協(xié)同作用的抗微生物體系的制作方法

專利名稱：：協(xié)同作用的抗微生物體系的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種能夠有效地防止食品中的微生物污染物生長(zhǎng)的抗微生物組合物。更具體地，提供了一種抗微生物組合物，它是乳酸鏈球菌肽和ε-聚-L-賴氨酸的摻合物。乳酸鏈球菌肽和ε-聚-L-賴氨酸協(xié)同作用來(lái)防止食品中微生物計(jì)數(shù)的增加。背景目前的食品技術(shù)人員利用一系列的物理、化學(xué)和生物學(xué)方法和試劑來(lái)保存食物。存在許多化學(xué)組合物，它們能夠殺死或抑制有害細(xì)菌和/或其它微生物，從而保存食物并且防止其變質(zhì)。通過(guò)抑制微生物污染物的生長(zhǎng)來(lái)保存食品通常是困難的。添加到食物中的化學(xué)組合物應(yīng)該能夠有效地防止微生物數(shù)目的增加，并且應(yīng)該不會(huì)給食物增加不希望有的氣味或者不希望有的器官感覺(jué)特征。乳酸鏈球菌肽和ε-聚-L-賴氨酸是兩種已知的在食物中單獨(dú)使用來(lái)抑制微生物生長(zhǎng)的組合物。乳酸鏈球菌肽是一種肽類抗細(xì)菌物質(zhì)，它是由微生物如乳酸乳球菌乳亞種(Lactococcuslactissubsp.lactis)(以前被稱為乳鏈球菌(Streptococcuslactis))制備得到的。它已經(jīng)被用于幫助穩(wěn)定多種食品并且它的結(jié)構(gòu)已在Yamauchi等的美國(guó)專利5,527,505中所闡明。乳酸鏈球菌肽的最高制備活性為每克含有約四千萬(wàn)個(gè)國(guó)際單位(IU)。乳酸鏈球菌肽對(duì)人類沒(méi)有任何已知的毒性作用并且被廣泛用在多種乳制品中。乳酸鏈球菌肽用于保存其它食物的用途也被報(bào)道了。在以下文獻(xiàn)中描述了這些應(yīng)用的詳述美國(guó)專利No.5,527,505(“ProcessfortheManufactureofFermentedMilk”)；美國(guó)專利No.5,015,487(“UseofLanthioninesforControlofPost-processingContaminationinProcessedMeat”)；Chung等(Appl.Envir.Microbiol.，55，1329-1333(1989))；美國(guó)專利No.4,584,199(“AntibotulinalAgentsforHighMoistureProcessCheeseProducts”)；Muriana等(J.FoodProtection，581109-1113(1995))；美國(guó)專利No.6,136,351(“StabilizationofFermentedDairyCompositionsUsingWheyfromNisin-ProducingCultures”)；美國(guó)專利No.6,113,954(“StabilizationofMayonnaiseSpreadsUsingWheyfromNisin-ProducingCultures”)；美國(guó)專利No.6,110,509(“StabilizationofCreamCheeseCompositionsUsingNisin-ProducingCultunes”)；美國(guó)專利No.6,242,017(“StabilizationofCookedMeatCompositionsStabilizedbyNisin-ContainingWheyandMethodsofMaking”)；和美國(guó)專利No.6,613,364(“StabilizationofCookedMeatandVegetableCompositionsUsingWheyFromNisin-ProducingCulturesandProductThereof”)；美國(guó)專利申請(qǐng)序號(hào)09/779,756(“StabilizationofCookedPastaCompositionsUsingWheyFromNisin-ProducingCultures”)；ScottV.N.