一種復合菌種發酵劑及其制備方法

文檔序號：591179閱讀：425來源：國知局

專利名稱：一種復合菌種發酵劑及其制備方法
技術領域：
本發明屬于生物工程微生物發酵領域，具體涉及一種乳酸菌——酵母菌復合發酵劑及其制備方法。
背景技術：
Kefir (開菲爾)起源于高加索山區，它是用開菲爾粒子發酵牛奶而產生的一種乳酸一一酒精性發酵飲料，由于其復雜的菌系、特殊的營養作用和保健功能，引起人們對它廣泛的研究，但由于在不使用原粒子的情況下無法生成新粒，因此產業化難于發酵出和粒子發酵產物一致或功能相近的飲料。發明內容本發明的目的在于模仿原始開菲爾的特性，用純發酵劑復合和優化培養研制一種復合菌種發酵劑，進而研制開菲爾飲料，該法制成的開菲爾可解決用開菲爾粒子直接發酵難于產業化的問題，并能保持菌種在乳生產中的穩定性。本發明的另一個目的是提供了該復合菌種發酵劑的制備方法。本發明的目的是這樣實現的利用公知菌種德氏乳桿菌保加利亞亞種(L.delbrueckii subsp.bulgaricus)ATCC No.33409*，乳酸乳球菌(L.lactis)CGMCC No.12030，腸膜明串珠菌 (L.mesenteroides) CCIC No.6055，嗜酸乳桿菌(L.acidophilus) ATCC No.43121,干酪乳桿菌 (L.casei)ATCC No.393，克魯維酵母(Kluyveromyces)CCIC No.1772和釀酒酵母(saccharomyces cerevi)ATCC No.15248進行高密度培養后真空冷凍干燥，制成直投式單菌發酵劑再以等量細胞數目復合成復合菌種發酵劑。該復合菌種發酵劑的制備方法如下1、首先，對菌種德氏乳桿菌保加利亞亞種、乳酸乳球菌、腸膜明串珠菌、嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌、克魯維酵母和酒香酵母，進行高密度培養，方法和步驟如下。各菌以3 5%培養基的量接種到優化培養基中，全自動發酵罐培養，流加無菌30%Na2C03 溶液控制發酵過程中的pH值，培養3 6小時后添加培養基量的0. 1 20%增殖因子，培養3 6小時后流加相同體積的優化培養基繼續培養，繼續培養4 10小時后收集發酵液。2、其次對各菌種培養基再分別發酵。O)德氏乳桿菌保加利亞亞種以12%脫脂奶+蛋白水解酶為優化培養基，以3 5%麥芽汁+3 5%酵母粉+5 10%番茄汁為增殖因子，增殖因子添加量為培養基的10 20%,控制pH值為6. 5，在半連續培養裝置中3(TC連續培養16 24小時，攪拌速度是200 250rpm，不通氣發酵。
② 乳酸乳球菌以12%脫脂奶+蛋白水解酶為優化培養基，以5 10%麥芽汁+1 3%酵母粉 +15 20mg/L Vc為增殖因子，增殖因子添加量為培養基的10 20%，控制pH值為6.0，在半連續培養裝置中32'C連續培養16 24小時，攪拌速度是200 250rpm，不通氣發酵。
③ 腸膜明串珠菌以蛋白胨0. 5%+酵母膏0. 5%+葡萄糖1%+檸檬酸鈉0. 15%+磷酸二氫鉀 0. 1%為優化培養基，以0.005 0. ll%Mg2++0.005 0. 01窗112++3 5%酵母粉為增殖因子，增殖因子添加量為培養基的5 10%，控制pH值為6. 5，在半連續培養裝置中32'C連續培養16 24小時，攪拌速度200 250rpm，通氣量為1 2vol/vol/min。
