HIV－Env基因DNA變構重組包膜蛋白抗原免疫應答抗HIV實驗與方法

專利名稱：HIV－Env基因DNA變構重組包膜蛋白抗原免疫應答抗HIV實驗與方法
技術領域：
本發明涉及了一種HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白抗原免疫應答抗HIV實驗與方法。它涉及生命科學領域、及醫藥領域。揭示HIV包膜蛋白gp120或gp160抗原-疫苗，是與CD4+細胞CD4受體結合、誘導免疫耐受CD4受體的異種配體抗原弱免疫原，誘導HIV感染宿主免疫耐受體液免疫反應遲緩產生保護性抗體、滯后于病毒變異，不能誘導HIV感染宿主免疫反應，有效清除最初感染原病毒復制速度快、高變異性、病毒序列多樣性高的野生病毒多克隆株群。能夠研制不觸發人免疫耐受的，HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白抗原HIV治療疫苗、HIV預防疫苗，提供足夠充分的直接動物模型實驗科學依據、直接臨床人體試驗科學依據。提供可實施的抗HIV細胞模型、嚙齒類動物模型、非人類靈長類動物模型與臨床人體試驗科學研究方案。
背景技術：
現代HIV科學研究存在三大難點1.HIV復制速度快、高變異性、病毒序列多樣性；沒有找到——不能在HIV感染人體中找到，可以誘導最初HIV感染人群的免疫反應，有效清除最初感染原病毒復制速度快、高變異性、病毒序列多樣性高的野生病毒多克隆株群的，各個亞型HIV保護性免疫原——強免疫原、交叉亞型HIV保護性免疫原——強免疫原。2.HIV感染復制產生包膜蛋白gp120或gp160抗原，是與CD4+細胞CD4受體結合、誘導免疫耐受CD4受體的異種配體抗原弱免疫原，誘導HIV感染宿主免疫耐受體液免疫反應遲緩產生保護性抗體、滯后于病毒變異，不能誘導HIV感染宿主免疫反應，有效清除最初感染原病毒復制速度快、高變異性、病毒序列多樣性高的野生病毒多克隆株群。3.沒有可以在較短時期內評估驗證候選HIV疫苗有效保護率的，HIV疫苗臨床試驗的替代終點；而不具有從進入臨床研究的上百種候選HIV疫苗中，評估篩選出1種有實際應用價值的HIV疫苗的能力。不能研制出可能會有效預防HIV感染人類群體的HIV疫苗。是客觀存在的必然科學現實；不可被疏漏，亟待解決的3個最重要現代HIV科學研究難點問題。
基于HIV疫苗產生安全性考慮、HIV疫苗人體應用安全性考慮，現代HIV科學研究，只能選擇應用有安全保證的HIV部分免疫原，抗原決定簇少、免疫原性差的某種HIV保護性免疫原，研制生產可以被應用于人體的HIV保護性免疫原合成疫苗。HIV保護性免疫原擁有的抗原決定簇少，是現代HIV科學研究，難以應用它研制出具有較高保護率的合成HIV疫苗的最重要因素。HIV感染——艾滋病AIDS是不可自愈的人類疾病；HIV與人類的其它的逆轉錄病毒復制速度快、高變異性、病毒序列多樣性高的，如流感病毒、艾博拉病毒……丙肝病毒等高致病性逆轉錄病毒感染不同，所有最初HIV感染者急性期血漿病毒血癥，維持數周每天大量復制病毒體降解產生的，各種HIV免疫原，不能誘導HIV感染宿主免疫反應，有效清除最初感染原病毒復制速度快、高變異性、病毒序列多樣性高的野生病毒多克隆株群，HIV感染宿主終生慢性持續感染HIV自然疾病進程不可逆轉，已有六千多萬HIV感染發病者人群，沒有自愈的HIV病例、沒有可以被治愈的HIV病例；有一個恰當的科學推論在HIV感染人體中存在的任何一種HIV免疫原、HIV免疫原誘導人體免疫反應機制，都難以被現代HIV科學研究應用作、研制出具有較高保護率的合成HIV疫苗。現代HIV科學研究研制合成HIV疫苗在HIV感染人體中篩選的，任何一種HIV免疫原、HIV免疫原誘導人體免疫反應機制，都曾在每一個最初HIV感染者急性期血漿病毒血癥發生時，維持數周每天大量產生、存在過，不能誘導HIV感染者免疫反應，有效清除體內發生變異的野生HIV病毒多克隆株群；科學推論擁有在六千多萬HIV感染發病者人群的自然疾病進程中客觀存在的，不容置疑的科學依據。是被現代HIV科學研究疏漏的，極重要的科學研究盲區；至今沒有取得解決根本問題的科學突破的重要因素。
HIV感染復制產生包膜蛋白gp120或gp160抗原，是與CD4+細胞CD4受體結合、誘導免疫耐受CD4受體的異種配體抗原弱免疫原，誘導HIV感染宿主免疫耐受體液免疫反應遲緩產生保護性抗體、滯后于病毒變異，不能首先產生針對gp120或gp160抗原的保護性中和抗體，阻斷gp120或gp160抗原與CD4+細胞CD4受體結合誘導的免疫耐受；使HIV能夠在感染宿主免疫反應，產生針對gp120或gp160抗原的保護性中和抗體前，還沒有被細胞免疫CTL有效抑制時、過度復制達到血漿病毒載量最大峰值，進一步誘導細胞免疫耐受-細胞免疫損傷；能夠比人類的其它的逆轉錄病毒感染宿主復制速度快、高變異性、病毒序列多樣性高的簡單免疫逃逸機制，更為有效對抗宿主免疫抑制壓力，逐漸損傷-摧毀HIV感染宿主免疫系統；因而沒有自愈的HIV病例、可以被治愈的HIV病例；是HIV逆轉錄病毒感染人體復制，導致艾滋病人群終生持續慢性感染性疾病的，另一個最主要發生因素。迄今現代HIV科學研究曾研制的，各種不同的HIV包膜蛋白gp120或gp160抗原疫苗臨床人體試驗，不能證實可以預防HIV感染人類，最重要的因素是，HIV包膜蛋白gp120或gp160抗原疫苗，是與CD4+細胞CD4受體結合、誘導免疫耐受CD4受體的異種配體抗原弱免疫原，不能誘導人免疫反應，有效清除最初感染原病毒復制速度快、高變異性、病毒序列多樣性高的野生病毒多克隆株群。最初HIV感染者急性期血漿病毒血癥，維持數周每天大量復制的病毒體降解產生的，包膜蛋白gp120或gp160抗原——與CD4+細胞CD4受體結合、誘導免疫耐受CD4受體的異種配體抗原數量可超過1011/d，最初HIV感染者急性期血漿毒載量達到最大峰值時，由大量復制的病毒體降解產生的，包膜蛋白gp120或gp160抗原——與CD4+細胞CD4受體結合、誘導免疫耐受CD4受體的異種配體抗原數量可超過1012/d，可以誘導與上述免疫抑制-免疫損傷相關的免疫耐受。已經有眾多各種不同的HIV包膜蛋白gp120或gp160抗原疫苗臨床人體試驗失敗。HIV包膜蛋白gp120或gp160抗原疫苗免疫接種臨床人體，表現體液免疫反應遲緩產生保護性抗體、HIV包膜蛋白gp120或gp160弱免疫原體液免疫反應。與最初HIV感染人體表現體液免疫反應遲緩產生保護性抗體、滯后于病毒變異，不能誘導人免疫反應首先產生針對gp120或gp160抗原的保護性中和抗體，弱免疫原體液免疫反應極為相似；可以為揭示HIV復制產生包膜蛋白gp120或gp160抗原，是與CD4+細胞CD4受體結合、誘導免疫耐受CD4受體的異種配體抗原弱免疫原，誘導HIV感染宿主免疫耐受體液免疫反應遲緩產生保護性抗體、滯后于病毒變異，不能誘導HIV感染宿主免疫反應，有效清除最初感染原病毒復制速度快、高變異性、病毒序列多樣性高的野生病毒多克隆株群；提供相關HIV疫苗臨床人體試驗科學依據。已有六千多萬HIV感染發病者人群，終生慢性持續感染HIV自然疾病進程不可逆轉，沒有自愈的HIV病例、沒有可以被治愈的HIV病例；能夠為此提供HIV感染人群免疫耐受自然疾病進程機制的，相關科學依據旁證。每一個HIV感染者終生慢性持續感染HIV自然疾病進程，體液免疫反應遲緩產生保護性抗體、滯后于病毒變異，始終不能清除體內發生變異的野生HIV病毒多克隆株群，有一個恰當的科學推論最初HIV感染復制產生某個重要HIV免疫原，誘導HIV感染宿主免疫耐受體液免疫反應遲緩產生保護性抗體、滯后于病毒變異；科學推論擁有在六千多萬HIV感染發病者人群的自然疾病進程中客觀存在的，不容置疑的科學依據。是被現代HIV科學研究疏漏的，極重要的科學研究盲區；至今沒有取得解決根本問題的科學突破的重要因素。