和TaylorS.L.“EffectofnisinontheoutgrowthofClostridiumbotulinumspores.”J.FoodSci.，46117-120(1981)；ScottV.N.和TaylorS.L.“Temperature，pHandsporeloadeffectsontheabilityofnisintopreventtheoutgrowthofClostridiumbotulinumspores.”J.FoodSci.，46121-126(1981)；和Broughton，J.D.“Nisinanditsusesasafoodpreservative.”FoodTechnology，11，100-17(1990)。這些專利和文獻(xiàn)在此全部被結(jié)合作為參考。ε-聚-L-賴氨酸的抗細(xì)菌作用是為人們所熟知的。已經(jīng)通過(guò)將ε-聚-L-賴氨酸與食物揉在一起或直接將它噴到食物上來(lái)將ε-聚-L-賴氨酸用于防止食物中微生物的增殖(美國(guó)專利No.5,759,844)。然而，在將ε-聚-L-賴氨酸直接添加到食物中時(shí)，通常限制ε-聚-L-賴氨酸在每千克食物中的量為約100毫克或更少，因?yàn)楦叩牧繒?huì)對(duì)食物的味道和物理特性產(chǎn)生不利的影響。ε-聚-L-賴氨酸的制備方法和其用途在美國(guó)專利No.6,294,183(“AntimicrobialResinCompositionandAntimicrobialResinMoldedArticleComprisingSame”)；美國(guó)專利No.5,294,552(“Strainmass-producingε-poly-L-lysine”)；美國(guó)專利No.5,434,060(“MethodforProducingε-poly-L-lysine”)；美國(guó)專利No.5,759,844(“AntibacterialArticlesandMethodsofProducingtheArticles”)；美國(guó)專利No.5,900,363(“ProcessforProducingε-poly-L-lysinewithimmobilizedStreptomycesalbulus”)；美國(guó)專利No.5,453,420(“Foodpreservativeandproductionthereof”)；美國(guó)專利No.5,009,907(“MethodforTreatingFoodtoControltheGrowthofYeast”)；美國(guó)專利No.4,597,972(“NisinasanAntibotulinalAgentforFoodProducts”)；美國(guó)專利No.4,584,199(“AntibotulinalAgentsforHighMoistureProcessCheeseProducts”)中被描述。這些專利在此全部被結(jié)合作為參考。需要一種組合物，它能夠添加到食物中來(lái)有效地保存食物并且防止其變質(zhì)，同時(shí)也不會(huì)對(duì)食物的味道和物理特性產(chǎn)生不利的影響。概述提供了一種抗微生物組合物，它含有一定量的乳酸鏈球菌肽和ε-聚-L-賴氨酸，能夠有效地防止食品中微生物計(jì)數(shù)的增加。乳酸鏈球菌肽和ε-聚-L-賴氨酸協(xié)同作用來(lái)防止食物中微生物計(jì)數(shù)的增加，而不會(huì)影響食物的味道和物理特性。這種協(xié)同作用的抗微生物組合物可用于抑制普通的食物病原體和腐敗菌，如單核細(xì)胞增生利斯特氏菌(Listeriamonocytogenes)、肉毒梭菌(Clostridiumbotulinum)、蠟狀芽孢桿菌(Bacilluscereus)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、乳球菌屬物種(Lactococcusspp.)、乳桿菌屬物種(Lactobacillusspp.)、明串珠菌屬物種(Leuconostocspp.)、鏈球菌屬物種(Streptococcusspp.)等。