Ugt1a1基因擴增用引物對、含有其的ugt1a1基因擴增用試劑及其用途的制作方法

專利名稱：：Ugt1a1基因擴增用引物對、含有其的ugt1a1基因擴增用試劑及其用途的制作方法
技術領域：
：本發明涉及用于擴增UGT1A1基因的引物對，含有該引物對的UGT1A1基因擴增用試劑及其用途。
背景技術：
：已知葡糖醛酸轉移酶(UDP-葡糖醛酸基轉移酶UGT)是一種已知的藥物代謝酶，是一種催化將葡糖醛酸結合到藥物、異物、作為內源性物質的膽紅素、甾類激素、膽汁酸等上的反應的酶。已報道了UGT有被分類為UGT1家族和UGT2家族的多種同工酶。這些同工酶中，編碼屬于UGT1家族的UGT1A1的基因(UGT1A1基因)存在基因多態性，一般而言認為這與抗癌劑鹽酸伊立替康(Irinotecan)的副作用的表現相關。具體而言，據報道，患者UGT1A1基因具有多態性時，通過UGT將具有高抗腫瘤活性的伊立替康水解物(SN-38)解毒的能力下降，因而發生白血球減少和腹瀉等嚴重的副作用。與這種副作用相關的代表性的基因多態性已知有啟動子區域的多態性UGT1A1*28，夕卜顯子l的多態性UGT1A"6和UGT1A1承27。尤其是據報道包括日本人在內的亞洲人中，由于除了最重要的多態性UGTIAI*28,還同時具有多態性UGTIAI*6和UGTIAI*27的至少一種，因而容易出現更強的副作用。另外，UGTIAI由于與生物體內的由葡糖醛酸產生的結合膽紅素相關，因此其多態性也是吉伯綜合癥等體質性黃疽的成因。因此，研究UGT1A1基因的多個多態性對于預測抗癌劑所產生的副作用的程度，預測副作用的發生十分重要。另一方面，作為在基因水平分析所有疾病的成因、個體間疾病易感性(容易患病性)、個體間藥效差異等的方法，現在廣泛使用點突變，即所謂單核苷酸多態性(SNP)的檢測。作為點突變的一般的檢測方法，可以列舉(1)對于試樣的目標DNA,通過PCR(聚合酶鏈式反應)擴增相當于檢測對象序列的區域，分析其全基因序列的直接測序(DirectS叫uencing)法，(2)對于試樣的目標DNA,通過PCR(聚合酶鏈式反應)擴增相當于檢測對象序列的區域，用根據前述檢測對象序列有無目標突變而切斷作用不同的限制酶將其擴增產物切斷，通過電泳進行分型的RFLP分析，(3)使用目標突變位于3，末端區域的引物進行PCR，通過擴增的有無來判斷突變的ASP-PCR法等。但是，這些方法例如由于必須純化從試樣中提取的DNA、電泳、限制酶處理等，因此麻煩又費錢。而且，進行PCR后，反應容器需要開封一次，因此就存在前述擴增產物混入下一個的反應體系中，分析精確度降低的擔憂。而且，由于難以自動化，因此無法分析大量試樣。而且，就前述(3)的ASP-PCR法而言，也存在特異性低的問題。從這些問題出發，近年來，作為點突變的檢測方法，分析由目標核酸與揮^十形成的雙鏈核酸的融解溫度(Tm:meltingtemperature)的方法正4f到實際的應用。這種方法由于通過例如Tm分析或者前述雙鏈的融解曲線的分析來進行，因此被稱為融解曲線分析。其就是以下這種方法。即，首先，使用與含有檢測目標的點突變的檢測對象序列互補的探針，使檢測試樣的目標單鏈DNA與前述探針形成雜交體(雙鏈DNA)。然后，對該雜交產物實施加熱處理，通過吸光度等信號的變動來檢測伴隨溫度上升的雜交體的解離(融解)。然后，基于該檢測結果確定Tm值，由此判斷是否存在點突變。雜交產物的同源性高，則Tm值高，同源性低，則Tm值低。因此，預先求出含有點突變的檢測對象序列和與之互補的探針的雜交產物的Tm值(評價基準值)，再測定檢測試樣的目標單鏈DNA和前述探針的Tm值(測定值)。如果前述測定值與評價基準值程度相同，則可以判斷為匹配，即在目標DNA中存在點突變，如果測定值比評〗介基準值低，則可以評斷為不匹配，即在目標DNA中不存在點突變。而且，通過該方法可以實現基因分析的自動化。4旦是，對于這種利用Tm分析的4企測方法而言，存在著在PCR中必須要特異性且高效地擴增含有4企測目標部位的區域的問題。尤其是，由于UGT存在許多同工酶，編碼這些酶的序列又才及為類似，因此就有這樣的擔憂，即在PCR中連UGT1A1之外的同工酶的編碼基因也被擴增。而且，這種連UGT1A1之外的同工酶的編碼基因也被擴增的情況，也成為例如UGT1A1基因的特定多態性(UGT1A1*28,UGT1A"6或UGT1A"27)分析(非專利文獻l)中，分析結果的可信度降低的原因。而且，這樣一來，由于分析l個樣本時伴隨過多勞動力，因此存在著實際上不能實現大量分析試樣的問題。非專利文獻PMID:11156391CancerRes.2000Dec15;60(24):6921-6。
發明內容因此，本發明以提供用于通過基因擴增法特異性擴增UGT1A1基因的目標區域的引物對作為目的。為了實現上述目的，本發明的引物對，其特征在于，其為用于通過基因擴增法擴增UGT1A1基因的引物對，且含有選自以下引物對(l)~(3)所組成的組中的至少一種。引物對(1):包含含有下述(Fl)的寡核苷酸的正向引物和含有下述(Rl)的寡核苦酸的反向引物的一個引物對(Fl):與含有序列號1的堿基序列的UGT1A1基因中的、以第2120位的腺噪呤堿基(A)作為第1個堿基朝著5'方向直至第18~22個堿基的區域序列相同的至少一種寡核苷酸，該寡核普酸以所述腺嘌呤堿基(A)作為3'末端和與含有序列號l的堿基序列的UGT1A1基因中、以第2140位的胞嘧啶堿基(C)作為第1個堿基朝著5，方向直至第18~34個堿基的區域序列相同的至少一種寡核苷酸，該寡核苷酸以所述胞嘧啶石威基(C)作為3'末端中的至少一個(Rl):與含有序列號1的堿基序列的UGT1A1基因中的、以第2226位的烏嘌呤堿基(G)作為第1個堿基朝著3'方向直至第17~27個堿基的區域互補的至少一種寡核苷酸，該寡核苷酸以與所述第2226位的鳥噤呤;咸基(G)互補的胞嘧啶石咸基(C)作為3'末端和與含有序列號1的堿基序列的UGT1A1基因中的、以第2198位的胞嘧啶堿基(C)作為第1個堿基朝著3'方向直至第22~39個堿基的區域互補的至少一種寡核苷酸，該寡核苷酸以與所述第2198位的胞嘧啶石威基(C)互補的鳥嘌呤石咸基(G)作為3'末端中的至少一個引物對(2):包含含有下述(F2)的寡核苷酸的正向引物和含有下述(R2)的寡核苷酸的反向引物的一個引物對(F2):與含有序列號1的堿基序列的UGT1A1基因中的、以第2622位的鳥嘌呤堿基(G)作為第1個堿基朝著5，方向直至第15~27個堿基的區域序列相同的至少一種寡核苷酸，該寡核苷酸以所述鳥噤呤堿基(G)作為3'末端(R2):與含有序列號1的堿基序列的UGT1A1基因中的、以第2687位的胞嘧啶堿基(C)作為第1個石成基朝著3，方向直至第17~26個堿基的區域互補的至少一種寡核苷酸，該寡核苷酸以與所述第2687位的胞嘧啶堿基(C)互補的鳥噤呤堿基(G)作為3'末端引物對(3):包含含有下述(F3)的寡核普酸的正向引物和含有下述(R3)的寡核苷酸的反向引物的一個引物對(F3):與含有序列號1的堿基序列的UGT1A1基因中的、以第1863位的胞嘧啶堿基(C)作為第1個石威基朝著5'方向直至第17~31個堿基的區域序列相同的至少一種寡核苷酸，該寡核苷酸以所述胞嘧啶堿基(C)作為3'末端(R3):與含有序列號1的堿基序列的UGT1A1基因中的、以第1928位的胞嘧啶堿基(C)作為第1個石威基朝著3，方向直至第16~20個堿基的區域互補的至少一種寡核苷酸，該寡核苷酸以與所述第1928位的胞嘧啶堿基(C)互補的鳥"票呤堿基(G)作為3'末端而且，本發明的基因擴增用試劑，其特征在于，其為一種用于通過基因擴增法擴增UGT1A1基因的試劑，含有前述本發明的UGT1A1基因擴增用引物對。本發明的擴增產物的制備方法，其特征在于，其為一種通過基因擴增法制備UGT1A1基因擴增產物的方法，含有下述(I)步驟。12(I)以試樣中的核酸作為模板，使用本發明的UGT1A1基因擴增用引物對，在反應液中擴增前述UGT1A1基因的步驟本發明的多態性分析方法，其特征在于，其為分析UGT1A1基因中的檢測對象部位的多態性的方法，包括以下步驟(i)~(iv)。(i)通過本發明的擴增產物的制備方法，在反應液中擴增UGT1A1基因中包含才企測對象部位的區域的步驟(ii)準備含有所述步驟(i)中的擴增產物和能與所述檢測對象部位雜交的揮j十的反應液的步驟(iii)改變所述反應液的溫度，測定所述擴增產物和所述探針的雜交產物顯示融解狀態的信號值的步驟(iv)根據伴隨溫度變化的所述信號值的變動，決定所述檢測對象部位的多態性的步驟如果使用本發明的引物對，可以在反應液中特異性且高效率地擴增UGT1A1基因中的、含有檢測目標多態性(UGT1A1*28，UGT1AP6或UGT1AP27)發生的部位的目標區域。因此，與前述以往的方法不同，可以降低麻煩和成本。