用于微生物的腸應用的組合物的制作方法

文檔序號：557795閱讀：330來源：國知局

專利名稱：用于微生物的腸應用的組合物的制作方法
發明詳述本發明涉及可用于向腸道供應微生物的組合物。制造用于營養或藥物目的的、包含活的微生物的組合物時遇到若干問題。一些這類問題闡述于WO 97/16198。特別地，旨在在腸道中發揮其活性的微生物必須被保護，免受胃液中存在的酸的影響。另外，包埋在載體或保護性基質中的微生物(其通常被凍干)易于吸濕，并且在環境儲存條件下易于結塊。該結塊效應可例如通過流動性不足從而妨礙成為固體劑型(例如片劑)的加工，并且由于快速吸濕可能進一步對儲存穩定性(在微生物存活方面)具有不良影響。粉末狀產物的流動性也可被顆粒尺寸影響，因為太小的顆粒尺寸可能妨礙流動性，并從而例如導致片劑中活性的裝量差異(content uniformity)問題。因此，低吸濕性和好的流動性是加工粉末狀產物(特別是涉及微生物的粉末狀產物)以例如制備片劑和膠囊的必需特征。
WO 97/16198公開了胃液抗性基質中的益生菌微生物(例如Lactobacillus種)的組合物。該組合物通過將干燥的微生物與胃液抗性基質成分混合、壓緊混合物并將獲得的混合物干燥成顆粒而制備。任選地，對這樣獲得的顆粒進行進一步的干燥成顆粒步驟，以在顆粒上提供胃液抗性的涂層。
已經發現，已知的配制步驟(例如使用通過WO 97/16198的方法制備的顆粒)并不總是能生產出下述片劑，所述片劑顯示令人滿意的特性，例如片劑硬度和片劑抗彎強度，從而所述片劑在處理時不會輕易被破壞。
根據本發明發現，微生物可以被加工為下述顆粒或粉末，所述顆粒或粉末具有用于成片劑目的的優良特性，特別是吸濕性的缺乏和良好的流動性，可通過新方法從所述顆粒或粉末制備具有令人滿意的操作特性的片劑，所述新方法包括將微生物與中鏈或長鏈脂肪酸鹽摻合和/或壓緊以形成粉末狀混合物或壓緊的顆粒的第一步，和對所述粉末狀混合物或壓緊的顆粒提供涂層的第二步。
因此，在一個方面，本發明涉及用于制造包含微生物的固體組合物的方法，其中在第一步中將微生物和中鏈或長鏈脂肪酸鹽的混合物壓緊并成顆粒；在第二步中，在所述顆粒上提供涂層。
在另一方面，本發明涉及用于制造包含微生物的固體組合物的方法，在所述方法中在第一步將微生物與中鏈或長鏈脂肪酸鹽摻合，以制造粉末狀混合物，而在第二步中對所述粉末狀混合物顆粒提供涂層；本發明還涉及通過所述方法可獲得的組合物。
在又一方面，本發明涉及含有微生物的固體組合物，所述微生物被中鏈或長鏈脂肪酸鹽涂布或被包埋于其中，其中所述微生物在中鏈或長鏈脂肪酸鹽涂層下任選地具有第一涂層；所述組合物具有外部涂層，所述外部涂層基本上不含存在于組合物中的材料。
涂層可以是連續的或不連續的，這取決于涂層材料的量和涂布條件。不希望受任何理論束縛的情況下，假設一些顆粒可以被部分或完全涂布，然后附聚形成更大的顆粒。附聚的顆粒隨后被涂布。因此，涂布過程將固有地涉及成顆粒過程。事實上，這類成顆粒過程是需要的，因為其使得顆粒更大并促進粉末流動。
本發明的方法可以用任何微生物或其混合物來實現。本文使用的術語微生物表示微生物的任何固體形式(包括凍干制劑，其典型地包含輔助劑，例如碳水化合物和/或蛋白質)和其中微生物被基質材料(例如蛋白質、麥芽糖糊精、海藻糖和/或抗壞血酸)涂布或包埋于其中的制劑。在本發明上下文中，“微生物”是指至少一種微生物。優選地，所述微生物是作為營養補劑或藥劑或食品添加物提供給腸道的微生物。更優選地，微生物是益生菌或其混合物。益生菌在本文中被定義為活的微生物菌株，其通過促進微生物平衡有利地影響人宿主細胞。優選的益生菌是Bifidobacterium、Lactobacillus、Propionibacterium、Enterococcus及其混合物的分離菌株。更優選的益生菌物種是Bifidobacterium infantis、Bifidobacterium longum、Bifidobacterium animalis、Bifidobacterium lactis、Lactobacillus acidophilus、Lactobacillus rhamnosus、Lactobacillus casei、Lactobacillus paracasei、Lactobacillus helveticus及其混合物。根據一種優選的實施方案，所述微生物包含至少一種以下益生菌作為活性成分在CBS以編號CBS 116411保藏的Lactobacillus acidophilus菌株LAFTI

