優選的，例如抗連接蛋白43反義寡核苷酸1)吸收劑適合的吸收劑可以包括，例如，吸收件敷料，該吸收件敷料可以提供,例如，半粘附質量或非粘附層，其結合于纖維的高度吸收層，如例如，纖維素、棉花或人造絲。可替換地，吸收劑可以用作主要或輔助敷料。2)^適的藻酸鹽包括，例如，敷料，該敷料是非編織、非粘著墊和帶狀物，其由天然多糖纖維或干凝膠(衍生自海藻)組成。適合的藻酸鹽敷料可以例如在與滲出物接觸以后通過離子交換過程形成濕凝膠。在某些實施方式中，藻酸鹽敷料被設計成柔軟可適應的，易于包扎、塞進或施用于不規則形狀區域。在某些實施方式中，藻酸鹽敷料可以與第二敷料一起使用。3)抗微牛物敷料話合的抗微牛物敷料可以包括，例如，可以促講牛物活件劑遞送的敷料，如，例如，銀和聚六亞甲基雙胍(PHMB)，以保持抵抗感染的效力(在需要或期望的情況下)。在某些實施方式中，適合的抗微生物敷料可以為例如，海綿、浸漬編織紗布、薄膜敷料、吸收性產品、島狀敷料(islanddressings)、尼龍織物、非粘附阻擋層(或隔離物)、或材料的組合。4)生物和生物合成材料(biosynthetics)適合宜的生物敷料或生物合成敷料可以包括，例如，凝膠、溶液或來自天然來源的半滲透片材。在某些實施方式中，將凝膠或溶液施加于治療部位并用用于屏障保護的敷料覆蓋。在另一種實施方式中，原位放置片材，其可以作為膜，從而在單次施加以后保留在適當位置。5)膠原適合的膠原敷料可以包括，例如，凝膠、墊、顆粒、糊狀物、粉末、片材或溶液，其衍生自例如，牛、豬或鳥來源或其他天然來源或供體。在某些實施方式中，膠原敷料可以與治療部位滲出物相互作用以形成凝膠。在某些實施方式中，可以與輔助敷料組合來使用膠原敷料。6)ff合材料適合的復合敷料可以包括例如將物理上不同成分結合成單一產品以提供多種功能的敷料，如，例如，細菌屏障、吸收和粘附。在某些實施方式中，復合敷料由例如多層組成，并結合有半粘附或非粘附墊。在某些實施方式中，復合材料還可以包括例如，非編織織物帶或透明薄膜的膠接邊界(adhesiveborder)。7)^MM:適合的接觸層敷料可以包括，例如，放置在區域上的薄的、非粘附片材，以保護組織免于例如，直接與施加至治療部位的其他制劑或敷料接觸。在某些實施方式中，接觸層可以被展開以符合治療部位區域的形狀并且是多孔的以使滲出物可以穿過從而由疊加的輔助敷料吸收。8)彈件繃帶適合的彈性繃帶可以包括例如伸展并符合身體輪廓的敷料。在某些實施方式中，織物成分可以包括例如，棉花、聚酯、人造絲或尼龍。在某些其他實施方式中，彈性繃帶可以例如，作為第二層或敷料，提供吸收，以將覆蓋物保持在適當位置，施加壓力或緩和治療部位。9)皿適合的泡沫敷料可以包括，例如，片材和其他形狀的發泡聚合物溶液(包括聚氨酯)，其具有能夠容納流體的較小的敞開的單元。示例性的泡沫可以例如，浸漬有或層合于其他材料。在某些實施方式中，吸收能力可以基于泡沫的厚度和組成加以調節。在某些其他實施方式中，與治療部位接觸的區域可以是非粘著的，以易于除去。在又一種實施方式中，泡沫可以與膠接邊界和/或透明薄膜涂層(其可以作為抗感染阻擋層)組合使用。10)紗布和非編織敷料適合的紗布敷料和編織敷料可以包括,例如，干編織或非編織海綿和包裹物，其具有不同程度的吸收性。示例性的織物成分可以包括，例如，棉花、聚酯或人造絲。在某些實施方式中，紗布和非編織敷料可以是無菌或非無菌散裝的并且具有或沒有膠接邊界。示例性的紗布敷料和編織敷料可以用于清潔、包扎和覆蓋各種傷口治療部位。11)水膠體話合的水膠體敷料可以包括,例如，干膠片(wafer)、粉末或糊狀物，其由明膠、果膠或羧甲基纖維素組成。在某些實施方式中，干膠片是自粘附的并且具有或沒有膠接邊界以及具有各種各樣的形狀和大小。示例性的水膠體可用于需要輪廓的區域。在某些實施方式中，粉末和糊狀物水膠體可以與輔助敷料組合使用。12)水凝膠(無定形)適合的無定形水凝膠敷料可以包括，例如，水、聚合物以及其他組分的制劑，其沒有任何形狀，被設計為用來給予水分并保持潮濕的愈合環境和/或再水化治療部位。在某些實施方式中，可以與輔助敷料覆蓋物組合來使用水凝膠。13)水凝膠浸漬敷料適合的浸漬水凝膠敷料可以包括，例如，用無定形水凝膠飽和的紗布和非編織海綿、繩(rope)以及條。無定形水凝膠可以包括例如，水、聚合物以及其他組分的制劑，其沒有形狀，被設計為用來將水分給予干燥治療部位以及保持潮濕的愈合環境。14)水凝膠片材適合的水凝膠片材可以包括例如，交聯親水聚合物的三維網絡，其不溶于水并且通過溶脹與水溶液相互作用。示例性的水凝膠是高度可適應和可滲透的并且可以吸收不同的排水量，這取決于它們的組成。在某些實施方式中，水凝膠相對于治療部位是非粘著的，或處理以易于除去。15)浸漬敷料適合的浸漬敷料可以包括,例如，用溶液、乳液、油、凝膠或某㈣其他藥物活性化合物或載體劑，包括例如，鹽水、油、鋅鹽、凡士林、三溴酚鉍和猩紅以及本文描述的化合物飽和的紗布和非編織海綿、繩(rope)以及條。16)硅凝膠片材適合的硅凝膠片材敷料可以包括，例如，由交聯聚合物組成的軟覆蓋物，其中交聯聚合物增強有或結合于網狀物或織物。17)溶液適合的液體敷料可以包括，例如，多蛋白材料和在細胞外基質中發現的其他元素的混合物。在某些實施方式中，可以在清創和清潔以后將示例性的溶液施用至治療部位，然后用吸水性敷料或非粘附墊覆蓋。18)JtMI:適合的透明薄膜敷料可以包括利用粘合劑涂布在一側上的不同厚度的聚合物膜。在某些實施方式中，透明薄膜對于液體、水以及細菌是不可滲透的，但對于水汽和大氣是可滲透的。在某些實施方式中，透明性使得可以對治療部位實現可視化。19)填料適合的填料敷料可以包括，例如，珠、乳膏、泡沬、凝膠、軟膏、墊、糊狀物、枕袋(或枕墊，pillows)、粉末、絲狀體(strands)或其他制劑。在某些實施方式中，填料是非粘附的并且可以包括定時釋放的抗微生物劑。示例性的填料可以用來保持潮濕環境，處置滲出物，以及用于治療例如，部分和完全厚度傷口、感染傷口、引流傷口(drainingwound)以及需要包扎的深傷口。因此，根據本發明，提供了制劑，通過該制劑可以以瞬時和部位特異性方式負調節細胞間通信，用于治療不以預期速率愈合的傷口。因此這些制劑可應用于治療方法中。傷口治療在組織損傷(尤其是特征在于延遲愈合的傷口和慢性傷口)的情況下，已發現，本發明的制劑在促進傷口愈合過程、減少炎癥以及使瘢痕組織形成降至最小程度方面是有效的。因此這些制劑可明顯有利于治療不以預期速率愈合的傷口，不管是外部創傷的結果、還是疾病狀態(如糖尿病性潰瘍)或病癥(如靜脈性潰瘍、動脈性潰瘍、以及血管炎性潰瘍)或物理過程(如壓力性潰瘍)的結果。