腫瘤模型與方法

專利名稱：腫瘤模型與方法
技術領域：
本發明涉及了一種能夠揭示人類實體惡性腫瘤與機體組織或器官微環境演進轉化-改變綜合分子腫瘤生物調控機制、綜合分子腫瘤生物應答機制、綜合分子腫瘤生物預防治療機制方法及藥物的，腫瘤模型與方法，綜合人類腫瘤模型科學研究實驗平臺。能夠揭示檢測、監測人類小原位癌細胞組織的，人類相關分子腫瘤蛋白質組表達譜靶標；揭示拮抗-抑制人類腫瘤細胞組織生長增殖的，人類相關分子腫瘤蛋白質組表達譜靶標、腫瘤相關人類基因表達譜靶標。它涉及生命科學領域、及醫藥領域。
背景技術：
現代醫學科學針對在人類群體中臨床自然發病率最高的致死性實體惡性腫瘤，如肺癌、胃癌、乳腺癌、大腸癌、肝癌……，實施的各個科學研究層面的腫瘤科學研究，已經超過一個世紀；迄今在有效預防癌癥發生、在針對已經發生腫瘤轉移的中晚期致死性實體惡性腫瘤的有效根治或長期有效緩解治療方面，沒有取得解決實質問題的科學研究突破。需要擁有能夠實施現代醫學、分子生物學、生物化學、遺傳學、免疫學、病理生理學、實驗動物學等多個不同相關生物科學研究領域——各個相關科學學科協同的綜合科學研究，揭示人類實體惡性腫瘤與機體組織或器官微環境演進轉化-改變綜合分子腫瘤生物調控機制、綜合分子腫瘤生物應答機制、綜合分子腫瘤生物預防治療機制方法及藥物的，腫瘤模型與方法，綜合人類腫瘤模型科學研究實驗平臺。能夠揭示檢測、監測人類小原位癌細胞組織的，人類相關分子腫瘤蛋白質組表達譜靶標；揭示拮抗-抑制人類腫瘤細胞組織生長增殖的，人類相關分子腫瘤蛋白質組表達譜靶標、腫瘤相關人類基因表達譜靶標。

發明內容
本發明公開了一種能夠揭示人類實體惡性腫瘤與機體組織或器官微環境演進轉化-改變綜合分子腫瘤生物調控機制、綜合分子腫瘤生物應答機制、綜合分子腫瘤生物預防治療機制方法及藥物的，腫瘤模型與方法，綜合人類腫瘤模型科學研究實驗平臺。能夠揭示檢測、監測人類小原位癌細胞組織的，人類相關分子腫瘤蛋白質組表達譜靶標；揭示拮抗-抑制人類腫瘤細胞組織生長增殖的，人類相關分子腫瘤蛋白質組表達譜靶標、腫瘤相關人類基因表達譜靶標。
人類與脊椎動物機體發生占位實體惡性腫瘤，最初由于細胞基因變異在人類與脊椎動物機體中轉化產生的原始腫瘤細胞種子，沒有適合其傳代增殖的機體組織或器官微環境土壤，腫瘤細胞傳代增殖受到機體組織或器官微環境土壤抑制，是弱勢生長腫瘤細胞克隆種子；至少需要長達幾年以上甚至是一、二十年時間，才有可能會極緩慢逐漸增殖出極微小的、傳代增殖小于106~107腫瘤細胞、不會對機體組織或器官造成生物損傷的小原位癌細胞組織種子；并且會誘導淋巴免疫系統針對基因變異腫瘤細胞的免疫耐受機制。人類與脊椎動物機體中發生存在的106~107腫瘤細胞的小原位癌細胞組織種子、與機體組織或器官微環境土壤相互之間，逐漸-逐步發生多重復雜的相互誘導、相互調控轉化-改變，是能夠驅使其向致死性占位實體惡性腫瘤轉化的，腫瘤-微環境演進轉化-改變生物調控機制1.受抑制的弱勢生長腫瘤細胞克隆小原位癌細胞組織生物代謝機制，逐漸發生適應機體組織或器官微環境的轉化。2.主要是由非腫瘤因素、及腫瘤因素逐步造成機體組織或器官微環境演進轉化-改變，例如慢性乙型肝炎病人的靶器官肝臟、致癌物質誘發動物腫瘤模型的靶器官，發生靶器官細胞組織受到損傷可以被修復的病理損傷變化、進一步發生靶器官細胞組織受到損傷不可以被修復的病理損傷轉化-改變；機體組織或器官微環境演進轉化-改變，誘導-調控小原位癌細胞組織生物代謝機制，促使其發生適應機體組織或器官微環境的轉化-改變。3.機體組織或器官微環境演進轉化-改變，逐步選擇在小原位癌細胞組織中逐步發生不同基因變異的、適合在演進轉化-改變微環境中傳代增殖、具有生長增殖優勢的異質腫瘤細胞克隆。4.具有生長增殖優勢的異質腫瘤細胞克隆小原位癌細胞組織生命代謝物質，誘導-調控改變機體組織或器官微環境。5.機體組織或器官微環境演進轉化-改變，誘導-調控具有生長增殖優勢的，異質腫瘤細胞克隆生物代謝機制與傳代增殖生物調控機制，使其進一步轉化成為抵抗可能存在的免疫生物損傷、受損腫瘤細胞代償增殖速度快、能夠對機體組織或器官造成致死性生物損傷的惡性腫瘤組織。6.人類與脊椎動物機體發生存在的，具有生長增殖優勢的異質小原位癌細胞組織種子，與機體組織或器官微環境土壤，仍需經歷較長的相互誘導、相互調控轉化-改變——腫瘤-微環境演進轉化-改變生物調控/生物應答；才能夠被相互轉化-改變成為對機體組織或器官造成致死性生物損傷的惡性腫瘤組織種子、與適合惡性腫瘤組織種子傳代增殖的機體組織或器官微環境土壤；繼而會在人類與脊椎動物機體發生出，對機體組織或器官造成致死性生物損傷的占位實體惡性腫瘤組織。因而在人類與脊椎動物機體發生存在的，具有生長增殖優勢腫瘤細胞克隆的異質小原位癌細胞組織，在被逐漸演進轉化-改變成為致死性生物損傷占位實體惡性腫瘤的生物發生進程中，存在難以被當今常規醫療腫瘤監測-檢測發現的致死性占位實體惡性腫瘤成瘤潛伏期。7.在人類與脊椎動物機體發生存在的，大多數具有不同腫瘤生物分化異質占位實體惡性腫瘤組織，是由于機體發生最初機體微環境土壤適合高分化良性腫瘤細胞克隆種子傳代增殖、抑制低分化惡性腫瘤細胞克隆種子傳代增殖，逐漸趨向演進轉化-改變為適合低分化惡性腫瘤細胞克隆種子傳代增殖、抑制高分化良性腫瘤細胞克隆種子傳代增殖，異質占位實體腫瘤與微環境發生多重復雜相互誘導、相互調控轉化-改變——腫瘤-微環境演進轉化-改變生物調控、生物應答；人類與脊椎動物機體組織或器官才能夠逐漸-逐步發生，最初主要由高分化腫瘤細胞為優勢生長良性細胞克隆構成的異質占位實體腫瘤組織、逐漸-逐步過渡到主要由低分化腫瘤細胞為優勢生長惡性細胞克隆構成的異質占位實體腫瘤組織。例如被揭示、得到公認的，大腸癌分子腫瘤病理演進轉化-改變生物發生機制正常分化腸上皮細胞生物基因APC變異→異常病理分化非典型增殖細胞組織生物基因DNA低甲基化→腫瘤病理高分化早期腺瘤組織生物基因K-ras丟失→腫瘤病理中分化中期腺瘤組織生物基因Dcc丟失→腫瘤病理低分化晚期腺瘤組織生物基因P53變異→腫瘤病理分化原位腺癌組織→直至生成腫瘤病理分化致死性占位實體惡性腺癌組織。8.現代腫瘤實驗科學研究，將能夠通過建立本發明提供的，能夠揭示人類實體惡性腫瘤與機體組織或器官微環境演進轉化-改變綜合分子腫瘤生物調控機制、綜合分子腫瘤生物應答機制、綜合分子腫瘤生物預防治療機制方法及藥物的，腫瘤模型與方法，綜合人類腫瘤模型科學研究實驗平臺，獲得綜合科學研究實驗結果，為上述人類與脊椎動物機體發生占位實體惡性腫瘤，種子-土壤多重復雜相互誘導、相互調控轉化-改變——腫瘤-微環境演進轉化-改變生物調控、生物應答科學假說，提供全面的令人信服的科學實驗結果證據。