HIV保護性免疫原擁有的抗原決定簇少；現代HIV科學研究，應用任何一種HIV保護性免疫原研制合成HIV疫苗，都難以研制出具有實際應用價值的合成HIV疫苗。需要應用多種不同的、同亞型或不同亞型某一種或幾種HIV保護性免疫原、各個同位抗原決定簇結合表位氨基酸序列存在差異、同位抗原決定簇克隆特異型不同的HIV保護性免疫原，組合各種不同的混合HIV保護性免疫原；以增加混合HIV保護性免疫原各個同位抗原決定簇克隆特異型多樣性、不同位抗原決定簇克隆特異型多樣性，對抗最初HIV感染原病毒復制速度快、高變異性、病毒序列多樣性高的野生病毒多克隆株群，設計、研制各種候選混合HIV保護性免疫原疫苗。現代HIV疫苗科學研究，篩選HIV保護性免疫原各個同位抗原決定簇克隆特異型不同的，多種不同HIV保護性免疫原，設計、研制幾十種幾百種各種不同組合的候選混合HIV保護性免疫原疫苗；再從中篩選有效保護率高、具有實際應用價值的混合HIV保護性免疫原疫苗，科學研究復雜性、科學研究難度，超出現有HIV科學研究理論思維認知，無法預測存在未知的難以規避的巨大科學研究風險變數。已經實施過評估驗證3種候選HIV疫苗有效保護率的III期臨床人體試驗，向社會招募HIV感染陰性高危人群志愿者實施臨床人體試驗，未接種HIV疫苗的高危人群志愿者自然HIV感染發病率低。例如，2001年1月，Vaxgene公司的HIV包膜蛋白gp120抗原疫苗在北美進行的、共有5400名志愿者參加的III臨床人體試驗；2003年2月，對外公布北美地區試驗結果，其中接種疫苗人群自然HIV感染率為5.7％。實施評估驗證1種候選HIV疫苗有效保護率III/IV期臨床人體試驗，遠比想象的難III/IV期臨床人體試驗，分別需要在未接種HIV疫苗的高危人群志愿者中、發生1000個/5000個自然HIV感染病例，才有可能評估驗證這種候選HIV疫苗擁有的有效保護率；如果高危人群志愿者自然HIV感染發病率為5％，實施1種候選HIV疫苗III/IV期臨床人體試驗，實際至少需要向社會招募20000個/100000個注射疫苗、20000個/100000個不注射疫苗的HIV感染陰性高危人群志愿者；因為，候選HIV疫苗可能擁有的有效保護率低于30％，接受試驗的HIV感染陰性高危人群志愿者數量需要加倍；因為，在實施候選HIV疫苗臨床人體試驗所在區域，同時流行幾種不同主要亞型HIV病毒感染，因此接受試驗的HIV感染陰性高危人群志愿者數量還需要加幾倍，并且需要通過繁雜的生物檢測方法甄別自然HIV感染高危人群志愿者、是否是感染與候選HIV疫苗同亞型HIV病毒。因此，實施評估驗證1種候選HIV疫苗有效保護率III/IV期臨床人體試驗，實際至少需要向社會招募100萬個HIV感染陰性高危人群志愿者、募集上百億美元臨床人體試驗費用；由于實施完成III/IV期臨床人體試驗周期超過20年，試驗所在區域流行的幾種主要亞型HIV病毒可能會發生改變、或流行幾種發生重組的新亞型HIV病毒，使前期試驗結果與后期試驗結果不一致，最終可能會得不到具有客觀科學研究價值的臨床人體試驗結果。即便是現代HIV科學研究擁有足夠多的科學研究資源、科學研究資金、科學研究人員、科學研究時間，能夠向社會招募足夠其實施1種候選HIV疫苗III/IV期臨床人體試驗的，實際少需要100萬個HIV感染陰性高危人群志愿者；因為不能規避研制新型合成HIV疫苗，實施III/IV期臨床人體試驗存在未知的巨大科學研究風險變數，而不具有通過III/IV期臨床人體試驗，從可以進入臨床研究的上百種候選HIV疫苗中，評估篩選出1種有實際應用價值的HIV疫苗的能力。
綜上所述，現代HIV基礎科研究實驗生物學簡單科學認識思維、方法論、方法，存在明顯的缺陷與不足；禁錮束縛現代HIV科學研究，不能解決HIV感染——艾滋病AIDS問題！發明者認為現代HIV科學研究必須像實施人類基因組計劃那樣，建立最初HIV感染人群不同個體的各種不同源HIV病毒大貯存標本血漿、PBMC細胞庫采集貯存最初HIV感染人群不同個體的各種不同源HIV病毒大樣本血漿、PBMC細胞，揭示最初HIV感染人群不同各體的，各個亞型各種不同源野生HIV病毒多克隆株群的，HIV病毒基因-cDNA序列型；用最初HIV感染人群不同個體的各種不同源HIV病毒大貯存標本血漿、PBMC細胞庫，各種不同基因序列型同位基因HIV免疫原-基因重組HIV免疫原，免疫無菌GF小鼠，獲取各種不同基因序列型同位基因HIV免疫原的、各個同位抗原決定簇特異性B細胞，通過雜交瘤技術建立，各種不同基因序列型同位基因HIV免疫原各個同位抗原決定簇單克隆抗體特異型庫揭示最初HIV感染人群不同各體的，各個亞型各種不同源野生HIV病毒多克隆株群的，各種不同基因序列型同位基因HIV免疫原各個同位抗原決定簇克隆特異型；用最初HIV感染人群不同個體的各種不同源HIV病毒大貯存標本血漿、PBMC細胞庫，各種不同基因序列型同位基因HIV免疫原-基因重組HIV免疫原，免疫嚙齒類動物小鼠或大鼠或豚鼠或兔或非人類的靈長類猴或大猩猩抗HIV動物模型，獲取抗各種不同基因序列型同位基因HIV免疫原中和抗體的動物血清；應用含有中和抗體的動物血清，分別實施體外培養取自于最初HIV感染人群不同個體的各種不同源HIV病毒大貯存標本血漿、PBMC細胞庫，各種不同源血漿、PBMC細胞野生HIV病毒多克隆株群感染正常人PBMC細胞模型實驗，建立抑制不同源野生HIV病毒感染正常人PBMC細胞模型庫篩選尋找可以誘導最初HIV感染人群的免疫反應，有效清除最初感染原病毒復制速度快、高變異性、病毒序列多樣性高的野生病毒多克隆株群的有效保護率高的，各個亞型HIV保護性免疫原——強免疫原、交叉亞型HIV保護性免疫原——強免疫原；用各種不同基因序列型同位基因HIV免疫原各個同位抗原決定簇單克隆抗體特異型庫，選出同位基因HIV保護性強免疫原、各個同位抗原決定簇克隆特異型不同的，各種不同基因序列型同位基因HIV保護性強免疫原，指導設計應用2種或2種以上不同的、同亞型或不同亞型某一種或幾種HIV保護性免疫原、各個同位抗原決定簇克隆特異型不同的HIV保護性免疫原，組合各種不同的候選新型混合HIV保護性免疫原-疫苗；用抑制不同源野生HIV病毒感染正常人PBMC細胞模型庫，從中篩選出可以誘導最初HIV感染人群的免疫反應，有效清除最初感染原病毒復制速度快、高變異性、病毒序列多樣性高的野生病毒多克隆株群的有效保護率高的，各個亞型混合HIV保護性強免疫原抗原-疫苗、交叉亞型混合HIV保護性強免疫原抗原-疫苗，證實能夠將其應用作HIV治療疫苗、HIV預防疫苗，實施臨床人體實驗；把詳細實驗過程、數據記錄，輸入相應的計算機綜合分析系統，構建規避研制合成HIV疫苗存在未知的巨大科學研究風險變數的綜合生物科學研究實驗平臺。指導現代HIV科學研究，設計、研制具有實際應用價值的合成HIV疫苗。依靠充實完善最初HIV感染人群不同個體的各種不同源HIV病毒大貯存標本血漿、PBMC細胞庫——各種不同基因序列型同位基因HIV免疫原各個同位抗原決定簇單克隆抗體特異型庫——抑制不同源野生HIV病毒感染正常人PBMC細胞模型庫——計算機綜合分析系統——綜合生物科學研究實驗平臺，設計實施評估驗證HIV治療疫苗、HIV預防疫苗的，I/II/III期臨床人體試驗--抑制不同源野生HIV病毒感染正常人PBMC細胞模型實驗制定評估驗證HIV治療疫苗有效保護率標準，制定評估驗證HIV預防疫苗有效保護率標準；規避研制新型合成HIV疫苗，實施III/IV期臨床人體試驗存在未知的巨大科學研究風險變數。把實施臨床人體試驗--抑制不同源野生HIV病毒感染正常人PBMC細胞模型實驗，詳細實驗過程、數據記錄，輸入計算機綜合分析系統；進一步充實完善最初HIV感染人群不同個體的各種不同源HIV病毒大貯存標本血漿、PBMC細胞庫——各種不同基因序列型同位基因HIV免疫原各個同位抗原決定簇單克隆抗體特異型庫——抑制不同源野生HIV病毒感染正常人PBMC細胞模型庫——計算機綜合分析系統——綜合生物科學研究實驗平臺。從而能夠規避研制新型合成HIV疫苗存在未知的巨大科學研究風險變數，解決3個使現代HIV科學研究陷入困境、亟待解決的最重要難點問題。

發明內容
本發明公開了一種HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白抗原免疫應答抗HIV實驗與方法。揭示HIV包膜蛋白gp120或gp160抗原-疫苗，是與CD4+細胞CD4受體結合、誘導免疫耐受CD4受體的異種配體抗原弱免疫原，誘導HIV感染宿主免疫耐受體液免疫反應遲緩產生保護性抗體、滯后于病毒變異，不能誘導HIV感染宿主免疫反應，有效清除最初感染原病毒復制速度快、高變異性、病毒序列多樣性高的野生病毒多克隆株群。能夠研制不觸發人免疫耐受的，HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白抗原HIV治療疫苗、HIV預防疫苗，提供足夠充分的直接動物模型實驗科學依據、直接臨床人體試驗科學依據。
本發明的目的是，提供一種HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白抗原免疫應答抗HIV實驗與方法。設計、實施HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白抗原免疫應答抗HIV實驗，揭示HIV包膜蛋白gp120或gp160抗原-疫苗，是與CD4+細胞CD4受體結合、誘導免疫耐受CD4受體的異種配體抗原弱免疫原，誘導HIV感染宿主免疫耐受體液免疫反應遲緩產生保護性抗體、滯后于病毒變異，不能誘導HIV感染宿主免疫反應，有效清除最初感染原病毒復制速度快、高變異性、病毒序列多樣性高的野生病毒多克隆株群。能夠研制不觸發人免疫耐受的，HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白抗原HIV治療疫苗、HIV預防疫苗，提供足夠充分的直接動物模型實驗科學依據、直接臨床人體試驗科學依據。提供可實施的抗HIV細胞模型、嚙齒類動物模型、非人類靈長類動物模型與臨床人體試驗科學研究方案。
