一種微生物轉(zhuǎn)化生產(chǎn)胱氨酸的方法

專利名稱：一種微生物轉(zhuǎn)化生產(chǎn)胱氨酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于氨基酸的生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域，涉及通過微生物催化法底物前體得到的半胱氨酸，進(jìn)一步氧化生產(chǎn)胱氨酸的方法。
背景技術(shù)：
L-半胱氨酸和L-胱氨酸是含硫的基本氨基酸，由于其分子中含有活性的巰基，具有許多重要的生理功能，如可以增強(qiáng)肝功能、解除苯中毒、化痰、促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)和防止食品氧化等，廣泛地用于醫(yī)藥、食品添加劑以及化妝品等領(lǐng)域。
L-半胱氨酸是非發(fā)酵法生產(chǎn)的氨基酸，不能像谷氨酸那樣用常用的碳、氮源和其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)通過微生物發(fā)酵來生產(chǎn)；同時(shí)，由于L-半胱氨酸的巰基活性強(qiáng)，化學(xué)合成步驟繁多，其產(chǎn)品為DL型外消旋體，拆分后才能得到L-半胱氨酸，因此很難化學(xué)合成。傳統(tǒng)的生產(chǎn)方法一直沿用抽提法，即將毛發(fā)用酸(或堿)加熱水解、中和、脫色、過濾、結(jié)晶獲得胱氨酸，再經(jīng)電解后得到L-半胱氨酸。毛發(fā)中胱氨酸，含量約為14％，國(guó)外目前毛發(fā)水解法的最高收率為9至10％，國(guó)內(nèi)約為4.5至5.5％。用毛發(fā)酸解制取L-半胱氨酸，收率低，能耗高，水解過程產(chǎn)生難聞氣體及大量廢酸，環(huán)境污染嚴(yán)重；化學(xué)合成法制取L-半胱氨酸合成步驟繁多，兩種方法均有弊端。由于微生物的培養(yǎng)和酶的分離技術(shù)成熟，微生物酶法轉(zhuǎn)化所需要的底物來源易得、工藝簡(jiǎn)單，對(duì)環(huán)境污染的程度低。隨著L-半胱氨酸用途的開拓，世界需求量年年增長(zhǎng)，用微生物酶法轉(zhuǎn)化生產(chǎn)L-半胱氨酸越來越引起人們的重視。因此，用微生物酶法轉(zhuǎn)化合成氨基酸和某些藥物將是具有廣泛應(yīng)用前景的新工藝路線。
1978年Sano用嗜硫氮雜環(huán)戊烯假單胞菌(Pseudomonas thiazolinophilum)AJ3854菌株產(chǎn)生的胞內(nèi)酶，酶法水解DL-2-氨基-Δ2噻唑啉-4羧酸(DL-2-Amino-Δ2thiazoline-4-CarboxylicAcid，ATC)制取L-半胱氨酸獲得成功，從40g/L ATC得到31.4g/L L-半胱氨酸，轉(zhuǎn)化率為78.5％。
2002年日本的Toshikazu和Shiba報(bào)道了假單胞菌BS菌株由DL-ATC經(jīng)酶法轉(zhuǎn)化生成L-半胱氨酸的關(guān)鍵基因。它是通過L-ATC水解酶水解ATC噻唑環(huán)中C2-S單鍵，以N-氨甲酰-L-半胱氨酸(L-NCC)為轉(zhuǎn)化的中間產(chǎn)物，再經(jīng)N-氨甲酰-L-半胱氨酸氨甲酰水解酶催化生成L-半胱氨酸，稱為N-代途徑(L-NCC途徑)圖1(B途徑)。
1997年韓國(guó)Ryu報(bào)道了以DL-ATC為底物，微生物酶法轉(zhuǎn)化生成L-半胱氨酸的固定化工藝，推測(cè)此轉(zhuǎn)化途徑涉及三種酶，不同于N-代途徑，可能為“S-代途徑”。
