專利名稱：一種制備食用菌膠體菌種的方法
技術領域：
本發明涉及制備食用菌膠體菌種的方法。
背景枝術食用菌菌種是食用菌生產的技術關鍵，目前通常是采用固體菌種，即先將食用菌的斜面菌種取一小塊，接入固體培養基為第一次培養，也稱原種培養，接下去再取出培養成熟的原菌種小塊，接入新的培養基中，進行下一次培養至成熟，也稱一級種；一級種可以用于作生產栽培種，也可以再次接種進行二級或三級培養，至成熟后用于生產；最后成熟的菌種，對開始的斜面菌種而言，已是至少轉接了三至四次。但每一級固體培養至成熟，至少要28天左右。固體菌種應用于食用菌生產至今已有近幾十年歷史，其優點在于，制作方便，技術要求難度小，只要會栽培食用菌幾乎都能制作菌種。固體食用菌種的缺點在于1、固體菌種要三級、四級地代代轉接，制種時間長，一轉就是半年，菌種培養需占用大量空間；2、生產過程易污染，管理過程怕老化，接種過程煙熏火燒，繁瑣復雜，勞動強度大；3、固體菌種生產質量低，菌絲生長參差不齊，即使是同一菌種袋(或瓶)內，上面的菌絲已經老化，而下面的還沒長好，菌袋(或瓶)上下之間，菌絲菌齡相差懸殊，導致接種后，出菇時間難以集中，管理費用高；4、作坊式的固體菌種生產人人都會做，自繁自種隨處可見，由于轉代次數過多，菌種純度與活力嚴重下降，生產栽培萌發遲緩，導致污染居高不下，種植大戶出現大面積污染的地區數不勝數。5、固體菌種簡單易做，同時產品質量不一，影響企業加工與產品出口。實踐證明，固體菌種已是非常落后的生產技術，但目前為止，我國食用菌生產過程中，固體菌種仍然占居主導地位。隨著科學技術的進步，食用菌生產將向著菌種高純度，生產標準化、工廠化、周年化方向發展，食用菌效益要有大幅度提高，而固體菌種無疑將成為食用菌規模化發展的限制因素。
采用液體菌種可以份服上述難題，它的最大好處是，通過工廠化發酵制種，菌齡一致，菌種標準化程度高，質量好，用于生產發菌快、出菇集中，可省去二級、三級等固體菌種的制作煩瑣，因此具有固體菌種所不可比擬的發展優勢。早在上一世紀70年代，我國就有人嘗試用液體菌種生產靈芝菌并取得成功，此后不斷有人開發這一技術在金針菇以及其它食用菌應用的實例，至今已有30余年。但該技術始終未能得到普遍推廣，主要原因除價格昂貴外，該技術目前還尚存有以下技術問題1、菌種生產需要有專業設備和專業技術人員，一般小廠難以實現；2、液體狀態下，菌種不易保存，生產出的菌種要盡快使用。3、接種時要配有嚴格的無菌設備及條件，否則易污染，即推廣應用的技術難度相對較高。4、由于食用菌本身的生物學特性，液體菌種產品的包裝、貯藏、運輸等問題仍存在許多困難。
發明內容
本發明的目的是提供一種低成本，高效、高產，自動化、標準化制備食用菌膠體菌種的方法。