L10、在CBS以編錄號CBS 116412保藏的Lactobacillus casei菌株LAFTI

L26，和LAFTI

B94，其是Bifidobacterium animalis。根據一種優選的實施方案，益生菌至少由所述保藏菌株的生物學純凈培養物或基本上生物學純凈的培養物組成。根據一種更優選的實施方案，益生菌至少由所述保藏菌株的生物學純凈培養物或基本上生物學純凈的培養物與任何其它有價值的益生菌組合組成。根據一種進一步更優選的實施方案，益生菌選自由Bifidobacterium infantis、Bifidobacterium longum、Bifidobacteriumlactis、Bifidobacterium animalis、Lactobacillus acidophilus，優選地Lactobacillus acidophilus LAFTI

L10 CBS 116411、Lactobacillusrhamnosus、Lactobacillus casei，優選地Lactobacillus casei LAFTI

L26CBS 116412、Lactobacillus paracasei和Lactobacillus helveticus組成的組。進一步更優選地，微生物為Lactobacillus acidophilus CBS 116411和/或Lactobacillus casei CB S116412和/或Bifidobacterium animalis。
在本發明方法的第一步中，將微生物與中鏈或長鏈(例如C10-30-)脂肪酸的無毒鹽(例如硬脂酸鹽或棕櫚酸鹽)混合，或混合并壓緊。具體地，無毒鹽為硬脂酸鈣或硬脂酸鎂。其它可以使用的無毒鹽的例子為長鏈脂肪酸(如硬脂酸和棕櫚酸)的鈉、鉀或鋅鹽。在與微生物的混合物中中鏈或長鏈脂肪酸鹽的量以微生物干重為基礎，適當地為約5重量％到約90重量％，優選地為約5wt.-％到約80wt.-％，更優選地為約5wt.-％到約5wt.-％，最優選地為約5wt.-％到約30wt.-％。存在食用油時，其與中鏈或長鏈脂肪酸鹽的比例適當地為約1∶10或更低，例如以重量計約1∶20份。
本文使用的術語“壓緊”的各種詞性形式是指制備均相的、粘合的成分混合物的任何方法。壓緊適當地通過將微生物與中鏈或長鏈脂肪酸鹽和任選地食用油(優選中鏈(例如C8-14)三酰甘油，生育酚如α-生育酚，大豆油，棕櫚油，葵花子油)或任何其它已知食用油或其混合物捏合在一起形成均相糊劑來實現。對顆粒而言，糊劑被制成適當尺寸(例如約10μm到約800μm)的顆粒，然后對所述顆粒進行涂布。或者，可形成微生物和中鏈或長鏈脂肪酸鹽的親密粉末狀混合物，例如通過例如搖動來實現。對所述粉末狀混合物(其中微生物顆粒被假設為用中鏈或長鏈脂肪酸鹽蓋滿)進行涂布。
在本發明方法的第二步中，對顆粒狀顆粒或粉末進行涂布。涂布可以通過任何涂布技術完成，一種優選方法為將涂層材料的溶液噴霧進入待涂布的粉末或顆粒的流動床上。
涂層材料適當地是能夠溶解或懸浮于水中形成粘稠溶液或懸浮液的材料。碳水化合物和蛋白質適用于該目的。在本發明方法中用作涂層材料的碳水化合物的例子為多糖(例如藻酸鹽、果膠、淀粉、修飾的淀粉、麥芽糖糊精、角叉藻聚糖、阿拉伯膠、瓜爾膠、黃原膠)、纖維素和纖維素衍生物(例如羥丙基甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素臨苯二甲酸酯和乙酸鹽-琥珀酸鹽、寡糖、二糖和單糖)。在本發明方法中用作涂層材料的蛋白質的例子是明膠、植物蛋白和乳清蛋白。優選的涂層材料為海藻酸鈉，其可以作為約0.1到約8wt.-％的水性溶液使用。也可使用本領域已知的其它涂層劑，特別是已知提供抗胃液的涂層，例如纖維素衍生物，如羥丙基甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯和醋酸酯-琥珀酸酯。