⑨嗜酸乳桿菌以12%脫脂奶+蛋白水解酶為優化培養基，以3 5%麥芽汁+3 5%酵母粉 +15 20%番茄汁為增殖因子，增殖因子添加量為培養基的10 20%，控制pH值為6.5，在半連續培養裝置中35'C連續培養12 14小時，攪拌速度200 250rpm，通氣量為l 2vol/vol/min發酵。
⑤干酪乳桿菌以12%脫脂奶+蛋白水解酶為優化培養基，以5 10%麥芽汁+2 3%酵母粉 +5 15%番茄汁為增殖因子，增殖因子添加量為培養基的10 20%， pH值為6.5，在半連續培養裝置中3(TC連續培養16-24小時，攪拌速度200 250rpm，不通氣發酵。
⑤克魯維酵母以2%酵母膏+1%蛋白胨+2%葡萄糖+0. 1% KH2P04為優化培養基，以O. 15 0. 35mg/mL Zn2+ +45 60u g/mL生物素+45 60 u g/mL肌醇為增殖因子，增殖因子添加量為培養基的0.30 1%，控制pH值為6.5，在半連續培養裝置中28。C連續培養16 24小時，攪拌速度是280 300rpm，通氧氣量為10 20vol/vol/min發酵。
(D酒香酵母以2%酵母膏+1%蛋白胨+2%葡萄糖+0. 1% KH2P04為優化培養基，以0.25 0. 35mg/mL Zn2+ + 60 80 u g/mL生物素+35 55 u g/mL肌醇為增殖因子，增殖因子添加量為培養基的0.25 1%，控制pH值為6.5，在半連續培養裝置中28i:連續培養16 24小時，攪拌速度是250 280rpm，通氧氣量為10 20vol/vol/min發酵。
3、分別將以上各單菌發酵液在0 5'C條件下，轉速為8000 15000轉/分鐘由高速冷凍離心機進行處理，離心后的濃縮菌體在無菌條件下加入細胞保護劑，各種濃縮菌體加入如下細胞保護劑。
細胞保護劑 ^德氏保加利亞乳桿菌 5 10%海藻糖+5 10%山梨醇+5 10%甘油+5 10%低聚異麥芽糖；乳酸乳球菌40 60g/kg蔗糖+10 20g/kg甘油+ l 3g/kg L-cys +13g/kg Vc;腸膜明串珠菌5 10%蔗糖+5 7. 5%聚乙二醇+5 10%甘油;嗜酸乳桿菌5 10%低聚異麥芽糖+5 10%甘油+0. 05 0. WVc+10 20呢脫干酪乳桿菌5 10%低聚異麥芽糖+5 10%甘露醇+10 20%脫脂奶;克魯維酵母10 20%脫脂乳粉+5 10%甘油+2 5%海藻糖溶液;酒香酵母3 5%海藻糖+5 10%乙二醇+10 15%甘油+5 10%低聚異麥芽糖。4、將以上各單菌分別凍干在-60 -4(TC預凍24小時后真空冷凍，冷凍干燥溫度-60 °C，真空度為3 6pa，真空冷凍干燥24 36小時得到單菌凍干制品，各單菌凍干制品等細胞數目均勻混合后用錫箔密封真空包裝即為復合菌種發酵劑成品。本發明的優點在于1、本發明綜合考慮各增殖方法后利用分離耦合生物反應器對幾種乳酸菌和酵母菌進行了高密度連續培養。培養液中乳酸菌的濃度可達到107 mL以上，酵母菌濃度達到107 mL以上；2、該發酵劑含菌量達到10"個/mL以上，性能穩定，使用方便，可作為直投式發酵劑使用；3、本發酵劑由多種功能菌復合組成，風味獨特，其功能指標和開菲爾粒子發酵的酸奶接近，可作為優良的直投式開菲爾發酵劑；4、其發酵酸奶對病原微生物有較強的抑制作用；對胃腸道疾病、代謝疾病、高血壓、心臟病等也都具有良好的療效；產品中含有的多糖對抗腫瘤有良好的效果，B族維生素含量較普通酸乳多；經常飲用可加速人體尿液的稀釋，排泄。
具體實施方式
