專利名稱：：包含發(fā)酵的韓國(guó)辣椒醬或者醬油的培養(yǎng)基和γ-氨基丁酸的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及包含發(fā)酵的韓國(guó)辣椒醬、未稀釋的釀制醬油或者酸解醬油的培養(yǎng)基成分，以及制備y-氨基丁酸的方法。更特別地，本發(fā)明涉及用于培養(yǎng)具有谷氨酸脫羧酶活性的乳酸桿菌的培養(yǎng)基成分，該培養(yǎng)基成分包含發(fā)酵的韓國(guó)辣椒醬、未稀釋的釀制醬油或者酸解醬油，本發(fā)明還涉及使用另外添加了谷氨酸或者谷氨酸鹽的培養(yǎng)基生產(chǎn)高濃度y-氨基丁酸的方法。
背景技術(shù)：
：y-氨基丁酸(GABA)是非蛋白質(zhì)成分氨基酸，其分子量為103.12，熔點(diǎn)為203°C。這種氨基酸是熱穩(wěn)定的并且高水溶性的。GABA產(chǎn)生機(jī)制，與動(dòng)物或者植物相比，已經(jīng)在微生物中被更精確地揭示。在微生物的增殖過(guò)程中，過(guò)量的細(xì)胞外代謝產(chǎn)物在增殖后期積累，由此細(xì)胞外和細(xì)胞內(nèi)兩者之間的氫離子(H+)的平衡被打破；為了調(diào)節(jié)這種平衡，產(chǎn)生了GABA。也就是說(shuō)，當(dāng)細(xì)胞外谷氨酸鹽傳遞到細(xì)胞內(nèi)時(shí)，谷氨酸鹽的羧基被細(xì)胞內(nèi)的H+取代，于是在GABA產(chǎn)生過(guò)程中細(xì)胞內(nèi)H+被消耗，導(dǎo)致C02的產(chǎn)生。與該GABA產(chǎn)生相關(guān)的GAD酶表達(dá)并被活化以維持穩(wěn)定的pH以便抵抗酸應(yīng)激(acidstress)。最佳pH在微生物之間是不同的，但一般都早4.2-4.7之間，5'-磷酸吡哆醛(PLP)是一個(gè)輔酶的例子。在動(dòng)物大腦中發(fā)現(xiàn)的GABA是神經(jīng)傳遞抑制劑，其在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中起重要作用。已經(jīng)認(rèn)識(shí)到GABA通過(guò)增強(qiáng)大腦細(xì)胞的新陳代謝而具有對(duì)癱瘓、癡呆、精神集中增強(qiáng)和記憶增強(qiáng)以及失眠有防止和/或治療效果。根據(jù)近期在日本進(jìn)行的GABA的效果方面的研究，大米胚芽中積累的GABA可以每天以26.5mg的GABA口服給受到更年期紊亂困擾或者心理失調(diào)的老年人。結(jié)果，根據(jù)上述報(bào)道，心理紊亂諸如頭疼和壓抑或者更年期紊亂的各種癥狀改善了大約75%。GABA的另一重要活性是加速鈉離子通過(guò)尿液的排出，于是已知其可降低由過(guò)量攝入食鹽引起的高血壓患者的血壓。有關(guān)GABA的另一研究報(bào)道了酗酒者血液中GABA的水平顯著低于正常人血液中的水平，于是該研究顯示GABA加速了酒精的新陳代謝。另外，已知GABA參與生長(zhǎng)激素分泌的調(diào)節(jié)、利尿作用、防止肥胖減輕痛苦和緊張、應(yīng)力控制以及肝功能活化等，基于所述各種生理效果，GABA變成了藥物學(xué)上感興趣的化合物。GABA被認(rèn)識(shí)到不僅是一種具有多種功能和效果的藥物化合物，而且還是功能性食品材料。作為藥物化合物，GABA已經(jīng)通過(guò)靜脈注射被應(yīng)用，其被用于治療中風(fēng)、腦外傷和腦動(dòng)脈瘤后遺癥，以增加腦血流和腦新陳代謝。作為功能性食品，GABA已經(jīng)以高濃度應(yīng)用于綠茶中，在日本這種綠茶被稱為GABARON茶，還用于飲料和大豆醬(miso)。GABA包含在食物中諸如蔬菜、水果和谷物中，但在這些食物中的濃度非常低，因此任何有益效果都受到懷疑。于是，已經(jīng)或者正在進(jìn)行各種嘗試來(lái)生產(chǎn)高度濃縮的GABA。增加GABA濃度的方法主要在植物中進(jìn)行了嘗試，這方面的例子為由外部環(huán)境因子引起的冷休克、機(jī)制刺激、熱休克、缺氧、細(xì)胞質(zhì)酸化、水分脅迫、植物激素等。