專利名稱：肌酸羥基檸檬酸鹽、其制法及在個體中的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種促進個體肌肉生長和鍛煉成績、減少和/或預防肥 胖、改善訓練的恢復和/或抑制食欲導致減肥的食品添加劑。本發明還 涉及一種通過消耗添加的組合物促進這些效果的方法。本發明還涉及一 種制造一種添加組合物的方法。
背景技術：
單水合肌酸通常作為添加劑使用。單水合肌酸可溶于水，每75mL 水可溶解l克肌酸。攝取單水合肌酸須要同時攝入大量的水。另外，在 水溶液中，肌酸通過不可逆的、與pH值有關的非酶反應而轉化為肌酸 酐。堿性水溶液含有肌酸和肌酸酐的平衡混合物。另一方面，在酸性的 溶液中，則完全生成肌酸酐。肌酸酐完全沒有肌酸的增進機能的有益效 果。水溶性的單水合肌酸鹽是可以得到的，在其他地方已經敘述。比如， 美國專利5,973,199 (其全部內容在此引作參考)將lmol單水合肌酸和 lmol如下的有機酸結合而成的肌酸水溶性有機鹽，這些有機酸是檸 檬酸、馬來酸、富馬酸、酒石酸和馬來酸。美國專利5，925，278 (其全部內容在此引作參考)聲稱敘述了通過 lmol的肌酸和lmol的檸檬酸結合得到的一種形式的肌酸鹽。美國專利6,211,407 (其全部內容在此引作參考)聲稱敘述了檸檬酸 二肌酸鹽和三肌酸鹽及其制造方法。據報道此鹽是2mo1和3mo1的單 水合肌酸分別與lmol檸檬酸結合。另外，檸檬酸二肌酸鹽和三肌酸鹽 據稱在酸性溶液中是穩定的，似乎旨在防止或阻止肌酸形成肌酸酐。美國專利6,166,249 (其全部內容在此引作參考)聲稱敘述了丙酮酸 肌酸鹽，其中肌酸和丙酮酸根之比為1:1,該丙酮酸肌酸鹽含有1~10 個分子的水。美國專利5，973，199 (其全部內容在此引作參考)聲稱敘述了其熔點 為128~ 129'C的馬來酸肌酸鹽的制造方法。該專利還聲稱敘述了其熔 點為112-114X:的檸檬酸肌酸鹽的制造方法。 美國專利6，838，562(其全部內容在此引作參考)聲稱敘述了乳清酸、 硫代乳清酸和二氫乳清酸的單肌酸鹽、二肌酸鹽或三肌酸鹽的合成方 法。發明內容本發明，按照其不同的實施方案提供了通過肌酸(正如在本文中所 使用的，此術語指的是任何種類的肌酸，將不限定于任何特定的形式或 陰離子)與羥基檸檬酸(也稱為HCA)的反應形成的有機鹽的制造方 法及其在個體，比如動物和人當中的應用，羥基檸檬酸是在藤黃屬植物(包括但不限于膝黃果(G"flmVi/fl cfl附辦wVi)、山竹子((7"w7wVi ) 和客夜果(G"rc/"/fl "/ W/7V/s ))水果外殼中存在的主要的酸。這些鹽， 比如羥基檸檬酸單肌酸鹽、羥基檸檬酸二肌酸鹽和羥基檸檬酸三肌酸鹽(一起稱為"羥基檸檬酸肌酸鹽")，可提供改善的水溶性，并在水中 和在酸性溶液中具有比單水合肌酸改善的穩定性。如上所述的羥基檸檬 酸肌酸鹽可用于增加個體，特別是運動員的肌肉和鍛煉成績，提供針對 特定生物能缺陷的神經保護策略。另外，通過供給有生物效果量的 HCA,這樣的羥基檸檬酸肌酸鹽有助于通過避免將碳水化合物能轉化 為三甘油酯來減少脂肪酸合成，借此特別適合于旨在減少和/或防止過 度肥胖以減輕體重的節食和鍛煉安排。