具體實施例方式
為達到上述目的，實施本發明采用的方案HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白抗原免疫應答抗HIV實驗與方法1.實驗動物與臨床試驗人體1.1.實驗動物無菌動物——GF近交系嚙齒類動物，6~8周齡BALB/c小鼠、F344大鼠；非人類靈長類動物，恒河猴，大猩猩。
1.2.臨床試驗人體未感染HIV的正常健康人；最初HIV感染者。
2.實驗生物材料2.1.HIV病毒取自最初HIV感染者急性期的血漿、液氮低溫冷凍保存備用；取自最初HIV感染者急性期的人PBMC細胞，液氮低溫冷凍保存備用；與正常健康人PBMC細胞共同培養獲得。
2.2.體外培養CD4+細胞取自最初HIV感染者急性期的人PBMC細胞；取自未感染HIV正常健康人PBMC細胞。
2.3.人淋巴細胞取自最初HIV感染者急性期，經非逆轉錄酶抑制劑NRTIs/NNRTIs抗HIV藥聯合用藥治療，經混合HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原——HIV治療疫苗，多次免疫注射治療后，采血獲取的人淋巴細胞。
2.4.血清正常BALB/c小鼠血清；小鼠經HIV-Env基因DNA重組包膜蛋白gp120或gp160準保護性免疫原抗原-疫苗，多次免疫注射后，采血獲取的含抗gp120抗體的小鼠血清。正常F344大鼠血清；大鼠經HIV-Env基因DNA變構重組、不誘導人免疫耐受包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原-疫苗，多次免疫注射后，采血獲取的含抗gp120抗體的大鼠血清。正常恒河猴血清；恒河猴經混合HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原-疫苗，多次免疫注射后，采血獲取的含抗gp120抗體的恒河猴血清。正常大猩猩血清；大猩猩經混合HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原-疫苗，多次免疫注射后，采血獲取的含抗gp120抗體的大猩猩血清。
2.5.血漿未感染HIV-I正常健康人血漿，經混合HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原——HIV預防疫苗，多次免疫注射后，采血獲取的含抗gp120抗體的血漿；最初HIV感染者急性期的未實施治療前的血漿，經混合HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原——HIV治療疫苗，多次免疫注射后，采血獲取的含抗gp120抗體的血漿。
3.實驗檢測、藥物和試劑及與培養液3.1.檢測gp120抗體的雙夾心法、或直接夾心法試劑。
3.2.HIV前病毒檢測與試劑。
3.3.HIV病毒載量檢測HIV-1 Qiantiplex實驗與試劑，或AmplicorHIV-1Monitor實驗與試劑，或NucliSens HIV-1實驗與試劑。
3.4.CD4+T淋巴細胞檢測實驗與試劑。
3.5.RPMI-2加2％人血培養液，RPMI1640加10％動物血清、10％最初HIV感染者急性期的血漿的培養液含青霉素-G100U/ml、慶大霉素50μg/ml；RPMI1640加20％人血漿、10％最初HIV感染者急性期的血漿的培養液含青霉素-G100U/ml、慶大霉素50μg/ml；Ficoll-Hystopaque密度梯度溶液d＝1.077g/ml Pharmacia，把10ml Ficoll液預先內置于50ml離心管中；淋巴細胞處理液-Nycomed，Birmingham，UK，把15ml淋巴細胞處理液預先內置于50ml離心管內；EDTA鈉鹽、用生理鹽水配制4％抗凝液，把1.2ml抗凝EDTA鈉鹽溶液預先內置于50ml注射器中，把0.6ml抗凝EDTA鈉鹽溶液預先內置于20ml注射器內。
4.制備生物實驗材料4.1.通過采血獲取最初HIV感染者急性期的人PBMC細胞；用最初HIV感染者急性期的人PBMC細胞，提取HIV原病毒優勢序列前病毒基因cDNA；PCR復制克隆、剪切制備Env基因cDNA；用中國倉鼠卵巢細胞-CHO表達系統，表達Env基因cDNA重組完全糖基化的HIV包膜蛋白gp120或gp160準保護性免疫原抗原。在實施實驗時制備用生理鹽水配制的50μg/ml溶液。
4.2.設計、研制取自最初HIV感染者急性期的人PBMC細胞原病毒優勢序列前病毒基因cDNA，提取HIV原病毒優勢序列前病毒基因cDNA；實施各種不同的Env基因DNA變構重組表達的、改變HIV包膜蛋白gp120或gp160準保護性免疫原——與CD4+細胞CD4受體結合、誘導免疫耐受CD4受體的異種配體抗原分子，與CD4受體結合特異結合表位C-末端420~463位氨基酸的某個或某些個氨基酸結構，使其失去與CD4受體結合的特異氨基酸結構表位、不與CD4受體結合，能夠失去誘導免疫耐受CD4受體的異種配體抗原弱免疫性，獲得不誘導人免疫耐受包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原-疫苗。在實施實驗時制備用生理鹽水配制的100μg/ml。
4.3.用取自2位或2位以上最初HIV感染者急性期的人PBMC細胞的、各自不同源同亞型病毒序列多樣性不同的，2種或2種以上前病毒Env基因cDNA，各自實施Env基因DNA變構重組的不同序列表達的、2種或2種以上不同的HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原、各個同位抗原決定簇結合表位氨基酸序列存在差異、同位抗原決定簇單克隆抗體特異型不同，組合混合HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原-疫苗。在實施實驗時分別制備用生理鹽水配制的150μg/ml、300μg/ml溶液。
4.4.臨時應用制取人PBMC細胞應用預先內置有1.2ml抗凝EDTA鈉鹽溶液的50ml注射器，無菌抽取未感染HIV-I的正常健康人靜脈血30ml，加2倍RPMI-2培養液混勻；將其仔細緩慢加入3個預先內置有Ficoll液10ml的50ml離心管上層；不要剎車，20℃、400g離心30min；用滅菌吸管小心把離心管Ficoll液和血液分界層間的PBMC細胞吸出，置入新離心管加5倍RPMI-2培養液混勻；20℃、300g離心10min，棄上清液，加5倍RPMI-2培養液混勻；20℃、200g離心5min，棄上清液。用含有10％正常動物血清、10％最初感染HIV者急性期的血漿的RPMI1640培養液，配制細胞懸液5×106/ml、并進行活細胞計數；用10％含抗gp120抗體的動物血清、10％最初HIV感染者急性期的血漿的RPMI1640培養液，配制細胞懸液5×106/ml、并進行活細胞計數；用含有20％正常人血漿、10％最初HIV感染者急性期的血漿的RPMI1640培養液，配制細胞懸液5×106/ml、并進行活細胞計數；用20％含抗gp120抗體的人血漿、10％最初HIV感染者急性期的血漿的RPMI1640培養液，配制細胞懸液5×106/ml、并進行活細胞計數。
4.5.臨時應用制取人淋巴細胞應用預先內置有0.6ml抗凝EDTA鈉鹽溶液的20ml注射器，無菌抽取經HIV治療疫苗免疫治療HIV感染者靜脈血15ml，加1倍RPMI-2培養液混勻；將其仔細緩慢加入預先內置有淋巴細胞處理液15ml的50ml離心管上層；不要剎車，20℃、800g離心25min；用滅菌吸管小心吸取離心管淡黃色層，置入新離心管加5倍RPMI-2培養液混勻；20℃、300g離心10min，棄上清液，加5倍RPMI-2培養液混勻；20℃、200g離心5min，棄上清液，用含有10％人AB血清的RPMI1640培養液，配制細胞懸液2×107/ml、并進行活細胞計數。
4.6.臨時應用制取動物血清抽取正常恒河猴或大猩猩動物靜脈血30ml、免疫恒河猴或大猩猩動物靜脈血30ml；置于離心管中，2000g離心10min，離心后4℃低溫靜置60min；然后用血管鉗擠壓血凝塊，擠出內含的血清；棄去血凝塊，再置于新離心管中，5~10000g離心60min；用一系列過濾器進行過濾，最后用0.1μm孔徑無菌過濾器進行過濾后；分置于多個小無菌高密度聚丙烯容器，放置-80℃冰箱保存備用。臨時應用制取小鼠、大鼠動物血清實施乙醚麻醉斷頭采血，余法如上。