而且，這樣一來，由于可以特異性擴增UGT1A1基因中的、含有特定的多態性發生的檢測對象部位的區域，因此通過使用與含有檢測對象部位的檢測對象序列互補的探針，可以使用前述反應液直4妻進4亍Tm分析，對前述多態性進4亍分型。而且，由于可以在一個反應液中擴增前述目標區域以及實現多態性分型，因此可以實現操作自動化。進而，如果使用本發明的引物對，即使是例如含有雜質的試樣(例如，全血或口腔粘膜等)，由于可以省略前處理，因此可以更迅速且更筒便地進行擴增反應。而且，^吏用本發明的引物對，由于可以以比以往更好的擴增效率進行擴增反應，因此可以縮短擴增反應。因此，通過本發明的引物對、含有它們的試劑以及使用這些物質的擴增產物的制備方法和多態性分析方法，可以迅速且簡4更地分析UGT1A1基因的多態性，因此可以認為其在醫療領域中非常有效。圖1是表示本發明的實施例1中Tm分析的結果的圖。圖2是表示本發明的前述實施例1中Tm分析的結果的圖。圖3是表示本發明的前述實施例1中Tm分析的結果的圖。圖4是表示本發明的實施例2中Tm分析的結果的圖。具體實施例方式〈UGT1A1基因擴增用引物對>本發明的UGT1A1基因擴增用引物對，如前所述，其特征在于其含有選自前述引物對(i)~(3)所組成的組中的至少一種引物對。由于含有至少任意一種引物對，因此例如可以特異性擴增UGT1A1基因中特定的目標區域。本發明的UGT1A1基因擴增用引物對，例如可以只含有前述引物對(1)~(3)中的任意一種，也可以含有任意兩種或引物對(1)~(3)全部。可以用引物對(1)特異性擴增的目標區域是UGT1A1基因中含有多態性UGT1A"6發生的部位的區域，可以用引物對(2)特異性擴增的目標區域是UGT1A1基因中含有多態性UGT1AP27發生的部位的區域，可以用引物對(3)特異性擴增的目標區域是UGT1A1基因中含有多態性UGT1AP28發生的部位的區域，這將在后面4又述。如前所述，已知UGT1A1基因的這3種多態性均為對藥物代謝產生影響的多態性，因此不僅要重視研究任意l種，還要重視研究任意2種或所有3種多態性。但是，在以往的方法中，存在著l個反應體系中無法分析多個序列的問題。這被認為是因為如前所述，由于UGT存在很多同工酶，因此PCR中連UGT1A1之外的同工酶的編碼基因也被擴增。因此，為了研究UGT1A1基因的3種多態性(UGT1A1*28，UGT1A1承6或UGT1A1承27)中的2種或所有3種時，需要分別在各個反應體系中分別擴增含有多態性發生部位的區域，單獨分析獲得的產物。這樣一來，以往的方法難以做到僅將UGT基因的UGT1Al基因作為模板且同時在UGT1A1基因中只特異性擴增分別含有前述多態性發生部位的2種或3種目標區域。而且，這樣一來，由于即使分析l個樣品也伴隨過多勞動力，因此存在無法實現分析大量試樣的問題。與之相對，如果使用本發明的UGT1A1基因擴增用引物對，則即使在含有前述引物對(1)~(3)中的任意2種或所有3種時，也可以在同一反應液中同時且特異性地擴增各個目標區域。因此，與前述的現有方法不同，可以減少麻煩和成本。而且，這樣一來，由于在同一反應液中特異性擴增2個或3個目標區域，因此通過使用例如與各個目標區域中的檢測對象序列互補的^笨針，寸吏用前述反應液直接進行Tm分析，則可以分別對前述2種或3種多態性進行分型。這樣一來，由于可以在同一反應液中分析UGT1A1基因中的2種或3種多態性，因此本發明的UGT1A1基因擴增用引物對，例如在含有引物對(l)~(3)任一種時當然優選，含有任意兩種或所有三種也優選。使用這種UGT1A1基因擴增用引物對，l個目標區域自不必說，如果同時擴增2個或3個目標區域，則可以比以往更有效地進4亍UGT1A1基因的多態性分析。而且，以下有時將正向引物稱為F引物，將反向引物稱為R引物。前述引物對(1)，如前所述，是包含含有下述(Fl)的寡核苷酸的正向引物和含有下述(Rl)的寡核苷酸的反向引物的一個引物對。(Fl):與含有序列號1的堿基序列的UGT1A1基因中的、以第2120位的腺嘌呤堿基(A)作為第1個堿基朝著5'方向直至第18~22個堿基的區域序列相同的至少一種寡核苷酸，該寡核苷酸以所述腺嘌呤堿基(A)作為3'末端和與含有序列號1的堿基序列的UGT1A1基因中的、以第2140位的胞嘧啶堿基(C)作為第1個堿基朝著5'方向直至第18~34個堿基的區域序列相同的至少一種寡核香酸，該寡核香酸以所述胞嘧啶堿基(C)作為3'末端中的至少一個(Rl):與含有序列號1的堿基序列的UGT1A1基因中的、以第2226位的鳥噤呤堿基(G)作為第1個堿基朝著3，方向直至第17~27個堿基的區域互補的至少一種寡核苷酸，該寡核苷酸以與所述第2226位的鳥噤呤石威基(G)互補的胞嘧啶堿基(C)作為3'末端和與含有序列號1的堿基序列的UGT1A1基因中的、以第2198位的胞嘧啶堿基(C)作為第l個堿基朝著3，方向直至第2239個堿基的區域互補的至少一種寡核苷酸，該寡核苷酸以與所述第2198位的胞嘧啶堿基(C)互補的鳥嘌呤堿基(G)作為3，末端中的至少一個序列號l所示的；威基序列是來源于人(HomoSapiens)的UGT1家族的UGT1A1基因的全長序列，例如，登錄于NCBI登錄號No.AY603772。前述引物對(1)是用于擴增序列號l的包含第2121位~2225位區域、第2141位~2197位區域、第2121位~2197位區域或者第2141位~2225位區域中的任意一個區域的DNA鏈及其互補鏈的引物對。已知該區域內的第2160位的堿基(序列號l中第2160位的堿基)存在對UGT1A1的功能產生影響的點突變(2160G，2160A),這種多態性就是前述的UGT1Al*6。本發明中，該部位的多態性，在純合子時，可以用2160G/G、2160A/A表示，在為雜合子時，可以用2160G/A來表示。以下，也將該引物對(1)稱為"UGT1A"6用引物對"。而且，在只分析UGT1A"6的多態性時，可以只使用UGT1A"6用引物對。在本發明中，引物對(1)的F1引物和R1引物，只要決定DNA聚合酶的擴增起始點的3，末端堿基滿足前述條件即可。這樣一來，通過固定各引物的3，末端的堿基，可以充分防止引物對(1)與例如類似的其它同工酶的基因(例如，UGT1A3基因，UGT1A4基因等)結合。這樣一來，由于F1引物和R1引物其3，末端的堿基被固定，各引物的長度自身沒有特別的限制，可以適當調整到一般長度。作為引物長度的其中一例，例如在13~50mer的范圍內，優選14~45mer,更優選1540mer。作為具體的一例，前述F1引物優選如下與含有序列號l的堿基序列中的、以第2120位的腺噪呤堿基(A)作為第l個堿基，朝著5，方向直至第18~22個堿基(優選第1922個，更優選第19~21個i咸基)的區域序列相同的至少一種寡核香酸，或者與序列號l的堿基序列中的、以第2140位的胞嘧啶堿基(C)作為第l個堿基，朝著5，方向直至第18~34個堿基(優選第21~33個堿基，更優選第24~31個堿基)的區域序列相同的至少一種寡核苷酸。而且，前述R1引物優選如下與序列號l的堿基序列中的、以第2226位的鳥嘌呤堿基(G)作為第l個堿基，朝著3，方向直至第1727個堿基(優選第19~26個堿基，更優選第19~23個堿基)的區域互補的至少一種寡核苷酸；或者與序列號l的堿基序列中的、以第2198位的胞嘧啶i威基(C)作為第1個堿基朝著3，方向直至第2239個堿基(優選第23~36個堿基，更優選第25~34個堿基)的區域互補的至少一種寡核苷酸。而且，由于F1引物和R1引物的3，末端分別被固定，由引物延伸的區域是例如，如前所述序列號l中第2121位~第2225位的區域，第2141位~第2197位的區域，第2121位~第2197位區域，或第2141位~第2225位的區域中的任意一個區域，獲得的擴增產物的總長根據所使用的引物的長度而變化。而且，Rl引物也可以是不與序列號l所示的堿基序列完全互補的寡核苷酸，Fl引物也可以是不與前述石威基序列的互補鏈完全互補的寡核苷酸。即，各引物中除3，末端堿基以外的部分中，可以與完全互補的寡核苷酸有l~5個石咸基不同。以下，列舉F1引物和R1引物的具體例子，本發明不限于此。而且，這些F1引物和R1引物的組合沒有任何限制，這其中，特別優選包括含有序列號4或序列號81的寡核苷酸的Fl，引物、和含有序列號13或序列號91的寡核苷酸的R1，引物的引物對(1，)。而且，下表中的"Tm(。C)"是下表的序列和與其完全互補的序列雜交時的Tm(。C)，是用MELTCALC軟件(http:〃www.meltcalc.com/)，將參數設為寡核苷酸濃度0.2pM，鈉當量(Na叫.)50mM計算的值(以下相同)。前述Tm值，可以用例如以往乂>知的MELTCALC軟件(http:〃www.meltcalc.com/)等計算，而且，還可以用臨近法(NearestNeighborMethod)測定(以下相同)。