近年來(lái)，隨著分子細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，已經(jīng)嘗試通過(guò)將GAD或者鈣調(diào)素基因轉(zhuǎn)導(dǎo)到煙草中來(lái)獲得增加的GABA濃度。但是，上述方法需要物理裝置和專業(yè)知識(shí)。作為替代，正在嘗試使用具有GAD活性的微生物諸如霉菌、大腸桿菌和乳酸桿菌來(lái)生產(chǎn)GABA。特別是，乳酸桿菌被優(yōu)選用于生產(chǎn)GABA作為食品添加劑，因?yàn)槿樗釛U菌具有廣泛應(yīng)用并來(lái)源于日常消費(fèi)的發(fā)酵食品。但是，乳酸桿菌是需要各種養(yǎng)分的菌株，因此其培養(yǎng)很困難并且培養(yǎng)基很貴。盡管在種類(lèi)方面存在一些差異，但乳酸桿菌一般需要各種氨基酸、維生素、鹽和特異性肽。對(duì)于特定菌株來(lái)說(shuō)如果缺乏任何必需養(yǎng)分，該菌株就不能很好地生長(zhǎng)，導(dǎo)致發(fā)酵產(chǎn)品的產(chǎn)量很低。
發(fā)明內(nèi)容技術(shù)問(wèn)題本發(fā)明的一個(gè)目的在于克服常規(guī)方法的問(wèn)題，其提供用于具有谷氨酸脫羧酶(GAD)活性的乳酸桿菌培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基，包含發(fā)酵的韓國(guó)辣椒醬、未稀釋的釀制醬油或者酸解醬油，以便大量生產(chǎn)Y-氨基丁酸(GABA)。本發(fā)明的另一目的在于通過(guò)在用于乳酸桿菌培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基中培養(yǎng)具有谷氨酸脫羧酶(GAD)活性的乳酸桿菌，來(lái)提供生產(chǎn)高濃度Y-氨基丁酸(GABA)的方法。技術(shù)方案為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供了用于乳酸桿菌培養(yǎng)的培養(yǎng)基，其包含發(fā)酵的韓國(guó)辣椒醬、未稀釋的釀制醬油或者酸解醬油，以便大量生產(chǎn)Y-氨基丁酸。本發(fā)明的培養(yǎng)基成分可進(jìn)一步包含谷氨酸或者谷氨酸鹽。發(fā)酵的韓國(guó)辣椒醬可以是來(lái)源于選自下組的一種或多種材料的發(fā)酵產(chǎn)品包括小麥、麥麩、小麥玉米(wheatcorn)、大米、大麥、高粱、玉米、燕麥、蕎麥、粟或者它們的加工產(chǎn)品。未稀釋的釀制醬油或者酸解醬油可以是來(lái)源于選自下組的一種或多種材料的那些大豆、豆粉、脫脂大豆粉、蠶豆、綠豆或者它們的加工產(chǎn)品o培養(yǎng)基成分可進(jìn)一步包含選自下組的一種或多種材料包括葡萄糖、NaCl、谷氨酸鹽、磷酸吡咯烷酮、大蒜和番茄醬。本發(fā)明還提供了在培養(yǎng)基中培養(yǎng)乳酸桿菌之后在培養(yǎng)液中生產(chǎn)Y-氨基丁酸的方法，所述培養(yǎng)基包含發(fā)酵的韓國(guó)辣椒醬、未稀釋的釀制醬油的或者酸解醬油。本發(fā)明還提供了生產(chǎn)Y-氨基丁酸的方法，進(jìn)一步包括在培養(yǎng)過(guò)程中加入谷氨酸或者谷氨酸鹽的步驟。本發(fā)明還提供了生產(chǎn)Y-氨基丁酸的方法，其中發(fā)酵的韓國(guó)辣椒醬可以是來(lái)自選自下組的一種或多種材料的發(fā)酵產(chǎn)品包括小麥、麥麩、小麥玉米、大米、大麥、高粱、玉米、燕麥、蕎麥、粟或者它們的加工產(chǎn)品。本發(fā)明還提供了生產(chǎn)Y-氨基丁酸的方法，其中未稀釋的釀制醬油或者酸解醬油可以是來(lái)源于選自下組的一種或多種材料大豆、豆粉、脫脂大豆粉、蠶豆、綠豆或者它們的加工產(chǎn)品。本發(fā)明還提供了生產(chǎn)Y-氨基丁酸的方法，其中培養(yǎng)基成分可進(jìn)一步包含選自下組的一種或多種材料包括葡萄糖、NaCl、谷氨酸鹽、磷酸吡咯烷酮、大蒜和番茄醬。