在一個方面，本發明涉及一種在患有慢性傷口、延遲愈合傷口或不完全愈合傷口、或不以預期速率愈合的其他傷口的受治療者中促進或改善傷口愈合的方法，該方法包括給予治療有效量的一種或多種抗連接蛋白多核苷酸。在某些實施方式中，給予一種或多種抗連接蛋白多核苷酸可有效減少肉芽組織沉積，促進細胞遷移以加速傷口閉合和愈合，促進上皮生長，或它們的任何組合。在一個方面，本發明涉及一種在受治療者中促進或改善傷口愈合的方法，該方法包括以可有效在慢性傷口、延遲愈合傷口或不完全愈合傷口、或不以預期速率愈合的其他傷口中調節上皮基底細胞分裂和生長的量給予一種或多種抗連接蛋白多核苷酸。在一種實施方式中，抗連接蛋白多核苷酸是連接蛋白反義多核苷酸，其有效調節上皮基底細胞分裂和生長。在一種實施方式中，連接蛋白反義多核苷酸是連接蛋白26反義多核苷酸、連接蛋白43反義多核苷酸或它們的混合物。在一個方面，本發明涉及一種促進或改善傷口愈合的方法，該方法包括以可有效在慢性傷口、延遲愈合傷口或不完全愈合傷口、或不以預期速率愈合的其他傷口中調節外層角蛋白分泌的量給予一種或多種抗連接蛋白多核苷酸。在一種實施方式中，抗連接蛋白多核苷酸是可有效調節外層角蛋白分泌的連接蛋白反義多核苷酸。在一種實施方式中，連接蛋白反義多核苷酸是連接蛋白43反義多核苷酸、31.1反義多核苷酸、或它們的混合物。在一個方面，本發明涉及一種在患有慢性傷口、延遲愈合傷口或不完全愈合傷口、或不以預期速率愈合的其他傷口的受治療者中減少、預防或改善組織損傷的方法，該方法包括給予一種或多種抗連接蛋白多核苷酸。在一個方面，本發明涉及持續給予一種或多種抗連接蛋白多核苷酸。在一種實施方式中，給予抗連接蛋白多核苷酸至少約1-24小時、至少約0.5小時、至少約1小時、至少約2小時、至少約3小時、至少約4小時、至少約5小時、至少約6小時、至少約7小時、至少約8小時、至少約9小時、至少約10小時、至少約11小時、至少約12小時或至少約24小時。在一種實施方式中，在一段持續時間內對連接蛋白表達進行負調節。優選地，在一段持續時間內對連接蛋白43表達進行負調節。適宜地，連接蛋白43表達被負調節至少約0.5、1、2、4、6、8、10、12、或24小時。在對表達進行負調節以后，完全連接蛋白恢復(recovery)通常是在至少約48-72小時內。適合的受治療者包括糖尿病受治療者或患有不以預期速率愈合的傷口的其他受治療者。在一個方面，本發明提供了一種對患有慢性傷口、延遲愈合傷口或不完全愈合傷口、或不以預期速率愈合的其他傷口的受治療者進行治療的方法，該方法包括持續給予有效量的一種或多種抗連接蛋白多核苷酸。在另一方面，本發明提供了一種在受治療者中促進或改善傷口愈合的方法，該方法包括將一種或多種抗連接蛋白多核苷酸持續給予慢性傷口、延遲愈合傷口或不完全愈合傷口、或不以預期速率愈合的其他傷口。根據另一個方面，本發明提供了一種在具有慢性傷口、延遲愈合傷口或不完全愈合傷口、或不以預期速率愈合的其他傷口的受治療者中促進或改善傷口愈合的方法，該方法包括以可有效在傷口區域增加再上皮化率(或再上皮形成率，re-epithlializationrates)的量將一種或多種抗連接蛋白多核苷酸持續給予傷口區域。在一種實施方式中，該方法包括持續給予連接蛋白43反義多核苷酸、和/或連接蛋白31.1反義多核苷酸。在一種實施方式中，以緩釋制劑給予組合物或多種組合物。在另一種實施方式中，給予組合物或多種組合物持續一段時間。適宜地，組合物可有效降低連接蛋白43和/或31.1水平或表達至少約24小時。可治療的受治療者包括糖尿病受治療者或患有不以預期速率愈合的傷口的其他受治療者。在又一方面，本發明提供了一種在具有慢性傷口、延遲愈合傷口或不完全愈合傷口、或不以預期速率愈合的其他傷口的受治療者中促進或改善傷口愈合的方法，該方法包括將可有效調節上皮基底細胞分裂和生長和/或可有效調節外層角蛋白分泌的量的一種或多種抗連接蛋白多核苷酸持續給予傷口區域。在一種實施方式中，組合物包含可有效調節上皮基底細胞分裂或生長的連接蛋白反義多核苷酸，優選連接蛋白26反義多核苷酸、連接蛋白43反義多核苷酸、或它們的混合物。在一種實施方式中，組合物包含可有效調節外層角質化的連接蛋白反義多核苷酸，優選連接蛋白31.1反義多核苷酸。在一種實施方式中，以緩釋制劑給予組合物或多種組合物。在另一種實施方式中，給予組合物或多種組合物持續一段時間。適宜地，該組合物可有效降低連接蛋白43、26、和/或31.1水平或表達至少約24小時。可治療的受治療者包括糖尿病受治療者。在一個方面，本發明涉及一種用于治療或預防慢性傷口、延遲愈合傷口或不完全愈合傷口、或不以預期速率愈合的其他傷口的方法，該方法包括將有效量的抗連接蛋白多核苷酸給予需要其的受治療者，其中將有效量的抗連接蛋白多核苷酸給予所述傷口或與所述傷口有關的組織。在另一種實施方式中，慢性傷口是慢性皮膚傷口并且將本發明的組合物給予所述受治療者的皮膚或與皮膚有關的組織有效的一段時間。適宜地，組合物可有效降低連接蛋白43水平，或阻斷或減小連接蛋白43半通道開放(hemicharmeloperming)，至少約0.5小時、約1-2小時、約2-4小時、約4-6小時、約4_8小時、約12小時、約18小時、或約24小時。適合于治療的慢性皮膚傷口可以，例如，選自由壓力性潰瘍、糖尿病性潰瘍、靜脈性潰瘍、動脈性潰瘍、血管炎性潰瘍、以及混合性潰瘍構成的組。慢性傷口可以是動脈性潰瘍，其包括起因于完全或部分動脈阻塞的潰瘍。慢性傷口可以是靜脈淤滯性潰瘍，其包括起因于靜脈瓣功能障礙和相關血管疾病的潰瘍。慢性傷口可以是創傷誘導的潰瘍。受治療者患有其他潰瘍，包括靜脈性潰瘍以及本文描述和本領域已知的其他潰瘍。組合物本發明涉及藥物組合物、制劑、以及它們的制備方法和應用，其中組合物包含治療有效量的抗連接蛋白多核苷酸，其包括，例如，連接蛋白反義多核苷酸。該組合物可用來增強或促進不以預期速率愈合的傷口的愈合，包括對于常規傷口治療或傷口愈合促進療法來說可能是緩慢愈合或難治愈的傷口。在一種優選的形式中，該組合物包含針對僅一種連接蛋白(cormexinprotein)的mRNA的一種或多種抗連接蛋白多核苷酸，例如連接蛋白反義多核苷酸。最優選地，這種連接蛋白是連接蛋白43。可替換地，該組合物可以包含針對多于一種的連接蛋白的多核苷酸。優選地，多核苷酸導向的連接蛋白之一是連接蛋白43。寡脫氧核苷酸導向的其他連接蛋白可以包括，例如，連接蛋白26、30、31.1、32、以及37。導向各種連接蛋白的適合的示例性多核苷酸(以及0DN)列在表1中。本發明的許多方面是參照寡脫氧核苷酸加以描述的。然而，應當理解，在這些方面中可以使用其他適合的多核苷酸(如RNA多核苷酸)。