專利名稱：：一種酵母三雜交檢測方法及其在藻毒素檢測中的應用的制作方法一種酵母三雜交檢測方法及其在藻毒素檢測中的應用一、
技術領域：
-本發明屬于生物化學與分子生物學
技術領域：
，具體涉及小分子化合物的酵母三雜交檢測系統，以及該檢測方法在藻毒素檢測的應用。二、
背景技術：
-酵母雙雜交系統是Fields和Song于1989首先描述的在細胞內分析蛋白與蛋白相互作用的一種新穎的系統，近年來，這種研究蛋白質間相互作用的實驗方法已得到愈來愈廣泛的應用。它是一種直接在細胞內檢測蛋白質相互作用的分子遺傳學方法，靈敏度很高，比以往的各種生化手段具有更為明顯的優勢。利用這一系統已經證實和篩選了許多具有相互作用的蛋白質，并逐漸推廣到了細胞凋亡、腫瘤基因表達等多個研究領域，受到越來越多的重視。酵母雙雜交系統有以下幾個特點(1)在真核細胞內檢測蛋白質間的相互作用，具有真實的蛋白質作用環境；(2)在基因水平上操作，無需提純待研究蛋白質，也無需相應的抗體；(3)可檢測蛋白質間較微弱的相互作用及短暫作用；(4)可進行文庫篩選，從而獲得與己知蛋白作用的未知蛋白的基因；(5)可用于尋找蛋白質相互作用的結構域；(6)可檢測基因突變對其編蛋白質功能的影響。微囊藻毒素是由淡水微囊藻產生的次生代謝物，結構為環狀七肽，分子量約1000Da，一般組成為環(D-丙氨酸-L-X-赤-P-甲基-D-異天冬氨酸-L-Z-Adda-D-異谷氨酸-N-甲基脫氫丙氮酸)，其中Adda為一種特殊氨基酸，結構為3-氨基-9-甲氧基-2，6，8-三甲基-10-苯基-4，6二烯酸。藻毒素對生物機體具有多種毒理作用，是一類較強的腫瘤促進劑，可誘發大面積肝損傷甚至肝腫瘤，并產生多臟器損害，國外資料已連續報導了多起因MCs污染而導致的人群、家畜、魚類患病甚至死亡的事件，國內流行病學調查也發現MCs是導致某些地區人群原發性肝癌比率居高不下的主要原因之一。2007年春季在無錫地區太湖大規模發生的藍藻暴發使得微囊藻毒素的快速、簡便的檢測成為當務之目前檢測MCs的方法主要可歸納為三種，即生物學、生物化學和分析化學檢測法。生物學測試法主要采用毒理學檢測的方法，用動物急性毒性試驗來間接推算MCs的毒性；生物化學檢測法主要有酶聯免疫吸附測定(Enzyme-linkedimmunoaLdsorbervtSLSsay,EUSA)禾口蛋白磷酸酶抑制法(Proteinphosphoataseinhibitionassay,PPIA);化學檢測技術主要包括HPLC、TLC、氣相層析(GC)、液質聯用分析(LC/MS)、毛細管電泳(CE)、膠態電動學色譜(MEKC)、反相液相色譜一電離子化質譜聯用技術(RPHPLC/EIMS)等方法。生物學方法和生物化學方法雖然可以檢測MCs，但是不能做到準確定量、而且價格較高或費時較長，例如商業化的ELISA檢測試劑盒價格較高，不能在環境監測中得到普及使用；化學方法的特點是精確客觀，但大多必須配備大型精密分析儀器，因此不能用于樣品的實時、原位分析。我們在前期研究中應用噬菌體表面展示肽庫技術從隨機12和7肽庫中篩選獲得若干與藻毒素有相互作用的多肽，成功獲得了能與MC-LR相互識別的噬菌體克隆，通過酶聯免疫吸附分析(ELISA)和免疫沉淀(IP)的檢測，證明這些小肽片段對藻毒素有特異性的結合(ZhaoSW,ShenPP，ZhouY,WeiY,XinXB，HuaZC，EnvironmentInternational31(4):535-41，2005)。我們從12肽庫篩選獲得9個小肽，這9個多肽都具有一WHWX0-2W—的保守序列，這些小肽經ELISA分析與藻毒素具有較高的親和力。從7肽庫篩選獲得8個短肽，這些短肽經ELISA分析與藻毒素具有較高的親和力，這些短肽有的具有一QP—保守序列、有的沒有任何保守序列。