根據(jù)以乳酸桿菌培養(yǎng)為基礎(chǔ)的生產(chǎn)GABA的常規(guī)方法，谷氨酸鹽被加入到混合的培養(yǎng)基(MRS、LBS、脫脂奶、番茄汁等)中，并對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，冷卻并接種用于培養(yǎng)的乳酸桿菌。但是，高培養(yǎng)基成本增加了GABA的生產(chǎn)成本，不適于工業(yè)應(yīng)用。在對(duì)怎樣通過(guò)具有GAD活性的乳酸桿菌來(lái)生產(chǎn)GABA以及怎樣測(cè)試以低成本培養(yǎng)基來(lái)替換高成本MRS培養(yǎng)基以克服常規(guī)方法在工業(yè)應(yīng)用中的缺點(diǎn)的可能性，和怎樣建立用于大量生產(chǎn)GABA的發(fā)酵方法的研究過(guò)程中，本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)了下列事實(shí)，即乳酸桿菌可在韓國(guó)辣椒醬和未稀釋的釀制醬油的混合物上生長(zhǎng)并產(chǎn)生GABA。因此，本發(fā)明的發(fā)明人通過(guò)優(yōu)化用于GAD產(chǎn)生和活化的條件完成了本發(fā)明，并確信GABA可通過(guò)分批補(bǔ)料(fed-batch)培養(yǎng)并在培養(yǎng)過(guò)程中重復(fù)供應(yīng)底物而大量生產(chǎn)。此后，將詳細(xì)描述本發(fā)明。本發(fā)明提供了用于乳酸桿菌培養(yǎng)的培養(yǎng)基成分，包含發(fā)酵的韓國(guó)辣椒醬、未稀釋的釀制醬油或者酸解醬油。本發(fā)明還提供了在培養(yǎng)基中培養(yǎng)乳酸桿菌之后從培養(yǎng)液中生產(chǎn)Y-氨基丁酸的方法，所述培養(yǎng)基包含發(fā)酵的韓國(guó)辣椒醬、未稀釋的釀制醬油或者酸解醬油。發(fā)酵的韓國(guó)辣椒醬、未稀釋的釀制醬油或者酸解醬油中氨基氮的濃度優(yōu)選10-500mg%，更優(yōu)選10-300mg%。發(fā)酵的韓國(guó)辣椒醬可以是來(lái)自選自下組的一種或多種材料的發(fā)酵產(chǎn)品包括小麥、麥麩、小麥玉米、大米、大麥、高粱、玉米、燕麥、蕎麥、粟或者它們的加工產(chǎn)品。本發(fā)明還提供了生產(chǎn)Y-氨基丁酸的方法，其中未稀釋的釀制醬油或者酸解醬油可以是來(lái)源于選自下組的一種或多種材料的那些大豆、豆粉、脫脂大豆粉、蠶豆、綠豆或者它們的加工產(chǎn)品。培養(yǎng)基成分可進(jìn)一步包含選自下組的一種或多種材料包括葡萄糖、NaCl、谷氨酸鹽、磷酸吡咯烷酮、大蒜和番茄醬。添加的葡萄糖可包括任何在加入葡萄糖的條件下能夠由乳酸桿菌發(fā)酵的碳源，優(yōu)選濃度為0-10w/wM重量比，更優(yōu)選為0-5w/w。/。重量比。加入的NaCl的優(yōu)選濃度為0-5.0w/w。/。重量比，更優(yōu)選為0-3w/w。/o重加入的PLP優(yōu)選濃度為0.1ymol-100mmo1，更優(yōu)選0.1umol-10mmo1。加入的磷酸鹽的優(yōu)選濃度為0.1-5.0^％重量比，更優(yōu)選為0.1-3w/wO/o重量比。加入的大蒜可以是生蒜和加工的大蒜產(chǎn)品；優(yōu)選濃度為0.5-10w/w%重量比，更優(yōu)選0.5-5w/w。/。重量比。番茄漿料不僅可以是番茄醬，而且也可以是新鮮的番茄和加工的番茄產(chǎn)品；0.5-10w/wG/。重量比，更優(yōu)選0.5-5w/w。/c)重量比。加入用于培養(yǎng)的乳酸桿菌可以是任何菌株，只要其具有強(qiáng)GAD活性并在營(yíng)養(yǎng)學(xué)上是可接受的即可。例如，可使用選自下組的一種或多種菌株，包括短乳桿菌,米酒乳桿菌,嗜酸乳桿菌，植物明串珠菌,腸系膜樣明串珠菌，短雙歧桿菌，長(zhǎng)雙歧桿菌，嬰兒雙岐桿菌，5(/Wo6ac&n'wm乳酸糞鏈球菌和嗜熱鏈球菌?？紤]到乳酸桿菌的生長(zhǎng)條件，優(yōu)選不加入鹽，但作為培養(yǎng)基的發(fā)酵產(chǎn)物可含有鹽。如果鹽濃度低于4w/w。/。，將不會(huì)影響GABA的產(chǎn)生。