再有，由于HCA部分對5-羥 色胺能輸出(serotonergic output)的刺激作用，羥基檸檬酸肌酸鹽可 有助于改善鍛煉恢復和抑制食欲導致減輕體重。一般說來，按照其不同的實施方案，本發明提供穩定的水溶性羥基 檸檬酸的肌酸鹽，比如羥基檸檬酸肌酸鹽及其制造方法，與單水合肌酸 相比，此肌酸鹽具有更高的水溶性和在酸性溶液中具有更高的穩定性。 按照其不同的實施方案，本發明還可提供羥基檸檬酸肌酸鹽及其制造方 法，這種肌酸鹽可以給哺乳動物口服，并具有與單獨服用或同時服用肌 酸或檸檬酸相比相同或更高的生物有效性，其中該鹽可協同性地增加由 單獨的肌酸和羥基檸檬酸成分所賦予的生理學效果。更具體說，本發明提供一種食品添加劑的制造方法，這種方法提供 生物有效的有機肌酸鹽，比如羥基檸檬酸單肌酸鹽、二肌酸鹽和三肌酸 鹽，它們在整體上被稱為"羥基檸檬酸肌酸鹽"。本發明有利地提供一 種食品添加劑及其制造方法，其中有生物效果的有機肌酸鹽，每個脂解 /抗生脂的陰離子部分(由羥基檸檬酸表示)分別包括一個、兩個或三 個增能的陽離子部分(由肌酸表示，它如上所述但不限定于特定種類的 陰離子)。還有，按照其一個實施方案，本發明可提供具有改善了 口味 的羥基檸檬酸肌酸鹽及其制造方法。本發明還通過消耗含有羥基檸檬酸肌酸鹽的添加組合物，來提供促 進個體增加肌肉和鍛煉成績的方法。本發明還通過消耗含有羥基檸檬酸 肌酸鹽或衍生物的添加組合物，來提供減少和/或防止肥胖癥的方法。 本發明還通過消耗含有羥基檸檬酸肌酸鹽或衍生物的添加組合物，提供 改善鍛煉恢復的方法。另外，本發明還通過消耗含有羥基檸檬酸肌酸鹽 或衍生物的添加組合物，來提供抑制食欲導致減輕體重的方法。按照本發明的不同實施方案，須要改善短期無氧運動成績和/或同 時實現肌肉體積膨大和瘦肉多的從事運動的個體可補充以羥基檸檬酸肌酸鹽。再有，由于來源于補充羥基檸檬酸肌酸鹽而由HCA-誘發的刺 激5 -羥色胺能輸出，使得增強了鍛煉的恢復，并改善了進食的欲望(特 別是在嚴格限制飲食的期間)。再有，通過神經保護，羥基檸檬酸肌酸 鹽可特別用于杭廷頓舞蹈癥和帕金森病、杜興氏肌營養不良病人的特異 性生物能缺陷，在臨床上可以用于螺旋狀萎縮病人和其他各種神經肌肉 疾病、糖原儲積病和充血性心臟功能不全。在一個實施方案中，本發明涉及通過肌酸與羥基檸檬酸反應形成的 被分離的水溶性肌酸鹽，比如羥基檸檬酸肌酸鹽，這是一種與單水合肌 酸相比，具有改善的在水和酸性溶液中穩定性的鹽。在一個實施方案中，羥基檸檬酸肌酸鹽是羥基檸檬酸的單肌酸鹽、 二肌酸鹽和三肌酸鹽。羥基檸檬酸單肌酸鹽可以是每個羥基檸檬酸根陰 離子包括一個肌酸陽離子。羥基檸檬酸二肌酸鹽可以是每個羥基檸檬酸 根陰離子包括兩個肌酸陽離子。而羥基檸檬酸三肌酸鹽可以是每個羥基 檸檬酸根陰離子包括三個肌酸陽離子。本發明可提供對個人，比如運動員增強肌肉能力和鍛煉恢復以及減 輕體重的方法，其中該方法包括單獨或組合服用含有經分離的在此敘述 的鹽中的任何一種的組合物。本發明還可以提供針對特異性生物能缺陷 提供神經保護策略的方法，該方法包括單獨或組合服用含有在此所述分 離的鹽中任何一種的組合物。本發明還可以提供恢復疲勞和緊張的方 法，其中該方法包括單獨或組合服用含有在此所述分離的鹽中任何一種 的組合物。