發明內容為克服已有技術的缺點，本發明有如下二個目的1。將酵母雙雜交系統只能用于細胞內分析蛋白與蛋白相互作用，創新和改進成為能夠檢測短肽和小分子化合物相互作用的酵母三雜交檢測體系；2。提供一種簡便易行、成本低廉的藻毒素酵母檢測系統，用于藻毒素的檢測。為達到上述目的，本發明的技術方案是將兩個不同序列的、能夠與小分子化合物相互作用的短肽(短肽l、短肽2)分別構建進入酵母雙雜交載體，將兩個肽段的編碼基因分別融合在含有結合結構域(BD)編碼基因和激活結構域(AD)編碼基因的表達載體中，然后共同轉化酵母雙雜交菌株，構建成為能夠檢測小分子化合物的酵母三雜交檢測系統。在這個能夠檢測小分子化合物的酵母三雜交檢測系統中，當培養基中存在被檢測的小分子化合物時，就形成了GAL4-BD-短肽1…小分子化合物…短肽2-GAL4-AD的復合物，該復合物的形成將啟動下游g-Gal基因的表達，從而導致e-Gal底物的顯色反應，達到檢測小分子化合物的目的。在該酵母三雜交檢測系統中，短肽l、短肽2的序列可以是直接來源于已知的小分子化合物的親和肽段、也可以是從與小分子化合物相互作用蛋白質上的直接與小分子化合物發生相互作用的部分肽段、也可以是利用肽庫篩選技術從肽庫中篩選獲得的小分子化合物親和短肽；短肽l、短肽2應該分別作用于小分子化合物的不同部位，短肽l、短肽2在小分子化合物上作用位點應該互不重疊。短肽l、短肽2長度為2-60氨基酸殘基。進一步地，利用上述小分子化合物的酵母三雜交檢測系統能夠簡便易行、成本低廉地用于小分子化合物的檢測。進一步地，釆用從不同長度肽庫中篩選獲得的、具有不同保守序列的兩個藻毒素親和短肽構建進入酵母雙雜交系統，即將不同肽段的編碼基因分別融合在含有結合結構域編碼基因和激活結構域編碼基因的表達載體中，共轉化酵母菌株AH109，獲得表達有兩個不同的藻毒素親和短肽的酵母雙雜交系統，在培養基中存在藻毒素的情況下，通過測定P-半乳糖苷酶活性來反映下游報告基因半乳糖苷酶的表達情況。進一步地，利用藻毒素親和短肽構建的、基于酵母雙雜交的藻毒素酵母檢測系統可以應用于藻毒素檢測方面。進一步地，一種藻毒素酵母三雜交檢測方法，其特征是能夠形成半乳糖苷酶基因轉錄因子GAL4的DNA結合區(GAL4-BD)-短肽1…藻毒素…短肽2-半乳糖苷酶轉錄因子GAL4的DNA激活區(GAL4-AD)的復合物，啟動下游P-半乳糖苷酶基因的表達，從而導致P-Gal底物的顯色反應，其中，短肽1的序列為WHWSLWRPPYTL、短肽2的序列為QPHPYYM，…代表藻毒素與短肽1、短肽2之間的相互作用。進一步地，一種藻毒素酵母三雜交檢測方法，其特征是能夠形成半乳糖苷酶基因轉錄因子GAL4的DNA結合區(GAL4-BD)-短肽1…藻毒素…短肽2-半乳糖苷酶轉錄因子GAL4的DNA激活區(GAL4-AD)的復合物，啟動下游e-半乳糖苷酶基因的表達，從而導致P-Gal底物的顯色反應，其中，短肽1的序列為WHWSLWRPPYTL、短肽2的序列為SEMRLAL，…代表藻毒素與短肽1、短肽2之間的相互作用。上述利用藻毒素親和短肽構建的、基于酵母雙雜交的藻毒素酵母檢測系統可以通過20分鐘-2小時的顯色反應反映培養基里面是否含有藻毒素，利用此方法可以簡便易行、成本低廉地用于藻毒素的檢測。同已有的酵母雙雜交系統相比，本發明具有鮮明的特色和創新之處(1)系統構成的創新己有的酵母雙雜交系統是用于蛋白質之間相互作用的分析、篩選和鑒定，其原理是通過表達在同一個酵母細胞中兩個表達質粒上的、分別與GAL4的AD和BD結構域融合表達的兩個蛋白質之間的相互作用，將原來單獨表達的GAL4的AD和BD結構域通過兩個蛋白質間的結合而靠近，進而啟動下游報告基因e-Gal的表達；而在本發明中，本發明首次將兩個序列不同的、能夠與同一個小分子化合物相互作用的短肽分別與GAL4的AD和BD結構域融合表達，而且這兩個短肽之間并不能發生相互作用。