Sdf-1結合性核酸的制作方法

專利名稱：：Sdf-1結合性核酸的制作方法
技術領域：
：本發明涉及結合CXC趨化因子基質細胞衍生因子1(SDF-1)的核酸，及其在藥物制備中的用途及其在診斷劑制備中的用途。
背景技術：
：趨化因子是一個8-14kDa的結構相關、結合肝素的堿性小蛋白質的家族。可將其功能分為促炎功能、內環境穩定功能或雙重功能(Moser，Wolfetal.2004)。炎性趨化因子受病原體、細胞因子或生長因子誘導，并將效應白細胞募集到感染、炎癥、組織損傷和腫瘤部位。所述趨化因子調控白血球細胞(白細胞)的募集、活化和增生(SchallandBacon1994;Springer1995;Baggiolini1998)。趨化因子選擇性誘導嗜中性粒細胞、嗜酸細胞、嗜堿細胞、單核細胞、巨噬細胞、肥大細胞、T細胞和B細胞的趨化性。除趨化效應之外，其還可在應答細胞中選擇性發揮其他作用，如改變細胞形狀，瞬時升高胞內游離鈣離子濃度，去粒，上調整聯蛋白，形成生物活性脂質(白三烯、前列腺素、血栓烷)，或呼吸爆發(通過釋放活性氧而破壞致病微生物或腫瘤細胞)。因此，趨化因子通過激發其他促炎介質的釋放及白細胞向感染或炎癥灶的趨化和外滲來引發炎性應答的逐步升級。而另一方面，內環境穩定趨化因子(homeostaticchemokine)主要在骨髓和淋巴樣組織組織中表達，且參與血細胞生成、免疫監督和適應性免疫應答(Godessart2005)。根據四個保守半胱氨酸殘基中前兩個的排列方式將趨化因子分成四類CC或p-趨化因子(例如其中所述半胱氨酸串聯)，CXC或a-趨化因子(其中所述半胱氨酸被一個額外的氨基酸殘基隔開)，XC或Y趨化因子(只具有一個二硫橋)(是迄今為止淋巴細胞趨化因子/XCL1的唯一代表)及CX3C-趨化因子(以在所述半胱氨酸間有3個氨基酸殘基為特征)(僅一個成員，膜結合的CXXXC趨化因子(fractalkin))(Bazan，Baconetal.1997)。CXC趨化因子(尤其是在其氨基末端帶有氨基酸序列ELR的CXC趨化因子)主要作用于嗜中性粒細胞。對嗜中性粒細胞具有活性的CXC趨化因子的實例是IL-8/CXCL8、GROa/CXCLl、GROp/CXCL2和GROy/CXCL3、NAP-2/CXCL7、ENA-78/CXCL5、SDF-1/CXCL12和GCP-2/CXCL6。CC趨化因子作用于更多種類的白細胞，如單核細胞、巨逸細胞、嗜酸細胞、嗜堿細胞及T和B淋巴細胞(Oppenheim,Zachariaeetal.1991;MillerandKrangel1992;Baggiolini，Dewaldetal.1994;Jose,Griffiths-Johnsonetal.1994;Ponath，Qinetal.1996)。所述趨化因子的實例是I-309/CCLl、MCP-1/CCL2、MCP畫2/CCL8、MCP畫3/CCL7、MCP-4/CCL13、MIP-la/CCL3和MIP誦1(3/CCL4、RANTES/CCL5和嗜酸細胞活化趨化因子/CCL11。趨化因子通過屬于七跨膜G蛋白偶聯受體(GPCRs;(Murphy,Baggiolinietal.2000)超家族的受體起作用。一般而言，趨化因子和趨化因子受體的相互作用是趨于混雜的，因為一個趨化因子可結合許多趨化因子受體，而反過來，單個趨化因子受體也可與幾種趨化因子相互作用。一些已知的CXC趨化因子的受體包括CXCRl(結合GROa、GCP-2和IL-8)、CXCR2(結合包括GROa、GRO卩、GROy、ENA-78和IL-8在內的趨化因子)、CXCR3(結合包括PF4、MIG、IP-10和I-TAC在內的趨化因子)、CXCR4(迄今為止發現的唯一響應SDF-1而產生信號的CC趨化因子受體)和CXCR5(已發現響應BCA-1而產生信號)(Godessart2005)。SDF-1(基質細胞衍生因子-l;別名為CXCL12;PBSF[前B細胞生長刺激因子j;TPAR-TPA抑制基因1；SCYB12;TLSF[胸腺淋巴細胞刺激因子；hIRH[肝細胞瘤中減少的人內泌素(intercrine))是不包含IL-8樣趨化因子特有的ELR基序(Salcedo，Wasserman等人1999;Salcedo和Oppenheim2003)的、結合并激活G蛋白偶聯受體CXCR4的血管生長CXC趨化因子。三個研究小組，通過基于當所述趨化因子被基質細胞系PA6表達時刺激早期祖B細胞的能力(Nagas醒，Kikutani等人1994)克隆帶有N末端信號序列的cDNA(Tashiro，Tada等人1993)，或通過從cDNA文庫(從用蛋白質激酶C激活物四十二烷酰巴豆醇乙酸酯(TPA)處理的小鼠胚胎成纖維細胞構建的cDNA文庫)分離所述趨化因子(Jiang，Zhou等人1994)，各自獨立地發現了所述趨化因子。作為可變剪接的結果，存在兩種形式的在C末端帶有4個額外殘基的SDF-l,SDF-la(68個氨基酸)和SDF-ip(Shirozu，Nakano等人1995)。尚不完全清楚這兩種剪接變體的生物學意義。來自不同物種的SDF-1之間的序列保守性是顯著的人SDF-la(SEQ.ID.1)和鼠SDF-la(SEQ.ID.2)實際上相同。僅存在第18位氨基酸由V到I的單個保守改變(Shirozu，Nakanoetal.1995)。區分SDF-1與大多數其他趨化因子的另一個罕見特征是其選擇性。事實上，SDF-1與其受體CXCR4似乎包含單配受體-配體對。存在SDF-1[8-681的NMR結構模型(PDBaccess,1SDF)。發現SDF-1是具有無序N末端區域的單體。與其他趨化因子的差異主要見于疏水核心的包衷和表面電荷分布(Crump,Gongetal.1997)。SDF-1的生理活性因為SDF-1受體CXCR4在白細胞、成熟內皮細胞、內皮細胞、腦細胞和巨核細胞中廣泛表達，所以SDF-1的活性是多效的。所述趨化因子相比迄今已鑒定的任何其他趨化因子，尤其在免疫系統外，表現出最廣泛的生物學功能。SDF-1的最重要的功能效應是將上皮細胞復位(homing)并附著于視網膜的脈絡膜部分的新生血管位點已顯示SDF-1在眼組織的新生血管形成過程中參與將上皮細胞復位到脈絡膜。對所述細胞的確切作用尚處于研究階段，但有假說認為上皮細胞參與迷行血管形成(Seng叩ta，Caballeroetal.2005)。造血作用12成人骨髓中需要有SDF-1來維持造血祖細胞(CD34+)。可將AMD3100(—種選擇性CXCR4拮抗劑)用于造血干細胞移植中的CD34+細胞動員。CD34+細胞在體外和體內沿著由基質細胞產生的SDF畫1梯度遷壽多(Aiuti,Webbetal.1997)。B細胞發育和趨化SDF-1支持前B細胞增生，且促進骨髓祖B細胞生長(Nagasawa，Kikutanietal.1994);其在不作為成熟B細胞的有效趨化劑的情況下誘導前B細胞和祖B細胞(pro-Bcell)的特定遷移，(D'Apuzzo，Rolinketal.1997;Bleul，Schultzeetal.1998)。推測SDF-1在將B細胞定位于次生淋巴組織的過程中發揮重要作用。T細胞趨化SDF-1是最有效的T細胞趨化劑之一；CXCR4存在于多種T細胞亞群上(Bleul,Farzanetal.1996)。胚胎發育SDF-1及其受體CXCR4在胚胎發育過程中必不可少。敲除SDF-1和CXCR4基因的小鼠將死于圍產期；除發生B細胞和骨髓組細胞數減少外，還表現出心臟室間隔缺損或異常小腦發育(Nagasawa,Hirotaetal.1996^Ma，Jonesetal.1998^Zou,Kottmaimetal.1998)。胚胎發生期間的血液發育的正常個體發生過程中也需要SDF-1(JuarezandBendall2004)。HIV感染SDF-1能抑制T細胞嗜性HIV-1進入具有CXCR4的細胞系，且SDF-1的表達可在輔助AIDS發病中發揮重要作用，因為人SDF-1基因的多態性影響AIDS的發病(Bleul，Farzanetal.1996)。SDF-1或其受體CXCR4的表達水平變化或對所述分子的應答變化與許多人類疾病相關，所述人類疾病例如視網膜病(Brooks,Caballeroetal.2004;Butler,Guthrieetal.2005;Meleth，Agronetal.2005);乳腺癌(Muller，Homeyetal.2001;Cabioglu,Sahinetal.2005)、卵巢癌(Scotton，Wilsonetal.2002)、胰腺癌(Koshiba,Hosotanietal.2000)、甲狀腺癌(Hwang,Chungetal.2003)、鼻咽癌(Wang,Wuetal.2005);神經膠質瘤(Zhou,Larsenetal.2002);成神經細胞瘤(Geminder,Sagi-Assifetal.2001);B細胞慢性淋巴細胞白血病(Burger,Tsukadaetal.2000);WHIM綜合征(疣、低丙種球蛋白血癥、感染、先天性骨髓粒細胞缺乏癥)(Gulino，Morattoetal.2004Balabanian，Laganeetal.2005Kawai，Choietal.2005);免疫缺陷綜合征(Arya，Ginsbergetal.1999;Marechal，Arenzana-Seisdedosetal.1999;Soriano,Martinezetal.2002);病理性新生血管形成(Salvucci，Yaoetal.2002;Yamaguchi，Kusanoetal.2003;Grunewald,Avrahametal.2006);炎癥(Murdoch2000;Fedyk，Jonesetal.200"Wang,G,etal.2001);多發性硬化癥(Kr體bholzTheiletal.2006);類風濕性關節炎/骨關節炎(Buckley,Amftetal.2000;Kanbe,Takagishietal.2002;Grassi，Cristinoetal.2004)。已在實驗動物中證明，SDF-1或其受體的拮抗劑可有效阻斷不同來源的人癌細胞的生長和/或轉移擴散，所述不同來源的人癌細胞例如來源于胰腺(Guleng，Tateishietal.2005;Saur，Seidleretal.2005)、結腸(Zeelenberg，Ruuls-VanStalleetal.2003;Guleng，Tateishietal.2005)、乳腺(Muller，Homeyetal.2001;Lapteva,Yangetal.2005)、肺(Phillips,Burdicketal.2003)、成膠質細胞瘤/成髓細胞瘤(Rubin,Kungetal.2003)、前列腺(Sun,Schneideretal.2005)、骨肉瘤(Perissinotto，Cavallonietal.2005)、黑素瘤(Takenaga，Tamamuraetal.2004)、胃(Yasumoto，Koizumietal.2006)、多發性骨髓瘤(Menu,Asosinghetal.2006)的人癌細胞。此夕卜，抗SDF-1療法在動物模型中的視網膜新生血管形成(Butler,Guthrieetal.2005)、腎炎(Balabanian,Coudercetal.2003)和關節炎(Matthys,Hatseetal.2001;Tamamura,Fujisawaetal.2004;DeKlerck，Geboesetal.2005)的預防中發揮有益作用。SDF-1參與眼后部疾病(back-of-the-eyedisease)(例如糖尿病性-f見網膜病(DR)(Fong，Aielloetal.2004)和老年黃斑變性(AMD)(Ambati，Anandetal.2003))的病理過程。這兩種疾病均損傷眼睛，并導致視力逐漸衰退至失明。所述損傷由眼后部的不當血管生長(此過程被稱為脈絡膜新生血管形成(CNV))所致。在CNV過程中，源于脈絡膜的新血管通過布魯赫膜(Bruchmembrane)中的斷裂處遷移進入視網膜下色素上皮(sub-RPE)或視網膜下間隙。所述異常血管可在視網膜下出血(視網膜內出血)或滲漏液體。這可留下傷疤，并可使斑增多，從而扭曲視覺。SDF-1被認為在CNV中通過將內皮前體細胞(EPC)募集至眼而發揮作用。然后這些前體細胞會在迷行血管中成為關鍵的結構組分。糖尿病性視網膜病是糖尿病的主要后遺癥，經常在患有1型和2型糖尿病的患者中發病。美國有約1千6百萬糖尿病患者，其中的近8百萬患有一些形式的糖尿病性視網膜病。如果不治療增生型糖尿病性視網膜病(PDR)，則約60°/。的患者會在5年內單眼或雙眼失明。隨著糖尿病在北美、歐洲和許多新興國家令人擔憂地日益普遍，患者群體也快速增長。例如，糖尿病患者中失明的發生率比普通人群高25倍。此外，糖尿病性視網膜病(DR)是中年受試者中最常見的失明病因，每年占美國所有新病例的至少12%。可通過配制篩選程序來監測糖尿病患者的視力，從而可及時提供如可獲得的治療。對糖尿病性視網膜病的直接原因尚知之甚少，但該病#皮人由下列多個成因的組合所致視網膜血流自調節受損；視網膜細胞內山梨醇蓄積和細胞外液中高級糖基化終產物蓄積。所有這些因素直接或間接與高血糖癥、血流中的糖豐度相關。DR癥狀與AMD癥狀相似。患者損失視網膜細胞，在^L網膜基底膜中發生微動脈瘤(血流)。此外，VEGF、IGF-1及其他血液因子(可能包括SDF-1)吸引新血管細胞，并促進損壞血管的形成。老年黃斑變性(AMD)破壞人的中央視覺。疾病的早期癥狀不明顯，因為癥狀隨患者而異。有時患者僅單眼受到影響。或雙眼視力均減退，但不顯著。疾病導致色覺失真或出錯。在^L野中央常有黑斑。對所述疾病的發病機理(發病過程)尚知之甚少。通常認為AMD15是視網膜最外層的老化。在視網膜中央發生生理變化(也被稱為斑)其為最敏銳視覺所依賴的視網膜部分。濕性AMD始于所述疾病的干性形式的后遺癥。約90%的患者患干性AMD,其導致斑組織變薄和色素沉積紊亂。其余患有所述濕性形式，包括上述出血。所述濕性AMD代表著新型治療劑的理想市場已為55歲以上的人失明的最常見原因，AMD使據估計4%-5%的65-74歲的美國人群和近10%的75歲或更老人群遭受痛苦。僅在美國就已有5百萬患有所述疾病的80歲以上的人，且還有另外5百萬人預期在2020年前受其影響。腫瘤不僅僅是癌細胞聚集塊腫瘤被免疫細胞浸潤是癌癥的特征。許多人類癌癥具有影響所述浸潤的程度和表型及腫瘤生長、存活和遷移及血管發生的復雜的趨化因子網絡。大多數實體瘤包含許多非惡性基質細胞。事實上，有時基質細胞比癌細胞多。癌癥中發現的占優勢的基質細胞是巨噬細胞、淋巴細胞、內皮細胞和成纖維細胞。來自不同癌癥類型的惡性細胞具有不同的趨化因子受體表達傳，但所述SDF-1受體CXCR4最常見于小鼠和人來自至少23個不同類型的人上皮、間充質細胞和造血來源的癌癥的腫瘤細胞表達CXCR4(Balkwill2004)。SDF-1是CXCR4的唯一已知配體。SDF-1除在骨髓和次生淋巴組織中組成型表達外，其還可見于淋巴瘤的原發性肺瘤(Corcione，Ottonelloetal.2000)及神經元和星形細胞系的腦腫瘤中。此外，其以高水平存在于卵巢(Scotton，Wilsonetal.2002)和胰腺癌(Koshiba，Hosotanietal.2000)中及存在于乳腺癌(Muller，Homeyetal.2001)和曱狀腺癌(Hwang，Chungetal.2003)、成神經細胞瘤和血液學惡性腫瘤(Geminder，Sagi畫Assifetal.2001)的轉移灶中。相反，CXCR4在正常乳腺(Muller，Homeyetal.2001)、印巢(Scotton,Wilsonetal.2002)和前歹'j腺上皮(Sun,Schneideretal.2005)中的表達水平;f艮低或無。因此，CXCR4的表達似乎是惡性上皮細胞而非其正常相應細胞的一般特征。抑制腫瘤細胞上的趨化因子-受體信號轉導具有在體內誘導生長停滯或凋亡及預防侵入和轉移的潛能通過siRNA產生的CXCR4減弱(knockdown)中止了乳腺腫瘤的生長(Lapteva，Yangetal.2005);給小鼠靜脈注射用阻止CXCR4表面表達的構建體轉染的T雜交瘤細胞，可使其不再遷移至遠處的器官(Zeelenberg，Ruuls-VanStalleetal.2001);在使用結腸直腸癌細胞的相似實驗中，大大減少了肺和肝轉移(Zeelenberg,Ruuls-VanStalleetal.2003);抗CXCR4抗體抑制乳腺癌異種移植物擴散到淋巴節(Muller,Homeyetal,2001);使用抗CXCR4或抗SDF-l抗體處理淋巴樣干細胞延遲了(NOD)/SCID小鼠中的腫瘤生長(Bertolini，Dell，Agnolaetal.2002);抗SDF-l抗體抑制非小細胞肺癌(NSCLC)細胞器官轉移的發生(Phi川ps,Burdicketal.2003);CXCR4拮抗劑AMD3100(AnorMED)的全身施用在24小時內抑制了顱內成膠質細胞瘤和成髓細胞瘤異種移植物的生長，并增加了腫瘤細胞凋亡(Rubin,Kungetal.2003);抗SDF-l抗體抑制了與癌相關成纖維細胞混合的MCF-7乳腺癌細胞的生長(Orimo，Guptaetal.2005);使用抗體中和CXCR4阻斷了前列腺癌轉移和骨灶生長(growthinosseoussites)(Sun,Schneideretal.2005);通過施用狀CXCR4括抗劑T134阻止了在注射骨肉瘤細胞后肺轉移的發生(Perissinotto，Cavallonietal.2005)。不同文獻作者均提出，粑向SDF-1/CXCR4軸可給癌癥患者提供新的治療選擇人卵巢腫瘤強烈表達SDF-1，并以較低水平表達VEGF。兩種蛋白受腫瘤中的低氧觸發。病理濃度的其中任一蛋白質均不足以單獨誘導體內血管發生，但如果組合在一起，病理濃度的SDF-l和VEGF可有效且協同誘導新生血管形成。因此，阻斷所述協同軸，而非僅針對VEGF,可為治療癌癥的有效的抗血管生成新策略(Kryczek，Langeetal.2005);當具有自分泌SDF-1/CXCR4信號轉導通路時，乳腺癌細胞系便表現出攻擊行為。這包括伴隨加快生長的侵襲和遷移。因此，可從所述SDF-1/CXCR4軸獲取預測所述攻擊性的重要信息，也可將其用作治療人乳腺癌的重要靼標(Kang，Watkinsetal.2005);表達高水平的CXCR4的小細胞肺癌(SCLC)細胞的遷移和轉移受SDF-1調控。CXCR4的激活促進對肺瘤微環境中的輔助細胞(例如基質細胞)和胞外基質分子的附著。這些粘著相互作用導致SCLC細胞對化學療法的抗性增加。這樣，所述SDF-1/CXCR4軸的抑制劑可增加SCLC細胞的化學敏感性，并給患SCLC的患者提供新治療途徑(Hartmann,Burgeretal.2004);所述SDF-1/CXCR4軸已被認為是在體內運輸不同類型干細胞的關鍵調節通路。因為大多數(若非所有)惡性胖瘤源于干細胞/祖細胞區域，癌干細胞也在其表面表達CXCR4，從而所述SDF-1/CXCR4軸參與將它們指導運輸/轉移至表達SDF-l的器官(例如淋巴結、肺、肝、骨)。因此，針對調控SDF-1/CXCR4軸的策略可在將正常干細胞遞送至組織的再生藥物中和抑制癌干細胞的轉移的臨床腫瘤學中具有重要的臨床應用(Kucia,Recaetal.2005)。
