專利名稱：：卵巢細胞微囊的制作方法
技術領域：
：本發明屬于生物
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，具體涉及一種卵巢細胞微囊。技術背景卵巢是女性重要的生殖內分泌器官，有明顯的年齡性變化。卵巢功能的衰退始于30歲，并于絕經期開始，卵巢功能迅速下降，雌激素分泌銳減(絕經后雌激素水平可比高峰期下降90%),從而導致機體出現一系列器官功能紊亂現象，特別是與雌激素關系密切的心血管、骨骼、大腦和皮膚等，在絕經后容易發生疾病。隨著人類壽命的延長和生活水平的提高，人類生存的目標不僅是"活著"，而且要"活好"。因此臨床上使用激素替代療法糾正因卵巢功能衰退(卵巢早衰，更年期)造成的機體功能紊亂。激素替代療法能有效地預防因性激素分泌不足而引發的一些疾病(如骨質疏松、女性絕經后綜合征等)，但同時發現女性雌激素水平由于受下丘腦-腺垂體的調節，不僅有著明顯的周期性變化，而且還有明顯的個體差異，激素替代療法很難做到個體化。由于外源性雌激素在體內呈非生理性釋放，可產生一些較為嚴重的副反應，如增加心腦血管疾病的死亡率和乳腺癌、靜脈血栓等的發生率，因此，近年來對應用激素替代療法預防絕經前后婦女慢性病的方法出現了爭議。目前只有那些有絕經期癥狀和存在有與絕經相關的生活質量逆向改變的婦女，首選激素替代治療，并且使用最低的有效劑量和短療程治療。隨著器官移植技術的進一步成熟和完善，人們希望當機體性腺功能衰退時，進行異體性腺移植，將能還機體一個置身于自體神經內分泌調控之下，適合于宿主本身內分泌水平的有功能的器官。卵巢移植的目的是為卵巢早衰、雙側卵巢切除或絕經期婦女，提供一種內源性雌性激素。目前主要有卵巢自體移植、胚胎卵巢移植、同種異體移植。卵巢自體移植由于供體卵巢來源充足，無免疫排斥，手術操作簡單，臨床上主要用于卵巢原位發生病變需放化療的患者(卵巢組織冷凍用于自體異位移植已成為可能)。胚胎卵巢細胞有較強的分化能力，被移入異體內可生長發育至成熟，并有內分泌功能，而且還能接受上級器官-垂體激素的調控，雖然目前胚胎卵巢被認為是比較理想的供體，但仍存在排異反應和來源問題。同種異體移植可為供體來源提供又一渠道，但面臨的最大問題是免疫排斥反應。微囊技術起源于20世紀60年代，是組織工程的一個分支，是將外源性的細胞或組織包埋在半透性人工膜中進行體內移植，目的是通過微囊的免疫隔離作用，提高移植物在異體的存活率。釆用微囊包埋技術進行細胞固定和移植要求所制備的微囊需具有透過性，以保證囊內細胞分泌產生的特定因子可通過囊膜進入細胞外間隙。APA生物微膠囊被認為是較好的微囊制備材料，海藻酸鈉(ALG)是由海藻中提出的聚陰離子多糖，在多價陽離子如Ca"存在時形成凝膠。多聚賴氨酸(PLL)是聚陽離子大分子，與ALG可形成大分子復合物。目前已有胰島細胞、多巴胺細胞、甲狀旁腺等分泌含氮類激素細胞的微囊包裹及移植實驗取得可喜研究進展的報道，提示內分泌腺是微囊技術的適應組織，也證實微囊技術具有廣泛的應用前景。但雌激素的合成與分泌具有特殊性與復雜性，即需要卵泡膜細胞和卵泡顆粒細胞共同協作完成，并受下丘腦-垂體-性腺軸的調控，呈周期性分泌。體外培養卵巢細胞是否能持續性分泌雌激素，應用微囊技術將卵巢細胞微囊化后是否能持續性分泌雌激素，以及移植入小鼠腹腔后是否能持續性分泌雌激素，同時是否能有效地預防機體各個生命必需器官的衰退(這是當前的激素替代療法無法解決的難題)，國內外尚未見報道。