不論由發(fā)酵法、酶催化法、合成法或其它任何方法得到的含半胱氨酸反應(yīng)液，由于反應(yīng)液的組成化合物復(fù)雜，并且半胱氨酸在水中的溶解度極高，在其半胱氨酸分離過程中，一般是先將最初得到的半胱氨酸進(jìn)行分離和提純，然后與強(qiáng)酸如鹽酸或?qū)妆交撬岱磻?yīng)而生成相應(yīng)的鹽。這些方法一般流程都復(fù)雜，得到的半胱氨酸產(chǎn)率低。所以要從復(fù)雜的發(fā)酵液中，分離出高純度的半胱氨酸是困難的。但由于半胱氨酸相當(dāng)容易氧化成胱氨酸，利用這一特性，可以先將反應(yīng)液中的半胱氨酸轉(zhuǎn)化成胱氨酸，使其沉淀析出，然后再將分離出的胱氨酸電解還原成半胱氨酸，從而得到純的半胱氨酸。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的是解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述問題，提供一種在以惡臭假單胞菌TS-1138全細(xì)胞為酶源，酶法催化DL-ATC合成L-半胱氨酸，并在氧化劑的存在下氧化水溶液中的半胱氨酸成胱氨酸的方法。
本發(fā)明自行分離獲得一株惡臭假單胞菌TS-1138菌株(Pseudomonas putida TS-1138)，通過相關(guān)酶的分離純化等初步研究表明，該菌株以S-氨甲酰-L-半胱氨酸為中間產(chǎn)物(L-SCC)，由S-代途徑(L-SCC途徑)酶法合成L-半胱氨酸。合成路線見圖1(A途徑)。
其中所述的惡臭假單胞菌TS1138(Pseudomonas putida TS-1138)，已于2007年1月17日保藏于“中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心”(北京市海淀區(qū)中關(guān)村北一條13號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所)，保藏號(hào)為CGMCC No.1920。
如圖1所示，TS-1138是經(jīng)過途徑A，將ATC轉(zhuǎn)化為L(zhǎng)-半胱氨酸，其中有3種酶進(jìn)行協(xié)同催化作用ATC消旋酶(ATC racemase)、L-ATC水解酶(L-ATC hydrolyse)和S-氨甲酰-L-半胱氨酸酰胺水解酶(S-carbomyl-L-cysteine amidohydrolase)。ATC消旋酶催化拆分DL-ATC生成L-ATC；L-ATC水解酶水解ATC噻唑環(huán)中的C＝N雙鍵，生成S-氨甲酰-L-半胱氨酸(L-SCC)中間產(chǎn)物；再經(jīng)S-氨甲酰-L-半胱氨酸酰胺水解酶(L-SCC酰胺水解酶)催化生成終產(chǎn)物L(fēng)-半胱氨酸。
本發(fā)明提供的微生物轉(zhuǎn)化生產(chǎn)胱氨酸的方法包括(1)在假單胞菌TS-1138全細(xì)胞為酶源的情況下，酶法催化轉(zhuǎn)化底物ATC得到L-半胱氨酸水溶液。在所述的轉(zhuǎn)化反應(yīng)中，TS-1138菌體用量一般占轉(zhuǎn)化總體系重量百分比為的1％至25％，最佳為8％。
(2)所述的酶法催化ATC反應(yīng)過程中，底物ATC的終濃度為0.1％至1.5％，最佳為0.4％。
(3)所述的ATC轉(zhuǎn)化反應(yīng)過程中以羥胺為脫巰基酶的抑制劑，有效地控制L-半胱氨酸的分解，所用羥胺的終濃度應(yīng)為0.5mM至3.0mM，最好為1.5mM。
(4)采用氧化方式將所述的溶液中的半胱氨酸轉(zhuǎn)化成胱氨酸，可使用二甲亞砜(DMSO)氧化法、雙氧水氧化法或空氣氧化法，其中DMSO是最有效的半胱氨酸氧化劑。DMSO氧化法是在pH為1時(shí)，添加半胱氨酸摩爾濃度的10倍的DMSO，室溫條件下攪拌8小時(shí)，可實(shí)現(xiàn)95％以上的半胱氨酸氧化為胱氨酸。
(5)所述的全細(xì)胞催化法的特征是能夠連續(xù)進(jìn)行，即通過離心或膜過濾的方法分離酶源細(xì)胞及反應(yīng)液，使同一批細(xì)胞能夠連續(xù)參加轉(zhuǎn)化反應(yīng)，其中可保持5次以上ATC轉(zhuǎn)化為胱氨酸的轉(zhuǎn)化率在90％以上。
(6)得到的胱氨酸溶液通過濃縮，調(diào)節(jié)pH為5，胱氨酸以晶體形式析出，再通過過濾或抽濾的方式可得到胱氨酸晶體。