發明內容本發明旨在提供針對SDF-1的特異性結抗劑。本發明另一方面旨在提供用于治療分別牽涉SDF-1和CXCR4受體的疾病和病癥的化合物。本發明另一方面旨在提供用于特異性檢測SDF-1的方法。通過獨立權利要求的主題解決了本發明所涉及問題。優選實施方案可取自從屬權利要求。第一方面，本發明通過核酸分子解決了本發明所涉及問題，所述核酸分子優選結合SDF-1，選自A型核酸分子、B型核酸分子、C型核酸分子，且核酸分子具有SEQ.ID.No.142、SEQ.ID.No.143和SEQ.ID.No.144所示任一核酸序列。在一個實施方案中，所述A型核酸分子包含下列核心核苷酸序列185"AAAGYRACAHGUMAAXaUGAAAGGUARC3"(SEQ.ID.19)其中xa缺失或為A。在一個優選實施方案中，所述A型核酸分子包含選自下列的核心核苷酸序列5"AAAGYRACAHG畫AAUGAAAGGUARC3"(SEQ.ID.No.20)、5'AAAGYRACAHG畫AAAUGAAAGGUARC3'(SEQJD.No.21)和5'AAAGYAACAHGUCAAUGAAAGGUARC3'(SE(J.ID.No.22)，所述核心核苷酸序列優選包含5，AAAGYAACAHGUCAAUGAAAGGUARC3"(SEQ.ID.No.22)。在一個實施方案中，所述核酸分子以5，->3，方向包含第一片核苷酸段、所述核心核普酸序列和第二核苷酸片段。在一個實施方案中，所述核酸分子以5，->3，方向包含第二核苷酸片段、所述核酸核普酸序列和第一核苷酸片段。在一個優選實施方案中，所述核酸分子包含所述第一和第二核普酸片段，且所述第一和第二核苷酸片段任選相互雜交，其中在雜交后形成雙鏈結構。在一個再優選的實施方案中，所述雙鏈結構由4-6個堿基對，優選5個堿基對構成。在一個實施方案中，所述第一核苷酸片段包含核苷酸序列5，X!X2NNBV3，(SEQ.ID.No.44)，且所述第二核普酸片段包含核苷酸序列5，BNBNX3X43，(SEQ.ID.No.45),其中Xi缺失或為R,X2為S,乂3為S及X4缺失或為Y;或Xi缺失，X2缺失或為S，x3缺失或為S及X4缺失。在一個實施方案中，所述第一核苷酸片段包含核苷酸序列5，RSHRYR3，(SEQ.ID.No.23)，且所述第二核苷酸片段包含核苷酸19序列5，YRYDSY3，(SEQ.ID.No.24)，所述第一核苷酸片段優選包含核苷酸序列5，GCUGUG3，，且所述第二核苷酸片段優選包含核苷酸序列5'CGCAGC3'。在一個實施方案中，所述第一核苷酸片段包含核苷酸序列5，X2BBBS3，(SEQ.ID.No.42)，且所述第二核苷酸片段包含核苷酸序列5，SBBVX33，(SEQ.ID.No.43),其中X2缺失或為S，且X3缺失或為S;所述第一核普酸片段優選包含核普酸序列5'CUGUG3',且所述第二核苷酸片段優選包含核苷酸序列5，CGCAG3，；或所述第一核苷酸片段優選包含核苷酸序列5，GCGUG3，，且所述第二核苷酸片段優選包含核苷酸序列5，CGCGC3，。在一個實施方案中，所述核酸分子具有SEQ.ID.No.5-18、25-41、133、137、139-141所示任一核酸序列。在一個實施方案中，所述B型核酸分子包含下列核心核普酸序列5"GUGUGAUCUAGAUGUA而GGCUGWUCCUAGUYAGG3，(SEQ.ID.No.57)。在一個優選實施方案中，所述B型核酸分子包含核心核苷酸序列GUGUGAUCUAGAUGUADUGGCUGAUCCUAGUCAGG(SEQ.ID.No.58):在一個實施方案中，所述核酸分子以5，->3，方向包含第一核普酸片段、所述核心核苷酸序列和第二核苷酸片段。在一個實施方案中，所述核酸分子以5，->3，方向包含第二核苷酸片段、所述核心核苷酸序列和第一核苷酸片段。在一個優選實施方案中，所述核酸分子包含所述第一和第二核苷酸片段，所述第一和第二核苷酸片段任選相互雜交，其中在雜交后形成雙鏈結構。在一個實施方案中，所述雙鏈結構由4-6個堿基對，優選5個堿基對構成。在一個實施方案中，所述第一核苷酸片段包含核苷酸序列5，X!XzSVNS3，(SEQ.ID.No.77)，且所述第二核苷酸片段包含核苷酸序列5，BVBSX3X43，(SEQ.ID.No.78)，其中Xj缺失或為A,X2是G，X3是C及X4缺失或為U;或Xi缺失，X2缺失或為G，X3缺失或為C及X4缺失。在一個實施方案中，所述第一核苷酸片段包含核苷酸序列5，XjGCRWG3，(SEQ.ID.No.59)，且所述第二核苷酸片段包含核苷酸序列5，KRYSCX43，(SEQ.ID.No.60)，其中X!缺失或為A，且X4缺失或為U。在一個實施方案中，所述第一核苷酸片段包含核苷酸序列5，X!GCGUG3，(SEQ.ID.No.75),且所述第二核苷酸片段包含核苷酸序列5，UACGCX43，(SEQ.ID.No.76)，其中X!缺失或為A,且X4缺失或為U，所述第一核苷酸片段優選包含核苷酸序列5，AGCGUG3'，且所述第二核苷酸片段優選包含核苷酸序列5，UACGCU3，。在一個優選實施方案中，所述第一核苷酸片段包含核苷酸序列5，X2SSBS3，(SEQ.ID.No.73),且所述第二核苷酸片段包含核苷酸序歹J5，BVSSX33，(SEQ.ID.No.74),其中X2缺失或為G，且X3缺失或為C，所述第一核苷酸片段優選包含核苷酸序列5'GCGUG3，，且所述第二核苷酸片段優選包含核苷酸序列5，UACGC3，。在一個實施方案中，所述核酸分子具有SEQ.ID.No.46-56、61-72和132所示任一核酸序列。在一個實施方案中，所述C型核酸分子包含核心核苷酸序列GGUYAGGGCUHRXAAGUCGG(SEQ.ID.No.90)，其中XA缺失或為A。在一個優選實施方案中，所述C型核酸分子包含選自下列序列的核心核苷酸序列5，GGUYAGGGCUHRAAGUCGG3"(SEQ.ID.No.91)、215，GGUYAGGGCUHRAGUCGG3，(SEQ.ID.No.92)和5，GGUUAGGGCUHGAAGUCGG3，(SEQ.ID.No.93)，所述核心核苷酸序列優選包含5，GGUUAGGGCUHGAAGUCGG3，(SEQ.ID.No.93)。在一個實施方案中，所述核酸分子以5，->3，方向包含第一核苷酸片段、所述核心核苷酸序列和第二核苷酸片段。在一個實施方案中，所述核酸分子以5，->3，方向包含第二核苷酸片段、所述核心核普酸序列和第一核苷酸片段。在一個優選實施方案中，所述核酸分子包含所述第一和第二核苷酸片段，其中所述第一核苷酸片段的至少一部分與所述第二核苷酸片段的至少一部分任選相互雜交，其中在雜交后形成雙鏈結構。在一個實施方案中，所述第一核苷酸片段的長度和所述第二片段的長度各自分別為0-17個核苷酸，優選4-10個核苷酸，及更優選4-6個核苷酸。在一個實施方案中，所述雙鏈結構包含4-10個堿基對，優選4-6個堿基對，更優選5個堿基對。在一個優選實施方案中，所述雙鏈結構包含4-10個連續堿基對，優選4-6個連續堿基對，更優選5個連續堿基對。在一個優選實施方案中，所述第一核苷酸片段包含核苷酸序列5，RKSBUSNVGR3，(SEQ.ID.No.120),且所述第二核普酸片段包含核苷酸序列5，YYNRCASSMY3，(SEQ.ID.No.121)，所述第一核苷酸片段優選包含核苷酸序列5，RKSBUGSVGR3，(SEQ.ID.No.122)，且所述第二核苷酸片段優選包含核苷酸序列5，YCNRCASSMY3，(SEQ.ID.No.123)。在一個實施方案中，所述第一核苷酸片段包含核普酸序列5，XSSSSV3，(SEQ.ID.No.124),且所述第二核苷酸片段包含核苷酸序列5，BSSSXs3，(SEQ.ID.No.125),其中Xs缺失或為S。在一個實施方案中，所述第一核苷酸片段包含核苷酸序列5，SSSSR3，(SEQ.ID.No.130)，且所述第二核苷酸片段包含核苷酸序列5，YSBSS3，(SEQ.ID.No.131)，所述第一核苷酸片段優選包含核苷酸序列5，SGGSR3，(SEQ.ID.No.126)，且所述第二核苷酸片段優選包含核苷酸序列5，YSCCS3，(SEQ.ID.No.127)。在一個實施方案中，所述第一核苷酸片段包含核苷酸序列5，GCSGG3，(SEQ.ID.No.128),且所述第二核苷酸片段包含核苷酸序列5，CCKGC3，(SEQ.ID.No.129)，所述第一核苷酸片段優選包含核苷酸序列5，GCCGG3',且所述第二核苷酸片段優選包含核苷酸序列5，CCGGC3，。在一個實施方案中，所述第一核苷酸片段包含核苷酸序列5，CGUGCGCUUGAGAUAGG3，，且所述第二核苷酸片段包含核苷酸序歹'J5，CUGAUUCUCACG3,。在一個實施方案中，所述第一核苷酸片段包含核苷酸序列5，UGAGAUAGG3，，且所述第二核苷酸片段包含核苷酸序列5，CUGAUUCUCA3'。在一個實施方案中，所述第一核苷酸片段包含核苷酸序列5，GAGAUAGG3，，且所述第二核苷酸片段包含核苷酸序列5，CUGAUUCUC3，。在一個實施方案中，所述核酸分子具有SEQ.ID.No.79-89、94-119和134-136所示4壬一核酸序列。在一個實施方案中，所述核酸分子具有SEQ.ID.No.142-144所示任一核酸序列。在一個實施方案中，所述核酸分子是針對SDF-1的拮抗劑。在一個實施方案中，所述核酸分子是SDF-1受體系統的拮抗劑，所述SDF-1受體系統的所述SDF-1受體優選是CXCR4受體。在一個實施方案中，所述SDF-1是人SDF-1和/或所述SDF-l受體是人SDF-1受體。在一個實施方案中，所述SDF-1包含SEQIDNo.1所示氨基酸序列。在一個實施方案中，所述核酸包含修飾物。在一個優選實施方案中，所述修飾物選自HES部分和PEG部分。在一個再優選的實施方案中，所述修飾物是由直鏈或支鏈PEG構成的PEG部分，其中所述PEG部分的分子量優選約2-180kD，更優選約60-140kD及最優選約40kD。在一個實施方案中，所述修飾物是HES部分，其中所述HES部分的分子量優選約10-130kD，更優選約30-130kD及最優選約100kD。在一個實施方案中，所述核酸的核苷酸是L-核苷酸，優選SEQ.ID.No.19、20、21、22、57、58、90、91、92和93所示任一序列的核苷酸。第二方面，本發明通過包含第一方面的核酸和任選其他組分的藥物組合物解決了本發明所涉及問題，其中所述其他組分選自藥學可接受的賦形劑和藥物活性劑。第三方面，本發明通過第一方面的核酸在藥物制備中的用途解決了本發明所涉及問題。在第三方面的一個實施方案中，所述藥物被用于治療和/或預防疾病或病癥，其中所述疾病或病癥受SDF-1介導，所述疾病或病癥優選選自眼后部疾病，如糖尿病性視網膜病和老年黃斑變性；乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、甲狀腺癌、鼻咽癌、結腸癌、肺癌和胃癌；骨肉瘤；黑素瘤；神經膠質瘤；成髓細胞瘤和成神經細胞瘤；白血病；WHIM綜合征；免疫缺陷綜合征；病理性新生血管形成；炎癥；多發性硬化癥；類風濕性關節炎/骨關節炎和腎炎。在第三方面的一個實施方案中，所述藥物被用于抑制血管發生、新生血管形成、炎癥和轉移。第四方面，本發明通過第一方面的核酸在診斷工具制備中的用途解決了本發明所涉及問題。在第四方面的一個實施方案中，所述診斷工具被用于診斷疾病，其中所述疾病選自眼后部疾病，如糖尿病性視網膜病和老年黃斑變性；24乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、甲狀腺癌、鼻咽癌、結腸癌、肺癌和胃癌；骨肉瘤；黑素瘤；神經膠質瘤；成髓細胞瘤和成神經細胞瘤；白血病；WHIM綜合征；免疫缺陷綜合征；病理性新生血管形成；炎癥；多發性硬化癥；類風濕性關節炎/骨關節炎和腎炎。在第四方面的一個實施方案中，所述診斷工具被用于診斷血管發生、新生血管形成、炎癥和/或轉移。第五方面，本發明通過包含SDF-l和第一方面的核酸的復合物解決了本發明所涉及問題，其中所述復合物優選是晶體復合物。第六方面，本發明通過第一方面的核酸在SDF-1檢測中的用途解決了本發明所涉及問題。第七方面，本發有通過用于篩選SDF-1拮抗劑或SDF-1激動劑的方法解決了本發明所涉及問題，所述方法包括下列步驟-提供候選SDF-1拮抗劑和/或候選SDF-1激動劑，-提供第一方面的核酸，-提供在SDF-1拮抗劑和/或SDF-1激動劑存在的情況下提供信號的檢測系統，及-確定所述候選SDF-l拮抗劑是否是SDF-l拮抗劑和/或所述候選SDF-1激動劑是否是SDF-1激動劑。第八方面，本發明通過篩選SDF-1激動劑和/或SDF-1拮抗劑的方法解決了本發明所涉及問題，所迷方法包括下列步驟-提供固定于相的SDF-1，所述相優選固相，-提供第一方面的核酸，優選被標記的第一方面的核酸，-加入候選SDF-1激動劑和/或候選SDF-1拮抗劑，及-確定所述候選SDF-1激動劑是否是SDF-1激動劑和/或所述候選SDF-1拮抗劑是否是SDF-1拮抗劑。在第八方面的一個實施方案中，進行所述確定以便估計所述核酸是否被所述候選SDF-1激動劑或被候選SDF-1拮抗劑替代。第九方面，本發明通過用于檢測SDF-1的包含第一方面的核酸的試劑盒解決了本發明所涉及問題。25第十方面，本發明通過可通過第七方面或第八方面的方法獲得的SDF-1拮抗劑解決了本發明所涉及問題。本發明基于驚人的發現，即有可能制備出特異性結合SDF-1且與其具有高親和力的核酸。SDF-1是具有SEQ.ID.No.1的氨基酸序列的堿性肽。經計算得到的SDF-1的pi為9.70。本文所用術語SDF-1指任何SDF-1，包括但不限于哺乳動物SDF-1。所述哺乳動物SDF-1優選選自小鼠、大鼠、兔、倉鼠、猴和人SDF-1。所述SDF-1最優選是人SDF-l(SEQ.ID.1)。發現可鑒定可以高親和力SDF-1結合性核酸是令人驚訝的，因為Eaton等人(Eaton,Goldetal.1997)觀察到通常極難制備針對堿性蛋白質的適體(aptamer)(即結合靶分子的D-核酸)，因為此類把標會產生高但非特異性的信噪比。所述高信噪比由核酸表現出的對堿性靶標(如SDF-1)的高非特異性親和力所致。可在使用本發明的核酸的本發明的任何方面實現所述核酸的特征，其中可單獨或任意組合使用所述核酸。無意受任何理論束縛，發明人假定所觀察到的本發明的核酸結合SDF-1的特異性共有一些結構特征，且具體指被稱為核心序列(將在下文中更詳細地討論)的核苷酸序列之一，請參照圖l-8及實施例1。但需知，這些圖和實施例1包括幾個不必在每個和任一本發明的核酸中實現的所述結構特征。如在權利要求書和實施例1中的進一步詳述，可分別基于所述框和一些結構特征和元件對各種人SDF-1結合性核酸分子進行分類。本文將如述定義的各種類別稱為"型"，且更具體稱為A型、B型和C型。在一個優選實施方案中，本發明的核酸是單個核酸分子。再一個實施方案中，所示單個核酸分子以許多單個核酸分子的形式存在。除非另有說明，本文中的術語"核酸"和"核酸分子"可互換使用。本領域技術人員將公認本發明的核酸分子優選由相互共價連接(優選通過磷酸二酯連接或鍵連接)的核苷酸構成。本發明的核酸還應包括與本發明的特定序列基本同源的核酸。應將術語"基本同源"理解為，同源性至少75%，優選85%,更優選90°/。，及最優選大于95%、96%、97%、98%或99%。存在于本發明的核酸中的同源核苷酸的實際百分比將取決于存在于所述核酸中的核苷酸總數。修飾百分比可基于存在于所述核酸中的核苷酸總數。可根據本領域技術人員已知的方式測定所述同源性。所述方法更具體為序列比較算法，然后基于指定程序參數計算待測序列相對于參比序列的序列同一性百分比。所述待測序列優選為所述應與另一核酸分子同源或待測是否與另一核酸分子同源(且如果是，以何種程度同源)的序列或核酸分子，其中也將所述另一核酸分子稱為參比序列。在一個實施方案中，所述參比序列是本文所述核酸分子，更優選為具有SEQ.ID.No.5-144所示任一序列的核酸分子。可根據下列方法進行用于比較的最佳序列比對，.所述方法例如Smith&Waterman的局部同源性算法(Smith&Waterman,1981)，Needleman&Wunsch的同源性比對算法(Needleman&Wunsch，1970),Pearson&Lipman的相似性搜索方法(Pearson&Lipman，1988),這些算法的計算機化實施(WisconsinGeneticsSoftwarePackage中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA，GeneticsComputerGroup,575ScienceDr"Madison,Wis.)或目測檢查。適合于測定序列同一性百分比的算法的一個實例是在基本局部比對搜索工具(basiclocalalignmentsearchtool,以下稱為"BLAST，，)中使用的算法，參見例如Altschul等人(Altschuletal.1990andAltschuletal，1997)。用于進4亍BLAST分析的軟件可在美國生物技術信息中心(NationalCenterforBiotechnologyInformation)(以下稱為"NCBI，，)中公開獲得。McGinnis等人描述了在使用可從NCBI獲得的軟件(例如BLASTN(用于核苷酸序列)和BLASTP(用于氨基酸序列))進行序列同一性測定中采用的默認參數(McGinnisetal，2004)。27術語"本發明的核酸"還應包括包含本文公開的核酸序列或其部分的那些核酸，至所述核酸或所述部分優選參與結合SDF-1。可例如通過裁減本文公開的核酸而產生所述核酸。可裁減本文公開的核酸的任一末端或兩個末端。也可裁減內部核苷酸序列，即裁減5，和3，末端核苷酸之間的核苷酸。此外，裁減還應包括刪除本文公開的核酸序列中的短至一個核苷酸。也可裁減不只一個本發明的核酸片段，其中所述片段可短至僅為一個核苷酸長。本領域技術人員可通過常規實驗或通過使用或釆用本文所述的方法(優選在本文實施例部分描述的方法)測定本發明的核酸的結合。本發明的核酸可為D-核酸或L-核酸。本發明的核酸優選是L-核酸。另外，也可能是所述核酸的一個或幾個部分為D-核酸或所述核酸的至少一個或幾個部分為L-核酸。術語所述核酸的"部分"應指短至一個核苷酸。本文通常將所述核酸分別稱為D-核酸和L-核酸。因此，在一個特別優選的實施方案中，本發明的核酸由L-核苷酸構成，并包含至少一個D-核苷酸。所述D-核苷酸優選附著于不同于定義本發明的核酸片段的部分，優選與所述核酸的其他部分相互作用的所述核酸的那些部分。所述D-核苷酸優選分別附著于本發明的任意片段末端和任意核酸末端。在再優選的實施方案中，所述D-核普酸可被用作間隔物或連接物，優選將4務飾物(如PEG和HES)附著于本發明的核酸。即述特征亦在本發明的范圍內，即每個和任一本文所述核酸分子(以其整體(以其核酸序列表示))均限于特定核香酸序列。換言之，應將所述實施方案中的術語"包含"解釋為"含有"或"由...構成"。即述特征亦在本發明的范圍內，即本發明的核酸是較長核酸的部分，其中所述較長核酸包含幾個部分，其中至少一個所述部分是本發明的核酸或其部分。所述較長核酸的其他部分可為一個或幾個D-核酸或L-核酸。本發明可使用任意組合。較長核酸的所述其他部分，可表現出不同于結合(優選結合SDF-1)的功能。一種可能的功能是允許與其他分子(其中所述其他分子優選與SDF-1不同)相互作用，例如，用于固定、交聯、檢測或擴增。在本發明的另一個實施方案中，本發明的核酸單獨或組合包含幾個本發明的核酸。術語"較長核酸"也涵蓋包含幾個本發明的核酸的所述核酸。本文所用L-核酸是由L-核苷酸構成的核酸，優選完全由L-核苷酸構成的核酸。本文所用D-核酸是由D-核普酸構成的核酸，優選完全由D-核苷酸構成的核酸。除非另有說明，術語"核酸，，和"核酸分子"在本文中可互換使用。除非另有說明，本文中的所有核苷酸序列也均以5，—3，的方向表示o無論本發明的核酸由D-核普酸構成、由L-核苷酸構成還是由兩者的組合(所述組合是例如隨機組合，或是由至少一個L-核苷酸和至少一個D-核酸構成的片段的特定序列)構成，所述核酸可由脫氧核糖核苷酸，核糖核苷酸或其組合構成。將本發明的核酸設計成L-核酸具有諸多優點。L-核酸是天然核酸的對映體。但由于核酸酶的廣泛存在，D-核酸在水溶液中(且尤其在生物系統或生物樣品中)不很穩定。天然核酸酶(尤其是來自動物細胞的核酸酶)不能降解L-核酸。由此，L-核酸在所述系統(包括動物和人體)中的生物學半衰期顯著增長。由于L-核酸不易降解，故無核酸酶降解產物產生，從而觀察不到由其所致的副作用。所述方面事實上界定了所有其他化合物(其用于治療涉及SDF-1的疾病和/或病癥)的L-核酸。也將通過不同于Watson-Crick堿基配對機理特異性結合靶分子的L-核酸或或部分或完全由L-核酸構成的適體(尤其含有參與所述適體與靶分子的結合的所述適體部分)稱為鏡像異構體(spiegelmer)。即述特征亦在本發明的范圍內，即連接到所述核心核苷酸序列兩側的所述第一和第二核苷酸片段原則上可相互雜交。在所述雜交后形成雙鏈結構。本領域技術人員將公認所述雜交可(尤其在體外和/或體內條件下)發生或不發生。如果發生雜交，則可至少基于堿基配對法則雜交形成雙鏈結構，無需發生兩個片段的全序列雜交。本文所用雙鏈結構優選是由兩個或多個獨立鏈形成的部分分子或結構，其中存在至少一個(優選兩個或多個)優選按照Watson-Crick堿基配對法則進行堿基配對的堿基對。本領域技術人員還將公認其他堿基配對(例如Hoogsten堿基配對)可存在于所述雙鏈結構中或形成所述雙鏈結構。即述特征亦在本發明的范圍內，即無論是以D-核酸、L-核酸或D，L-核酸存在的核酸，或無論它們是DNA或RNA，本發明的核酸可作為單鏈或雙鏈核酸存在。通常，本發明的核酸是表現出由一級序列限定的二級結構，并由此也可形成三級結構的單鏈核酸。但本發明的核酸也可為雙鏈核酸，即彼此互補或部分互補的兩條鏈相互雜交。