專利名稱：一種防治煙草黑脛病的菌株及其菌劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及微生物領(lǐng)域，更確切的說，涉及用于植物根部病害，特別是一 種用于防治煙草黑脛病的菌抹及菌劑。
背景技術(shù)：
煙草黑脛病菌最早是由Breda de Haan于1896年在印度尼西亞的爪哇首 次發(fā)現(xiàn)和描述的，并將其命名為煙草疫霉(腳鄉(xiāng)力M，戸甜/.〃ca var./ /co"a/7ae ( Breda de Haan) Tucker)，由i亥病菌引起的;):因草黑胚病是一 種分布廣泛， 為害嚴重的世界性煙草主要病害之一。煙草黑脛病可以在煙草的 任何生育階段侵染為害，但主要為害大田煙林。苗期發(fā)病往往造成煙苗成片死 亡，成猝倒狀；大田期發(fā)病則可以造成整個煙株突然凋萎并伴有根部或莖基部 變黑癥狀，造成無法挽救的損失。我國20世紀80年代以后隨著煙草種植面積 的擴大，煙草黑脛病迅速發(fā)展。據(jù)1989-1991年全國16個省市主要煙區(qū)調(diào)查， 除黑龍江尚未發(fā)生外，其余各煙區(qū)均有發(fā)生，以河南、山東、安徽、云南等省 發(fā)生較重， 一般發(fā)生率為5%一15%,重者達30%以上，給煙草生產(chǎn)造成很大損失。 長期以來，主要用化學農(nóng)藥一甲霜靈。隨著曱霜靈在煙草生產(chǎn)上的大量使用， 煙草黑脛病逐步產(chǎn)生抗藥性。20世紀60年后，由于化學農(nóng)藥"3R" (residue, resistance, resurgence )問題嚴重^A類對環(huán)境保護及自身健康意識的增強， 生物防治已經(jīng)成為人們研究的熱點。生物防治的優(yōu)點是對人畜安全，對環(huán)境沒 有或極少污染，使用成本較低，便于利用。利用微生物對煙草黑脛病進行防治 是生物防治 一個重要的例子。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的正是針對上述現(xiàn)有技術(shù)所存在問題而的提供的一種防治煙草黑脛病的菌抹及其菌劑，該菌林對煙草黑脛病有較好的抑制作用。本案發(fā)明人從福建、河南、安徽、云南、湖北采集了煙草根際土樣ioo份，用幾丁質(zhì)選擇培養(yǎng)基法共分離出產(chǎn)幾丁質(zhì)酶菌林62林，其中真菌32抹、細 菌22抹、放線菌8抹。通過透明圈法和還原糖法對分離的菌抹進行了篩選，得 到一抹幾丁質(zhì)酶高產(chǎn)菌林。經(jīng)過鑒定，該菌抹為淡紫擬青霉(Pacilomyces lilacinus。該菌林被送往位于武漢大學的中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，保藏 曰期為2007年12月10日，保藏號為CCTCCNO: M207196;其名稱為淡紫擬青 霉ZY-19-2。經(jīng)試驗該菌抹對煙草黑脛病菌(戶A^o/7/^力roa paraW〃ca Dast var. /2/co〃a朋e)有較強的抑制作用(見附圖)。由附圖看出隨著黑脛病菌 絲的不斷生長，當遇到牛津杯中的菌抹發(fā)酵液時，黑脛病菌絲停止擴散，而向 沒有菌林發(fā)酵液的地方延伸，表明菌林發(fā)酵液對黑脛病菌有抑制作用。本發(fā)明的防治煙草黑脛病的菌林是淡紫擬青霉ZY-19-2 (Pacilomyces lilacinus ZY-19-2),保藏編號為CCTCCN0: M207196。