4.7.制取人血漿每10ml血加0.4ml抗凝EDTA鈉鹽溶液無菌抽取健康人靜脈血100ml，或HIV疫苗臨床人體試驗志愿者免疫前靜脈血100ml、免疫后靜脈血100ml；置于離心管中，2000轉/min，離心10min。用滅菌吸管吸取管中血漿，給予采血者回輸剩余紅細胞；用一系列過濾器進行過濾，最后用0.1μm孔徑無菌過濾器進行過濾后；分置于多個小無菌高密度聚丙烯容器，放置-80℃冰箱保存備用。
4.8.采集最初HIV-I感染者急性期的血漿、PBMC細胞大貯存標本、及貯存；建立最初HIV感染人群不同個體的各種不同源HIV病毒大貯存標本血漿、PBMC細胞庫——各種不同基因序列型同位基因HIV免疫原各個同位抗原決定簇單克隆抗體特異型庫——抑制不同源野生HIV病毒感染正常人PBMC細胞模型庫——計算機綜合分析系統——綜合生物科學研究實驗平臺1.每10ml血加0.4ml抗凝EDTA鈉鹽溶液、無菌抽取最初HIV感染者急性期的靜脈血200ml~400ml。2.分置于4~8個100ml離心管中，2000轉/min，離心5min。3.用滅菌吸管吸取管中大部分血漿；保留近紅細胞界面約4~6mm處血漿，以保留紅細胞界面表層單核淋巴細胞層，取2ml血漿做血漿病毒載量、病毒亞型、病毒Env基因序列檢測，其余血漿置于2~4個100ml離心管中。4.2400轉/min，離心5min，除去血小板及其它細胞成分，用一系列過濾器進行過濾，最后用0.15μm孔徑無菌過濾器進行過濾后；按1ml分置于多個小無菌高密度聚丙烯容器，標記①病人代號，②血漿，③采血日期，④病毒載量，⑤病毒亞型、病毒Env基因序列；而后裝入有編號的盒中，保存于-80℃冰箱中備用，每個最初HIV感染者的標本及盒中放置位子均需要輸入計算機詳細記錄，以便日后能夠準確提取。5.用滅菌吸管吸取管中殘留血漿+紅細胞界面表層單核淋巴細胞層+部分紅細胞分置于4個100ml離心管中(給予采血者回輸剩余紅細胞)，加入2~3倍RPMI-2培養液混勻。6.將其仔細緩慢加入預先內置有Ficoll液的4個100ml離心管上層；血-RPMI-2培養液∶Ficoll液＝3∶1。7.不要剎車，20℃、2000轉/min，離心15min。8.用滅菌吸管小心把管中Ficoll液和血液分界層間的單核淋巴細胞吸出。9.置入新離心管加5倍RPMI-2培養液混勻。10.1500轉/min，離心5min；棄上清液，留細胞。11.加5倍RPMI-2培養液混勻。12.取細胞懸液做活細胞計數。13.計數同時，1500轉/min，離心5min；棄上清液，留細胞。14.取2×106細胞做PBMC細胞病毒載量、病毒亞型、病毒Env基因cDNA序列檢測，其余細胞按照總細胞計數加入凍存液，調整細胞濃度至5×106~1×107細胞/ml凍存液；分裝入抗低溫特殊冷凍管中，每管5×106細胞/ml凍存液。15.冷凍管標記①病人代號，②PBMC細胞，③采血日期，④病毒載量，⑤病毒亞型、病毒Env基因cDNA序列，gp120或gp160各個同位抗原決定簇結合表位氨基酸序列、同位抗原決定簇單克隆抗體特異型；而后置于4℃中40min，置于-20℃中40min，裝入有編號的盒中置于-80℃中過夜；在冷凍細胞過程使用CellFreezer，可望獲得較長的保存期并細胞復蘇時獲得最高的細胞存活率；最后放入液氮罐中保存備用，每個最初HIV感染者的標本及盒中放置位子均需要輸入計算機詳細記錄，以便日后能夠準確提取。16.凍存液人AB血清90ml，二甲基亞砜10ml。
4.9.人淋巴細胞免疫缺陷鼠Hu-PBL-SCID的再構建用人淋巴細胞懸液2×107/ml、0.2ml/只，注射到4~6周齡免疫缺陷鼠的腹膜腔內。
5.建立最初HIV感染者急性期的HIV病毒感染細胞體外培養系統5.1.用含有10％正常動物血清、10％最初HIV感染者急性期的血漿的RPMI1640培養液，調整正常人PBMC細胞濃度為5×106/ml培養細胞懸液、接種1×106/m取自最初HIV感染者急性期的液氮低溫保存備用復蘇的人PBMC細胞，模擬最初HIV感染者急性期的宿主組織細胞病理/生理/免疫微環境，血漿病毒序列多樣性、PBMC病毒序列多樣性的病毒和CD4+細胞動力學；用24孔板實施60位或更多位最初HIV-I感染者急性期的、HIV病毒感染正常人PBMC細胞體外培養。每個編號最初HIV感染者急性期的HIV病毒感染正常人PBMC細胞體外培養各3孔，每孔灌注1ml；放置在有一定濕度，37℃，5％CO2的培養箱中培養。每培養3d吸取上清液0.5ml，補充新鮮培養液。培養第4d后每天在倒置顯微鏡觀察培養細胞病變。培養12d后，對每個細胞培養孔中沒有被HIV感染致死的活細胞計數。
5.2.用10％含抗gp120抗體的動物血清、10％最初HIV感染者急性期的血漿的RPMI1640培養液，調整正常人PBMC細胞濃度為5×106/ml培養細胞懸液、接種1×106/m取最初HIV感染者急性期的液氮低溫保存備用復蘇的人PBMC細胞，模擬HIV治療疫苗免疫治療最初HIV感染者急性期的宿主組織細胞病理/生理/免疫微環境，血漿病毒序列多樣性、PBMC病毒序列多樣性的病毒和CD4+細胞動力學；用24孔板實施60位或更多位最初HIV感染者急性期的、HIV病毒感染正常人PBMC細胞體外培養。每個編號最初HIV感染者急性期的HIV病毒感染正常人PBMC細胞體外培養各3孔，每孔灌注1ml；放置在有一定濕度，37℃，5％CO2的培養箱中培養。每培養3d吸取上清液0.5ml，補充新鮮培養液。培養第4d后每天在倒置顯微鏡觀察培養細胞病變。培養12d后，對每個細胞培養孔中沒有被HIV感染致死的活細胞計數。
5.3.用含有20％正常人血漿、10％最初HIV感染者急性期的血漿的RPMI1640培養液，調整正常人PBMC細胞濃度為5×106/ml培養細胞懸液、接種1×106/ml取自最初HIV感染者急性期的液氮低溫保存備用復蘇的人PBMC細胞，模擬最初HIV感染者急性期的宿主組織細胞病理/生理/免疫微環境，血漿病毒序列多樣性、PBMC病毒序列多樣性的病毒和CD4+細胞動力學；用24孔板或96孔板實施100位或更多位最初HIV感染者急性期的、HIV病毒感染正常人PBMC細胞體外培養。每個編號最初HIV感染者急性期的HIV病毒感染正常人PBMC細胞體外培養各3孔，每孔灌注1ml、或0.2ml；放置在有一定濕度，37℃，5％CO2的培養箱中培養。每培養3d吸取上清液0.5ml、或0.1ml，補充新鮮培養液。培養第4d后每天在倒置顯微鏡觀察培養細胞病變。培養12d后，對每個細胞培養孔中沒有被HIV感染致死的活細胞計數。
5.4.用含有20％含抗gp120抗體的人血漿、10％最初HIV感染者急性期的血漿的RPMI1640培養液，調整正常人PBMC細胞濃度為5×106/ml培養細胞懸液、接種1×106/m取自最初HIV感染者急性期的液氮低溫保存備用復蘇的人PBMC細胞，模擬HIV疫苗免疫治療臨床人體后、最初HIV感染者急性期的宿主組織細胞病理/生理/免疫微環境，血漿病毒序列多樣性、PBMC病毒序列多樣性的病毒和CD4+細胞動力學；用24孔板或96孔板實施100位或更多位最初HIV感染者急性期的、HIV病毒感染正常人PBMC細胞體外培養。每個編號最初HIV感染者急性期的HIV病毒感染正常人PBMC細胞體外培養各3孔，每孔灌注1ml、或0.2ml；放置在有一定濕度，37℃，5％CO2的培養箱中培養。每培養3d吸取上清液0.5ml、或0.1ml，補充新鮮培養液。培養第4d后每天在倒置顯微鏡觀察培養細胞病變。培養12d后，對每個細胞培養孔中沒有被HIV感染致死的活細胞計數。
6.實驗方法、生物檢測、數據記錄、結果評定6.1.取自最初HIV感染者急性期的人PBMC細胞的HIV原病毒優勢序列前病毒基因cDNA，表達HIV-Env基因cDNA重組包膜蛋白gp120或gp160準保護性免疫原抗原——不與小鼠CD4受體結合、不誘導免疫耐受強免疫原抗原，免疫BALB/c小鼠抗HIV動物模型-抑制不同源野生HIV病毒感染正常人PBMC細胞模型，實驗方法、生物檢測、數據記錄、結果評定6.1.1.分別對30只BALB/c小鼠，實施乙醚麻醉斷頭采血，制取正常動物血清。
6.1.2.HIV-Env基因cDNA重組包膜蛋白gp120或gp160準保護性免疫原——不與小鼠CD4受體結合、不誘導免疫耐受強免疫原抗原，免疫BALB/c小鼠，肌肉注射免疫30只BALB/c小鼠50μg/ml、0.2ml/只，0d、14d、28d、42d各一次。在免疫接種第14d、21d、28d、35d、42d，尾部微量采血，檢測每只小鼠體液免疫反應、抗體的滴度。49d或60d，分別各自乙醚麻醉斷頭采血處死30只小鼠，制取含抗gp120抗體動物血清、檢測抗體的滴度；建立各種不同基因序列型同位基因HIV免疫原各個同位抗原決定簇單克隆抗體特異型庫。