<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>接著，前述引物對(2),如前所述，是包含含有下述(F2)的寡核苷酸的正向引物和含有下述(R2)的寡核苷酸的反向引物的一個引物對。(F2):與含有序列號l的堿基序列的UGT1A1基因中的、以第2622位的鳥噪呤堿基(G)作為第l個堿基，朝著5，方向直至第15~27個堿基的區域序列相同的至少一種寡核苷酸，該寡核苷酸以所述鳥噤呤堿基(G)作為3，末端(R2):與含有序列號1的堿基序列的UGT1A1基因中的、以第2687位的胞嘧啶堿基(C)作為第1個堿基，朝著3'方向直至第17~26個堿基的區域互補的至少一種寡核苷酸，該寡核苷酸以與所述第2687位的胞嘧啶堿基(C)互補的鳥嘌呤堿基(G)作為3'末端前述引物對(2)是用于擴增序列號1的含有第2623位~2686位區域的DNA鏈及其互補鏈的引物對。已知該區域內的第2635位堿基(序列號1中第2635位的堿基)存在對UGT1A1的功能產生影響的點突變(2635C,2635A)，這種多態性就是前述的UGT1A1*27。本發明中，該部位的多態性，在純合子時，可以用2635C/C、2635A/A表示，在為雜合子時，可以用2635C/A來表示。以下，也將該引物對(2)稱為"UGT1A"27用引物對"。而且，在只分析UGT1A1*27的多態性時，可以只4吏用UGT1A"27用引物對。出于與前述引物對(1)相同的理由，在本發明中，引物對(2)的F2引物和R2引物，只要決定DNA聚合酶的擴增起始點的3，末端的堿基滿足前述條件即可。因此，F2引物和R2引物其長度自身沒有特別的限制，可以列舉與前述相同的長度。作為具體的例子，前述F2引物優選如下與序列號l的堿基序列中的、以第2622位的鳥噤呤堿基(G)作為第l個堿基，朝著5，方向直至第15~27個石威基(優選第1627個，更優選第1727個堿基)的區域序列相同的至少一種寡核苷酸。而且，前述R2引物優選如下與序列號l的堿基序列中的、以第2687位的胞嘧啶堿基(C)作為第l個堿基，朝著3，方向直至第17~26位堿基(優選第1826個堿基，更優選第19~26個堿基)的區域互補的至少一種寡核苷酸。而且，由于F2引物和R2引物的3，末端被固定，由引物延伸的區域是例如如前所述的序列號l中第2623位~第2686位的區域，獲得的擴增產物的總長根據所使用的引物的長度而變化。而且，R2引物，也可以是不與序列號l所示的堿基序列完全互補的寡核苷酸，F2引物也可以是不與前述堿基序列的互補鏈完全互補的寡核苷酸。即，各引物中除3，末端堿基以外的部分中，可以與完全互補的寡核香酸有l~5個石成基不同。以下，列舉F2引物和R2引物的具體例子，本發明不限于此。而且，這些F2引物和R2引物的組合沒有任何限制，這其中，特別優選包括含有序列號21或序列號92的寡核苷酸的F2，引物、和含有序列號29或序列號98的寡核苷酸的R2，引物的引物對(2，)。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage21</table其次，引物對(3)如前所述是包含含有下述(F3)的寡核苷酸的正向引物和含有下述(R3)的寡核普酸的反向引物的一個引物對。(F3):與含有序列號1的堿基序列的UGT1A1基因中的、以第1863位的胞嘧啶堿基(C)作為第1個堿基，朝著5'方向直至第17~31個堿基的區域序列相同的至少一種寡核苷酸，該寡核苷酸以所述胞嘧啶堿基(C)作為3'末端(R3):與含有序列號1的堿基序列的UGT1A1基因中的、以第1928位的胞嘧啶堿基(C)作為第1個堿基，朝著3'方向直至第16~20個堿基的區域互補的至少一種寡核苷酸，該寡核苷酸以與所述第1928位的胞嘧啶堿基(C)互補的鳥噤呤堿基(G)作為3'末端前述引物對(3)是用于擴增序列號l的含有第1864位~1927位區域的DNA鏈及其互補鏈的引物對。已知序列號l的該區域內第1895位起的TATA盒中的突變(6次TA重復，7次TA重復)為對UGT1A1的功能產生影響的點突變。這種多態性就是前述的UGT1A"28。本發明中，該部位的多態性，在純合子時，可以用1895-TA7/TA7、1895-TA6/TA6表示，在為雜合子時，可以用1859-TA6/TA7來表示。而且，序列號l是具有7次TA重復的多態性UGT1A1*28。以下，也將該引物對(3)稱為"UGT1A"28用引物對"。而且，在只分析UGT1A"28的多態性時，可以只使用UGT1AP28用引物對。出于與前述引物對(1)相同的理由，在本發明中，引物對(3)的F3引物和R3引物，只要決定DNA聚合酶的擴增起始點的3，末端的堿基滿足前述條件即可。因此，F3引物和R3引物其長度自身沒有特別的限制，可以列舉與前述相同的長度。作為具體的例子，前述F3引物優選如下與序列號l的堿基序列中的、以第1863位的胞嘧啶堿基(C)作為第l個堿基，朝著5，方向直至第17~31個i威基(優選第1828個，更優選第1924個堿基)的區域序列相同的至少一種寡核苷酸。而且，前述R3引物優選如下與序列號l的堿基序列中的、以第1928位的^^包嘧咬堿基(C)作為第1個堿基，朝著3，方向直至第16~20個堿基(優選第1720個堿基，更優選第17~19個堿基)的區域互補的至少一種寡核苷酸。而且，由于F3引物和R3引物的3，末端被固定，由引物延伸的區域是例如如前所述的序列號1中第1864位~第1927位的區域，獲得的擴增產物的總長根據所使用的引物的長度而變化。而且，R3引物也可以是不與序列號l所示的堿基序列完全互補的寡核苷酸，F3引物也可以是不與前述堿基序列的互補鏈完全互補的寡核苷酸。即，各引物中除3，末端堿基以外的部分中，可以與完全互補的寡核香酸有l~5個堿基不同。以下，列舉F3引物和R3引物的具體例子，本發明不限于此。而且，這些F3引物和R3引物的組合沒有任何限制，這其中，特和含有序列號46或序列號48的寡核苷酸的R3，引物的引物對(3，)。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>而且，前述引物對(1)~(3)的各引物，例如為了提高擴增反應的反應溫度，可以在5，末端添加以往/^知的任意序列。含有這種引物對(1)~(3)中的任意一個的本發明的UGT1A1基因擴增用引物對優選在擴增全血試樣等生物試樣中的UGT1A1基因時使用。尤其是，本發明的UGT1A1基因擴增用引物對在與后述的多態性檢測用探針一起使用時，基因擴增用反應液中的全血試樣的添加比例優選為O.l~0.5體積％。對于這點，后文有述。〈UGT1A1基因擴增用試劑>本發明的UGT1A1基因擴增用試劑，如前所述，其特征在于，其為用于通過基因擴增法擴增UGT1A1基因的試劑，含有本發明的UGT1A1基因擴增用探針。本發明的基因擴增用試劑的特征在于含有本發明的引物對，此外的組成等沒有任何限定。本發明的UGT1A1基因擴增用試劑，例如，為了檢測使用本發明的引物對通過基因擴增法獲得的擴增產物，還可以含有能與UGT1A1基因的檢測對象部位雜交的探針。如前所述，如果使用本發明的UGT1A1基因擴增用引物對，根據例如其所包含的引物對(1)~(3)的種類，通過基因擴增法可以獲得UGT1A1基因中的l個~3個目標區域的擴增產物。因此，通過同時存在有與前述各目標區域中的^r測對象序列互補的探針，可以使用后述的方法檢測例如擴增的有無、4全測對象部位的基因型(多態性)等。對于這種探針及其利用方法，在之后的多態性分析方法中說明。而且，本發明的UGT1A1基因擴增用引物對優選在擴增全血等生物試樣中的UGT1A1基因時使用。尤其是，本發明的UGT1Al基因擴增用試劑在與前述的探針一起使用時，基因擴增用反應液中的全血試樣的添加比例優選為0.1~0.5體積％。而且，在本發明中，所謂"檢測對象序列，，是指含有多態性發生的部位(檢測對象部位)的序列。本發明的UGT1A1基因擴增用試劑的形態沒有特別限定，例如可以是含有本發明的UGT1A1基因擴增用引物對的液體試劑，也可以是在使用前用溶劑懸浮的干燥試劑。而且，UGT1A1基因擴增用引物對的含有量也沒有特別的限制。<擴增產物的制備方法〉本發明的擴增產物的制備方法，如前所述，，其特征在于，其是通過基因擴增法制備UGT1A1基因的擴增產物的方法，含有下述步驟(I):(I)以試樣中的核酸作為模板，使用本發明的UGT1A1基因擴增用引物對，在反應液中擴增前述UGT1A1基因的步驟。這樣一來，通過使用本發明的UGT1A1基因擴增用引物對進行擴增反應，如前所述，可以使UGT1A1基因的目標區域擴增。而且，本發明的UGT1A1基因擴增用引物對在含有前述引物對(1)~(3)中的任意兩種時，可以在同一反應液中同時擴增分別含有UGT1A1基因中的2個檢測對象部位的2個目標區域。而且，本發明的UGT1A1基因擴增用引物對在含有前述引物對(l)~(3)全部時，可以在同一反應液中同時擴增分別含有UGT1A1基因中的3個檢測對象部位的3個目標區域。