這兩個短肽通過與共同識別的小分子化合物共同發生相互作用時，導致GAL4的AD和BD因為融合的這兩種短肽通過與小分子化合物(如藻毒素)的結合而靠近，進而啟動下游報告基因e-Gal的表達。因此，本發明的特色創新之處在于1。已有的酵母雙雜交系統使用的是相互作用的兩個蛋白質，而本發明中使用的是并不發明相互作用的兩個短肽；2。已有的酵母雙雜交系統依據的是相互作用的兩個蛋白質，而本發明中的酵母三雜交檢測系統依據的是短肽1…小分子化合物…短肽2之間的三元相互作用。(2)檢測研究對象的創新已有的酵母雙雜交系統是用于蛋白質之間的相互作用分析、篩選和鑒定；而本發明的酵母三雜交檢測系統的檢測是小分子化合物。(3)系統用途的創新已有的酵母雙雜交系統是用于蛋白質之間相互作用的分析、篩選和鑒定；從來沒有報道或發明將酵母雙雜交系統用于培養基環境中小分子化合物的檢測。與已有的藻毒素檢測方法相比，本發明亦有著鮮明的特色和創新之處(1)本發明首次發明了一種基于生物菌株的藻毒素的檢測工具。(2)本發明方法具有簡便易行、成本低廉的特點。具體實施例方式實施例1:(1)藻毒素酵母三雜交檢測菌株1的構建從前期實驗結果(ZhaoSW，ShenPP，ZhouY,WeiY,XinXB，HuaZC，EnvironmentInternational31(4):535-41，2005)中，根據親和力高低挑選了線性隨機12肽庫中的3號肽段(W冊SLWRPPYTL)、線性隨機7肽庫中的7號肽段(QPHPYYM)，根據酵母偏好密碼子以及克隆時限制內切酶位點需要，分別合成了6條引物(引物1:5，-GATCCTTTGGCACTGGTCCTTGTGGAGACCACCATACACTTTGTAAC-3，;引物2:5，-TCGAGTTACAAAGTGTATGGTGGTCTCCACAAGGACCAGTGCCAAAG-3，；引物3:5，-AATTCCAACCACACCCATACTACATGTAAG-3，；引物4:5，—GATCCTTACATGTAGTATGGGTGTGGTTGG—3')。引物l和引物2配對退火就可以得到兩端帶有BamHI和XhoI粘性末端的、可表達3號肽段的雙鏈DNA;引物3和引物4配對退火就可以得到兩端帶有EcoRI和BamHI粘性末端的、可表達7號肽段的雙鏈DNA。將獲得的可表達3號肽段的雙鏈DNA片段與經過BamHI和XhoI酶切的pACT2載體(美國CL0NTECH公司)連接得到pACT2-3質粒，而可表達7號肽段的雙鏈DNA片段和經過EcoRI和BamHI酶切的pGBKT7載體(美國CLONTECH公司)連接，得到pGBKT7-7質粒。pGBKT7酵母表達載體含有表達半乳糖苷酶基因轉錄因子GAL4的DNA結合區，pACT2酵母表達載體含有表達半乳糖苷酶轉錄因子GAL4的DNA激活區。將得到的兩個質粒分別轉化大腸桿菌后，取菌液作菌液PCR(PCR引物pACT2-3:引物1:5，-GGCACACTACTCTCTAATGAG-3，，引物2:5，-CGAGTTACAAAGTGTATGGTGG-3，，退火溫度61°C;pGBKT7-7:引物3:5，-GCTATACCAAGCATACAATCAACTCCAAGC-3'，引物4:5，-GATCCTTACATGTAGTATGGGTGTGGTTGG-3，，退火溫度67°C)初步驗證陽性克隆，然后將PCR之后的陽性克隆進行DNA序列測定分析加以進一步驗證，測序結果顯示編碼兩個個不同多肽的重組子DNA序列正確，與設計的DM序列完全一致。。在驗證插入片段正確之后，將pACT2-3質粒和pGBKT7-7質粒分別共轉AH109酵母，通過SD/-Trp/-Leu營養缺陷平板篩選，從共轉化獲得的陽性重組酵母菌中挑選克隆，分別接種在沒有藻毒素或者含有一定濃度藻毒素的YPDA培養基中培養，然后利用0NPG(鄰硝基苯-e-D-半乳吡喃糖苷)法測量e-Gal的活性。