6.1.3.分別用6.1.1.30只小鼠的混合正常動物血清、6.1.2.30只小鼠的含抗gp120抗體混合動物血清，分別對照實施5.1.HIV病毒感染細胞體外培養系統實驗，5.2.HIV病毒感染細胞體外培養系統實驗總數不少于60位最初HIV感染者急性期預留液氮保存的、血漿和PBMC細胞不同源同亞型HIV病毒感染正常人PBMC細胞體外培養，每個編號最初HIV感染者急性期的HIV病毒感染正常人PBMC細胞體外培養各3孔。培養12d后，對每個細胞培養孔中沒有被HIV感染致死的活細胞計數。檢測用同亞型HIV包膜蛋白gp120或gp160準保護性免疫原抗原，免疫小鼠抗HIV模型，免疫應答產生的中和抗體，具有能夠有效中和抑制多少位？最初感染HIV者急性期的、多種不同源同亞型野生HIV病毒多克隆株群感染正常人PBMC細胞能力——即中和抗體抑制多種不同源同亞型野生HIV病毒序列多樣性高的多克隆株群的有效保護率。
6.1.4.實驗過程、數據記錄1.詳細記錄，6.1.1./6.1.2./6.1.3.實驗全過程。把詳細實驗過程、數據記錄，輸入計算機綜合分析系統。2.記錄，實施HIV病毒感染細胞體外培養系統實驗，用HIV-Env基因cDNA重組包膜蛋白gp120或gp160準保護性免疫原抗原-疫苗，免疫BALB/c小鼠，免疫反應產生的中和抗體，具有能夠有效中和抑制多少位？最初感染HIV者急性期的、多種不同源同亞型野生HIV病毒多克隆株群感染正常人PBMC細胞能力——即中和抗體抑制多種不同源同亞型野生HIV病毒序列多樣性高的多克隆株群的有效保護率＝？位數總位數×100％。小鼠抗HIV模型，免疫反應產生的中和抗體，具有中和抑制大于6位最初HIV感染者急性期的血漿、PBMC細胞多種不同源同亞型HIV病毒感染正常人PBMC細胞能力，即中和抗體抑制多種不同源同亞型野生HIV病毒序列多樣性高的多克隆株群的有效保護率大于10％；即可被認為是具有實際應用價值HIV-Env基因cDNA重組包膜蛋白gp120或gp160準保護性免疫原抗原。
6.1.小鼠抗HIV動物模型-抑制不同源野生HIV病毒感染正常人PBMC細胞模型實驗1.能夠被應用于生物檢測最初HIV感染人群不同個體的，各種不同基因序列型同位基因HIV免疫原各個同位抗原決定簇結合表位氨基酸序列、同位抗原決定簇單克隆抗體特異型；建立最初HIV感染人群不同個體的各種不同源HIV病毒大貯存標本血漿、PBMC細胞庫——各種不同基因序列型同位基因HIV免疫原各個同位抗原決定簇單克隆抗體特異型庫——抑制不同源野生HIV病毒感染正常人PBMC細胞模型庫——計算機綜合分析系統——綜合生物科學研究實驗平臺；從中篩選出，中和抗體抑制多種不同源同亞型野生HIV病毒序列多樣性高的多克隆株群的有效保護率大于10％的，具有實際應用價值HIV-Env基因cDNA重組包膜蛋白gp120或gp160準保護性免疫原抗原。2.證實，用取自最初HIV感染者急性期的人PBMC細胞的HIV原病毒優勢序列前病毒Env基因cDNA，表達HIV-Env基因DNA重組包膜蛋白gp120或gp160準保護性免疫原抗原，是可以誘導最初HIV感染人群的免疫反應，有效清除最初感染原病毒復制速度快、高變異性、病毒序列多樣性高的野生病毒多克隆株群的同亞型準保護性免疫原抗原。3.進一步證實，設計研制，實施HIV-Env基因DNA變構重組、能夠失去誘導免疫耐受CD4受體的異種配體抗原弱免疫原性，獲得不誘導人免疫耐受包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原-疫苗，將有可能在研制篩選HIV治療疫苗、HIV預防疫苗科學研究方面，取得科學突破。提供進一步的抗HIV動物模型-抑制不同源野生HIV病毒感染正常人PBMC細胞模型實驗科學依據。
6.2.HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原-疫苗，免疫F344大鼠抗HIV動物模型-抑制不同源野生HIV病毒感染正常人PBMC細胞模型，實驗方法、生物檢測、數據記錄、結果評定6.2.1.分別對10只F344大鼠，實施乙醚麻醉斷頭采血，制取正常動物血清。
6.2.2.用HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原-疫苗，免疫F344大鼠，肌肉注射免疫10只F344大鼠100μg/ml、0.2ml/只，0d、14d、28d、42d各一次。在免疫接種第14d、21d、28d、35d、42d，尾部微量采血，檢測每只大鼠體液免疫反應、抗體的滴度。49d或60d，分別各自實施乙醚麻醉斷頭采血處死10只大鼠，制取含抗gp120抗體的動物血清、檢測抗體的滴度。
6.2.3.分別用6.2.1.10只大鼠的混合正常動物血清、6.2.2.10只大鼠的含抗gp120抗體混合動物血清，分別對照實施5.1.HIV病毒感染細胞體外培養系統實驗，5.2.HIV病毒感染細胞體外培養系統實驗總數不少于60位最初HIV感染者急性期預留液氮保存的、血漿和PBMC細胞不同源同亞型HIV病毒感染正常人PBMC細胞體外培養，每個編號最初HIV感染者急性期的HIV病毒感染正常人PBMC細胞體外培養各3孔。培養12d后，對每個細胞培養孔中沒有被HIV感染致死的活細胞計數。檢測用同亞型用HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原-疫苗，免疫大鼠抗HIV模型，免疫應答產生的中和抗體，具有能夠有效中和抑制多少位？最初感染HIV者急性期的、多種不同源同亞型野生HIV病毒多克隆株群感染正常人PBMC細胞能力——即中和抗體抑制多種不同源同亞型野生HIV病毒序列多樣性高的多克隆株群的有效保護率。
6.2.4.實驗過程、數據記錄1.詳細記錄，6.2.1./6.2.2./6.2.3.實驗全過程。把詳細實驗過程、數據記錄，輸入計算機綜合分析系統。2.記錄，實施HIV病毒感染細胞體外培養系統實驗，用HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原-疫苗，免疫F344大鼠，免疫反應產生的中和抗體，具有能夠有效中和抑制多少位？最初感染HIV者急性期的、多種不同源同亞型野生HIV病毒多克隆株群感染正常人PBMC細胞能力——即中和抗體抑制多種不同源同亞型野生HIV病毒序列多樣性高的多克隆株群的有效保護率＝？位數總位數×100％。大鼠抗HIV-I動物模型，免疫反應產生的中和抗體，具有中和抑制大于6位最初HIV感染者急性期的血漿、PBMC細胞多種不同源同亞型HIV病毒感染正常人PBMC細胞能力，即中和抗體抑制多種不同源同亞型野生HIV病毒序列多樣性高的多克隆株群的有效保護率大于10％；即可被認為是具有實際應用價值HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原。
6.2.大鼠抗HIV動物模型-抑制不同源野生HIV病毒感染正常人PBMC細胞模型實驗1.能夠從實施各種不同HIV-Env基因DNA變構重組、能夠失去誘導免疫耐受CD4受體的異種配體抗原弱免疫原性，獲得不誘導人免疫耐受包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原中，篩選出，中和抗體抑制多種不同源同亞型野生HIV病毒序列多樣性高的多克隆株群的有效保護率大于10％的，具有實際應用價值HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原。2.進一步證實，用取自最初HIV感染者急性期的人PBMC細胞的HIV原病毒優勢序列前病毒Env基因cDNA，實施HIV-Env基因DNA變構重組、能夠失去誘導免疫耐受CD4受體的異種配體抗原弱免疫原性，獲得不誘導人免疫耐受包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原，是可以誘導最初HIV感染人群的免疫反應，有效清除最初感染原病毒復制速度快、高變異性、病毒序列多樣性高的野生病毒多克隆株群的同亞型保護性強免疫原抗原。3.再進一步證實，設計研制，實施HIV-Env基因DNA變構重組、能夠失去誘導免疫耐受CD4受體的異種配體抗原弱免疫原性，獲得不誘導人免疫耐受包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原-疫苗，將有可能在研制篩選抗HIV治療疫苗、抗HIV預防疫苗科學研究方面，取得科學突破。提供進一步的抗HIV動物模型-抑制不同源野生HIV病毒感染正常人PBMC細胞模型實驗科學依據。
6.3.混合HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原-疫苗，免疫恒河猴抗HIV動物模型-抑制不同源野生HIV病毒感染正常人PBMC細胞模型，實驗方法、生物檢測、數據記錄、結果評定6.3.1.分別對8~10只恒河猴各自抽取靜脈血30ml，制取正常動物血清。