根據本發明擴增的目標區域，如前所述，是分別含有各多態性(UGT1A1*28，UGT1A"6和UGT1A"27)發生的4企測對象部位的區域。而且，在本發明的擴增產物的制備方法中，特征在于使用本發明的引物對，基因擴增法的種類和條件等沒有任何限制。作為前述基因擴增法，如前所述，沒有特別的限制，例如，可以列舉PCR(聚合酶鏈式反應)法、NASBA(Nucleicacidsequencebasedamplification,基于沖亥酉臾序歹'J的才廣增)法、TMA(Transcription-mediatedamplification,轉錄介導的擴增法)法、SDA法(StrandDisplacementAmplification,鏈置換擴增法)等，這其中，優選PCR法。以下，以PCR法為例，說明本發明，j旦不限于該法。作為使用本發明的試樣，例如只要含有作為模板的核酸即可，沒有特別的限制，優選例如在含有雜質的試樣中使用。作為前述含有雜質的試樣，可以列舉例如全血、口腔內細胞(例如，口腔粘膜)、指曱和毛發等的體細胞、生殖細胞、咳痰、羊水、石蠟包埋組織、尿、胃液(例如胃清洗液)等，以及這些物質的懸浮液等。根據采用本發明的引物對的擴增產物的制備方法，即使是例如含有各種雜質的試樣(尤其是全血或口腔內細胞等生物試樣)，也可以不受其影響地特異性擴增UGTIAI基因的前述目標區域。因此，根據本發明，即使是用以往的方法難以分析的雜質多的試樣，也可以例如不進行純化等前處理地直接使用。因而，從試樣的前處理的觀點來看，可以說能夠比以往的方法更快地制備擴增產物。前述反應液中的試樣的添加比例沒有特別的限制。作為具體例子，前述試樣為生物試樣(例如，全血試一羊)時，前述反應液中的添加比例的下限優選在例如0.01體積％以上，更優選在0.05體積％以上，更優選在0.1體積％以上。而且，前述添加比例的上限沒有特別的限制，例如，優選2體積％以下，更優選在1體積％以下，更優選在0.5體積％以下。而且，以后述的光學檢測作為目的時，尤其是使用標記探針進行光學檢測時，前述反應液中的全血試樣等生物試樣的添加比例優選設定在例如O.l~0.5體積％。在PCR反應中，通常為了使DNA變性(向單鏈DNA的解離)而實施熱處理，但是存在著通過這種熱處理，試樣中所含的糖、蛋白質等變性，產生不溶的沉淀物、渾濁等的可能性。因此，在通過光學方法確認有無擴增產物、檢測部位的基因型(多態性)時，這種沉淀物、渾濁的產生可能會影響測定精確度。但是，若將反應液中的全血試樣的添加比例i殳定在前述范圍，盡管4幾理并不清楚,但可以充分防止變性所導致的沉淀物的發生所產生的影響，因此可以提高使用光學方法的測定精確度。而且，由于充分抑制了全血試樣中的雜質對PCR的干擾，因此可以進一步提高擴增效率。因此，在使用本發明的引物對的基礎上，再通過將全血試樣等試樣的添加比例設定在前述范圍，可以進一步排除試樣的前處理的必要性。而且，前述反應液中的全血試樣的比例不僅可以用前述的體積比例(例如，0.1~0.5體積％)還可以用血紅蛋白(以下稱為"Hb")的重量比例表示。此時，前述反應液中的全血試樣的比例，換算成Hb量，在例如0.565~113g/L的范圍，更優選在2.825~56.5g/L的范圍，更優選在5.65~28.25g/L的范圍。而且，前述反應液中的全血試樣的添加比例，可以滿足例如前述體積比例和Hb重量比例兩者，也可以滿足二者中的<壬意一者。作為全血，可以是例如溶血的全血、未溶血的全血、抗凝固全血、含有凝固組分的全血等中的任意一者。本發明中，試樣中所含的目標核酸例如是DNA。前述DNA可以是例如生物試樣等試樣中原來含有的DNA，也可以是通過基因擴增法擴增的擴增產物DNA。后者的情況下，可以列舉由前述試樣中原本含有的RNA(總RNA,mRNA等)通過逆轉錄反應(例如RT-PCR(逆轉錄PCR))生成的cDNA。在本發明的擴增產物的制備方法中，優選在基因擴增反應開始前在前述反應液中再添力口白蛋白。通過添力口這種白蛋白，可以進一步減小例如由于前述沉淀物、渾濁的發生所產生的影響，而且還可以進一步提高擴增效率。具體而言，優選在前述步驟(I)的擴增反應和向單鏈DNA解離的步驟之前添加白蛋白。前述反應液中的白蛋白的添加比例在例如0.01~2重量％的范圍，優選在O.l~1重量％的范圍，更優選在0.2~0.8重量％的范圍。作為前述白蛋白，沒有特別的限定，可以列舉例如牛血清白蛋白(BSA)，人血清白蛋白，大鼠血清白蛋白，馬血清白蛋白等，可以是這些物質中的任意一種也可以聯合使用兩種以上。其次，對于本發明的擴增產物的制備方法，舉如下的例子進行說明，即，以全血試樣中的DNA作為目標核酸，采用包括前述引物對(l)~(3)的本發明的UGT1A1基因擴增用引物對、通過PCR制備UGT1A1基因的3個目標區域的擴增產物。而且，本發明的特征在于使用本發明的引物對，其它構成及條件沒有任何限制。首先，制備PCR反應液。本發明的引物對的添加比例沒有特別的限制，但優選按引物對(1)~(3)的F引物分別達到0.1~2pmol/L的方式添加，更優選為0.25~1.5nmol/L,特別優選為0.5~lpmol/L。而且優選按引物對(l)~(3)的R引物分別達到O.l~2lamol/L的方式添加，更優選為0.25~1.5|imol/L,特別優選為0.5~lpmol/L。各引物對中F引物和R引物的添加比例(F:R,摩爾比)沒有特別限制，但優選例如在l:0.25-1:4,更優選在l:0.5~1:2。反應液中的全血試樣的比例沒有特別的限定，但優選前述的范圍。全血試樣可以直接添加于反應液中，也可以預先用？K或緩沖液等溶劑稀釋后再添加到反應液中。預先稀釋全血試樣時，其稀釋率沒有特別的限定，例如將稀釋率設定為使反應液中的最終的全血添加比率在前述范圍，例如為100~2000倍，優選在200~1000倍。前述反應液中的其它組成成分沒有特別的限制，可以列舉以往公知的成分，其比例沒有特別限定。作為前述組成成分，可以列舉例如DNA聚合酶，核苷酸(核香三磷酸(dNTP))和溶劑。而且，如前所述，優選在前述反應液中進一步含有白蛋白。而且，在前述反應液中，各組成成分的添加順序沒有任何限定。作為前述DNA聚合酶，沒有特別限定，例如可以^使用以往/^知的耐熱性細菌來源的聚合酶。作為具體例子，可以商業上獲得水生棲熱菌(7Tzerwws"《w",/cws)來源的DNA聚合酵(美國專利第4889818號和第5079352號)(商品名Taq聚合酶)，嗜熱棲熱菌(7Tzer附w^zwwo//n7w)來源的DNA聚合酶(WO91/09950)(rTthDNA聚合酶)，強烈火球菌(p^ococcws/t/Www)來源的DNA聚合酶(WO92/09689)(PfuDNA聚合酶Stratagenes公司制)，嗜熱球菌(77^r腳coccws/"on^)來源的DNA聚合酶(EP0455430)(商標Vent:NewEnglandBiolabs公司制)等，這其中優選水生棲熱菌(r/zermwa《wa"cws)來源的耐熱性DNA聚合酶。前述反應液中的DNA聚合酶的添加比例沒有特別限定，例如在l100U/mL，優選在550U/mL，更優選在20~30U/mL。而且，DNA聚合酶的活性單位(U)，一般以活化鮭魚精子DNA作為模板引物，在活性測定用反應液中于74。C、30分鐘內將所有10nmo1的核苷酸都吸收到酸不溶性沉淀物中的活性為1U。前述活性測定用反應液的組成是例如25mMTAPS緩沖液(pH9.3,25。C),50mMKC1,2mMMgCl2，lmM石克基乙酉f,200fiMdATP、200|iMdGTP、200一dTTP、100fiM"a_32P，，dCTP、0.25mg/ml活化鮭魚精子DNA。作為前述核苷三磷酸，通常可以列舉dNTP(dATP,dCTP，dTTP)。前述反應液中的dNTP的添加比例沒有特別的限定，例如為0.01~lmmol/L,優選為0.05~0.5mmol/L,更4尤選為0.1~0.3mmol/L。作為前述溶劑，可以列舉例如Tris-HCL，三(羥曱基)曱基甘氨酸(Tricine)，MES，MOPS,HEPES，CAPS等緩沖液，可以使用市售的PCR用緩沖液和市售的PCR試劑盒的緩沖液等。而且，前述PCR反應液還可以含有肝素，甜萊石威，KC1,MgCl2，MgS04,甘油等，它們的添加比例可以i殳定在例如不抑制PCR反應的范圍內。反應液的總體積沒有特別的限定，例如可以根據使用的機器(熱循環儀)等適當確定，通常為l500pL，更優選為10~有特別的限定，例如(l)全血來源的雙鏈DNA向單鏈DNA的解離，(2)引物的退火，(3)引物的延伸(聚合酶反應)分別如下述方式進行。而且，循環數也沒有特別限定，以下述(1)~(3)的3個步驟為1個循環，優選例如在30個循環以上。上限沒有特別的限定，例如在總計IOO個循環以下，優選70個循環以下，更優選50個循環以下。各步驟的溫度變化可以使用例如熱循環儀等自動進行控制。