現代腫瘤實驗科學研究的重要科學研究手段，建立可移植性動物腫瘤模型，把動物自發性動物腫瘤、或致癌物質誘發的動物腫瘤、或通過臨床手術獲取的人體腫瘤的，約106~108腫瘤細胞或腫瘤小塊組織種子，移植到一個新的同種動物、或異種動物宿主機體土壤傳代增殖，研究揭示腫瘤的某些生物發生機制、生物性質。幾乎所有自發性原發于動物機體、原發于人類機體、或腫瘤移植動物機體，具有生長增殖優勢、傳代生長增殖速度快、能夠對機體組織或器官造成致死性生物損傷的、可移植性腫瘤細胞或腫瘤小塊組織種子，被移植到一個新動物宿主機體土壤；腫瘤細胞種子傳代生長增殖會受到新宿主機體微環境土壤的明顯抑制；必須經歷種子-土壤多重復雜相互誘導、相互調控轉化-改變——腫瘤-微環境演進轉化-改變生物調控、生物應答，被移植腫瘤細胞、或腫瘤小塊組織在新宿主機體的移植占位腫脹目測觀察消失的成瘤潛伏期；而后受到新宿主機體微環境土壤明顯抑制的、可移植性腫瘤細胞種子，才能夠被移植新宿主機體微環境土壤演進轉化-改變，再次被轉化成為具有生長增殖優勢、傳代生長增殖速度快、能夠對機體組織或器官造成致死性生物損傷的、可移植性腫瘤細胞組織種子，繼而會傳代生長增殖成為對機體組織或器官造成致死性生物損傷占位實體惡性腫瘤。能夠為上述人類與脊椎動物機體發生占位實體惡性腫瘤，種子-土壤多重復雜相互誘導、相互調控轉化-改變——腫瘤-微環境演進轉化-改變生物調控、生物應答科學假說，提供令人信服的現代腫瘤實驗科學研究結果證據。
本發明的目的是，提供一種能夠揭示人類實體惡性腫瘤與機體組織或器官微環境演進轉化-改變綜合分子腫瘤生物調控機制、綜合分子腫瘤生物應答機制、綜合分子腫瘤生物預防治療機制方法及藥物的，腫瘤模型與方法，綜合人類腫瘤模型科學研究實驗平臺。能夠揭示檢測、監測人類小原位癌細胞組織的，人類相關分子腫瘤蛋白質組表達譜靶標；揭示拮抗-抑制人類腫瘤細胞組織生長增殖的，人類相關分子腫瘤蛋白質組表達譜靶標、腫瘤相關人類基因表達譜靶標。
1.把取自臨床手術獲取的肺癌、胃癌、乳腺癌、大腸癌、肝癌……等人類腫瘤、或人類腫瘤細胞系，約106~108腫瘤細胞或腫瘤小塊組織，原位移植、或皮下移植到免疫機制有缺陷動物如裸小鼠的相應器官、或皮下；建立能夠被應用于模擬在人類機體發生的小原位癌，研究揭示人類腫瘤的某些生物發生機制、生物性質的那種人類腫瘤裸小鼠移植瘤模型——瘤株。
2.取那種人類腫瘤裸小鼠移植瘤模型的，機體接種移植瘤株傳代增殖量達到109腫瘤細胞——1g腫瘤組織的荷瘤裸小鼠的血；制取血清。應用荷瘤裸小鼠20％血清加培養基，體外培養那種人類腫瘤裸小鼠移植瘤株，建立那種人類腫瘤應用荷瘤裸小鼠血清體外培養的異質人類腫瘤細胞系；繼而再分離出的腫瘤生物分化表達性狀不同的腫瘤細胞克隆，3.分別建立那種人類腫瘤不同細胞克隆裸小鼠移植瘤模型、異質混合細胞裸小鼠移植瘤模型。
4.分別取那種人類腫瘤不同細胞克隆、異質混合細胞裸小鼠移植瘤模型的，接種移植瘤株0d、7d、14d、21d、28d、35d荷瘤裸小鼠的血；分別制取血清。分別應用接種移植瘤株0d、7d、14d、21d、28d、35d荷瘤裸小鼠的20％血清加培養基，模擬接種移植那種人類腫瘤株的裸小鼠不同生命時間發生進程0d、7d、14d、21d、28d、35d機體微環境土壤演進轉化-改變，在體外培養那種人類腫瘤細胞系，模擬那種人類腫瘤小原位癌細胞組織種子與接種移植那腫瘤株荷瘤裸小鼠機體微環境土壤，在不同生命時間發生進程0d、7d、14d、21d、28d、35d發生多重復雜相互誘導、相互調控轉化-改變由最初接種移植人類腫瘤株種子生長增殖受到機體微環境土壤抑制成瘤潛伏期、到機體微環境土壤促進移植人類腫瘤株種子增殖成瘤生長期、繼而會發生出致死性占位實體惡性腫瘤組織——腫瘤-微環境演進轉化-改變生物調控、生物應答。建立能夠綜合模擬表達在人類與脊椎動物機體發生存在的，具有生長增殖優勢腫瘤細胞克隆的小原位癌細胞組織種子——那種人類可移植性腫瘤細胞或腫瘤小塊組織種子，被移植到一個新動物宿主機體土壤；腫瘤細胞種子傳代生長增殖會受到新宿主機體微環境土壤的明顯抑制；必須經歷種子-土壤多重復雜相互誘導、相互調控轉化-改變——腫瘤-微環境演進轉化-改變生物調控、生物應答，被移植腫瘤細胞或腫瘤小塊組織在新宿主機體的移植占位腫脹目測觀察消失的成瘤潛伏期；而后受到新宿主機體微環境土壤明顯抑制的、那種人類可移植性腫瘤細胞種子，才能夠被移植新宿主機體微環境土壤演進轉化-改變，再次被轉化成為具有生長增殖優勢、傳代生長增殖速度快、能夠對機體組織或器官造成致死性生物損傷的、那種人類可移植性腫瘤細胞組織種子，繼而會傳代生長增殖成為對機體組織或器官造成致死性生物損傷的占位實體惡性腫瘤；腫瘤組織內存在可以分辨的異質腫瘤細胞克隆種子與宿主機體微環境土壤，經歷種子-土壤多重復雜相互誘導、相互調控轉化-改變——腫瘤-微環境演進轉化-改變生物調控、生物應答，能夠表達出可以被科學實驗結果證實、分辨的異質多樣腫瘤-微環境演進轉化-改變生物調控、生物應答性質的腫瘤模型與方法，綜合人類腫瘤模型科學研究實驗平臺。為現代腫瘤實驗科學研究，能夠綜合模擬分析揭示在人類群體中臨床自然發病率最高的，那種人類實體惡性腫瘤異質小原位癌細胞組織種子，在人類機體轉化為致死性占位實體惡性腫瘤與機體組織或器官微環境演進轉化-改變綜合分子腫瘤生物調控機制、綜合分子腫瘤生物應答機制、綜合分子腫瘤生物預防治療機制方法及藥物，提供切實可以實施的綜合生物醫學科學研究實驗方法。能夠揭示檢測、監測人類小原位癌細胞組織的，人類相關分子腫瘤蛋白質組表達譜靶標；揭示拮抗-抑制人類腫瘤細胞組織生長增殖的，人類相關分子腫瘤蛋白質組表達譜靶標、腫瘤相關人類基因表達譜靶標。
具體實施例方式