所述的菌體細(xì)胞酶源是通過發(fā)酵的方法得到的，其中發(fā)酵條件為溫度28至30℃，pH 6.2至6.8，轉(zhuǎn)速350至450r/min，通氣量150至300L/h。
在本發(fā)明實(shí)例中，采用Gaitonde法來測(cè)定半胱氨酸的含量，具體方法如下精確稱取一定量L-半胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)品，溶于一定量0.05M HCl中，制備終濃度為500mg/L的標(biāo)準(zhǔn)母液，進(jìn)一步用蒸餾水將上述母液分別稀釋為10，20，……，100mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液。取一定量的標(biāo)準(zhǔn)溶液或待測(cè)樣品溶液的稀釋液0.2mL，加入0.2mL冰醋酸，再加入0.2mL酸性茚三酮試劑，于沸水浴中反應(yīng)10min，然后立即在冷水中冷卻，最后加入2.4mL酒精，使總體積為3mL。放置10min后，于560nm下測(cè)定其吸光度，以濃度和吸光度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過該標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出未知溶液中的半胱氨酸濃度。
在本發(fā)明實(shí)例中還涉及到胱氨酸濃度的分析方法先將含有胱氨酸的溶液稀釋到100mg/L，并與等體積的2mM 1，4-二硫蘇糖醇溶液混合，添加2N的NaOH以調(diào)節(jié)pH值到8.0至8.5，在室溫下靜置1小時(shí)，使胱氨酸完全還原成半胱氨酸，再通過上述方法測(cè)定溶液中總的半胱氨酸的濃度。并同時(shí)分析溶液中未經(jīng)1，4-二硫蘇糖醇還原時(shí)的半胱氨酸含量，再通過總的半胱氨酸的濃度減去還原前的半胱氨酸的濃度，得到胱氨酸的濃度。
在本發(fā)明實(shí)例中，L-半胱氨酸轉(zhuǎn)化率計(jì)算公式如下C(%)=M2·NM1×100%=W2MW2·NW1MW1×100%=W2121·NW1146×100%]]>其中C——ATC轉(zhuǎn)化為L(zhǎng)-半胱氨酸的摩爾轉(zhuǎn)化率；N——茚三酮反應(yīng)的稀釋倍數(shù)；MW1——ATC的分子量；M1——轉(zhuǎn)化反應(yīng)液中的ATC的摩爾濃度；W1——轉(zhuǎn)化反應(yīng)液中的ATC的質(zhì)量濃度；MW2——L-半胱氨酸的分子量；
M2——茚三酮反應(yīng)稀釋液中L-半胱氨酸的摩爾濃度；W2——茚三酮反應(yīng)稀釋液中L-半胱氨酸的質(zhì)量濃度；本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和積極效果通常在裂解菌體利用細(xì)胞內(nèi)的胞內(nèi)酶，酶法催化底物的轉(zhuǎn)化反應(yīng)中，酶的穩(wěn)定性差、易失活，一般不能重復(fù)使用；而固定化的方法步驟比較繁雜，而且或多或少對(duì)酶活力有一定影響。而本發(fā)明方法以惡臭假單胞菌TS-1138細(xì)胞為酶源，不需要胞內(nèi)酶的分離與精制，并以羥胺為抑制劑，直接利用菌體細(xì)胞轉(zhuǎn)化底物ATC得到L-半胱氨酸水溶液，并進(jìn)一步通過氧化方式將所述的半胱氨酸轉(zhuǎn)化成胱氨酸的方法。該方法直接利用細(xì)胞為酶源直接催化底物，取締了固定化酶的方法，可多次連續(xù)使用，其中可保持5次以上ATC轉(zhuǎn)化為半胱氨酸的轉(zhuǎn)化率在90％以上。

圖1微生物轉(zhuǎn)化ATC合成L-半胱氨酸的代謝途徑示意圖；圖2羥胺濃度對(duì)轉(zhuǎn)化率的影響曲線。