使用本發明的引物對時，由于如前所述擴增效率優異，因此與用以往的方法50個循環需要3個小時左右相比，根據本發明可以以約l小時左右(優選l小時內)完成50個循環。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>按上述方式，可以制備與UGT1A1基因的3個目標區域互補的擴增產物。而且，在制備與3個目標區域中的任意1個或任意2個互補的擴增產物時，可以使用例如含有引物對(1)~(3)中與目標區域相應的任意l種或任意2種引物對的本發明的UGT1A1基因擴增用引物對。擴增反應獲得的目標區域的擴增產物的步驟。通過該步驟，還可以檢測擴增產物的有無、UGT1A1基因的前述目標區域的基因型(多態性UGT1A"6，UGT1AP27或UGT1AP28)。按照以往已知的方法可以確i/v擴增產物的有無。具體而言，例如可以通過在前述步驟(I)中，在前述反應液中添加可以與UGT1A1基因的檢測對象部位雜交的探針(例如熒光標記探針)，再通過步驟(11)、即測定前述反應液的前述探針中的熒光標記的熒光強度來確認。而且，擴增的目標區域為2個或3個時，可以通過例如在前述步驟(I)中，在前述反應液中添加2種或3種可以與UGT1A1基因的各檢測對象部位雜交的探針(例如焚光標記探針)，再通過步驟(II)、即測定前述反應液的各探針中的各熒光標記的熒光強度來確認。而且，對于UGT1A1基因中的UGT1A1*6,UGT1A"27和UGT1A"28的檢測，作為本發明的一個方式，在下文進行說明。〈UGT1A1基因的多態性分析方法>本發明的UGT1A1基因的多態性分析方法，其特征在于，其是分析UGT1A1基因中的檢測對象部位的多態性的方法，含有以下步驟(i)~(iv)。(i)通過本發明的擴增產物的制備方法，在反應液中擴增UGT1A1基因中包含檢測對象部位的區域的步驟(ii)準備含有所述步驟(i)中的擴增產物和可以與所述檢測對象部位雜交的探針的反應液的步驟(iii)改變所述反應液的溫度，測定所述擴增產物和所述探針的雜交產物顯示融解狀態的信號值的步驟(iv)根據伴隨溫度變化的所述信號值的變動，決定所述才企測對象部位的多態性的步驟這樣，通過使用本發明的UGT1A1基因擴增用引物對制備擴增產物，如前所述地擴增UGT1A1基因中的、含有多態性(UGT1A1*6,UGT1AP27或UGT1AP28)的檢測對象部位的目標區域，可以分析前述目標區域中的檢測對象部位的多態性。前述步驟(ii)中的探針沒有特別的限定，可以列舉例如與多態性UGT1Al*6的發生部位雜交的探針(以下也稱為"UGT1A"6用探針")，與多態性UGT1AP27的發生部位雜交的探針(以下也稱為"UGT1AP27用探針")，以及與多態性UGT1A"28的發生部位雜交的探針(以下也稱為"UGT1A"28用探針")。這些探針優選與含有前述檢測對象部位的檢測對象序列互補的探針。這些探針可以是任意一種，也可以是任意兩種，也可以是所有3種，例如可以根據用本發明的UGT1A1基因擴增用引物對擴增出的目標區域的種類來確定。使用2種或3種探針時，例如可以使用同一反應液，分析任意2種檢測對象部位或前述所有3個才全測對象部位的多態性。用于檢測前述多態性的探針，沒有特別的限定，可以通過以往公知的方法設定。例如，作為含有多態性的檢測對象部位的檢測對象序列，可以基于UGT1A1基因的有義鏈的序列設計，也可以基于反義鏈的序列設計。而且，多態性的4企測對象部位的石威基可以才艮據各個多態性的種類適當確定。即，UGT1A1*6時，序列號1中第2160位的堿基已知有"G"和"A"的多態性，據此可以列舉例如與第2160位為G的檢測對象序列和第2160位為A的檢測對象序列中的任一條序列互補的探針(有義鏈的檢測用探針)、與其反義鏈的序列互補的探針(反義鏈的檢測用探針)。而且，UGT1AP27時，序列號1中第2635位的堿基已知有"C"和"A"的多態性，據此可以列舉例如與第2635位為C的檢測對象序列和第2635位為A的檢測對象序列中的任一條序列互補的探針(有義鏈的檢測用探針)、與其反義鏈的序列互補的探針(反義鏈的檢測用探針)。而且，UGT1AP28時，序列號l中從第1895位開始的TATA盒的堿基已知有"6次TA重復TA6","7次TA重復TA7")的多態性，據此可以列舉例如與第1895位起始的TA重復為6次的檢測對象序列和第1895位起始的TA重復為7次的檢測對象序列中的任一條序列互補的探針(有義鏈的檢測等)。這樣，不論在設計探針時將發生多態性的檢測對象部位的堿基設定為前述那樣的任意一種堿基，都可以通過后述的方法判斷UGT1A1基因的各檢測對象部位中呈現哪種多態性。前述各探針還可以在前述步驟(i)后，即對UGT1A1基因的目標區域進行擴增反應后，添加到擴增反應液中，但為了容易且迅速地進行分析，優選在前述步驟(i)的擴增反應前預先添力口至J反應液中。前述反應液中的探針的添加比例沒有特別的限定，<旦優選例如4姿10~400nmol/L的范圍內添力口各^采4十，更優選在20~200nmol/L。而且，使用熒光染料作為#笨針的標記時，例如為了調整檢測的熒光強度，可以聯合使用與標記探針序列相同的未標記探針，這種未標記探針可以在其3，末端上添加石粦酸。此曰于，標記4笨針和非標記探針的摩爾比優選在例如1:10~10:1。前述探針的長度沒有特別的限制，例如是550mer,優選是10~30mer。對Tm值進行說明。若逐漸加熱含有雙鏈DNA的溶液，260nm處的吸光度上升。這是由于雙鏈DNA中的雙鏈間的氬鍵因加熱而解開，解離成單鏈DNA(DNA的融解)。而且，所有的雙鏈DNA解離形成單鏈DNA,其吸光度呈現出加熱開始時的吸光度(只是雙鏈DNA的吸光度)的約1.5倍左右，由此可以判斷融解結束了。基于這種現象，所謂融解溫度Tm—般被定義為吸光度達到吸光度總上升部分的50%時的溫度。前述步驟(iii)中，測定前述擴增產物和前述探針的雜交產物顯示融解狀態的信號可以是測定前述的260nm的吸光度，也可以是測定標記物的信號。具體而言，優選^f吏用用標記物標記的標記^:針作為前述探針，進行前述標記物的信號測定。作為前述標記探針，可以列舉例如單獨顯示信號且由于形成雜交體而不顯示信號的標記探針，或者單獨不顯示信號且由于形成雜交體而顯示信號的標記探針。如果是前述的探針，在與^r測對象序列形成雜交體(雙鏈DNA)時不顯示信號，而通過加熱探針游離則顯示信號。而且如果是后者的探針，在與檢測對象序列形成雜交體(雙鏈DNA)而顯示信號，而通過加熱探針游離則信號減少(消失)。因此，通過在信號特有的條件(吸收波長等)下檢測這種標記產生的信號，可以與前述260nm的吸光度測定一樣，在進行雜交產物融解的同時進行Tm值的測定等。在本發明中，如前所述，還可以對同一反應液中擴增的2個或3個目標區域的擴增產物確認其多態性。為此，在使用2種標記進行標記。通過使用這種不同的標記，即使在同一反應液中，通過改變檢測條件，也可以分別分析各擴增產物。作為前述標記纟果針中的標記物的具體例子，可以列舉例如熒光染料(熒光團)。作為前述標記探針的具體例子，優選例如用熒光染料標記，單獨呈現信號且由于雜交體形成而熒光減少(例如猝滅)的探針。利用這種熒光猝滅現象(Quenchingphenomenon)的探針一般被稱為熒光猝滅探針。這其中優選前述4罙4十的寡核苦酸的3，末端或5，末端被熒光染料標記，被標記的前述末端的石威基優選為C。此時，優選將前述標記探針的^5威基序列:&計成如下的序列在前述標記揮3十所雜交的4全測對象序列中，與前述標記的探針的末端堿基C配對的i威基或從前述配對的堿基起的1~3個堿基為G。這種探針一般被稱為鳥嘌呤猝滅探針，已知有所謂QProbe(注冊商標)。這種鳥噤呤猝滅探針若與檢測對象序列雜交，經熒光染料標記的末端的C由于靠近前述檢測對象DNA中的G，因此呈現出前述熒光染料的發光變弱(熒光強度減少)的這種現象。如果使用這種探針，通過信號的變動可以容易地確認雜交和解離。作為前述熒光染料，沒有特別的限定，但可以列舉例如熒光素、磷光體、羅丹明、聚甲炔染料衍生物等，作為市售的熒光染料，可以列舉例如BODIPYFL(商標，Molecularprobe公司制)，FluorePrime(商品名,AmershamPharmacia公司制),Fluoredite(商品名，Millipore7厶司制)，FAM(ABP^司制)，Cy3和Cy5(AmershamPharmacia公司制),TAMRA(Molecularprobe公司制)等。在多種探針中使用的熒光染料的組合，只要可在例如不同的條件下檢測，就沒有特別的限定，例如可以列舉PacificBlue(才企觀'jS皮長450~480nm)，TAMRA(才全觀'J^皮長585~700nm)和BODIPYFL(才全測波長515~555nm)的組合等。以下，列舉用于檢測多態性UGT1A"6，UGT1AP27和UGT1A"28的探針的序列的具體例子，但本發明不限于此。下述探針(1)是UGT1A"6用探針的一個例子，是用于檢測反義鏈的探針。