涂層的量優選占組合物總重的15wt.-％或更少，更優選約0.1wt/-％到約10wt.-％，仍然更優選約0.1wt.％到約5wt.％，最優選約1wt.-％到約3wt-％。
本發明方法第一步中使用的微生物適當地為凍干制劑，其可以具有涂層，特別是抗胃液涂層。優選地，摻合或壓緊步驟中使用的微生物具有涂層或被包埋在基質材料中。或者，干燥微生物的其它方法是可能的，如噴霧干燥、流動床干燥。可通過用化合物處理所述微生物的細胞懸浮液獲得具有抗胃液涂層的這類凍干的微生物制劑，所述化合物至少選自由蛋白質(乳清、乳、其它)、糖(麥芽糖、海藻糖、乳糖、蔗糖)、淀粉、纖維素和任選地其它穩定劑或冷凍保護劑(如抗壞血酸)組成的組。更優選地，用蛋白質、麥芽糖糊精、海藻糖和任選地其它穩定劑或冷動保護劑(如抗壞血酸)處理細胞懸浮液，形成粘稠的糊劑，將其冷凍干燥。將如此獲得的材料研磨為約10μm到約800μm的尺寸。特別地，可如Korean專利KR 429494B或KR 429495B(其內容通過參考并入本文)中所述獲得凍干制劑。因此，在一種特別優選的實施方案中，本發明涉及含有微生物的固體組合物，所述微生物被涂布有中鏈或長鏈脂肪酸鹽或被包埋在其中，其中所述微生物在中鏈或長鏈脂肪酸鹽的涂層下具有第一涂層；所述組合物具有外部涂層，所述外部涂層具有基本上不存在于組合物中的材料。
根據一種優選的實施方案，涂布后存在于組合物中的殘余水濃度為低于10％。更優選地，殘余的水濃度低于5％，進一步更優選地低于4％。優選地通過干燥失水來測量殘余水濃度。優選地，該方法在4g產物上在70℃下進行60分鐘。根據另一優選的實施方案，涂布后組合物的水活性范圍在0.04和0.3之間。更優選地，水活性在0.04和0.2范圍之間，進一步更優選地在0.04和0.15之間，最優選地在0.04和0.1之間。水活性優選地在給定溫度下，通過測量放置粉末的密閉容器的頂部空間中的平衡相對濕度(erh)來確定。優選的溫度為25℃。水活性表達為erh除以100。
為了獲得具有如此低的殘余水濃度或水活性的組合物，涂布顆粒狀顆粒或粉末的最終步驟是在流動床中同時進行的干燥步驟。或者，將干燥步驟作為涂布顆粒狀顆粒或粉末后的一個額外步驟來進行。令人驚奇的是，我們發現具有相對低殘余水濃度或水活性的組合物在儲存中顯示好得多的微生物存活。
本發明的組合物可用作營養藥物(即具有營養價值的藥物產物，或通過藥物增強其營養價值的食物(in casu微生物)或用作營養成分，或用作健康成分，或用作食物或飲料的補劑，或用作獨立作用(stand-alone)的藥物。因此，在另一實施方案中，本發明涉及包含根據本發明的組合物的食物或飲料。這類食物或飲料可含有任何生理學的或可接受的賦形劑和/或稀釋劑。優選的食物產物為酸乳、酸乳酪、乳酪、乳粉、coveratures(定義為油、糖和乳蛋白(乳清)的混合物)、嬰兒配方、經發酵的肉類制品，或飲料如乳飲品、運動飲品、果汁、果汁飲品。
根據另一實施方案，本發明的組合物是片劑、膠囊、粉末或顆粒、經口液體施用的液體制劑、栓劑、干制劑的形式。更優選地，組合物是能夠在胃中存留并完整達到腸的腸溶片、膠囊、粉末或顆粒的形式。所有這些形式能夠通過已知方法使用食品級的(各種藥物可接受的)載體、賦形劑、溶劑或佐劑來制備。就制備藥物而言，可使用如RemingtonThescience and practice of pharmacy，1995，Mack Publishing，Remington通過引用將Remington一文并入本文。
因此，根據一種優選的實施方案，采用本發明的方法能制造包含微生物的固體組合物，其中與已知的包含微生物的固體組合物相比，該組合物具有經改進的流動性和/或降低的吸濕性。
通過下文給出的實施例進一步闡述本發明。在說明書和權利要求全文中，術語“Lafti