具體實(shí)施方式實(shí)施例1假單胞菌TS-1138菌懸液的制備從平板上挑取一環(huán)假單胞菌TS-1138接入50mL種子培養(yǎng)基中(葡萄糖20g，ATC 3g，玉米漿5g，尿素3g，NaCl 1.5g，MnSO4·H2O 0.1g，K2HPO43g，MgSO4·7H2O 0.5g，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.01g，定容至1L，pH 7.5)，28℃ 120r/min培養(yǎng)16小時(shí)后，以1％接種量轉(zhuǎn)接到7L產(chǎn)酶培養(yǎng)基中(葡萄糖30g，ATC 4g，玉米漿1g，尿素3g，NaCl 1.5g，MnSO4·H2O 0.1g，K2HPO43g，MgSO4·7H2O0.5g，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.01g，定容至1L，pH 7.5)，在10L發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵條件如下溫度29℃；pH6.5；轉(zhuǎn)速400r/min；通氣量200L/h。發(fā)酵14至16小時(shí)后，離心，收集菌體，用甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液(pH8.0)洗滌菌體1至2次，稱得菌體濕重為180g。稱取一定量的上述菌體，加入甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液，制得終濃度為25％的菌懸液。
實(shí)施例2抑制劑羥胺對(duì)提高半胱氨酸轉(zhuǎn)化率的影響在100mL三角瓶中加入0.6％的ATC溶液(含有0.6％ATC，0.6％ K2HPO4，pH 7.5至8.0)20mL，加入終濃度為0.5，1.0，1.5，2.0，3.0，5.0，8.0，10.0mM不同劑量的羥胺，再向每個(gè)三角瓶中加入上述實(shí)施例1的TS-1138菌懸液10mL，混勻。37℃恒溫，反應(yīng)2.5小時(shí)。取一定量的反應(yīng)液，離心，去沉淀，稀釋到一定濃度，采用Gaitonde法來測(cè)定半胱氨酸的含量，以不加菌懸液的反應(yīng)液作空白對(duì)照。與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)比，計(jì)算出半胱氨酸量，并計(jì)算出相應(yīng)的轉(zhuǎn)化率，結(jié)果見圖2。
如圖2結(jié)果所示，在沒有羥胺為抑制劑的條件下，ATC轉(zhuǎn)化為半胱氨酸的摩爾轉(zhuǎn)化率為65％左右，在底物中加入0.5，1.0，1.5，2.0，3.0mM羥胺后，轉(zhuǎn)化率可以達(dá)到80％以上。特別當(dāng)羥胺濃度為1.0，1.5和2.0mM時(shí)，轉(zhuǎn)化率可以保持在90％以上。最佳為1.5mM，其轉(zhuǎn)化率可以達(dá)到95.7％。
實(shí)施例3不同的氧化條件對(duì)制備胱氨酸的影響為考察DMSO、H2O2以及空氣對(duì)半胱氨酸的氧化能力。本實(shí)驗(yàn)在0.1M L-半胱氨酸水溶液(pH 1)中，分別加入不同的劑量的DMSO、H2O2以及通入空氣，在室溫下氧化8小時(shí)后，分別測(cè)定L-半胱氨酸的氧化率及胱氨酸的得率，結(jié)果如表1所示。
表1不同氧化劑氧化半胱氨酸的用量考察
由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，DMSO和H2O2均可以有效的氧化半胱氨酸。當(dāng)DMSO和H2O2的濃度分別在0.8M及0.5M以上時(shí)，半胱氨酸的氧化率均可以達(dá)到90％以上。其中DMSO可以將大部分半胱氨酸氧化為胱氨酸，半胱氨酸的氧化與胱氨酸的生成呈線性關(guān)系。由于H2O2為強(qiáng)氧化劑，即使半胱氨酸的氧化率接近100％，而生成的胱氨酸會(huì)進(jìn)一步被氧化生成磺基丙氨酸，因此胱氨酸生成率很低。因此對(duì)于濃度為0.1M的半胱氨酸，所用的氧化劑以DMSO為最好，最佳反應(yīng)濃度為1.0M。