本發明的制備食用菌膠體菌種方法，其步驟如下1)制備固體培養基將闊葉樹碎木榍、棉籽殼、玉米秸桿、稻草、玉米芯和雜草中的一種或幾種混合，干燥后粉碎至20～60目，取60～85份；將麩皮、豆粕和玉米粉中的一種或幾種混合，干燥后粉碎至20～60目，取10～30份；葡萄糖或蔗糖1～5份；磷酸二氫鉀0.5～3份；硫酸鎂0.01～1.0份；石膏粉1～3份；將以上成分混合后加水，混合物總量與水的份數比為1∶1～1.5；2)固體培養基接種將上述培養基料裝于容器中，料面壓實后用棉花塞封口，進行滅菌處理，滅菌條件為蒸汽壓力Pa＝1.2～1.5kg，溫度T＝110～120℃，保持時間t＝30～90分鐘；冷卻后接入少許食用菌的斜面菌種，于15～28℃條件下培養至菌絲發白至容器底部，為固體菌種；3)制備膠體營養液取去皮切塊馬鈴薯和新鮮南瓜泥中的一種或其混合物10～50份，麩皮2～10份，加水100～250份，煮沸后過濾取液體，加入硫酸鎂0.01～0.1份，磷酸二氫鉀0.5～3份，葡萄糖或蔗糖2～3份，吸水倍數＞200～1000倍的交聯型吸水材料0.1～2.0份，液體增稠劑1.0～5.0份，混合后裝于容器中封口，在蒸汽壓力Pa＝1.2～1.5kg，溫度T＝110～120℃下滅菌，保持時間t＝30～90分鐘；冷卻后備用；4)制備膠體菌種取固體菌種∶膠體營養液＝1∶1～50份，在無菌條件下，混合成均質狀，存放在除菌過濾容器內，于0～22℃下保存。
本發明中，所說的吸水倍數＞200～1000倍的交聯型吸水材料可以是聚丙烯酰胺和聚乙烯醇中的一種或其混合物。所說的液體增稠劑可以是羧甲基纖維素、海藻酸鹽、200～300目的滑石粉、膨潤土和熱電廠粉煤灰中的一種或幾種混勻后的混合物。
本發明中，所說的食用菌的斜面菌種為金針菇、靈芝、猴頭菇、草菇、平菇、滑菇、灰樹花、杏鮑菇或黑木耳。
本發明的有益效果1.制種速度快，可現用現做，比液體發酵制種更為方便，易得，生產操作簡便，制備過程中不需要發酵罐等昂貴設備，成本低，易于推廣并工業化生產，有利于保證產品質量。
2.利用膠體營養液將固體菌種制成半流動狀的液體菌，即膠體菌種，產品具有液體菌的優點，使用方便，發菌快，少污染，出菇集中，進而極大提高接種成活率，且易于包裝運輸和貯藏。
3.制備過程中，將所用的固體菌種主要成分做成20～60目細小碎末，便于膠體狀態下流動，易于接種，同時通過混合均質，可以份服原有固體菌種瓶上下菌齡不一致的技術難題。
4.在膠體菌種營養液中添加了多種營養生物質和生物相容性載體，有利于減弱菌絲在液體狀態下的代謝，并促進接種后菌種在培養料中萌發。
具體實施例方式
以下通過實施例進一步說明本發明。
實施例11)制備固體培養基取棉籽殼和闊葉樹碎木榍混合物60份，干燥后粉碎過40目篩，取麩皮25份，干燥后粉碎過40目篩；取葡萄糖2份，磷酸二氫鉀1份，硫酸鎂0.5份，石膏粉1份，將以上成分混合后加70份水；2)固體培養基接種將上述培養基料裝于廣口瓶中，料面壓實，用棉花塞封口，雙層報紙與橡膠筋扎口后，進行滅菌處理，滅菌條件為蒸汽壓力Pa＝1.5kg，溫度T＝120℃，保持時間t＝30分鐘；冷卻后接入食用菌平菇P5.39(黑龍江省微生物研究所有售)斜面菌種若干小塊，于18℃條件下培養至菌絲發白至容器底部，為固體菌種。