發明內容本發明的目的在于提供一種卵巢細胞微囊，實現補充體內性激素個性化；本發明的另一個目的在于提供上述卵巢細胞微囊的制備方法及應用。本發明的卵巢細胞微囊是應用海藻酸鈉-多聚賴氨酸-海藻酸鈉(APA)包裹卵巢細胞，制備成內含卵巢細胞的微囊。微囊中的卵巢細胞是卵巢組織去除卵細胞外的其余細胞，包括具有內分泌功能的卵巢顆粒細胞和卵泡膜細胞；未分化的卵巢內間充質細胞和結締組織細胞。APA卵巢細胞微囊為圓球型，表面光滑透明。微囊膜屬于生物半透膜，能阻止大分子物質進入膜內，小分子物質、細胞因子、性激素、02、C02等可以自由通過微囊膜。上述微囊內的卵巢細胞是取卵巢組織，剪碎后制備成細胞懸液，經體外增殖培養獲得。卵細胞在培養過程中自然去除。本發明的卵巢細胞微囊的制備方法包括如下步驟1)將經體外增殖培養后的卵巢細胞消化后制成細胞懸液；2)將步驟l)細胞懸液與1.5%(質量g/體積L)海藻酸鈉混合制成終密度為2xl(^個/ml細胞懸液。3)將細胞懸液滴入輕微攪動的1.1%(質量/體積)CaCl2中(20-25°C),使其形成凝膠珠，傾去CaCl2溶液，加入0.05%(質量/體積)多聚賴氨酸作用6min。4)用l呢CaCl2清洗凝膠珠2次，再加入0.15%海藻酸鈉，作用5min。5)先后用l呢CaCl2和生理鹽水清洗凝膠珠，加入0.05mol/L枸椽酸鈉(pH7.4,相對分子質量249.1),作用6min(液化囊心)，即得到卵巢細胞微囊。每個微囊直徑約2mm，含大約2xl(^個卵巢細胞。用生理鹽水清洗后，用培養液清洗數次，加入D/F12全培養液，37°。5%0)2培養箱培養，備用。或將清洗數次后的微囊進行凍存，待需要時，經融解后使用。卵巢是產生卵子和分泌性激素的器官，是腦垂體前葉分泌的促性腺激素的靶器官之一，它不僅參與生殖并維持性周期，還對機體的內分泌功能和新陳代謝起著重要的調節作用，在生殖生理研究中占有重要地位。卵巢在性周期和妊娠期均發生形態及生化變化。在卵巢發生這些變化的過程中，不僅卵泡和黃體的形態及功能發生改變，而且卵巢間質細胞的增殖及內分泌功能也發生改變。雌激素的合成與分泌具有特殊性與復雜性，即需要卵泡膜細胞和卵泡顆粒細胞共同協作完成，并受多種細胞因子及下丘腦-垂體-性腺軸的調控，呈周期性分泌。目前主要有卵巢自體移植、胚胎卵巢移植、同種異體移植，均為組織塊移植，尚未見分離卵巢細胞移植。實驗表明分離純化的卵泡膜細胞或卵泡顆粒細胞培養，細胞很快死亡。用分離的混合卵巢細胞移植，可以制成卵巢細胞微囊，而且保證了卵泡膜細胞和卵泡顆粒細胞的相互作用，并且移植入體內后，可受下丘腦-垂體分泌激素的調節，和細胞因子的作用，卵巢間質細胞可以不斷分化補充形成具有分泌功能的卵泡膜細胞和卵泡顆粒細胞。因而微囊化的卵巢細胞具有一段時間分泌性激素的功能。本發明的卵巢細胞微囊可以使用種植/注入或移植的方法移入體內。其可以種植在異體的各個部位如腹腔、四肢和皮下組織內；或者移植到異體的各種組織內，如結締組織和肌組織內。將本發明的微囊進行異體種植，其可在體內不斷地分泌性激素，并且其分泌功能可置身于受體自身的神經內分泌的調控之下，達到個性化補充性激素分泌不足的目的。具體地說，其如下功能1)治療卵巢早衰；2)防治女性更年期綜合征；3)防治機體的退行性病變包括①骨質疏松；②心血管疾患(包括高血壓)；③調節胰島素和胰高血糖素的分泌；④老年性癡呆；老年性尿失禁；⑥泌尿生殖系統萎縮等；4)女性美容。