實(shí)施例中顯示的數(shù)據(jù)證明該組合物對(duì)于食物病原體肉毒梭菌和腐敗細(xì)菌植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum)尤其有效。在許多情況中(參見(jiàn)實(shí)施例)，其中當(dāng)單獨(dú)使用乳酸鏈球菌肽和ε-聚-L-賴氨酸時(shí)基本上沒(méi)有效果，而組合提供了非常有效的抗微生物組合物。乳酸鏈球菌肽和ε-聚-L-賴氨酸的組合能夠有效地防止食品中微生物計(jì)數(shù)的增加，使其在約三天之后只增加約1log或更少。該組合在一些食物體系中還呈現(xiàn)出殺細(xì)菌效果，因?yàn)樗軌蛴行У販p少一些食品中的微生物的計(jì)數(shù)，使其在5天中減少至1cfu/g或更少。該抗微生物組合物包括至少約百萬(wàn)分之一(ppm)的乳酸鏈球菌肽和至少約10ppm的ε-聚-L-賴氨酸，基于該抗微生物組合物的重量。在本發(fā)明的一個(gè)重要方面，該抗微生物組合物含有約1到約100ppm，優(yōu)選約5到約10ppm的乳酸鏈球菌肽，和約10到約1000ppm，優(yōu)選約50到約500ppm的ε-聚-L-賴氨酸，基于該抗微生物組合物的重量。乳酸鏈球菌肽的濃度也可以用每克國(guó)際單位(IU/g)計(jì)算，1ppm的乳酸鏈球菌肽為40IU/g。另一方面，提供了一種抗微生物組合物，它含有一定量的乳酸鏈球菌肽和ε-聚-L-賴氨酸，它們能夠有效地使食品中乳酸鏈球菌肽的活性在約14天后保持為最初乳酸鏈球菌肽活性的約90％或更多。該抗微生物組合物含有至少約1ppm的乳酸鏈球菌肽和至少約10ppm的ε-聚-L-賴氨酸，基于該抗微生物組合物的重量。在本發(fā)明的一個(gè)重要方面，該抗微生物組合物含有約1到約100ppm，優(yōu)選約5到約10ppm的乳酸鏈球菌肽，和約10到約1000ppm，優(yōu)選約50到約500ppm的ε-聚-L-賴氨酸，基于該抗微生物組合物的重量?？梢詫⑷樗徭溓蚓暮挺?聚-L-賴氨酸作為摻合物或分別地?fù)饺胧澄镏?。食品中含有一定量的乳酸鏈球菌肽和?聚-L-賴氨酸，它們能夠有效地防止食品中微生物計(jì)數(shù)的增多，使其在約三天后只增加約1log或更少。一方面，食品中可以含有至少約1ppm的乳酸鏈球菌肽，優(yōu)選約5到約10ppm的乳酸鏈球菌肽，和至少約10ppm的ε-聚-L-賴氨酸，優(yōu)選約50到約500ppm的ε-聚-L-賴氨酸，全部基于食物組合物的總重量?？梢约尤肴樗徭溓蚓暮挺?聚-L-賴氨酸的食物包括色拉調(diào)料、沙司、腌泡汁、乳制品、涂抹料、人造黃油、肉、面食、面條、米飯、米飯布丁、蔬菜和飲料。另一方面，提供了一種方法，它利用有效量的乳酸鏈球菌肽和ε-聚-L-賴氨酸的組合來(lái)防止食品如沙司、色拉調(diào)料、包括含茶飲料在內(nèi)的飲料、腌泡汁、乳制品、涂抹料、人造黃油、肉等中的微生物計(jì)數(shù)的增多。該方法能夠有效地防止食品中微生物計(jì)數(shù)的增多，使其在約三天后只增加約1log或更少。該方法包括將約1ppm到約100ppm的乳酸鏈球菌肽和約10到約500ppm的ε-聚-L-賴氨酸的摻合物加入食品中。可以將乳酸鏈球菌肽和ε-聚-L-賴氨酸的摻合物加入食品中，或可以將乳酸鏈球菌肽和ε-聚-L-賴氨酸分別地加入食品中。乳酸鏈球菌肽和ε-聚-L-賴氨酸能夠有效地防止溫度為約0到約50℃的食物中微生物計(jì)數(shù)的增多或減少微生物的計(jì)數(shù)。詳述乳酸鏈球菌肽和ε-聚-L-賴氨酸的組合可以協(xié)同作用作為一種抗微生物組合物，它可以有效地用于食物保存和防止食物變質(zhì)?？梢詫⑷樗徭溓蚓暮挺?聚-L-賴氨酸摻合或直接加入食物中，或者包含在包裝食品的介質(zhì)中，如例如蔬菜的包裝水。該抗微生物組合物在低溫中有效，因?yàn)樗跍囟葹榧s0到約50℃時(shí)能夠防止食品中微生物計(jì)數(shù)的增多，使其在約三天后只增加約1log或更少。該組合物在一些食品中還是可殺細(xì)菌的，因?yàn)樗軌蛴行У貙⑽⑸锏挠?jì)數(shù)減少至1cfu/g或更少。可以使用可商業(yè)上獲得的乳酸鏈球菌肽和ε-聚-L-賴氨酸制劑。