加入的用于發(fā)酵的乳酸桿菌的量由菌株來(lái)確定，一般優(yōu)選106107CFU/ml。如果加入的乳酸桿菌的量少于106CFU/ml，則培養(yǎng)周期將延長(zhǎng)。相反，如果加入的乳酸桿菌的量超過(guò)107CFU/ml，除酶活性下降以外經(jīng)濟(jì)效益也會(huì)降低。將乳酸桿菌加入到培養(yǎng)基中的優(yōu)選時(shí)間點(diǎn)是當(dāng)培養(yǎng)基滅菌并冷卻到大約3(TC的時(shí)候，以便不會(huì)抑制乳酸桿菌的生長(zhǎng)。谷氨酸鹽溶解在培養(yǎng)基中，其被滅菌、冷卻并以4-6小時(shí)為間隔以培養(yǎng)基總體積的10-10,000mgn/。的濃度多次加入到培養(yǎng)基中。為了在分批補(bǔ)料培養(yǎng)中誘導(dǎo)最大GAD活性，pH優(yōu)選為4.2-5.0，并且其可以通過(guò)以5-6小時(shí)為間隔將酸加入到培養(yǎng)液中來(lái)調(diào)節(jié)。加入的用于調(diào)節(jié)pH的酸可使用無(wú)機(jī)酸或者有機(jī)酸。無(wú)機(jī)酸可以是選自下組的一種或多種化合物，包括硫酸、鹽酸、磷酸和硝酸。有機(jī)酸可以是選自下組的一種或多種化合物，包括乳酸、醋酸、蘋(píng)果酸、檸檬酸和蟻酸。通過(guò)氣相色譜(GC)來(lái)測(cè)定GABA，單位為mg。/。。通過(guò)下列公式來(lái)計(jì)算轉(zhuǎn)化率(％):(GABAmmo1/加入的谷氨酸鹽mmole)x100。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式中，谷物與小麥粉曲汁混合然后熟化。得到的發(fā)酵產(chǎn)物(此后稱為"發(fā)酵的韓國(guó)辣椒醬")和豆曲汁浸泡在鹽水中。熟化后，發(fā)酵液(此后稱為"未稀釋的釀制醬油")被分離，分別將磷酸、PLP(5'-磷酸吡哆醛)、大蒜和番茄醬加入其中作為營(yíng)養(yǎng)源。然后，為了制備本發(fā)明的培養(yǎng)基，將谷氨酸加入到其中。培養(yǎng)基然后接種短乳桿菌，接著培養(yǎng)26小時(shí)。將培養(yǎng)基的pH調(diào)節(jié)到4.7，并在50小時(shí)的培養(yǎng)期中以6小時(shí)為間隔分?jǐn)?shù)次加入3000mgy。的谷氨酸，以生產(chǎn)高濃度的GABA。本發(fā)明顯示包含發(fā)酵的韓國(guó)辣椒醬、未稀釋的釀制醬油的培養(yǎng)基與少量PLP、磷酸、大蒜或者番茄醬一同提供乳酸桿菌生長(zhǎng)的最佳條件，于是這種培養(yǎng)基可以是優(yōu)良的工業(yè)培養(yǎng)基，其可取代用于生產(chǎn)GABA的常規(guī)MRS培養(yǎng)基。本發(fā)明進(jìn)一步建議通過(guò)分批補(bǔ)料培養(yǎng)可以低成本大量生產(chǎn)GABA，其中培養(yǎng)基的pH被調(diào)節(jié)以保持GAD分泌和GABA的最大活性，并且谷氨酸鹽可間隔重復(fù)添加以便不抑制底物。圖1是示出制備用于高濃度生產(chǎn)Y-氨基丁酸的最佳培養(yǎng)基和分批補(bǔ)料培養(yǎng)的過(guò)程的流程圖。具體實(shí)施例方式此后，將參照附圖詳細(xì)描述本發(fā)明的實(shí)施方式。本發(fā)明僅僅通過(guò)下列用于理解的例子來(lái)示例，因此其不應(yīng)當(dāng)被理解成對(duì)本發(fā)明的范圍的限制。實(shí)施例1為了研究最佳底物濃度，將谷氨酸鹽(MonosodiumGlutamate:MSG)以lw/w。/。加入到MRS培養(yǎng)基(蛋白胨10g，牛肉浸膏10g,酵母膏5g,葡萄糖20g,多山醇酯801g,檸檬酸銨2g,醋酸鈉5g,硫酸鎂0.1g,硫酸錳0.05g,磷酸氫二鉀2g,蒸餾水1,000ml,pH6.5)的總重量中，然后在121'C滅菌15分鐘。冷卻后，將短乳桿菌以lX107CFU/ml的濃度接種到培養(yǎng)中，接著培養(yǎng)26小時(shí)。測(cè)定GABA，結(jié)果在表l中顯示。