專利名稱：多用途的復合霉菌的制備方法
技術領域：
本發明涉及微生物領域，特別是一種多用途的復合霉菌的制備方法。二、 技術背景目前，發達國家在農業生產中應用微生物技術十分廣泛，科技含量很高。 如日本的酵素菌、EM、萬田發酵三大品牌，這些微生物菌群的特點是多菌 種、多功能，可廣泛應用于生產有機肥、微生物農藥、飼料、保健品或污水 處理。而我國用于微生物肥生產的菌種，種類少，用途少，用量少，效果不 明顯，如各種品牌的固氮菌、微生物鉀、微生物磷，包括最大品牌的阿姆斯， 這些有益菌種數量都比較少。因此，研究開發多菌種、多功能、多用途的有 益微生物菌群，是我國科技界面臨的重大課題。農業微生物在農作物種植業、畜禽飼養業、水產養殖業、農產品加工、 農業環境保護及農業生產技術等領域有廣闊的應用前景。目前發達國家在農 業生產中應用微生物技術十分廣泛，從過去單一菌種的應用發展到復合菌群， 可廣泛用于生產生物有機肥、生物農藥和生物飼料，可用于農產品保鮮或用 于環境保護(污水垃圾處理)。我國目前農業微生物庫保藏菌種3000多種， 而用于生物肥料中的有益微生物2003年統計才80多種，尤其是用于肥料生 產的菌種種類少，菌量少。我國利用微生物生產生物有機肥料才開始起步， 還很落后，隨著科技的發展和生產中的實際需要，截止到2003年末已有300 家生物有機肥產品在農業部登記、生產，還有許多正在申報登記，總量超過 350萬噸，是1995年的8倍。從以上看出農業微生物在有機肥料上的應用發 展勢頭喜人，形勢也逼人，大有發展前途，但是，由于種種原因，我國目前 有益微生物的繁殖量小，不能滿足生產中的實際需要，因此，有益微生物的 培養繁殖是正在努力解決的問題。三、 發明內容針對上述情況，本發明之目的就是提供一種多用途復合霉菌的制備方法， 以解決生產中對有益霉菌的需要問題，其解決的技術方案是，將食纖維菌、
啤酒酵母菌、龜裂鏈霉菌分別按配比摻入各自的培殖器內的培養基中，在適宜的溫度和PH值下培養一定時間，再分別置入三個種子罐內，在一定溫度 下進行厭氧發酵，發酵后將三種菌體按比例混配在一起，再按比例加入麥麩 或米糠進行擴繁，擴繁后進行二次發酵，干燥后成菌種粉，稱重包裝入庫， 本發明方法簡單，培殖效果好，其霉菌用途廣，價值大，有廣闊的開發應用 前景及巨大的經濟效益。 四具體實施方式
本發明菌種為市售或從有關中科院所引進的食纖維菌、啤酒酵母菌和龜 裂鏈霉菌，首先以三種菌作母種，對三種母菌種進行擴殖培養，步驟是，對 食纖維菌培養基進行常規滅菌，再將食纖維菌母種置入裝有食纖維菌培養基的培殖試管中，菌種加入量按菌種對培養基重量比為i : ioo，食纖維菌培養基(固體)每1000g是由牛肉膏4-15g、蛋白胨15-20g、可溶性淀粉l-3g、 食鹽6-8g、瓊脂18-20g和余量為水組成，食纖維菌母種植入培養基后，在恒 溫26'C、 PH值為7.3下培殖84小時，繁殖成試管種，再置入培殖罐內進行 厭氧發酵，在18畫30。