定義如在此使用的術(shù)語(yǔ)“食物保存”包括延遲或防止食物因?yàn)槲⑸锒冑|(zhì)的方法。食物保存能夠保證食物被安全地消費(fèi)并且抑制或防止?fàn)I養(yǎng)物的變質(zhì)或器官感覺(jué)變化，從而造成食物不再可口。如在此使用的術(shù)語(yǔ)“食物變質(zhì)”包括任何使食物不再可口的狀況的變化，它包括味道、氣味、質(zhì)地或外觀的變化。乳酸鏈球菌肽商業(yè)上的乳酸鏈球菌肽制劑可用在本發(fā)明的組合物中。例如，Nisaplin含有約2.5％的純?nèi)樗徭溓蚓?，相?dāng)于每克含一百萬(wàn)個(gè)國(guó)際單位(IU)，它可以從Aplin&BarrettLtd.，Trowbridge，英國(guó)和從DaniscoA/S(丹麥)得到。Chrisin每克也含有約一百萬(wàn)個(gè)國(guó)際單位(IU)的乳酸鏈球菌肽，它可以從Chr.HansonA/S(丹麥)得到。Nisaplin是一種經(jīng)過(guò)提純的乳酸鏈球菌肽制劑，它是一種天然的抗微生物組合物并且通常含有2.5％的乳酸鏈球菌肽、77.5％的氯化鈉、12％的蛋白質(zhì)、6％的糖類和2％的水分，其中乳酸鏈球菌肽的活性為約1×106IU/g。產(chǎn)品中的乳酸鏈球菌肽的濃度可用ppm或IU/g表示，1ppm等于40IU/g。ε-聚-L-賴氨酸ε-聚-L-賴氨酸可以以游離的類型使用或可以以與無(wú)機(jī)酸如鹽酸、硫酸或磷酸或者與有機(jī)酸如乙酸、丙酸、延胡索酸、蘋果酸或檸檬酸形成的鹽類型使用。有機(jī)酸鹽或無(wú)機(jī)酸鹽的類型以及游離的類型都具有相似的抗微生物作用。ε-聚-L-賴氨酸具有如下結(jié)構(gòu)其中n為約25到約35。ε-聚-L-賴氨酸可以從日本的ChissoCorporation以商品名Save-oryTMGK128獲得。該商業(yè)制劑含有1.0％的作為活性抗微生物劑的ε-聚-L-賴氨酸、30％的甘油、68.8％的水、用于調(diào)節(jié)pH的痕量的有機(jī)酸和乳化劑。在日本Save-oryTM產(chǎn)品已經(jīng)被用于延長(zhǎng)壽司和米飯的保存期限。抗微生物組合物的制備和用途可以通過(guò)如下方法制備抗微生物組合物，摻合有效量的乳酸鏈球菌肽和ε-聚-L-賴氨酸，以提供一種組合物，該組合物含有約1ppm到約100ppm，優(yōu)選約5ppm到約10ppm的乳酸鏈球菌肽，和約10到約1000ppm，優(yōu)選約50到約500ppm的ε-聚-L-賴氨酸，全部基于該組合物的總重量?？梢詫⒃摽刮⑸锝M合物以有效量添加到食物中，以提供食物中至少約1ppm，優(yōu)選約5到約10ppm的乳酸鏈球菌肽，和至少約10ppm，優(yōu)選約50到約500ppm的ε-聚-L-賴氨酸的水平，重量百分比基于食品的總重量。備選地，也可以將乳酸鏈球菌肽和ε-聚-L賴氨酸以有效量分別地加入食品中，該量可以提供相同的濃度水平。下面列出了在各種食品中乳酸鏈球菌肽和ε-聚-L-賴氨酸的組合所提供的比較的協(xié)同抗微生物活性+表示抗微生物活性，多個(gè)+表示增強(qiáng)的抗微生物活性-表示沒(méi)有抗微生物活性實(shí)施例實(shí)施例1乳酸鏈球菌肽和ε-聚-L-賴氨酸對(duì)肉毒梭菌孢子的生長(zhǎng)的抑制從細(xì)菌芽孢生長(zhǎng)到營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞通常包括以下階段孢子萌發(fā)、孢子壁的釋放、長(zhǎng)出營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞和細(xì)胞分裂。不同的防腐劑在不同的階段防止細(xì)菌芽孢長(zhǎng)成增殖的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞。在本實(shí)施例中，用瓊脂孔測(cè)定來(lái)確定乳酸鏈球菌肽和ε-聚-L-賴氨酸在防止肉毒梭菌孢子長(zhǎng)成營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞的總的抗微生物活性。用四種不同的肉毒梭菌菌株作為指示菌株。