用等細胞數量的德式乳桿菌保加利亞亞種；乳酸乳球菌；腸膜明串珠菌；嗜酸乳桿菌；干酪乳桿菌；克魯維酵母和釀酒酵母分別在全自動發酵罐中進行半連續高密度培養，各菌的增菌培養條件如下德氏乳桿菌保加利亞亞種以12%脫脂奶+蛋白水解酶為優化培養基，德氏乳桿菌保加利亞亞種以5%的量接種到優化培養基中，pH值6.5，攪拌速度250rpm， 30'C不通氣連續培養6小時，流加增殖因子5%麥芽汁+3%酵母粉+10%番茄汁，流加量為培養基的20%，繼續培養,培養6小時后流加相同體積的優化培養基，再培養6小時后收集發酵液。乳酸乳球實施例l菌以12%脫脂奶+蛋白水解酶為優化培養基，以5M的量接種到優化培養基中，控制pH值6.0， 32°C，攪拌速度250rpm不通氣培養6小時后，流加增殖因子1(^麥芽汁+3呢酵母粉+20mg/L Vc 繼續培養，流加量為培養基的20%，培養4小時后再流加相同體積的優化培養基培養10小時后收集發酵液。腸膜明串珠菌優化培養基由蛋白胨0.5%，酵母膏0.5%，葡萄糖1%，檸檬酸鈉0. 15%,磷酸二氫鉀0. 1%組成，菌株接種量為5%， pH值6. 5， 32。C培養，攪拌速度為200rpm，通氧氣量為lvol/vol/min發酵培養4小時后，流加10%培養基量的增殖因子 0. 01%Mg2++0. 01WMn"+39&酵母粉，培養4小時后再流加相同體積的優化培養基繼續培養6小時后收集培養液。嗜酸乳桿菌以12%脫脂奶+蛋白水解酶為優化培養基，嗜酸乳桿菌以5%的量接種到優化培養基中，控制pH值為6.5, 35°C，攪拌200rpm，通氧氣量為2vol/vol/min培養3小時后流加增殖因子5%麥芽汁+3%酵母粉+15%番茄汁，流加量為培養基的20%，在半連續培養裝置中連續培養3小時后再流加相同體積的優化培養基繼續培養5小時后收集菌液。干酪乳桿菌以12%脫脂奶+蛋白水解酶為優化培養基，干酪乳桿菌以5%的量接種到優化培養基中控制pH值為6. 5， 30°C，攪拌200rpm不通氣連續培養6小時，以10%麥芽汁+2%酵母粉+5% 番茄汁為增殖因子，流加量為培養基的20%，再培養6小時，流加相同體積的優化培養基繼續培養10小時后收集發酵掖。克魯維酵母以2%酵母膏+1%蛋白胨+2%葡萄糖+0. 1% KH2P04 為優化培養基，克魯維酵母菌以5%的量接種到優化培養基中，控制pH值為6. 5， 28°C， 280rpm 攪拌，通氧氣量為20vol/vol/min發酵培養4小時后流加培養基量0.25%的增殖因子 0. 15mg/mL Zn2+ +45 u g/mL生物素+60 y g/mL肌醇，再培養4小時后流加相同體積的培養基繼續培養6小時，收集發酵液。酒香酵母以2%酵母膏+1%蛋白胨+2%葡萄糖+0. 1%1(貼04為優化培養基，酒香酵母以5%的量接種到優化培養基中，用3(ENa2C03控制pH值為6.5，在半連續培養裝置中28°C，攪拌速度為280rpm,通氧氣量為20vol/vol/min連續培養4小時后流加培養基量的0. 30%的增殖因子0. 25mg/mL Zn2+ + 60 u g/mL生物素+55 u g/mL肌醇,培養4小時后流加相同體積的優化培養基繼續培養6小時后收集發酵液。分別將以上各單菌發酵液在-5'C條件下，轉速為10000轉/分鐘由高速冷凍離心機進行處理，離心后的濃縮菌體在無菌條件下加入和菌體等質量的細胞保護劑混合，各種濃縮菌體加入的細胞保護劑如下德氏乳桿菌保加利亞亞種10%海藻糖+5%山梨醇+10%甘油+5%低聚異麥芽糖；乳酸乳球菌40g/kg蔗糖+10g/kg甘油+lg/kg L-cys +lg/kg Vc;腸膜明串珠菌 5%蔗糖+5%聚乙二醇+10%甘油；嗜酸乳桿菌5%低聚異麥芽糖+5%甘油+0.05%￥0+10%脫脂乳；干酪乳桿菌5%低聚異麥芽糖+5%甘露醇+10%脫脂奶；克魯維酵母脫脂乳粉10%+甘油8%+2%海藻糖溶液；酒香酵母3%海藻糖+5%乙二醇+10%甘油+5%低聚異麥芽糖。