本發(fā)明的防治煙草黑脛病的菌劑是采用淡紫擬青霉CCTCCN0: M207196為原 菌種通過發(fā)酵工藝而制成，最佳發(fā)酵條件如下以0. 8~2. 0%膠體幾丁質(zhì)為碳 源，發(fā)酵液初始pH值為5.5-7.0，以0.8~1. 5%蛋白胨為氮源，0.05%~0.2% 吐溫80作為表面活性劑，發(fā)酵時間為48~72 h，接種量為0.8-2 °/。，搖床轉(zhuǎn) 速為100 - 180 r/min 。本發(fā)明的制備該菌劑的發(fā)酵工藝按三角搖瓶—種子罐—發(fā)酵罐的三級工藝 培養(yǎng)。本發(fā)明的菌劑可為液體制劑，即通過三級發(fā)酵工藝培養(yǎng)后的培養(yǎng)液直接作 為液體殺菌劑使用，制成的培養(yǎng)液中的孢子量約為1. 0x 1()5個/ml。本發(fā)明的菌劑也可為固體制劑，即用硅藻土和草木灰吸附已制成的培養(yǎng)液， 自然晾干后制成孢子量為2xi()S個/g固體殺菌制劑。本發(fā)明的液體菌劑的使用方法如下用量為50 L/畝，煙草植抹大田移栽 后10 ~ l5天第一次施藥，移栽后25 ~ 30天第二次施藥，移栽后40 ~ 45天第三 次施藥，移栽后55~60天第四次施藥。此外，還可以采用其它后處理工藝，例如將液體菌劑濃縮后復配，或?qū)⑵浒l(fā)酵過濾，將固、液分別處理包裝，待混合后施用或者用固體載體(硅藻土+ 草炭)作液體菌劑的吸附劑，晾干后施用。與現(xiàn)有的技術(shù)化學農(nóng)藥或類似生物農(nóng)藥相比，本發(fā)明用于防治煙草黑脛病的菌抹及其制劑具有如下優(yōu)點1.菌林淡紫擬青霉生長快，產(chǎn)幾丁質(zhì)酶能力強 等優(yōu)點；2.能分解蠅蛆的體壁，可以在蠅蛆體壁或體壁降解產(chǎn)物和水配制的培 養(yǎng)基上生長；3.可定殖在煙草植林的根際，抵抗煙草黑脛病的侵染；4.能有效 地克服土壤的抑菌作用，可以長期保持淡紫擬青霉的抑制煙草黑脛病的能力。
附圖菌林ZY-19-2對黑脛病的抑菌效果。
具體實施方式
本發(fā)明下面通過具體實施例來進一步說明，但并不是限制本發(fā)明。 實施例1液體制劑采用試管培養(yǎng)的淡紫擬青霉(ZY-19-2)原種，再按三角搖瓶—種子罐—發(fā) 酵罐的三級工藝培養(yǎng)。在50L發(fā)酵罐中，裝入30L的2%膠態(tài)幾丁質(zhì)液體培養(yǎng)基， 發(fā)酵液初始pH值為6. 5,以1. 0%蛋白胨為氮源，0. 1%吐溫80作為表面活性劑， 經(jīng)0. 05mpa滅菌30分鐘，冷卻至室溫后，接入2. OL菌4朱ZY-19-2液體種子， 培養(yǎng)溫度28。C，通氣量為1. 5M7h,攪拌速度為120r/min,經(jīng)48小時后，培養(yǎng) 液可以直接作為液體殺菌劑，供大田生產(chǎn)使用。淡紫擬青霉(ZY-19-2)液體殺菌劑使用方法用量為50L/畝，在裏縣'汾 陳鄉(xiāng)，對曾經(jīng)有黑脛病發(fā)生的大田期煙草植4朱施藥四次第一次，大田移栽15 天，噴淋煙草幼苗的根和莖；第二次，大田移栽后30天，噴淋煙草植抹的根和 莖；第三次，大田移栽后"天，噴淋煙草植株的根、莖和發(fā)病煙葉的基部；第 四次，大田移栽后60天，噴淋煙草植林的根、莖和發(fā)病煙葉的基部。實施例2固體制劑用硅藻土和草炭配制成發(fā)酵菌液的載體吸附劑。