這些菌株包括蛋白酶解毒素A型菌株、蛋白酶解毒素B型菌株、非蛋白酶解毒素B型菌株和非蛋白酶解毒素E型菌株。用含有濃度水平為每毫升約104-105個(gè)孢子的肉毒梭菌孢子的腦心浸液(BHI)瓊脂培養(yǎng)基來(lái)制備培養(yǎng)皿(Petriplates)。在將指示菌株加入培養(yǎng)基之前，首先熱激孢子以使其活化并且除去已經(jīng)存在的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞。在瓊脂培養(yǎng)基上無(wú)菌地鉆出若干個(gè)直徑為6毫米的孔。通過(guò)用水稀釋市售的乳酸鏈球菌肽制劑Nisaplin(來(lái)自Danisco)和市售的ε-聚-L-賴氨酸制劑GK128(來(lái)自Chisso)至所需要的濃度得到乳酸鏈球菌肽和ε-聚-L-賴氨酸的溶液。將樣品以每孔40微升的比率用移液管注入孔中。另外，用NaOH和HCl調(diào)節(jié)溶液的pH值至5.5(為了消除任何pH的抑制作用)。然后在厭氧的條件下在30℃下將培養(yǎng)皿培養(yǎng)24個(gè)小時(shí)。培養(yǎng)之后，指示菌株生長(zhǎng)并且可以測(cè)量到明顯的抑制區(qū)。表1顯示了乳酸鏈球菌肽和ε-聚-L-賴氨酸樣品以及它們的組合所形成的抑制區(qū)。結(jié)果顯示在給定的水平下單獨(dú)的乳酸鏈球菌肽或ε-聚-L-賴氨酸對(duì)所有測(cè)試的肉毒梭菌菌株都沒(méi)有顯示出明顯的或強(qiáng)烈的抑制區(qū)。它們都不能抑制肉毒梭菌在最佳培養(yǎng)條件下從孢子開始的生長(zhǎng)。然而，在組合中，它們對(duì)所有測(cè)試的肉毒梭菌菌株都明顯地表現(xiàn)出對(duì)孢子生長(zhǎng)的抑制作用。這些數(shù)據(jù)表明這兩種抗微生物成分之間對(duì)于防止肉毒梭菌從孢子開始的生長(zhǎng)和后來(lái)的毒素形成都具有很強(qiáng)的協(xié)同作用。表1乳酸鏈球菌肽和ε-聚-L-賴氨酸在30℃對(duì)肉毒梭菌的孢子生長(zhǎng)的抑制作用實(shí)施例2乳酸鏈球菌肽和ε-聚-L-賴氨酸對(duì)肉毒梭菌的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用在本實(shí)施例中，用實(shí)施例1中所述的瓊脂孔測(cè)定來(lái)確定乳酸鏈球菌肽和ε-聚-L-賴氨酸在防止肉毒梭菌的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)中的抗微生物活性。用四種不同的肉毒梭菌菌株作為指示菌株。這些菌株包括蛋白酶解毒素A型菌株、蛋白酶解毒素B型菌株和兩種非蛋白酶解毒素E型菌株。將這些菌株經(jīng)過(guò)加熱活化的孢子在30℃在BHI液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)24個(gè)小時(shí)，并且然后轉(zhuǎn)移到新的BHI液體培養(yǎng)基中在30℃培養(yǎng)過(guò)夜，以得到營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞。用含有濃度水平為約3×106cfu/ml的上述肉毒梭菌營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞的BHI瓊脂培養(yǎng)基來(lái)制備培養(yǎng)皿。在瓊脂培養(yǎng)基上鉆出若干個(gè)直徑為6毫米的孔。按照實(shí)施例1中所描述的方法方法制備乳酸鏈球菌肽和ε-聚-L-賴氨酸的樣品，并且用NaOH和HCl調(diào)節(jié)pH值到5.5(為了消除任何pH的抑制作用)。將它們以每孔40微升的比率用移液管注入孔中。然后在厭氧的條件下在30℃下將平板培養(yǎng)24個(gè)小時(shí)。培養(yǎng)之后，指示菌株生長(zhǎng)并且測(cè)量到明顯的抑制區(qū)。表2顯示了乳酸鏈球菌肽和ε-聚-L-賴氨酸樣品分別地以及組合地所形成的抑制區(qū)。