圖l是體外培養的卵巢細胞；圖2是用APA技術制備的卵巢細胞微囊；圖3是小鼠腹腔內微囊狀態；圖4是正常小鼠脛骨松質骨結構；圖5是正常小鼠脛骨上段成骨細胞(osteoblast,OB)、骨細胞結構；圖6是去卵巢小鼠脛骨松質骨結構；圖7是去卵巢小鼠脛骨上段OB、骨細胞結構；圖8是移植組小鼠脛骨松質骨結構；圖9是移植組小鼠脛骨上段OB、骨細胞結構；圖IO是正常小鼠脛骨骺軟骨細胞堿性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)的表達；圖ll是去卵巢小鼠脛骨骺軟骨細胞ALP的表達；圖12是移植組小鼠脛骨骺軟骨細胞ALP的表達；圖13是正常小鼠脛骨上段軟骨細胞、OB和破骨細胞(osteoclast，OC)的間質金屬蛋白酶-9(matrixmetalloproteinases,MMP-9)表達；圖14是移植組小鼠脛骨上段軟骨細胞、OB和OC的MMP-9表達；圖15是去卵巢小鼠脛骨上段軟骨細胞、OB和OC的MMP-9表達；圖16是胰腺HE染色，其中A為正常對照組，B為去卵巢組，C為微囊移植組；圖17是免疫組織化學標記高血糖素，其中A為正常對照組，B為去卵巢組，C為微囊移植組；圖18免疫組織化學標記胰島素，其中A為正常對照組，B為去卵巢組，C為微囊移植組；圖19免疫組織化學標記胰島素受體-a,其中A為正常對照組，B為去卵巢組，C為微囊移植組；圖20免疫組織化學標記胰島素受體底物II，其中A為正常對照組，B為去卵巢組，C為微囊移植組。具體實施方式下面是實施例用于對本發明的進一步說明，但不用來限制本發明的范圍。實施例l卵巢細胞的離體培養無菌條件下取小鼠雙側卵巢，去除周圍脂肪組織，冷PBS沖洗，剪碎卵巢組織，加入消化液(0.2%膠原酶1與0.25%胰蛋白酶，以1:1的比例混合)，置于37"C恒溫水洛搖床消化，30min后加入含10呢FBSD/F12培養液終止消化，179g離心10min，去除上清液，以無血清培養液清洗2次(離心，179gl0min)，輕輕吹打，制成細胞懸液，經60目細胞篩過濾，濾液以lxl(^的密度接種于25cir^培養瓶，加入D/F12(HyClone公司)全培養液(D/F12培養液內添加10%FBS，1%青-鏈霉素，pH7.2~7.4)，置于37°C5%C02培養箱培養。待細胞長滿融合后，以0.25%胰蛋白酶與0.02%EDTA1:1混合消化液消化，將消化后的細胞懸液繼續培養。實施例2微囊化卵巢細胞的制備將傳12代的卵巢細胞(其內不含生殖細胞)與1.5%海藻酸鈉混合制成細胞懸液，細胞終密度為2x106。用4號針頭將細胞懸液滴入輕微攪動的1.1免CaCl2中，使其形成凝膠珠，加入0.05%多聚賴氨酸作用6min。1%CaCl2清洗凝膠珠2次，再加入0.15%海藻酸鈉，作用5min。先后用1%CaCl2和生理鹽水清洗凝膠珠，加入0.05mol/L枸椽酸鈉(pH7.4，相對分子質量249.1)，作用6min液化囊心。生理鹽水清洗后，用培養液清洗數次，加入D/F12全培養液，37匸5%(302培養箱培養，待用。每個微囊直徑約2mm,含大約2><104個卵巢細胞。實施例3微囊化卵巢細胞內分泌功能的測定應用放射免疫檢測方法(使用天津九鼎醫學生物工程有限公司孕酮、雌激素放射免疫分析試劑盒，按照說明書進行操作)測定體外培養的卵巢細胞和微囊化卵巢細胞分泌的性激素水平。結果體外培養的卵巢細胞(圖l)有內分泌功能，微囊化卵巢細胞(圖2)的分泌量與同期體外培養的卵巢細胞相比沒有差異(表1),說明此微囊的通透效果良好，微囊內卵泡膜細胞和卵泡顆粒細胞仍能繼續維持協同作用，合成和分泌雌激素、孕激素。將包入微囊內的卵巢細胞破壁再培養，從微囊內釋放的卵巢細胞仍能迅速貼壁，生長良好，也表明卵巢細胞在APA微囊內可以成活。表i體外培養卵巢細胞與微簾化卵巢細胞培養液中E2和孕酮值比較(x±s)組另u雌二醇(ng.i;1)孕酮(JAg.L-1)培養組190.56±90.67187.40±33.17微囊組133.52±15.43*158.26±40.57**P>0.05vs培養組實施例4微囊化卵巢細胞的體內移植及內分泌功能檢測微囊化卵巢細胞的體內移植摘除小鼠卵巢制成去卵巢小鼠模型，一組常規飼養3個月，造成骨質疏松，另一組去卵巢后即用微囊化的卵巢細胞移植入小鼠腹腔，設正常組作對照。