其他抗連接蛋白寡核苷酸是RNAi和siRNA寡核苷酸。因此，在一個方面，本發明提供了用于治療性治療的組合物，其包含至少一種抗連接蛋白多核苷酸，優選抗連接蛋白43多核苷酸。在優選的實施方式中，組合物進一步包含藥用載體或媒介物。試劑盒、藥物以及制品可選地，一種或多種抗連接蛋白多核苷酸還可以用于制備藥物。在一種實施方式中，藥物包含治療有效量的抗連接蛋白多核苷酸，優選抗連接蛋白43多核苷酸、以及藥用載體。在一個方面，本發明提供了一種試劑盒，該試劑盒包含所描述的一種或多種組合物或制劑。例如，試劑盒可以包括一種組合物，該組合物包含有效量的一種或多種連接蛋白43反義多核苷酸。還提供了制品，該制品包括容器，其包含如本文所描述的本發明的組合物或制劑、以及用于治療受治療者的使用說明書。例如，一種制品，其包括容器，該容器包含連接蛋白反義多核苷酸，以及用于治療患有慢性、延遲愈合、或不完全愈合傷口、或不以預期速率愈合的其他傷口的受治療者的使用說明書。在另一個方面，本發明包括一種制品，該制品包括容器，該容器包含治療有效量的一種或多種抗連接蛋白多核苷酸，以及使用說明書，包括用于治療患有慢性傷口或延遲或不完全愈合傷口、或不以預期速率愈合的其他傷口的受治療者。在另一個方面，本發明包括一種制品，該制品包括容器，其包含治療有效量的一種或多種抗連接蛋白多核苷酸，以及使用說明書，包括用于治療患有或懷疑患有全部或部分特征在于慢性傷口或延遲或不完全傷口愈合、或不以預期速率愈合的其他傷口的任何疾病、障礙和/或病癥的受治療者。如所指出的，已報道，在糖尿病患者中，傷口愈合是緩慢的，經常導致感染或慢性傷口，其可能導致截肢。通過間隙連接蛋白連接蛋白43的細胞間通信和連接蛋白43表達的動態調節被報道為在傷口愈合中起關鍵作用。在正常組織如皮膚中，在受傷后的最初24小時，在傷口邊緣處在角質細胞中連接蛋白43通常被負調節而連接蛋白26被正調節，因為它們采用遷移表型。然而，通常，在糖尿病組織中、并且尤其是在皮膚中，我們已發現，在受傷以后，連接蛋白43被立即正調節。在糖尿病大鼠中的傷口愈合已用作慢性受傷的一個模型。實施例1說明了在糖尿病大鼠中使用抗連接蛋白寡核苷酸來改善受損的傷口愈合。在實施例1中，在大鼠中的急性、鏈脲佐菌素誘發的糖尿病會改變皮膚中的連接蛋白表達，減少在表皮中的連接蛋白43和連接蛋白26蛋白以及通信，以及增加真皮中的連接蛋白43蛋白和通信。實施例1表明糖尿病會改變與傷口愈合有關的連接蛋白的動態變化。在24小時內，在傷口邊緣處在角質細胞的增厚球狀物(thickenedbulb)中連接蛋白43被正調節(而不是被負調節，如在對照中，其形成移動細胞的薄化進程(thinprocess))。連接蛋白43衰退被延遲直到48小時，其時開始再上皮化。雖然在糖尿病中連接蛋白26照常被正調節，但其在傷口邊緣的分布是異常的、更廣泛。實施例1進一步表明連接蛋白43表達的異常動態與延遲再上皮化之間的相關性，如通過將連接蛋白43特異性反義凝膠施加至糖尿病性傷口(與通過施加具有相應正義寡脫氧核苷酸的凝膠相比)所證實的。這種治療預防連接蛋白43的異常正調節并和對照(非糖尿病)水平相比再上皮化率加倍且更高。在實施例1中報道的結果支持以下設想，連接蛋白表達動態的糖尿病誘導變化有助于延遲的傷口愈合，以及靶向連接蛋白43表達作為促進糖尿病性傷口和其他慢性傷口愈合的方式具有潛在的治療價值。實施例2表明抗連接蛋白43寡核苷酸成功用來在人受治療者中促進不愈合皮膚潰瘍的愈合。實施例3表明抗連接蛋白43寡核苷酸成功用來在人受治療者中促進不愈合靜脈性潰瘍的愈合。現在將參照以下實施例來描述本發明的各個方面，以下實施例將理解為僅以舉例的方式提供而不用來構成對本發明范圍的限制。實施例實施例1制備具有以下序列的寡脫氧核苷酸GTAATTGCGGCAGGAGGAATTGTTTCTCTC(連接蛋白43)(SEQ.ID.NO:2)、GACAGMACAATTCCTCCTGCCGCATTTAC(正義對照)(SEQ.ID.NO7)。通過單次腹腔內注射在檸檬酸緩沖液中的鏈脲佐菌素，65mg/kg，以在成年斯-道鼠(Sprague-Dawleyrats)(350_400g)中誘導糖尿病(ShottonHR,etal.(2003)Diabetes.52157-64)(N=6個糖尿病，6個對照)。已在糖尿病誘導后兩周進行了大部分糖尿病性傷口愈合研究并且相同時間點用于該傷口愈合研究。然而，在8周還檢查了在糖尿病大鼠皮膚中的連接蛋白表達(N=6個糖尿病，6個對照)，以證實在兩周檢測的變化保持不變。切除正常背部皮膚，冷凍切片，免疫染色(用于連接蛋白)，通過共聚焦顯微術加以成像，以及將染色量化，如在Saitongdeeetal.(2000).CardiovascularRes.47，108-115中。用氟烷麻醉大鼠并刮取它們的背部。制得兩對5X5mm全厚度切除傷口，然后將在PluronicF-127凝膠中的10μM連接蛋白43特異性反義寡脫氧核苷酸施加于一個傷口并將對照(正義)凝膠施加于另一傷口(QiuC，etal.(2003)CellBiol.Int.27:525_541)。在受傷后的第1、2、5、10和15天收集組織，并在制備物中切片，用于連接蛋白免疫組織化學或H&E染色(同前)。連接蛋白表達的動態變化與傷口愈合過程中的關鍵事件有關。N=6只糖尿病、6只對照大鼠/時間點。通過將在明膠海綿的小拭子中的LuciferYellowCH(Sigma)的4%溶液施加到新鮮、全厚度皮膚切口中來評估細胞間通信。在除去凝膠泡沫和固定組織以前，使染料轉移5分鐘。將進入受傷細胞但不穿過間隙連接的IOkDKdFITC-右旋糖酐用作對照。組織被冷凍切片，然后在LeicaSP2UV上通過共聚焦顯微術進行成像(Leica，MiltonKeynes,UK；N=4個糖尿病和4個對照)。利用共聚焦顯微鏡檢查轉移的染料和連接蛋白免疫染色。預先設置最佳增益(gain)和偏置(offset)并在圖像采集期間保持恒定。獲得一系列單光學斷面圖像(singleopticalsectionimage)以產生來自切口的皮膚的剪輯(montage)。數字圖像是8位(或比特，bit)并利用Image-J軟件(NIH)進行分析。為了評估染料轉移，將1500X30像素感興趣區域框從切口邊緣放置在中部真皮中并產生穿過該框的圖像強度圖。灰度級強度下降低于50被任意取作LuciferYellow已移動的點。類似地，在表皮中，記錄離LuciferYellow信號下降低于50的切口的距離。分析來自每只動物的最少三個圖像。為了比較連接蛋白(cormexinprotein)的水平，從每個傷口的不同切片獲得真皮或表皮的6個單光學斷面圖像。