本發明還可以提供通過防止碳水化合物能轉化為三甘油酯， 從而減少脂肪酸合成的方法，其中該方法包括單獨或組合服用含有在此所述分離的鹽中任何一種的組合物。還有，本發明可提供通過刺激5-羥色胺能輸出來抑制食欲導致減輕體重的方法，其中，該方法包括單獨 或組合服用含有在此所述分離的鹽中任何一種的組合物。本發明還可以提供方法，該方法有利地包括將任何一種在此所述分 離的鹽與一種或幾種如下所述的食品添加劑相組合的步驟乳清蛋白 (分離物和/或濃縮物和/或水解物)、酪蛋白(膠束酪蛋白、酪蛋白酸 鈉和/或酪蛋白酸鉀)、a-硫辛酸、碳水化合物、游離形式的氨基酸(分 支鏈和/或關鍵氨基酸和/或非關鍵氨基酸)和鹽、三價鉻及其有機鹽和 螯合物(多煙酸鉻和/或曱基吡啶酸鉻和/或富馬酸鉻、檸檬酸鉻等)、 維生素和礦物質、茶葉及其多酚提取物(特別含有表沒食子兒茶精五倍 子酸鹽(EGCG)、表沒食子兒茶精(EGC)、兒茶精(C)、表兒茶 精(EC)、表兒茶精五倍子酸鹽(EG)等)、咖啡因和其他熱源、生 物類黃酮、縮合單寧酸、低聚原花青素、美國和/或韓國人參及其提取 物(特別含有人參皂戒型糖苷皂戒)、魔芋葡甘露聚糖、肌肉醇，包括 肌肉醇衍生物，比如酯、酰胺和鹽以及其他衍生物，包括在消化時變成 活性物的衍生物和o-磷酸肌醇酯(COP)、硫酸肌醇酯(CS)、普立 醇、補益草藥和藥物等。應該承認，可以加入或者與本發明的食品鹽一 起加入的成分并不限于如上所述的成分。按照一個實施方案，本發明涉及如下通式的分離的水溶性羥基檸檬 酸肌酸鹽該水溶性鹽的分子量為547.07，熔點為大約290'C。
此外，按照一個實施方案，本發明涉及至少下列一種方法促進個 體增加肌肉和鍛煉成績、減少和/或防止肥胖癥、改善鍛煉恢復和抑制 食欲，導致個體減輕體重的方法，該方法包括消耗以分離水溶性幾基檸 檬酸肌酸鹽的形式含有羥基檸檬酸肌酸鹽的食品添加組合物。該水溶性 鹽的分子量為547.07，熔點為大約290匸。按照一個實施方案，本發明涉及用于促進個體增加肌肉和鍛煉成 績、減少和/或防止肥胖癥、改善鍛煉恢復和抑制食欲，導致個體減輕 體重的中至少 一 項的食品添加組合物，該食品添加組合物包括呈分離的 水溶性羥基檸檬酸肌酸鹽形式的羥基檸檬酸肌酸鹽。在該食品添加組合 物中，該鹽的分子量為547.07，其熔點為大約290。C。
具體實施方式
當補充外源肌酸時，肌肉內和大腦的肌酸及其磷酰化形式，即磷酰 肌酸的儲存就變高。此儲存量的增加，通過防止消耗ATP，刺激蛋白 質合成或減少蛋白質降解和使生理膜穩定化而給予治療的效果。來自運 動文獻的證據表明，運動員通過補充肌酸得到增加肌肉力量和能力的益 處，減輕了重復活動產生的疲勞并增加了肌肉的質量。在短時間的強力 鍛煉的過程中，比如在半分鐘或更短的時間內，磷酰肌酸分解為肌酸和 磷酸根，使用釋放出的能量使初級能源，即三磷酸腺普(ATP)再生。 當磷酰肌酸被耗盡時，由于ATP的再生無法快到滿足鍛煉的需要而使 動力輸出下降。因此，在肌肉中積累更多的磷酰肌酸能夠減輕在短時間 內高強度鍛煉產生的疲勞。在肌肉中過量的肌酸也可以在高強度無氧鍛煉之后提高磷酰肌酸 再生的速度，這可能導致減輕在訓練中或在許多竟爭性運動中由于重復 的急促性活動導致疲勞。因此，補充肌酸能夠導致對骨銀肌有積極的生理效果，比如在短時 間高強度無氧鍛煉的過程中提高成績，增加強度和改善體力活動主體的 身體成分。