L10”是指先前在說明書中定義的Lactobacillusacidophilus的凍干細胞制劑。由甘油三酯混合物組成的中鏈甘油三酯(MCT)中不少于95％為辛酸和硅酸(見Handbook of Pharmaceutical Excipients，2nd ed.，Am.Pharm.Association，Wash.，USA，1994)。
實施例1 (壓緊/流動床涂層) 步驟1 將硬脂酸鎂(46.74g)、α-生育酚(6.46g)和中鏈甘油三酯(MCT，3.8g)在燒杯中混合，然后用制糊機(pasta maker)(Model Atlas 150，Fabrique EnItalie Par，Campodarsego，Itali)揉捏直到混合物均相為止。然后將混合物與Lafti

L10(CBS 116411)(323g)混合，并用制糊機揉捏直到其均相并成片狀。將片狀材料通過800-微米篩形成成顆粒的顆粒。
步驟2 通過將7.372g藻酸鈉(13％水含量；FMC Biopolymer，Philadelphia，USA)溶解于去離子水(99.5g)中，來制備6％的藻酸鹽溶液。將涂布了硬脂酸鎂的Lafti

L10(如在步驟1中所獲得的，350g)置于流動床顆粒機(MP-1 Multi-Processor，Aeromatic-Fielder，Bubendorf，Switzerland)上，并從底部以每分鐘約1.6g的速率噴射6％的藻酸鹽溶液(106.9g)。最后，將產物干燥至低于4％的水分含量，得到具有以下表1所示顆粒尺寸分布的最終產物。
表1顆粒尺寸分布最終產物具有如表2中所示的如下組成。
表2最終產物的組成
流動性通過記錄100g樣品經過帶有直徑11cm頸的漏斗所需要的時間來測定流動性。流動性為每100g 16秒，而未改變的Lafti

制劑不具有粉末流動性。
Lactobacillus acidophilus方法的存活率在下文顯示于表3中。將瓊脂平板在缺氧條件下于37℃孵育至少48小時后，通過計算在Mann RagosaSharp(MRS)(Oxoid，UK)瓊脂上形成的Lactobacillus菌落來評估Cfu數。
表3組合物中益生菌的存活率

Cfu菌落形成單位實施例2 (片劑化) 將2.80g Polyplasdone XL10，(Crospovidone)和181.96g Avicel pH 302(微晶纖維素)篩過1mm的篩子。加入95.24g根據實施例1獲得的Lafti