為達到上述目的，實施本發明采用的方案1.制備生物實驗材料1.1.1復旦大學肝癌研究所建立的人肝癌MHCC97-L細胞系、人肝癌MHCC97-H細胞系；根源于臨床手術取自于一個肝細胞肝癌病人腫瘤組織，建立的異質人肝癌MHCC97細胞系、繼而再分離出的腫瘤生物分化表達性狀不同的兩個腫瘤細胞克隆，主要腫瘤生物表達性狀人肝癌MHCC97-L細胞系腫瘤生物分化表達性狀、為高分化腫瘤細胞克隆，人肝癌MHCC97-H細胞系腫瘤生物分化表達性狀、為低分化腫瘤細胞克隆；人肝癌MHCC97-L細胞平均直徑50±5μm、細胞核內通常有2~3個大核仁，人肝癌MHCC97-H細胞平均直徑43±2μm、細胞核內通常有3~7個小核仁；體外培養于含有10％人AB血清的高糖DMEM培養基中穩定傳代生長增殖；體外培養人肝癌MHCC97細胞倍增時間43h，體外培養人肝癌MHCC97-L細胞倍增時間60h，體外培養人肝癌MHCC97-H細胞倍增時間34.2h；5×106細胞/0.2ml/每只劑量接種于裸小鼠皮下，人肝癌MHCC97成瘤潛伏期為15~20d、人肝癌MHCC97-L成瘤潛伏期為21.3±2.5d、人肝癌MHCC97-H成瘤潛伏期為6.4±2.2d。
1.1.2人肝癌MHCC97-L細胞裸小鼠移植瘤模型把體外培養人肝癌MHCC97-L細胞，按照5×106細胞/0.2ml/每只劑量，分別注射接種于6只裸小鼠腋下。接種移植瘤株30d~32d，乙醚麻醉荷瘤裸小鼠，手術剝離取出腫瘤組織，稱重；選取其中1個腫瘤細胞組織生長性狀最好、沒有發生組織壞死、腫瘤重量大于0.6g的腫瘤。采用常規機械法把腫瘤組織制成2.5×107細胞/ml單細胞懸液，按照5×106細胞/0.2ml/每只劑量，分別注射接種于80只裸小鼠腋下；按照1.5法，分別于接種移植瘤株不同時間0d乙醚麻醉采血處死20只裸小鼠，7d、14d、21d、28d、30d、35d各自乙醚麻醉采血處死10只裸小鼠，制取血清備用。分別手術剝離取出在各自動物機體發生的不同成瘤生長時間腫瘤組織，用卡尺測量腫瘤組織的長、短徑，稱重，記錄；置于2％多聚甲醛、0.5％戊二醛、0.2％苦味酸、0.1mol/L磷酸緩沖液的固定液中固定；制作組織切片Giemsa染色、400×腫瘤細胞組織光鏡形態學觀察數碼照相圖片資料儲存備用。選取另1個腫瘤細胞組織生長性狀最好、沒有發生組織壞死、腫瘤重量大于0.5g的腫瘤。用常規機械法把腫瘤組織制成2.5×107細胞/ml單細胞懸液，按照5×106細胞/0.2ml/每只劑量，分別注射接種于30只裸小鼠皮下，實施下述2.模擬人類小原位癌—腫瘤與機體微環境演進轉化-改變生物調控、生物應答動物模型實驗。
1.1.3人肝癌MHCC97-H細胞裸小鼠移植瘤模型把體外培養人肝癌MHCC97-H細胞，按照5×106細胞/0.2ml/每只劑量，注射接種于6只裸小鼠腋下。接種移植瘤株28d~30d，乙醚麻醉荷瘤裸小鼠，手術剝離取出腫瘤組織，稱重；選取其中1個腫瘤細胞組織生長性狀最好、沒有發生組織壞死、腫瘤重量大于0.6g的腫瘤。采用常規機械法把腫瘤組織制成2.5×107細胞/ml單細胞懸液，按照5×106細胞/0.2ml/每只劑量，分別注射接種于60只裸小鼠腋下；按照1.1.5法，分別于接種移植瘤株不同時間0d、7d、14d、21d、28d、35d各自乙醚麻醉采血處死10只裸小鼠，制取血清備用。分別手術剝離取出在各自動物機體發生的不同成瘤生長時間腫瘤組織，用卡尺測量腫瘤組織的長、短徑，稱重，記錄；置于固定液中固定；制作組織切片Giemsa染色、400×腫瘤細胞組織光鏡形態學觀察數碼照相圖片資料儲存備用。按照5×106細胞/0.2ml/每只劑量，分別注射接種于10只裸小鼠皮下，實施下述2.模擬人類小原位癌—腫瘤與機體微環境演進轉化-改變生物調控、生物應答動物模型實驗。
1.1.4人肝癌MHCC97-LH異質混合細胞裸小鼠移植瘤模型分別把人肝癌MHCC97-L腫瘤組織/人肝癌MHCC97-H腫瘤組織制成，人肝癌MHCC97-L細胞的2.5×107細胞/ml單細胞懸液、人肝癌MHCC97-H細胞的2.5×107細胞/ml單細胞懸液，1∶1相互混合均勻，按照5×106異質混合細胞/0.2ml/每只劑量，分別注射接種于60只裸小鼠腋下；按照1.1.5法，分別于接種移植瘤株不同時間0d、7d、14d、21d、28d、35d各自乙醚麻醉采血處死10只裸小鼠，制取血清備用。分別手術剝離取出在各自動物機體發生的不同成瘤生長時間腫瘤組織，用卡尺測量腫瘤組織的長、短徑，稱重，記錄；置于固定液中固定；制作組織切片Giemsa染色、400×腫瘤細胞組織光鏡形態學觀察數碼照相圖片資料儲存備用。按照5×106異質混合細胞/0.2ml/每只劑量，分別注射接種于10只裸小鼠皮下，實施下述2.模擬人類小原位癌—腫瘤與機體微環境演進轉化-改變生物調控、生物應答動物模型實驗。
1.1.5分別制取接種不同人肝癌MHCC97-L/H/LH移植瘤株，0d、7d、14d、21d、28d、35d不同荷瘤時間采血的裸小鼠的血清分別乙醚麻醉接種L/H/LH不同移植瘤株/不同荷瘤時間采血的裸小鼠，把動物仰臥固定。正中切口入腹。把腸子用紗布保護好放置在腹腔外左側。通過尾靜脈用5號針注射0.4ml林格氏液，注射速度0.05ml/s~0.1ml/s，注射完畢后先用絲線結扎注射前端止血，再抽出注射針。輕輕分開脊柱前的脂肪，暴露腹主動脈；在腹主動脈遠心端用絲線打一個節，再用拉線阻斷腹主動脈近心端，然后在其間平行刺入，并松開近心端阻斷拉線，立即采血。當動物呼吸減弱時，擠壓動物胸腔輔助呼吸同時不斷擠出心臟殘余血液。或實施動物心臟穿刺采血。分別把接種L/H/LH不同移植瘤株/不同荷瘤時間采血的裸小鼠的血，集中注入各自的4℃低溫保存離心管內收集完成后，以2000g離心10min，離心后4℃低溫靜置60min；然后用血管鉗擠壓血凝塊，擠出內含的血清；棄去血凝塊，再以5~10000g離心60min。把取自于接種L/H/LH不同移植瘤株/不同荷瘤時間采血的裸小鼠的血清編號——Ln/Hn/LHn，n＝0d、7d、14d、21d、28d、35d；各自分別用一系列一次性注射器式過濾器進行過濾，最后用0.1μm孔徑無菌過濾器進行過濾后；分別把編號血清Ln/Hn/LHn，n＝0d、7d、14d、21d、28d、35d，各自分置于多個小無菌高密度聚丙烯容器，放置-70℃冰箱保存備用。