以上酵母的相關實驗以及培養基和溶液的配制都是參照美國CL0NTECH公司的MATCHMAKERTwo-HybridSystem3的手冊進行。(2)藻毒素酵母檢測菌株在藻毒素檢測中的應用挑選酵母菌株(pACT2-3\pGBKT7-7)，測定菌株在含有藻毒素和不含藻毒素的培養基中e-Gal的活性水平及變化情況。為了排除其它因素影響下游基因的啟動，我們在實驗中加入了共同轉化了pGBKT7和pACT2空載質粒的AH109酵母菌作為對照，同樣在沒有和加有藻毒素的YPDA培養基中培養，然后測量并計算e-Gal值。Gal(單位)-1000XOD420/(tXVXOD600)，其中t-顯色時間(min)，V=0.lmLX稀釋倍數(本實驗中均為5)，0D600為1raL酵母培養液在600nm的光密度值，0D420為顯色后的lmL液體在420nm的光密度值。1個P-Gal單位定義為每分鐘每細胞可水解llimolONPG(鄰硝基苯e-D-半乳糖苷)產生鄰-苯基酚和D-半乳糖的量。我們用藻毒素酵母檢測菌株在含有藻毒素和不含藻毒素的培養基中3-Gal值的變化情況來反映藻毒素的存在。實施例2:(1)藻毒素酵母三雜交檢測菌株2的構建從前期實驗結果(ZhaoSW,ShenPP,ZhouY,WeiY,XinXB,HuaZC，EnvironmentInternational31(4):535-41，2005)中，根據親和力高低挑選了線性隨機12肽庫中的3號肽段(W冊SLWRPPYTL)、線性隨機7肽庫中的9號肽段(SEMRLAL),根據酵母偏好密碼子以及克隆時限制內切酶位點需要，分別合成了6條引物(引物1:5'-GATCCTTTGGCACTGGTCCTTGTGGAGACCACCATACACTTTGTAAC-3';引物2:5，-TCGAGTTACAAAGTGTATGGTGGTCTCCACAAGGACCAGTGCCAAAG-3，;引物5:5，-AATTCTCCGAGATGAGATTGGCTTTGTAAG-3，;引物6:5，-GATCCTTACAAAGCCAATCTCATCTCGGAG_3，)。引物l和引物2配對退火就可以得到兩端帶有BamHI和XhoI粘性末端的、可表達3號肽段的雙鏈DNA;引物5和引物6配對退火就可以得到兩端帶有EcoRI和BamHI粘性末端的、可表達9號肽段的雙鏈DNA。將獲得的可表達3號肽段的雙鏈DNA片段與經過BamHI和XhoI酶切的pACT2載體(美國CLONTECH公司)連接得到pACT2-3質粒，而可表達9號肽段的雙鏈DNA片段分別和經過EcoRI和BamHI酶切的pGBKT7載體(美國CLONTECH公司)連接，得到pGBKT7-9質粒。將得到的兩個質粒分別轉化大腸桿菌后，取菌液作菌液PCR(PCR引物pACT2-3:引物1:5，-GGCACACTACTCTCTAATGAG-3，，引物2:5，-CGAGTTACAAAGTGTATGGTGG-3，，退火溫度61°C;pGBKT7-9:引物5:5，-GCTATACCAAGCATACAATCAACTCCAAGC-3'，引物6:5'-GATCCTTACAAAGCCAATCTCATCTCGGAG-3'，退火溫度67°C)初步驗證陽性克隆，然后將PCR之后的陽性克隆進行DNA序列測定分析加以進一步驗證，測序結果顯示編碼兩個不同多肽的重組子DNA序列正確，與設計的DNA序列完全一致。。在驗證插入片段正確之后，將ACT2-3質粒和pGBKT7-9質粒分別共轉AH109酵母，通過SD/-Trp/-Leu營養缺陷平板篩選，從共轉化獲得的陽性重組酵母菌中挑選克隆，分別接種在沒有藻毒素或者含有一定濃度藻毒素的YPDA培養基中培養，然后利用0NPG(鄰硝基苯-P-D-半乳吡喃糖苷)法測量P-Gal的活性。