將以上各混合液置于-6(TC下預凍24小時再進行凍干，在-60°C,真空度為3pa下真空冷凍干燥36小時后得凍干制品，各單菌凍干制品再以等細胞數目均勻混合后用錫箔密封包裝即為復合菌種發酵劑成品°實施例2用等細胞數量的德氏乳桿菌保加利亞亞種；乳酸乳球菌；腸膜明串珠菌；嗜酸乳桿菌；干酪乳桿菌；克魯維酵母和釀酒酵母分別在全自動發酵罐中進行半連續高密度培養，各菌的增菌培養條件如下德氏乳桿菌保加利亞亞種以12%脫脂奶+蛋白水解酶為優化培養基，德氏乳桿菌保加利亞亞種以5%的量接種到優化培養基中，pH值6.5，攪拌速度250rpm， 3(TC不通氣連續培養4小時，流加增殖因子3%麥芽汁+5%酵母粉+10%番茄汁，流加量為培養基的15%, 繼續培養，培養4小時后流加相同體積的優化培養基，再培養8小時后收集發酵液。乳酸乳球菌以12%脫脂奶+蛋白水解酶為優化培養基，以5%的量接種到優化培養基中，控制pH值6. 0， 32°C，攪拌速度250rpm不通氣培養4小時后，流加增殖因子5y。麥芽汁+W酵母粉+15mg/L Vc 繼續培養，流加量為培養基的15%，培養6小時后再流加相同體積的優化培養基培養10小時后收集發酵液。腸膜明串珠菌優化培養基由蛋白胨0.5%，酵母膏0.5%，葡萄糖1%，檸檬酸鈉0.15%，磷酸二氫鉀0.1%組成，菌株接種量為5。/。，pH值6. 5，32。C培養，攪拌速度為200rpm，通氧氣量為lvol/vol/min發酵培養6小時后，流加l(W培養基量的增殖因子 0. 0075%Mg2++0. 01%^&12++5%酵母粉，培養4小時后再流加相同體積的優化培養基繼續培養6小時后收集培養液。嗜酸乳桿菌以12%脫脂奶+蛋白水解酶為優化培養基，嗜酸乳桿菌以5% 的量接種到優化培養基中，控制pH值為6.5， 35°C，攪拌200卬m，通氧氣量為2vol/vol/min 培養3小時后流加增殖因子5%麥芽汁+5%酵母粉+15%番茄汁，流加量為培養基的20%，在半連續培養裝置中連續培養4小時后再流加相同體積的優化培養基繼續培養5小時后收集菌液。干酪乳桿菌以12%脫脂奶+蛋白水解酶為優化培養基，干酪乳桿菌以5%的量接種到優化培養基中控制pH值為6.5， 30°C，攪拌200rpm不通氣連續培養6小時，以5%麥芽汁+3%酵母粉 +10%番茄汁為增殖因子，流加量為培養基的20%，再培養6小時，流加相同體積的優化培養基繼續培養10小時后收集發酵掖。克魯維酵母以2%酵母膏+1%蛋白胨+2%葡萄糖+0.1%KH2P04 為優化培養基，克魯維酵母菌以5%的量接種到優化培養基中，控制pH值為6. 5， 28'C， 280rpm 攪拌，通氧氣量為20vol/vol/min發酵培養4小時后流加培養基量0.25%的增殖因子 0. 35mg/mL Zn2+ +45 n g/mL生物素+45 u g/mL肌醇，再培養4小時后流加相同體積的培養基繼續培養6小時，收集發酵液。酒香酵母以2%酵母膏+1%蛋白胨+2%葡萄糖+0.1%1(貼04為優化培養基，酒香酵母以5%的量接種到優化培養基中，用30。/。Na2C03控制pH值為6.5，在半連續培養裝置中28°C，攪拌速度為280rpm,通氧氣量為20vol/vol/min連續培養4小時后流加培養基量的0. 30%的增殖因子0. 35mg/mL Zn2+ + 75 y g/mL生物素+45 u g/mL肌醇，培養4小時后流加相同體積的優化培養基繼續培養6小時后收集發酵液。