1.1.6配制DMEM葡萄糖4.5g/l培養基，-D。分別應用接種不同人肝癌MHCC97-L/H/LH移植瘤株0d、7d、14、21、28d、35d不同時間采血的裸小鼠的編號血清Ln/Hn/LHn，n＝0d、7d、14d、21d、28d、35d，按照裸小鼠血清/DMEM葡萄糖4.5g/l＝1/4，分別配制綜合模擬接種不同人肝癌MHCC97-L/H/LH移植瘤株的裸小鼠不同生命時間進程0d、7d、14d、21d、28d、35d機體微環境(土壤)演進轉化-改變的編號培養基，Ln-D/Hn-D/LHn-D，n＝0d、7d、14d、21d、28d、35d。分別應用編號Ln-D，n＝0d、7d、14d、21d、28d、35d的6種培養基，各自配制L細胞2×105/ml的6種細胞懸浮液；分別應用編號Hn-D，n＝0d、7d、14d、21d、28d、35d的6種培養基，各自配制H細胞2×105/ml的6種細胞懸浮液；分別應用編號LHn-D，n＝0d、7d、14d、21d、28d、35d的6種培養基，各自配制L細胞＝H細胞2×105/ml的6種細胞懸浮液。分別應用含有10％AB血清DMEM葡萄糖4.5g/l培養基配制L細胞2×105/ml細胞懸浮液，H細胞2×105/ml細胞懸浮液，L細胞＝H細胞2×105/ml細胞懸浮液。
實施下述3.模擬人類小原位癌—腫瘤與機體微環境演進轉化-改變生物調控、生物應答體外培養人類腫瘤細胞模型實驗。
2.模擬人類小原位癌—腫瘤與機體微環境演進轉化-改變生物調控、生物應答動物模型實驗2.1模型生物機制特點2.1.1現代腫瘤實驗科學研究，把具有生長增殖優勢、傳代生長增殖速度快、能夠對機體組織或器官造成致死性生物損傷的、人類腫瘤可移植瘤株106~108腫瘤細胞或腫瘤小塊組織種子，接種到免疫有缺陷的裸小鼠機體微環境土壤，建立人類腫瘤異種動物可移植瘤模型；可以被應用于模擬在人類機體發生的小原位癌，研究揭示人類腫瘤的某些生物發生機制、生物性質。存在移植瘤株種子受到裸小鼠機體微環境土壤抑制的成瘤潛伏期，可以被認為是能夠模擬表達在人類脊椎動物機體發生存在的，具有生長增殖優勢小原位癌細胞組織種子，需要與機體組織或器官微環境土壤，經歷多重復雜相互誘導、相互調控轉化-改變——腫瘤-微環境演進轉化-改變生物調控/生物應答發生進程；才能夠被相互轉化-改變成為，對機體組織或器官造成致死性生物損傷的惡性腫瘤組織種子、與適合惡性腫瘤組織種子傳代增殖的機體組織或器官微環境土壤；繼而會在人類與脊椎動物機體發生出，對機體組織或器官造成致死性生物損傷的占位實體惡性腫瘤組織的，人類腫瘤生物發生機制的實驗動物模型。
2.2實驗動物模型及分組及實驗實施方法2.2.1接種人肝癌MHCC97-LH異質混合細胞裸小鼠移植瘤模型組按照1.1.4法，把人肝癌MHCC97-L腫瘤組織、人肝癌MHCC97-H腫瘤組織制成，1∶1混合細胞懸液，按照MHCC97-L細胞2.5×106細胞+MHCC97-H細胞2.5×106細胞/0.2ml/每只劑量，分別注射接種10只裸小鼠便于實驗觀察的、胸肋弧中央處皮下。
2.2.2接種人肝癌MHCC97-H細胞裸小鼠移植瘤模型對照組按照1.1.3法，把人肝癌MHCC97-H腫瘤組織制成的單細胞懸液，按照5×106細胞/0.2ml/每只劑量，注射接種10只裸小鼠便于實驗觀察的、胸肋弧中央處皮下。
2.2.3接種人肝癌MHCC97-L細胞裸小鼠移植瘤模型對照組按照1.1.2法，把人肝癌MHCC97-L腫瘤組織制成的單細胞懸液，按照5×106細胞/0.2ml/每只劑量，注射接種10只裸小鼠便于實驗觀察的、胸肋弧中央處皮下。
2.2.4接種人肝癌MHCC97-L細胞裸小鼠移植瘤模型，注射接種瘤株30d成瘤生長期動物血清，調控移植人肝癌瘤株成瘤潛伏期、腫瘤生長速度組按照1.1.2法，把人肝癌MHCC97-L腫瘤組織制成的單細胞懸液，按照5×106細胞/0.2ml/每只劑量，注射接種10只裸小鼠便于實驗觀察的、胸肋弧中央處皮下。在接種瘤株后，每24h一次，距離接種瘤株邊緣外5mm處，皮下注射50μl取自接種MHCC97-L瘤株30d成瘤生長期裸小鼠的血清；分別輪換在不同位置處，共皮下注射8次。
2.2.5接種人肝癌MHCC97-L細胞裸小鼠移植瘤模型，注射接種瘤株0d成瘤潛伏期動物血清對照組按照1.1.2法，把人肝癌MHCC97-L腫瘤組織制成的單細胞懸液，按照5×106細胞/0.2ml/每只劑量，注射接種10只裸小鼠便于實驗觀察的、胸肋弧中央處皮下。在接種瘤株后，每24h一次，距離接種瘤株邊緣外5mm處，皮下注射50μl取自接種MHCC97-L瘤株0d成瘤潛伏期裸小鼠的血清；分別輪換在不同位置處，共皮下注射8次。
2.3實驗觀察/檢測/目的評定目測觀察移植瘤株在每一只實驗動物機體上出現的移植占位腫脹，移植占位腫脹消失、到腫瘤占位再次出現的成瘤潛伏期；目測觀察實驗動物機體上再次出現腫瘤占位，每2d一次用卡尺測量腫瘤占位的長、短徑；接種瘤株28d，實施頸椎脫臼法處死荷瘤裸小鼠，手術剝離取出腫瘤組織，用卡尺測量腫瘤組織的長、短徑，稱重。作記錄。
2.3.1應用體外細胞培養傳代生長增殖速度快、腫瘤病理低分化的人肝癌MHCC97-H細胞，與體外細胞培養傳代生長增殖速度慢、腫瘤病理高分化的人肝癌MHCC97-L細胞異質混合，模擬在人類機體發生的異質小原位癌，接種到免疫有缺陷的裸小鼠機體微環境土壤，建立人類腫瘤異種動物可移植瘤模型。
2.1.1接種人肝癌MHCC97-LH異質混合細胞裸小鼠移植瘤模型組的成瘤潛伏期，明顯長于2.1.2接種人肝癌MHCC97-H細胞裸小鼠對照組的成瘤潛伏期，短于2.1.3接種人肝癌MHCC97-L細胞裸小鼠移植瘤模型對照組的成瘤潛伏期；人肝癌MHCC97-LH異質混合細胞裸小鼠移植瘤模型組的成瘤生長速度，慢于人肝癌MHCC97-H細胞裸小鼠對照組的成瘤生長速度，快于肝癌MHCC97-L細胞裸小鼠移植瘤模型對照組的成瘤生長速度。裸小鼠機體組織或器官微環境土壤演進轉化-改變，能夠使腫瘤病理低分化的人肝癌MHCC97-H細胞種子，明顯延長成瘤潛伏期，失去低分化腫瘤細胞生長增殖優勢；能夠使腫瘤病理高分化的人肝癌MHCC97-L細胞種子，成為具有生長增殖優勢、主導腫瘤組織生長的異質腫瘤細胞克隆。表明人類與脊椎動物機體組織或器官微環境演進轉化-改變，選擇小原位癌細胞組織中逐步發生不同基因變異、適合在逐步發生轉化-改變微環境中傳代增殖、具有生長增殖優勢的異質腫瘤細胞克隆；決定其是否能夠在機體組織或器官微環境中轉化-改變成為具有生長增殖優勢、主導腫瘤組織生長的異質腫瘤細胞克隆。應用上述3種人類腫瘤異種動物可移植瘤模型，綜合表達人類腫瘤生物表達性狀能夠被機體微環境演進轉化-改變調控，可信服的科學實驗結果，證實人類與脊椎動物機體組織或器官微環境演進轉化-改變，使最初發生、受到機體組織或器官微環境抑制的異質人類小原位癌細胞組織，轉化-改變成為適合在演進轉化-改變微環境中傳代增殖、具有生長增殖優勢的異質人類小原位癌細胞組織；異質人類小原位癌細胞組織，與異質人類腫瘤細胞克隆腫瘤病理分化的高低、體外細胞培養傳代增殖速度的快慢，不是決定異質人類小原位癌細胞組織、異質人類腫瘤細胞克隆能夠在機體微環境中，轉化-改變成為具有生長增殖優勢人類腫瘤細胞克隆、構成主導腫瘤組織生長的異質人類腫瘤組織的，主要人類腫瘤發生因素；而是主要取決于機體組織或器官微環境演進轉化-改變，對異質人類小原位癌細胞組織、異質人類腫瘤細胞克隆的選擇，調控異質人類腫瘤細胞克隆生物表達性狀、與異質人類腫瘤組織生長；繼而會在人類與脊椎動物機體發生出，對機體組織或器官造成致死性生物損傷的占位實體惡性腫瘤組織。是人類腫瘤主要生物發生機制。