實(shí)施例4DMSO氧化條件的考察為考察DMSO氧化時(shí)間、濃度與半胱氨酸氧化率的關(guān)系。本實(shí)驗(yàn)在0.1M L-半胱氨酸水溶液(pH 1)中，分別加入0.5，1.0，1.5M不同的劑量的DMSO，在室溫下氧化2至12小時(shí)后，分別測(cè)定L-半胱氨酸的氧化率及胱氨酸的得率，結(jié)果如表2所示。
表2DMSO氧化半胱氨酸條件的考察
如表2所示，使用0.5，1.0，1.5M的DMSO氧化8小時(shí)以后，半胱氨酸的氧化率及胱氨酸得率均沒有明顯的提高，證明在8小時(shí)時(shí)基本上已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了半胱氨酸的完全氧化。而在2至6小時(shí)內(nèi)，1.5M DMSO的氧化率明顯高于1.0M。但隨著時(shí)間延長(zhǎng)，高濃度的氧化優(yōu)勢(shì)漸漸失去，因此，使用1.0M DMSO作為半胱氨酸的氧化劑，在室溫條件下氧化0.1M的半胱氨酸，氧化8小時(shí)為最佳時(shí)間。
實(shí)施例5TS-1138菌體細(xì)胞的使用次數(shù)與胱氨酸轉(zhuǎn)化率的關(guān)系在一個(gè)內(nèi)容積為500mL并裝有攪拌器的容器中，分別加入含有0.6％ ATC，0.6％K2HPQ4和1.5mM羥胺的水溶液300mL，以及含有25％TS-1138濕菌體的150mL菌懸液。用5％的氫氧化鈉水溶液調(diào)整pH值至7.5至8.0，置于37℃恒溫水浴中，攪拌反應(yīng)2.5小時(shí)。
反應(yīng)完成后，在4℃條件下12000rpm離心15分鐘后，將固液分離，收集沉淀作為酶源細(xì)胞，用于下次反應(yīng)。上清液為含有半胱氨酸的混合液。用濃鹽酸調(diào)整pH至1.0左右，再添加DMSO使終濃度達(dá)到1.0M，室溫下攪拌8小時(shí)。用2N的氫氧化鈉水溶液調(diào)整溶液pH值至5.0，使胱氨酸析出，過濾干燥后得胱氨酸粉末。
取上述沉淀后的TS-1138細(xì)胞，以150mL甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液重懸，再加入到上述同樣的300mL含有0.6％ATC，0.6％磷酸氫二鉀和1.5mM羥胺的溶液中，調(diào)整pH值7.5至8.0，37℃水浴中繼續(xù)反應(yīng)2.5小時(shí)，以下過程同上。離心后沉淀作為酶源可再次反應(yīng)，液相可用于獲得胱氨酸。
同一批菌體連續(xù)反應(yīng)8次，分別測(cè)定反應(yīng)過程中的L-半胱氨酸的轉(zhuǎn)化率和胱氨酸的收率。如表3所示，前6次ATC轉(zhuǎn)化成L-半胱氨酸的轉(zhuǎn)化率均可以在95％以上，胱氨酸的收率也可以保持在90％以上。
表3.TS-1138菌體細(xì)胞的使用次數(shù)的考察
實(shí)施例6以TS-1138菌體細(xì)胞連續(xù)轉(zhuǎn)化ATC生產(chǎn)胱氨酸在一個(gè)內(nèi)容積為2500mL并裝有攪拌器的容器中，分別加入含有0.6％ATC，0.6％K2HPO4和1.5mM羥胺的底物原料溶液1400mL，和含有25％TS-1138菌懸液700mL。用5％的氫氧化鈉水溶液調(diào)整pH值至7.5至8.0，置于37℃恒溫水浴中，反應(yīng)2.5小時(shí)后，使用中空纖維素膜MIF-503過濾分離細(xì)胞和反應(yīng)液。其中ATC和L-半胱氨酸等小分子隨反應(yīng)液被濾出，TS-1138細(xì)胞以高濃度菌懸液形式被保留。濾出液經(jīng)濃鹽酸調(diào)pH值至1.0后，再添加終濃度為1.0M的DMSO，室溫下攪拌8小時(shí)。用2N的氫氧化鈉水溶液調(diào)整溶液pH值至5.0，析出胱氨酸結(jié)晶，過濾干燥后得胱氨酸白色粉末。