L10制劑，并用轉鼓混合機混合10分鐘。
將片劑混合物在單沖頭壓片機(Comprex II)上壓實為重約1400mg的長方形(oblong)片劑(22mmx9mm)，壓實力為20kN。獲得的片劑特性如下壓碎力277N(通過Kraemer UTS 4.1測定) 崩解時限7分鐘10秒(根據USP 27，軟化水) 添加計數(Added counts)/片劑90.8*109 發現計數(Found counts)/片劑89.6*109(保留＝99％) 術語“添加計數”是指與實施例1的Lafti

L10制劑一起被添加的微生物計數(菌落形成單位)數量；術語“發現計數”表示在片劑配方中發現的菌落形成單位。
實施例3 (摻合/流動床涂層) 步驟1 將Lafti

L 10(272g)和硬脂酸鎂(48g)置于1升瓶中，并以45RPM搖動20分鐘(Turbula T2C，Willy A.Bachofen，Basel，Switzerland)。
步驟2 通過將6.321g藻酸鈉(13％水分含量；FMC Biopolymer，Philadelphia，USA)溶于去離子水(85.3g)中，來制備6％藻酸鹽溶液。將步驟1中獲得的產物(300g)置于流體床顆粒機(MP-1 Multi-Processor，Aeromatic-Fielder，Bubendorf，Switzerland)中，并從底部以每分鐘0.86-1.6g的速率噴射6％的藻酸鹽溶液(91.65g)。最后將藻酸鹽和硬脂酸鎂包被的

L10干燥至低于4％的水分含量，得到具有表4中所示的以下顆粒尺寸分布。
表4顆粒尺寸分布終產物具有如表5中所示的以下組成。
表5獲得的終產物組成
流動性流動性如實施例1中所述測量，為每100g 10秒，而未改變的

制劑不具有粉末流動性。
Lactobacillus acidophilus方法存活率在下文顯示于表6中。
表6組合物中益生菌的存活率
實施例4 (片劑化) 將根據實施例3獲得的0.98g Polyplasdone XL10，(Crospovidone)，55.09g Avicel PH 302(微晶纖維素)和41.93g Lafti

L10制劑篩過1mm篩子，并用轉鼓混合機混合10分鐘。
將片劑混合物在單沖頭壓片機(Comprex II)上壓實為重約1400mg的長方形片劑(22mmx9mm)，壓實力為20kN。
獲得的片劑特性如下壓碎力254.4N(通過Kraemer UTS 4.1測定) 崩解時限52分鐘02秒(根據USP 27，軟化水) 實施例5 步驟1 將Lafti

L10(272g)和硬脂酸鎂(48g)置于1升瓶中，并以45RPM搖動20分鐘(Turbula T2C，Willy A.Bachofen，Basel，Switzerland)。
步驟2 通過將16.45g果膠(GENU

果膠USP/100，8.83％水分含量，CP Kelco，Lille Skensved，Denmark)溶解于去離子水(483.55g)中，來制備3％的果膠溶液。將步驟1中獲得的產物(360g)置于流動床顆粒機(MP-1 Multi-Processor，Aeromatic-Fielder，Bubendorf，Switzerland)中，并從頂部以每分鐘約1.5g的速率噴射3％的果膠(216g)。最后，將果膠和硬脂酸鎂包被的Lafti

L10干燥至水分含量低于4％。產物的主要級分(301g)位于顆粒機容器中，但是白色材料(59g)的較小級分殘留在濾器上。根據顏色(硬脂酸鎂白色；Lafti褐色)，濾器中的材料主要為硬脂酸鎂。
組合級分的顆粒尺寸分布表示在表7中。
表7顆粒尺寸分布流動性通過記錄100g樣品經過帶有直徑11cm頸的漏斗所需要的時間來測定流動性。流動性為每100g 21秒，而未改變的Lafti

L10制劑不具有粉末流動性。
產物具有如表8中所示的以下組成。
表8獲得的終產物的組成
去除濾器中殘余的較小級分后，產物的顆粒尺寸分布顯示于表9中。
表9顆粒尺寸分布流動性通過記錄100g樣品經過帶有直徑11cm頸的漏斗所需要的時間來測定流動性。流動性為每100g 14秒，而未改變的Lafti