2.3.2給人肝癌MHCC97-L細胞裸小鼠移植瘤模型，在移植瘤株處附近皮下、多次注射取自接種MHCC97-L瘤株30d成瘤生長期裸小鼠的血清，使成瘤潛伏期移植瘤株接種處局部微環境、發生成瘤生長期的轉化-改變，縮短人肝癌MHCC97-L移植瘤株在裸小鼠機體受到抑制的成瘤潛伏期。應用上述人類腫瘤異種動物可移植瘤模型，實施機體微環境演進轉化-改變調控人類腫瘤生物表達性狀實驗，可信服的科學實驗結果，進一步證實人類腫瘤生物表達性狀能夠被機體微環境演進轉化-改變調控；人類與脊椎動物機體組織或器官微環境演進轉化-改變，使最初發生、受到機體組織或器官微環境抑制的人類小原位癌細胞組織，轉化-改變成為適合在演進轉化-改變微環境中傳代增殖、具有生長增殖優勢的人類腫瘤細胞克隆小原位癌細胞組織；決定其是否能夠在機體組織或器官微環境中，轉化-改變成為具有生長增殖優勢人類腫瘤細胞克隆、構成主導腫瘤組織生長的人類腫瘤組織；調控人類腫瘤細胞克隆的生物表達性狀、與人類腫瘤組織生長；繼而會在人類與脊椎動物機體發生出，對機體組織或器官造成致死性生物損傷的占位實體惡性腫瘤組織。是人類腫瘤主要生物發生機制。
2.3.3調出1.制備生物實驗材料，創造人肝癌MHCC97-L細胞裸小鼠移植瘤模型、人肝癌MHCC97-H細胞裸小鼠移植瘤模型、人肝癌MHCC97-LH異質混合細胞裸小鼠移植瘤模型，各自動物機體發生的不同成瘤生長時間腫瘤細胞組織的、光鏡形態學觀察數碼照相圖片資料；對比分析異質人肝癌MHCC97-L細胞克隆移植瘤株、人肝癌MHCC97-H細胞克隆移植瘤株、人肝癌MHCC97-LH異質混合細胞移植瘤株，分別在裸小鼠機體微環境成瘤生長的腫瘤細胞組織形態。人肝癌MHCC97-LH異質混合細胞裸小鼠移植瘤模型，在裸小鼠機體微環境成瘤生長的異質混合細胞腫瘤組織，L腫瘤細胞與H腫瘤細胞的比例，不同成瘤生長時間的比例存在漸進變化差異，腫瘤病理高分化、體外細胞培養傳代增殖速度慢的人肝癌MHCC97-L細胞種子，成為具有生長增殖優勢、主導腫瘤組織生長的異質腫瘤細胞克隆；L腫瘤細胞形態、與人肝癌MHCC97-L細胞裸小鼠移植瘤模型的L腫瘤細胞形態存在差異，H腫瘤細胞形態、與人肝癌MHCC97-H細胞裸小鼠移植瘤模型的H腫瘤細胞形態存在差異；不同成瘤生長時間的腫瘤細胞形態存在差異。應用上述3種人類腫瘤異種動物可移植瘤模型表達的，可信服的腫瘤細胞組織形態學對比分析科學實驗結果，進一步從不同的科學研究層面證實人類腫瘤生物表達性狀能夠被機體微環境演進轉化-改變調控；在人類機體發生的異質小原位癌細胞組織，與異質腫瘤細胞克隆腫瘤病理分化的高低、體外細胞培養傳代增殖速度的快慢，不是決定異質人類小原位癌細胞組織、異質人類腫瘤細胞克隆能夠在機體微環境中，轉化-改變成為具有生長增殖優勢人類腫瘤細胞克隆、構成主導腫瘤組織生長的人類腫瘤組織的，主要人類腫瘤發生因素；而是主要取決于機體組織或器官微環境演進轉化-改變，對異質人類小原位癌細胞組織、異質人類腫瘤細胞克隆的選擇，調控異質人類腫瘤細胞克隆生物表達性狀、與異質人類腫瘤組織生長；繼而會在人類與脊椎動物機體發生出，對機體組織或器官造成致死性生物損傷的占位實體惡性腫瘤組織。是人類腫瘤主要生物發生機制。
3.模擬人類小原位癌—腫瘤與機體微環境演進轉化-改變生物調控、生物應答體外培養人類腫瘤細胞模型實驗3.1模型生物機制特點3.1.1人肝癌MHCC97-L細胞裸小鼠移植瘤模型、人肝癌MHCC97-H細胞裸小鼠移植瘤模型、人肝癌MHCC97-LH異質混合細胞裸小鼠移植瘤模型，機體血液循環血清分子生物物質成分生物質譜——蛋白質組表達譜，在接種瘤株后不同生命時間進程發生的演進轉化-改變，表達各自裸小鼠移植瘤模型的腫瘤-微環境演進轉化-改變生物調控/生物應答，機體微環境演進轉化-改變的重要綜合分子腫瘤生物調控機制。分別檢測、綜合分析人肝癌MHCC97-L細胞裸小鼠移植瘤模型、人肝癌MHCC97-H細胞裸小鼠移植瘤模型、人肝癌MHCC97-LH異質混合細胞裸小鼠移植瘤模型，接種移植瘤株0d、7d、14、21、28d、35d不同時間采血的裸小鼠的編號血清Ln/Hn/LHn，n＝0d、7d、14d、21d、28d、35d，分子生物物質成分生物質譜——蛋白質組表達譜演進轉化-改變能夠被應用于模凝分析揭示人類與脊椎動物機體組織或器官微環境演進轉化-改變，使最初發生、受到機體組織或器官微環境抑制的人類小原位癌細胞組織轉化-改變成為，適合在演進轉化-改變微環境中傳代增殖、具有生長增殖優勢的人類腫瘤細胞克隆小原位癌細胞組織；決定其是否能夠在機體組織或器官微環境中轉化-改變成為，具有生長增殖優勢人類腫瘤細胞克隆構成、主導腫瘤組織生長的人類腫瘤組織；調控人類腫瘤細胞克隆的生物表達性狀、與人類腫瘤組織生長的，由人類與脊椎動物機體微環境演進轉化-改變的血清相關分子腫瘤生物物質成分生物質譜——蛋白質組表達譜表達的，重要綜合分子腫瘤生物調控機制。分別應用人肝癌MHCC97-L細胞裸小鼠移植瘤模型、人肝癌MHCC97-H細胞裸小鼠移植瘤模型、人肝癌MHCC97-LH異質混合細胞裸小鼠移植瘤模型，各自不同生命時間發生進程的編號血清Ln/Hn/LHn，n＝0d、7d、14d、21d、28d、35d，分別配制能夠模凝接種不同人肝癌MHCC97-L/H/LH移植瘤株的裸小鼠不同生命時間進程0d、7d、14d、21d、28d、35d機體微環境土壤演進轉化-改變的編號培養基Ln-D/Hn-D/LHn-D，n＝0d、7d、14d、21d、28d、35d，體外培養各自腫瘤細胞能夠被應用于模凝分析揭示最初發生、受到機體組織或器官微環境抑制的人類小原位癌細胞組織轉化-改變成為，適合在演進轉化-改變微環境中傳代增殖、具有生長增殖優勢的人類腫瘤細胞克隆小原位癌細胞組織；能夠在機體組織或器官微環境中轉化-改變成為，具有生長增殖優勢人類腫瘤細胞克隆、構成主導腫瘤組織生長的人類腫瘤組織；機體微環境演進轉化-改變，調控人類腫瘤細胞克隆的生物表達性狀、與人類腫瘤組織生長，由人類(脊椎動物)機體微環境演進轉化-改變的血清相關分子腫瘤生物物質成分生物質譜——蛋白質組表達譜調控的，演進轉化-改變的腫瘤相關人類基因表達譜，重要綜合分子腫瘤生物應答機制。