術后(去卵巢組、微囊化的卵巢細胞移植組)90d，斷頭取血處死所有動物。觀察腹腔內微囊化卵巢細胞的生長狀態。內分泌功能的測定應用放射免疫檢測方法(使用天津九鼎醫學生物工程有限公司孕酮、雌激素放射免疫分析試劑盒，按照說明書操作)測定小鼠血清雌二醇(E2)水平。表2小鼠血清E2放射免疫檢測結果(^±*)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>結果腹腔為自然生理環境，體液條件適合細胞生長，微囊化的卵巢細胞在移植鼠腹腔中的生長狀態(圖3)和小鼠血清Ea濃度(表2),說明微囊壁有良好的通透性，微囊化的卵巢細胞在移植鼠體內仍能分泌雌激素，囊內細胞分泌產生的特定因子可透過囊膜進入受體細胞外間隙，同時囊內細胞也可能受到受體體液因子的作用。實施例5體內移植徵囊化卵巢細胞的效果檢測預防骨質疏松的作用實驗方法取小鼠右側脛骨，經HE染色進行組織學觀察，VanGieson染色觀察骨基質中膠原纖維變化，免疫組織化學檢測ALP和MMP-9的表達，應用圖像分析儀行脛骨上段骨小梁形態計量學測定及分析免疫組織化學染色結果；取小鼠左側股骨和第五腰推體，用萬能電子實驗機進行骨生物力學測試；將左側股骨水解，酶標儀測水解液羥脯氨酸、鈣、磷含量(使用南京建成生物工程研究所羥脯氨酸、鈣、磷含量測定試劑盒，按照說明書操作)。實驗結果HE染色脛骨形態(圖4-9)計量學測定(表3)，骨小梁體積、平均骨小梁厚度去卵巢組顯著低于正常組；移植組與正常組之間無差異。平均骨小梁間距去卵巢組顯著高于正常組；移植組與正常組之間無差異。結點末端比去卵巢組顯著低于正常組；移植組低于正常組。免疫組織化學檢測結果脛骨骺軟骨細胞ALP(圖10-12)的平均光密度值(表4),移植組與正常組之間無差異，去卵巢組低于正常組；MMP-9陽性(圖13-15)軟骨細胞和成骨細胞與破骨細胞的比值(表5)，移植組與正常組之間無差異，去卵巢組顯著低于正常組。小鼠股骨三點彎曲試驗的生物力學參數(表6)顯示各組間、組內均數無差異。小鼠腰推壓縮實驗的生物力學參數(表7)顯示，破壞載荷去卵巢組顯著低于正常組，移植組低于正常組；彈性模量去卵巢組低于正常組，移植組與正常組之間無差異；能量吸收去卵巢組顯著低于正常組，移植組與正常組之間無差異。小鼠股骨羥脯氨酸、鈣、磷測定結果(表8)顯示，去卵巢組低于正常組，移植組與正常組之間無差異。表3各組別小鼠右側脛骨上段骨小梁形態計量結果(i±s)組另'J骨小梁體積(％)平均骨小梁厚度(Hm)平均骨小梁間距(nm)結點末端比正常組去卵巢組移植組11.60±3.394.85±1.23***9.81±2.0749.95±8.1330.18±9.51***52.98±6.74150.71±26.114.88±2.05235.92±43.38***0.61±0.26***142.99±22.632.91±1.83*P〈0.05vs正常組，***P<0.001vs正常組表4各組別小鼠脛骨骺軟骨細胞ALP平均光密度值的比較(^土s)組別正常組去卵巢組移植組ALP0.798±0.0710.740±0.0170.755±0.040*P<0.05vs正常組表5各組別小鼠脛骨上段MMP-9陽性軟骨細胞、OB與OC個數的比值(i±s)組別正常組去卵巢組移植組軟骨細胞和OB/OC8.5±1.8523.38±1.302***8.38±2.204***P<0.001vs正常組表6各組別小鼠左側股骨三點彎曲試驗結果(^±s)組別最大載荷(N)彈性模量(GPa)