以上酵母的相關實驗以及培養基和溶液的配制都是參照美國CLONTECH公司的MATCHMAKERTwo-HybridSystem3的手冊進行。(2)藻毒素酵母檢測菌株在藻毒素檢測中的應用挑選酵母菌株(pACT2-3\pGBKT7-9)，測定菌株在含有藻毒素和不含藻毒素的培養基中e-Gal的活性水平及變化情況。為了排除其它因素影響下游基因的啟動，我們在實驗中加入了共同轉化了PGBKT7和pACT2空載質粒的AH109酵母菌作為對照，同樣在沒有和加有藻毒素的YPDA培養基中培養，然后測量并計算e-Gal值。0-Gal(單位)二1000X0D420/(tXVX0D600)，其中t二顯色時間(min)，V=0.lmLX稀釋倍數(本實驗中均為5)，0D600為1raL酵母培養液在600nm的光密度值，OD420為顯色后的lmL液體在420nm的光密度值。1個P-Gal單位定義為每分鐘每細胞可水解lymolONPG(鄰硝基苯P-D-半乳糖苷)產生鄰-苯基酚和D-半乳糖的量。我們用藻毒素酵母檢測菌株在含有藻毒素和不含藻毒素的培養基中0-Gal值的變化情況來反映藻毒素的存在。表i:鄰硝基苯-e-d-半乳吡喃糖苷法測量e-半乳糖苷酶活性值。<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>實驗結果表明(如表1所示)藻毒素的存在對重組酵母菌的生長基本沒有影響；當有藻毒素存在時，空載酵母菌的P-Gal值幾乎沒有變化；但是當含有兩個質粒時，Gal值發生了明顯的變化，增加幅度在10-20%。例如，在共轉了pACT2-3和pGBKT7-7質粒的酵母菌在加有500ng/mL藻毒素的培養基中，加入ONTG底物96分鐘后，e-Gal值相對于在沒有加入藻毒素培養基中培養的增大了21.36%，而在共轉了pACT2-3和pGBKT7-9質粒的酵母菌在加有500ng/mL藻毒素的培養基中培養的時候，^-Gal值相對于在沒有加入藻毒素培養基中培養的增大了.12.30%。這說明轉進酵母菌中的兩個質粒編碼的肽段確實通過藻毒素為橋梁，形成了復合物，從而啟動了下游e-Gal基因的表達，導致了e-Gal值的升高。根據酵母雙雜交技術的常規操作，我們選定了加入ONPG后84至136分鐘內測定e-Gal值，并對3+7(共轉了pACT2-3和pGBKT7-7質粒的酵母菌)、3+9(共轉了pACT2-3和pGBKT7-9質粒的酵母菌)兩個酵母菌e-Gal表達的穩定性進行了分析，結果顯示酵母菌3+9在測定時間范圍內表現出很好的P-Gal表達穩定性，可以用作進一步的研究和分析工程菌。本發明探索建立一種全新的、利用酵母三雜交技術進行包括藻毒素在內的小分子化合物的檢測方法。本發明首次將兩個序列不同的、能夠與同一個小分子化合物相互作用的短肽分別與GAL4的AD和BD結構域融合表達，而且這兩個短肽之間并不能發生相互作用。這兩個短肽通過與共同識別的小分子化合物共同發生相互作用時，導致GAL4的AD和BD因為融合的這兩種短肽通過與小分子化合物的結合而靠近，進而啟動下游報告基因P-Gal的表達。因此，本發明與常用的酵母雙雜交系統不同之處在于已有的酵母雙雜交系統使用的是相互作用的兩個蛋白質，而本發明中使用的是并不發明相互作用的兩個短肽；已有的酵母雙雜交系統依據的是相互作用的兩個蛋白質，而本發明中的酵母三雜交檢測系統依據的是短肽1…小分子化合物…短肽2之間的三元相互作用。作為應用實例，本發明中我們在前期研究中利用噬菌體隨機肽庫技術，以MC-LR為靶分子，分別從噬菌體表面展示線性隨機12肽庫和7肽庫中篩選獲得了能與MC-LR特異性結合的短肽片段。