3.2實驗分組及實驗實施方法
3.2.1按照1.1.6法，分別應用模擬接種人肝癌MHCC97-L細胞瘤株0d、7d、14d、21d、28d、35d裸小鼠機體微環境演進轉化-改變的6種編號培養基Ln-D，n＝0d、7d、14d、21d、28d、35d，各自配制L細胞2×105/ml細胞懸浮液；應用含有10％AB人血清DMEM葡萄糖4.5g/l培養基配制，L細胞2×105/ml細胞懸浮液。在一塊24孔板上，分別實施6種編號培養基Ln-D，n＝0d、7d、14d、21d、28d、35d，體外培養人肝癌MHCC97-L細胞。每種編號培養基各3孔，每孔灌注1ml應用各自編號培養基Ln-D，n＝0d、7d、14d、21d、28d、35d配制L細胞2×105/ml細胞懸浮液；在有一定濕度，5％CO2的37℃溫箱中培養；培養72h時各自換1次各自編號培養基Ln-D。培養144h，停止培養；同時在24孔板上加一組人肝癌MHCC97-L細胞培養0h對照組，設置3孔，每孔灌注1ml應用高糖DMEM培養基配制L細胞2×105/ml細胞懸浮液。分別收集各種培養基各自3個培養孔培養腫瘤細胞，分別做制備涂片Giemsa染色、400×培養腫瘤細胞光鏡形態學觀察數碼照相圖片資料儲存備用；培養腫瘤細胞生長周期與生長曲線測定；置于液氮冷凍保存，準備做培養腫瘤細胞人類基因表達譜檢測。
3.2.2按照1.1.6法，分別應用模擬接種人肝癌MHCC97-H細胞瘤株0d、7d、14d、21d、28d、35d裸小鼠機體微環境演進轉化-改變的6種編號培養基Hn-D，n＝0d、7d、14d、21d、28d、35d，各自配制H細胞2×105/ml細胞懸浮液；應用含有10％AB人血清DMEM葡萄糖4.5g/l培養基配制，H細胞2×105/ml細胞懸浮液。在一塊24孔板上，分別實施6種編號培養基Hn-D，n＝0d、7d、14d、21d、28d、35d，體外培養人肝癌MHCC97-H細胞。每種編號培養基各3孔，每孔灌注1ml應用各自編號培養基Hn-D，n＝0d、7d、14d、21d、28d、35d配制H細胞2×105/ml細胞懸浮液；在有一定濕度，5％CO2的37℃溫箱中培養；培養72h時各自換1次各自編號培養基Hn-D。培養144h，停止培養；同時在24孔板上加一組人肝癌MHCC97-H細胞培養0h對照組，設置3孔，每孔灌注1ml應用高糖DMEM培養基配制H細胞2×105/ml細胞懸浮液。分別收集各種培養基各自3個培養孔培養腫瘤細胞，分別做制備涂片Giemsa染色、400×培養腫瘤細胞光鏡形態學觀察數碼照相圖片資料儲存備用；培養腫瘤細胞生長周期與生長曲線測定；置于液氮冷凍保存，準備做培養腫瘤細胞人類基因表達譜檢測。
3.2.3按照1.1.6法，分別應用模擬接種人肝癌MHCC97-LH異質混合細胞瘤株0d、7d、14d、21d、28d、35d裸小鼠機體微環境演進轉化-改變的6種編號培養基LHn-D，n＝0d、7d、14d、21d、28d、35d，各自配制L細胞＝H細胞2×105/ml混合細胞懸浮液；應用含有10％AB人血清DMEM葡萄糖4.5g/l培養基配制L細胞＝H細胞2×105/ml混合細胞懸浮液。在一塊24孔板上，分別實施6種編號培養基LHn-D，n＝0d、7d、14d、21d、28d、35d，體外培養人肝癌MHCC97-LH異質混合細胞。每種編號培養基各3孔，每孔灌注1ml應用各自編號培養基LHn-D，n＝0d、7d、14d、21d、28d、35d配制L細胞＝H細胞2×105/ml細胞懸浮液；在有一定濕度，5％CO2的37℃溫箱中培養；培養72h時各自換1次各自編號培養基LHn-D。培養144h，停止培養；同時在24孔板上加一組人肝癌MHCC97-LH異質混合細胞培養0h對照組，設置3孔，每孔灌注1ml應用高糖DMEM培養基配制LH異質混合細胞2×105/ml細胞懸浮液。分別收集各種培養基各自3個培養孔培養腫瘤細胞，分別做制備涂片Giemsa染色、400×培養腫瘤細胞光鏡形態學觀察數碼照相圖片資料儲存備用；培養腫瘤細胞生長周期與生長曲線測定；置于液氮冷凍保存，準備做培養腫瘤細胞人類基因表達譜檢測。
3.2.4按照1.1.6法，應用L0d-D培養基，配制L細胞2×105/ml細胞懸浮液4ml，分置于2個10號培養瓶；應用H0d-D培養基，配制H細胞2×105/ml細胞懸浮液4ml，分置于2個10號培養瓶；應用LH0d-D培養基，配制L細胞＝H細胞2×105/ml混合細胞懸浮液4ml，分置于2個10號培養瓶；在有一定濕度，5％CO2的37℃溫箱中培養。各個養瓶培養3d時各自換1次各自編號n＝0d培養基；各個養瓶培養6d時取出50％~80％培養腫瘤細胞備用，換1次各自編號n＝7d培養基；各個培養瓶培養9d時各自換1次各自編號n＝7d培養基；各個培養瓶培養12d時取出50％~80％培養腫瘤細胞備用，換1次各自編號n＝14d培養基；各個培養瓶培養15d時各自換1次各自編號n＝14d培養基；各個培養瓶培養18d時取出50％~80％培養腫瘤細胞備用，換1次各自編號n＝21d培養基；各個培養瓶培養21d時各自換1次各自編號n＝21d培養基；各個培養瓶培養24d時取出50％~80％培養腫瘤細胞備用，換1次各自編號n＝28d培養基；各個培養瓶培養27d時各自換1次各自編號n＝28d培養基；各個培養瓶培養30d時取出50％~80％培養腫瘤細胞備用，換1次各自編號n＝35d培養基；各個培養瓶培養33d時各自換1次各自編號n＝35d培養基；各個培養瓶培養36d時結束連續培養，取出培養腫瘤細胞備用。分別對應用Ln-D培養基連續培養L細胞、Hn-D培養基連續培養H細胞、LHn-D培養基連續培養LH混合細胞，各自分別培養6d、12d、18d、24d、27d、30、36d取出的培養腫瘤細胞，分別做制備涂片Giemsa染色、400×培養腫瘤細胞光鏡形態學觀察數碼照相圖片資料儲存備用；培養腫瘤細胞生長周期與生長曲線測定；置于液氮冷凍保存，準備做培養腫瘤細胞人類基因表達譜檢測。