3)制備膠體營養液取去皮切塊馬鈴薯和新鮮南瓜泥混合物20份，麩皮5份，加水200份，煮沸后過濾取液體，加入硫酸鎂0.5份，磷酸二氫鉀1份，葡萄糖2份，吸水倍數＞300倍的交聯型聚丙烯酰胺吸水材料0.3份，液體增稠劑羧甲基纖維素3.0份，混合后裝于容器中封口，在蒸汽壓力Pa＝1.5kg，溫度T＝120℃下滅菌，保持時間t＝30分鐘；冷卻后備用；4)制備膠體菌種取固體菌種∶膠體營養液＝1∶20份，在無菌條件下，混合成均質狀，為平菇P5.39食用菌膠體菌種，存放在滅菌的牙膏筒內，于0℃下保存。
食用菌膠體菌種的應用例取棉籽殼69kg，玉米粉5kg，麩皮10kg，豆粕3kg，硫酸鎂0.25kg，磷酸二氫鉀0.6kg，石膏粉1kg，生石灰1kg，加水110kg，充分混均勻，裝入170×380mm耐高溫塑料培養袋中，每袋裝料重1.2kg，折口后用橡膠筋扎口，滅菌冷卻后用本實例制得的平菇P5.39食用菌膠體菌種接種，每支120ml牙膏筒可以連續接種10～20個培養袋。本實驗接種2100袋，并用常規固體菌種作對照，成功率達98％，污染全部是袋底意外扎破所至。菌袋發滿平均28天，比對照提前5～8天。生產管理與對照相同，產品質量與產量均好于對照。
實施例21)制備固體培養基取棉籽殼、玉米秸桿和玉米芯混合物75份，干燥后粉碎過30目篩，取麩皮和豆粕15份，干燥后粉碎過40目篩；取蔗糖1份，磷酸二氫鉀0.5份，硫酸鎂0.01份，石膏粉1.5份，將以上成分混合后加95份水；2)固體培養基接種將上述培養基料裝于廣口瓶中，料面壓實，用棉花塞封口，雙層報紙與橡膠筋扎口后，進行滅菌處理，滅菌條件為蒸汽壓力Pa＝1.2kg，溫度T＝110℃，保持時間t＝60分鐘；冷卻后接入食用菌江山白菇F21(江山農科所食用菌種場提供)斜面菌種若干小塊，于22℃條件下培養至菌絲發白至容器底部，為固體菌種。
3)制備膠體營養液取去皮切塊馬鈴薯20份，麩皮3份，加水100份，煮沸后過濾取液體，加入硫酸鎂0.1份，磷酸二氫鉀0.5份，葡萄糖2份，吸水倍數＞300倍的交聯型聚乙烯醇吸水材料0.15份，液體增稠劑羧甲基纖維素和海藻酸鹽混勻后的混合物5.0份，混合后裝于容器中封口，在蒸汽壓力Pa＝1.2kg，溫度T＝110℃下滅菌，保持時間t＝50分鐘；冷卻后備用；4)制備膠體菌種取固體菌種∶膠體營養液＝1∶50份，在無菌條件下，混合成均質狀，為江山白菇F21食用菌膠體菌種，存放在除菌過濾容器內，于4℃下保存。
食用菌膠體菌種的應用例取棉籽殼69kg，玉米粉5kg，麩皮10kg，豆粕3kg，硫酸鎂0.25kg，磷酸二氫鉀0.6kg，石膏粉1kg，生石灰1kg，加水110kg，充分混均勻，裝入170×380mm耐高溫塑料培養袋中，每袋裝料重1.2kg，折口后用橡膠筋扎口，滅菌冷卻后用本實例制得的江山白菇F21食用菌膠體菌種接種，每袋接種15ml；共接種1860袋，平均每分鐘可接種20袋，用常規固體菌種作對照，提高效率近6倍，成功率達99％，不成功僅為橡膠筋斷裂使袋口污染。生產管理與對照相同，產品質量與產量均好于對照。