這樣的好處已經給予了杭廷頓舞蹈癥、帕金森病和杜興氏肌 營養不良病人模型，在臨床上用于螺旋狀萎縮病人和其他各種神經肌肉 疾病、糖原儲積病和充血性心臟功能不全。請見比如Persky, A. M.和 Brazeau, G. A.，的《食品補充單水合肌酸的臨床藥理學》，栽尸A"r柳a"/ Z ev53 ( 2) : 161-176， 2001。食品中補充合成肌酸越來越普遍，代表
運動員用肌酸給肌肉"加載"的主要方法。每日攝入大約20g的肌酸， 連續5 ~ 7日 一般會增加肌肉中肌酸含量10 ~ 25 % 。在肌肉中過量肌酸 的大約三分之一呈磷酰肌酸的形式。請見比如Harris, R.等人的《通過 補充肌酸提高正常主體的靜止肌肉和運動肌肉中肌酸含量》，載Clinical Science 83: 367-374， 1992和Balson, P.等人的《在短時間高強度鍛煉 的過程中骨骼肌的代謝，補充肌酸的影響》，載爿""戶/^si》/og/cfl S，J/譜/ca， 1154: 303-310, 2995。羥基檸檬酸表現出能夠抑制ATP檸檬酸分解酶的活性，這是負責 將碳水化合物能轉化為脂肪的線粒體外酶，因此，據信能抑制脂肪酸的 合成，即抑制脂肪生成并減輕體重，請見比如Jena， B. S.等人的《來 源于藤黃的(-)-鞋基檸檬酸的化學和生物化學》，載/.爿g〃'c Ftf^/C7^w. 50: 10-20， 2002。還在一定程度上介紹了另外的證據，即羥基檸檬酸 可借助于對5-羥色胺能輸出的刺激來減少食物攝入，這最終會誘發飽 和并減少個體對食物的欲望，請見比如Preuss， H. G.等人的《(-)-羥基 檸檬酸(HCA-SX)新型天然提取物和HCA-SX、尼亞新(一種煙酸商 品名)結合鉻和匙羹藤(Gymnema sylvestre )提取物組合在志愿者體 重控制方面的影響初步研究》，載7VM/W//Vm i ^e"rc/i 24: 45-58， 2004。 補充羥基檸檬酸通常被用作飲食介入以對抗肥胖癥和體重過重導致減 輕體重。另外，在運動營養中羥基檸檬酸還用于幫助活動的個體和專業 運動員達到和保持許多運動規則可要求的身體脂肪的最佳水平。按照其不同的實施方案(指實施例1-4),本發明提供穩定的水 溶性羥基檸檬酸肌酸鹽，比如羥基檸檬酸肌酸鹽，如羥基檸檬酸三肌酸 鹽，還提供其制造方法，該肌酸鹽具有比單水合肌酸有更高水溶性并在 酸性溶液中有更高的穩定性。按照其不同的實施方案，本發明提供羥基 檸檬酸肌酸鹽，比如羥基檸檬酸三肌酸鹽及其制造方法，該肌酸鹽可供 哺乳動物口服，其生物有效性與單獨或組合給藥的肌酸或幾基檸檬酸相同或者更高，其中該鹽可協同性地增加由單獨的肌酸和羥基檸檬酸成分 所賦予的生理效果。更具體說，本發明提供一種食品添加劑及其制造方法，該添加劑提 供生物有效的肌酸有機鹽，比如羥基檸檬酸肌酸鹽。本發明有利地提供 一種食品添加劑及其制造方法，其中該生物有效的肌酸有機鹽在每個脂 解/抗生脂陰離子部分(由羥基檸檬酸根表示)分別包括一個、兩個或