6.3.2.用混合HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原-疫苗，肌肉注射免疫8~10只恒河猴，150μg/ml、1ml/只，0d、21d、42d各一次。在免疫接種第14d、21d、28d、35d、42d、49d，采血檢測每只恒河猴體液免疫反應、抗體的滴度。60d，分別各自抽取靜脈血30ml，制取含抗gp120抗體動物血清、檢測抗體的滴度。
6.3.3.分別用每只恒河猴的正常動物血清、含抗gp120抗體動物血清，分別對照實施5.1.HIV病毒感染細胞體外培養系統實驗，5.2.HIV病毒感染細胞體外培養系統實驗總數不少于60位最初HIV感染者急性期預留液氮保存的、血漿和PBMC細胞不同源同亞型HIV病毒感染正常人PBMC細胞體外培養，每個編號最初HIV感染者急性期的HIV病毒感染正常人PBMC細胞體外培養各3孔。培養12d后，對每個細胞培養孔中沒有被HIV感染致死的活細胞計數。檢測用用混合HIV-I-Env基因DNA變構重組包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原-疫苗，免疫恒河猴抗HIV動物模型，免疫應答產生的中和抗體，具有能夠有效中和抑制多少位？最初感染HIV者急性期的、多種不同源同亞型野生HIV病毒多克隆株群感染正常人PBMC細胞能力——即中和抗體抑制多種不同源同亞型野生HIV病毒序列多樣性高的多克隆株群的有效保護率。
6.3.4.實驗過程、數據記錄1.詳細記錄，6.3.1./6.3.2./6.3.3.實驗全過程。把詳細實驗過程、數據記錄，輸入計算機綜合分析系統。2.記錄，實施HIV病毒感染細胞體外培養系統實驗，用混合HIV-I-Env基因DNA變構重組包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原，免疫恒河猴，免疫反應產生的中和抗體，具有能夠有效中和抑制多少位？最初感染HIV者急性期的、多種不同源同亞型野生HIV病毒多克隆株群感染正常人PBMC細胞能力——即中和抗體抑制多種不同源同亞型野生HIV病毒序列多樣性高的多克隆株群的有效保護率＝？位數總位數×100％。恒河猴抗HIV動物模型，免疫反應產生的中和抗體，具有中和抑制大于18位最初HIV感染者急性期的血漿、PBMC細胞多種不同源同亞型野生HIV病毒感染正常人PBMC細胞能力，即中和抗體抑制多種不同源同亞型野生HIV病毒序列多樣性高的多克隆株群的有效保護率大于30％；即可被認為是具有實際應用價值混合HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原。
6.3.恒河猴抗HIV動物模型-抑制不同源野生HIV病毒感染正常人PBMC細胞模型實驗能夠從各種不同組合的候選混合HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原-疫苗中，篩選出，中和抗體抑制多種不同源同亞型野生HIV病毒序列多樣性高的多克隆株群的有效保護率大于30％的，具有實際應用價值混合HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原-疫苗；即證實在HIV感染人體中存在的任何一種HIV免疫原，都難以被現代HIV科學研究應用作、研制出具有較高保護率的合成HIV疫苗；HIV保護性免疫原擁有的抗原決定簇少，現代HIV科學研究，應用任何一種HIV保護性免疫原研制合成HIV疫苗，都難以研制出可以誘導最初HIV感染人群的免疫反應，有效清除最初感染原病毒復制速度快、高變異性、病毒序列多樣性高的野生病毒多克隆株群，具有實際應用價值的合成HIV疫苗。需要應用多種不同的、同亞型或不同亞型某一種或幾種HIV保護性免疫原的、各個同位抗原決定簇結合表位氨基酸序列存在差異、同位抗原決定簇克隆特異型不同的HIV保護性免疫原，設計、研制各種不同組合的混合HIV保護性免疫原；以增加混合HIV保護性免疫原各個同位抗原決定簇克隆特異型多樣性、不同位抗原決定簇克隆特異型多樣性，對抗最初感染HIV人群的原病毒復制速度快、高變異性、病毒序列多樣性高的野生病毒多克隆株群持續變異，設計、研制各種候選混合HIV保護性免疫原疫苗；是未來能夠研制出具有實際應用價值的合成HIV疫苗的唯一出路。將有可能在研制篩選HIV治療疫苗、HIV預防疫苗科學研究方面，取得科學突破。提供具有與人類相似生命機制的，恒河猴抗HIV動物模型-抑制不同源野生HIV病毒感染正常人PBMC細胞模型實驗科學依據。
6.4.混合HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原-疫苗，免疫大猩猩抗HIV動物模型-抑制不同源野生HIV病毒感染正常人PBMC細胞模型，實驗方法、生物檢測、數據記錄、結果評定6.4.1.分別對4~6只大猩猩各自抽取靜脈血30ml，制取正常動物血清。
6.4.2.用混合HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原-疫苗，肌肉注射免疫4~6只大猩猩，300μg/ml、2ml/只，0d、21d、42d各一次。在免疫接種第14d、21d、28d、35d、42d、49d，采血檢測每只大猩猩體液免疫反應、抗體的滴度。60d，分別各自抽取靜脈血30ml，制取含抗gp120抗體動物血清、檢測抗體的滴度。
6.4.3.分別用每只大猩猩的正常動物血清、含抗gp120抗體動物血清，分別對照實施5.1 HIV病毒感染細胞體外培養系統實驗，5.2.HIV病毒感染細胞體外培養系統實驗總數不少于60位最初HIV感染者急性期預留液氮保存的、血漿和PBMC細胞不同源同亞型HIV病毒感染正常人PBMC細胞體外培養，每個編號最初HIV感染者急性期的HIV病毒感染正常人PBMC細胞體外培養各3孔。培養12d后，對每個細胞培養孔中沒有被HIV感染致死的活細胞計數。檢測用混合HIV-I-Env基因DNA變構重組包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原-疫苗，免疫大猩猩抗HIV動物模型，免疫應答產生的中和抗體，具有能夠有效中和抑制多少位？最初感染HIV者急性期的、多種不同源同亞型野生HIV病毒多克隆株群感染正常人PBMC細胞能力——即中和抗體抑制多種不同源同亞型野生HIV病毒序列多樣性高的多克隆株群的有效保護率。
6.4.4.實驗過程、數據記錄1.詳細記錄，6.4.1./6.4.2./6.4.3.實驗全過程。把詳細實驗過程、數據記錄，輸入計算機綜合分析系統。2.記錄，實施HIV病毒感染細胞體外培養系統實驗，用混合HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原，免疫大猩猩，免疫反應產生的中和抗體，具有能夠有效中和抑制多少位？最初感染HIV者急性期的、多種不同源同亞型野生HIV病毒多克隆株群感染正常人PBMC細胞能力——即中和抗體抑制多種不同源同亞型野生HIV病毒序列多樣性高的多克隆株群的有效保護率＝？位數總位數×100％。大猩猩抗HIV動物模型，免疫反應產生的中和抗體，具有中和抑制大于18位最初HIV-I感染者急性期的血漿、PBMC細胞多種不同源同亞型野生HIV病毒感染正常人PBMC細胞能力，即中和抗體抑制多種不同源同亞型野生HIV病毒序列多樣性高的多克隆株群的有效保護率大于30％；即可被認為是具有實際應用價值混合HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原。
6.4.大猩猩抗HIV動物模型-抑制不同源野生HIV病毒感染正常人PBMC細胞模型實驗，證實，能夠將混合HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原，作為HIV治療疫苗、HIV預防疫苗，實施臨床人體試驗。提供具有與人類生命機制最為接近的，大猩猩抗HIV動物模型-抑制不同源野生HIV病毒感染正常人PBMC細胞模型實驗科學依據。
6.5.混合HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原，作為HIV治療疫苗，與抗HIV藥聯合用藥免疫治療最初HIV感染者急性期，I期臨床人體抗HIV免疫治療試驗一抑制不同源HIV野生病毒感染正常人PBMC細胞模型實驗，相關疫苗學的實驗方法、生物檢測、數據記錄、結果評定6.5.1.在實施治療前采集最初HIV感染者急性期的血漿、PBMC細胞大貯存標本；見4.8.。