C下厭氧發酵200小時(約8.5天，g卩8夜9晝)待用； 對啤酒酵母菌培養基進行常規滅菌，滅菌后按重量的啤酒酵母菌比啤酒酵母 菌培養基為1 : 100的比例植入啤酒酵母菌，在26"C恒溫下搖瓶培養84小時， 繁擴成啤酒酵母菌試管種，所說的啤酒酵母菌培養基是由葡萄糖25-35g、酵 母粉15-25g加豆汁調至1000ml組成，擴繁成的啤酒酵母菌試管種再置入培 殖罐內在18-3(TC下厭氧發酵200小時，成為擴殖的啤酒酵母菌，備用；對龜 裂鏈霉菌培養基進行12(TC高壓濕熱滅菌，再將龜裂鏈霉菌母種置入裝有己 滅過菌的龜裂鏈霉菌培養基的培殖罐內，龜裂鏈霉菌母種加入量為培養基重 量的1/100，即重量比為1 : 100， PH值為7.3，恒溫26"C下培殖84小時， 繁殖成試管種，所說的龜裂鏈霉菌培養基是每1000ml (液體)的培養基是由 可溶性淀粉15-25g、硝酸鉀0.5-1.5g、食鹽(氯化鈉)0.4-0.8g、 K2HP04 *3H20(磷酸氫二鉀)0.4-0.8g、 MgS04'7H20 (硫酸鎂，俗稱瀉鹽)0.4-0.8g、 FeS04 7H20 (硫酸亞鐵，俗稱綠礬)0.005-0.02g、瓊脂15-25g和余量為水制成，PH值為7.2-7.4，配制時，先用冷水將可溶性淀粉調成糊狀，再倒入煮 沸的水中，在火上加熱，邊攪拌邊加入其他成分，充分溶解均勻后，補足水 分至1000ml，繁殖成的試管種龜裂鏈霉菌再置入培殖罐內，在18-3(TC的溫 度下，進行厭氧發酵200小時(約8.5天，即8夜9晝)，培殖成擴殖的龜裂 鏈霉菌，備用；三種經厭氧發酵后擴殖的食纖維菌、啤酒酵母菌和龜裂鏈霉 菌以重量1:1:1比例混配在一起組成混合菌，再置入培養罐內，加入麥麩 或米糠進行擴繁，在15-3(TC下進行固體擴繁240-300小時，麥麩或米糠與混 合菌的重量比為100 : 1，固體擴繁后再放入培殖罐，在25。C恒溫下發酵200 小時，(即約8夜9晝的時間)，干燥脫水后成菌粉，含水量2.5-4%。 本發明還可按以下的具體實施例制備。首先以三種菌作母種，對三種母菌種進行擴殖培養，步驟是，對食纖維 菌培養基進行常規滅菌，將食纖維菌母種置入裝有食纖維菌培養基的培殖試 管中，每100g食纖維菌培養基中加入lg食纖維菌種，培養基(固體)每1000g 是由牛肉膏5g、蛋白胨10g、可溶性淀粉2g、食鹽6g、瓊脂19g和余量為水 組成，食纖維菌母種植入培養基后，在恒溫26'C、 PH值為7.3下培殖84小 時，繁殖成試管種，再置入培殖罐內進行厭氧發酵，在26"C下厭氧發酵200 小時待用；對啤酒酵母菌培養基進行常規滅菌，滅菌后的啤酒酵母菌加入酵 母菌培養基中，每100ml培養基內加入啤酒酵母菌種lg，在26'C恒溫下搖瓶 培養84小時，繁擴成啤酒酵母菌試管種，所說的啤酒酵母菌培養基是由葡萄 糖30g、酵母粉20g加豆汁調至1000ml組成，擴繁成的啤酒酵母菌試管種再 置入培殖罐內在26。C下厭氧發酵200小時，成擴殖的啤酒酵母菌，備用；對 龜裂鏈霉菌培養基進行12(TC高壓濕熱滅菌，將龜裂鏈霉菌母種置入裝有己 滅過菌的龜裂鏈霉菌培養基的培殖罐內，每100ml龜裂鏈霉菌培養基內加入 lg龜裂鏈霉菌種，即1 : 100， PH值為7.3，恒溫26。C下培殖84小時，繁 殖成試管種，所說的龜裂鏈霉菌培養基是每1000ml (液體)的培養基是由可 溶性淀粉20g、硝酸鉀lg、食鹽(氯化鈉)0.5g、 K2HP04'3H20 (磷酸氫二 鉀)0.5g、 MgS04*7H20 (硫酸鎂，俗稱瀉鹽)0.5g、 FeS04 7H20 (硫酸亞