這賦予核酸以穩定性，尤其在所述核酸是以天然D-形式而非L-形式存在時有利。可修飾本發明的核酸。可對所述核酸的單個核苷酸進行所述修飾，且所述修飾為本領域所熟知。有關所述修飾的實例尤其見Venkatesan等人(Venkatesan,Kimetal，2003)和Kusser(Kusser2000)。所述修飾物可為在構成所述核酸的個別核苷酸的2，位置處的H原子、F原子或0-CH3基團或NHr基團。此外，本發明的核酸也可包含至少一個LNA核苷酸。在一個實施方案中，本發明的核酸由LNA核苷酸構成。在一個實施方案中，本發明的核酸可為多分體(multipartite)核酸。本文所用多分體核酸是由至少兩個核酸鏈構成的核酸。所迷至少兩個核酸鏈形成功能單元，其中所述功能單元是靶分子的配體。可通過將所述核酸切成兩條鏈，或通過合成與本發明的(即整體)核酸的第一部分相對應的一條核酸和與整體核酸的第二部分相對應的另一條核酸而從本發明的核酸得到所述至少兩個核酸鏈。應公認切割和合成兩者均可被用于制備如上所述具有2個以上鏈的多分體核酸。換言之，盡管各個核酸部分間可一定程度互補，但所述至少兩個核酸鏈通常不同于互補且相互雜交的兩條鏈。即述特征亦在本發明的范圍內，即最后實現了本發明的核酸的完全閉合(即環狀)結構，即本發明的核酸是閉合的，優選通過共價連接閉合，其中所述共價連接更優選發生在本文公開的核酸序列的5，末端和3'末端之間。發明人已發現，本發明的核酸表現出非常有利的Kd值范圍。通過使用所謂的biacore儀(BiacoreAB，Uppsala,Sweden)進行的表面等離子共振測量是測定結合常數的一種可能方法，這也是本領域才支術人員已知的。可優選通過^f吏用實施例中描述的"pull-down測定法(pull-downbindingassay)"測量本文所用親和力。表示所述核酸與所述靼標(在當前情況下為SDF-1)之間的結合強度的合適量度即為所謂Kd值，本領域技術人員知曉該值及其測定方法。本發明的核酸通過某個KD值來表征。本發明的核酸表現出的Ko值優選低于MM。約lpM的KD值被認為是核酸與靶標非特異性結合的特征。如本領域技術人員將公認的一樣，一組化合物(如本發明的核酸)的Ko值在某個范圍內。上述約lnM的Kd是仇逸的Ko值上限。結合靶標的核酸的Kn的優選下限可為約10pM或更高。即述特征亦在本發明的范圍內，即個別核酸與ghrelin結合的Ko值優選在所述范圍內。優選的范圍可通過選擇所述范圍內的任意第一個數字和所述范圍內的任意第二個數字來限定。優選的上限值是250nM和100nM，優選的下限值是50nM、10nM、1nM、100pM和10pM。只要仍能結合靶分子，本發明的核酸分子可具有任意長度。本領域將公認，存在本發明的核酸的優選長度。所述長度一般為15-120個核苷酸。本領域技術人員將公認，15-120的任何整數是本發明的核酸的可能長度。本發明的核酸的長度的更優選范圍是約20-100個核苷酸、約20-80個核苷酸、約20-60個核苷酸、約20-50個核苷酸及約20-40個核苷酸的長度。即述特征亦在本發明的范圍內，即本文公開的核酸包含優選為高分子量部分和/或優選使所述核酸尤其在動物體內(優選在人體內)的停留時間的特征發生改變的部分。所述修飾物的特別優選的實施方案是本發明的核酸的PEG化和HES化。本文所用PEG表示聚(乙二醇)，31而HES表示羥乙基淀粉。本文所用PEG化優選為對本發明的核酸的修飾，其中所述修飾物由附著于本發明的核酸的PEG部分構成。本文所用HES化優選為對本發明的核酸的修飾，其中所述修飾物由附著于本發明的核酸的HES部分構成。歐洲專利申請EP1306382中描述了所述修飾物及用所述修飾物修飾核酸的方法，將所述專利公開通過引用整體并入本文。優選情況下，由高分子量部分構成或包含高分子量部分的修飾物的分子量，尤其在PEG作為所述高分子量部分的情況下為約2,000-200,000Da,優選40,000-120,000Da，且尤其在HES作為所述高分子量部分的情況下優選為約3,000-180,000Da，更優選60,000-140,000Da。例如德國專利申請DE12004006249.8中描述了HES修飾方法，將所述專利公開通過引用整體并入本文。即述特征亦在本發明的范圍內，即如在專利申請WO2005074993和PCT/EP02/11950中進一步描述的那樣，可以直鏈或支鏈形式使用PEG和HES中的任一者。原則上可在本發明的核酸分子的任何位置進行所述修飾。可優選在所述核酸分子的5，-末端核苦酸、3，-末端核苷酸和/或5'核苷酸和3'核苷酸之間的任意核苷酸上進行所述修飾。可將所述修飾物(且優選為PEG和/或HES部分)直接或通過連接子附著于本發明的核酸分子。即述特征亦在本發明的范圍內，即本發明的核酸分子包含一種或多種修飾物，優選一種或多種PEG和/或HES部分。在一個實施方案中，個別連接分子將一種以上的PEG部分或HES部分附著于本發明的核酸分子上。本發明中使用的連接子本身可為直鏈的或支鏈的。本領域技術人員知曉此類連接子，且專利申請WCH005074993和PCT/EP02/11950中也進一步描述了所述連接子。無意受任何理論束縛，通過用高分子量部分(如聚合物(且更尤其是本文公開的聚合物(其優選為生理學上可接受的)))修飾本發明的核酸，似乎改變了分泌動力學。更具體而言，似乎由于所述經修飾的本發明核酸的分子量增加，且由于所述核酸不經歷代謝(尤其是在L形式時)，從而降低其從動物體內，優選從哺乳動物體內，及更32優選從人體內分泌。由于一般通過腎臟進行分泌，因此發明人推測經如述修飾的核酸的腎小球濾過率較不帶此類高分子量修飾物的核酸顯著減小，這導致其在體內的停留時間增長。與之相關，特別值得注意的是，盡管具有這種高分子量修飾，但本發明的核酸的特異性并未受到有害影響。如此這般，本發明的核酸具有令人驚訝的特征(所述特征通常不能從藥學活性化合物中預期)，從而無需通過使用賦予持續釋放特性的藥物制劑來使其持續釋放。而以其包含高分子量部分的修飾形式，本發明的核酸本身就可用作持續釋放制劑。如此這般，如本文公開的核酸分子的修飾物和經如述修飾的核酸分子及任何包含其的組合物可提供不同的，優選受控的藥物動力學及其生物分布。這還包括在循環中的停留時間和向組織的分配。專利申請PCT/EP02/11950中進一步描述了所述修飾。但即述特征亦在本發明的范圍內，即本文公開的核酸不包含任何修飾，且尤其不包含高分子量修飾(例如PEG化或HES化)。當希望將核酸于施用后快速清出身體時，尤其優選所述實施方案。當需要使用本發明的核酸或包含所述核酸的藥物進行體內成像或特定給藥時可能希望所述快速清除。可將本發明的核酸和/或本發明的拮抗劑用于制藥。所迷藥物包含任選與其他藥學活性化合物組合在一起的至少一種本發明的核酸，其中本發明的核酸本身優選發揮藥學活性化合物的作用。在一個優選實施方案中，所述藥物至少包含藥學可接受的載體。所述載體可為例如水、緩沖液、PBS、葡萄糖溶液、蔗糖溶液、甘露糖溶液、優選5%的蔗糖平衡液、淀粉、糖、明膠或任何其他可接受的栽體物質。所述栽體通常是本領域技術人員已知的。本領域技術人員將公認，也可將本發明藥物的任何實施方案、用途和方面或與之相關的實施方案、用途和方面應用于本發明的藥物組合物，反之亦然。用本發明的或根據本發明制備的核酸、藥物組合物和藥物治療和/或預防的適應癥、疾病和病癥是由SDF-1直接或間接參與各自致病機理所致。當然，由于本發明的SDF-1結合性核酸與人或鼠的SDF-1相互作用或結合，本領域技術人員通常將理解可容易將本發明的SDF-1結合性核酸用于治療、預防和/或診斷本文描述的任何人和動物疾病。可使用所述藥物治療和/或預防的疾病和/或病癥和/或病狀包括但不限于眼后部疾病，如視網膜病、糖尿病性視網膜病和老年黃斑變性(干性和濕性兩種形式)；癌癥；乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、曱狀腺癌、鼻咽癌、結腸癌、肺癌和胃癌；骨肉瘤；黑素瘤；坤申經膠質瘤；成髓細胞瘤和成坤申經細胞瘤；白血病；B細胞'漫性淋巴細胞白血病、多發性骨髓瘤；淋巴瘤；WHIM綜合征；免疫缺陷綜合征；病理性新生血管形成；炎癥；多發性硬化癥；關節炎、類風濕性關節炎、骨關節炎和腎炎。在進一步實施方案中，所述藥物包含其他藥學活性劑。所述其他藥學活性化合物可為本領域技術人員已知的藥物，且優選選自趨化因子或細胞因子拮抗劑、皮質類固醇等。本領域技術人員理解假設可根據本發明通過使用本發明的核酸處理所述各種適應癥時，所述其他藥學活性劑可為原則上適用于治療和/或預防所述疾病的任何藥學活性劑。優選將本發明的核酸分子(尤其是以藥物形式存在或使用時)與VEGF抑制劑(如來自PfizerOphthalmics的^底加他尼鈉(Pegatanib)、來自NovartisOphthalmics的Lucentis(Ranitizumab)、來自Roche(藥品核準標示外^f吏用)的阿瓦斯丁(貝伐單抗))組合；或與光動力療法(如來自NovartisOphthalmics的Visudyne(維替泊芬))和可注射到玻璃體內的可的爭〉衍生物(如來自AlconInc.的Retaane(醋酸阿奈可他)組合。此外，所述其他藥學活性劑也可為本發明的其他核酸。所述藥物也可再包含至少一種與不同于SDF-1的靶分子結合或表現出不同于本發明的核酸之一的功能的核酸。本領域技術人員將公認確實可在任何可通過將針對SDF-1的拮抗劑施用給需要所述結抗劑的患者，且所述拮抗劑適合于消除疾病或的核酸。所述效應包括但不限于病理性新生血管形成、炎癥和轉移。本發明的核酸適用于所述及其他說明書導言部分所述尤其由SDF-1參與所致的疾病或病癥(將其通過引用并入本文，以避免任何不必要的重復)。即述特征亦在本發明的范圍內，即此外原則上還可將藥物用于預防公開的與所述藥物在所述疾病治療中的用途相關的任何疾病。因此本領域技術人員已知對于相應疾病的相應標記物。所述相應標記物優選是SDF-1。此外，所述相應標記物選自氧化應激標記物(包括鐵氰化物(TMR)的跨膜還原酶、山梨醇途徑活性增加包括之后的山梨醇蓄積、細胞溶質NADH/NAD比率增加、NADPH耗盡和果糖蓄積及隨之而來的晚期糖基化終產物(AGES)的非酶促產生和蛋白激酶C的隨后激活、由亞硝化和氧化應激介導的下游事件(例如MAP激酶活化))、炎性標記物(包括ICAM-1、VCAM-1、RANTES、結合珠蛋白或C反應性蛋白)及促血管生成標記物(如促血紅細胞生長素或VEGF)。由此看來，可將所述標記用于確定是否可用本發明的任意核酸分子治療受試者或患者。因此，再一方面，本發明涉及所述方法，其中測定相應標記物的存在與否及更具體的濃度。本領域技術人員已知用于檢測所述標記物和任選定量所述標記物，及相應標記物應當存在或不存在于其中的范圍，以判定受試者或患者是否患所述疾病中的任一種或處于患所述疾病的危險中的方法，及從而可按照本發明相應進行治療的方法。在本發明的藥物的一個實施方案中，將所述藥物與其他療法聯合應用于本文公開的任一種疾病，尤其是待用本發明的藥物進行治療的疾病。"聯合療法"(或"綜合療法")包括施用本發明的藥物和至少第二試劑(作為具體治療方案的一部分)，以期望通過這些治療劑(即本發明的藥物和所述第二試劑)的共同作用提供有益效應。這種聯合的有益效應包括但不限于由治療劑的聯合所致的藥物動力學或藥效動力學共同作用。通常在限定的時間內完成所述治療劑的聯合施用(通常35為數分鐘、數小時、數天或數周，取決于所選聯合)。"聯合療法，，可旨在包括(但通常不包括)分別獨立施用兩種或多種所述治療劑，所述分別獨立施用偶爾也可導致本發明的聯合。"聯合療法"旨在包括連續施用這些治療劑，即在不同時間施用其中各治療劑，和基本上同時施用這些治療劑或所述治療劑中的至少兩種。可例如通過給受試者施用以固定比例含有各治療劑的單膠嚢或多個各治療劑的單膠嚢實現基本上同時給藥。可通過任何合適途徑實現各治療劑的依次給藥或基本上同時給藥，所述途徑包括但不限于局部途徑、口服途徑、靜脈內途徑、肌內途徑和經過粘膜組織直接吸收。可通過相同途徑或不同途徑施用所述治療劑。例如，可注射施用所選聯合劑的第一種治療劑，并可局部施用所述聯合劑中的其他治療劑。此外，也例如可局部施用所有治療劑，或可注射施用所有治療劑。除非另有說明，所述治療劑的施用順序不嚴格重要。"聯合療法"還可包括將上述治療劑再與其他生物活性成分聯合施用。如果聯合療法還包括非藥物治療，則可在能從治療劑和非藥物治療的聯合的共同作用中獲得有益效應的任何合適時間實施所述非藥物治療。例如，在適當的情況下，在非藥物治療時隔治療劑的施用或許有幾天或甚至幾周時，仍能達到有益效應。如在上述通用術語中所論述，原則上可以本領域技術人員已知的任何形式施用本發明的藥物。優選的施用途徑是全身施用，更優選通過腸胃外施用(優選通過注射)。此外，也可局部施用所述藥物。其他施用途徑包括肌內、腹膜內和皮下、經口、鼻內、氣管內或肺部施用，優選侵入性最低并同時確保效力的施用途徑。腸胃外施用通常被用于皮下、肌內或靜脈內注射和輸注。另外，一種用于腸胃外施用的方法釆用了本領域技術人員熟知的緩釋或持續釋放系統的植入，其確保維持恒定的劑量水平。此外，可通過局部4吏用合適的鼻內媒介物(vehicle)、吸入劑以鼻內形式施用本發明的優選藥物，或可采用那些本領域技術人員所熟知的透皮貼劑的形式通過經皮途徑施用本發明的優選藥物。欲以透皮遞送系統形式給藥，(當然)要在整個給藥過程中連續而非間歇給藥。其他優選的局部制劑包括乳骨劑、軟骨劑、洗劑、氣霧噴霧劑和凝膠劑，其中活性成分的濃度范圍通常將是0.01%-15%(w/w或w/v)。本發明的藥物將通常包含溶解或分散于藥學可接受的介質中的有效量的治療活性成分，包括但不限于本發明的核酸分子。藥學可接受的介質或栽體包括任何及所有溶劑、分散介質、包衣、抗細菌劑和抗真菌劑、等滲劑和吸收延遲劑等。本領域熟知用于藥學活性物質的所述介質和制劑的應用。也可將補充的活性成分摻入本發明的藥物中。本發明再一方面涉及藥物組合物。所述藥物組合物包含至少一種本發明的核酸，且優選包含藥學可接受的粘合劑。所述粘合劑可為本領域使用和/或已知的任何粘合劑。所述粘合劑更特別是任何有關本文公開的藥物的制備過程中論述的粘合劑。再一個實施方案中，所述藥物組合物包含其他藥學活性劑。根據本公開，本領域技術人員將知道藥物和藥物組合物的制備。通常可將所述組合物制成注射劑(作為液體溶液或懸浮液)；制成適合于在注射前溶解或懸浮于液體中的固體形式；制成用于口服施用的片劑或其他固體劑；制成定時釋放膠嚢；或制成當前使用的任何其他形式，包括滴眼劑、乳骨劑、洗劑、油骨劑、吸入劑等。由外科醫生、內科醫生或衛生保健工作者使用無菌制劑(例如基于鹽水的洗液)來處理手術區中的特定區域也特別有用。也可通過微型裝置、微顆粒或海綿遞送組合物。配制后，將藥物以與劑量制劑相容的方式施用，并施用藥理學有效量。可易于以各種劑型(例如上述可注射溶液的類型)施用所述制劑，但也可采用藥物釋放膠囊等。在所述情形中，待施用的活性成分的量和組合物體積取決于待治療的個體或受試者。給藥所需的活性化合物的具體量取決于從業者的判斷，且特異于每個個體。通常利用分散活性化合物所需的最小體積的藥物。合適的施用方37案也是可變的，但可以開始施用所述化合物并監測結果，然后再以進一步的時間間隔提供進一步的受控劑量表示。例如，當以片劑或膠嚢(例如明膠膠嚢)形式口服施用時，可將活性藥物成分(即本發明的核酸分子)和/或任何其他藥學活性劑(在本文中也被稱為治療劑或活性化合物)與口服的、無毒的、藥學可接受的惰性載體(例如乙醇、甘油、水等)相組合。而且，當期望或需要時，也可將合適的粘合劑、潤滑劑、崩解劑和著色劑摻入所述混合物。合適的粘合劑包括淀粉，硅酸鎂鋁，淀粉漿，明膠，甲基纖維素，羧曱基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮，天然糖類(例如葡萄糖或卩-乳糖)，玉米增甜劑，天然和合成的樹膠(例如阿拉伯膠、黃蓍膠或藻酸鈉)，聚乙二醇，蠟等。在這些劑型中使用的潤滑劑包括油酸鈉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、苯曱酸鈉、乙酸鈉、氯化鈉、二氧化硅、滑石、硬脂酸、其鎂鹽或釣鹽和/或聚乙二醇等。崩解劑包括但不限于，淀粉、曱基纖維素、瓊脂、膨潤土、黃原膠淀粉、瓊脂、藻酸或其鈉鹽、或泡騰混合物等。稀釋劑包括例如乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露醇、山梨糖醇、纖維素和/或甘氨酸。還可以諸如定時釋放和緩釋片劑或膠嚢、丸劑、粉劑、顆粒劑、酏劑、酊劑、混懸劑、糖漿劑和乳劑的口服劑型施用本發明的藥物。有利地由脂肪乳濁液或懸浮液制備松劑。藥物組合物或藥物可為經滅菌的和/或含有佐劑，例如防腐劑、穩定劑、潤濕劑或乳化劑、促溶劑(solutionpromoter)、用于調節滲透壓的鹽和/或緩沖劑。另外，它們還可包含其他在治療上有價值的物質。根據常規混合、粒化或包被方法制備組合物，且所述組合物通常含有約0.1%-75%,優選約1%-50%的活性成分。可通過例如溶解、分散等制備液體(尤其是可注射的)組合物。將活性化合物溶解于藥學純溶劑(例如水、鹽水、右旋糖水溶液、甘油、乙醇等)中或與之混合，從而形成可注射的溶液或懸浮液。另外，可配制適合于在注射前溶解于液體中的固體形式。對于固體組合物，賦形劑包括藥物級的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、滑石、纖維素、葡萄糖、蔗糖、碳酸鎂等。還可用例如聚亞烷基二醇(如丙二醇)作為載體將上文限定的活性化合物配制成栓劑。在一些實施方案中，有利地由脂肪乳濁液或懸浮液制備栓劑。也可以脂質體遞送系統(例如小單層嚢泡、大單層囊泡和多層囊泡)的形式分別施用本發明的藥物和核酸分子。脂質體可由各種磷脂(包含膽固醇、硬脂胺或磷脂酰膽堿)構成。在一些實施方案中，將脂質成分的薄膜與藥物水溶液水合而形成包裹所述藥物的脂質層，這是本領域技術人員熟知的。例如，可以用本領域已知方法與親脂化合物或非免疫原性高分子量化合物構建的復合物形式提供本文所述的核酸分子。另外，脂質體可在其表面攜帶所述核酸分子，以便用于靶向和在內部攜帶細胞毒性劑而介導細胞殺傷。美國專利6,011,020中提供了核酸相關復合物的實例。也可分別將本發明的藥物和核酸分子與作為可定靶藥物的載體的可溶聚合物相偶聯。所述聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羥丙基-曱基丙烯酰胺-苯酚、聚羥乙基天冬酰胺苯酚或經棕櫚酰殘基取代的聚環氧乙烷聚賴氨酸。此外，可分別將本發明的藥物和核酸分子偶聯至一類可用于實現藥物的受控釋放的可生物降解的聚合物，例如聚乳酸、聚￡-己內酯、聚羥基丁酸、聚原酸酯、聚縮醛類、聚二氫吡喃、聚氰基丙烯酸酯類及水凝膠的交聯或兩親性嵌段共聚物。如需要，待施用的藥物組合物和藥物還可含有較少量的非毒性輔助物質，例如潤濕劑或乳化劑、pH緩沖劑及其他物質，例如乙酸鈉和三乙醇胺油酸酯。可根據多種因素選擇分別使用本發明的核酸分子和藥物的給藥方案，包括患者的類型、物種、年齡、體重、性別和醫學狀況；待治療的病狀的嚴重度；給藥途徑；患者的腎和肝功能；及所采用的具體適體或其鹽。普通醫師或獸醫可容易確定和開出預防、對抗或阻止病狀進展所需的藥物有效量。在治療本文公開的任何疾病中，本發明的核酸的有效血漿水平范39圍優選為500fM-500nM。可優選以單次日劑量、每兩天或每三天、每周、每兩周、以單次月劑量或每三個月劑量分別施用本發明的核酸分子和藥物。即述特征亦在本發明的范圍內，即本文所述藥物構成了本文公開的藥物組合物。本發明再一方面涉及用于治療需要這種治療的受試者的方法，其中所述方法包括施用藥學活性量的至少一種本發明的核酸。在一個實施方案中，受試者患有疾病或處于患所述疾病的風險中，其中所述疾病是任何本文公開的所述疾病，尤其是有關任何本發明的核酸在藥物制備中的用途中公開的那些疾病中的任何一種。如本文優選使用的診斷或診斷劑或診斷工具適合于直接或間接檢測有關本文中描述的各種病癥和疾病時描述的SDF-1。所述診斷適合于檢測和/或隨訪任何本文分別描述的病癥和疾病。所述檢測通過本發明的核酸與SDF-1的結合而成為可能。可直接或間接檢測這種結合。相應的方法和工具是本領域技術人員已知的。尤其是，本發明的核酸可包含標記，所述標記使得能檢測本發明的核酸，優選結合到SDF-1的核酸。所述標記優選選自放射性標記、酶標記和熒光標記。原則上，所有已知的針對抗體開發的測定法都可用于本發明的核酸，但將耙結合性抗體替換成了靶結合性核酸。在使用未標記的耙結合性抗體的抗體-測定法中，優選通過二抗來進行檢測，用放射性標記、酶標記和熒光標記修飾所述二抗，并在其Fc-片段處結合所述靼結合性抗體。