6.5.2.選擇在最初HIV感染者急性期，經非逆轉錄酶抑制劑NRTIs/NNRTIs抗HIV藥聯合用藥治療，可在14d內病毒載量下降為不可檢測、28d內CD4+T淋巴細胞檢測計數可恢復≥800/μl的，60位感染同亞型HIV患者。分2組，用混合HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原——HIV治療疫苗，與抗HIV藥聯合用藥免疫治療最初HIV-I感染者1組150μg/ml/人、2組300μg/ml/人，0d、14d、28d、60d各自免疫皮下多點接種注射一次。在免疫接種第14d、21d、28d、35d、49d，采血檢測每位實施HIV治療疫苗免疫治療者的體液免疫反應、抗體的滴度。60d，分別各自抽取靜脈血30ml檢測抗體的滴度；建立不同基因序列型同位基因HIV保護性免疫原各個同位抗原決定簇的人源單克隆抗體特異型庫；制取淋巴細胞。
6.5.3.用每位實施非逆轉錄酶抑制劑NRTIs/NNRTIs抗HIV藥聯合用藥治療，與新型同亞型混合HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原——HIV治療疫苗免疫治療者的淋巴細胞，各自分別實施3~5只SCID鼠的，人淋巴細胞免疫缺陷鼠Hu-PBL-SCID的再構建。21d，分別采血處死Hu-PBL-SCID鼠，分別做前病毒檢測、血漿病毒載量檢測。
6.5.4.HIV治療疫苗免疫治療者的淋巴細胞重建Hu-PBL-SCID鼠的前病毒、血漿病毒載量為不可檢測者，停止非逆轉錄酶抑制劑NRTIs/NNRTIs抗HIV藥聯合用藥治療7d后，抽取靜脈血100ml，制取血漿。分別用正常人血漿、HIV治療疫苗免疫治療者含抗gp120抗體的血漿，分別對照實施5.3.HIV病毒感染細胞體外培養系統實驗，5.4.HIV病毒感染細胞體外培養系統實驗100位或更多位最初HIV感染者急性期預留液氮保存的、血漿和PBMC細胞不同源同亞型HIV病毒感染正常人PBMC細胞體外培養，每個編號最初HIV感染者急性期的HIV病毒感染正常人PBMC細胞體外培養各3孔。培養12d后，對每個細胞培養孔中沒有被HIV感染致死的活細胞計數。檢測用混合HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原——HIV治療疫苗，免疫治療最初HIV感染者，體液免疫應答產生的中和抗體，具有能夠有效中和抑制多少位？最初感染HIV者急性期的、多種不同源同亞型野生HIV病毒多克隆株群感染正常人PBMC細胞能力——即中和抗體抑制多種不同源同亞型野生HIV病毒序列多樣性高的多克隆株群的有效保護率。
6.5.5.實驗過程、數據記錄1.詳細記錄6.5.1./6.5.2./6.5.3./6.5.4.實驗全過程。把詳細實驗過程、數據記錄，輸入計算機綜合分析系統。2.記錄，實施HIV-I病毒感染細胞體外培養系統實驗，用混合HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原——HIV治療疫苗，抗HIV免疫治療臨床人體，體液免疫反應產生的中和抗體，具有能夠有效中和抑制多少位？最初感染HIV者急性期的、多種不同源同亞型野生HIV病毒多克隆株群感染正常人PBMC細胞能力——即中和抗體抑制多種不同源同亞型野生HIV病毒序列多樣性高的多克隆株群的有效保護率＝？位數總位數×100％。抗HIV免疫治療臨床人體，體液免疫反應產生的中和抗體，具有能夠中和抑制大于30位最初HIV感染者急性期的血漿、PBMC細胞多種不同源同亞型野生HIV病毒感染正常人PBMC細胞能力，即中和抗體抑制多種不同源同亞型野生HIV病毒序列多樣性高的多克隆株群的有效保護率大于30％；即可被認為是具有實際應用價值混合HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原。能夠應用作HIV治療疫苗、HIV預防疫苗，實施I期HIV預防疫苗臨床人體試驗，實施II期HIV治療疫苗、HIV預防疫苗臨床人體試驗。
6.5.6.HIV治療疫苗免疫治療者的血漿抗gp120抗體，具有抑制本人實施治療前預留液氮保存的、血漿和PBMC細胞HIV病毒感染細胞能力，征求免疫治療者簽字同意停止非逆轉錄酶抑制劑NRTIs/NNRTIs抗HIV藥聯合治療。對免疫治療者實施定期抽血檢測前病毒、血漿病毒載量3年，觀察是否會發生前病毒、血漿病毒載量反跳恢復？如果HIV治療疫苗免疫治療患者的前病毒、血漿病毒載量仍為不可檢測，可被認為是應用混合HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原——HIV治療疫苗，臨床治愈的幾例最初HIV感染者。
6.5.混合HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原，作為HIV治療疫苗，與抗HIV藥聯合用藥免疫治療最初HIV感染者的，臨床人體免疫治療試驗--抑制不同源野生HIV病毒感染正常人PBMC細胞模型實驗，能否臨床治愈幾例最初HIV感染者。是評估驗證HIV治療疫苗、HIV預防疫苗具有實際應用價值的，黃金標準。
6.6.混合HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原，作為HIV治療疫苗，與抗HIV藥聯合用藥免疫治療最初HIV感染者急性期，II期臨床人體抗HIV免疫治療試驗--抑制不同源HIV野生病毒感染正常人PBMC細胞模型實驗，相關疫苗學的實驗方法、生物檢測、數據記錄、結果評定6.6.1.在實施治療前采集最初HIV感染者急性期的血漿、PBMC細胞大貯存標本；見4.8.。
6.6.2.800位最初感染不同源同亞型HIV急性期患者。分3個免疫治療組、1個對照組，每組各200人；用混合HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原——HIV治療疫苗，與抗HIV藥聯合用藥治療3個免疫治療組最初HIV感染者經抗HIV藥聯合用藥治療28d后，1組100μg/ml/人、2組200μg/ml/人、3組300μg/ml/人，0d、14d、28d、60d各自免疫皮下多點接種注射一次；抗HIV藥聯合用藥治療1個對照治療組最初HIV感染者經抗HIV藥聯合治療28d后，生理鹽水1ml/人，0d、14d、28d、60d各自皮下多點接種注射一次。在免疫接種第14d、21d、28d、35d、49d、60d，采血檢測每位免疫治療者體液免疫應答、抗體的滴度。60d，停止全部1組、2組、3組、4組的抗HIV藥聯合用藥治療。7d后，在免疫治療1組、2組、3組，各自分別抽出體液免疫反應抗體滴度最高的10人、抗體滴度中等的10人、抗體滴度最低的10人，分別各自抽取靜脈血100ml，制取血漿。
6.6.3.分別用正常人血漿、HIV治療疫苗免疫治療者含抗gp120抗體的血漿，分別對照實施5.3.HIV病毒感染細胞體外培養系統實驗，5.4.HIV病毒感染細胞體外培養系統實驗500位或更多位最初HIV感染者急性期預留液氮保存的、血漿和PBMC細胞不同源同亞型HIV病毒感染正常人PBMC細胞體外培養，每個編號最初HIV感染者急性期的HIV病毒感染正常人PBMC細胞體外培養各3孔。培養12d后，對每個細胞培養孔中沒有被HIV感染致死的活細胞計數。檢測用混合HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原——HIV治療疫苗，免疫治療最初HIV感染者，體液免疫應答產生的中和抗體，具有能夠有效中和抑制多少位？最初感染HIV者急性期的、多種不同源同亞型野生HIV病毒多克隆株群感染正常人PBMC細胞能力——即中和抗體抑制多種不同源同亞型野生HIV病毒序列多樣性高的多克隆株群的有效保護率。
6.6.4.實驗過程、數據記錄詳同6.5.1./6.5.2./6.5.3.用混合HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原-疫苗，抗HIV免疫治療臨床人體，體液免疫反應產生的中和抗體，具有能夠中和抑制大于180位最初HIV感染者急性期的血漿、PBMC細胞多種不同源同亞型野生HIV病毒感染正常人PBMC細胞能力，即中和抗體抑制多種不同源同亞型野生HIV病毒序列多樣性高的多克隆株群的有效保護率大于30％；即可被認為是具有實際應用價值混合HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原。能夠應用作HIV治療疫苗、HIV預防疫苗，實施III期HIV-I治療疫苗、I/II/III期HIV-I預防疫苗臨床人體試驗。把詳細實驗過程、數據記錄，輸入計算機分析系統。