三個增強能量的陽離子部分(由肌酸表示)。本發明還可以提供具有改 善了滋味的羥基檸檬酸肌酸鹽及其制造方法。本發明通過消耗含有羥基檸檬酸的食品添加組合物，提供促進個體 增加肌肉和提高鍛煉成績的方法。本發明通過消耗含有羥基檸檬酸肌酸 鹽的食品添加組合物，提供減少和/或防止肥胖癥的方法。本發明還通 過消耗含有羥基檸檬酸肌酸鹽的食品添加組合物，提供一種改善鍛煉恢 復的方法。另外，本發明還通過消耗含有羥基檸檬酸肌酸鹽的食品添加 組合物，提供一種抑制個體食欲，導致減輕體重的方法。在此方面，按照本發明的各種實施方案，補充羥基檸檬酸肌酸鹽， 可特別適用于須要改善短時間無氧成績和/或同時實現肌肉增加體積和瘦肉的運動。再有，由于HCA-誘發的刺激5-羥色胺能輸出，按照本 發明的各種實施方案，補充羥基檸檬酸肌酸鹽，特別可適用于增強從鍛 煉中的恢復和減少進食欲望(特別是在嚴格的飲食限制中)。再有，通 過賦予神經保護，幾基檸檬酸肌酸鹽特別適用于杭廷頓舞蹈癥、帕金森 病和杜興氏肌營養不良特異性生物能缺陷，在臨床上用于螺旋狀萎縮和 各種神經肌肉疾病、糖原儲積病和充血性心臟功能不全的病人。添加劑羥基檸檬酸肌酸鹽可以任何形式消費。比如可將添加組合物 的劑型以比如膠嚢、片劑、嚢片劑、液體飲料、粉末混合飲料、食品凝 膠或即食型棒或飲品的形式提供。優選的劑型是膠嚢或粉末。再有，可以按照習慣的草藥和/或食品添加劑的加工技術，以如上 所述的任何形式提供劑型。本領域的專業人員都可以理解，補充組合物 可含有各種附加的活性成分和賦形劑。在實施例l至實施例5中更詳細說明的本發明的幾個實施例的實施 方案中，提供了生產羥基檸檬酸肌酸鹽的方法、用于促進增加個體肌肉 和提高鍛煉成績、減少和/或防止肥胖癥、改善鍛煉的恢復和/或抑制食 欲導致減輕體重的方法。因此，按照其各種實施方案，本發明提供與單水合肌酸相比具有更 高的水溶性和在酸性溶液中穩定性的穩定水溶性HCA肌酸鹽，比如羥基檸檬酸肌酸鹽。按照其各種實施方案，本發明還可以提供可供哺乳動 物口服，與單獨或組合給藥的肌酸或HCA相比，其生物有效性相等或 更高的羥基檸檬酸肌酸鹽，其中該鹽可協同性地增加由單獨的肌酸或 HCA組分所賦予的生理效果。
至于在下面說明的在實施例的實施方案中各個步驟中使用的醇，應 該注意到，優選的醇包括曱醇、乙醇、丙醇和異丙醇。也可以^使用乙酸 乙酯。更優選使用曱醇。為了降低在完成反應所必需的時間內，肌酸向肌酸酐的轉化率，優選(-)-HCA的羥基醇溶液。也可以使用水-(-)-HCA 溶液作為加入單水合肌酸的介質。然而反應產生的鹽，其肌酸的含量更 低。按照其各種實施方案，本發明可提供比傳統的食品添加劑及其制造 方法更好的某些優點。比如，本發明的羥基檸檬酸肌酸鹽，與單水合肌 酸相比，可具有改善的水溶性并具有改善的在水和酸性溶液中的穩定 性。再有，本發明的羥基檸檬酸肌酸鹽可用于增加個體，特別是運動員 的肌肉和提高鍛煉成績，并賦予面向特異性生物能缺陷的神經保護策 略。此外，通過供應生物有效量的HCA，本發明的鞋基檸檬酸肌酸鹽 可有助于通過防止碳水化合物能轉化為三甘油酯來減少脂肪酸合成，借 此特別適合于與旨在減少和/或防止過分肥胖導致減輕體重的節食計劃 一起使用。進一步，本發明的羥基檸檬酸肌酸鹽，由于HCA部分對5 -羥色胺能輸出的刺激作用，本發明的羥基檸檬酸肌酸鹽可有助于改善 個體的鍛煉恢復和抑制食欲，導致減輕體重。