鐵，俗稱綠礬)0.01g、瓊脂20g和余量為水制成，PH值為7.3，配制時，先 用冷水將可溶性淀粉調成糊狀，再倒入煮沸的水中，在火上加熱，邊攪拌邊 加入其他成分，充分溶解均勻后，補足水分至1000ml，繁殖成的試管種龜裂 鏈霉菌再置入培殖罐內，在18-30'C的溫度下，進行厭氧發酵200小時，培殖 成擴殖的龜裂鏈霉菌，備用；三種經厭氧發酵后擴殖的食纖維菌、啤酒酵母菌和龜裂鏈霉菌以重量比例混配在一起組成混合菌，再置入培養罐內，加入麥麩或米糠進行擴繁，在18-28'C下進行固體擴繁240小時，每100g 麥麩或米糠中加入混合菌lg，固體擴繁后再放入培殖罐，在25'C恒溫下發酵 200小時，干燥脫水后成菌粉，含水量3%。一、 本發明培殖的復合霉菌用于生產有機肥不僅含不氮、磷、鉀、微量 元素，而且還含有多種維生素、氨基酸、糖類化合物、脂類化合物、纖維素、 核酸及SOD等多種酶，可疏松土壤，培肥地力，保水保肥，提高土壤CEC 值，降低EC值，提高地溫2-5度，根系發達，生長茁壯，座果率提高25% 以上，提前成熟15天左右；保持土壤適當的PH值，有改良鹽堿地的作用； 減少病蟲害發生，減少化學農藥用量和次數；提高作物品質，大大降低農產 品硝酸鹽含量，糖度提高1-3度，耐儲藏；農作物提高產量25%以上，降低 成本30%以上。二、 本發明復合霉菌發酵中藥，制作農作殺菌劑、殺蟲劑。 用本發明復合霉菌發酵中藥制作殺菌劑、殺蟲毒劑已取得明顯效果。微生物發酵中藥劑，靠代謝產生的有機酸、醇和酶等物質，溶解中藥中的礦元 素，分解、轉化中藥中的植物堿、黃酮類、萜稀類等殺菌成分，提高藥效35 倍以上，加入代謝產生的幾十種抗菌素，能大大提高防治病蟲害效果，植物 發病率減少50%以上。中藥殺菌劑、殺蟲劑，還可以配合化學農藥使用，不僅可以減少一半農 藥用量，還可以增加藥效，而且噴施后3天就可以降解農藥的作用，大大減 少農藥在農產品中的殘留量。三、 用復合霉菌制作飼料添加劑
增進畜禽食欲、幫助消化，經過發酵的飼料，有良好的甜味和酒香味， 可增進食欲。發酵分解的酶和有機酸，能促進各種營養的消化吸收，如蛋白轉化率極高，家畜成長快，如豬8-10個月就出欄，供食用。促進生產，改善肉質。在復合霉菌的次級代謝中，能產生多種刺激動物 生長發育的因子，既可促進脂肪的代謝，又可防止由于脂肪過多而發生肉質下降的現象，提高瘦肉率，養豬的料肉比為3 : l或4 : l左右，豬體重曰增0.65kg以上。養雞可延長產蛋期，提高產蛋率15y。左右，雞蛋破損率降到0.3。/。， 軟蛋減少到1%。奶牛可提高產奶率20%，平均日增產鮮奶2-4kg。提高畜禽 的抗病性，不再使用西方國家禁用抗生素和激素，節省藥費，減少投資40%， 只進行必要的防疫工作即可。減少糞便惡臭，改善養殖環境。畜禽糞便質量 好，用于種值是優良的有機肥，飼料成本降低25%以上，技術好學，容易掌 握。四、 環境保護方面用于污水除臭把生活垃圾做成有機肥，制作家庭清潔劑。