專利名稱：一種收集貼壁細胞的方法
技術領域：
本發明涉及一種實驗室培養細胞的方法，特別是涉及一種將貼壁細胞從培養板上或培養瓶中分離出來的方法。
背景技術：
細胞在培養過程中按照其生長方式分為貼壁生長和懸浮生長兩種，其中大部分種類的細胞是貼壁生長的細胞。貼壁細胞在培養過程中，必須先將貼壁細胞從培養板上或培養瓶中分離出來，才能進行傳代和收集，目前一般采用胰蛋白酶法和EDTA法分離。胰蛋白酶法分離效果較好，所以被廣泛采用，但此方法容易造成細胞損傷、操作技術要求也高，特別是要準確掌握消化時間，消化時間長造成細胞損傷甚至細胞死亡，消化時間短則細胞分離效果不好，消化時間的長與短有時只有數秒鐘，因此較難掌握。EDTA法分離效果不佳，需要時間較長。
發明內容
本發明的目的是提供一種收集貼壁細胞的方法，它能克服現有技術的上述缺點。
一種收集貼壁細胞的方法，其特征是將裝有貼壁細胞和細胞培養液的細胞培養瓶或細胞培養板放置在2-8℃冰箱中20分鐘至過夜，取出后立刻用吸管輕輕吹打，將細胞全部從培養瓶內或培養板上分離出來。
本發明的方法容易操作，操作時間容易掌握，分離效果好，在操作過程中不容易損傷細胞。可以廣泛用于醫療衛生、生物科技、農牧漁業等領域和科研中的細胞培養，如為臨床應用而進行的貼壁干細胞的大規模擴增和培養、樹突狀細胞培養和貼壁細胞株培養，使這些細胞大規模擴增后的臨床應用成為可能。
具體實施例方式
實施例1將裝有貼壁細胞珠A549和細胞培養液的細胞培養瓶置于8℃冰箱中過夜，取出后立刻用吸管輕輕吹打，可以將細胞全部從培養瓶中分離下來。
實施例2將裝有貼壁細胞人骨髓間充質干細胞和細胞培養液的細胞培養瓶置于4℃冰箱中2小時，取出后立刻用吸管輕輕吹打，將細胞全部從培養瓶中分離下來。
實施例3將裝有貼壁細胞樹突狀細胞和細胞培養液的細胞培養板置于2℃冰箱中20分鐘，取出后立刻用吸管輕輕吹打，將細胞全部從培養板上分離下來。
本發明利用降低溫度，使細胞代謝速度下降，貼壁細胞可自然地從貼壁狀態轉變為懸浮狀態，使貼壁細胞自然從培養板或培養瓶底分離下來，再根據不同的需要或將細胞移植到新的培養瓶中繼續培養，或收集起來備用。
用本發明的方法與目前常用的胰蛋白酶法和EDTA法對貼壁細胞株A549、NCI-H446、多例人骨髓間充質干細胞、樹突狀細胞進行比較，結果發現(見表)本發明無論在分離效果、細胞損傷程度和操作難度方面都優于現有的胰蛋白酶法和EDTA法。
表本發明和現有技術對貼壁細胞分離效果的比較
權利要求
1.一種收集貼壁細胞的方法，其特征是將裝有貼壁細胞和細胞培養液的細胞培養瓶或細胞培養板放置在2-8℃冰箱中20分鐘至過夜，取出后立刻用吸管輕輕吹打，將細胞幾乎全部從培養瓶內或培養瓶板上分離出來。
2.權利要求1所述的貼壁細胞在樹突狀細胞制備中的應用。
3.權利要求1所述的貼壁細胞在干細胞擴增和培養后制備中的應用。
全文摘要
一種收集貼壁細胞的方法，其特征是將裝有貼壁細胞和細胞培養液的細胞培養瓶或細胞培養板放置在2－8℃冰箱中20分鐘至過夜，取出后立刻用吸管輕輕吹打，將細胞全部從培養瓶內或培養瓶板上分離出來。本發明的方法容易操作，操作時間容易掌握，分離效果好，并且不損傷細胞。可以廣泛用于醫療衛生、生物科技、農牧漁業等領域和科研中的細胞培養，如貼壁生長的干細胞大規模擴增后的臨床應用、樹突狀細胞培養后的臨床治療和部分細胞株培養，從而使大規模推廣體細胞臨床應用成為可能。
文檔編號C12N5/08GK1974763SQ20061007079
公開日2007年6月6日 申請日期2006年12月13日 優先權日2006年12月13日
發明者高岱清, 魏仁敏, 宋修歧, 李文濤, 黃衛青, 張蓉, 王文 申請人:青島市中心醫院