對于對照和糖尿病組，激光功率、針孔、增益/偏置以及物鏡所有的參數保持不變。與在Saitongdee等人(2000)(上文)中一樣，利用ImageJ軟件(NIH)來量化連接蛋白表達。設置閥值以檢測具有最小背景噪聲的間隙連接斑塊，然后對于所有圖像保持不變。對于每個圖像記錄連接蛋白斑塊的數目和大小，并且表示為每100μm的表皮或10000μm2的真皮。這種方式已證明比蛋白質印跡更準確，因為它在細胞水平產生關于蛋白表達的信息。蛋白質印跡將不能區別表皮和真皮細胞或檢測與傷口邊緣的鄰近效應。利用這種方式，在受傷后一天或兩天，能夠量化在傷口邊緣(WE)區以及在離開500μm(AD)區中角質細胞中的連接蛋白水平。在受傷后的第5天，新生表皮的前沿(LE)的另外的區域也被成像。利用LeicaDMLFS顯微鏡并借助于DC300F數碼相機，獲得H&E染色的圖像。先前(QiuC，etal.(2003)上文)已詳細地描述了再上皮化率的測量結果。利用威氏配對符號秩次檢驗(ffilcoxonmatched-pairssigned-rankstest)，檢驗了治療之間的所有數值差異的顯著性，如在Statview5.0.1.中所實施的。圖IA和圖IB示出了在誘導糖尿病以后的第2周(圖1A)和第8周(圖1B)在正常和STZ糖尿病大鼠皮膚中的連接蛋白43和26染色。圖表示出了在表皮和真皮中的斑塊數目。在糖尿病表皮中連接蛋白43和連接蛋白26染色被顯著降低，而在真皮中早在誘導糖尿病后的兩周連接蛋白43染色被增加，并且在第8周沒有進一步的變化。圖IC示出了在對照C，以及糖尿病D皮膚中，在第8周，典型的連接蛋白43和連接蛋白26免疫染色的圖像，其中箭頭表示表皮和真皮之間的邊界。比例條(scalebar)25μm0圖ID示出了間隙連接持久染料，LuciferYellow，在對照和糖尿病大鼠的表皮和真皮中，在5分鐘內移動的距離的量化。在糖尿病表皮中染料轉移被顯著降低，但在糖尿病真皮中則被顯著增加。通常，在表皮的基底層、以及在真皮成纖維細胞、毛囊、血管和附屬物(appendage)中發現點狀連接蛋白43免疫染色(圖IA至圖1D)。然而，在糖尿病性皮膚中，就間隙連接斑塊的大小和數目而論，在表皮中，連接蛋白43染色被顯著降低(圖1A)。在糖尿病表皮中，在表皮上層中的連接蛋白26的染色類似地被顯著降低(圖1A)。然而，這不是響應糖尿病的連接蛋白的全局負調節，因為在真皮成纖維細胞中觀察到對比效應；其中，觀察到連接蛋白43陽性斑塊大小和數目的明顯增加。在STZ誘導糖尿病后的兩周和8周的皮膚中觀察到對連接蛋白表達的類似效應(圖1B)。為了評估在糖尿病表皮和真皮中的細胞間通信，檢查了間隙連接持久染料LuciferYellow在5分鐘內通過組織的轉移程度。這揭示了，在糖尿病表皮中顯著降低的通信，但在真皮中顯著增強的通信(圖1D)，這與連接蛋白表達的變化一致。已報道，在人糖尿病成纖維細胞中，連接蛋白43蛋白的表達升高和通信增加(AbdullahKM，etal.(1999)Endocrine10:35-41.)以及在腎系統(ZhangJ，HillCE.(2005)KidneyInt.681171-1185.)和膀胱(PoladiaDP，etal.(2005)ActaDiabetol.42147-152.))中已注意到不同連接蛋白對糖尿病的混合反應。圖2A至圖2D示出了在對照和糖尿病表皮中在損傷以后的再上皮化率以及連接蛋白43和連接蛋白26蛋白水平的反應。受傷后第一天和第二天，在傷口邊緣(WE)的表皮內和鄰近(AD)表皮(離開500μm)通過計數斑塊來量化染色(圖2A)。在第五天，量化在新生表皮的前沿(LE)處的另外的區并且也包括其數據。與對照(C)相比，在所有時間點受傷后的第一天、第二天以及第五天，在糖尿病大鼠(D)中再上皮化率顯著降低(圖2B)。在損傷以后的最初24小時內，在TO區中的連接蛋白43染色通常降低，但在糖尿病性皮膚中它顯著增加，在2dpw以前返回到近對照水平，并且在所有三個區5dpw發現顯著降低的水平(圖2C)。連接蛋白26對損傷的正常反應是增加WE中的染色水平，并且這在Idpw發生在對照和糖尿病動物中(圖2D)。然而，在2dpw，在糖尿病性皮膚中，在WE和AD區觀測到連接蛋白26染色被顯著提高，僅在5dpw在這些區中顯著降低。圖3a至圖3f以及圖3a'至圖3f示出了在傷口愈合過程中在對照和糖尿病性皮膚的表皮傷口邊緣，連接蛋白43(a、a'、c、c'、e、e')以及連接蛋白26(b、b'、d、d'、f、f')染色(綠色)和核染色(藍色)。在第一天，在對照大鼠的前沿角質細胞中連接蛋白43蛋白表達被負調節(圖3a)，但在糖尿病動物中在該區域已被正調節，其表現為腫脹(swollen)(圖3a')。在對照(圖3b)和糖尿病(圖3b')表皮中，可以觀測到連接蛋白26類似地正調節。在第二天，在糖尿病前沿角質細胞中，連接蛋白43染色已減少(圖3c')并類似于對照的連接蛋白43染色(圖3c)，而在所有糖尿病角質細胞中連接蛋白26已持續增加(圖3d')至比對照顯著更高的水平(圖3d)。在受傷后的第五天，對照(圖3e)和糖尿病(圖3e')的新生表皮在角質細胞之間顯示非常少的點狀連接蛋白43染色，而與對照傷口(圖3f)相比，在糖尿病性傷口(圖3f’)中連接蛋白26染色被少量降低。箭頭表示傷口邊緣。比例條a、c、e,50μm,b、d、f，100μm。為了確定連接蛋白表達對損傷的動態響應，在受傷后的第一天和第二天，量化了在傷口邊緣(WE)和在鄰近區(離開500μπι)(AD)在角質細胞中的連接蛋白染色，而在五天以后對前沿(LE)角質細胞(圖2Α)進行成像。受傷后一天，與AD相比，發現在TO區中對照角質細胞中的連接蛋白43染色顯著減少(圖2C、圖3a以及圖3a')。形成鮮明對比，在糖尿病動物中，與AD相比，發現在TO中連接蛋白43染色顯著增加。這相反于正常傷口愈合反應并且是出人意外的，因為在完整的糖尿病性皮膚中連接蛋白43水平被顯著降低。在糖尿病和對照皮膚中，連接蛋白26的動態反應是類似的，其中在WE區中染色顯著增加(圖2D、圖3b以及圖3b‘)，雖然，在糖尿病性皮膚中，連接蛋白26染色的提高并不限于WE區(如在對照中)，而是延伸一定距離進入AD區，這意味著對損傷的反應的更大擴散。此外，發現在傷口邊緣的角質細胞在糖尿病組織中形成增厚球狀物，而在對照中它們在緩慢地向前移動以閉合傷口以前會變薄。兩天對照傷口開始再上皮化(閉合12%)，但糖尿病性傷口被延緩(閉合5%)，僅最近采用遷移形態。