實(shí)施例2以實(shí)施例1中所描述的相同方式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，但將2w/wM的谷氨酸鹽(MSG)加入到總重量中。領(lǐng)IJ定GABA，結(jié)果在表l中顯示。實(shí)施例3以實(shí)施例1中所描述的相同方式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，但將3w/wy。的谷氨酸鹽(MSG)加入到總重量中。測(cè)定GABA，結(jié)果在表l中顯示。實(shí)施例4以實(shí)施例1中所描述的相同方式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，但將4w/w。/。的谷氨酸鹽(MSG)加入到總重量中。測(cè)定GABA水平，結(jié)果在表l中顯示。實(shí)施例5以實(shí)施例1中所描述的相同方式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，但將5w/w。/。的谷氨酸鹽(MSG)加入到總重量中。測(cè)定GABA水平，結(jié)果在表l中顯示。實(shí)施例6以實(shí)施例1中所描述的相同方式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，但將用于發(fā)酵的辣椒醬的氨基氮濃度(將小麥粉曲汁和谷物混合，熟化并發(fā)酵)加入到培養(yǎng)基總重量的30mg%，加入葡萄糖和NaCl使其中糖和鹽的濃度分別變成3w/w。/。和2w/wM，并將3w/wn/。的谷氨酸鹽(MSG)加入到培養(yǎng)基中。測(cè)定GABA水平，結(jié)果在表l中顯示。實(shí)施例7以實(shí)施例6中所描述的相同方式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，但將用于發(fā)酵的辣椒醬和釀制醬油的未發(fā)酵液混合，使用于發(fā)酵的辣椒醬的氨基氮濃度和釀制醬油(將豆曲汁浸泡在鹽水中，熟化并分離)分別變成培養(yǎng)基總重量的30mgO/。和20mg。/。。測(cè)定GABA水平，結(jié)果在表1中顯示。實(shí)施例7-1以實(shí)施例6中所描述的相同方式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，但將用于發(fā)酵的辣椒醬和未發(fā)酵的釀制醬油混合，使用于發(fā)酵的辣椒醬的氨基氮濃度和酸解醬油(蛋白質(zhì)或者含碳水化合物的材料用酸水解并將濾液進(jìn)行處理)分別變成培養(yǎng)基總重量的30mgn/。和20mg%。測(cè)定GABA水平，結(jié)果在表1中顯示。實(shí)施例8以實(shí)施例6中所描述的相同方式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，但將用于發(fā)酵的辣椒醬和釀制醬油的未發(fā)酵液混合，使用于發(fā)酵的辣椒醬的氨基氮濃度和釀制醬油分別變成培養(yǎng)基總重量的30mgn/。和40mg%。測(cè)定GABA水平，結(jié)果在表1中顯示。實(shí)施例8-1以實(shí)施例6中所描述的相同方式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，但將用于發(fā)酵的辣椒醬和釀制醬油的未發(fā)酵液混合，使用于發(fā)酵的辣椒醬的氨基氮濃度和酸解醬油分別變成培養(yǎng)基總重量的30mg。/。和40mg%。測(cè)定GABA水平，結(jié)果在表1中顯示。實(shí)施例9以實(shí)施例7中所描述的相同方式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，但將在培養(yǎng)基滅菌后將相對(duì)于總重量0.1umol的5'-磷酸吡眵醛(PLP)加入到總體積中。測(cè)定GABA水平，結(jié)果在表l中顯示。實(shí)施例10以實(shí)施例7中所描述的相同方式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，但將在培養(yǎng)基滅菌后將相對(duì)于總重量l.Oumol的5，-磷酸吡哆醛(PLP)加入到總體積中。