在核酸，優選本發明的核酸的情形中，用優選選自生物素、Cy-3和Cy-5的標記修飾所述核酸，且用針對所述標記的抗體(例如抗生物素抗體、抗Cy3抗體或抗Cy5抗體)檢測這種標記，或當所述標記為生物素時，用天然結合生物素的鏈霉抗生物素蛋白或抗生物素蛋白檢測所述標記。繼而，優選用相應標記(例如放射性標記、酶標記或熒光標記)修飾所述抗體、鏈霉抗生物素蛋白或抗生物素蛋白(如同二抗一樣)。再一個實施方案中，通過第二種檢測工具檢測或分析本發明的核酸分子，其中所述檢測工具是分子信標。本領域技術人員已知分子信標方法。簡言之，核酸探針(其也被稱為分子信標)是待測核酸樣品的反向互補序列，并因而可與待測核酸樣品部分雜交。在結合核酸樣品后，分子信標的熒光基團分離，導致熒光信號發生變化，優選為強度變化。這種變化與存在的核酸樣品量相關。本領域技術人員理解，由于本文概述的SDF-1與其相應的受體之間的關系，可使用本發明的核酸分子診斷的疾病和病癥原則上正是關于所述核酸分子用于治療和/或預防所述疾病的用途時所描述的疾病和病癥。除此以外，本發明的核酸分子的用途存在于造血減少、侵入或轉移減少、B細胞發生和趨化現象減少、T細胞化學趨化減少和誘導生長抑制和凋亡。有關SDF-1的檢測，優選方法包括下列步驟(a)提供待測SDF-1是否存在的樣品(b)提供本發明的核酸，(c)讓所述樣品與所述核酸反應，優選在反應容器中進行反應，其中步驟(a)可在步驟(b)之前進行，或步驟(b)可在步驟(a)之前進行。在一個優選實施方案中，還提供步驟d)，檢測樣品與核酸的反應。優選將步驟b)的核酸固定至表面。所述表面可為反應容器(例如反應管、平板的孔)表面，或可為包含于所述反應容器中的裝置(例如珠)表面。可通過任何本領域技術人員已知的手段將核酸固定至所述表面，包括但不限于非共價或共價連接。優選通過所述表面和所述核酸之間的共價化學鍵建立連接。但即述特征亦在本發明的范圍內，即將所述核酸間接固定至所述表面，其中這種間接固定涉及使用其他組分或一對相互作用偶體(interactionpartner)。所述其他組分優選為與待固定的核酸特異性相互作用的化合物(其也被稱為相互作用偶體)，并從而介導所述核酸附著于所述表面。所述相互作用偶體優選選自核酸、多肽、蛋白質和抗體。所述相互作用偶體優選為抗體，更41優選為單克隆抗體。所述相互作用偶體也可為核酸，優選功能性核酸。所述功能性核酸更優選選自適體、鏡像異構體和至少與所述核酸部分互補的核酸。再一個備選實施方案中，所述核酸與所述表面的結合由多分體相互作用偶體(multi-partiteinteractionpartner)介導。所述多分體相互作用偶體優選為由第一成員和第二成員構成的一對相互作用偶體或一個相互作用偶體，其中所述第一成員包含于或附著于所述核酸，而所述第二成員包含于或附著于所述表面。所述多分體相互作用偶體優選選自包括生物素和抗生物素蛋白、生物素和鏈霉抗生物素蛋白、及生物素和中性鏈霉抗生物素蛋白(neutravidin)的相互作用偶體對。所述相互作用偶體對的第一成員優選是生物素。所述方法的優選結果是形成了SDF-1和所述核酸的經固定的復合物，其中更優逸可檢測到所述復合物。技術特征亦在實施方案的范圍內，即可從所述復合物中檢測出SDF-1。用于檢測SDF-1的方法還包括從優選已用于進行步驟c)的反應容器中除去樣品。再一個實施方案中，所述方法還包括將SDF-1的相互作用偶體固定于表面(優選如上定義的表面)的步驟，其中所述相互作用偶體如本文中定義，和優選如上面在關于相應的方法時所定義的，及更優選在它們的各種實施方案中包括核酸、多肽、蛋白質和抗體。在此實施方案中，特別優選的檢測工具是本發明的核酸，其中所述核酸可優選為經標記的或未標記的。在所述核酸為經標記的情況下，它可直接或間接被檢測。這種檢測也可涉及第二種檢測工具的>(吏用，所迷第二種檢測工具也優選選自核酸、多肽、蛋白質和在本文所述的各種實施方案中的具體形式。所述檢測工具優選特異于本發明的核酸。在更優選的實施方案中，所述第二種檢測工具是分子信標。在一個優選實施方案中，所述核酸或所述第二種檢測工具或兩者可包含檢測標記。所述檢測標記優選選自生物素、溴脫氧尿苷標記、洋地黃毒苷標記、熒光標記、UV-標記、放射性標記和螯合劑分子。此外，所述第二種檢測工具也可與優選由所述核酸所含有、由所述核酸所包含或附著于所述核酸的檢測標記相互作用。特別優選的組合如下檢測標記是生物素而第二種檢測工具是針對生物素的抗體，或其中檢測標記是生物素而第二種檢測工具是抗生物素蛋白或攜帶抗生物素蛋白的分子，或其中檢測標記是生物素而第二種檢測工具是鏈霉抗生物素蛋白或攜帶鏈霉抗生物素蛋白的分子，或其中檢測標記是生物素而第二種檢測工具是中性鏈霉抗生物素蛋白或攜帶中性鏈霉抗生物素蛋白的分子，或其中檢測標記是溴脫氧尿苷而第二種檢測工具是針對溴脫氧尿苷的抗體，或其中檢測標記是洋地黃毒苷而第二種檢測工具是針對洋地黃毒苷的抗體，或其中檢測標記是螯合劑而第二種檢測工具是放射性核素，其中所述檢測標記優選附著于所述核酸。將公認的是，此類組合也可被應用于其中核酸附著于表面的實施方案。在這種實施方案中，檢測標記優選附著于相互作用偶體。最后，即述特征亦在本發明的范圍內，即用第三種檢測工具檢測第二種檢測工具，所述第三種檢測工具優選是酶，更優選為在檢測所述第二種檢測工具時顯示出酶促反應的酶，或所述第三種檢測工具是用于檢測輻射(更優選由放射性核素發射的輻射)的工具。所述第三種檢測工具優選特異性檢測所述第二種檢測工具和/或與所述第二種檢測工具相互作用。此外，在將SDF-1的相互作用偶體固定在表面上并將本發明的核酸優選加入到在相互作用偶體和SDF-1之間形成的復合物中的實施方案之中，可將樣品從反應體系中移除，更優選從在進行步驟c)和/或d)的反應容器中移除。在一個實施方案中，本發明的核酸包含熒光部分，且其中在所述核酸與SDF-1之間形成復合物時和在所述核酸與游離的SDF-1之間形成復合物時的所述熒光部分的熒光不同。再一個實施方案中，所述核酸是本發明的核酸的衍生物，其中所述核酸的衍生物包含至少一種腺苷的熒光衍生物以替換腺苷。在一個優選實施方案中，所述腺苷的熒光衍生物是亞乙烯基腺苷。再一個實施方案中，利用熒光檢測由本發明的核酸的衍生物和SDF-1構成的復合物。在所述方法的一個實施方案中，信號產生于步驟(c)或步驟(d)，且所述信號優選與樣品中SDF-1的濃度相關。在一個優選的方面，可在96孔平板中進行所述測定，其中將成分固定在如上描述的反應容器中，并將孔用作反應容器。還可將本發明的核酸用作藥物設計的起始材料。主要存在兩種可能方法。一種方法是篩選化合物文庫，而所述化合物文庫優選為低分子量化合物文庫。在一個實施方案中，所述篩選是高通量篩選。高通法(trial-and-error)評估。最好是通過比色測量法來進行所述分析。與之相關使用的文庫是本領域技術人員已知的。此外，也可將本發明的核酸用于藥物的合理設計。合理藥物設計優選是設計藥學先導結構。從靶標的三維結構開始，用計算機程序把包含許多不同化合物的結構的數據庫搜索一遍，所述三維結構通常通過諸如X射線晶體學或核磁共振光鐠學之類的方法來確定。所述選擇通過計算機來完成，隨后可在實驗室中檢測所確定的化合物。可從任何本發明的核酸開始進行合理藥物設計，并涉及與本發明構，優選三維結構。在任何情況下，所述結構仍顯示出與本發明的核酸相同或相似的結合特征。在合理藥物設計中的進一步的步驟中或作為備選步驟，優選用不同于核苷酸和核酸的化學基團來模擬結合到神經遞質的所述核酸的那些部分的三維結構。通過這種模擬，可設計出不同于所述核酸的化合物。所述化合物優選為小分子或肽。在例如通過使用本領域技術人員已知的竟爭性測定法來篩選化合物文庫的情況下，可發現合適的SDF-1類似物、SDF-1激動劑或SDF-l拮抗劑。這種竟爭性測定法可如下建立。將本發明的核酸，優選作為結合靶標的L-核酸的鏡像異構體偶聯至固相。為了鑒定SDF-1類似物，可將經標記的SDF-1加入至所述測定法。潛在的類似物將與SDF-1分子竟爭性結合所述鏡像異構體，這將伴隨通過相應標記獲得的信號降低。篩選激動劑或拮抗劑可涉及使用本領域技術人員已知的細胞培養測定法。本發明的試劑盒可包含至少一種或幾種本發明的核酸。另外，試劑盒可包含至少一種或幾種陽性或陰性對照。陽性對照可例如是SDF-1，尤其是針對其來選擇本發明核酸或本發明核酸與其結合的SDF-1，優選以液體形式。陰性對照可例如是根據類似于SDF-1的生物物理學性質而限定的肽，但其不會被本發明的核酸所識別。此外，所述試劑盒可包含一種或幾種緩沖液。各種成分可以干燥或凍干的形式，或以溶解于液體中的形式包含在試劑盒中。所述試劑盒可包括一個或幾個容器，所述容器繼而可包含一種或幾種所述試劑盒的成分。再一個實施方案中，所述試劑盒包括說明書或操作手冊，其將有關如何使用試劑盒及其各種成分的信息提供給使用者。如本文中所優選使用的，術語治療在一個優選實施方案中也包括預防和/或隨訪。本發明的核酸的藥學和生物分析測定主要用于評估它在幾種人體和非人體的體液、組織和器官中的藥物動力學和生物動力學特性。為此，可使用任何本文公開和本領域技術人員已知的檢測方法。本發明再一方面提供了用于檢測本發明的核酸的夾心雜交測定法。在所述檢測測定法中，使用了捕獲探針和檢測探針。所述捕荻探針與本發明的核酸的第一個部分互補，而檢測探針與本發明的核酸的第二個部分互補。捕獲探針和檢測探針均可由DNA核苷酸、經修飾的DNA核苷酸、經〈務飾的RNA核苷酸、RNA核苷酸、LNA核苷酸和/或PNA核普酸形成。因此，所述捕獲探針包含與本發明的核酸的5'-末端互補的片段，45而檢測探針包含與本發明的核酸的3，-末端互補的片段。在所述情況下，將捕獲探針通過其5，-末端固定至表面或基質，其中所述捕獲探針可在其5，-末端處直接固定，或通過在其5，-末端和表面或基質之間的連接子進行固定。但原則上，可將連接子連接至捕獲探針的每個核苷酸。所述連接子可由本領域技術人員已知的親水性連接子形成，或由D-DNA核苷酸、經修飾的D-DNA核苷酸、D-RNA核苷酸、經修飾的D-RNA核香酸、D-LNA核苷酸、PNA核苷酸、L-RNA核苷酸、L-DNA核苷酸、經修飾的L-RNA核苷酸、經修飾的L-DNA核苷酸和/或L-LNA核苷酸形成。此外，所述捕獲探針也可包含與本發明的核酸的3，-末端互補的片段，而所述檢測探針也可包含與本發明的核酸的5，-末端互補的片段。在該情況下，所述捕獲探針通過其3，-末端固定至表面或基質，其中所述捕獲探針可在其3，-末端處直接固定，或通過在其3，-末端和表面或基質之間的連接子進行固定。但原則上，可將連接子連接至與本發明的核酸互補的片段的每個核苷酸。連接子可由本領域技術人員已知的親水性連接子形成，或由D-DNA核苷酸、經修飾的D-DNA核苷酸、D-RNA核苦酸、經修飾的D-RNA核苷酸、D-LNA核苷酸、PNA核苷酸、L-RNA核苷酸、L-DNA核苷酸、經^f務飾的L-RNA核苷酸、經#>飾的L-DNA核苷酸和/或L-LNA核苷酸形成。的，數。可與本發明的核酸雜交的捕獲探針和檢測探針的核苷酸總數的最大值應是本發明的核酸所包含的核苷酸數。檢測探針和捕獲探針的最小核苷酸數(2-10個核苷酸)應可使它們分別與本發明的核酸的5，-末端或3，-末端雜交。為了實現在本發明的核酸和存在于所分析的樣品中的其他核酸之間的高的特異性和選擇性，捕獲探針和檢測探針的核苷酸總數應是或最多為本發明的核酸所包含的核苷酸數。此外，所述檢測探針優選攜帶如本文先前所描述的可檢測的標記物分子或標記。原則上，可將所述標記或標記物分子連接至所述檢測探針的每個核苷酸。所述標記或標記物優選位于檢測探針的5，-末端或3，-末端，其中可在檢測探針內的與本發明的核酸互補的核苷酸與所述標記之間插入連接子。所述連接子可由本領域技術人員已知的親水性連接子形成，或由D-DNA核苷酸、經修飾的D-DNA核苷酸、D-RNA核苷酸、經修飾的D-RNA核苷酸、D-LNA核苷酸、PNA核苷酸、L-RNA核苷酸、L-DNA核苦酸、經修飾的L-RNA核苷酸、經修飾的L-DNA核苷酸和/或L-LNA核苷酸形成。可如下檢測本發明的核酸使本發明的核酸以其一端與捕獲探針雜交，且以其另一端與檢測探針雜交。然后，通過例如一個或多個洗滌步驟移除未結合的檢測探針。隨后可測量結合的檢測探針量，所述檢測探針優選攜帶標記或標記物分子。如本文優選使用的，除非另有說明，術語"疾病"和"病癥，，應可互換使用。如本文使用的，術語"包含"優選無意限制所述術語之前的主題或由所述術語所描述的主題。但在備選實施方案中，應將術語"包含，，理解為"含有"，從而理解為限制所述術語之前的主題或由所述術語所描述的主題。下表中概括了本文所使用的本發明的核酸分子和靶分子SDF-1的各序列標識號、化學性質，其實際序列及內部參考號。需知，已用生物素化的人D-SDF-1(SEQ.ID.4)在適體(即d-核酸水平(D-RNA))水平表征了所述核酸，或用天然構型的SDF-1、L-SDF-l(人SDF-1a，SEQ-ID.1)在鏡像異構體(即L-核酸(L-RNA))水平表征了所述核酸。不同的核酸共有一個內部參考名稱(但分別以一個SEQ.ID針對D-RNA(適體)分子，且一個SEQ，ID.針對L-RNA(鏡像異構體)分子)。表l(A)<table>tableseeoriginaldocumentpage48</column></row><table>RNA/肽序列內部參考號18L-RNA(鏡像異構體)AGCGUGAAAGUAACACGUAAAAUGAAAGGUAACCACGCU191-A619L-RNA(鏡像異構體)AAAGYRACAHGUMAAX,UGAAAGGUARC;X,=A或缺失A型的式-l20L-RNA(鏡像異構體)AAAGYRACAHGUMAAUGAAAGGUARCA型的式-221L-RNA(鏡像異構體)AAAGYRACAHGUMAAAUGAAAGGUARCA型的式-322L-RNA(鏡像異構體)AAAGYAACAHGUCAAUGAAAGGUARCA型的式-423L-RNA(鏡像異構體RS證RA型的式-5-5'24L-RNA(鏡像異構體YRYDSYA型的式-5-3，25L-RNA(鏡像異構體)CUGUGAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCCGCAG192-A10-00226L-RNA(鏡像異構體)UGUGAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCCGCA192-A10-00327L-RNA(鏡像異構體)GUGAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCCGC192-A10-00428L-RNA(鏡像異構體)(JGAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGIMGCCG192-A10-00529L-RNA(鏡像異構體)GAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCC192-A10-00630L-RNA(鏡像異構體)AAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGC192-A10-00731L-RNA(鏡像異構體)GCGUGAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCCGCGC192-A10-00832L-RNA(鏡像異構體)GCGCGAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCCGCGC192-A10-01533L-RNA(鏡像異構體)GCGGAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCCCGC192-A10-01434L-RNA(鏡像異構體)CGUGAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCCGCG192-A10-01635L-RM(鏡像異構體)GCGC/UAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCGUGC192-A10-01736L-RNA(鏡像異構體)GUGCAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCGCGC192-A10-018,200780030524.3勢溢齒被40/98M<table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>表l(D)<table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table>表l(E)<table>tableseeoriginaldocumentpage52</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage53</column></row><table>表l(G)<table>tableseeoriginaldocumentpage54</column></row><table>表l(H)<table>tableseeoriginaldocumentpage55</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage56</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage57</column></row><table>表l(K)<table>tableseeoriginaldocumentpage58</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage59</column></row><table>表l(M)<table>tableseeoriginaldocumentpage60</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage61</column></row><table>表l(o)<table>tableseeoriginaldocumentpage62</column></row><table>表l(p)<table>tableseeoriginaldocumentpage63</column></row><table>附圖簡述本發明通過附圖、實施例和序列表來進一步舉例說明，從這些附圖、實施例和序列表中可獲得另外的特征、實施方案和優點，其中圖1示結合人SDF-1的相關RNA配體的序列比對，其中標出了在一個優選實施方案中以其整體對于結合人SDF-1來說必不可少的序列基序("A型");圖2A示RNA配體192-A10-001的衍生物("A型，，序列基序的人SDF-1RNA配體)；圖2B示RNA配體192-A10-001的衍生物("A型，，序列基序的人SDF-1RNA配體)；圖3示結合人SDF-1的相關RNA配體的序列比對，其中標出了在一個優選實施方案中以其整體對于結合人SDF-1來說必不可少的序列基序("B型")；圖4A示RNA配體193-C2-001和193-G2-001的衍生物("B型"序列基序的人SDF-1RNA配體)；圖4B示RNA配體193-C2-001和193-G2-001的衍生物("B型"序列基序的人SDF-1RNA配體)；圖5示結合人SDF-1的相關RNA配體的序列比對，其中標出了在一個優選實施方案中以其整體對于結合人SDF-1來說必不可少的序列基序("C型，，);圖6示RNA配體190-A3-001的衍生物("C型"序列基序的人SDF-1RNA配體)；圖7A示RNA配體190-D5-001的衍生物("C型"序列基序的人SDF-1RNA配體)；圖7B示RNA配體190-D5-001的衍生物("C型"序列基序的人SDF-1RNA配體)；圖8示RNA配體197-B2的衍生物("C型"序列基序的人SDF-1RNA配體)；圖9示結合人SDF-1的其他RNA配體；圖10示人SDF-1誘導性Jurkat人T細胞白血病細胞的趨化性，其中在Jurkat人T細胞白血病細胞向各種濃度的SDF-1遷移3小時后，獲得了關于人SDF-1的劑量-反應曲線，表示為隨SDF-1濃度改變而變化的熒光信號；圖11示人SDF-1結合性適體192-A10-001與生物素化的人D-SDF-l在37。C下的結合分析的結果，表示為隨生物素化的人D-SDF-l濃度改變而變化的適體結合；圖12示在趨化性測定實驗中測得的人SDF-1結合性鏡像異構體192-A10-001的趨化效力；讓細胞向的0.3nM人SDF-1(于37。