分別將以上各單菌發酵液在-5'C條件下，轉速為10000轉/分鐘由高速冷凍離心機進行處理，離心后的濃縮菌體在無菌條件下加入和菌體等質量的細胞保護劑混合，各種濃縮菌體加入的細胞保護劑如下德氏乳桿菌保加利亞亞種5%海藻糖+10%山梨醇+5%甘油+5%低聚異麥芽糖；乳酸乳球菌60g/kg蔗糖+15g/kg甘油+2g/kg L-cys +lg/kg Vc;腸膜明串珠菌 10%蔗糖+5%聚乙二醇+5%甘油；嗜酸乳桿菌10%低聚異麥芽糖+5%甘油+0. 075呢Vc+15W脫脂乳；干酪乳桿菌5%低聚異麥芽糖+10%甘露醇+20%脫脂奶；克魯維酵母15%脫脂乳粉+5%甘油+5%海藻糖溶液；酒香酵母3%海藻糖+10%乙二醇+5%甘油+7%低聚異麥芽糖。將以上各混合液置于-60。C下預凍24小時再進行凍干，在-6(TC，真空度為3pa下真空冷凍干燥32小時后得凍干制品，各單菌凍干制品再以等細胞數目均勻混合后用錫箔密封包裝即為復合菌種發酵劑成品。實施例3用等細胞數量的德氏乳桿菌保加利亞亞種；乳酸乳球菌；腸膜明串珠菌；嗜酸乳桿菌；干酪乳桿菌；克魯維酵母和釀酒酵母分別在全自動發酵罐中進行半連續高密度培養，各菌的增菌培養條件如下德氏乳桿菌保加利亞亞種以12%脫脂奶+蛋白水解酶為優化培養基，德氏乳桿菌保加利亞亞種以5%的量接種到優化培養基中，pH值6.5，攪拌速度200rpm， 30'C不通氣連續培養6小時，流加增殖因子3.5%麥芽汁+3.5%酵母粉+10%番茄汁，流加量為培養基的15%，繼續培養，培養6小時后流加相同體積的優化培養基，再培養6小時后收集發酵液。乳酸乳球菌以12%脫脂奶+蛋白水解酶為優化培養基，以3%的量接種到優化培養基中，控制 pH值6.0， 32°C，攪拌速度200rpm不通氣培養6小時后，流加增殖因子7. 5%麥芽汁+2%酵母粉+15mg/L Vc繼續培養，流加量為培養基的20%，培養5小時后再流加相同體積的優化培養基培養8小時后收集發酵液。腸膜明串珠菌優化培養基由蛋白胨0.5%，酵母膏0.5%，葡萄糖1%，檸檬酸鈉0.15%，磷酸二氫鉀0.1%組成，菌株接種量為5%， pH值6.5， 32'C培養，攪拌速度為200rpm，通氧氣量為lvol/vol/min發酵培養4小時后，流加10%培養基量的增殖因子0. 0075%Mg2++0. 0075MMr^+4W酵母粉，培養4小時后再流加相同體積的優化培養基繼續培養 6小時后收集培養液。嗜酸乳桿菌以12%脫脂奶+蛋白水解酶為優化培養基，嗜酸乳桿菌以 5%的量接種到優化培養基中，控制pH值為6. 5， 35°C ，攪拌250rpm，通氧氣量為lvol/vol/min 培養3小時后流加增殖因子4. 5%麥芽汁+3. 5%酵母粉+10%番茄汁，流加量為培養基的15%，在半連續培養裝置中連續培養3小時后再流加相同體積的優化培養基繼續培養5小時后收集菌液。干酪乳桿菌以12%脫脂奶+蛋白水解酶為優化培養基，干酪乳桿菌以5%的量接種到優化培養基中控制pH值為6. 5， 30°C ，攪拌200rpm不通氣連續培養6小時，以7. 5%麥芽汁+2. 5% 酵母粉+10%番茄汁為增殖因子，流加量為培養基的10%，再培養6小時，流加相同體積的優化培養基繼續培養9小時后收集發酵掖。克魯維酵母以2%酵母膏+1%蛋白胨+2%葡萄糖+0. 1% KH2P04為優化培養基，克魯維酵母菌以5%的量接種到優化培養基中，控制pH值為6.5， 28°C, 280rpm攪拌,通氧氣量為20vol/voi/min發酵培養4小時后流加培養基量0. 25%的增殖因子 0. 