五、 用于人體保健，作飲料，發酵中藥用于醫療健身及治病機理，是發酵轉化的中藥成份及產生的抗氧化物，如維生 素、抗生素、氨基酸、礦元素、多種酶和核酸，以及去氫表雄酮、染料木素 等抗癌物質，讓腸胃中的有益菌群占絕對優勢，消除體內有害菌和氧自由基 的危害，除去疾病和衰老的根源，從而恢復增強免疫功能，使人體各種疾病 好轉或康復。六、 復合霉菌不僅科技含量高，而且價格低復合霉菌每克含有益菌》10億個，遠遠超過日本酵素菌每克含菌6億個， 功能多，如固氮能力高于日本酵素菌，比日本多了植物表型基因誘導調控表 達技術，可大大提高農作物的抗寒能力。用日本酵素菌發酵1噸肥料需要菌咱20公斤，復合霉菌發酵l噸肥料，只需要4-8公斤，進口l噸日本酵素菌 需要25萬元人民幣，而復合霉菌1噸原菌種的價格僅IO萬元人民幣，成本 降低70%以上，且無環境污染，社會與經濟效益巨大。
權利要求
1、一種多用途的復合霉菌的制備方法，其特征在于，先以食纖維菌、啤酒酵母菌和龜裂鏈霉菌作母種，對三種母菌種進行擴殖培養，步驟是，對食纖維菌培養基進行常規滅菌，再將食纖維菌母種置入裝有食纖維菌培養基的培殖試管中，菌種加入量按菌種對培養基重量比為1∶100，食纖維菌培養基每1000g是由牛肉膏4-15g、蛋白胨15-20g、可溶性淀粉1-3g、食鹽6-8g、瓊脂18-20g和余量為水組成，食纖維菌母種植入培養基后，在恒溫26℃、PH值為7.3下培殖84小時，繁殖成試管種，再置入培殖罐內進行厭氧發酵，在18-30℃下厭氧發酵200小時待用；對啤酒酵母菌培養基進行常規滅菌，滅菌后按重量的啤酒酵母菌比啤酒酵母菌培養基為1∶100的比例植入啤酒酵母菌，在26℃恒溫下搖瓶培養84小時，繁擴成啤酒酵母菌試管種，所說的啤酒酵母菌培養基是由葡萄糖25-35g、酵母粉1 5-25g加豆汁調至1000ml組成，擴繁成的啤酒酵母菌試管種再置入培殖罐內在18-30℃下厭氧發酵200小時，成為擴殖的啤酒酵母菌，備用；對龜裂鏈霉菌培養基進行120℃高壓濕熱滅菌，再將龜裂鏈霉菌母種置入裝有已滅過菌的龜裂鏈霉菌培養基的培殖罐內，龜裂鏈霉菌母種加入量為培養基重量的1/100，即重量比為1∶100，PH值為7.3，恒溫26℃下培殖84小時，繁殖成試管種，所說的龜裂鏈霉菌培養基是每1000ml的培養基是由可溶性淀粉15-25g、硝酸鉀0.5-1.5g、食鹽0.4-0.8g、K2HPO4·3H2O 0.4-0.8g、MgSO4·7H2O0.4-0.8g、FeSO4·7H2O 0.005-0.02g、瓊脂15-25g和余量為水制成，PH值為7.2-7.4，配制時，先用冷水將可溶性淀粉調成糊狀，再倒入煮沸的水中，在火上加熱，邊攪拌邊加入其他成分，充分溶解均勻后，補足水分至1000ml，繁殖成的試管種龜裂鏈霉菌再置入培殖罐內，在18-30℃的溫度下，進行厭氧發酵200小時，培殖成擴殖的龜裂鏈霉菌，備用；三種經厭氧發酵后擴殖的食纖維菌、啤酒酵母菌和龜裂鏈霉菌以重量1∶1∶1比例混配在一起組成混合菌，再置入培養罐內，加入麥麩或米糠進行擴繁，在15-30℃下進行固體擴繁240-300小時，麥麩或米糠與混合菌的重量比為100∶1，固體擴繁后再放入培殖罐，在25℃恒溫下發酵200小時，干燥脫水后成菌粉，含水量2.5-4％。
