專利名稱：益生康的制作方法
技術領域：
本發明涉及用于改善禽畜腸道微生態平衡，增強禽畜免疫力和提高飼料利用率的益生菌制成的飼料添加劑及制備這種添加劑的工藝。
背景技術：
已有的益生菌的研究也只限于對單個菌種的研究，沒有針對益生菌群相互促進、共生，協調促進改善禽畜腸道免疫力，也沒有協調促進改善禽畜腸道免疫力的益生菌群飼料添加劑及工藝。
發明內容
本發明就是要解決如何利用益生菌群協調促進改善禽畜腸道免疫力的問題，主要是利用從動物體內分離出具有生理作用的四種益生菌菌株經發酵分離菌體、干燥經合理組方混合成益生菌飼料添加劑，同時提供一種益生菌飼料添加劑的的制造工藝。
本發明的益生菌飼料添加劑，按重量稱取蠟樣芽胞桿菌菌粉5-15份，干酪乳桿菌菌粉5-15份，屎腸球菌5-15份，釀酒酵母粉2000-3000份，混合而成。還可以外加玉米粉或麥麩粉10000份-20000份。按以上配方制成的益生菌添加劑，每克含有益生菌數200-500億/g。添加劑與飼料比為1∶1000。即每kg益生菌添加劑可配制1000-2000kg飼料(0.2-0.5億/g)。
本發明的益生菌飼料添加劑的的制造工藝。按重量稱取蠟樣芽胞桿菌菌粉5-15份，干酪乳桿菌菌粉5-15份，屎腸球菌5-15份，釀酒酵母粉2000-3000份，玉米粉或麥麩粉10000-20000份。按以上配方制成的益生菌添加劑。每克含有益生菌數200-500億/g。添加劑與飼料比為1∶1000。即每kg益生康添加劑可配制1000-2000kg飼料(0.2-0.5億/g)。其中，單一菌粉制備工藝如下(1)蠟樣芽胞桿菌菌粉的制備蠟樣芽胞桿菌菌株種子液接入已經滅菌后的含有重量5-10％豆芽汁、0.2-0.5％葡萄糖、0.5-1.5％蛋白胨培養基中經32℃-36℃有氧發酵后，離心分離出的菌體加入2-4倍重量的碳酸鈣或麥麩，混合制備成濕顆粒，在40℃-55℃條件下干燥2-4小時后即可得到蠟樣芽胞桿菌菌粉；(2)干酪乳桿菌菌粉的制備干酪乳桿菌菌株種子液接入已經滅菌后的含有重量1％-3％葡萄糖、0.5-1.5％蛋白胨、0.5-1％酵母浸膏培養基中經32℃-36℃厭氧發酵后，離心分離出的菌體，將占保護液重量25-40％的菌體加入含有重量3-5％的谷氨酸鈉和5-15％多脂奶粉凍干保護液中混合冷凍干燥后即可得到干酪乳桿菌菌粉；(3)屎腸球菌菌粉的制備屎腸球菌菌株種子液接入已經滅菌后的含有1％-3％葡萄糖、0.5-1.5％蛋白胨、0.5-1％酵母浸膏、0.1-0.5％Na2HPO4、0.1-0.5％KH2PO4的培養液中經32℃-38℃厭氧發酵后，離心分離出的菌體，將占保護液重量25-40％的菌體加入含有3-5％的谷氨酸鈉、5-15％多脂奶粉凍干保護液中混合冷凍干燥后即可得到屎腸球菌菌粉；(4)釀酒酵母菌菌粉的制備釀酒酵母菌菌株種子液接入已經滅菌后的含有重量5-10％豆芽汁、0.2-0.5％葡萄糖、0.5-1.5％蛋白胨培養液基中經32℃-36℃有氧發酵后，離心分離出的菌體，菌體加入2-4倍重量的碳酸鈣或麥麩，混合制備成濕顆粒，在40℃-55℃條件下干燥2-4小時后即可得到釀酒酵母菌菌粉。