3.3實驗檢測/目的評定3.3.1通過P3級生物質譜——蛋白質組表達譜檢測分析實驗室，分別檢測1.制備生物實驗材料，人肝癌MHCC97-L細胞裸小鼠移植瘤模型、人肝癌MHCC97-H細胞裸小鼠移植瘤模型、人肝癌MHCC97-LH異質混合細胞裸小鼠移植瘤模型，分別接種移植瘤株0d、7d、14、21、28d、35d不同時間采血的裸小鼠的編號血清Ln/Hn/LHn，n＝0d、7d、14d、21d、28d、35d，各自血清分子生物物質成分生物質譜——蛋白質組表達譜。綜合對比分析人肝癌MHCC97-L細胞裸小鼠移植瘤模型的編號血清Ln，n＝0d、7d、14d、21d、28d、35d，由成瘤潛伏期抑制人小原位癌腫瘤細胞生長增殖、到成瘤生長期促進人小原位癌腫瘤細胞生長增殖、到發生致死性腫瘤，血清分子生物物質成分生物質譜——蛋白質組表達譜演進轉化-改變；人肝癌MHCC97-H細胞裸小鼠移植瘤模型的編號血清Hn，n＝0d、7d、14d、21d、28d、35d，由成瘤潛伏期抑制人小原位癌腫瘤細胞生長增殖、到成瘤生長期促進人小原位癌腫瘤細胞生長增殖、到發生致死性腫瘤，血清分子生物物質成分生物質譜——蛋白質組表達譜演進轉化-改變；人肝癌MHCC97-LH異質混合細胞裸小鼠移植瘤模型的編號血清LHn，n＝0d、7d、14d、21d、28d、35d，由成瘤潛伏期抑制人小原位癌腫瘤細胞生長增殖、到成瘤生長期促進人小原位癌腫瘤細胞生長增殖、到發生致死性腫瘤，血清分子生物物質成分生物質譜——蛋白質組表達譜演進轉化-改變。模擬分析揭示人類與脊椎動物機體組織或器官微環境演進轉化-改變，使最初發生、受到機體組織或器官微環境抑制的人類小原位癌細胞組織轉化-改變成為，適合在演進轉化-改變微環境中傳代增殖、具有生長增殖優勢的人類腫瘤細胞克隆小原位癌細胞組織；決定其是否能夠在機體組織或器官微環境中轉化-改變成為，具有生長增殖優勢人類腫瘤細胞克隆構成、主導腫瘤組織生長的人類腫瘤組織；調控人類腫瘤細胞克隆的生物表達性狀、與人類腫瘤組織生長，由人類與脊椎動物機體微環境演進轉化-改變的血清相關分子腫瘤生物物質成分生物質譜——蛋白質組表達譜表達的，重要綜合分子腫瘤生物調控機制。
3.3.2通過P3級細胞基因表達譜生物芯片檢測分析實驗室，應用人類基因表達檢測生物芯片分別檢測3.2.1/3.2.2/3.2.3/3.2.4，分別應用模擬人肝癌MHCC97-L細胞裸小鼠移植瘤模型、人肝癌MHCC97-H細胞裸小鼠移植瘤模型、人肝癌MHCC97-LH異質混合細胞裸小鼠移植瘤模型，不同生命時間進程0d、7d、14d、21d、28d、35d機體微環境土壤演進轉化-改變的編號培養基Ln-D/Hn-D/LHn-D，n＝0d、7d、14d、21d、28d、35d，分別不連續體外培養各自的人肝癌腫瘤細胞、分別連續體外培養各自的人肝癌腫瘤細胞的，與血清相關分子腫瘤生物物質成分生物質譜——蛋白質組表達譜調控相關的人類基因表達譜。綜合對比分析模擬人肝癌MHCC97-L細胞裸小鼠移植瘤模型發生腫瘤，由成瘤潛伏期抑制人小原位癌腫瘤細胞生長增殖、到成瘤生長期促進人小原位癌腫瘤細胞生長增殖、到發生致死性腫瘤不同生命時間進程6種體外培養人肝癌腫瘤細胞的，與演進轉化-改變的血清相關分子腫瘤生物物質成分生物質譜——蛋白質組表達譜調控相關的，演進轉化-改變的腫瘤相關人類基因表達譜；模擬人肝癌MHCC97-H細胞裸小鼠移植瘤模型發生腫瘤，由成瘤潛伏期抑制人小原位癌腫瘤細胞生長增殖、到成瘤生長期促進人小原位癌腫瘤細胞生長增殖、到發生致死性腫瘤不同生命時間進程6種體外培養人肝癌腫瘤細胞的，與演進轉化-改變的血清相關分子腫瘤生物物質成分生物質譜——蛋白質組表達譜調控相關的，演進轉化-改變的腫瘤相關人類基因表達譜；模擬人肝癌MHCC97-LH異質混合細胞裸小鼠移植瘤模型發生腫瘤，由成瘤潛伏期抑制人小原位癌腫瘤細胞生長增殖、到成瘤生長期促進人小原位癌腫瘤細胞生長增殖、到發生致死性腫瘤不同生命時間進程6種體外培養人肝癌腫瘤細胞的，與演進轉化-改變的血清相關分子腫瘤生物物質成分生物質譜——蛋白質組表達譜調控相關的，演進轉化-改變的腫瘤相關人類基因表達譜。模擬分析揭示人類與脊椎動物機體組織或器官微環境演進轉化-改變，使最初發生、受到機體組織或器官微環境抑制的人類小原位癌細胞組織轉化-改變成為，適合在演進轉化-改變微環境中傳代增殖、具有生長增殖優勢的人類腫瘤細胞克隆小原位癌細胞組織；決定其是否能夠在機體組織或器官微環境中轉化-改變成為，具有生長增殖優勢人類腫瘤細胞克隆構成、主導腫瘤組織生長的人類腫瘤組織；調控人類腫瘤細胞克隆的生物表達性狀、與人類腫瘤組織生長，由人類與脊椎動物機體微環境演進轉化-改變的血清相關分子腫瘤生物物質成分生物質譜——蛋白質組表達譜調控的，演進轉化-改變的腫瘤相關人類基因表達譜，重要綜合分子腫瘤生物應答機制。
4.相似動物腫瘤模型與方法采用中國科學院實驗生物學研究所1974年建立的大鼠肝細胞癌BERH-2細胞系，能夠應用免疫機制正常的動物Wistar大鼠實施，與上述1.2.3.相似的各項動物肝細胞癌腫瘤模型、動物腫瘤細胞體外培養實驗；實驗實施方法與上述1.2.3.相同。不再作贅述。能夠在相關動物腫瘤實驗方法證實動物腫瘤生物表達性狀，能夠被免疫機制正常的動物機體微環境演進轉化-改變調控；調控動物腫瘤細胞克隆生物表達性狀、與動物腫瘤組織生長；繼而會在動物機體發生出，對機體組織或器官造成致死性生物損傷的占位實體惡性腫瘤組織。是動物腫瘤生物發生機制。能夠用免疫機制正常的動物，通過實施3.相似的實驗揭示動物機體微環境演進轉化-改變的血清相關分子腫瘤生物物質成分生物質譜——蛋白質組表達譜表達的，重要綜合分子腫瘤生物調控機制；由動物機體微環境演進轉化-改變的血清相關分子腫瘤生物物質成分生物質譜——蛋白質組表達譜調控的，演進轉化-改變的腫瘤相關動物基因表達譜，重要綜合分子腫瘤生物應答機制。