C下與各種量的鏡像異構體192-A10-001預溫育)遷移，表示為隨鏡像異構體192-A10-001濃度改變而變化的對照的百分比；圖13示人SDF-1結合性適體192-A10-001、192-F10-001、192國C9畫001、192-E10-001、192-C10-001、192-D11-001、192-G11-001、192-H11-001、192-D10-001、192-E9-001和192-H9-001與生物素化的人D-SDF-l在37。C下的竟爭性結合分析的結果，表示為在1nM和5nM的未標記的適體192-A10-001、192-F10-001、192-C9-001、192-E10-001、192-C10-001、192-D11-001、192-G11-001、192-H11-001、192-D10-001、192-E9-001和192-H9-001下，經標記的適體192-A10-001(用作被未標記的適體替代的參照)的結合；圖14示人SDF-1結合性適體192-A10-008與生物素化的人D-SDF-l在37。C下的結合分析的結果，表示為隨生物素化的人D-SDF-l濃度改變而變化的適體結合；圖15示Biacore2000感應圖(sensorgram),標出了人SDF-1結合性鏡像異構體192-A10-008與人SDF-1(其被通過胺偶聯過程固定在PioneerFl感應芯片上)結合的K。值，表示為隨時間而變化的響應值(RU);另外列出鏡像異構體192-A10-008和192-A10-001的開關率及Ko值；圖16示通過趨化性測定實驗測得的人SDF-1結合性鏡像異構體192-A10-008的趨化效力；讓細胞向的0.3nM人SDF-1(于37。C下與各種量的鏡像異構體192-A10-008預溫育)遷移，表示為隨鏡像異構體192-A10-008濃度改變改變而變化的對照的百分比；圖17示Biacore2000感應圖，標出了鏡像異構體193-G2-01與人SDF-1(其被通過胺偶聯過程固定在PioneerFl感應芯片上)結合的Kd植，表示為隨時間而變化的響應值(RIO;另外列出鏡像異構體193-G2-001和193-C2掘的開關率及K。值；圖18示人SDF-1結合性適體193-G2-012與生物素化的人D-SDF-1在37。C下的結合分析的結果，表示為隨生物素化的人D-SDF-1濃度改變而變化的適體結合；圖19示人SDF-1結合性適體190-A3-001、190-A3-003、l卯-A3-004、190-A3-007、191國D5陽001、191畫D5國002、191-D5-003、191-D5-004、191-D5-005、191-D5-006和191-D5-007與生物素化的人D-SDF-1在37。C下的竟爭性結合分析的結果，表示為在500nM、50nM和10nM的未標記的適體190-A3-001、190-A3-003、190-A3-004、190-A3-007、191-D5-001、191-D5-002、191-D5-003、191-D5-004、191-D5-005、191-D5-006和191-D5-007下，經標記的適體190-A3-001或191-D5-001(用作纟皮未標記的適體替代的參照)的結合；圖20示人SDF-1結合性適體190-A3-004和191-D5-007與生物素化的人D-SDF-1在37。C下的結合分析的結果，表示為隨生物素化的人D-SDF-1濃度改變而變化的適體結合；圖21示Biacore2000感應圖，標出了鏡像異構體191-D5-007與人SDF-1(其被通過胺偶聯過程固定在PioneerFl感應芯片上)結合的Ko值，表示為隨時間而變化的響應值(RU);另外列出鏡像異構體191-D5-001、191-D5-007、190-A3-003和197-B2的開關率及Ku值；圖22示通過趨化性測定實驗測得的人SDF-1結合性鏡像異構體190-A3-004的趨4匕效力；讓細胞向0.3nM人SDF-1(于37。C下與各種量的鏡像異構體l卯-A3-004預溫育)遷移，表示為隨鏡像異構體190-A3-004濃度改變而變化的對照的百分比；66圖23A示通過趨化性測定實驗測得的人SDF-1結合性鏡像異構體193-G2-012國5，-PEG、197-B2-006-5，-PEG、191畫D5-007畫5，-PEG和191-A10-008-5，-PEG的趨化效力；讓細胞向0.3nM人SDF-l(于37°C下與各種量的鏡像異構體193-G2-012-5，-PEG、197-B2-006-5，-PEG、191-D5-007-5，-PEG和191-A10-008-5，-PEG預溫育)遷移，表示為隨鏡像異構體193-G2-012-5，-PEG、197-B2-006-5，-PEG、191-D5-007-5，-PEG和191-A10-008-5，-PEG濃度改變而變化的對照的百分比；圖23B示通過趨化性測定實驗測得的人SDF-l結合性鏡像異構體197-B2-006-5，PEG和197-B2-006-31b-5，-PEG的趨化效力；讓細胞向0.3nM人SDF-l(于37。C下與各種量的鏡像異構體197-B2-006-5，PEG和197-B2-006-31b-5，-PEG預溫育)遷移，表示為隨鏡像異構體197-B2-006-5，PEG和197-B2-006-31b-5，-PEG濃度改變而變化的對照的百分比；圖24A示Biacore2000感應圖，標出了鏡《象異構體193-G2國012國5，-PEG、191-A10-008-5，-PEG和191畫A10誦001-5，-PEG與人SDF-l(其被通過胺偶聯過程固定在PioneerFl感應芯片上)結合的Ko值，表示為隨時間而變化的響應值(RU);圖24B示Biacore2000感應圖，標出了鏡《象異構體197-B2-006-5，PEG、197-B2-006-31b誦5，誦PEG和191-D5誦007畫5，-PEG與人SDF-l(其被通過胺偶聯過程固定在PioneerFl感應芯片上)結合的Ko值，表示為隨時間而變化的響應值(RU);圖25A示通過趨化性測定實驗測得的人SDF-l結合性鏡像異構體192-A10-001、192-A10-001-5，-HES130和192-A10-001-5，-HES100的趨化效力；讓細胞向0.3nM人SDF-l(于37。C下與各種量的鏡像異構體192-A10-001、192-A10-001國5，-HES130和192-A10-001-5，-HES100預溫育)遷移，表示為隨鏡像異構體192-A10-001、192-A10-001-5，-HES130和192-A10-001-5，-HES100濃度改變而變化的對照的百分比；67圖25B示通過趨化性測定實驗測得的人SDF-1結合性鏡像異構體192-A10德、192-A10-001-5，-PEG30和192-A10-001-5，-PEG40的趨化效力；讓細胞向0.3nM人SDF-l(于37。C下與各種量的鏡像異構體192-A10德、192-A10-001-5，-PEG30和192-A10-001~5，-PEG40預溫育)遷移，表示為隨鏡像異構體192-A10-001、192-A10-001-5，-PEG30和192-A10-001-5，-PEG40濃度改變而變化的對照的百分比；圖26示通過趨化性測定實驗測得的對照鏡像異構體的趨化效力；讓細胞向0.3nM人或鼠SDF-l(于37°。下與各種量的對照鏡像異構體預溫育)遷移，表示為隨對照鏡像異構體濃度改變而變化的對照的百分比；圖27示鼠SDF-l誘導性Jurkat人T細胞白血病細胞的趨化性，其中在Jurkat人T細胞白血病細胞向各種SDF-l濃度遷移3小時后，獲得了關于SDF-l的劑量-反應曲線，表示為熒光信號；圖28示通過趨化性測定實驗測得的人SDF-l結合性鏡像異構體192-A10-001和191-D5-007-5，PEG的趨化效力；讓細胞向0.3nM人SDF-l(于37°C下與各種量的鏡像異構體192-A10-001和191-D5-007-5，PEG預溫育)遷移，表示為隨鏡像異構體192-A10-001和191-D5-007-5，PEG濃度改變而變化的對照的百分比；圖29示SDF-l結合性鏡像異構體192-A10-001在使用人卩"J卜SDF-la(于37°C下與各種量的鏡像異構體192-A10-001預溫育)的CXCR4-受體結合測定中的效力，根據鏡像異構體192-A10-001濃度標繪特異性結合的[^J-SDF-la;和圖30示人SDF-l結合性鏡像異構體192-A10-001對使用1nM人SDF-la產生的表達CXCR4的細胞的MAP激酶刺激的抑制；圖31示主動l^環出芽須!l定(aorticringsproutingassay)中人SDF-l結合性鏡^f象異構體193-G2-012-5，-PEG和PEG化的對照鏡4象異構體對SDF-l誘導性出芽的抑制，其中來自大鼠主動脈的環被包埋在膠原基質中，且與含或不含鏡像異構體的SDF-l溫育6天(a:對照；b:10nMSDF-l;c:10nMSDF-l+1人SDF畫l結合性鏡<象異構體193-G2-012-5，-PEG;d:10nMSDF-1+1PEG化的對照鏡像異構體)；圖32示主動脈環出芽測定中人SDF-1結合性鏡像異構體193-G2-012-5，-PEG和PEG化的對照鏡像異構體對SDF-1誘導性出芽的抑制，其中以平均值+Z-SD顯示出芽指數(每條件5環)(*:SDF-1值與對照顯著不同(Mann-Whitney-檢驗；p=0.009);**:SDF-1+結合人SDF-1的鏡像異構體193-G2-012-5，-PEG的值與SDF-1的值顯著不同(Mann-Whitney誦檢驗；p=0.028);圖33示與未使用人SDF-1結合性鏡像異構體193-G2-012-5，-PEG處理的大鼠血漿SDF-1水平相比，在靜脈推注人SDF-1結合性鏡像異構體193-G2-012-5，-PEG后大鼠血漿中人SDF-1結合性鏡像異構體193-G2-012-5，-PEG和SDF-1的水平，其中在96小時的時間內測定血漿中人SDF-1結合性鏡像異構體193-G2-012-5，-PEG和SDF-1水平。實施例實施例1:人SDF-1結合性核酸使用生物素化的人D-SDF-1作為靶標，可產生幾種人SDF-1結合性核酸，所述核酸的核苷酸序列顯示于圖1-9。使用生物素化的人D-SDF-1在適體(即D-核酸)水平表征所述核酸，或使用天然構型的SDF-1(L-SDF-1)在鏡像異構體水平(即L-核酸)表征所述核酸。采用使用生物素化的人D-SDF-1的竟爭性或直接pull-down測定法使用生物素化的人D-SDF-1分析適體(實施例4)。通過Biacore儀2000進行的表面等離子體共振測量(實施例6)和體外趨化性測定(實施例5)使用天然構型的SDF-1(L-SDF-1)檢測了鏡像異構體。如此產生的核酸分子顯示出不同的序列基序，三種主要類型定義于圖1、2A和2B(A型)，圖3、4A和4B(B型)，圖5、6、7A、7B和8(C型)。對于核苷酸序列基序的定義，使用了IUPAC縮寫以用于不確定的核苷酸S強G或C;W弱A或U;G或A;C或U;G或U;A或C;B非AC或U或G;D非CA或G或U;H非GA或C或U;V非UA或C或G;N全部A或G或C或U。除非另有說明，任何核酸序列或片段和框的序列均分別以5，->3，的方向顯示。1.1A型SDF-l結合性核酸如圖1所示，所有A型SDF-l結合性核酸的序列都包含一個核心核苷酸序列，所述核心序列兩側連有可相互雜交的5，-和3，-末端片段。但在所述分子中并非一定發生這種雜交。采用使用生物素化的人D-SDF-1的直接和竟爭性pull-down測定法在適體水平表征所述核酸，以便根據它們的結合行為對它們進行分級(實施例4)。將選擇出的序列合成為鏡像異構體(實施例3)，并使用天然構型的SDF-l(L-SDF)根據體外細胞培養趨化性測定法進行檢測(實施例5)，及通過使用Biacore儀2000進行的表面等離子體共振測量進行檢測(實施例6)。所定義的框或片段的序列在A型SDF-1結合性核酸之間可能不同，這影響了對SDF-l的結合親和力。基于對被概括為A型SDF-l結合性核酸的不同的SDF-l結合性核酸所進行的結合分析，下述核心核普酸序列及其核苷酸序列各自及更優選以其整體在結合SDF-l中必不可少所有鑒定的A型SDF-l結合性核酸的核心核苷酸序列共有序列呤咬基氨嘌嘧酮亞RYKMAAAG豕RACAHGU班AAXaUGAAAGGUARCI(A型的式-l)，其中xa缺失或為'A，。如果'A，缺失，則可將核心核苷酸序列的序列概括為A型的式-2(kAAGyRACAHGU徵AA!UGAAAGGUARCl)。在核心核苷酸序列內具有額外的核苷酸'A，且仍結合SDF-1的A型SDF-1結合性核酸191-A6(核心核苷酸序列AAAGUAACACGU在AAjUGAAAGGUAiC)使得包括備選的核心核苷酸序歹'J(^AAGYRACAHGUMAARUGAAAGGUARCl，A型的式畫3)。作為A型SDF-1結合性核酸的所有其他核酸實例，根據對人SDF-1的結合親和力表征所述A型SDF-1結合性核酸192-A10-001。使用pull-down結合測定法(KD=1.5nM，圖11)和通過表面等離子體共振測量法(KD=1.0nM，圖15)測定平衡結合常數KD。使用體外細胞培養趨化性測定法測量出0,12nM的192-A10-001的IC5。(抑制濃度50%X圖12)。然后，通過測定相對192-A10-001的竟爭性pull-down結合而分析了圖1所示的所有A型SDF-1結合性核酸(圖13;并非所有被檢測的A型SDF-1結合性核酸示于圖13中)。在這些竟爭實驗中，A型SDF-1結合性核酸192-B11和192-C10表現出等于192-A10-001的結合親和力。測定A型SDF-1結合性核酸192-G10、192-F10、192-C9、192-E10、192-D11、192-G11、192-H11和191-A6得更弱的結合親和力。A型SDF-1結合性核酸192-D10、192-E9和192-H9的結合親和力極甚弱于192-A10-001(圖13)。如上所述，A型SDF-1結合性核酸192-B11和192-C10表現出等于192-A10-001的對SDF-1的結合親和力。但它們在核心核苷酸序列的核苷酸序列上顯示少許差異。因此，可通過核苷酸序列AAAGYAACAHGUCAAUGAAAGGUARCl(A型的式-4)概括三種結合SDF-1的具有幾乎相等的高親和力的分子的共有序列，其中192-A10-001的核心核苷酸序列的核苷酸序列(核苷酸序列AAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCl)代表具有最好的A型SDF-1結合性核酸的結合親和力的核苷酸序列。A型SDF-1結合性核酸的5，-末端片段的6個核苷酸中的5或6個核苷酸可與A型SDF-1結合性核酸的3，-末端片段的6個核苷酸中的相應的5或6個核苷酸雜交，從而形成末端螺旋。盡管這些核苷酸在幾個位置上是可變的，但不同核苷酸允許5，-和3，-末端片段各自6個核苷酸中的5或6個雜交。圖1中顯示的A型SDF-1結合性核酸的5'-末端和3，-末端片段可概括為5，末端片段的通式('RSHRYR，，A型的式-5-5，)和3，-末端片段的通式('YRYDSY，，A型的式-5-3，)。通過測定相對原始分子192-A10-001和192-A10-008的竟爭性pull-down結合而分析了A型SDF-1結合性核酸192-A10-001的截短衍生物(圖2A和2B)。這些實驗顯示可將192-A10-001的6個末端核普酸(5，末端GCUGUG;3，末端CGCAGC)減少至衍生物192-A10-002的5個核香酸(5，末端CUGUG;3，末端CGCAG)而不降低結合親和力。然而，當截短至4個末端核苷酸(5，末端UGUG;3，末端CGCA;192-A10-003)或更少(192-A10-004/-005/-006/-007)導致對SDF-1的結合親和力降低(圖2A)。可將圖2A和圖2B中顯示的測定的具有A型SDF-1結合性核酸192-A10-001的f汙生物的5和4個核苷酸的長度的5，-末端和3，-末端片段概括為5，-末端片段的通式(4X2BBBS，，A型的式-6-5，)和3，-末端片段的通式('SBBVX3，；A型的式-6-3，)中，其中X2缺失或為'S，，X3缺失或為'S，。5'-和3，-末端片段的核苷酸序列對A型SDF-1結合性核酸的結合親和力具有影響。這不僅由核酸192-F10和192-E10顯示，而且還由192-A10-001的衍生物顯示(圖2B;)。192-F10和192-E10的核心核苷酸序列與192-B11和192-C10的相同，但在5，-末端片段的3，-末端和在3，-末端片段的5，-末端包含少許差異，從而導致結合親和力降低。用'GCGCG，和'CGCGC，(192-A10-015)替換A型SDF-1結合性核酸192-A10-002的5，-和3'-末端核苷酸'CUGUG，和'CGCAG，導致結合親和力降低，然而使用'GCGUG，和'CGCGC，(192-A10-008)的替換導致與對于192-A10-002結合親和力相同(圖2B，圖15，圖12，圖16)。另外，相對192-A10-001或其衍生物192畫A10曙008(兩者具有相同的對SDF-1的結合親和力)的結合親和力，將各自具有4個5，-和3，-末端核苷酸的A型SDF-1結合性核酸192-A10-001的9個衍生物(192-A10-014/-015/-016M)17/-018/-019/-020/-021/-022/-023)檢測為適體。所有克隆表現出弱于、甚弱于或極甚弱于192-A10-001(6個核苷酸形成末端螺旋)或具有5個末端的192-A10-008(圖2B)的對SDF-1的結合親和力。因此，5，-和3，-末端片段的核苷酸的序列核苷酸數對于與SDF-1的有效結合極為重要。如對于A型SDF-1結合性核酸192-A10-002和192-A10-08所示，5，-和3，-末端片段的優選組合是'CUGUG，和'CGCAG，(A型SDF-1結合性核酸192-A10-002的5，-和3，-末端片段)及'GCGUG，和'CGCGC，(A型SDF-1結合性核酸192-A10-008的5，-和3，-末端片段)。然而，通過組合所有^:測A型SDF-1結合性核酸的5，-和3，-末端片段，得出A型SDF-1結合性核酸的5，-末端片段的通式是'X!X2NNBV，(A型的式-7-5，)，A型SDF-1結合性核酸的3，-末端片段的通式是'BNBNX3X4，(A型的式-7-3，)，其中Xj是'R，或缺失，X2是'S，，X3是'S，及X4是'Y，或缺失；或Xj缺失，X2是'S，或缺失，X3是'S，或缺失及X4缺失。1.2B型SDF-1結合性核酸如圖3所示，所有B型SDF-1結合性核酸的序列都包含一個核心核苷酸序列，所述核心序列兩側連有可相互雜交的5，-和3，-末端片段。但在所述分子中并非一定發生這種雜交。采用使用生物素化的人D-SDF-1的直接和竟爭性pull-down測定法在適體水平表征所述核酸，以便根據它們的結合行為對它們進行分級(實施例4)。將選擇出的序列合成為鏡像異構體(實施例3)，并使用天然構型的SDF-1(L-SDF)根據體外細胞培養趨化性測定法進行檢測(實施例5)，及通過使用Biacore儀2000根據表面等離子體共振測量法進行檢測(實施例6)。73所定義的框或片段的序列在B型SDF-1結合性核酸之間可能不同，這影響了對SDF-1的結合親和力。基于對被概括為B型SDF-l結合性核酸的不同的SDF-1結合性核酸所進行的結合分析，下述核心核苷酸序列及其核苷酸序列各自及更優選以其整體在結合SDF-1中必不可少所有鑒定的B型SDF-1結合性核酸的核心核苷酸序列共有序列(B型的式-1)。通過測定相對A型SDF-1結合性核酸192-A10掘(在pull-down結合測定法中測定的1.5nM的Kd[圉11，通過表面等離子共振測量法測定的1,0nM的K。[圖15j，0.12nM的IC50;[圖12)的竟爭性pull-down結合而分析了在核心核普酸序列的一個位置上相異的B型SDF畫l結合性核酸193-G2-001、193-C2-001和193-F2-001。三種,皮測B型SDF-1結合性核酸中每一種都顯示出優于A型SDF-1結合性核酸192-A10-001的對人SDF-1的結合，其中193-G2-001的結合親和力與193-C2-001和193-F2-001的一樣好(圖3)。