2、根據權利要求1所述的多用途的復合霉菌的制備方法，其特征在于， 首先以食纖維菌、啤酒酵母菌和龜裂鏈霉菌作母種，對三種母菌種進行擴 殖培養，步驟是，對食纖維菌培養基進行常規滅菌，將食纖維菌母種置入 裝有食纖維菌培養基的培殖試管中，每100g培養基中加入lg食纖維菌種， 食纖維菌培養基每1000g是由牛肉膏5g、蛋白胨10g、可溶性淀粉2g、食 鹽6g、瓊脂19g和余量為水組成，食纖維菌母種植入培養基后，在恒溫26°C、 PH值為7.3下培殖84小時，繁殖成試管種，再置入培殖罐內進行厭氧發酵， 在26"C下厭氧發酵200小時待用；對啤酒酵母菌培養基進行常規滅菌，滅 菌后的啤酒酵母菌加入酵母菌培養基中，每100ml培養基內加入啤酒酵母 菌種lg，在26'C恒溫下搖瓶培養84小時，繁擴成啤酒酵母菌試管種，所 說的啤酒酵母菌培養基是由葡萄糖30g、酵母粉20g加豆汁調至1000ml組 成，擴繁成的啤酒酵母菌試管種再置入培殖罐內在26"C下厭氧發酵200小 時，成擴殖的啤酒酵母菌，備用；對龜裂鏈霉菌培養基進行120'C高壓濕熱 滅菌，將龜裂鏈霉菌母種置入裝有已滅過菌的龜裂鏈霉菌培養基的培殖罐 內，每100ml龜裂鏈霉菌培養基內加入lg龜裂鏈霉菌種，PH值為7.3， 恒溫26'C下培殖84小時，繁殖成試管種，所說的龜裂鏈霉菌培養基是每 1000ml由可溶性淀粉20g、硝酸鉀lg、食鹽0.5g、 K2HP04 3H20 0.5g、 MgS04 7H20 0.5g、 FeS04 7H20 O.Olg、瓊脂20g和余量為水制成， PH值為7.3，配制時，先用冷水將可溶性淀粉調成糊狀，再倒入煮沸的水 中，在火上加熱，邊攪拌邊加入其他成分，充分溶解均勻后，補足水分至 1000ml,繁殖成的試管種龜裂鏈霉菌再置入培殖罐內，在18-3(TC的溫度下， 進行厭氧發酵200小時，培殖成擴殖的龜裂鏈霉菌，備用；三種經厭氧發 酵后擴殖的食纖維菌、啤酒酵母菌和龜裂鏈霉菌以重量1:1:1比例混配 在一起組成混合菌，再置入培養罐內，加入麥麩或米糠進行擴繁，在18-28 。C下進行固體擴繁240小時，每100g麥麩或米糠中加入混合菌lg，固體擴 繁后再放入培殖罐，在25t:恒溫下發酵200小時，干燥脫水后成菌粉，含 水量3%。
全文摘要
本發明涉及一種多用途復合霉菌的制備方法，以解決生產中對有益霉菌的需要問題，其解決的技術方案是，將食纖維菌、啤酒酵母菌、龜裂鏈霉菌分別按配比摻入各自的培殖器內的培養基中，在適宜的溫度和pH值下培養一定時間，再分別置入三個種子罐內，在一定溫度下進行厭氧發酵，發酵后將三種菌體按比例混配在一起，再按比例加入麥麩或米糠進行擴繁，擴繁后進行二次發酵，干燥后成菌種粉，稱重包裝入庫，本發明方法簡單，培殖效果好，其霉菌用途廣，價值大，有廣闊的開發應用前景及巨大的經濟效益。
文檔編號C12N1/18GK101113412SQ20071005467
公開日2008年1月30日 申請日期2007年6月28日 優先權日2007年6月28日
發明者爽 曹, 曹明軍 申請人:曹明軍