下述探針(2)是UGT1A"27用探針的一個例子，下述(2-1)是用于檢測反義鏈的探針，下述(2-2)是用于檢測有義鏈的探針。下述探針(3)是UGT1A"28用探針的一個例子，是用于檢測反義鏈的探針。探針(1):與序列號1中的、以第2173位的胞嗜啶堿基(C)作為第1個堿基，朝著5'方向直至第17~25個堿基的區域序列相同至少一種寡核苷酸，該寡核苷酸以前述胞嘧啶堿基作為3，末端探針(2)為以下(2-1)和(2-2)中任意一種寡核苷酸(2-1):與序列號1中的、以第2645位的胞嘧啶堿基(C)作為第1個堿基，朝著5'方向直至第15~22個堿基的區域序列相同的至少一種寡核苷酸，該寡核苷酸以前述胞嘧啶堿基作為3'末端和(2-2):與序列號l中的、以第2625位的鳥噤呤堿基(G)作為第1個堿基，朝著3'方向直至第17~22個堿基的區域互補的至少一種寡核苷酸，該寡核苷酸以與前述鳥噤呤石威基互補的胞嘧啶堿基(C)作為3'末端探針(3):與序列號1中的、以第1892位的胞嘧咬石威基(C)作為第1個堿基，朝著3'方向直至第25~31個堿基的區域序列相同的至少一種寡核苷酸，該寡核苷酸以前述胞嘧啶堿基作為3'末端在前述探針(l)中，位于序列號l的第2160位的堿基用r表示，前述r是G或A。在前述探針(2-l)中，位于序列號l的第2635位的堿基用m表示，前述m是C或A。在前述探針(2-2)中，與序列號l的第2635位互補的堿基用k表示，前述k是G或T。在前述探針(3)中，位于序列號l的從第1895位起的TATA盒的區域是7次的TA重復或6次的TA重復。進而，前述探針(1)、探針(2)和探針(3)的具體例子示于下表。而且，下表中"Tm(°C)"是下表的序列和與其完全互補的序列雜交時的Tm(°C)，是用MELTCALC軟件(http:〃www.meltcalc.com/)、將參數設為寡核香酸濃度0.2(iM,鈉當量(Naeq.)50mM計算的值。表5<table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>5'-ccaTATATATATATATAtaagtagsr3'40.573上表中探針(1)包含與序列號1中的第2160位為A的區域相同的序列，大寫的堿基表示序列號1的第2160位的堿基。而且，在前述揮:針(l)中，前述大寫的石咸基可以替換成r，前述r可以是A和G中的任一個。在上表中，由序列號59~66表示的探針(2-1)包含與序列號1中的第2635位為A的區域相同的序列，前述大寫的堿基表示序列號1的第2635位的堿基。而且，在前述探針(2-l)中，前述大寫的^威基可以替換成m，前述m可以是A和C中的任一個。在上表中，序列號100~105表示的探針(2-2)包含與序列號1中的第2635位為A的區域互補的序列，大寫的堿基表示與序列號1的第2635位的堿基互補的堿基。而且，在前述#笨針(2-2)中，前述大寫的石咸基可以替換成k,前述k可以是A或C。在上表中的探針(3)包含與序列號l中的第1895位起的TATA盒為7次TA重復的區域相同的序列，大寫的堿基表示7次TA重復。而且，在前述探針(3)中，TA重復可以是7次和6次中的任一種。作為本發明中的探針的具體例子，例如如前所述，可以是前表中所示的寡核苷酸的互補鏈。前述探針是一個例子，本發明不限于此。作為UGT1A"6用探針，探針(l)中，優選為含有序列號55的堿基序列的寡核苷酸或者含有序列號56的堿基序列的寡核苷酸；作為UGT1A"27用探針，探針(2)中，優選為含有序列號62的堿基序列的寡核苷酸或者含有序列號102的堿基序列的寡核苷酸；作為UGT1AP28用探針，探針(3)中，優選為含有序列號69的堿基序列的寡核苷酸。而且，在使用2種以上這些探針時，如前所述，優選用各個不同的熒光染料(不同的波長下檢測的熒光染料)標記。例如，以前表中所示的#笨針制成鳥嘌呤猝滅4笨針時，優選UGT1Al*6用探針和UGT1A"27用探針3，末端的胞嘧啶被前述的熒光染料(例如PacificBlue,TAMRA等)標記，UGT1Al*28用探針5，末端的胞嘧啶:帔前述的熒光染料(例如BODIPYFL)標記。而且，在5，末端上標記了熒光染料的探針，例如為了防止探針自身伸長，可以在其3，末端上再添加磷酸基。然后，對于本發明的檢測方法，列舉如下的例子進行說明，即，使用下述探針，檢測UGT1A1基因中的3個多態性UGT1A1*28,UGT1AP6和UGT1A"27。而且，本發明不限于此。(探針)UGT1A1*6用探針5，一agagacaGagcattttacac—(PacificBlue)—3，(序歹'J號55),或5，一gagacaGagcattttacac—(PacificBlue)—3，(序歹ij號56)UGT1A1*27用探針5，—ttattcccAgtatgcaacc—(TAMRA)—3，(序歹ij號62)《5，—gttgcatacTgggaataaac—(TAMRA)—3，(序歹ij號102)UGT1Al*28用拔針5，一(BODIPYFL)—ccaTATATATATATATAtaagtaggagag—3'(序列號69)首先，使用添加了前述3種標記探針的反應液，如前所述地進行PCR,在同一反應液中同時擴增UGT1A1基因的3個區域。前述反應液含有例如本發明的UGT1A1基因擴增用引物對，DNA聚合酶，dNTP,含有作為模板的核酸的試樣和前述3種探針。此外還可含有可以在核酸擴增中使用的各種添加劑。接著，對獲得的擴增產物進行解離，并進行通過解離獲得的單鏈DNA與前述標記探針的雜交。這可以通過例如改變前述反應液的溫度來進4亍。前述解離步驟中的加熱溫度只要是前述擴增產物解離的溫度即可，沒有特別的限定，例如，85~95°C。加熱時間沒有特別的限定，-f旦通常為l秒~IO分鐘，優選1秒5分鐘。解離的單鏈DNA和前述標記纟笨4十的雜交可以在例如前述解離步驟后，通過使前述解離步驟中的加熱溫度下降來進行。作為溫度條件，為例如4050。C。而且，改變前述反應液的溫度，測定前述擴增產物和前述標記探針的雜交產物顯示融解狀態的信號值。具體的是，例如，加熱前述反應液(前述單鏈DNA和前述標記探針的雜交產物)，測定伴隨溫度上升的信號值的變化。如前所述，使用末端的C堿基被標記的探針(鳥噤呤猝滅探針)時，在與單鏈DNA雜交的狀態下，熒光減少(或猝滅)，在解離的狀態下，發出熒光。因此，例如，可以慢慢加熱焚光減少(或猝滅)了的雜交產物，測定伴隨溫度上升的熒光強度的增加。測定熒光強度的變動時的溫度范圍沒有特別的限定，例如，起始溫度為室溫~85°C,優選2570。C,終止溫度為例如40105°C。而且，溫度的上升速度沒有特別的限定，為例如0.1~2(TC/秒，更優選為0.3~5。C/秒。接著，通過分析前述信號的變動來確定Tm值。具體而言，根據獲得的熒光強度，計算各溫度下每單位時間的熒光強度變化量(_d熒光強度增加量/dt)，將顯示最低值的溫度確定為Tm值。而且，還可以將每單位時間的熒光強度增加量(d焚光強度增加量/dt)的最高點確定為Tm值。而且，在使用單獨不顯示信號且由于雜交形成顯示信號的探針而不是使用猝滅探針作為標記探針時，可以相反地來測定熒光強度的減少量。在本發明中，為了檢測3個多態性UGT1A"6、UGT1A1*27和UGT1A"28，在與3種^:針的各個標記相應的條件下，測定各個Tm值。UGT1A1承6用探針的PacificBlue可以在例如450~48Onm的檢測波長處檢測，UGT1A1*27用探針的TAMRA可以在例如585~700nm的檢測波長處檢測，UGT1A"28用探針的BODIPYFL可以在例如515~555nm的檢測波長處檢測。而后，根據這些Tm值確定各檢測對象部位的基因型。在Tm分析中，獲得了以下結果完全互補的雜交體(匹配)比l個堿基不同的雜交體(錯配)顯示解離的Tm值要高。因此，對于前述探針，通過預先測定完全互補的雜交體的Tm值、和l個堿基不同的雜交體的Tm值，可以確定各檢測對象部位的基因型。例如，將檢測對象部位的堿基假定為突變型(例如，序列號l中第2160位的堿基為A),使用與含有其的檢測對象序列互補的探針時，形成的雜交體的Tm值如果與完全互補的雜交體的Tm值相同，則前述擴增產物的多態性可以判斷為突變型。而且，形成一個堿基不同的雜交體的Tm值相同(比完全互補的雜交體的Tm值更低)，則前述擴增產物的多態性可以判斷為野生型(例如，序列號1中第2160位的堿基為G)。進而，在檢測到兩個Tm值時，可以確定為雜合子。這樣，根據各個標記4笨針相對應的3個Tm值，可以評斷多態性UGT1AP6和UGT1AP27和UGT1AP28的基因型。而且，在本發明中，可以進行雜交體形成時的信號變動的測定來代替如前所述的使含有前述探針的反應液的溫度上升(加熱雜交產物)，測定伴隨溫度上升的信號變動的方法。也就是說，通過使含有前述探針的反應液的溫度下降來形成雜交體時，可以測定伴隨前述溫度下降的信號變動。