雖然下面的實施例在其5個實施方案中說明了本發明的實施方法， 但這些實施例并不構成對本發明范圍的限制。在考慮了說明書和下面的 實施例之后，其他實施方案和制造模式對本領域的專業人員都是不言而 喻的。實施例實施例1單水合羥基檸檬酸肌酸二鉀鹽、單水合羥基檸檬酸二肌酸(單)鉀 鹽和單水合羥基檸檬酸三肌酸鹽藤黃果(G. cfl附^^,Vi)和山竹子(G". /wJ/c")的果殼可含有20 ~ 30 %的(畫)-HCA (參照Lewis, Y. S和Neelakantan S.《(-)-羥基檸檬酸， 藤黃果中主要的酸》，載Pytochemistry 4: 619-625， 1965)。基于無 水酸含量，為使反應產率不低于50。/。的(-)-HCA，藤黃果(G. c"w^g/fl) 和山竹子(<7./m//cfl)的果殼優選可含有最少大約15。/。的(-)-HCA。因此，估計從1.3875kg原料藤黃果果殼可提取出208.13g (-)-HCA。 提取的方法可類似于由比如Majeed,M.等人在美國專利5，783，603中敘
述的方法，其中敘述了水溶性羥基檸檬酸(三)鉀鹽。該方法包括使用烷基醇從藤黃果中提取(-)-HCA。步驟l)在回流溫度下，用4.1625L曱醇提取1.3875kg藤黃果3.5h。 因此用濾布過濾器過濾之后，收集第一提取液；步驟2)在藤黃果果殼中再加入4.1625L曱醇并回流3.5h。如上將 其過濾收集第二提取液；步驟3)在藤黃果果殼中再加入4.1625L曱醇并再回流3.5h。如上 將其過濾，收集第三提取液；步驟4)然后將全部三者合并；步驟5 )用4.1625L曱醇處理合并的提取液，在9 ~ 10的pH值下， 在甲醇中加入112.2g氫氧化鉀(2mol元素鐘)和149.13g單水合肌酸 (lmol)。再將其回流3.5h得到恒定的pH值10，以4吏單水合羥基檸 檬酸(單)肌酸二鉀鹽沉淀出來。步驟6)過濾出沉淀并用1.3875L曱醇洗滌；步驟7)在大約70。C下真空干燥該沉淀。為了得到羥基檸檬酸二肌酸(單)鉀鹽，用4.1625L曱醇處理在步 驟5中的合并提取液，在大約9~ 10的pH值下，在甲醇中加入56.1g 氫氧化鉀(lmol的元素鉀)和298.26g單水合肌酸(2mo1)。將其回 流3.5h，得到恒定的pH值10，以使單水合羥基檸檬酸二肌酸(單)鉀 鹽沉淀出來。重復步驟6和步驟7。為了得到羥基檸檬酸三肌酸鹽，用4.1625L曱醇處理步驟5中的合 并提取液，在大約9~ 10的pH值下，在曱醇中加入447.39g單水合肌 酸(2mo1)。將其回流3.5h，得到恒定的pH值10，以沉淀出單水合 羥基檸檬酸三肌酸鹽。重復步驟6和步驟7。基于干物重量，單水合羥基檸檬酸(單)肌酸二鉀鹽優選具有不小 于大約50。/。的(-)-HCA,鐘和肌酸含量分別為大約20%和10% 。內酯 含量可接近于不大于大約2%。基于干物重量，單水合羥基檸檬酸二肌酸(單)鉀鹽優選具有不小 于大約50%的(-)-HCA,鉀和肌酸含量分別為大約10%和20% 。內酯 含量可接近于不大于大約2%。基于干物重量，單水合羥基檸檬酸三肌酸鹽優選具有不小于大約 50。/。的(-)-HCA，肌酸的含量為大約30%。內酯含量可接近于不大于大 約2 % 。