實施例31)制備固體培養基取雜草85份，干燥后粉碎過60目篩，取麩皮10份，干燥后粉碎過40目篩；取葡萄糖5份，磷酸二氫鉀3份，硫酸鎂1份，石膏粉3份，將以上成分混合后加150份水；2)固體培養基接種將上述培養基料裝于廣口瓶中，料面壓實，用棉花塞封口，雙層報紙與橡膠筋扎口后，進行滅菌處理，滅菌條件為蒸汽壓力Pa＝1.5kg，溫度T＝120℃，保持時間t＝90分鐘；冷卻后接入食用菌草菇(黑龍江省微生物研究所有售)斜面菌種若干小塊，于28℃條件下培養至菌絲發白至容器底部，為固體菌種。
3)制備膠體營養液取去皮切塊馬鈴薯和新鮮南瓜泥混合物50份，麩皮2份，加水250份，煮沸后過濾取液體，加入硫酸鎂0.5份，磷酸二氫鉀1份，葡萄糖2份，吸水倍數＞500倍的交聯型聚丙烯酰胺和聚乙烯醇的混合物吸水材料0.3份，液體增稠劑300目的滑石粉3.0份，混合后裝于容器中封口，在蒸汽壓力Pa＝1.5kg，溫度T＝120℃下滅菌，保持時間t＝40分鐘；冷卻后備用；4)制備膠體菌種取固體菌種∶膠體營養液＝1∶20份，在無菌條件下，混合成均質狀，為草菇食用菌膠體菌種，存放在除菌過濾容器內，于22℃下保存。
食用菌膠體菌種的應用例取稻草70kg，玉米粉4kg，麩皮20kg，豆粕5kg，硫酸鎂0.5kg，磷酸二氫鉀1kg，石膏粉1.1kg，生石灰1.1kg，加水130kg，充分混均勻，裝入180×420mm耐高溫塑料培養袋中，每袋裝料重2kg，折口后用橡膠筋扎口，滅菌冷卻后用本實例制得的草菇食用菌膠體菌種接種，每袋接種20ml；共接種1600袋，平均每分鐘可接種20袋，用常規固體菌種作對照，提高效率近6倍，成功率達98％，不成功僅為橡膠筋斷裂使袋口污染。生產管理與對照相同，產品質量與產量均好于對照。
實施例41)制備固體培養基取棉籽殼和闊葉樹碎木榍混合物75份，干燥后粉碎過30目篩，取麩皮10份，豆粕5份，玉米粉5份，干燥后粉碎過30目篩；取葡萄糖2份，磷酸二氫鉀2份，硫酸鎂0.2份，石膏粉1份，將以上成分混合后加120份水；2)固體培養基接種將上述培養基料裝于廣口瓶中，料面壓實，用棉花塞封口，雙層報紙與橡膠筋扎口后，進行滅菌處理，滅菌條件為蒸汽壓力Pa＝1.5kg，溫度T＝120℃，保持時間t＝45分鐘；冷卻后接入食用菌灰樹花(江山農業科學研究所有售)斜面菌種若干小塊，于23℃條件下培養至菌絲發白至容器底部，為固體菌種。
3)制備膠體營養液取去皮切塊馬鈴薯和新鮮南瓜泥混合物30份，麩皮5份，加水150份，煮沸后過濾取液體，加入硫酸鎂0.5份，磷酸二氫鉀1份，蔗糖2份，吸水倍數＞200倍的聚乙烯醇的混合物吸水材料0.5份，液體增稠劑用海藻酸鹽1.5份，混合后裝于容器中封口，在蒸汽壓力Pa＝1.2kg，溫度T＝110℃下滅菌，保持時間t＝60分鐘；冷卻后備用；4)制備膠體菌種取固體菌種∶膠體營養液＝1∶30份，在無菌條件下，混合成均質狀，為灰樹花食用菌膠體菌種，存放在除菌過濾容器內，于22℃下保存。
食用菌膠體菌種的應用例取棉籽殼60kg，碎木榍15kg，玉米粉13kg，麩皮5kg，豆粕3kg，硫酸鎂0.5kg，磷酸二氫鉀1kg，石膏粉1.5kg，生石灰1.kg，加水130kg，充分混均勻，裝入180×420mm耐高溫塑料培養袋中，每袋裝料重2kg，折口后用橡膠筋扎口，滅菌冷卻后用本實例制得的灰樹花食用菌膠體菌種接種，每袋接種15ml；共接種2000袋，平均每分鐘可接種20袋，用常規固體菌種作對照，提高效率近6倍，成功率達98.6％。生產管理與對照相同，產品質量與產量均好于對照。