6.6.對3個免疫治療組、1個對照治療組，實施定期抽血檢測前病毒、血漿病毒載量3年，觀察前病毒、血漿病毒載量反跳？如果免疫治療者的前病毒、血漿病毒載量為不可檢測，可被認為是應用混合HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原——HIV治療疫苗，臨床治愈的最初HIV感染者。是評估驗證候選HIV治療疫苗、HIV預防疫苗，具有實際應用價值的黃金標準。制定評估驗證HIV治療疫苗有效保護率標準3個免疫治療組中存在30位或更多位臨床治愈的最初HIV感染者；血漿病毒載量檢測計數/停止用藥治療1年÷血漿病毒載量檢測計數/停止用藥治療3個月的比值、血漿病毒載量檢測計數/停止用藥治療3年÷血漿病毒載量檢測計數/停止用藥治療1年的比值、CD4+T淋巴細胞檢測計數/停止用藥治療1年÷CD4+T淋巴細胞檢測計數/停止用藥治療3個月的比值、CD4+T淋巴細胞檢測計數/停止用藥治療3年÷CD4+T淋巴細胞檢測計數/停止用藥治療1年的比值，能夠比對照治療組同時期的比值低30％以上。可以認為是具有與抗HIV藥聯合用藥免疫治療最初HIV感染者的，臨床治療實用價值、可以上市的，混合HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原——HIV治療疫苗。
6.7.混合HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原，作為HIV-I預防疫苗，實施I/II(/III)期臨床人體試驗--抑制不同源HIV野生病毒感染正常人PBMC細胞模型實驗，相關疫苗學的實驗方法、生物檢測、數據記錄、結果評定，參照6.5./6.6.HIV治療疫苗實施。分別用試驗前預留血漿、HIV預防疫苗免疫后含抗gp120抗體的血漿，分別對照實施5.3/5.4.HIV病毒感染細胞體外培養系統實驗。制定評估驗證HIV預防疫苗有效保護率標準中和抗體抑制多種不同源同亞型野生HIV病毒序列多樣性高的多克隆株群的有效保護率大于35％。可以認為是具有預防同亞型HIV感染人類群體實際應用價值、可以上市的，混合HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原——HIV預防疫苗。把詳細實驗過程、數據記錄，輸入計算機分析系統。
現代HIV科學研究研制合成HIV疫苗、與實施III/IV期臨床人體試驗存在未知的巨大科學研究風險變數。HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白抗原免疫應答抗HIV實驗HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白抗原抗HIV動物模型-細胞模型實驗，HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白抗原HIV疫苗臨床人體試驗-細胞模型實驗，建立最初HIV感染人群不同個體的各種不同源HIV病毒大貯存標本血漿、PBMC細胞庫——各種不同基因序列型同位基因HIV免疫原各個同位抗原決定簇單克隆抗體特異型庫——抑制不同源野生HIV病毒感染正常人PBMC細胞模型庫——計算機綜合分析系統——綜合生物科學研究實驗平臺；提供解決3個使現代HIV科學研究陷入困境、亟待解決的最重要難點問題的方法，規避研制合成HIV疫苗、與實施III/IV期臨床人體試驗存在未知的巨大科學研究風險變數，指導現代HIV科學研究，設計、研制具有實際應用價值的合成HIV疫苗。可以在5~6年內實施完成，評估驗證混合HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白gp120或gp160保護性強免疫原抗原——HIV治療疫苗、HIV預防疫苗，擁有有效保護率I/II/III期臨床人體試驗--抑制不同源野生HIV病毒感染正常人PBMC細胞模型實驗。
權利要求
1.一種HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白抗原免疫應答抗HIV實驗與方法，其特征在于應用HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白抗原(1)免疫接種實驗動物(2)、采血檢測免疫實驗動物(2)針對HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白抗原(1)的血液成分(3)抗體(4)的滴度(5)。
2.一種HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白抗原免疫應答抗HIV實驗與方法，其特征在于應用HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白抗原(1)免疫接種實驗動物(2)，采血檢測免疫實驗動物(2)針對HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白抗原(1)的血液成分(3)抗體(4)的滴度(5)，應用免疫實驗動物(2)的血液成分(3)、HIV病毒(6)、培養液(7)體外培養CD4+細胞(8)，檢測免疫實驗動物(2)的血液成分(3)抗體(4)抑制HIV病毒(6)感染培養CD4+細胞(8)的能力(9)。
3.根據權利要求1、2中所述的HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白抗原免疫應答抗HIV實驗與方法，其特征在于實驗動物(2)是嚙齒類動物(10)。
4.根據權利要求1、2中所述的HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白抗原免疫應答抗HIV實驗與方法，其特征在于實驗動物(2)是非人類的靈長類動物(11)。
5.根據權利要求1、2中所述的HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白抗原免疫應答抗HIV實驗與方法，其特征在于實驗動物(2)是臨床試驗人體(12)。
6.根據權利要求2至5中所述的HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白抗原免疫應答抗HIV實驗與方法，其特征在于培養CD4+細胞(8)是人PBMC細胞(13)。
7.根據權利要求2至6中所述的HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白抗原免疫應答抗HIV實驗與方法，其特征在于HIV病毒(6)是取自最初HIV感染者急性期(14)血液成分(3)的HIV病毒(15)。
8.根據權利要求1至7中所述的HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白抗原免疫應答抗HIV實驗與方法，其特征在于HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白抗原(1)是取自最初HIV感染者急性期(14)血液成分(3)的HIV病毒(15)的Env基因DNA變構重組包膜蛋白抗原(1)。
9.根據權利要求1至8中所述的HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白抗原免疫應答抗HIV實驗與方法，其特征在于HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白抗原(1)、是由2種抗原決定簇克隆特異型存在差異的HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白抗原(1)、組合的混合HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白抗原(16)。
10.根據權利要求1至9中所述的HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白抗原免疫應答抗HIV實驗與方法，其特征在于HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白抗原(1)、是由2種以上抗原決定簇克隆特異型存在差異的HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白抗原(1)、組合的混合HIV-Env基因DNA變構重組包膜蛋白抗原(17)。
全文摘要
本發明名稱為HIV－Env基因DNA變構重組包膜蛋白抗原免疫應答抗HIV實驗與方法。它涉及生命科學領域、及醫藥領域。證實HIV包膜蛋白gp120或gp160抗原－疫苗，是與CD文檔編號C12Q1/68GK101021539SQ20071009095
公開日2007年8月22日 申請日期2007年3月29日 優先權日2007年3月29日 公開號200710090957.X
發明者葉新新 申請人:葉新新