測(cè)定GABA水平，結(jié)果在表1中顯示。實(shí)施例11以實(shí)施例7中所描述的相同方式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，但將在培養(yǎng)基滅菌后將相對(duì)于總重量lOixmol的5'-磷酸吡哆醛(PLP)加入到總體積中。測(cè)定GABA水平，結(jié)果在表l中顯示。實(shí)施例12以實(shí)施例7中所描述的相同方式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，但將在培養(yǎng)基滅菌后將0.1%w/w的磷酸加入到總重量中。測(cè)定GABA水平，結(jié)果在表1中顯示。實(shí)施例13以實(shí)施例7中所描述的相同方式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，但將在培養(yǎng)基滅菌后將0.2%w/w的磷酸加入到總重量中。測(cè)定GABA水平，結(jié)果在表1中顯示。實(shí)施例14以實(shí)施例7中所描述的相同方式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，但將在培養(yǎng)基滅菌后將0.3%w/w的磷酸加入到總重量中。測(cè)定GABA水平，結(jié)果在表1中顯示。實(shí)施例15以實(shí)施例7中所描述的相同方式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，但將在培養(yǎng)基滅菌后將1.0%w/w的大蒜加入到總重量中。測(cè)定GABA水平，結(jié)果在表1中顯示。實(shí)施例16以實(shí)施例7中所描述的相同方式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，但將在培養(yǎng)基滅菌后將2.0%w/w的大蒜加入到總重量中。測(cè)定GABA水平，結(jié)果在表1中顯示。實(shí)施例17以實(shí)施例7中所描述的相同方式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，但將在培養(yǎng)基滅菌后將3.0%w/w的大蒜加入到總重量中。測(cè)定GABA水平，結(jié)果在表1中顯示。實(shí)施例18以實(shí)施例7中所描述的相同方式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，但將在培養(yǎng)基滅菌后將0.5。/。w/w的番茄醬加入到總重量中。測(cè)定GABA水平，結(jié)果在表l中顯示。實(shí)施例19以實(shí)施例7中所描述的相同方式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，但將在培養(yǎng)基滅菌后將1.0%w/w的番茄醬加入到總重量中。測(cè)定GABA水平，結(jié)果在表l中顯示。實(shí)施例20以實(shí)施例7中所描述的相同方式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，但將在培養(yǎng)基滅菌后將1.5y。w/w的番茄醬加入到總重量中。測(cè)定GABA水平，結(jié)果在表l中顯示。實(shí)施例21以實(shí)施例12中所描述的相同方式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，但將發(fā)酵罐用于生產(chǎn)高濃度的GABA。測(cè)定GABA水平，結(jié)果在表2中顯示。實(shí)施例22以實(shí)施例1中所描述的相同方式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，但在培養(yǎng)26小時(shí)后，將谷氨酸鹽以培養(yǎng)基總重量的3，000mg。/。