5.綜合科學研究討論5.1.1通過實施2.模擬人類小原位癌—腫瘤與機體微環境演進轉化-改變生物調控、生物應答動物模型實驗，與4.相似動物腫瘤模型實驗，用可信服的科學實驗結果，從不同的科學研究層面證實人類與脊椎動物腫瘤生物表達性狀能夠被機體微環境演進轉化-改變調控；在人類與脊椎動物機體發生的異質小原位癌細胞組織，與異質腫瘤細胞克隆腫瘤病理分化的高低、體外細胞培養傳代增殖速度的快慢，不是決定異質人類與脊椎動物小原位癌細胞組織、異質人類與脊椎動物腫瘤細胞克隆能夠在機體微環境中，轉化-改變成為具有生長增殖優勢人類與脊椎動物腫瘤細胞克隆、構成主導腫瘤組織生長的人類與脊椎動物腫瘤組織的，主要人類與脊椎動物腫瘤發生因素；而是主要取決于機體組織或器官微環境演進轉化-改變，對異質人類與脊椎動物小原位癌細胞組織、異質人類與脊椎動物腫瘤細胞克隆的選擇，調控異質人類腫瘤細胞克隆生物表達性狀、與異質人類腫瘤組織生長；繼而會在人類與脊椎動物機體發生出，對機體組織或器官造成致死性生物損傷的占位實體惡性腫瘤組織。是人類與脊椎動物腫瘤主要生物發生機制。通過實施3.模擬人類小原位癌—腫瘤與機體微環境演進轉化-改變生物調控、生物應答體外培養人類腫瘤細胞模型實驗，與4.相似體外培養動物腫瘤細胞模型實驗模擬分析揭示人類與脊椎動物機體組織或器官微環境演進轉化-改變，使最初發生、受到機體組織或器官微環境抑制的人類與脊椎動物小原位癌細胞組織轉化-改變成為，適合在演進轉化-改變微環境中傳代增殖、具有生長增殖優勢的人類與脊椎動物腫瘤細胞克隆小原位癌細胞組織；決定其是否能夠在機體組織或器官微環境中轉化-改變成為，具有生長增殖優勢人類與脊椎動物腫瘤細胞克隆構成、主導腫瘤組織生長的人類與脊椎動物腫瘤組織；調控人類與脊椎動物腫瘤細胞克隆的生物表達性狀、人類與脊椎動物腫瘤組織生長，由人類與脊椎動物機體微環境演進轉化-改變的血清相關分子腫瘤生物物質成分生物質譜——蛋白質組表達譜表達的，重要綜合分子腫瘤生物調控機制；由人類與脊椎動物機體微環境演進轉化-改變的血清相關分子腫瘤生物物質成分生物質譜——蛋白質組表達譜調控的，演進轉化-改變的腫瘤相關人類與脊椎動物基因表達譜，重要綜合分子腫瘤生物應答機制。創造揭示某些種人類與脊椎動物實體惡性腫瘤與機體微環境演進轉化-改變綜合分子腫瘤生物調控機制、綜合分子腫瘤生物應答機制、綜合分子腫瘤生物預防治療機制方法及藥物的，人類、脊椎動物腫瘤模型與方法，綜合人類、脊椎動物腫瘤模型科學研究實驗平臺，在理論與科學研究方法上，不存在不可實施的現代生物科學技術難點。
5.1.2能夠為現代分子腫瘤生物檢測科學技術，今后可以有效檢測出在當今人類群體中臨床自然發病率最高的肺癌、胃癌、大腸癌、乳腺癌、肝癌……等，某些種傳代增殖106~107腫瘤細胞、尚不能對腫瘤發生位置做出精確定位的小原位癌細胞組織，監測小原位癌細胞組織是否能夠轉化成為致死性占位實體惡性腫瘤；提供有效檢測、監測小原位癌細胞組織的相關分子腫瘤生物物質成分生物質譜——蛋白質組表達譜靶標；設計制造能夠有效檢測、監測小原位癌細胞組織的相應靶標的生物芯片，應用于人類群體可能發生的小原位癌細胞組織的分子腫瘤生物檢測、監測。能夠為現代醫學今后可能有效預防在當今人類群體中臨床自然發病率最高的肺癌、胃癌、大腸癌、乳腺癌、肝癌……等，某些種傳代增殖106~107腫瘤細胞、尚不能對腫瘤發生位置做出精確定位的小原位癌細胞組織，轉化成為致死性占位實體惡性腫瘤；今后可能有效長期緩解治療某些種已經發生腫瘤轉移的中/晚期致死性實體惡性腫瘤；提供能夠拮抗-抑制腫瘤細胞組織生長增殖的相關分子腫瘤生物物質成分生物質譜——蛋白質組表達譜靶標、腫瘤相關人類基因表達譜靶標；依照相應的靶標，設計制造能夠有效拮抗-抑制腫瘤細胞組織生長增殖的藥物，應用于臨床生物預防癌癥、臨床生物抗腫瘤治療。在腫瘤基礎醫學科學研究方面、臨床醫學科學研究方面、醫藥學科學研究方面，提供綜合科學研究研究方法。
權利要求
1.一種腫瘤模型與方法，其特征在于制取機體生長出動物腫瘤(1)動物(2)血液制品(3)、機體沒有生長動物腫瘤(1)同種動物(2)血液制品(4)，分別配制含有血液制品(3)細胞培養基(5)、含有血液制品(4)細胞培養基(5)分別培養動物腫瘤(1)細胞。
2.一種腫瘤模型與方法，其特征在于制取機體生長出動物腫瘤(1)動物(2)血液制品(3)、機體沒有生長動物腫瘤(1)同種動物(2)血液制品(4)，分別配制含有血液制品(3)細胞培養基(5)、含有血液制品(4)細胞培養基(5)分別培養動物腫瘤(1)細胞，通過分別對血液制品(3)、血液制品(4)。培養動物腫瘤(1)細胞實施人類基因表達檢測(6)對比分析，揭示人類腫瘤發生機制、治療機制、方法及藥物。
3.一種腫瘤模型與方法，其特征在于制取機體生長出動物腫瘤(1)動物(2)的血液制品(3)、機體沒有生長動物腫瘤(1)同種動物(2)血液制品(4)，通過分別對血液制品(3)、血液制品(4)實施生物質譜檢測(7)對比分析，揭示人類腫瘤發生機制、治療機制、方法及藥物。
4.根據權利要求1至3中所述的腫瘤模型與方法，其特征在于動物(2)是免疫機制有缺陷的動物(8)。
5.根據權利要求1至4中所述的腫瘤模型與方法，其特征在于動物(2)是免疫機制有缺陷的動物裸小鼠(9)。
6.根據權利要求1至5中所述的腫瘤模型與方法，其特征在于動物(2)血液制品(3)、動物(2)血液制品(4)是動物血清(10)。
7.根據權利要求1至6中所述的腫瘤模型與方法，其特征在于動物腫瘤(1)是人類腫瘤(11)、培養動物腫瘤(1)細胞是培養人類腫瘤(11)細胞。
8.根據權利要求1至6中所述的腫瘤模型與方法，其特征在于動物腫瘤(1)是人類肺癌(12)、培養動物腫瘤(1)細胞是培養人類肺癌(12)細胞。
9.根據權利要求1至6中所述的腫瘤模型與方法，其特征在于動物腫瘤(1)是人類胃癌(13)、培養動物腫瘤(1)細胞是培養人類胃癌(13)細胞。
10.根據權利要求1至6中所述的腫瘤模型與方法，其特征在于動物腫瘤(1)是人類乳腺癌(14)、培養動物腫瘤(1)細胞是培養人類乳腺癌(14)細胞。
11.根據權利要求1至6中所述的腫瘤模型與方法，其特征在于動物腫瘤(1)是人類前列腺癌(15)、培養動物腫瘤(1)細胞是培養人類前列腺癌(15)細胞。
12.根據權利要求1至6中所述的腫瘤模型與方法，其特征在于動物腫瘤(1)是人類大腸癌(16)、培養動物腫瘤(1)細胞是培養人類大腸癌(16)細胞。
全文摘要
本發明名稱為腫瘤模型與方法，涉及生命科學領域、及醫藥領域。提供了一個能夠揭示人類實體惡性腫瘤與機體組織或器官微環境演進轉化－改變綜合分子腫瘤生物調控機制、綜合分子腫瘤生物應答機制、綜合分子腫瘤生物預防治療機制方法及藥物的，腫瘤模型與方法，綜合人類腫瘤模型科學研究實驗平臺。能夠揭示檢測、監測人類小原位癌細胞組織的，人類相關分子腫瘤蛋白質組表達譜靶標；揭示拮抗－抑制人類腫瘤細胞組織生長增殖的，人類相關分子腫瘤蛋白質組表達譜靶標、腫瘤相關人類基因表達譜靶標。
文檔編號C12N5/08GK1857739SQ20061005756
公開日2006年11月8日 申請日期2006年3月15日 優先權日2006年3月15日
發明者葉新新 申請人:葉新新