伴隨這種糖尿病角質細胞形狀變化，在WE區內存在連接蛋白43染色的顯著減少，其通過該階段類似于對照(圖2C、圖3c以及圖3c')。然而，在糖尿病性皮膚傷口中，在WE和AD區中，連接蛋白26染色的水平均持續升高(圖2D、圖3d以及圖3d‘)，這表明對損傷的更廣泛的組織反應。在第五天，在糖尿病和對照組中再上皮化均在順利進行，雖然糖尿病性傷口被顯著延緩(與對照的33%相比，閉合20%;P<0.008；威氏配對符號秩次檢驗；圖2C)。在糖尿病和對照組中，均可以清楚地看到LE角質細胞包含很少連接蛋白43染色。在TO和AD區中，連接蛋白43染色顯著上升，但在糖尿病性皮膚中較少，其與完好皮膚一樣，比對照表達更少的連接蛋白43(圖2C、圖3e以及圖3e')。在該階段，在糖尿病和對照皮膚中，在LE中的連接蛋白26染色被類似地提高(圖2D、圖3f以及圖3f，)。在糖尿病TO和AD區中先前提高的連接蛋白26染色返回到更正常的水平。在對照和糖尿病動物中，到第十天，當在增生、過度增厚表皮中可以看到高水平的連接蛋白43時，再上皮化均是完全的。圖4A至圖4C示出了與連接蛋白43正義寡脫氧核苷酸對照(“sODN”)相比，連接蛋白43反義寡脫氧核苷酸(“Cx43as0DN”)治療對連接蛋白43表達(受傷后一天)的影響以及對再上皮化率(在一、二以及五天)的影響。在糖尿病性傷口邊緣ldpw，在腫脹表皮球狀物中可以看到升高水平的連接蛋白43染色(綠色點)(圖4A)。然而，通過用連接蛋白43as0DN進行治療可以防止連接蛋白43蛋白表達的這種提高，這還導致形成更薄的角質細胞層，其似乎更象對照動物而不是細胞的球狀物(圖4B)。治療在用asODN或對照sODN的對照和糖尿病性皮膚中的傷口對導致在asODN施加以后在檢查的所有時間點使再上皮化率加倍(圖4C)。糖尿病性asODN治療的皮膚的再上皮化率在Idpw和2dpw近似于sODN治療的對照皮膚的再上皮化率，但在5dpw顯著更快。比例條50μm。鑒于已觀察到糖尿病性傷口中的連接蛋白免疫染色、間隙連接通信以及形態響應的這些異常模式，通過用連接蛋白43特異性反義凝膠(在損傷時施加至傷口)防止增加來評估在糖尿病WE角質細胞中連接蛋白43蛋白的異常增加的影響。這有效地防止了連接蛋白43的增加(圖4A)，并且還改善了傷口愈合率(其加倍)，從而達到未治療的對照水平或更高(圖4B)，雖然在對照大鼠的反義治療傷口中愈合率甚至更高。借此糖尿病改變連接蛋白表達的機制(其對于不同的連接蛋白具有不同影響)是未知的。高血糖癥和/或由高血糖癥誘導的氧化應激已與糖尿病的其他并發癥的發展有關，如神經病禾口血管病(AmericanDiabetesAssociation(1999)Consensusdevelopmentconferenceondiabeticfootwoundcare:7_8April1999,Boston,Massachussets)。已報道，在各種不同細胞類型中，高葡萄糖和氧化應激均體外改變連接蛋白表達和/或間隙連接通信(FukudaT,etal.(2000)J.Gastroenterol35:361_368；ChoJH,etal.(2002),Carcinogenesis.Jul；23(7)1163-9；RouachN,etal.(2004)Glia.1；45(1):28-38)，并且已知連接蛋白43和連接蛋白26具有不同的啟動子(HennemannH，etal.(1992)Eur.J.CellBiol.58(1):81_9)；ChenZQ,etal.(1995)JBiolChem.270(8)3863-8)。然而，在大鼠中早在誘導糖尿病以后一周并在神經病或血管病發展以前，已顯示受損的傷口愈合(WitteMB,etal.(2002)Br.J.Surg.891594-1601)；ShiHP,etal.(2003)WoundRepairRegen.11198-203)。因此，在兩周內在這些實驗中觀察到的變化很可能是糖尿病狀態的直接后果而不是長期糖尿病并發癥的繼發性后果。一個重要發現是在糖尿病的表皮傷口邊緣中連接蛋白43的異常正調節。這具有以不同方式影響傷口閉合過程的潛力。已提出，在再生表皮內通信區室(communicationcompartments)的形成在傷口愈合中起作用(MartinP(1997)Science276:75-81)；LampePD,etal.(1998)JCellBiol.143(6)1735-47；HodginsM(2004)J.Invest.Dermatol.122commentary)。在正常條件下通過在前沿細胞中表達連接蛋白26和除去連接蛋白43可以有效地產生區室化(compartmentalization)，因為這些連接蛋白并不彼此形成連接。因此，在糖尿病中傷口愈合的延遲可以反映連接蛋白43表達負調節到可以發生這樣的區室化的程度所需要的另外的時間。可替換地，已知連接蛋白43的C-尾與細胞骨架成分或與P120ctn/RhOGTP酶相互作用，所以連接蛋白43的負調節可以是在傷口邊緣改變角質細胞的能動性所必要的，從而使它們可以遷移并閉合傷口(WeiCJ,etal.(2004)AnnuRevCellDevBiol.20:811_38)。在這點上，值得注意的是，在受傷后一天，當它們的連接蛋白43表達較高時，糖尿病角質細胞在傷口邊緣形成增厚球狀物而不是漸平以及開始緩慢地向前移動穿過傷口。本文中我們已經表明，在受傷時通過單次施加連接蛋白43特異性反義凝膠降低連接蛋白43表達可以使整個過程(從最初遷移到完全傷口閉合)以正常和更高速率發生，盡管糖尿病狀態持續存在。因此，抗連接蛋白寡核苷酸治療，例如，反義治療，具有相當大的潛力作為新途徑來治療不以預期速率愈合的傷口，其中包括在糖尿病及其他患者中的慢性傷口。實施例2基于有同情心的使用，本發明已成功地用來治療患有較大慢性傷口的人受治療者，在這種情況下為血管(脈管)炎性潰瘍。患有基本周圍血管疾病的49歲男性首先呈現并發癥，其產生自非閉合腿部傷口。該患者在創傷后已經歷左膝下截肢，由于摔倒的結果，該傷口隨后裂開。在大于6個月的時間內，傷口對所有形式的已建立的護理沒有反應。該患者經歷多種局部治療，以試圖愈合傷口，包括施用生長因子、抗微生物敷料、VAC(真空輔助閉合)、異種移植物敷料，沒有顯著變化。然后該患者摔倒并進一步損害傷口部位。其后是多次手術清創和更換異種移植物。傷口的大小持續增加并被認為已開始威脅肢體。因此，由于傷口特性以及截肢的水平和類型，認為患者除了經受膝蓋以上截肢以外沒有可替換的治療選擇。FDA的皮膚學部門(DermatologyDivision)批準申請人的實驗藥物(SEQIDNO1)在EmergencyUseIND下可用于該患者。