數據表明B型SDF-1結合性核酸193-G2-001、193-C2-001和193-F2-001的核心核苷酸序列的核苷酸序列中的差異對于對SDF-1的結合親和力沒有影響。例如，根據對人SDF-1的結合親和力表征所述B型SDF-1結合性核酸193-G2-001。使用pull-down結合測定法(KD=0.3nM)和通過表面等離子體共振測量法(KD=0.5nM，圖17)測定平衡結合常數Kd。使用體外細胞培養趨化性測定法測量出0.08nM的193-G2-001的IC50(抑制濃度50%)。相反，核心核苷酸序列的序列不同的B型SDF-1結合性核酸193-B3-002、193-H3-002、193-E3-002和193-D1-002結合性質更差(圖3)。因此，具有提高的對SDF-1的結合親和力的B型SDF-1結合性核酸共有具有序列(B型的式-2)的核心核苷酸序列。B型SDF-1結合性核酸的5，-末端片段的6個核苷酸中有4、5或6個核苷酸可與B型SDF-1結合性核酸的3，-末端片段的6個核苷酸中的相應的4、5或6個核苷酸雜交，從而形成末端螺旋。盡管這些核苷酸在幾個位置上是可變的，但不同核苷酸允許5，-和3，-末端片段各自6個核苷酸中的5或6個雜交。可將圖3中顯示的B型SDF-1結合性核酸的5，-末端和3，-末端片段概括為5，末端片段的通式(B型的式-3-5，；'X,GCRWG，，其中Xi是'A，或缺失)和3，-末端片段的通式(B型的式-3-3，；'KRYSCX4'，其中X4是'U，或缺失)。B型SDF-1結合性核酸193-Gl-002、193-D2-002、193-A1-002和193-D3-002具有更弱的對SDF-1的的結合親和力，盡管它們與193-C2-001、193-G2-001和193-F2-001共有相同的核心核苷酸序列(B型的式-2)(圖3)。B型SDF-1結合性核酸193-Gl-002、193-D2-002、193-A1-002和193-D3-002的不利的結合性質可為由5，-和3，-末端片段的核苷酸數和序列所致。通過測定相對原始分子193-G2-001和193-G2-012的竟爭性pull-down結合而分析了B型SDF-1結合性核酸193-G2-001和193-C2-001的截短衍生物(圖4A和4B)。這些實驗顯示將B型SDF-1結合性核酸193-G2-001和193-C2-001的6個末端核苷酸(5，末端AGCGUG;3'末端UACGCU)減少至5個核苷酸(5，末端GCGUG;3'末端UACGC)產生具有相似結合親和力的分子(193-C2-002和193-G2-012)。用pull-down結合測定法測定平衡結合常數KD(KD=0.3nm,圖18)。然而，當截短至4個末端核苷酸(5，末端CGUG;3'末端UACG;193-C2-003)或更少(193-C2畫004、193-C2-005、193-C2-006、193-C2-007)時導致對SDF-1的結合親和力降低，所述親和力可通過4吏用竟爭性pull-down結合測定法來測量(圖4A)。在5，-和3，-末端處的5個末端核香酸的核苷酸序列分別具有對B型SDF-1結合性核酸的結合親和力的影響。用'GCGCG，和'CGCGC，(193-G2-013)替換5，-和3'-末端核苷酸'GCGUG，和'UACGC，(193-C2-002,193-G2-12)導致結合親和力降低。另外，檢測了具有核苷酸長為4個堿基對的末端螺旋的B型SDF-1結合性核酸193-GZ-001的4種不同衍生物(193-G2-014/-015/-016/-017)。它們均表現出對SDF-1的結合親和力降低(圖4B)。因此，5'-和3，-末端核苷酸序列和長度對于與SDF-1的有效結合是必需的。具有圖4A和4B中顯示的B型SDF-1結合性核酸193-C2-003和193-G2-012的衍生物的5和4個核苷酸的長度的5，-末端和3，-末端片段可概括為5，-末端片段的通式('X2SSBS，，B型的式-4-5，，其中X2缺失或為'G，)和3，-末端片段的通式('BVSSX3，，B型的式-4-3，，其中乂3缺失或為'C，)。如對于B型SDF-1結合性核酸193-G2-001和193-C2-01及它們的衍生物193-G2-012和193-C2-002所示，5，-和3，-末端片段的優選實施方案是'X,GCGUG，(5，-末端片段；B型的式5-5，)和'UACGCX4，(3，-末端片段；B型的式5-3，)，其中Xi是'A，或缺失，且X4是'U，或缺失。然而，通過組合所有被測B型SDF-1結合性核酸的5，-和3，-末端片段，得出B型SDF-1結合性核酸的5，-末端片段的通式是U2SVNS，(B型的式-6-5，)，B型SDF-1結合性核酸的3，-末端片段的通式是'BVBSX3X4，(B型的式-6-3，)，其中Xi是'A，或缺失，X2是'G，，X3是'C，及X4是'U，或缺失；或Xj缺失，X2是'G，或缺失，X3是'C，或缺失及X4缺失；1.3C型SDF-1結合性核酸如圖5所示，所有C型SDF-1結合性核酸的序列都包含一個核心核苷酸序列，所述核心序列兩側連有可相互雜交的5，-和3，-末端片段。但在所述分子中并非一定發生這種雜交。采用使用生物素化的人D-SDF-1的直接和竟爭性pull-down測定法在適體水平表征所述核酸，以便根據它們的結合行為對它們進行分級(實施例4)。將選擇出的序列合成為鏡像異構體(實施例3)，并使用天然構型的SDF-1(L-SDF)根據體外細胞培養趨化性測定法進行檢測(實施例5),及通過使用Biacore儀2000根據表面等離子體共振測量法進行檢測(實施例6)。所定義的框或片段的序列在C型SDF-1結合性核酸之間可能不同，這影響了對SDF-1的結合親和力。基于對被概括為C型SDF-l結合性核酸的不同的SDF-1結合性核酸所進行的結合分析，下述核心核苷酸序列及其核苷酸序列各自及更優選以其整體在結合SDF-1中必不可少所有鑒定的C型SDF-1結合性核酸的核心核苷酸序列共有序列GGUfAGGGCU據食，AAGUCGG(C型的式-1)，其中XA缺失或為'A，除C型SDF-1結合性核酸197-D1夕卜，所有鑒定的C型SDF-1結合性核酸的序列的核心核苷酸序列共有核苷酸序列as—一—^■—i一GGU《AGGGCUfi^AGUCGG(C型的式-2)。在核心核苷酸序列內缺少一個核苷酸'A，且仍結合SDF-1的C型SDF-1結合性核酸197-D1(核心核苷酸序列|gguuagggcua^agucgg|)使得包括備選的核心核苷酸序列(lGGU!AGGGCUH綠GUCGGl,C型的式-3)。首先，通過測定相對A型SDF-1結合性核酸192-A10-00K通過pull-down測定法和通過表面等離子體共振測量法測量的KD=1.5nM;IC50=0.12nM)的竟爭性pull-down結合而分析了圖5所示所有C型SDF-1結合性核酸。在竟爭實驗中，C型SDF-1結合性核酸191-D5-001、197-B2、190-A3-001、197-H1、197-H3和197-E3表現出弱于192-A10-001的結合親和力。測得191國A5、197-B1、197-D1、197-H2和197-D2的結合親和力甚弱(圖5)。通過進一步的竟爭性pull-down結合測定法、表面等離子體共振測量法和體外趨化性測定法進一步表征了所述分子或其衍生物。根據對人SDF-1的結合親和力表征了C型SDF-1結合性核酸191-D5-001,其中通過表面等離子體共振測量法測定出平衡結合常數K。(KD=0.8nM，圖21)。使用體外細胞培養趨化性測定法測量出0.2nM的191-D5-001的IC50(抑制濃度50%)。通過表面等離子體共振測量法測定出C型SDF-1結合性核酸197-B2對人SDF-1的結合親和力(KD=0.9nM)，在體外細胞培養趨化性測定法分析出其0.2nM的IC5o(抑制濃度50%)。這些數據表明C型SDF-1結合性核酸191-D5-001和197-B2具有相似的對SDF-1的結合親和力(圖5和8)。C型SDF-1結合性核酸190-A3-001(48個核苷酸)包含17個核苷酸的5，-末端片段和12個核苷酸的3，-末端片段，其中在另一方面，在5，-末端片段的5，末端的4個核苷酸和在3，-末端片段的3'末端的4個核苷酸可相互雜交，從而形成末端螺旋。此外，5，-末端片段中的核苷酸'UGAGA，也可與3'-末端片段中的核苷酸'UCUCA，'雜交，從而形成末端螺旋。分子190-A3-001的5，-末端片段減少至8個核苷酸('GAGAUAGG，)和3，-末端片段中減少至9個核苷酸('CUGAUUCUC，)(其中5，-和3，-末端片段的8、9個核苷酸中的6個可相互雜交)對針對SDF-1的結合親和力無影響(190-A3-004;圖6和圖19)。使用竟爭性pull-down結合測定法(1^=4.6nM，圖20)和通過表面等離子體共振測量法(KD=4.7nM)測定190-A3-004的平衡結合常數Kd。使用體外細胞培養趨化性測定法測量出0.1nM的190-A3-004的IC5。(抑制濃度50%)(圖22)。然而，在5，-末端片段截短至2個核苷酸導致結合親和力極強降低(190-A3-007;圖6和圖19)。C型SDF-1結合性核酸191-D5-001、197-B2和197-H1(核心核苷酸序歹'j:I^GUUAGGGCUAGAAGUCGGl)、197-H3/191-A5(核心核普酸序歹'j:lGGUUAGGGCUCGAAGUCGGl)和197-E3/197-B1(核心核苷酸序列IgguuagggcuugaagucggI)共有幾乎相同的核心核苷酸序列(C型的式-4;核苷酸序列GGUUAGGGCUHGAAGUCGG)。191畫D5畫001、197-B2和197-H1不共有相似的5,國和3，-末端片段(197-H3和197-E3具有與197-B2相同的5，-和3，-末端片段)。然而，5，-末端片段的相應的10個(197-B2、197曙E3、197隱H3)核苷酸或10個核香酸中的9個(191-D5-001、197-H1)核苷酸可與3，-末端片段的相應10個核苷酸(197-B2、197-E3、197-H3)或10個核苷酸中的9個(191-D5-001,197-H1)核苷酸雜交(圖5)。從而，上述C型SDF-1結合性核酸197-B2、191-D5-001、197-H1、197-E3和197-H3及191-A5、197誦B1、197畫H2、197-D1和197-D2的785'-末端片段包含共同通用的'RKSBUSNVGR，(C型的式-5-5，)的核苷酸序列。上述C型SDF-1結合性核酸197-B2、191-D5-001、197-H1、197-E3和197-H3及191-A5、197-B1、197-H2、197-D1和197-D2的3'-末端片段包含共同通用的'YYNRCASSMY，(C型的式-5-3，)的核苷酸序列，其中優選C型SDF-l結合性核酸197-B2、191-D5-001、197-H1、197-E3和197-H3的5，和3，-末端片段。可將C型SDF-l結合核酸197-B2、191-D5-001、197-H1、197-E3和197-H3的這些優選5，_和3，_末端片段概括為通式'RKSBUGSVGR，(C型的式-6-5，；5，-末端片段)和'YCNRCASSMY，(C型的式-6-3，；3，-末端片段)。構建C型SDF-1結合性核酸191-D5-001的截短的f汴生物，且在竟爭性pull-down結合測定法中相對于原始分子191-D5-001對其進行檢測(圖7A,圖7B和圖19)。首先，如圖7A所示，首先將5，-和3，-末端片段的長度從各自10個核苷酸(191-D5-001)縮短至各自7個核苷酸(191-D5-004)，其中5，-末端片段和3，-末端片段的IO個核苷酸(191-D5-001)中9個或7個核苷酸(191-D5-004)的6個可相互雜交。分別從5，-和3，-末端片段的核苷酸減少至7個核苷酸(其中7個核苷酸中的6個可相互雜交)導致對SDF-1的結合親和力降低(191-D5-004)。修飾C型SDF-1結合性核酸191-D5-004的末端片段，其中用'C，(191-D5-005)替換191-D5-004的3，-末端片段中的非配對核苷酸'A，。所述修飾導致結合的提高。此衍生物——C型SDF-1結合性核酸191-D5-005表現出與191-D5-001相似的對SDF-1的結合性。再分別截短5，-和3，-末端片段至5個核苷酸，產生總長為29個核苷酸的分子(191-D5-007)。因為191-D5-001與C型SDF-1結合性核酸197-B2、191-D5-001、197國H1、191-A5、197-H3、197-B1、197誦E3、197畫D1、197-H2和197-D2的相似性，及因為對于191-D5-007所示數據，可推測5，-和3，-末端片段原則上可被截短至5個核苷酸，其中成功地檢測5'-末端片段的核苷酸序列'CGGGA，和3，-末端片段的'UCCCG，(C型SDF-1結合性核酸191-D5-007010)。令人驚訝的是，C型SDF-1結合性核酸191-D5-007與SDF-1的結合比191-D5-001更好一些(使用竟爭性結合測定法在適體水平上測定的)。使用pull-down結合測定法(KD=2.2nM，圖20)和通過表面等離子共振測量法(KD=0.8nM,圖21)測定191-D5-007的平衡結合常數Ko。使用體外細胞培養趨化性測定法測量出o.lnM的191-D5-007的IC5。(抑制濃度50%)。進一步將兩個末端片段都截短至4個核苷酸(191-D5-010,圖7A)。具有各自4個核苷酸的5，-和3，-末端片段的C型SDF-1結合性核酸191-D5-001的另外的衍生物(191-D5-017/-024/-029)在竟爭性pull-down結合測定法中相對191-D5-007也顯示對SDF-1的結合親和力降低(圖7B)。還檢測了具有各自5個核苷酸的備選的5，-和3，-末端片段及(191-D5-017-29a、191國D5-017-29b、191-D5-019-29a、191-D5-024-29a、191-D5-024-29b)。這些衍生物的5，-末端片段的通式是'XsSSSV，(C型的式-7-5，)，這些衍生物的3，-片段的通式是'BSSSXs，C型的式-7-3，)，其中Xs缺失或為S，。5個被測變體中的2個顯示與191-D5-007相同的對SDF-1的結合親和力(191-D5-024國29a、191-D5-024-29b;圖7B)。可將顯示對SDF-1的最佳結合親和力，且分別包含5個核苷酸的5，-末端和3，-末端片段的191-D5-001衍生物(191-D5-007、191-D5誦024-29a、191-D5-024-29b)的5，-末端和3，-末端片段的序列概括為通式(5，-末端片段'SGGSR，，C型的式-8-5，；3，-末端片段，YSCCS，，C型的式-8-3')。通過測定相對原始分子197-B2和191-D5-007的竟爭性pul卜down結合而分析了C型SDF-1結合性核酸197-B2的截短衍生物(圖8)。通過相對于191-D5-007使用竟爭性pull-down結合測定法，顯示197-B2具有與191-D5-007相同的對SDF-1結合親和力。將5，-和3，-末端片段從各自10個核苷酸(197-B2)縮短至各自5個核苷酸(197-B2-005)而無損于結合親和力，其中5，-末端片段和3，-末端片段的核苷酸可完全相互雜交。如果用197-B2-006的'GCCGG，(5，-末端片段)和'CCGGC，(3，-末端片段)替換197-B2-005的5，-末端('GCGGG，)和3，-末端('CCUGC，)片段，那么對SDF-1的結合親和力得到完全保持。因為197-B2和191-D5-001(及它們的衍生物)共有相同的核心核苷酸序列(IgguuagggcuagaagucggI)且檢測了擁有具有各自4個核苷酸的長度的5，-和3，-末端片段的191-D5的幾種衍生物，所以略去了5，-和3，-末端片段的進一步截短。設計兩種另外的衍生物，所述衍生物分別在5，-和3，-末端包含6個核苷酸(5，-和3，-末端片段)。兩種分子(197-B2-006誦31a和197-B2-006-31b)對SDF-1的結合親和力與對于191-D5-007和197-B2-006所示親和力相同(圖8)。可將顯示對SDF-1的最佳結合親和力，且分別包含5個核苷酸的5，-末端和3，-末端片段的197-B2衍生物的5，-末端和3，-末端片段的序列概括為通式(5，-末端片段'GCSGG，，C型的式-9-5，；3，-末端片段，CCKGC，，C型的式-9-3，)。通過組合C型SDF-1結合性核酸191-D5-001(5，-末端片段:'SGGSR，，C型的式-8-5，;3，-末端片段:，YSCCS，，C型的式-8-3，)和197-B2(5，-末端片段'GCSGG，，C型的式-9-5，；3，-末端片段:,CCKGC，，C型的式-9-3，)的截短衍生物的優選5，-和3，-片段，得出5'-末端和3，-末端片段的共同優選通式是'SSSSR，(5，-末端片段，C型的式-10-5，)和'YSBSS，(3，-末端片段C型的式-10-3，)。1.4其他SDF-1結合性核酸此外，鑒定了不共有'A型，、'B型，和'C型，的SDF-1結合性基序的其他三種SDF-1結合性核酸。通過使用pull-down結合測定法，它們經分析為適體(圖9)。要理解，圖1-9中顯示的任何序列是本發明的核酸，包括其截短形式，但還包括其延伸形式，但條件是分別經所述截短和延伸的核酸分子仍能結合靶標。實施例2:SDF結合性鏡像異構體的40kda-PEG和其他修飾物為延長鏡像異構體的體內血漿停留時間，如第3章中所述將鏡象異構體193-G2-012,192-A10-008,191-D5-007,197-B2-006和197-B2-006-31b在5'末端處共價偶聯至40kDa聚乙二醇(PEGXPEG化的克隆193-G2-012-5，-PEG，192畫A10-008-5，PEG,191-D5-007-5，PEG，197陽B2-006-5，PEG和197畫B2-006-31b誦5，PEG)。在體外細胞培養TAX測定法(第5章)中和通過使用Biacore進行的等離子體共振測量法(第6章)分析了PEG化的鏡像異構體分子。所有經40kDa-PEG-修飾的鏡像異構體仍能抑制SDF-1誘導性趨化作用，且能在低納摩爾范圍內結合SDF-1(圖23A、23B、24A和圖24B)。此外，用40kDa-PEG、30kDa-PEG、lOOkDa-HES或130kDa-HES(PEG化的克隆:192-A10-001-5，PEG40、192-A10-001-5，PEG30、192-A10-001-5，HES100、192-A10-001-5，HES130;第3章中的偶聯方法)修飾SDF結合性鏡像異構體192-A10-001。如圖25A和圖25B所示，PEG-部分和HES-部分對鏡像異構體抑制SDF-1誘導性趨化潛能均無影響。實施例3:適體和鏡像異構體的合成和衍生化3.1小規模合成利用2'TBDMSRNA亞砩酰胺化學(Damha和Ogilvie，1993)，使用ABI394合成4義(AppliedBiosystems，FosterCity,CA，USA),通過固相合成來制備適體和鏡像異構體。D-和L-構型的rA(N-Bz)-、rC(Ac)-、rG(N畫ibu)-和rU誦亞砩酰胺購自ChemGenes,Wilmington,MA。適體和鏡像異構體通過凝膠電泳進行純化。3.2大規模合成及修飾利用2，TBDMSRNA亞磷酰胺化學(DamhaandOgilvie,1993)，使用AktaPilot100合成儀(AmershamBiosciences;GeneralElectricHealthcare,Freiburg)，通過固相合成來制備鏡像異構體。L國rA(N-Bz)畫、L曙rC(Ac)-、L-rG(N-ibu)-和L誦rU畫亞磷酰胺購自82ChemGenes，Wilmington,MA，USA。5，-氨基-修飾劑購自AmericanInternationalChemicalsInc.(Framingham，MA，USA)。鏡像異構體的合成始于分別經L-riboG;L-riboC、L-riboA、L-riboU修飾的CPG，孔徑為1000A(LinkTechnology,Glasgow,UK)。對于偶聯(每個循環是15分鐘)，使用0.3M在乙腈中的芐硫基四唑(AmericanInternationalChemicalsInc.,Framingham,MA，USA)和3.5當量的各自0.2M在乙腈中的亞磷酰胺溶液。使用氧化封端循環。其他用于寡核苷酸合成的標準溶劑和試劑購自Biosolve(Valkenswaard，NL)。