作為具體例子，使用單獨顯示信號而由于形成雜交體不顯示信號的標記探針(例如鳥嘌呤猝滅4笨針)時，在單鏈DNA和探針解離的狀態下發出熒光，然而由于溫度下降而形成雜交體時，則前述焚光減少(或猝滅)。因此，例如，可以4吏前述反應液的溫度緩緩下降，測定伴隨溫度下降的熒光強度的減少。另一方面，使用單獨不顯示信號、由于形成雜交體而顯示信號的標記探針時，在單鏈DNA和探針解離的狀態下不發出熒光，然而由于溫度下降而形成雜交體時，則發出熒光。因此，例如，可以使前述反應液的溫度徐徐下降，測定伴隨溫度下降的熒光強度的增加。而且，在分析UGT1A1基因的3種多態性(UGT1AP28和UGT1AP6和UGT1A"27)中的任意1種或任意2種多態性時，使用例如含有引物對(1)~(3)中的對應于目標區域的任意l種或任意2種引物對的本發明的UGT1A1基因擴增用引物對，還可以使用與目標檢測對象部位雜交的任意一種探針或任意2種探針。42下面，對本發明的實施例進行說明。但是，本發明不受下述實施例限制。實施例1從9名受試者中用肝素鋰采血管進行采血(試樣1~9)。將10nL獲得的血液與90pL蒸餾水混合，再將10nL該混合液與90^L蒸餾水混合。將1OpL所得的混合液添加到40jxL下述組成的PCR反應液中，用熱循環儀進行PCR。PCR的條件為以95。C處理60秒、95。C1秒和54。C10秒作為1個循環，重復50個循環，再于95。C處理l秒，40。C處理60秒。而且，接著，溫度的上升速度設為rC/3秒，將前述PCR反應液由40。C加熱到95。C，測定焚光強度隨時間的變化。檢測波長為450~480nm(熒光染料PacificBlue的才企測)，515~555nm(熒光染泮牛BODIPYFL的才企測)，585~700nm(焚光染一牛TAMRA的才全測)。而且，50個循環、的PCR所需要的時間約為l個小時。表6(PCR反應液單位|^1)蒸餾水19.8755%NaN30.520%BSA140%甘油3.12510xGeneTaq緩沖液*52.5mMdNTPs4100mMMgCl215pMUGT1A1*6用探針15pMUGT1A1*27用探針10.55pMUGT1A1*27用探針215(iMUGT1A1*28用探針0.5lOO^iMUGT1A1*6Fl引物lOOuMUGT1A1*6Rl引物lOO^MUGT1A1*27F2引物lOO(iMUGT1A1*27R2引物lOO^MUGT1A1*28F3引物lOO^MUGT1A1*28R3引物5U/filGeneTaqFP*_0.250.50.250.50.250.50.25總40^1*商品名GeneTaqFP:-水>,-一>公司制(探針)UGT1A1*6用探針5，—agagacagagcattttacac—(PacificBlue)—3，(序歹ij號55)UGT1A1*27用探針15'—ttattcccagtatgcaacc—(TAMRA)—3，(序歹'J號62)UGT1A1*27用探針25，—ttattcccagtatgcaacc—P—3，(序歹ij號62)UGT1A1*28用探針5，一(BODIPYFL)—ccatatatatatatatataagtaggagag—P—3，(序歹ij號69)(引物對)UGT1A1*6Fl引物5，-agcagaggggacatg肌ata-3'UGT1A1*6Rl引物5，一肌cattatgcccgEigact肌c一3'(序列號4)(序列號13)UGT1A1*27F2引物5，-卿actttctgtgcgacg-3，(序列號21)UGT1A1*27R2引物5，-cagatgcagagctcaatagg-3，(序歹ij號29)UGT1A1*28F3引物5，-gtcacgtg織cagtc咖c-3，(序列號42)UGT1A1*28R3引物5，-cctttgctcctgccagag-3，(序歹ij號48)與UGT1Al*6用探針匹配的雜交體的Tm值為63°C,錯配的雜交體的Tm值為56°C，與UGT1A"27用探針匹配的雜交體的Tm值為6rC,4晉配的雜交體的Tm^直為56。C，與UGT1A1承28用探針匹配的雜交體的Tm值為58°C，錯配的雜交體的Tm值為54°C。試樣l~9的結果示于圖1~3。這些圖是表示伴隨溫度上升的熒光強度的變化的Tm分析的圖，縱軸的微分值表示"-d熒光強度增加量/dt",橫軸表示溫度(以下相同)。如這些圖所示，根據信號的峰確定各試樣中的UGT1A"6和UGT1AP27和UGT1A"28的基因型。為了支持這些實施例的結果，對于9名受試者，通過RFLP法和測序法確認UGT1A"6和UGT1A"27和UGT1A"28的基因型，獲得了與實施例相同的結果。這樣，通過使用本發明的引物對，使用不實施前處理的全血試樣，可以在同一反應液中同時擴增UGT1A1基因的3個區域，并且使用前述同一反應液分沖斤3種多態性。實施例2從2名受試者中用EDTA采血管進行采血(試樣l~2)。將10(iL獲得的血液與70iiL下述稀釋液A混合，再將10jiL該混合液與70pL下述稀釋液B混合。將10pL所得混合液于95。C加熱5分鐘處理后，再添加到46pL下述組成的PCR反應液中，用熱循環儀進行PCR。PCR的條件為以95。C處理60秒后、95。C處理l秒和6(TC15秒作為l個循環，重復50個循環，再于95。C1秒，40。C處理6o秒。而且，接著，溫度的上升速度設為rc/3秒，將前述PCR反應液由40。C加熱到75。C,測定熒光強度隨時間的變化。檢測;皮長為450~480nm(焚光染才牛PacificBlue的才企溯'J),515~555nm(熒光染料BODIPYFL的檢測)，585~700nm(熒光染料TAMRA的檢測)。(稀釋液A)10mMTris—HCl(pH8)、0.lmMEDTA、0.05%NaN、0.3%SDS3(稀釋液B)10mMTris—HCl(pH8)、0.lmMEDTA、0.05%NaN3表7(PCR反應液單位pl)蒸餾水155%NaN30.520%BSA0.540%甘油12.510xGeneTaq緩沖液*52.5mMdNTPs45jaMUGT1A1*6用探針25|iMUGT1A1*27用探針25|iMUGT1A1*28用探針2lOO(iMUGT1A1*6Fl引物0.25lOOpMUGT1A1*6Rl引物0.5lOOfiMUGT1A1*27F2引物0.5lOO^MUGT1A1*27R2引物0.25lOO(iMUGT1A"28F3引物0.25100|iMUGT1A1*28R3引物0.55U/|iilGeneTagFP*_0.25總46^1*商品名GeneTaqFP:-少水°乂'-一>/>司制(探針)UGT1A1*6用探針5，—gagacagagcattttacac—(PacificBlue)—3，(序歹ij號56)UGT1A1*27用探針5，一gttgc由cTggg肌t咖c一(TAMRA)—3，(序列號102)UGT1A1*28用探針5，—(BODIPYFL)—ccatatatatatatatataagtaggagag—P—3，(序歹ij號69)(引物對)UGT1A1*6Fl引物5，_tgaaatagttgtcctagcacctgacgc-3，(序歹ij號81)UGT1A1*6Rl引物5，_caaaagactctttcacatcctccctttgg_3，(序歹ij號91)UGT1A1*27F2引物5，-ccttttcacagaactttctgtgcgacg-3，(序歹ij號92)UGT1A1*27R2引物5，-gccagac卿tgc卿gctcaatagg-3，(序列號9g)UGT1A1*28F3引物5，-agctttttatagtcacgtgacacagtcaaac-3，(序歹ij號123)UGT1A1"8R3引物5，-cgcctttgctcctgccagag-3，(序歹ij號46)與UGTlAl*6用探針匹配的雜交體的Tm值為57°C,錯配的雜交體的Tm值為50°C，與UGTlAl*27用探針匹配的雜交體的Tm值為57。C,4晉配的雜交體的Tm值為50。C,與UGT1AP28用探針匹配的雜交體的Tm值為53°C,錯配的雜交體的Tm值為49。C。試樣l~2的結果示于圖4。這些圖是表示伴隨溫度上升的熒光強度的變化的Tm分析的圖，縱軸的微分值表示"-d焚光強度增加量/dt",橫軸表示溫度。如這些圖所示，根據信號的峰確定各試樣中的UGT1AP6和UGT1A"27和UGT1A"28的基因型。為了支持這些實施例的結果，對于2名受試者，通過RFLP法和測序法，確認UGT1AP6和UGT1A"27和UGT1A"28的基因型，獲得了與實施例相同的結果。這樣，通過使用本發明的引物對，4吏用不實施前處理的全血試樣，可以在同一反應液中同時擴增UGT1A1基因的3個區域，并且使用前述同一反應液可以分析3種多態性。工業上利用的可能性如上所述，通過本發明的引物對，可以以高效率特異性擴增UGT1A1基因中的、含有特定的多態性(UGT1A"28和UGT1A"6或UGT1A"27)發生部位的區域。