上述濃縮后的TS-1138細(xì)胞，可重懸于700mL甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液中，再加入至上述1400mL底物原料溶液中，調(diào)整pH值7.5至8.0，37℃繼續(xù)反應(yīng)2.5小時(shí)，以下過程同上。
同一批菌體連續(xù)反應(yīng)8次，分別測(cè)定每次反應(yīng)過程中的L-半胱氨酸的轉(zhuǎn)化率和胱氨酸的收率。如表4所示，前5次內(nèi)ATC轉(zhuǎn)化生成胱氨酸的收率可以保持在90％之上。
表4.連續(xù)轉(zhuǎn)化生產(chǎn)胱氨酸的條件考察
權(quán)利要求
1.一種微生物轉(zhuǎn)化生產(chǎn)胱氨酸的方法，其特征在于包括以惡臭假單胞菌TS-1138細(xì)胞為酶源的條件下，以羥胺為抑制劑，酶法轉(zhuǎn)化底物DL-2-氨基-Δ2噻唑啉-4羧酸(DL-2-Amino-Δ2thiazoline-4-Carboxylic Acid，ATC)得到L-半胱氨酸水溶液，并進(jìn)一步通過氧化方式將所述的半胱氨酸轉(zhuǎn)化成胱氨酸；其中，TS-1138菌體用量占轉(zhuǎn)化總體系重量百分比為1％至25％，轉(zhuǎn)化體系中所用羥胺的濃度應(yīng)為0.5mM至3.0mM，底物ATC的初始濃度為0.1％至1.5％。
2.按權(quán)利要求1所述的微生物轉(zhuǎn)化生產(chǎn)胱氨酸的方法，其特征在于所述的假單胞菌TS1138(Pseudomonas putida TS-1138)，保藏于“中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心”，保藏號(hào)為CGMCC No.1920。
3.按權(quán)利要求1所述的微生物轉(zhuǎn)化生產(chǎn)胱氨酸的方法，其特征在于所述的細(xì)胞為酶源催化ATC反應(yīng)過程中，底物ATC的初始濃度最佳為0.4％。
4.按權(quán)利要求1所述的微生物轉(zhuǎn)化生產(chǎn)胱氨酸的方法，其特征在于TS-1138菌體用量占轉(zhuǎn)化總體系重量百分比最好為8％。
5.按權(quán)利要求1所述的微生物轉(zhuǎn)化生產(chǎn)胱氨酸的方法，其特征在于所述的ATC轉(zhuǎn)化反應(yīng)過程中以羥胺為半胱氨酸分解的抑制劑，轉(zhuǎn)化體系中所用羥胺的濃度最好為1.5mM。
6.按權(quán)利要求1所述的微生物轉(zhuǎn)化生產(chǎn)胱氨酸的方法，其特征在于所述的氧化法是二甲亞砜氧化法；該氧化法是在pH為1時(shí)，添加半胱氨酸摩爾濃度的10倍的二甲亞砜，室溫條件下攪拌8小時(shí)以上，將半胱氨酸氧化為胱氨酸。
7.按權(quán)利要求1所述的微生物轉(zhuǎn)化生產(chǎn)胱氨酸的方法，其特征在于所述的酶催化法能夠連續(xù)發(fā)生，即通過高速離心或膜過濾的方法分離酶源細(xì)胞及反應(yīng)液，使同一批細(xì)胞能夠連續(xù)參加轉(zhuǎn)化反應(yīng)，其中可保持5次以上ATC轉(zhuǎn)化為半胱氨酸的轉(zhuǎn)化率在90％以上。
8.按權(quán)利要求1所述的微生物轉(zhuǎn)化生產(chǎn)胱氨酸的方法，其特征在于，其中得到的胱氨酸溶液，調(diào)節(jié)pH為5，胱氨酸以晶體形式析出，通過過濾或抽濾的方式得到胱氨酸晶體。
全文摘要
一種微生物轉(zhuǎn)化生產(chǎn)胱氨酸的方法。本發(fā)明方法包括在以惡臭假單胞菌TS－1138細(xì)胞為酶源的情況下，以羥胺為抑制劑，酶法轉(zhuǎn)化底物DL－2－氨基－Δ
文檔編號(hào)C12R1/40GK101054597SQ20071005675
公開日2007年10月17日 申請(qǐng)日期2007年2月9日 優(yōu)先權(quán)日2007年2月9日
發(fā)明者白鋼, 楊文博, 劉春琴, 余養(yǎng)盛 申請(qǐng)人:南開大學(xué)