彈性載荷(N)剛度系數(KN)正常組19.00±4.847.90±3.0116.00±33415.60±5.94~~去卵巢組18.50±6.21*7.24±2.49*14.88±3.80*14.28±4.92*移植組18.13±2.70*7,54±3.07*15.38±2.07*13.44±5.49**P>0.05vs正常組表7各組別小鼠第5腰椎壓縮試驗的生物力學參數結果(；±s)H1破壞載荷(N)彈性模量(MPa)~最大能量吸收(J/mm3)正常組去卵巢組74.88±11.2248.13±10.60*"148.18±66.2498.63±41.49*29.93±7.9618.71土5.26"移植組62.50±8.26*_149.61±29.43_26.66±4.44_*P<0.05vs正常組，**P<0.01vs正常組，***P<0.001vs正常組表8各組別小鼠左側股骨干重、骨礦物質和有機質含量(^土s)組別干重(g)錦(mmol/g)磷(mmol/g)羥脯氨酸(mgT^T正常組0.060±0.0080.622±0.1200.405±0.1062艦±0.276去卵巢組0.064±0.0050.498±0.073*0.280±0.087*1.656±0.19*移植組0.061±0.0090.563±0.0930.385±0.0781.925±0.292*P<0.05vs正常組實施例6對胰島細胞(a細胞與e細胞)功能活性的影響實驗方法處死小鼠取出胰腺組織，經Bouin液固定，制成石蠟切片，進行HE染色，用抗胰島素單克隆抗體，兔抗胰高血糖素多克隆抗體，兔抗胰島素受體-(x多克隆抗體，兔抗胰島素受體底物-2多克隆抗體進行免疫組織化學染色。光學顯微鏡行組織病理學觀察，采用圖像分析儀對染色陽性部位進行光密度值的測量。實驗結果HE染色去卵巢組小鼠胰腺外分泌部細胞嗜酸性染色較正常對照組增強，細胞周圍的嗜堿性物質減少甚至消失，移植組與對照組無明顯差別(圖16)。免疫組織化學染色高血糖素、胰島素、胰島素受體-a及胰島素受體底物-2的陽性表達產物均呈棕黃色顆粒狀。高血糖素陽性細胞主要分布在胰島周圍。胰島素，胰島素受體-a及胰島素受體底物-2的陽性細胞主要分布在胰島中央部(圖17-20)。平均光密度值測量結果顯示(表912):去卵巢組胰高血糖素、胰島素顯著高于對照組，微囊移植組與對照組比較無明顯差異；去卵巢組胰島素受體-a和胰島素受體底物-2顯著低于對照組，移植組與對照組比較無明顯差異。*尸>0.05表示差異無統計學意義，**尸<0.01為差異有顯著統計學意義。表9各組高血糖素陽性產物平均光密度值結果(；±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>移植組**移植組0.965±0.0947去卵巢組*'表10各組胰島素陽性產物平均光密度值結果(^±s)組另寸胰島素OD值比較組別表11各組胰島素受體-a陽性產物平均光密度值結果(^土s)組別胰島素受體-aOD值比較組別正常組1.099±0.0977去卵巢組0.929±0.1419移植組1.035±0.0528表12各組胰島素受體底物一2陽性產物平均光密度值結果(；±s)組別胰島素受體底物-20D值比較組別正常組1.135±0.0692去卵巢組0.891±0.1175移植組1.127±0.1039結論微囊化的異體卵巢細胞在去卵巢小鼠腹腔內能夠生存，并且具有分泌性激素的功能，能減緩骨量丟失，對防治骨質疏松起積極的作用；同時能影響胰島a細胞和p細胞的生物活性，調節胰島胰島素和胰高血糖素的分泌。