因此與前述的以往的方法不同，可以減少麻煩和成本。而且，由于這沖羊一來特異性擴增含有多態性的檢測對象部位的區域，通過使用例如與含有前述檢測對象部位的檢測對象序列互補的探針，使用前述反應液直接進行Tm值分析，可以對前述多態性進行分型。而且，由于在一個反應液中可以擴增和分型，因此可以使操作自動化。再者，如果使用本發明的引物對，即使是例如含有雜質的試樣(例如全血或口腔粘膜等)，由于可以省略前處理，因此可以更迅速且更簡便地進行擴增反應。而且，如果使用本發明的引物對，可以以比以往更優異的擴增效率進行擴增反應，因此可以縮短擴增反應。因此，如果通過本發明的引物對和含有其的試劑、以及使用它們的擴增產物的制備方法，可以快速且簡便地分析UGT1A1基因的多態性，因此可以認為在醫療領域中極為有效。權利要求1.一種UGT1A1基因擴增用引物對，其特征在于，該引物對為用于通過基因擴增法擴增UGT1A1基因的引物對，含有選自下述引物對(1)～(3)所組成的組中的至少一種引物對引物對(1)包含含有下述(F1)的寡核苷酸的正向引物和含有下述(R1)的寡核苷酸的反向引物的一個引物對(F1)下述寡核苷酸中的至少一個與含有序列號1的堿基序列的UGT1A1基因中的、以第2120位的腺嘌呤堿基(A)作為第1個堿基朝著5’方向直至第18～22個堿基的區域序列相同的至少一種寡核苷酸，該寡核苷酸以所述腺嘌呤堿基(A)作為3’末端，和與含有序列號1的堿基序列的UGT1A1基因中的、以第2140位的胞嘧啶堿基(C)作為第1個堿基朝著5’方向直至第18～34個堿基的區域序列相同的至少一種寡核苷酸，該寡核苷酸以所述胞嘧啶堿基(C)作為3’末端；(R1)下述寡核苷酸中的至少一個與含有序列號1的堿基序列的UGT1A1基因中的、以第2226位的鳥嘌呤堿基(G)作為第1個堿基朝著3’方向直至第17～27個堿基的區域互補的至少一種寡核苷酸，該寡核苷酸以與所述第2226位的鳥嘌呤堿基(G)互補的胞嘧啶堿基(C)作為3’末端，和與含有序列號1的堿基序列的UGT1A1基因中的、以第2198位的胞嘧啶堿基(C)作為第1個堿基朝著3’方向直至第22～39個堿基的區域互補的至少一種寡核苷酸，該寡核苷酸以與所述第2198位的胞嘧啶堿基(C)互補的鳥嘌呤堿基(G)作為3’末端；引物對(2)包含含有下述(F2)的寡核苷酸的正向引物和含有下述(R2)的寡核苷酸的反向引物的一個引物對(F2)與含有序列號1的堿基序列的UGT1A1基因中的、以第2622位的鳥嘌呤堿基(G)作為第1個堿基朝著5’方向直至第15～27個堿基的區域序列相同的至少一種寡核苷酸，該寡核苷酸以所述鳥嘌呤堿基(G)作為3’末端，(R2)與含有序列號1的堿基序列的UGT1A1基因中的、以第2687位的胞嘧啶堿基(C)作為第1個堿基朝著3’方向直至第17～26個堿基的區域互補的至少一種寡核苷酸，該寡核苷酸以與所述第2687位的胞嘧啶堿基(C)互補的鳥嘌呤堿基(G)作為3’末端；引物對(3)包含含有下述(F3)的寡核苷酸的正向引物和含有下述(R3)的寡核苷酸的反向引物的一個引物對(F3)與含有序列號1的堿基序列的UGT1A1基因中的、以第1863位的胞嘧啶堿基(C)作為第1個堿基朝著5’方向直至第17～31個堿基的區域序列相同的至少一種寡核苷酸，該寡核苷酸以所述胞嘧啶堿基(C)作為3’末端，(R3)與含有序列號1的堿基序列的UGT1A1基因中的、以第1928位的胞嘧啶堿基(C)作為第1個堿基朝著3’方向直至第16～20個堿基的區域互補的至少一種寡核苷酸，該寡核苷酸以與所述第1928位的胞嘧啶堿基(C)互補的鳥嘌呤堿基(G)作為3’末端。2.根據權利要求1所述的UGT1A1基因擴增用引物對，所述引物對(1)~(3)分別為下述引物對(l')~(3，)引物對(rh包含含有下述(fi，)的寡核苷酸的正向引物和含有下述(Rr)的寡核苷酸的反向引物的一個引物對(Fl'):含有序列號4的堿基序列的寡核苷酸和含有序列號81的堿基序列的寡核苦酸中的至少一種，(Rl'):含有序列號13的堿基序列的寡核苷酸和含有序列號91的堿基序列的寡核苷酸中的至少一種；引物對(2，)包含含有下述(F2，)的寡核香酸的正向引物和含有下述(R2')的寡核香酸的反向引物的一個引物對(F2'):含有序列號21的堿基序列的寡核苷酸和含有序列號92的堿基序列的寡核苷酸中的至少一種，(R2'):含有序列號29的堿基序列的寡核苷酸和含有序列號98的堿基序列的寡核苷酸中的至少一種；引物對(3'):包含含有下述(f3，)的寡核苷酸的正向引物和含有下述(R3，)的寡核苷酸的反向引物的一個引物對(F3，)含有序列號42的堿基序列的寡核苷酸和含有序列號123的堿基序列的寡核苷酸中的至少一種，(R3'):含有序列號46的堿基序列的寡核苷酸和含有序列號48的堿基序列的寡核苷酸中的至少一種。3.根據權利要求1所述的UGT1A1基因擴增用引物對，所述UGT1A1基因擴增用引物對是用于擴增生物試樣中的UGT1A1基因的引物對。4.根據權利要求3所述的UGT1A1基因擴增用引物對，所述生物i式一羊是全血。5.—種UGT1A1基因擴增用試劑，其特征在于，其為用于通過基因擴增法擴增UGTIAI基因的試劑，含有權利要求1所述的UGTIAI基因擴增用引物對。6.根據權利要求5所述的UGTIAI基因擴增用試劑，其還含有能與UGTIAI基因的檢測對象部位雜交的探針。7.根據權利要求6所述的UGTIAI基因擴增用試劑，所述探針是選自下述(P1，)~(P3，)所示的寡核苷酸所組成的組中的至少一種探針(Pl，)含有序列號55的堿基序列的寡核苷酸和含有序列號56的堿基序列的寡核苷酸中的至少一種寡核苷酸；(P2，)含有序列號62的堿基序列的寡核苷酸和含有序列號102的堿基序列的寡核苷酸中的至少一種寡核苷酸；(P3，)含有序列號69的堿基序列的寡核苷酸。8.根據權利要求6所述的UGTIAI基因擴增用試劑，所述探針是熒光標記探針。9.一種擴增產物的制備方法，其特征在于，其為通過基因擴增法制備UGTIAI基因的擴增產物的方法，含有下述步驟(I):(I)以試樣中的核酸作為模板，使用權利要求1所述的UGTIAI基因擴增用引物對，在反應液中擴增所述UGTIAI基因的步驟。10.根據權利要求9所述的擴增產物的制備方法，在所述步驟(I)中，在所述反應液中還添加能與UGTIAI基因的檢測對象部位雜交的探針。11.根據權利要求10所述的擴增產物的制備方法，所述探針是選自下述(P1，)~(P3，)所示的寡核苷酸所組成的組中的至少一種探針(Pl，)含有序列號55的堿基序列的寡核苷酸和含有序列號56的堿基序列的寡核苷酸中的至少一種寡核苷酸；(P2，)含有序列號62的堿基序列的寡核普酸和含有序列號102的堿基序列的寡核苷酸中的至少一種寡核苷酸；(P3，)含有序列號69的堿基序列的寡核苷酸。12.根據權利要求10所述的擴增產物的制備方法，所述探針是熒光標記探針。13.根據權利要求12所述的擴增產物的制備方法，其還含有下述步驟(II):(II)對所述反應液，測定所述熒光標記揮:4十的熒光標記的熒光強度的步驟。14.根據權利要求9所述的擴增產物的制備方法，所述試樣是生物試樣。15.根據權利要求14所述的擴增產物的制備方法，所述生物試樣是全血。16.根據權利要求15所述的擴增產物的制備方法，所述反應液中的全血試樣的添加比例為0.1~0.5體積％。17.—種多態性分析方法，其特征在于，其為分析UGT1A1基因中的檢測對象部位的多態性的方法，包括以下步驟(i)~(iv):(i)通過權利要求9中所述的擴增產物的制備方法，在反應液中擴增UGT1A1基因中包含檢測對象部位的區域的步驟；(ii)準備含有所述步驟(i)中的擴增產物和能與所述檢測對象部位雜交的探針的反應液的步驟；(iii)改變所述反應液的溫度，測定所述擴增產物和所述探針的雜交產物顯示融解狀態的信號值的步驟；(iv)根據伴隨溫度變化的所述信號值的變動，決定所述檢測對象部位的多態性的步驟。18.根據權利要求17所述的多態性分析方法，在所述步驟(i)中，在擴增反應前，向所述反應液中添加能與所述檢測對象部位雜交的探針。全文摘要提供用于通過基因擴增法擴增UGT1A1基因中含有檢測目標部位的目標區域的引物對，該引物對可以特異性擴增前述區域。使用3對引物對，各個引物對分別包含含有序列號4或序列號81、序列號21和序列號42的堿基序列的正向引物、和含有序列號13或序列號91、序列號29和序列號48的堿基序列的反向引物。通過使用這種引物對，可以在同一反應液中，同時擴增UGT1A1基因的分別含有3種多態性(UGT1A1*6，UGT1A1*27，UGT1A1*28)發生部分的3個目標區域。文檔編號C12N15/09GK101506362SQ20078003031公開日2009年8月12日申請日期2007年11月29日優先權日2006年11月30日發明者平井光春,間島智史申請人:愛科來株式會社