權利要求
1.一種制備食用菌膠體菌種的方法，其特征是包括以下步驟1)制備固體培養基將闊葉樹碎木榍、棉籽殼、玉米秸桿、稻草、玉米芯和雜草中的一種或幾種混合，干燥后粉碎至20～60目，取60～85份；將麩皮、豆粕和玉米粉中的一種或幾種混合，干燥后粉碎至20～60目，取10～30份；葡萄糖或蔗糖1～5份；磷酸二氫鉀0.5～3份；硫酸鎂0.01～1.0份；石膏粉1～3份；將以上成分混合后加水，混合物總量與水的份數比為1∶1～1.5；2)固體培養基接種將上述培養基料裝于容器中，料面壓實后用棉花塞封口，進行滅菌處理，滅菌條件為蒸汽壓力Pa＝1.2～1.5kg，溫度T＝110～120℃，保持時間t＝30～90分鐘；冷卻后接入少許食用菌的斜面菌種，于15～28℃條件下培養至菌絲發白至容器底部，為固體菌種；3)制備膠體營養液取去皮切塊馬鈴薯和新鮮南瓜泥中的一種或其混合物10～50份，麩皮2～10份，加水100～250份，煮沸后過濾取液體，加入硫酸鎂0.01～0.1份，磷酸二氫鉀0.5～3份，葡萄糖或蔗糖2～3份，吸水倍數＞200～1000倍的交聯型吸水材料0.1～2.0份，液體增稠劑1.0～5.0份，混合后裝于容器中封口，在蒸汽壓力Pa＝1.2～1.5kg，溫度T＝110～120℃下滅菌，保持時間t＝30～90分鐘；冷卻后備用；4)制備膠體菌種取固體菌種∶膠體營養液＝1∶1～50份，在無菌條件下，混合成均質狀，存放在除菌過濾容器內，于0～22℃下保存。
2.根據權利要求1所述的制備食用菌膠體菌種的方法，其特征是吸水倍數＞200～1000倍的交聯型吸水材料為聚丙烯酰胺和聚乙烯醇中的一種或其混合物。
3.根據權利要求1所述的制備食用菌膠體菌種的方法，其特征是所說的液體增稠劑為羧甲基纖維素、海藻酸鹽、200～300目的滑石粉、膨潤土和熱電廠粉煤灰中的一種或幾種混勻后的混合物。
4.根據權利要求1所述的制備食用菌膠體菌種的方法，其特征是所說的食用菌的斜面菌種為金針菇、靈芝、猴頭菇、草菇、平菇、滑菇、灰樹花、杏鮑菇或黑木耳。
全文摘要
本發明公開了制備食用菌膠體菌種的方法。利用食用菌固體發酵成熟后，經過添加具有生物相容性的菌體營養保護劑和液體增稠劑均質混合成一種膠體化的半流動液體菌。本發明方法制種速度快，操作簡便，成本低。制得的膠體菌種具有液體菌的優點，使用方便，發菌快，少污染，出菇集中，接種成活率高，且易于包裝運輸和貯藏。從根本上解決了長期以來食用菌液體種不易貯藏、不便運輸和不利于推廣應用技術難題，對實現食用菌工廠自動化、標準化返季節種植和連接分散種植戶為集約化、高效率優質生產及管理均帶來重大突破。
文檔編號C12N1/14GK101066029SQ20071006917
公開日2007年11月7日 申請日期2007年6月5日 優先權日2007年6月5日
發明者劉志強, 藏蕾, 劉曉曄 申請人:浙江大學