加入到發(fā)酵罐中，同時(shí)通過(guò)加入3N的HCl將pH調(diào)節(jié)到4.7，然后繼續(xù)培養(yǎng)6小時(shí)(總共32小時(shí))。測(cè)定GABA水平，結(jié)果在表2中顯示。實(shí)施例23以實(shí)施例2中所描述的相同方式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，但總培養(yǎng)時(shí)間為38小時(shí)。測(cè)定GABA水平，結(jié)果在表2中顯示。實(shí)施例24以實(shí)施例2中所描述的相同方式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，但總培養(yǎng)時(shí)間為44小時(shí)。測(cè)定GABA水平，結(jié)果在表2中顯示。實(shí)施例以實(shí)施例2中所描述的相同方式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，但總培養(yǎng)時(shí)間為50小時(shí)。測(cè)定GABA水平，結(jié)果在表2中顯示。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>通過(guò)上述研究已知為乳酸桿菌生長(zhǎng)的最佳培養(yǎng)基的MRS培養(yǎng)基中底物抑制濃度的本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式的結(jié)果，可以確定優(yōu)選的不抑制底物的谷氨酸鹽濃度為3w/w%，如在實(shí)施例3中所示。在實(shí)施例7中GABA轉(zhuǎn)化率最高，其中發(fā)酵的韓國(guó)辣椒醬和釀制醬油被用于提供適合的濃度和氨基氮的混合比，并且GABA的轉(zhuǎn)化率在實(shí)施例7-l中也很高，其中使用了發(fā)酵的韓國(guó)辣椒醬和酸解醬油。當(dāng)實(shí)施例7的培養(yǎng)基添加了l.OumolPLP、0.1w/wn/。的磷酸、1.0w/w。/。的大蒜和0.5\￥~%的番茄醬時(shí)，轉(zhuǎn)化率達(dá)到100%，如實(shí)施例9、12、15和18所示。當(dāng)培養(yǎng)基單獨(dú)添加發(fā)酵的韓國(guó)辣椒醬、釀制醬油或者酸解醬油時(shí)，顯示用于乳酸桿菌生長(zhǎng)的必需養(yǎng)分不足。添加的PLP在GAD活化中作為輔酶涉及，磷酸作為用于乳酸桿菌生長(zhǎng)的必需養(yǎng)分因子涉及。大蒜和番茄醬補(bǔ)充了發(fā)酵的辣椒醬和醬油缺乏的養(yǎng)分。因此，所有這些材料一起導(dǎo)致轉(zhuǎn)化率的增加。因此，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)下列事實(shí)用于適于生產(chǎn)GABA的乳桿菌的最佳培養(yǎng)基可通過(guò)在發(fā)酵的韓國(guó)辣椒醬和釀制醬油的混合物中加入少量PLP或者磷酸或者番茄醬來(lái)制備，作為替代工業(yè)培養(yǎng)基來(lái)代替常規(guī)MRS培養(yǎng)基。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>()為加入的谷氨酸鹽的累計(jì)量。()為谷氨酸的累計(jì)量。如上述結(jié)果所指出的那樣，在初步培養(yǎng)26小時(shí)后，pH被調(diào)節(jié)到4.7，并且以6小時(shí)為間隔加入3,000mgy。的谷氨酸鹽(MSG)，通過(guò)這種操作轉(zhuǎn)化率達(dá)到100%。但是，如實(shí)施例24和25的結(jié)果所顯示的那樣，轉(zhuǎn)化率逐漸下降，這被認(rèn)為是因?yàn)槠渲械奈⑸锼劳鲆虼怂鼈兊幕钚燥@著降低。如實(shí)施例25中所示，在培養(yǎng)50小時(shí)后產(chǎn)生的最終GABA濃度為770mmole。工業(yè)實(shí)用性如上所述，根據(jù)本發(fā)明的方法，產(chǎn)生y-氨基丁酸的乳酸桿菌在添加有發(fā)酵的韓國(guó)辣椒醬、未稀釋的釀制醬油或者酸解醬油的培養(yǎng)基成分上培養(yǎng)，這些成分有利于在短時(shí)期內(nèi)產(chǎn)生高濃度y-氨基丁酸，成本低廉。