表2乳酸鏈球菌肽和ε-聚-L-賴氨酸在30℃對(duì)肉毒梭菌營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞的抑制作用結(jié)果顯示單獨(dú)的乳酸鏈球菌肽或ε-聚-L-賴氨酸對(duì)肉毒梭菌菌株在最佳生長(zhǎng)條件下從營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞開始的生長(zhǎng)都沒(méi)有形成明顯的或強(qiáng)烈的抑制區(qū)，然而它們的組合表現(xiàn)出對(duì)所有測(cè)試的肉毒梭菌菌株的明顯抑制作用。這些數(shù)據(jù)表明在乳酸鏈球菌肽和ε-聚-L-賴氨酸之間對(duì)于抑制肉毒梭菌(從營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞開始的生長(zhǎng)具有很強(qiáng)的協(xié)同作用。實(shí)施例3乳酸鏈球菌肽和ε-聚-L-賴氨酸在低溫下對(duì)肉毒梭菌營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用在某些情況中，溫度會(huì)影響抗微生物劑對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)的抑制效力。在本實(shí)施例中，除了平板培養(yǎng)條件不同之外，采用了與實(shí)施例2中所描述的完全相同的生物測(cè)定方法。測(cè)試的菌株僅包括非蛋白酶解毒素E型菌株。按照實(shí)施例2所述制備乳酸鏈球菌肽和ε-聚-L-賴氨酸的樣品，并將它們以每孔40微升的比率用移液管注入孔中。然后在厭氧的條件下在13℃下將平板培養(yǎng)48個(gè)小時(shí)。培養(yǎng)之后，指示菌株生長(zhǎng)并且測(cè)量到明顯的抑制區(qū)。表3顯示了乳酸鏈球菌肽樣品、ε-聚-L-賴氨酸樣品以及它們的組合所形成的抑制區(qū)。表3乳酸鏈球菌肽和ε-聚-L-賴氨酸在13℃對(duì)肉毒梭菌營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞的抑制作用類似于實(shí)施例1和2中的觀測(cè)，乳酸鏈球菌肽和ε-聚-L-賴氨酸的組合在13℃顯示出對(duì)于抑制非蛋白酶解肉毒梭菌生長(zhǎng)具有明顯的協(xié)同作用。實(shí)施例4ε-聚-L-賴氨酸對(duì)表觀乳酸鏈球菌肽活性的影響在本實(shí)施例中，用標(biāo)準(zhǔn)瓊脂孔測(cè)定來(lái)確定乳酸鏈球菌肽的活性以及它對(duì)指示菌株乳酸乳球菌乳脂亞種(Lactococcuslactissubsp.cremoris)的直接抑制區(qū)。在標(biāo)準(zhǔn)的瓊脂孔測(cè)定中，將過(guò)夜活化的乳酸乳球菌乳脂亞種以106cfu/ml的濃度混合在BHI瓊脂培養(yǎng)基中，并且用該培養(yǎng)基來(lái)制備平板。向每個(gè)培養(yǎng)皿(90×15mm)中注入20ml培養(yǎng)基。在每個(gè)皿上鉆6到7個(gè)直徑為6毫米的孔。按照實(shí)施例1中所述的方法制備乳酸鏈球菌肽和ε-聚-L-賴氨酸的樣品。在將樣品加入孔之前，用5x的pH2.0的緩沖液稀釋樣品并將其煮沸15分鐘。冷卻到室溫之后，在皿中的每個(gè)孔中加入40微克樣品。以同樣的方法制備標(biāo)準(zhǔn)的乳酸鏈球菌肽溶液，以進(jìn)行精確的對(duì)比。然后在厭氧的條件下在30℃下將平板培養(yǎng)過(guò)夜，并且測(cè)量抑制區(qū)大小。計(jì)算乳酸鏈球菌肽的活性是根據(jù)用標(biāo)準(zhǔn)溶液所作出的標(biāo)準(zhǔn)曲線的，其中假定乳酸鏈球菌肽的濃度與所述區(qū)直徑的對(duì)數(shù)之間存在線性關(guān)系。在直接孔測(cè)定中，按照標(biāo)準(zhǔn)的孔測(cè)定中所述的相同的方法制備平板和孔，但按照實(shí)施例2中所述制備乳酸鏈球菌肽和ε-聚-L-賴氨酸樣品，并且將它們以每孔40微克的水平直接加入孔中。在厭氧的條件下在30℃下將平板培養(yǎng)過(guò)夜，并且讀取抑制區(qū)。