隨后用在pluronic凝膠中的SEQIDNO1的2mL的20μM制品來治療傷口(總劑量400μg)。在施用時傷口為大約7cmX5cm(約35cm2)，其中深度為大約3-4_。因此，給予約12μg/cm2的SEDIDNO:1。包扎傷口并保持覆蓋7天時間。當在第7天拆開時，醫生報道，水腫和紅斑均不再存在并且傷口似乎已開始形成肉芽，雖然尺寸(長度和寬度)在該階段近似相同。進行第二次治療(總劑量400yg)。在該治療以后，傷口持續愈合并且隨后報道病變的深度為lmm(3至4倍降低)，并在所有側面有1-1.5cm的新組織。傷口是清潔的并且肉芽組織的外觀是“健康的”。如果其他組織，例如，大腿組織可以用于移植，則認為患者“準備好移植”。然而，由于他的基本周圍血管疾病，因此并不認為這是用于該患者的選擇。在這種實驗治療以后，沒有明顯的安全問題或沒有報道安全問題。在兩個月再次對患者進行評估，并且傷口的大小已持續減小。傷口的近似大小已減小7倍，至5cm2，并且評估傷口的醫務人員得出的結論是，它將繼續進行至完全閉合。確定不再需要膝蓋以上截肢。實施例3本發明已成功用來治療具有靜脈性慢性傷口的人受治療者。一位患有基本周圍水腫的86歲男性呈現起因于5個月之久的不愈合慢性靜脈性潰瘍的并發癥。在該期間傷口對所有形式的在社區已建立的護理沒有反應。患者經歷多種局部治療以試圖愈合傷口，包括抗菌劑和施用壓迫繃帶以減少水腫。在該期間，傷口的大小持續增大。患者已制定計劃進行膝置換手術，但被告知在有開放性慢性傷口存在的情況下不能進行該手術。因此，由于傷口的特性，其在傷口床內以及尤其是在邊緣還發炎和腫脹，患者被看作同情使用病例并且獲得知情同意以便治療該患者。隨后用在Pluronic凝膠中的200μL的SEQIDNO:1的10μM制品治療傷口(總劑量為約20μg)。在施用時傷口為約3cmX3cm(約9cm2)。其中深度為約2_3mm。因此，施用的總劑量約為2.2μg/cm2。然后用非粘著敷料包扎傷口24小時。當在24小時拆開時，炎癥和腫脹不再存在并且傷口正干燥。然后拆開傷口直到治療后72小時，其時先前非愈合皮膚潰瘍傷口被完全干燥并且在整個傷口上已形成痂。隨后包扎傷口并在一周后再檢查，其時傷口尺寸(長度和寬度)已顯著減小，炎癥和腫脹仍然不存在，并且傷口正愈合以及逐漸趨向閉合。在對傷口的進一步損傷(其已導致朝向閉合的停止)以后一個月，進行第二次治療(總劑量為大約20yg的SEQ.ID.N0:1)。在該治療以后，施加壓迫繃帶以減少水腫，并且傷口快速開始再次愈合。病變(或損傷，lesion)的深度、寬度和長度減小，并且在傷口愈合處的新皮膚的外觀是健康的。在這種實驗治療以后，沒有明顯的安全問題或沒有報道安全問題。在第6周再次對患者進行評估。傷口的大小已減小至最初大小的大約四分之一，并正逐步閉合。表2表2A人連接蛋白43，來自基因庫登錄號(GenBankAccessionNo.)M65188(SEQ.ID.NO13)1ggcttttagcgtgaggaaagtaccaaacagcagcggagttttaaactttaaatagacagg61tctgagtgcctgaacttgccttttcattttacttcatcctccaaggagttcaatcacttg121gcgtgacttcactacttttaagcaaaagagtggtgcccaggcaacatgggtgactggagc181gccttaggcaaactccttgacaaggttcaagcctactcaactgctggagggaaggtgtgg241ctgtcagtacttttcattttccgaatcctgctgctggggacagcggttgagtcagcctgg301ggagatgagcagtctgcctttcgttgtaacactcagcaacctggttgtgaaaatgtctgc361tatgacaagtctttcccaatctctcatgtgcgcttctgggtcctgcagatcatatttgtg421tctgtacccacactcttgtacctggctcatgtgttctatgtgatgcgaaaggaagagaaa481ctgaacaagaaagaggaagaactcaaggttgcccaaactgatggtgtcaatgtggacatg541cacttgaagcagattgagataaagaagttcaagtacggtattgaagagcatggtaaggtg601aaaatgcgaggggggttgctgcgaacctacatcatcagtatcctcttcaagtctatcttt661gaggtggccttcttgctgatccagtggtacatctatggattcagcttgagtgctgtttac721acttgcaaaagagatccctgcccacatcaggtggactgtttcctctctcgccccacggag781aaaaccatcttcatcatcttcatgctggtggtgtccttggtgtccctggccttgaatatc841attgaactcttctatgttttcttcaagggcgttaaggatcgggttaagggaaagagcgac901ccttaccatgcgaccagtggtgcgctgagccctgccaaagactgtgggtctcaaaaatat961gcttatttcaatggctgctcctcaccaaccgctcccctctcgcctatgtctcctcctggg1021tacaagctggttactggcgacagaaacaattcttcttgccgcaattacaacaagcaagca1081agtgagcaaaactgggctaattacagtgcagaacaaaatcgaatggggcaggcgggaagc1141accatctctaactcccatgcacagccttttgatttccccgatgataaccagaattctaaa1201aaactagctgctggacatgaattacagccactagccattgtggaccagcgaccttcaagc1261agagccagcagtcgtgccagcagcagacctcggcctgatgacctggagatctag表2B人連接蛋白43(SEP.ID.NO14)1atgggtgactggagcgccttaggcaaactccttgacaaggttcaagcctactcaactgct61ggagggaaggtgtggctgtcagtacttttcattttccgaatcctgctgctggggacagcg121gttgagtcagcctggggagatgagcagtctgcctttcgttgtaacactcagcaacctggt181tgtgaaaatgtctgctatgacaagtctttcccaatctctcatgtgcgcttctgggtcctg241cagatcatatttgtgtctgtacccacactcttgtacctggctcatgtgttctatgtgatg301cgaaaggaagagaaactgaacaagaaagaggaagaactcaaggttgcccaaactgatggt361gtcaatgtggacatgcacttgaagcagattgagataaagaagttcaagtacggtattgaa421gagcatggtaaggtgaaaatgcgaggggggttgctgcgaacctacatcatcagtatcctc481ttcaagtctatctttgaggtggccttcttgctgatccagtggtacatctatggattcagc541ttgagtgctgtttacacttgcaaaagagatccctgcccacatcaggtggactgtttcctc601tctcgccccacggagaaaaccatcttcatcatcttcatgctggtggtgtccttggtgtcc661ctggccttgaatatcattgaactcttctatgttttcttcaagggcgttaaggatcgggtt721aagggaaagagcgacccttaccatgcgaccagtggtgcgctgagccctgccaaagactgt781gggtctcaaaaatatgcttatttcaatggctgctcctcaccaaccgctcccctctcgcct841atgtctcctcctgggtacaagctggttactggcgacagaaacaattcttcttgccgcaat901tacaacaagcaagcaagtgagcaaaactgggctaattacagtgcagaacaaaatcgaatg961gggcaggcgggaagcaccatctctaactcccatgcacagccttttgatttccccgatgat1021aaccagaattctaaaaaactagctgctggacatgaattacagccactagccattgtggac1081cagcgaccttcaagcagagccagcagtcgtgccagcagcagacctcggcctgatgacctg1141gagatctag本文參考或提及的所有專利、出版物、科學文章、網站、以及其他文獻和材料都表示本發明所屬
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技術人員的技術水平，因此每個這樣的參考文獻和材料以引用方式結合于本文，結合的程度如同其各自以全文方式引用或以全文方式列在本文中一樣。申請人保留將任何和全部來自任何這樣的專利、出版物、科學文獻、網站、可得到的電子信息及其他參考材料或文獻的材料和信息自然結合于本說明書中的權利。本文描述的具體方法和組合物表示優選的實施方式并且是示例性的，并不作為對本發明范圍的限制。在考慮本說明書的基礎上，本領域技術人員將會想到其他目的、方面、以及實施方式，并且它們都包括在如權利要求的范圍所限定的本發明的精神內。對于本領域技術人員來說，顯而易見的是，在不偏離本發明的范圍和精神的情況下，可以對本文披露的發明進行各種替換和更改。本文說明性地描述的發明可以適當地在沒有任何要素或多種要素、或限制或多種限制(其不是本文必要的專門批露的)的情況下加以實施。因此，例如，在本文的每種情況下，在本發明的實施方式或實施例中，術語“包含”、“基本上由……組成”和“由……組成”中的任一個在本說明書中都可以由其他兩個術語中的任一個代替。此外，術語“包含”、“包括”、“含有”等都可以廣義地理解并且沒有限制。本文說明性地描述的方法和過程可以適當地以不同的步驟順序加以實施，并且它們不必限于在本文中或在權利要求中示出的步驟的順序。此外，如在本文中和所附權利要求中所使用的，除非上下文另有明確指明，否則單數形式“一個”、“一種”以及“該”包括復數形式。在任何情況下，本專利不可以解釋為限于本文具體披露的具體實施例或實施方式或方法。在任何情況下，本專利決不解釋為受到任何審查員或任何其他官方或專利和商標局員工的陳述的限制，除非這樣的陳述是明確的而且沒有規定或保守表達地適用于申請人的答辯。已采用的術語和表達被用作描述而不是限制的術語，而且這樣的術語和表達的使用也不是傾向于排除任何表現和描述的等同特征或其部分，但在本發明要求保護的范圍內，各種修改都被認為是可能的。因此，可以理解，雖然本發明已經通過優選的實施方式和可選的特征明確地公開，但是本領域技術人員可以采用本文公開的構思的修改和變更，并且這樣的修改和變更被認為在如由所附權利要求所限定的本發明的范圍內。這里已經寬泛且一般地描述了本發明。每個更窄的種類和落入批露類的亞類都構成本發明的一部分。這包括本發明的附帶條件或消極限制的一般描述，其從類屬中去除了任何主題，而不論去除內容是否在本文中明確地列舉出來。其他的實施方式在所附的權利要求內。另外，在根據馬庫什類描述本發明的特征或方面的情況下，本領域的技術人員將認識到，本發明因此也能夠根據任何馬庫什類的個別成員或亞組成員來加以描述。權利要求一種對具有不以預期速率愈合的傷口的受治療者進行治療的方法，所述方法包括將有效量的抗連接蛋白43多核苷酸給予所述傷口。2.根據權利要求1所述的方法，其中，所述抗連接蛋白43多核苷酸是連接蛋白43反義多核苷酸。3.根據權利要求1所述的方法，其中，所述抗連接蛋白43多核苷酸是RNAi多核苷酸。4.根據權利要求1所述的方法，其中，所述抗連接蛋白43多核苷酸是siRNA多核苷酸。5.根據權利要求1所述的方法，其中，給予所述抗連接蛋白43多核苷酸至少約0.5小時、至少約1-2小時、至少約2-4小時、至少約4-6小時、或至少約6-8小時。6.根據權利要求1所述的方法，其中，所述傷口是裂開傷口。7.根據權利要求1所述的方法，其中，所述傷口是延遲或不完全愈合傷口。8.根據權利要求1所述的方法，其中，所述傷口是慢性傷口。9.根據權利要求1所述的方法，其中，所述傷口是血管炎性潰瘍。10.根據權利要求1所述的方法，其中，所述傷口是靜脈性潰瘍或靜脈淤滯性潰瘍。11.根據權利要求1所述的方法，其中，所述傷口是動脈性潰瘍。12.根據權利要求1所述的方法，其中，所述傷口是壓力性潰瘍或褥瘡性潰瘍。13.根據權利要求1所述的方法，其中，所述傷口是糖尿病性潰瘍。14.根據權利要求1所述的方法，其中，所述傷口是由創傷引起的皮膚潰瘍。