單水合羥基檸檬酸(單)肌酸二鉀鹽、單水合羥基檸檬酸二肌酸(單) 鉀鹽和單水合羥基檸檬酸三肌酸鹽都是穩定的、水溶性的和生物有效的。實施例2羥基檸檬酸三肌酸鹽通過將羥基檸檬酸的鉀鹽、鈉鹽和鉀鹽的水溶液通過陽離子交換樹 脂，比如Zeocarb 225，就能夠4艮容易產生所述游離的HCA (參照 Singh， R. P.等人《來源于藤黃果的(-)-羥基檸檬酸》，載Biological Memoirs 21 ( 1 ) : 27-33， 1995)。羥基檸檬酸的分子量為208.13。單水合肌酸的分子量為149.13。可 按照如下的步驟制造羥基檸檬酸三肌酸鹽步驟1)從10.84L無水甲醇開始；步驟2)在攪拌下，在無水曱醇中加入將(-)-HCA鹽通過陽離子交 換樹脂之后得到的含有1，084g羥基檸檬酸(5.2mo1)的水溶液。將得到 的混合物攪拌大約45min;步驟3)在羥基檸檬酸/曱醇的混合物中加入2，362g (15.6mol)單 水合肌酸。將此混合物攪拌大約4h;步驟4)在第4h結束時，通過離心從反應混合物中分離結晶的產 物，用無水曱醇洗滌以除去所有的雜質；步驟5)在70X:下真空干燥最終產品。得到的產物是羥基檸檬酸三肌酸鹽，每個羥基檸檬酸的(三)陰離 子具有三個肌酸陽離子。單水合肌酸的分子量是149.13，因此加入的單 水合肌酸的量是15.6g-mol。因此，鑒于所述反應混合物包括5.2mol的羥基檸檬酸，肌酸與羥 基檸檬酸的化學計量比就是3:1。對材料進行化驗肌酸含量應該在60 ~ 70 %的范圍內。另外，鑒于反應混合物包括5.2mol羥基檸檬酸，通過將肌酸與幾 基檸檬酸的化學計量比變成1:1和2:1，就能夠分別得到每個羥基檸檬 酸根陰離子具有一個或兩個肌酸陽離子的羥基檸檬酸單肌酸鹽和羥基 檸檬酸二肌酸鹽。應該注意到，優選的醇包括甲醇、乙醇、丙醇和異丙醇。還可以使 用乙酸乙酯。特別優選的是曱醇。優選(-)-HCA的羥基醇溶液，以減小 在完成反應所必需的時間內肌酸轉化為肌酸酐的轉化率。另外也可以4吏 用水-(-)-HCA溶液作為加入單水合肌酸的介質。然而反應產生鹽將含有 比較少的肌酸。 實施例3從肌酸鹽酸鹽和單水合羥基檸檬酸(三)鉀鹽制備羥基檸檬酸三肌酸鹽單水合羥基檸檬酸三鉀鹽每mol的分子量為340.41。肌酸鹽酸鹽分 子量為167.57。操作步驟如下步驟l)將3.5g單水合羥基檸檬酸三鉀鹽(O.Olmol)與足夠量的 去離子水混合，使最終體積為300mL;步驟2)在如上所述的溶液中加入5.03g (0.03mol)肌酸鹽酸鹽， 并將溶液攪拌45min;步驟3)得到的產物是每個羥基檸檬酸(三)陰離子具有三個肌酸 陽離子的羥基檸檬酸三肌酸鹽(5.8~6% );步驟4)通過此反應還得到氯化鉀，可通過添加醇(乙醇、曱醇) 而沉淀出來，并經過濾而除去。鑒于所述反應混合物包括O.Olmol羥基檸檬酸三鉀鹽和0.03mol肌 酸鹽酸鹽，肌酸與羥基檸檬酸的化學計量比就是3:1。通過將肌酸與羥基檸檬酸的化學計量比改變為1:1和2:1時，就能 夠分別得到每個羥基檸檬酸根陰離子具有一個或兩個肌酸陽離子的羥 基檸檬酸單肌酸二鉀鹽和羥基檸檬酸二肌酸單鉀鹽。因此，在反應的步 驟2中分別能夠每mol羥基檸檬酸三鉀鹽使用0.01和0.02mol肌酸鹽 酸鹽。