合成鏡像異構體，DMT-ON;在去保護后，使用Sourcel5RPC介質(Amersham),通過制備型RP-HPLC(WincottF等人，1995)對其進行純化。用80%乙酸除去5，DMT-基團(在室溫下90分鐘)。隨后，加入2MNaOAc水溶液，并使用5K再生纖維素膜(Millipore，Bedford,MA)通過正切流動過濾來對鏡像異構體進行脫鹽。3.3PEG化為了延長鏡像異構體在體內的血漿停留時間，將鏡像異構體在5，-末端處共價偶聯至40kDa聚乙二醇(PEG)部分。為了PEG化(關于PEG化方法的技術細節，可參見歐洲專利申請EP1306382),將純化的5，-氨基修飾的鏡像異構體溶解于H20(2.5ml)、DMF(5ml)和緩沖液A(5ml;通過混合檸檬酸*1120[7g、硼酸[3.54gl、磷酸2.26m"和1MNaOH[343mlj并加入H20至終體積1L而制備；用1MHC1調節pH=8，4)的混合物中。用1MNaOH使鏡像異構體溶液的pH達到8.4。然后，在37°C下以6份(每份0.25當量海30分鐘添加40kDaPEG-NHS酯(NektarTherapeutics,Huntsville，AL)，直至達到75-85%的最大產率。在添加PEG-NHS酯的過程中，用1MNaOH將反應混合物的pH保持在8-8.5。將所述反應混合物與4ml尿素溶液(8M)、和4ml緩沖液B(0.1M的在H20中的乙酸三乙基銨)混合，并加熱至95。C15分鐘。然后，83采用乙腈梯度(緩沖液B;緩沖液C:0.1M的在乙腈中的乙酸三乙基銨)，使用Source15RPC介質(Amersham),通過RP-HPLC,使用源15RPC介質(Amersham)來純化PEG化的鏡像異構體。用5%緩沖液C洗脫過量的PEG,用10-15%緩沖液C洗脫PEG化的鏡像異構體。將純度>95%(這通過HPLC來評估)的產物級分合并，并與40m13MNaOAC相混合。通過正切流動過濾(5K再生纖維素膜，Millipore，BedfordMA)對PEG化的鏡像異構體進行脫鹽。3.4HES化為了伸長鏡像異構體的體內血漿停留時間，將鏡像異構體共價偶聯至大于130kDa的不同分子量和置換度(substitutiondegree)大于0.5的羥乙基淀粉(HES)。鏡像異構體的5，-末端是優選的綴合位點。對于HES化(關于HES化方法的技術細節，可參見GermanOffenlegungsschriftDE10112825Al,及關于D/L-核酸參見PCTWO02/080979A2),將純化的5，-氨基修飾的鏡像異構體溶解在碳酸氫鈉(0.3M,1ml)中，且將pH調節至8.5。有關鏡像異構體，向N,N-二曱基曱酰胺(1ml)中加入5倍過量的游離HES酸(3.3mmol,Supramol，Rosbach，Germany)和二(N-琥珀酰重胺基)碳酸酯(3.3mmol)，從而產生HES的活化的N-羥基琥珀酰亞胺酯溶液。為了溶解所有反應物，將混合物在60。C下短暫攪拌，冷卻至25。C，然后在25。C下攪拌1.5h。向活化的HES的溶液中加入鏡像異構體溶液，在25°C和pH8.5下攪拌所得的混合物。通過分析IEX-HPLC監控反應。通常綴合在l小時內進行至大于75%。為了通過Source15Q介質(GE，Freiburg,Germany)進行IEX-HPLC純化，將反應混合物與IO倍量的緩沖液A(lmMEDTA，25mMTris，10mM在水/乙腈(9:1)中的NaC104，pH4)混合。用5。/。的緩沖液A(lmMEDTA，25mMTris，500mM的在水/乙腈(9:l)中的NaC104，pH4)洗脫過量的HES，其中用20-30%的緩沖液B洗脫HES-鏡像異構體綴合物。將純度大于95%(如通過HPLC估計的)的產物級分合并，然后通過正切流動過濾(5K再生纖維素膜，MiHipore，BedfordMA)進行脫鹽。實施例4:結合常數的測定(Pull-down結合測定法)4.1直接pull-down結合測定法在37。C下，根據pull-down測定測量適體對生物素化人D-SDF-1的親和力。4吏用[Y-32p畫標記的ATP(HartmannAnalytic,BraunschweigGermany)，通過T4多核苦酸激酵(Invitrogen，Karlsruhe,Germany)對適體進行5，-磷酸標記。經標記的適體的比放射性為200，000誦800，000cpm/pmol。在變性和復性后將適體在37。C下以10、20、30或40pM的濃度與不同量的生物素化的人D-SDF-1—起于選擇緩沖液(20mMTris國HClpH7.4;137mMNaCl;5mMKC1;1mMMgCl2;1mMCaCl2;0.1%[w/vollTween-20)中溫育4-12小時以便在低濃度下達到平衡。用lOpg/ml人血清白蛋白(Sigma-Aldrich,Stdnheim，Germany)和10ng/ml酵母RNA(Ambion,Austin,USA)補充選擇緩沖液，以便防止結合伴侶吸附至所使用的塑料器具或固定基質的表面。生物素化的D-SDF-1的濃度范圍祐沒定為8pM-100nM;總反應體積為1ml。將肽和肽-適體復合物固定在1.5^1StreptavidinUltralinkPlus顆粒(PierceBiotechnology,Rockford,USA)上，所述顆粒已用選擇緩沖液預平衡，并重懸于6fil的總體積中。顆粒在相應的溫度下于熱混勻器中保持懸浮30分鐘。在分離上清液并適當洗滌后，在閃爍計數器中對固定的放射性進行定量。將結合百分比對生物素化的人D-SDF-1的濃度進行繪圖，且通過使用軟件算法(GRAFIT;ErithacusSoftware;SurreyU.K.)并假定1:1的化學計量來獲得解離常數。4.2竟爭pull-down結合測定法為了比較不同的結合D-SDF-1的適體，實施竟爭性分級測定法。為達到此目的，將可獲得的最具親和力的適體進行放射性標記(參見上文)并用作參照物。在變性和復性后，將它在一定的條件下于37X:與生物素化的D-SDF-1在1ml選擇緩沖液中進行溫育，所述條件導致在NeutrAvidin瓊脂糖或StreptavidinUltralinkPlus(兩者都來自Pierce)上固定和洗滌之后約5-10%的與所述肽的結令(無竟爭)。將過量的變性和復性的未標記的D-RNA適體變體以不同的濃度(如2、10和50nM)與經標記的參照適體一起加入，以便進行平行結合反應。待測適體與參照適體竟爭性結合乾標，從而降低結合信號，所述信號降低取決于它們的結合特征。在所述測定法中發現的最具活性實施例5:通過SDF-1結合性鏡像異構體進行的對SDF-1誘導性趨化作用的抑制的分析將Jurkat人T細胞白血病細胞(獲自DSMZ,Braunschweig)在37。C和5%C02下培養在含有Glutamax(Invitrogen，Karlsruhe,Germany)的RPMI1640培養基(其含有10%胎牛血清白蛋白、100單位/ml青霉素和100pg/ml鏈霉素(Invitrogen,Karlsruhe,Germany))中。在實驗前一天，將細胞以0.3x106/ml(9xio6/30ml)接種在新培養瓶中的標準培養基(Invitrogen,Karlsruhe,Germany)中。關于實驗，將細胞離心(以300g進行5分鐘)、重懸浮、計數及用15mlHBH(含有1mg/ml牛血清白蛋白和20mMHEPES的Hanks平衡鹽溶液；Invitrogen,Karlsruhe,Germany)清洗一次。然后以3xi06/ml或1.33xi06/ml重懸浮細胞，這取決于所使用的過濾板的類型。然后讓細胞通過過濾板的多孔膜向含有SDF-1和不同量的鏡像異構體的溶液遷移數小時。使用具有多孔聚碳酸酯膜(5pm的孔大小)(Corning;3421)的Transwell板和插入物或MultiScreenMIC板(Millipore，MAMIC5S10)。5.1用于Transwell板的方案在Transwell板的更低的區室中在600HBH中制備刺激溶液(SDF-1+不同濃度的鏡像異構體)，并溫育20-30分鐘。所有條件進行至少2次。將插入物轉移至含有刺激溶液的孔中，并向插入物(3x105個細胞/孔)中加入100pl的3x106/ml的細胞懸浮液。然后讓細胞在37。C下遷移3小時。此后，取出插入物，并向孔(也向校準孔)中加入60pl刃天青(resazurin)(Sigma，Deisenhofen，Germany)工作溶液(440|uM于PBS中;Biochrom,Berlin,Germany)。然后將平板在37。C下溫育2.5-3小時。在溫育后，將每個孔的200|iil轉移至黑色96孔平板。在FluostarOptima多檢測平板讀出器(BMG，Offenburg,Germany)中在544nm(激發)和590nm(發射)處進行萸光信號的測量。5.2用于MilliporeMultiScreen平板的方案在0.2ml低profile96管平板中將刺激溶液(SDF-1+不同濃度的鏡像異構體)配制為10X溶液。用移液器將135piHBH加入MultiScreen平板的更低的區室中，并加入15nl刺激溶液。所有條件進行一式三份。在20-30分鐘，將過濾板插入裝有刺激溶液的平板中，并向過濾板孔(1x105個細胞/孔)中加入75pi的1.33x106/ml的細胞懸浮液。然后讓細胞在37。C下遷移3小時。此后，取出插入物，向更低的孔中加入20|nl刃天青工作溶液(440于PBS中)。然后將平板在37。C下溫育2.5-3小時。在溫育后，將每個孔的lOOjnl轉移至黑色96孔平板。如上所述進行熒光信號的測量。5.3評估關于評估，就背景熒光(孔中無細胞)校正熒光值。然后計算在含和不含SDF-1的情況下的實驗條件之間的差異。將不含鏡像異構體87(僅SDF-1)的樣品的值設定為100%，將含鏡像異構體的樣品的值計算為該值的百分數。關于劑量-反應曲線，將百分數值對鏡像異構體濃度作圖，并根據圖從所得的曲線確定IC5()-值(在不含鏡像異構體的情況下的活性的50%存在時的鏡像異構體的濃度)。5.4結果5,4.1通過人SDF-1產生的Jurkat細胞的劑量依賴性刺激發現人SDF-1以劑量依賴性的方式刺激Jurkat細胞的遷移，半最大刺激在約0.3nM處(圖11)。5.4.2通過SDF-1結合性鏡像異構體進行的對人SDF-1誘導性趨化作用的劑量依賴性抑制當讓細胞向含有人SDF-1和遞增濃度的SDF-1結合性鏡像異構體的溶液遷移時，觀察到劑量依賴性的抑制。在實施例1中具體描述了被測鏡像異構體各自的IC5Q。當使用非特異性對照鏡像異構體而非SDF-1結合性鏡像異構體時，未觀察到抑制效應達到1pM(圖26)。5.4.3通過SDF-1結合性鏡像異構體進行的對小鼠SDF-1誘導性趨化作用的劑量依賴性抑制SDF-1在跨物種中具有良好的保守性來自小鼠的SDF-1與人SDF-la僅相差一個氨基酸(第18位為異亮氨酸而非纈氨酸)。小鼠SDF-1可刺激Jurkat細胞的趨化作用(圖27)，而發現所述作用被鏡像異構體192-A10-001和191-D5-007-5，-PEG(具有與人SDF-1相同的潛能)抑制(圖28)。實施例6:通過表面等離子共振測量法進行的結合分析使用Biacore儀2000(BiacoreAB，Uppsala，Sweden)分析鏡像異構體與人SDF-la的結合。當通過胺基實現偶聯時，將SDF-la逆水透析1-2小時(MilliporeVSWP混合的纖維素酯；孔尺寸為0.025)以去除干擾性的胺。在蛋白質偶聯之前，通過以5pl/分鐘的流速注射35nl0.4MNHS和0.1MEDC的1:1稀釋物來活化CM4感應芯片(BiacoreAB，Uppsala,Sweden)。然后以2jil/分鐘的流速注射濃度為0.1-1.5pg/ml的趨化因子，直到裝置的響應值在1000-2000RU(相對單位)的范圍內。通過以5nl/分鐘的流速注射35jil鹽酸乙醇胺溶液(pH8.5)來使未反應的NHS酯失活。將感應芯片用結合緩沖液預處理兩次，并以10pl/分鐘平衡l-2小時直到基線看似穩定。對于所有蛋白質，通過一系列在選擇緩沖液(Tris-HC120mM、NaCl137mM、KCI5mM、CaCl21mM、MgCl21mM、Tween200.1%[w/v、pH7.4)中濃度為1000、500、250、125、62.5、31.25和0nM的鏡像異構體注射液來評估動力學參數和解離常數。在所有實驗中，在37。C下用Kinject命令來進行分析，所述命令定義了在10pl/分鐘的流速下締合時間為180秒而解離時間為360秒。數據分析和解離常數(KD)的計算采用BIAevaluation3.0軟件(BIACOREAB，Uppsala，Sweden)來進行，其使用了Langmuir1:1化學計量擬合算法。實施例7:通過SDF-1結合性鏡像異構體進行的對[^J卜SDF-1與表達CXCR4的細胞的抑制7.1方法編碼人CXCR4受體的cDNA克隆(NM—003467.2)購自OriGeneTechnologies(Rockville,MD)且將其克隆入pCR3.1-載體(Invitrogen,Karlsruhe，Germany)。使用Lipofectamin2000(Invitrogen)將所得的栽體轉染入CHO-K1細胞(DSMZ，Braunschweig,Germany)，通過用遺傳霉素處理來選擇穩定表達的細胞系。通過RT-PCR驗證受體的表達。關于結合測定，將表達CXCR4的細胞以1x105個細胞/孔的細胞密度接種入包被有多聚賴氨酸的24孔平板，在37°C和5%C02于CHO-Ultra培養基(Cambrex,Verviers,Belgium)(其含有50個單位/ml青霉素、50ng/ml鏈霉素和0,5mg/ml遺傳霉素)中培養過夜。關于結合實驗，除去培養基，用額外含有20mMHEPES、1mg/ml牛血清白蛋白、0.1mg/ml桿菌肽(HBB)的Hanks平衡鹽溶液清洗細胞一次。然后將細胞在室溫下與50pM125JI-SDF-l(PerkinElmer，Rodgau，Germany)和變濃度的鏡像異構體一起在0.2mlHBB中溫育1小時。通過向數孔中加入未標記的人SDF-l(R&DSystems,Wiesbaden,Germany)至0.5pM的終濃度來測定非特異性結合。在溫育期后，除去上清液，用冰冷的HBB清洗孔3次。然后用0.1ml0.1MNaOH裂解細胞。將裂解物轉移入閃爍瓶(szintillationvial)，且加入4mlUnisafe1LiquidSzintillation混合物(Zinsser,Frankfurt,Germany)后，在BeckmanLS6500閃爍計數器中計數。因為非特異性結合(在高量的未標記的SDF-l存在的情況的結合)的值比在高濃度(500pM)的鏡像異構體存在的情況下的總結合的值更高一些，所以將在最大結合("max")和在500pM鏡像異構體存在的情況下的結合之間的差異用于計算ICs。值。7.2結果將結合的[^J卜SDF-1對鏡像異構體的濃度作圖顯示了，SDF-1的結合可被鏡像異構體192-A10-001阻斷，ICs。為約60pM(圖29)。實施例8:通過SDF-1結合性鏡像異構體對SDF-1誘導性MAP激酶活化的抑制8.1方法將表達CXCR4的CHO細胞以0.5x106個細胞/孔的細胞密度接種入6孔平板，并在37。C和5%C02于CHO-Ultra培養基(Cambrex，Verviers，Belgium)(其含有50個單位/ml青霉素、50pg/ml鏈霉素和0.5mg/ml遺傳霉素)中培養約3小時，在細胞貼壁后，除去培養基，并代之以含有50個單位/ml青霹素、50jig/ml鏈霉素的Ham'sF12培養基。然后將細胞在37。C和5%C02下過夜溫育，在刺激前3個小時，再用新鮮的Ham'sF12培養基替換培養基一次。用1nM人SDF-1和不同量的鏡像異構體刺激細胞5或IO分鐘。然后，除去培養基，用1ml水冷的磷酸緩沖鹽水(PBS)快速清洗細胞一次，然后用SDS-樣品緩沖液(Tris/HClpH6.8，62.5mM;甘油，10%;SDS，2%;溴酚藍，0.01%;p巰基乙醇，5%)進行裂解。向各孔中加入1pl0.5u/|iilBenzonase(Merck,Darmstadt,Germany)，在室溫下溫育5-10分鐘后，將裂解物轉移至Eppendorf管中，在95°C下溫育5分鐘，然后在-20°C下貯存直至進一步分析。在10。/。的變性SDS-聚丙烯酰胺凝膠上分離25^1的裂解物。然后通過電印跡將蛋白質轉移至HybondECL硝酸纖維素膜(Amersham/GEHealthcare,Munich,Germany)上。印跡后，用麗春紅(0.2%于3%三氯乙酸中)對膜進行染色以控制蛋白質的上樣量，將膜轉移，然后通過在含有10%的脫脂乳的TBS-T(Tris緩沖鹽溶液(20mMTris/HCl,pH7.6，137mMNaCl)和0.1%Tween20)中在2-8°C下溫育過夜來進行封閉。然后將膜與兔抗褲酸-MAP-激酶抗體(1:1000于TBS-T中的10%乳中)一起在室溫下溫育2小時。在用TBS-T清洗三次(每次5分鐘)后，將膜與抗兔IgG-HRP-綴合物(1:2000于TBS-T中的10%乳中)一起在室溫下溫育1小時。然后將膜用TBS-T再清洗3次(每次5分鐘)，然后在LumiGloR化學發光試劑中溫育1分鐘。通過對HyperfilmTMECL化學發光膠片(Amersham/GEHealthcare)暴露30秒-2分鐘來檢測發光。抗體和發光檢測試劑是PhosphoPlusp44/42MAP激酶(Thr202/Tyr204)抗體試劑盒(來自CellSignalingTechnology)(NewEnglandBiolabs，Frankfurta.M.，Germany)的組分。8.2結構反映激活的MAP激酶的條帶的強度增加表明，使用1nM人SDF-1刺激表達CXCR4的細胞5分鐘導致對MAP激酶的強烈刺激。此MAP激酶的激活可被鏡像異構體191-A10-001以劑量依賴的方式抑制(圖30)。實施例9:在主動脈環出芽測定法中進行的對人SDF-1結合性鏡像異構體193-G2-012-5，-PEG的功能分析為了在血管發生器官培養測定中檢測人SDF-1結合性鏡像異構體193-G2-012-5，-PEG也是具有功能的，進行主動脈環出芽測定。所述測定(其中估計來自外植體的脈管樣延伸(vessel-likeextensions)的長度和豐度)已成為最廣泛使用的用于血管發生的器官培養模型(Auerbachetal.2003)。已顯示SDF-1在所述類型的測定中誘導出芽(Salcedoetal.1999)。將大鼠主動脈切成環，包埋在膠原基質中，將其與SDF-1和SDF-1+人SDF-1結合性鏡像異構體193-G2-012-5，-PEG或SDF+不結合SDF-1的無功能的PEG化的對照鏡像異構體一起溫育。在6-7天后，通過拍照和測定出芽指數來分析出芽(即，內皮細胞的向外生長)。方法來自雄性大鼠的主動脈獲自BagheriLifesciences(Berlin,Germany)。新制備主動脈，然后在水上轉入含有50個單位/ml青霉素，50ng/ml鏈霉素(兩者都來自Invitrogen，Karlsruhe,Germany)和2.5jug/ml兩性霉素B(Cambrex，USA)的MCDB131-培養基(Invitrogen，Karlsruhe,Germany)中。關于實驗，將單個主動脈與培養基一起轉移至細胞培養皿，除去殘留的結締組織。然后使用解剖刀將主動脈切成約1-2mm長的環。將環在Medi腿199(Invitrogen,Karlsruhe,Germany)中充分清洗(至少5次)，然后置于24孔平板的孔(每孔裝有450pl的膠原溶液)中。通過將9ml大鼠尾部膠原(3mg/ml于0.1。/。的乙酸中；Sigma，Deisenhofen，Germany)與1.12ml10XMedium199(Invitrogen，Karlsruhe,Germany)、1.12ml10X膠原緩沖液(0.05NNaOH，200mMHEPES，260mMNaHC03)和0.6ml200mMGlutamin混合來制備所述膠源溶液。以使被切割的邊界與孔底部垂直的方向排列環。通過將平板在37。C下溫育至少1小時來讓膠原固化。然后每孔加入lmlMCDB131-培養基和添加物(SDF-1和鏡像異構體)。然后在37°C下溫育環6-7天。作為出芽的對照，額外地用VEGF(血管內皮生長因子)進行實驗。通過使用數碼相機拍照來記錄出芽。在一些情況下，通過加入1ml10%多聚甲醛來固定環，然后將其2-8。C下貯存以用于進一步的證明。