30mg/mL ZrT +55 u g/mL生物素+60u g/mL肌醇，再培養4小時后流加相同體積的培養基繼續培養6小時，收集發酵液。酒香酵母以2%酵母膏+1%蛋白胨+2%葡萄糖+0. 1% 1(貼04為優化培養基，酒香酵母以5%的量接種到優化培養基中，用30y。Na2C03控制pH值為6.5，在半連續培養裝置中28°C，攪拌速度為280卬m，通氧氣量為20vol/vol/min連續培養4小時后流加培養基量的0. 30%的增殖因子0. 25mg/mL Zn2+ + 55 u g/mL生物素+45 u g/mL肌醇，培養4小時后流加相同體積的優化培養基繼續培養6小時后收集發酵液。分別將以上各單菌發酵液在Ot:條件下，轉速為8000轉/分鐘由高速冷凍離心機進行處理，離心后的濃縮菌體在無菌條件下加入和菌體等質量的細胞保護劑混合，各種濃縮菌體加入的細胞保護劑如下德氏乳桿菌保加利亞亞種5%海藻糖+5%山梨醇+5%甘油+10%低聚異麥芽糖；乳酸乳球菌50g/kg蔗糖+10g/kg甘油+2g/kg L-cys +lg/kg Vc;腸膜明串珠菌5% 蔗糖+5%聚乙二醇+10%甘油；嗜酸乳桿菌10%低聚異麥芽糖+5%甘油+0. 05MVc+l(^脫脂乳；干酪乳桿菌5%低聚異麥芽糖+7.5%甘露醇+10%脫脂奶；克魯維酵母10%脫脂乳粉+10%甘油 +2%海藻糖溶液；酒香酵母5%海藻糖+7. 5%乙二醇+10%甘油+5%低聚異麥芽糖。將以上各混合液置于-60'C下預凍24小時再進行凍干，在-60°C，真空度為5pa下真空冷凍干燥36小時后得凍干制品，各單菌凍干制品再以等細胞數目均勻混合后用錫箔密封包裝即為復合菌種發酵劑成品。
權利要求
1. 一種復合菌種發酵劑，其特征在于它主要是由下列等量重量比原料制成德氏乳桿菌保加利亞亞種、乳酸乳球菌、腸膜明串珠菌、嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌、克魯維酵母、釀酒酵母，進行高密度培養后真空冷凍干燥，制成直投式單菌發酵劑再以等量細胞數目復合成復合菌種發酵劑。
2、根據權利要求1所述的一種復合菌種發酵劑的制備方法如下-(1) 對菌種德氏乳桿菌保加利亞亞種、乳酸乳球菌、腸膜明串珠菌、嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌、克魯維酵母和酒香酵母，進行高密度培養，方法和步驟如下；各菌以3 5%培養基的量接種到優化培養基中，全自動發酵罐培養，流加無菌3(mNa2C03溶液控制發酵過程中的pH 值，培養3 6小時后添加培養基量的0. 1 20%增殖因子，培養3 6小時后流加相同體積的優化培養基繼續培養，繼續培養4 10小時后收集發酵液；(2) 對各菌種培養基再分別發酵；① 德氏乳桿菌保加利亞亞種以12%脫脂奶+蛋白水解酶為優化培養基，以3 5%麥芽汁 +3 5%酵母粉+5 10%番茄汁為增殖因子，增殖因子添加量為培養基的10 20%，控制pH值為6. 5,在半連續培養裝置中3(TC連續培養16 24小時，攪拌速度是200 250rpm，不通氣發酵；② 乳酸乳球菌以12%脫脂奶+蛋白水解酶為優化培養基，以5 10%麥芽汁+1 3%酵母粉 +15 20mg/L Vc為增殖因子，增殖因子添加量為培養基的10 20%，控制pH值為6.0，在半連續培養裝置中32。C連續培養16 24小時，攪拌速度是200 250rpm，不通氣發酵；③ 腸膜明串珠菌以蛋白胨0. 5%+酵母膏0. 5%+葡萄糖1%+檸檬酸鈉0. 15%+磷酸二氫鉀 0. 1%為優化培養基，以0. 