表4顯示了直接孔測(cè)定和標(biāo)準(zhǔn)乳酸鏈球菌肽活性測(cè)定的結(jié)果。表4ε-聚-L-賴氨酸對(duì)表觀乳酸鏈球菌肽抑制乳酸乳球菌的活性的影響表4顯示了表觀乳酸鏈球菌肽活性被ε-聚-L-賴氨酸顯著地增強(qiáng)。表8-1(a)測(cè)試后將兩種片劑完全打碎。(b)測(cè)試過(guò)程中封蓋的兩種片劑。(c)測(cè)試過(guò)程中封蓋的全部片劑。(d)測(cè)試過(guò)程中打碎全部片劑。甘露糖醇/二代磷酸鈣二元制劑表現(xiàn)出嚴(yán)重的封蓋問(wèn)題且不能壓制成3kP以上硬度，而這種加工大小的目標(biāo)范圍在6-9kP。在這些硬度下，基于高脆性％(要求低于0.2％)的片劑具有的機(jī)械完整性差。另一方面，MCC/二代磷酸鈣二元片劑產(chǎn)生了目標(biāo)范圍內(nèi)的硬度和脆性值。因此，基于生產(chǎn)評(píng)估的更優(yōu)選二元制劑是微晶纖維素/二代磷酸鈣。三元制劑是基于穩(wěn)定性和生產(chǎn)特性的優(yōu)選制劑且也是本發(fā)明的實(shí)施方案。實(shí)施例9實(shí)施例6在乳制品中由ε-聚-L-賴氨酸增加的乳酸鏈球菌肽的抗微生物活性為了檢驗(yàn)本發(fā)明在基于乳制品的食品體系中的功效，選擇一種乳制品(即香薄荷奶油)。將抗微生物組分加入常規(guī)組分的混合物中以制備香薄荷奶油。根據(jù)實(shí)施例4所描述的標(biāo)準(zhǔn)生物測(cè)定法測(cè)定乳酸鏈球菌肽的活性。表6顯示了在含有單獨(dú)的乳酸鏈球菌肽、單獨(dú)的ε-聚-L-賴氨酸以及它們的組合的香薄荷奶油中可測(cè)得的乳酸鏈球菌肽活性的結(jié)果。數(shù)據(jù)提示ε-聚-L-賴氨酸增加了乳制品中可測(cè)量的乳酸鏈球菌肽的活性，但增加的程度低于在非乳制品的體系中的程度(即實(shí)施例4和5中觀測(cè)的青刀豆包裝水)。這可能是由于乳制品的蛋白質(zhì)與ε-聚-L-賴氨酸相互作用，從而減少了其在非乳制品體系中所顯示的效力。這些結(jié)果表明本發(fā)明在食物體系中的應(yīng)用可能會(huì)有一定的限制。在非-蛋白質(zhì)或低蛋白質(zhì)的食物和可能在低脂肪體系中所起的效果更好，并且可以在諸如蔬菜、基于淀粉的食物、果汁、飲料等的食物中具有更好的應(yīng)用潛力。表6乳酸鏈球菌肽和ε-聚-L-賴氨酸在30℃貯存的香薄荷奶油中的抗微生物活性實(shí)施例7在即飲型(ready-to-drink)飲料中由ε-聚-L-賴氨酸增強(qiáng)的乳酸鏈球菌肽的抗微生物活性在本實(shí)施例中，將乳酸鏈球菌肽和ε-聚-L-賴氨酸加入含有果汁的即飲型(RTD)飲料中，以觀察能否觀測(cè)到協(xié)同的抗微生物活性。用實(shí)施例1中所述的標(biāo)準(zhǔn)平板孔擴(kuò)散測(cè)定來(lái)確定抗微生物活性。結(jié)果顯示在表7中。所述的果汁濃縮至糖度為70.5％。所述的進(jìn)行酶解的時(shí)間為60-70分鐘。所述的過(guò)濾是采用硅澡土過(guò)濾機(jī)過(guò)濾。所述的硅藻土采用中土25μm。所述的檢測(cè)果膠的降解效果的方法為取其1份果汁倒入試管，取2份酸化酒精與其混合均勻后，靜置15分鐘，如有絮狀物出現(xiàn)，表明果汁中的果膠沒(méi)有充分降解，無(wú)絮狀物出現(xiàn)，則表明果膠已充分降解；所述的檢測(cè)淀粉的降解效果的方法為取20ml果汁倒入試管，加熱至70℃，冷卻后加入0.005mol/L碘溶液1ml，搖勻，觀察其顯色反應(yīng)，如顯黃色，則呈陰性；顯蘭色，則有淀粉；顯黑棕色，則有少量淀粉。所述的除菌為冷除菌，是采用JM1812-1卷式復(fù)合膜過(guò)濾機(jī)過(guò)濾除菌，復(fù)合膜的規(guī)格為0.01μm，工作壓力為0.5MPa。一種新蘋梨果汁，它是由新蘋梨、果膠酶、淀粉酶組成，其中果膠酶和淀粉酶的添加量為新蘋梨破碎榨汁所得果汁重量的0.1-0.12‰和0.03-0.04‰。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)及效果本發(fā)明產(chǎn)品新蘋梨原果汁的營(yíng)養(yǎng)成分表如下權(quán)利要求1.一種抗微生物組合物，其含有一定量的乳酸鏈球菌肽和ε-聚-L-賴氨酸，能夠在0℃到50℃的溫度有效地防止食品中微生物計(jì)數(shù)的增加，使其在三天之后只增加1log或更少，具有防止或延緩某些食物傳染的病原性微生物形成毒素的潛力。2.權(quán)利要求1的抗微生物組合物，其含有至少1ppm的乳酸鏈球菌肽和至少10ppm的ε-聚-L-賴氨酸。3.權(quán)利要求1的抗微生物組合物，其中所述ε-聚-L-賴氨酸具有如下結(jié)構(gòu)其中n為25到35。4.一種抗微生物組合物，其含有一定量的乳酸鏈球菌肽和ε-聚-L-賴氨酸，能夠有效地使乳酸鏈球菌肽在食品中的活性在14天之后保持為乳酸鏈球菌肽最初活性的90％或更多，其中乳酸鏈球菌肽活性用IU/g表達(dá)。5.權(quán)利要求4的抗微生物組合物，其含有至少1ppm的乳酸鏈球菌肽和至少10ppm的ε-聚-L-賴氨酸。6.權(quán)利要求4的抗微生物組合物，其中所述ε-聚-L-賴氨酸具有如下結(jié)構(gòu)其中n為25到35。7.一種食品，其含有一定量的乳酸鏈球菌肽和ε-聚-L-賴氨酸，能夠在0℃到50℃的溫度有效地防止食品中微生物計(jì)數(shù)的增加，使其在三天之后只增加1log或更少。8.權(quán)利要求7的食品，其中該食品含有一定量的乳酸鏈球菌肽和ε-聚-L-賴氨酸，能夠有效地使乳酸鏈球菌肽在食品中的活性在14天之后保持為乳酸鏈球菌肽最初活性的90％或更多，其中乳酸鏈球菌肽的活性用IU/g表達(dá)。9.權(quán)利要求7的食品，其含有至少1ppm的乳酸鏈球菌肽和至少10ppm的ε-聚-L-賴氨酸，基于食品的重量。10.權(quán)利要求7的食品，其中所述ε-聚-L-賴氨酸具有如下結(jié)構(gòu)其中n為25到35。11.權(quán)利要求7的食品，其中該食品選自色拉調(diào)料、沙司、腌泡汁、乳制品、涂抹料、人造黃油、肉、面食、面條、米飯、米飯布丁、蔬菜和飲料。12.一種防止食品中微生物計(jì)數(shù)增多的方法，其包括將有效量的乳酸鏈球菌肽和ε-聚-L-賴氨酸與食品摻合，所述量能夠防止食品中微生物計(jì)數(shù)的增加，使其在三天之后只增多1log或更少。13.權(quán)利要求12的方法，其中所述乳酸鏈球菌肽和ε-聚-L-賴氨酸是一起加入食品中的。14.權(quán)利要求12的方法，其中所述乳酸鏈球菌肽和ε-聚-L-賴氨酸是分別加入食品中的。15.權(quán)利要求12的方法，其中所述乳酸鏈球菌肽和ε-聚-L-賴氨酸能夠有效地防止溫度為0到50℃的食品中微生物計(jì)數(shù)的增多。16.權(quán)利要求12的方法，其中至少1ppm的乳酸鏈球菌肽和至少10ppm的ε-聚-L-賴氨酸，基于食品的總重量。17.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中所述ε-聚-L-賴氨酸具有如下結(jié)構(gòu)其中n為25到35。18.權(quán)利要求12的方法，其中該食品選自色拉調(diào)料、沙司、腌泡汁、乳制品、涂抹料、人造黃油、肉、面食、面條、米飯、米飯布丁、蔬菜和飲料。全文摘要本發(fā)明提供了一種抗微生物組合物，它含有一定量的乳酸鏈球菌肽和ε－聚－L－賴氨酸，能夠有效地防止食品中微生物計(jì)數(shù)的增多。乳酸鏈球菌肽和ε－聚－L－賴氨酸協(xié)同作用來(lái)防止食物中微生物計(jì)數(shù)的增多，而不會(huì)影響食物的味道和物理特性。該協(xié)同作用的抗微生物組合物可用來(lái)抑制普通的食物傳染的病原體，如單核細(xì)胞增生利斯特氏菌、肉毒梭菌、蠟狀芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌以及腐敗菌如乳球菌屬物種、乳桿菌屬物種、明串珠菌屬物種、鏈球菌屬物種等。文檔編號(hào)A23L3/3463GK1864557SQ20061008864公開日2006年11月22日申請(qǐng)日期2006年5月15日優(yōu)先權(quán)日2005年5月16日發(fā)明者Z·鄭,M·G·羅曼,S·P·蒙克頓申請(qǐng)人:卡夫食品集團(tuán)公司