實施例4從游離(-)-HCA制備羥基檸檬酸三肌酸鹽步驟l)通過將lmol ( 340.41g)羥基檸檬酸三鉀鹽溶解于去離子 水，使最終的溶液體積為2L，制備出0.5M的溶液；步驟2)在步驟1的羥基檸檬酸三鉀鹽溶液中加入lmol ( 192.13g) 無水檸檬酸。然后在30。C加熱該溶液；步驟3)冷卻，沉淀出檸檬酸三鉀。通過過濾將其除去；步驟4)得到10y。的游離(-)-HCA溶液； 步驟5)然后通過加入2L無水曱醇能夠得到3mo1 ( 447.39g )單水 合肌酸，然后將其與游離(-)-HCA溶液合并。將混合物攪拌4h,以得到 羥基檸檬酸三肌酸鹽；步驟6)在第4h結束時，通過離心從反應混合物中分離結晶的產 物，用無水曱醇洗滌；步驟7)然后在70C下真空干燥最終產物。通過分別在無水曱醇和(-)-HCA的混合物中加入2mol或lmol單水 合肌酸，然后攪拌4h，即可得到羥基檸檬酸二肌酸鹽和單肌酸鹽。 實施例5羥基檸檬酸三肌酸鹽的制造方法步驟l)將藤黃果果殼放入靜態萃取器中，用5:1和7:1的水萃取 60miii;步驟2)然后將水排放到儲槽中并進行4次洗滌； 步驟3)排放出果殼；步驟4)用氫氧化鈣進行沉淀，回收羥基檸檬酸的鈣鹽；步驟5)用酸性介質處理羥基檸檬酸釣并過濾。回收液體羥基檸檬酸；步驟6)用液體羥基檸檬酸與肌酸反應，然后進行噴霧干燥； 步驟7)回收HCA三肌酸鹽粉末；步驟8)通過40目的篩子過篩HCA三肌酸鹽粉末，進行測試和包裝。通過此方法用HPLC測定一般得到大約30~35%的(-)-羥基檸檬酸 和30~ 40%的肌酸。標準的規范可以是不低于大約30%的(-)-羥基檸檬酸和不低于30% 的肌酸。在干燥時的產物損失優選不多于8% ,重金屬含量優選不多于 10ppm。產物可以是白色到淡黃色的細粉末。
權利要求
1.一種如下通式的分離的肌酸和羥基檸檬酸的水溶性鹽
2. 權利要求1的水溶性鹽，其中該鹽的分子量為547.07。
3. 權利要求1的水溶性鹽，其中該鹽的熔點為大約290匸。
4. 促進增加個體的肌肉和提高鍛煉成績、減少和/或防止肥胖癥、改 善鍛煉恢復和抑制個體的食欲導致減輕體重等當中的至少一種方法，該 方法包括消耗含有呈分離的肌酸和羥基檸檬酸水溶性鹽形式的鞋基檸 檬酸肌酸鹽的食品添加組合物的步驟。
5. 權利要求4的方法，其中該鹽的分子量為547.07。
6. 權利要求4的方法，其中該鹽的熔點為大約2卯C。
7. 用于促進增加個體的肌肉和提高鍛煉成績、減少和/或防止肥胖 癥、改善鍛煉恢復和抑制個體的食欲導致減輕體重當中至少一種的食品 添加組合物，該食品添加組合物包括呈分離的肌酸和羥基檸檬酸水溶性 鹽形式的羥基檸檬酸肌酸鹽。
8. 權利要求7的食品添加組合物，其中該鹽的分子量為547.07。
9. 權利要求7的食品添加組合物，其中該鹽的熔點為大約290*C。
全文摘要
公開了羥基檸檬酸三肌酸鹽的制造方法。羥基檸檬酸三肌酸鹽可用作食品添加成分，用于減少肥胖癥、抑制食欲、改善肌肉和鍛煉的成績和恢復。該鹽可用于食品、食品添加劑和食品工業。
文檔編號A23L1/29GK101115714SQ200680004276
公開日2008年1月30日 申請日期2006年2月7日 優先權日2005年2月7日
發明者M·A·休爾, M·莫里諾 申請人:新細胞制劑有限公司