結果顯示，從12肽庫篩選獲得的短肽核心保守序列(一WHWX0-2W—)明顯不同于從7肽庫中篩選獲得的短肽的核心保守序列(一QP—)或沒有核心保守序列的多肽序列(SEMRLAL)。據此，我們認為這兩類具有不同長度的藻毒素親和短肽(12肽、7肽)可能分別與藻毒素的不同部位或者活性基團發生相互作用，那么就可以將這兩種短肽的編碼DNA序列分別克隆到含有AD或BD結構域的酵母雙雜交載體中，將這兩個質粒共同轉化AH109酵母菌，然后分別在沒有藻毒素或者加入了藻毒素的培養基中培養。因為這兩種短肽與藻毒素的結合位點不同，那么在加入藻毒素的培養基中培養的酵母菌中，GAL4的AD和BD因為融合的兩種短肽通過與藻毒素的結合而靠近，進而啟動下游報告基因0-Gal的表達，因此可以通過測得的P-Gal酶活性高低來反映培養基中是否存在藻毒素。我們的實驗結果表明我們確實達到了預期的設計目標。與沒有藻毒素存在的培養情況相比，在含有500ng/mL藻毒素的培養基中，只含有AD或BD結構域的酵母雙雜交載體pACT2和pGBKT7的酵母菌的P-Gal基本沒有任何改變；但是含有兩種不同的藻毒素親和短肽質粒的酵母菌的0-Gal值在藻毒素存在情況下發生了明顯的變化，增加幅度在10-20%。其中克隆3+9在測定時間范圍內表現出很好的P-Gal表達穩定性，可以用作檢測工程菌用于檢測藻毒素在環境中的存在。權利要求1.一種酵母三雜交體系，其特征是能夠形成半乳糖苷酶基因轉錄因子GAL4的DNA結合區(GAL4-BD)-短肽1…小分子化合物…短肽2-半乳糖苷酶轉錄因子GAL4的DNA激活區(GAL4-AD)的復合物，啟動下游β-半乳糖苷酶基因的表達，從而導致β-Gal底物的顯色反應，其中，短肽1、短肽2分別為能夠與同一個小分子化合物相互作用的、不同氨基酸序列的、長度為2-60個氨基酸殘基的短肽，…代表小分子化合物與短肽1、短肽2之間的相互作用。2.權利要求l所述的一種酵母三雜交體系的構建，其特征是利用基因工程技術構建兩種分別表達GAL4-BD-短肽l、短肽2-GAL4-AD的重組質粒，將這兩種質粒共同轉化酵母菌，從而獲得酵母三雜交菌株。3.—種權利要求l所述的酵母三雜交體系檢測小分子化合物的檢測方法，其特征是將酵母三雜交菌株在含有小分子化合物的培養基中培養，然后加入P-半乳糖苷酶的顯色底物反應20分鐘-2小時后，測定e-Gal值，用與不存在小分子化合物時相比13-Gal值的變化反映小分子化合物的存在。4.一種權利要求i所述的酵母三雜交體系構建的藻毒素檢測方法，其特征是能夠形成半乳搪苷酶基因轉錄因子GAL4的DNA結合區(GAL4-BD)-短肽1…藻毒素…短肽2-半乳糖苷酶轉錄因子GAL4的DNA激活區(GAL4-AD)的復合物，啟動下游P-半乳糖苷酶基因的表達，從而導致e-Gal底物的顯色反應，其中，短肽l、短肽2分別為能夠與藻毒素相互作用的、不同氨基酸序列的、長度為2-60個氨基酸殘基的短肽，…代表藻毒素與短肽1、短肽2之間的相互作用。5.權利要求l所述的一種酵母三雜交體系在小分子化合物及污染物檢測中的應用。6.權利要求4所述的一種藻毒素檢測方法在藻毒素檢測中的應用。全文摘要本發明屬于生物化學與分子生物學
技術領域：
，具體涉及一種新的酵母三雜交體系，該體系通過形成GAL4-BD-短肽1…小分子化合物…短肽2-GAL4-AD的復合物，啟動下游β-Gal基因的表達，從而導致β-Gal底物的顯色反應，能夠用于小分子化合物的檢測；本發明還涉及一種利用藻毒素親和短肽構建的藻毒素酵母檢測系統。該方法簡便易行、成本低廉，可用于包括藻毒素在內的小分子化合物的檢測。文檔編號C12Q1/68GK101131363SQ20071013279公開日2008年2月27日申請日期2007年9月30日優先權日2007年9月30日發明者華子春,沈萍萍,曉潘申請人:南京大學