005 0. ll%Mg2++0.005 0.01%Mn2++3 5%酵母粉為增殖因子，增殖因子添加量為培養基的5 10%，控制pH值為6.5，在半連續培養裝置中32'C連續培養16 24小時,攪拌速度200 250rpm，通氣量為1 2vol/vol/min;④ 嗜酸乳桿菌以12%脫脂奶+蛋白水解酶為優化培養基，以3 5%麥芽汁+3 5%酵母粉 +15 20%番茄汁為增殖因子，增殖因子添加量為培養基的10 20%，控制pH值為6.5，在半連續培養裝置中35。C連續培養12 14小時，攪拌速度200 250rpm，通氣量為l 2vol/vol/min發酵；⑤ 干酪乳桿菌以12%脫脂奶+蛋白水解酶為優化培養基，以5 10%麥芽汁+2 3%酵母粉 +5 15%番茄汁為增殖因子，增殖因子添加量為培養基的10 20%， pH值為6.5，在半連續培養裝置中3(TC連續培養16-24小時，攪拌速度200 250rpm，不通氣發酵；第(2)種方法制得的氯化鎂載體復合后過渡金屬催化劑A100毫克，將壓力升至并維持1.0MPa,在70'C反應2小時。聚合反應結束后，收集聚乙烯顆粒粉料，稱重得183克，催化劑的效率為915gPE/gcath，堆密度(BD)為0.37g/ml。通過電鏡觀察樹脂顆粒呈球形。聚乙烯的Mn:30000， Mw/Mn:19.8，枝化度為 4.7。實施例7在2升的不銹鋼高壓聚合釜中，用氮氣和乙烯各置換三次，然后加入200 毫升己烷溶劑，將釜溫升至70。C，再加入其余800毫升己烷溶劑，隨著己烷的加入，將1.0毫升2摩爾/升的三異丁基鋁己垸溶液加入，接著加入實施例1中第(2 )種方法制得的氯化鎂載體復合后過渡金屬催化劑A 102毫克，將壓力升至并維持l.OMPa，在5(TC反應2小時。聚合反應結束后，收集聚乙烯顆粒粉料，稱重得145克，催化劑的效率為704gPE/gcath，堆密度(BD)為0.35g/ml。通過電鏡觀察樹脂顆粒呈球形。聚乙烯的Mn:33200， Mw/Mn:17.6，枝化度為 5.4。實施例8在2升的不銹鋼高壓聚合釜中，用氮氣和乙烯各置換三次，然后加入200 毫升己烷溶劑，將釜溫升至70。C，再加入其余800毫升己烷溶劑，隨著己烷的加入，將1.0毫升2摩爾/升的三異丁基鋁己烷溶液加入，接著加入實施例1中第(2)種方法制得的氯化鎂載體復合后過渡金屬催化劑A 95毫克，將壓力升至并維持0.5 MPa,在7(TC反應2小時。聚合反應結束后，收集聚乙烯顆粒粉料，稱重得134克，催化劑的效率為705gPE/gcat'h，堆密度(BD)為0.36g/ml。
全文摘要
本發明公開了一種復合菌種發酵劑及其制備方法，屬于微生物發酵領域其主要是由等量的德氏乳桿菌保加利亞亞種、乳酸乳球菌、腸膜明串珠菌、嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌、克魯維酵母和酒香酵母制成；本發酵劑的制備方法，主要是對上述菌種優化培養，分別發酵，離機處理，濃縮后加入細胞保護劑，真空冷凍。本發酵劑由多種功能菌復合組成，由此發酵劑制成的酸奶，風味獨特，其功能指標和開菲爾粒子發酵的酸奶接近，可作為優良的直投式開菲爾發酵劑，其發酵酸奶對病原微生物有較強的抑制作用；對胃腸道疾病、代謝疾病、高血壓、心臟病等也都具有良好的療效。
文檔編號C12N1/20GK101225365SQ20071003429
公開日2008年7月23日申請日期2007年1月18日優先權日2007年1月18日
發明者馬小明申請人:馬小明

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