去卵巢組**移植組*正常組**移植組***正常組*去卵巢組***去卵巢組**移植組*正常組**移植組**正常組*去卵巢組**正常組0.822±0.0903去卵桌組'去卵巢組1.0234±0.0547移植組0.858±0.0838去卵巢組^b組組1植常植常移正移正權利要求1.一種卵巢細胞微囊，其特征在于，所述微囊是應用海藻酸鈉-多聚賴氨酸-海藻酸鈉包裹卵巢細胞制備成的微囊。2、如權利要求l所述的卵巢細胞微囊，其中所述卵巢細胞包括卵巢顆粒細胞、卵泡膜細胞、間充質細胞和結締組織細胞。3、如權利要求1或2所述的卵巢細胞微囊，其中所述卵巢細胞通過如下方法獲得取卵巢組織，制成細胞懸液，經體外增殖培養后獲得。4、如權利要求3所述的卵巢細胞微囊，其中所述的卵巢細胞通過如下方法獲得取卵巢組織，剪碎后，加入消化液置于37"C恒溫水浴搖床消化，30min后加入含10呢FBS培養液終止消化，179g離心10min，去除上清液，以無血清培養液清洗后制成細胞懸液，經60目細胞篩過濾，以106的密度接種于培養瓶內，加入D/F12全培養液，置于37。C5%0)2培養箱培養，待細胞長滿融合后，以0.25%胰蛋白酶與0.02%EDTA1:1混合消化液消化，將消化后的細胞重新制備成細胞懸液，進行繼代增殖培養。5、一種制備權利要求14所述卵巢細胞微囊的方法，其包括如下步驟1)將經體外增殖培養后的卵巢細胞消化后重新制備成細胞懸液；2)將步驟1)的細胞懸液與1.5%海藻酸鈉混合制成終密度為2xl(^個/ml的細胞懸液。3)將細胞懸液滴入輕微攪動的1.1%CaCl2中，使其形成凝膠珠，加入0.05%多聚賴氨酸作用6min。4)用l呢CaCl2清洗凝膠珠2次，再加入0.15%海藻酸鈉，作用5min。5)先后用l呢CaCl2和生理鹽水清洗凝膠珠，加入0.05mol/L枸椽酸鈉pH7.4，作用6min。6、如權利要求5所述的方法，其中步驟l)所述卵巢細胞通過如下方法獲得取卵巢組織，剪碎后，加入消化液置于37匸恒溫水浴搖床消化，30min后加入含10呢FBS培養液終止消化，179g離心10min,去除上清液，以無血清培養液清洗后制成細胞懸液，經60目細胞篩過濾，以106的密度接種于培養瓶內，加入D/F12全培養液，置于37。C5%<:02培養箱培養，待細胞長滿融合后，以0.25%胰蛋白酶與0.02%EDTA1:1混合消化液消化，將消化后的細胞重新制備成細胞懸液，進行繼代增殖培養。7、如權利要求1~2任一項所述的卵巢細胞微囊在制備治療卵巢早衰生物制劑中的應用。8、如權利要求1~2任一項所述的卵巢細胞微囊在制備防治女性更年期綜合征的生物制劑中的應用。9、如權利要求1~2任一項所述的卵巢細胞微囊在制備防治機體的退行性病變的生物制劑中的應用。10、如權利要求1~2任一項所述的卵巢細胞微囊在女性美容的生物制劑中的應用。全文摘要本發明提供了一種卵巢細胞微囊，其是應用海藻酸鈉-多聚賴氨酸-海藻酸鈉(APA)包裹卵巢細胞，制備成內含卵巢細胞的微囊。微囊中的卵巢細胞包括具有內分泌功能的卵巢顆粒細胞和卵泡膜細胞；未分化的卵巢內間充質細胞和結締組織細胞。將本發明的微囊進行異體種植，微囊內的內分泌細胞可在體內不斷地分泌性激素，并且其分泌功能可置身于受體自身的神經內分泌的調控之下，達到個性化補充性激素分泌不足的目的。應用卵巢細胞微囊異體種植可對機體退行性病變起到積極地防治作用。實驗證明能減緩骨量丟失，對防治骨質疏松起積極的作用；同時能影響胰島α細胞和β細胞的生物活性，調節胰島素和胰高血糖素的分泌。文檔編號C12N5/08GK101229192SQ20071006311公開日2008年7月30日申請日期2007年1月26日優先權日2007年1月26日發明者史小林,梁元晶,靜翁,晴許,欣路,郭曉霞申請人:首都醫科大學