制劑不具有粉末流動性。
實施例6 (壓縮/流動床涂層) 步驟1 將硬脂酸鈣(61.5g)、α-生育酚(8.5g)和中鏈甘油三酯(MCT，5g)在燒杯中混合，然后用制糊機(Model Atlas 150，Fabrique En Italie Par，Campodarsego，Itali)揉捏直到混合物均相為止。然后將混合物與Lafti

L10(425g)混合并用制糊機揉捏直到其均相并成片狀。用壓片機將混合物壓縮，將片劑壓碎并通過500-微米篩形成顆粒狀的顆粒。
步驟2 通過將33g藻酸鈉(13％水含量；FMC Biopolymer，Philadelphia，USA)溶解于去離子水(538.9g)中，來制備藻酸鹽溶液。將涂布了硬脂酸鎂的Lafti

L 10(如在步驟1中所獲得的，350g)置于流動床顆粒機(MP-1 Multi-Processor，Aeromatic-Fielder，Bubendorf，Switzerland)中，并從底部以每分鐘約2.3g的速率噴射藻酸鹽溶液(142.9g)。最后，將產物干燥至低于4％的水分含量。去除大于850微米的級分，所述級分占總材料的8.1％。表10顯示剩余材料的顆粒尺寸分布。
表10顆粒尺寸分布最終產物具有如表11中所述的以下組成。
表11獲得的最終產物的組成
流動性通過記錄100g樣品經過帶有直徑11cm頸的漏斗所需要的時間來測定流動性。流動性為每100g 14秒，而未改變的Lafti

制劑不具有粉末流動性。
實施例7 (摻合/流動床涂層) 步驟1 將Lafti

L10(272g)和硬脂酸鎂(48g)置于1升瓶中，并以45RPM搖動20分鐘(Turbula T2C，Willy A.Bachofen，Basel，Switzerland)。
步驟2 通過將6.321g藻酸鈉(13％水含量；FMC Biopolymer，Philadelphia，USA)溶解于去離子水(176.9g)中制備3％的藻酸鹽溶液。通過將5g氯化鈣溶解于去離子水(95g)中制備5％的氯化鈣。將步驟1中獲得的產物(300g)置于流動床顆粒機(MP-1 Multi-Processor，Aeromatic-Fielder，Bubendorf，Switzerland)中并從頂部以約1-3g每分鐘的速率噴射3％的藻酸鹽溶液(180g)和以0.5-2g每分鐘的速率噴射5％的氯化鈣溶液(27g)。最后，將用藻酸鹽和硬脂酸鎂包被的Lafti

L10干燥至低于4％的水分含量，得到具有表12所示以下顆粒尺寸分布的最終產物。
表12顆粒尺寸分布最終產物具有如表13中所示的以下大致組成。
表13獲得產物的組成
流動性如實施例1所述測定流動性，且流動性為每100g 16秒，而未改變的Lafti

制劑不具有粉末流動性。
實施例8 (片劑化) 將0.98g Polyplasdone XL10，(Crospovidone)、55.09g Avicel pH 302(微晶纖維素)和41.93g根據實施例6獲得的Lafti