加入到本發(fā)明的培養(yǎng)基成分中的材料都被用于生產(chǎn)傳統(tǒng)醬，因此培養(yǎng)基本身可直接應(yīng)用于醬和儲(chǔ)藏食品的生產(chǎn)，或者直接或者在純化后作為Y-氨基丁酸加入到功能性食品和藥物中。權(quán)利要求1、一種用于培養(yǎng)乳酸桿菌生產(chǎn)γ-氨基丁酸的培養(yǎng)基成分，包含發(fā)酵的韓國(guó)辣椒醬、未稀釋的釀制醬油液或者酸解醬油。2、根據(jù)權(quán)利要求l所述的培養(yǎng)基成分，其特征在于，培養(yǎng)基成分可進(jìn)一步包含谷氨酸或者谷氨酸鹽。3、根據(jù)權(quán)利要求l所述的培養(yǎng)基成分，其特征在于，發(fā)酵的韓國(guó)辣椒醬可以是來(lái)自選自下組的一種或多種材料的發(fā)酵產(chǎn)品包括小麥、麥麩、小麥玉米、大米、大麥、高粱、玉米、燕麥、蕎麥、粟或者它們的加工產(chǎn)品。4、根據(jù)權(quán)利要求l所述的培養(yǎng)基成分，其特征在于，未稀釋的釀制醬油或者酸解醬油可以是來(lái)源于選自下組的一種或多種材料的那些大豆、豆粉、脫脂大豆粉、蠶豆、綠豆或者它們的加工產(chǎn)品。5、根據(jù)權(quán)利要求l所述的培養(yǎng)基成分，其特征在于，培養(yǎng)基成分進(jìn)一步包含選自下組的一種或多種材料包括葡萄糖、NaCl、谷氨酸鹽、磷酸吡咯烷酮、大蒜和番茄醬。6、一種生產(chǎn)Y-氨基丁酸的方法，包括下列步驟在培養(yǎng)基中培養(yǎng)用于生產(chǎn)Y-氨基丁酸的乳酸桿菌，所述培養(yǎng)基包含發(fā)酵的韓國(guó)辣椒醬、未稀釋的釀制醬油或者酸解醬油，并從培養(yǎng)液中分離Y-氨基丁酸。7、根據(jù)權(quán)利要求6所述的生產(chǎn)Y-氨基丁酸的方法，其特征在于，在培養(yǎng)過(guò)程中將谷氨酸或者谷氨酸鹽另外加入培養(yǎng)基中。8、根據(jù)權(quán)利要求6所述的生產(chǎn)Y-氨基丁酸的方法，其特征在于，發(fā)酵的韓國(guó)辣椒醬可以是來(lái)自選自下組的一種或多種材料的發(fā)酵產(chǎn)品包括小麥、麥麩、小麥玉米、大米、大麥、高粱、玉米、燕麥、蕎麥、粟或者它們的加工產(chǎn)品。9、根據(jù)權(quán)利要求6所述的生產(chǎn)Y-氨基丁酸的方法，其特征在于，未稀釋的釀制醬油或者酸解醬油可以是來(lái)源于選自下組的一種或多種材料的那些大豆、豆粉、脫脂大豆粉、蠶豆、綠豆或者它們的加工產(chǎn)品。10、根據(jù)權(quán)利要求6所述的生產(chǎn)Y-氨基丁酸的方法，其特征在于，培養(yǎng)基成分可進(jìn)一步包含選自下組的一種或多種材料包括葡萄糖、NaCl、谷氨酸鹽、磷酸吡咯烷酮、大蒜和番茄醬。全文摘要本發(fā)明涉及包含發(fā)酵的韓國(guó)辣椒醬、未稀釋的釀制醬油或者酸解醬油的培養(yǎng)基成分，以及制備γ-氨基丁酸(GABA)的方法。更精確地說(shuō)，本發(fā)明涉及用于培養(yǎng)具有GAD活性的乳酸桿菌的培養(yǎng)基成分，該培養(yǎng)基成分包含發(fā)酵的韓國(guó)辣椒醬、未稀釋的釀制醬油或者酸解醬油，本發(fā)明還涉及使用另外添加了谷氨酸或者谷氨酸鹽的培養(yǎng)基生產(chǎn)高濃度γ-氨基丁酸的方法。本發(fā)明提供了使用上述培養(yǎng)基低生產(chǎn)成本生產(chǎn)高濃度γ-氨基丁酸的方法。由于醬的副產(chǎn)品被用作培養(yǎng)基成分，這種培養(yǎng)基本身可被加入到其它醬或者食品中來(lái)生產(chǎn)含有γ-氨基丁酸的功能性食品。文檔編號(hào)C12N1/20GK101346462SQ200680049163公開(kāi)日2009年1月14日申請(qǐng)日期2006年12月22日優(yōu)先權(quán)日2005年12月27日發(fā)明者全明希,崔峻鳳,張榮一,樸熙璟,權(quán)炳具,李承真申請(qǐng)人:Cj第一制糖株式會(huì)社