載體吸附劑的制備方法是,按每升培養(yǎng)液用lkg的硅藻土 ( 60% )和草炭(40% )作為載體吸附，自然晾干 后成為孢子量為2 x 1()8個/g固體殺菌制劑，再包裝成為產(chǎn)品，供大田生產(chǎn)使用。淡紫擬青霉(ZY-19-2)固體殺菌劑使用方法1、于煙草幼苗移栽前，將 固體殺菌劑撒施在種植穴內(nèi)，每穴施固體殺菌劑15g，然后將煙草幼苗移栽于 穴內(nèi)定植。2、在煙草幼苗移栽黑脛病發(fā)生前，將固體殺菌劑(15g)撒播在煙 草莖根處的土壤表面，澆300mL清水。結(jié)果表明，在使用本發(fā)明制劑的河南省裏城縣3畝煙田中，黑脛病癥狀明 顯減輕，較對照減少50%，煙葉平均畝產(chǎn)要比未使用本發(fā)明制劑的平均畝產(chǎn)高 出15%左右。
權(quán)利要求
1、一種防治煙草黑脛病的菌株，其特征在于它是淡紫擬青霉，保藏編號為CCTCCNOM207196。
2.一種利用權(quán)利要求1所述的菌林制備防治煙草黑脛病的菌劑，其特征 在于它是釆用淡紫擬青霉CCTCCNO:M207196為原菌種通過發(fā)酵工藝而制成， 發(fā)酵條件如下以0. 8 ~ 2. 0 %膠體幾丁質(zhì)為碳源，發(fā)酵液初始pH值為5. 5 ~ 7. 0， 以0. 8 ~ 1. 5°/。蛋白胨為氮源，0. 05% ~ 0. 2V土溫80作為表面活性劑，發(fā)酵時間 為48 ~ 72 h，接種量為0. 8 ~ 2 %，搖床轉(zhuǎn)速為100 ~ 180 r/min 。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的防治煙草黑脛病的菌劑，其特征在于制備該 菌劑的發(fā)酵工藝按三角搖瓶—種子罐—發(fā)酵罐的三級工藝培養(yǎng)。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的防治煙草黑脛病的菌劑，其特征在于該菌劑 為液體制劑。
5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的防治煙草黑脛病的菌劑，其特征在于該菌劑 為固體制劑。
全文摘要
一種防治煙草黑脛病的菌株及其菌劑，其特征是采用淡紫擬青霉ZY-19-2，保藏編號CCTCCNOM207196為原菌種通過發(fā)酵工藝而制成菌劑，發(fā)酵條件如下以0.8～2.0％膠體幾丁質(zhì)為碳源，發(fā)酵液初始pH值為5.5～7.0，以0.8～1.5％蛋白胨為氮源，0.1％吐溫80作為表面活性劑，發(fā)酵時間為48～72h，接種量為0.8～2％，搖床轉(zhuǎn)速為100～180r/min。本發(fā)明具有如下優(yōu)點1.菌株淡紫擬青霉生長快，產(chǎn)幾丁質(zhì)酶能力強；2.能分解蠅蛆的體壁，可在蠅蛆體壁或體壁降解產(chǎn)物和水配制的培養(yǎng)基上生長；3.可定殖在煙草植株的根際，抵抗煙草黑脛病的侵染；4.能有效地克服土壤的抑菌作用，長期保持抑制煙草黑脛病的能力。
文檔編號C12N1/14GK101220335SQ20071030008
公開日2008年7月16日 申請日期2007年12月28日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月28日
發(fā)明者周漢平, 奚家勤, 宋紀真, 尹啟生, 軍 楊, 王廣山, 蔡憲杰, 薛超群, 魏春陽 申請人:中國煙草總公司鄭州煙草研究院