L10制劑篩過1mm的篩子，并用轉鼓混合機混合10分鐘。
將片劑混合物在單沖頭壓片機(Comprex II)上壓實為重約1400mg的長方形片劑(22mmx9mm)，壓實力為20kN。
獲得的片劑特性如下壓碎力254.4N(通過Kraemer UTS 4.1測定) 實施例9 這些試驗的目的在于確認Lafti配方和中試規模的方法及其可能的外推至生產規模。
預先混合配方為了測試預先混合物對油量的敏感性，進行三次試驗，如表14中所示。
表14制備的三種預先混合物的組成油混合物被噴射到硬脂酸鈣上，所述硬脂酸鈣在高剪切力的攪拌器中于150rpm下混合。高剪切力的攪拌器在各情況下可毫無問題地被清空(沒有沉積物)。預先混合物不含塊，不需要過篩。
粉末混合物粉末混合物(lafti L10/預先混合物)也用表15所示的以下配方在高剪切力攪拌器中獲得。
表15從三種預先混合物獲得的粉末混合物然后在Bepex壓緊器上壓縮粉末混合物。
使用的壓力5-20kN，次數2 然后如表16所示將壓縮的材料過篩。最后2組試驗使用的旋轉篩使得能夠在少于5分鐘內篩過8-9Kg。
表16五個試驗組的過篩條件在流動床涂布器(Aeromatic)中對壓縮的/過篩的材料涂布。使用底部噴射構型。發現4％的藻酸鹽溶液是容易噴射的最優值。表17給出各試驗中使用的方法特性。
表17用于各試驗的方法最終產物質量所有的產物具有良好到非常良好的以下特征，并易于用來制造性能良好的片劑。產物密度高，這有利于包裝。
獲得的顆粒不是吸濕性的，可以放在開放的空氣中數天而不粘合。顆粒尺寸分布良好，特別是對試驗C而言。
成顆粒過程和成片劑過程后的存活率測量良好，與表3或表6中獲得的數據相當。
表18給出了對五個試驗中產生的產物特性的綜述。
表18五個試驗中制備的產物特性
與被保藏的微生物相關的說明
(PCT Rule 13bis)
與被保藏的微生物相關的說明
(PCT Rule 13bis)
權利要求
1. 用于制備包含微生物的固體組合物的方法，所述方法包括用中鏈或長鏈脂肪酸鹽與所述微生物摻合和/或壓緊，以制備粉末狀混合物或壓緊的顆粒的第一步，和對所述粉末狀混合物或壓緊的顆粒提供涂層的第二步。
2. 如權利要求1所述的方法，其中在第一步中，微生物和中鏈或長鏈脂肪酸鹽被壓緊并形成顆粒；在第二步中，對所述顆粒提供涂層。
3. 如權利要求1或2中所述的方法，其中所述中鏈或長鏈脂肪酸鹽為硬脂酸鎂。
4. 如權利要求1或2中所述的方法，其中所述中鏈或長鏈脂肪酸鹽為硬脂酸鈣。
5. 如權利要求1到4中任一項所述的方法，其中所屬壓緊步驟在存在食用油時進行。
6. 權利要求5所述的方法，其中所述食用油選自中鏈甘油三酯和生育酚及其混合物。
7. 如權利要求1所述的方法，其中在第一步中將微生物與中鏈或長鏈脂肪酸鹽摻合，產生粉末狀混合物，而在第二步中，對所述粉末狀混合物顆粒提供涂層。
8. 如權利要求1到7中任一項所述的方法，其中所述涂層由藻酸鹽提供。
9. 如權利要求8所述的方法，其中通過將水性藻酸鹽溶液噴在所述壓縮顆粒或粉末狀混合物上來應用所述涂層。
10. 如權利要求1到9中任一項所述的方法，其中所述微生物是益生菌或其混合物。
11. 如權利要求1到10中任一項所述的方法，其中所述微生物為凍干制劑。
12. 權利要求1到11中任一項所述的方法，其中所述摻合或壓緊步驟中使用的微生物具有基質材料涂層或被包埋入基質材料中。
13. 如權利要求12所述的方法，其中所述基質材料選白蛋白質、麥芽糖糊精、海藻糖和/或抗壞血酸。
14. 如權利要求1到13中任一項所述的方法，其中所述微生物為Bifidobacterium、Lactobacillus、Propionibacterium或Enterococcus。
15. 如權利要求1到13中任一項所述的方法，其中微生物選自由Bifidobacterium infantis、Bifidobacterium longum、Bifidobacteriumanimalis、Bifidobacterium lactis、Lactobacillus acidophilus，優選地Lactobacillus acidophilus CBS 116411、Lactobacillus rhamnosus、Lactobacillus casei，優選地Lactobacillus casei CBS 116412、Lactobacillusparacasei和Lactobacillus helveticus組成的組。