15.根據權利要求1所述的方法，其中，所述傷口是由燒傷引起的皮膚潰瘍。16.根據權利要求1所述的方法，其中，所述受治療者是糖尿病患者。17.根據權利要求1所述的方法，其中，所述受治療者是人。18.根據權利要求1所述的方法，其中，所述受治療者是非人動物。19.根據權利要求18所述的方法，其中，所述動物是馬。20.根據權利要求18所述的方法，其中，所述動物是狗。21.根據權利要求18所述的方法，其中，所述動物是貓。22.根據權利要求1所述的方法，其中，所述抗連接蛋白43多核苷酸以每平方厘米傷口大小約1至約100ug范圍的量給予。23.根據權利要求22所述的方法，其中，重復給予所述抗連接蛋白43多核苷酸。24.根據權利要求22所述的方法，其中，重復給予所述抗連接蛋白43多核苷酸每周約一次，由此促進傷口愈合。25.一種對具有延遲愈合、不完全愈合、或慢性傷口的受治療者進行治療的方法，所述方法包括將連接蛋白43反義多核苷酸給予所述傷口，由此在一段持續時間內對連接蛋白43表達進行負調節。26.根據權利要求25所述的方法，其中，對連接蛋白43表達進行負調節至少約0.5小時、至少約1-2小時、至少約2-4小時、至少約4-6小時、或至少約6-8小時。27.一種對具有延遲愈合、不完全愈合或慢性傷口的受治療者進行治療的方法，所述方法包括將連接蛋白43反義多核苷酸給予傷口區域，由此將在所述傷口區域中的連接蛋白43水平降低至少約0.5小時、至少約1-2小時、至少約2-4小時、至少約4-6小時、或至少約6-8小時。28.一種在具有延遲愈合、不完全愈合或慢性傷口的受治療者中促進傷口愈合的方法，所述方法包括將治療有效量的連接蛋白43反義多核苷酸給予所述傷口，所述連接蛋白43反義多核苷酸的量有效地在一段持續時間內負調節連接蛋白43表達。29.根據權利要求28所述的方法，其中，對連接蛋白43表達進行負調節至少約0.5小時、至少約1-2小時、至少約2-4小時、至少約4-6小時、或至少約6-8小時。30.一種在具有延遲愈合或慢性傷口的受治療者中促進傷口愈合的方法，所述方法包括將治療有效量的連接蛋白43反義多核苷酸給予傷口區域，所述連接蛋白43反義多核苷酸的量有效提高在所述傷口區域中的再上皮化率。31.根據權利要求30所述的方法，其中，以持續釋放制劑給予所述反義多核苷酸。32.根據權利要求30所述的方法，其中，在一段持續時間內給予所述多核苷酸。33.根據權利要求30所述的方法，其中，所述反義多核苷酸有效降低連接蛋白43水平至少約0.5小時、至少約1-2小時、至少約2-4小時、至少約4-6小時、或至少約6-8小時。34.一種促進皮膚傷口的再上皮化的方法，所述方法包括將以有效促進再上皮化的量的抗連接蛋白43多核苷酸給予具有延遲愈合、不完全愈合或慢性傷口的受治療者。35.根據權利要求34所述的方法，其中，所述抗連接蛋白43多核苷酸是連接蛋白43反義多核苷酸。36.一種在具有延遲愈合、不完全愈合或慢性傷口的受治療者中促進傷口愈合的方法，所述方法包括給予包含連接蛋白43反義多核苷酸和連接蛋白31.1反義多核苷酸的藥物組合物。37.一種在具有傷口的糖尿病受治療者中提高傷口愈合速率的方法，所述方法包括給予所述受治療者有效量的抗連接蛋白43多核苷酸。38.根據權利要求37所述的方法，其中，所述抗連接蛋白43多核苷酸是RNAi多核苷酸。39.根據權利要求37所述的方法，其中，所述抗連接蛋白43多核苷酸是siRNA多核苷酸。40.根據權利要求37所述的方法，其中，所述抗連接蛋白43多核苷酸是連接蛋白43反義多核苷酸。41.根據權利要求37所述的方法，其中，所述多核苷酸具有約18至約32個核苷酸。42.根據權利要求41所述的方法，其中，所述多核苷酸是寡脫氧核苷酸。43.一種在具有傷口的糖尿病受治療者中提高傷口愈合速率的方法，所述方法包括將有效減少所述傷口或傷口區域中的異常連接蛋白43調節的量的抗連接蛋白43多核苷酸給予所述受治療者。44.根據權利要求43所述的方法，其中，所述抗連接蛋白43多核苷酸是RNAi多核苷酸。45.根據權利要求43所述的方法，其中，所述抗連接蛋白43多核苷酸是siRNA多核苷酸。46.根據權利要求43所述的方法，其中，所述抗連接蛋白43多核苷酸是連接蛋白43反義多核苷酸。47.根據權利要求46所述的方法，其中，所述連接蛋白43反義多核苷酸是連接蛋白43寡脫氧核苷酸。48.根據權利要求46所述的方法，其中，所述多核苷酸具有約18至約32個核苷酸。49.一種在具有傷口的糖尿病受治療者中改善傷口閉合的方法，所述方法包括給予所述受治療者有效量的抗連接蛋白43多核苷酸。50.根據權利要求49所述的方法，其中，所述抗連接蛋白43多核苷酸是RNAi多核苷酸。51.根據權利要求49所述的方法，其中，所述抗連接蛋白43多核苷酸是siRNA多核苷酸。52.根據權利要求49所述的方法，其中，所述抗連接蛋白43多核苷酸是連接蛋白43反義多核苷酸。53.根據權利要求49所述的方法，其中，所述連接蛋白43反義多核苷酸具有約18至約32個核苷酸。54.根據權利要求49所述的方法，其中，所述多核苷酸是寡脫氧核苷酸。55.根據權利要求1、25、27、28、30、34、36、37、43以及49中任一項所述的方法，其中，所述反義多核苷酸包括選自SEQ.ID.NO.:1或2的序列。56.根據權利要求1、25、27、28、30、34、36、37、43以及49中任一項所述的方法，其中，所述反義多核苷酸與SEQ.ID.NO.:1或2具有至少約70%的同源性。57.根據權利要求1、25、27、28、30、34、36、37、43以及49中任一項所述的方法，其中，所述連接蛋白43反義多核苷酸在中等至高度嚴格條件下雜交于連接蛋白43mRNA。58.一種包括抗連接蛋白多核苷酸的合成或天然存在的傷口愈合基質。59.根據權利要求58所述的傷口愈合基質，其中，所述抗連接蛋白多核苷酸是連接蛋白43反義多核苷酸。60.根據權利要求58所述的傷口愈合基質，其中，所述抗連接蛋白多核苷酸是寡脫氧核苷酸。61.根據權利要求60所述的傷口愈合基質，其中，所述抗連接蛋白寡脫氧核苷酸是連接蛋白43反義寡脫氧核苷酸。全文摘要本發明涉及用于治療不以預期速率愈合的傷口，包括延遲愈合傷口、不完全愈合傷口、以及慢性傷口的連接蛋白調節，以及有關的方法、組合物和制品。文檔編號C12N15/113GK101835476SQ200780051207公開日2010年9月15日申請日期2007年12月11日優先權日2006年12月11日發明者布拉德福德·J·杜夫特,戴維·L·貝克爾,科林·R·格林申請人:科達治療公司