用ScionImage圖像處理軟件分析照片。在借助于拍自鏡臺測微器的圖像校準后，在離環的一個邊緣0.33mm的距離處劃線。通過軟件生成沿著該線的直方圖(plothistogram)，打印直方圖，對峰值(表示穿過線的芽)進行計數。將該數用作出芽指數。對每個條件的4-5個環進行評估。使用Excel的WinSTAT進行統計分析。結果可證明，SDF-1誘導出芽，且可用人SDF-1結合性鏡像異構體193-G2-012-5，-PEG阻斷該效應。對于無功能的PEG化的對照鏡l象異構體未觀察到SDF-1誘導性出芽的阻斷(圖31和32)。實施例10:以單次靜脈內推注人SDF-1結合性鏡像異構體193-G2-012-5，-PEG對大鼠施用后SDF-1和人SDF-1結合性鏡《象異構體193-G2-012-5，-PEG的血漿水平為了檢測人SDF-1結合性鏡像異構體193-G2-012-5，-PEG在體內是否具有功能，以靜脈內推注的形式給大鼠施用人SDF-1結合性鏡像異構體193-G2-012-5，-PEG，測定人SDF-1結合性鏡像異構體193-G2-012-5，-PEG和SDF-1的血漿水平。作為對照，測定未處理的93大鼠SDF-1的血漿水平。動物，施用和樣品收集將人SDF-1結合性鏡像異構體193-G2-012-5，-PEG在PBS中溶解至終濃度0.5mg/ml，然后過濾滅菌。以單次靜脈內推注的形式給雄SpragueDawley大鼠(體重約300g)施用1.0mg/kg人SDF-1結合性鏡像異構體193-G2-012-5，-PEG。在數個時間點收集血液樣品(如圖33中所示)以跟蹤人SDF-1結合性鏡像異構體193-G2-012-5，-PEG的血漿清除。用于定量鏡像異構體的夾心雜交測定法通過夾心雜交測定法定量樣品中人SDF-1結合性鏡像異構體193-G2-012-5，-PEG的量。夾心雜交測定法的原理甚似通常使用的鏡像異構體的ELISA(酶聯免疫吸附測定法)固定和檢測。檢測基于生物素化的檢測探針與鏡像異構體的一個末端的雜交。鏡像異構體的殘余單鏈末端介導雜交后復合物至經固定的捕荻探針的固定。在已除去未結合的復合物后，最后通過鏈霉抗生物素蛋白/堿性磷酸酶綴合物轉化化學發光底物來檢測與鏡像異構體雜交的檢測探針。如Drolet等人(Droletet.al，2000)所述，這樣的夾心雜交測定法也被用于檢測和定量RNA適體。雜交板的制備將193-G2-012捕獲探針(Seq.ID.:240)在4。C下以100nM(于0.5M磷酸鈉、1mMEDTA中，pH8.5)過夜固定至白色的DNA-BIND96孑L平板(ComingCostar，Wiesbaden,Germany)。于25。C下，用0.5%w/v的BSA(在0.25M磷酸鈉、0.5mMEDTA中，pH8.5)清洗孔兩次，并封閉2小時，再次清洗，然后在室溫下貯存直至使用。在雜交前，用清洗緩沖液(3xSSC，0.5。/。[w/v十二烷基肌氨酸鈉，pH7.0;預先配制不含月桂酰肌氨酸鈉的20x原液[3MNaCl，0.3M檸檬94酸鈉I，并相應稀釋)清洗2次。樣品制備以一式兩份測定所有樣品。將血漿樣品在水上解凍，渦漩，及在冷凍臺式離心機中短暫離心。將組織勻漿在室溫下解凍，于室溫下以最大速度離心5分鐘。按照下列配比，在室溫下用雜交緩沖液(40nM的清洗緩沖液中的193-G2-012檢測探針[Seq.ID.241)稀釋樣品1:1010nl樣口+90|11雜交緩沖液1:10020fxll:10+180^11雜交緩沖液測定所有樣品稀釋物。將人SDF-1結合性鏡像異構體193-G2-012-5，-PEG標準物系列稀釋至跨度0.001-40nM范圍的12個點的校正曲線。校正標準與在研究的樣品的校正標準相同。.雜交和檢測將樣品在95。C下加熱5分鐘，然后冷卻至室溫。于25。C，500rpm下，在振蕩器中將鏡像異構體/檢測探針復合物退火至經固定的捕獲探針45分鐘。通過分別用清洗緩沖液和lxTBST(20mMTris-Cl，137mMNaCl，0.1%Tween20，pH7.5)清洗兩次除去未結合的鏡像異構體。在500rpm的振蕩器中，通過以1:5000在lxTBST中稀釋的鏈霉抗生物素蛋白堿性磷酸酶在25°C下檢測雜交的復合物1小時。為了除去未結合的綴合物，再次用lxTBST清洗孑L。最后用100mlCSDP底物(AppliedBiosystems,Darmstadt,Germany)充滿孑L,并在25°C下溫育45分鐘。用FLUOstarOptima微量平板讀出計(BMGLabtechnologies，Offenburg,Germany)觀'J量化學發光。數據分析將下列被測樣品稀釋液用于定量數據分析大鼠EDTA血漿1:100用于定量鏡像異構體的ELISA使用體外酶聯免疫吸附測定法定量存在于血漿樣品中的SDF-1的量，所述測定法使用對于包被在96孔平板上的人SDF-la是特異的抗體(人SDF-laELISA試劑盒；RayBiotech，NorcrossGA，USA)。按照廠商說明書進行測定。結果如圖33中所示，未處理的大鼠中常規SDF-1的血漿水平處于較低的皮摩爾范圍內(約50pM)。相反，用人SDF-1結合性鏡像異構體193-G2-012-5，-PEG處理的大鼠的血漿水平似乎不同在施用人SDF-1結合性鏡像異構體193-G2-012-5，-PEG后前8個小時內，SDF-1血漿水平升高至約700pM。在12-72小時內，SDF-1的血漿水平再次降低至約50pM。SDF-1血漿水平的所述時程可直接與人SDF-1結合性鏡像異構體193-G2-012-5，-PEG的血漿水平關聯。因為人SDF-1結合性鏡像異構體193-G2-012-5，-PEG的腎臟清除，人SDF-1結合性鏡像異構體193-G2-012-5，-PEG的血漿水平在72小時內從約1100nM降低至低于50nM。然而，從未PEG化的鏡像異構體(約15000Da)或具有低于腎的過濾極限的分子量的其他分子(如SDF-1)來看，人SDF-1結合性鏡像異構體193-G2-012-5，-PEG(MW約54000Da)在1小時內未被清除出身體。內源性SDF-1被人SDF-1結合性鏡像異構體193-G2-012-5，-PEG結合，從而形成SDF-l-鏡像異構體-復合軟》其中SDF-1的清除和/或降解被延遲，作為結果這在前8個小時內導致SDF-1血漿水平升高。由于人SDF-1結合性鏡像異構體193-G2-012-5，-PEG隨著時間繼續清除(其中清除率要比許多更小的分子如SDF-1低得多)，從而由人SDF-1結合性鏡像異構體193-G2-012-5，-PEG和SDF-1形成的復合物的血漿水平降低(圖33)。參考文獻除非另有說明，本文所引用的文獻的完整參考文獻資料(將其公開通過引用并入本文)如下Aiuti，A.，I.J.Webb，etal.(1997)."ThechemokineSDF-1isachemoattractantforhumanCD34+hematopoieticprogenitorcellsandprovidesanewmechanismtoexplainthemobilizationofCD34+progenitorstoperipheralblood."JExpMed185(1):111-20.AltschulSF，GishW，MillerW，MyersEW,LipmanDJ(1990)，Basiclocalalignmentsearchtool.JMolBiol.215(3):403-10.AltschulSF，MaddenTL，SchafferAA，ZhangJ,ZhangZ，MillerW，LipmanDJ(1997).GappedBLASTandPSI-BLAST:anewgenerationofproteindatabasesearchprograms.NucleicAcidsRes.25(17):3389-402.Ambati，J.，A.Anand，etal.(2003),Ananimalmodelofage-relatedmaculardegenerationinsenescentCcl-2-orCcr-2-deficientmice.NatMed.9:1390-7.Arya，S,K.，C.C,Ginsberg,etal.(1999)."InvitrophenotypeofSDFlgenemutantthatdelaystheonsetofhumanimmunodeficiencyvirusdiseaseinvivo."JH薩Virol2(3):133-8.Auerbachetal.(2003)Angiogenesisassays:acriticaloverview.Clin.Chem.49:32-40.Baggiolini，M.(1998).，，Chemokinesandleukocytetraffk.'Nature392(6676):565-8.Baggiolini,M.，B.Dewald，etal.(1994)."Interleukin-8andrelatedchemotacticcytokines--CXCandCCchemokines."AdvImmunol55:97-179.Balabanian，K.，B.Lagane,etal.(2005)."WHIMsyndromeswithdifferentgeneticanomaliesareaccountedforbyimpairedCXCR4desensitizationtoCXCL12."Blood105(6):2449-57.Balabanian,K.，J.Couderc，etal.(2003)."Roleofthechemokinestromalcell-derivedfactor1inautoantibodyproductionandnephritisinmurinelupus."JImmunol170(6》3392-400,Balkwill，F.(2004)."Cancerandthechemokinenetwork."NatRevCancer4(7):540-50.Bazan，J.F.，K.B.Bacon,etal.(1997)."Anewclassofmembrane-boundchemokinewithaCX3Cmotif."Nature385(6617》640-4.Bertolini，F.，C.Dell'Agnola，etal.(2002)."CXCR4neutralization,anoveltherapeuticapproachfornon-Hodgkin'slymphoma."CancerRes62(11):3106-12.Bleul，C.C.，J.L.Schultze,etal.(1998)."Blymphocytechemotaxisregulatedinassociationwithmicroanatomiclocalization,differentiationstate,andBcellreceptorengagement."JExpMed187(5):753-62.Bleul，C.C.，M.Farzan，etal.(1996)."ThelymphocytechemoattractantSDF-lisaligandforLESTR/fusinandblocksHIV-1entry."Nature382(6594):829-33.Brooks,H.L.，Jr.,S.Caballero,Jr.,etal.(2004)."Vitreouslevelsofvascularendothelialgrowthfactorandstromal-derivedfactor1inpatientswithdiabeticretinopathyandcystoidmacularedemabeforeandafterintraocularinjectionoftriamcinolone."ArchOphthalmol122(12):1801-7.Buckley,C.D.，N,Amft，etal.(2000》"PersistentinductionofthechemokinereceptorCXCR4byTGF-beta1onsynovialTcellscontributestotheiraccumulationwithintherheumatoidsynovium."JImmunol165(6):3423-9.Burger,J.A.，N.Tsukada，etal.(2000)."Blood-derivednurse-likecellsprotectchroniclymphocyticleukemiaBcellsfrom98spontaneousapoptosisthroughstromalcell-derivedfactor畫l."Blood96(8):2655-63.Butler，J.M.，S.M.Guthrie,etal.(2005)."SDF-1isbothnecessaryandsufficienttopromoteproliferativeretinopathy."JClinInvest115(1):86-93.Cabioglu,N.，A.Sahin，etal.(2005》"ChemokinereceptorCXCR4expressioninbreastcancerasapotentialpredictivemarkerofisolatedtumorcellsinbonemarrow."ClinExpMetastasis22(1》39-46.Corcione，A.，L.Ottonello，etal.(2000),"Stromalcell-derivedfactor-lasachemoattractantforfollicularcenterlymphomaBcells."JNatlCancerInst92(8):628-35.Crump，M.P.，J.H.Gong,etal.(1997)."Solutionstructureandbasisforfunctionalactivityofstromalcell-derivedfactor-l;dissociationofCXCR4activationfrombindingandinhibitionofHIV-1."EmboJ16(23):6996-7007.D'Apuzzo，M.，A.Rolink，etal.(1997)."ThechemokineSDF-l，stromalcell-derivedfactor1，attractsearlystageBcellprecursorsviathechemokinereceptorCXCR4."EurJImmunol27(7):1788-93.DeKlerck，B.，L.Geboes，etal.(2005)."Pro-inflammatorypropertiesofstromalcell-derivedfactor-l(CXCL12)incollagen-inducedarthritis."ArthritisResTher7(6):R1208-20.DroletDW，NelsonJ，TuckerCE，ZackPM，NixonK，BolinR，JudkinsMB，FarmerJA，WolfJL，GillSC，BendeleRA(2000).Pharmacokineticsandsafetyofananti-vascularendothelialgrowthfactoraptamer(NX1838)followinginjectionintothevitreoushumorofrhesusmonkeys.Pharm.Res.17:1503Eaton，B.E.，L.Gold,etal.(1997)."Post國SELEXcombinatorialoptimizationofaptamers."BioorgMedChem5(6):1087-96.Fedyk，E.R"D.Jones,etal.(2001)."ExpressionofstromaNderivedfactor-lisdecreasedbyIL-1andTNFandindermalwoundhealing."JImmunol166(9):5749-54.Fong，D.S.，L.P.Aiello，etal.(2004)."Diabeticretinopathy."DiabetesCare27(10):2540-53.Geminder,H.，O.Sagi-Assif，etal.(2001)."ApossibleroleforCXCR4anditsligand，theCXCchemokinestromalcell-derivedfactor-l，inthedevelopmentofbonemarrowmetastasesinneuroblastoma."JImmunol167(8):4747-57.Godessart，N.(2005)."Chemokinereceptors:attract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2、57、58、90、91、92和93所示任一序列的核苷酸。49.藥物組合物，其包含權利要求1-48中任一項的核酸，且任選包含其他組分，其中所述其他組分選自藥學可接受的賦形劑和藥學活性劑。50.權利要求1-48中任一項的核酸在藥物制備中的用途。51.權利要求50的用途，其中所述藥物被用于治療和Z或預防疾病或病癥，其中所述疾病或病癥受SDF-1介導，所述疾病或病癥優選選自眼后部疾病(back-of-the-eyediseases)，如糖尿病性一見網膜病和老年黃斑變性；乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、曱狀腺癌、鼻咽癌、結腸癌、肺癌和胃癌；骨肉瘤；黑素瘤；神經膠質瘤；成髓細胞瘤和成神經細胞瘤；白血病；WHIM綜合征；免疫缺陷綜合征；病理性新生血管形成；炎癥；多發性硬化癥；類風濕性關節炎/骨關節炎和腎炎。52.權利要求50的用途，其中所述藥物被用于抑制血管發生、新生血管形成、炎癥和轉移。53.4又利要求1-48中任一項的核酸在診斷工具制備中的用途。54.權利要求53的用途，其中所述診斷工具被用于診斷疾病，其中所述疾病受SDF-1介導，所述疾病優選選自眼后部疾病，如糖尿病性視網膜病和老年黃斑變性；乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、甲狀腺癌、鼻咽癌、結腸癌、肺癌和胃癌；骨肉瘤；黑素瘤；神經膠質瘤；成髓細胞瘤和成神經細胞瘤；白血病；WHIM綜合征；免疫缺陷綜合征；病理性新生血管形成；炎癥；多發性硬化癥；類風濕性關節炎/骨關節炎和腎炎。55.權利要求53的用途，其中所述診斷工具被用于診斷血管發生、新生血管形成、炎癥和/或轉移。56.包含SDF-1和權利要求1-48中任一項的核酸的復合物，其中所述復合物優選是晶體復合物。57.權利要求1-48中任一項的核酸在SDF-1檢測中的用途。58.用于篩選SDF-1拮抗劑或SDF-1激動劑的方法，所述方法包括下列步驟-提供候選SDF-1拮抗劑和/或候選SDF-1激動劑，-提供權利要求1-48中任一項的核酸，-提供在SDF-1拮抗劑和/或SDF-1激動劑存在的情況下提供信號的檢測系統，及-確定所述候選SDF-l拮抗劑是否是SDF-l拮抗劑和/或所述候選SDF-1激動劑是否是SDF-1激動劑。59.用于篩選SDF-1激動劑和/或SDF-1拮抗劑的方法，所述方法包括下列步驟-提供固定于相的SDF-1，所述相優選固相，-提供權利要求1-48中任一項的核酸，優選被標記的權利要求1-48中任一項的核酸，-加入候選SDF-1激動劑和/或4矣選SDF-1拮抗劑，和-確定所述候選SDF-l激動劑是否是SDF-l激動劑和/或所述候選SDF-1拮抗劑是否是SDF-1拮抗劑。60.權利要求59的方法，其特征在于進行所述確定以便估計所述核酸是否被所述候選SDF-1激動劑或被候選SDF-1拮抗劑替代。61.用于檢測SDF-1的試劑盒，其包含權利要求1-48中任一項的核酸。62.可通過權利要求58-60中任一項的方法獲得的SDF-1拮抗劑。全文摘要本發明涉及核酸分子，優選SDF-1結合性核酸分子，其選自A型核酸分子、B型核酸分子、C型核酸分子和具有SEQ.ID.No.142、SEQ.ID.No.143和SEQ.ID.No.144所示任一核酸序列的核酸分子。文檔編號C12Q1/68GK101506364SQ200780030524公開日2009年8月12日申請日期2007年7月18日優先權日2006年7月18日發明者C·馬什,D·尤爾伯格,F·雅洛世,K·布赫納,N·丁斯,S·克魯斯曼,W·普爾斯克申請人:諾松制藥股份公司