16. 如權利要求15中所述的方法，其中所述微生物選自由Lactobacillus acidophilus菌株CBS 116411、Bifidobacterium animalis和Lactobacillus casei CBS 116412組成的組。
17. 如權利要求1到16中任一項所述的方法，用于促進固體微生物組合物的流動性和/或降低吸濕性。
18. 固體組合物，其包含微生物或其混合物、中鏈或長鏈脂肪酸鹽和涂層材料，可通過如權利要求1到17中任一項所述的方法獲得。
19. 含有微生物的固體組合物，所述微生物被中鏈或長鏈脂肪酸涂布或被包埋在其中，其中所述微生物在中鏈或長鏈脂肪酸鹽涂層下任選地具有第一涂層；所述組合物具有外部涂層，所述外部涂層基本上不含組合物中存在的材料。
20. 如權利要求18或19所述的組合物，其中所述微生物為凍干制劑。
21. 如權利要求18或20所述的組合物，其中所述微生物在中鏈或長鏈脂肪酸鹽涂層下具有第一涂層。
22. 如權利要求21所述的組合物，其中通過用蛋白質、麥芽糖糊精、海藻糖和抗壞血酸處理所述微生物的細胞懸浮液來提供所述第一涂層。
23. 如權利要求18到22中任一項所述的組合物，其為顆粒或粉末的形式。
24. 如權利要求18到23中任一項所述的組合物，其為片劑的形式。
25. 如權利要求18到24中任一項所述的組合物，其中所述中鏈或長鏈脂肪酸鹽是硬脂酸鎂或硬脂酸鈣，所述外部涂層是藻酸鈉。
26. 如權利要求18到25中任一項所述的組合物，其中所述微生物為益生菌或其混合物。
27. 如權利要求24所述的組合物，其中所述微生物是Bifidobacterium、Lactobacillus、Propionibacterium或Enterococcus。
28. 如權利要求27所述的組合物，其中所述微生物選自由Bifidobacterium infantis、Bifidobacterium longum、Bifidobacteriumanimalis、Bifidobacterium lactis、Lactobacillus acidophilus，優選地Lactobacillus acidophilus CBS 116411、Lactobacillus rhamnosus、Lactobacillus casei，優選地Lactobacillus casei CBS 116412、Lactobacillusparacasei和Lactobacillus helveticus組成的組。
29. 如權利要求28所述的組合物，其中所述微生物選自由Lactobacillus acidophilus CBS 116411、Lactobacillus casei CBS 116412和Bifidobacterium animalis組成的組。
30. 如權利要求18到29中任一項所述的組合物，其中所述水活性范圍在0.04和0.3之間。
31. 包含下述組合物的食品，所述組合物是通過權利要求1到16中任一項的方法獲得的或是權利要求18到30中任一項所要求的。
32. 如權利要求31所述的食品，其為酸乳、酸乳酪、乳酪、乳粉、coveratures(定義為油、糖和乳蛋白(乳清)的混合物)、嬰兒配方、發酵的肉產物或飲料，例如乳飲品、運動飲品、果汁、果汁飲品等。
33. 藥物、營養藥、營養健康成分或健康成分，其包含可通過權利要求1到17中任一項的方法獲得的或如權利要求18到30中任一項所要求的組合物。
全文摘要
本發明描述了用于制備包含微生物的固體組合物的方法，所述方法包括用中鏈或長鏈脂肪酸的鹽與微生物摻合和/或壓緊以制備粉末狀混合物或壓緊的顆粒的第一步，和對所述粉末狀混合物或壓緊的顆粒提供涂層的第二步。微生物優選地是益生菌。本發明還涉及通過所述方法獲得的固體組合物及其在食品中的用途。
文檔編號C12N11/04GK101257804SQ200680026473
公開日2008年9月3日申請日期2006年5月18日優先權日2005年5月18日
發明者齊-程·陳, 布魯諾·H·勒安伯格, 羅尼·施維克特, 厄恩斯特·澤迪申請人:帝斯曼知識產權資產管理有限公司

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