本發明的優點4種菌分別定植于腸道上中下部位，可以抑制整個腸道中的有害菌的繁殖和入侵，清除腸道各部有害物質，抵抗感染，維護消化道菌群平衡。各菌種在腸道不同部位組成一個在不同條件下都能生長，作用快而持久的聯合菌群，在整個腸道粘膜表面形成一道生物屏障，防止致病菌條件致病菌的生長繁殖，清除內毒素。4種菌聯合使用，各菌種的生長特點和功能不同，有共性也有特異性，多菌種協同作用可以使其發揮到最佳，最大限度適宜各類宿主動物。本發明所述的四種益生菌已通過毒理學和藥理學試驗研究，證明每一菌株都是安全和無毒副作用的。
我們通過對蠟樣芽胞桿菌和干酪乳桿菌及屎腸球菌共生關系進行研究如表1、表2、表3所示，結果表明蠟樣芽胞桿菌在兩種不同培養液中，一定時間條件下均對干酪乳桿菌和屎腸球菌具有促進生長作用。干酪乳桿菌和屎腸球菌兩種菌混合培養時兩菌株間相互影響較小。
通過合作單位協作我們對本發明所涉及的益生菌菌株單獨或聯合使用，對種雞腸內菌群、糞便pH、有害物質氨含量和硫化氫含量、含水量和生產性能進行研究，見表4、表5、表6。結果表明通過對種雞飼喂5組不同益生菌制劑的動物學試驗觀察，在雞腸內有毒物(硫化物、氨)和有機酸(乳酸、乙酸、丁酸、異丁酸)雞腸內有益菌群(雙歧桿菌、乳桿菌)及有害菌群葡萄球菌、腸球菌、腸桿菌、梭菌)、腸內容物水分含量等參數進行比較，結果顯示采用4種菌混合制劑比干酪乳桿菌和蠟樣芽孢桿菌兩菌混合制劑及干酪乳桿菌或蠟樣芽孢桿菌單一菌制劑效果好。而對蛋雞的生產性能方面比較，四菌混合制劑要優于兩菌混合制劑和單一菌制劑。4組菌制劑與對照柱之間無顯著插在生產和孵化性能方面無顯著差異。
表4 試驗第30天種雞腸內容物理化指標狀況(X±S，n＝6)
注試驗分為5組，每組100只雞，分開飼養。A、B、C、D、為實驗組，E組為對照組。在試驗第30天分別測定各項指標。A組在飼料中添加0.4億/g的蠟樣芽胞桿菌菌粉；B組在飼料中添加0.4億/g的干酪乳桿菌菌粉；C組在飼料中添加分別含有0.2億/g的蠟樣芽胞桿菌菌粉和干酪乳桿菌菌粉；D組在飼料中添加分別含有0.1億/g的蠟樣芽胞桿菌菌粉、干酪乳桿菌菌粉、屎腸球菌菌粉和釀酒酵母菌粉；E組飼喂常規飼料。
表5 試驗第30天種雞腸內菌群狀況
表6 試驗第30天后種雞生產性能性能狀況
我們分別對蠟樣芽孢桿菌、干酪乳桿菌及兩種菌混合制劑進行小鼠免疫功能研究，研究結果表明干酪乳桿菌與蠟樣芽孢桿菌的混合制劑的免疫調節作用指標分別高于干酪乳桿菌和蠟樣芽孢桿菌的單一制劑。結果見表7。
表7 幾種益生菌制劑對小鼠免疫功能的影響
注試驗分為5組，每組10只BALB/c小鼠，口服灌胃，分組給藥。A、B、C、D、為實驗組，E組為對照組。在試驗第15天分別測定各項指標。A組相當于灌胃10億/kg的蠟樣芽胞桿菌菌粉；B組相當于灌胃10億/kg的干酪乳桿菌菌粉；C組相當于灌胃分別含5億/kg的蠟樣芽胞桿菌菌粉和干酪乳桿菌菌粉；D組相當于灌胃分別含2.5/kg的蠟樣芽胞桿菌菌粉、干酪乳桿菌菌粉、屎腸球菌菌粉和釀酒酵母菌粉；E組灌胃10ml/kg生理鹽水。
實施例1 蠟樣芽胞桿菌菌粉6g，干酪乳桿菌菌粉10g，屎腸球菌14g，釀酒酵母粉3000g，玉米粉或麥麩粉15kg。按以上配方制成的益生菌添加劑，每克含有益生菌數200-500億/g。添加劑與飼料比為1∶1000。即每kg益生康添加劑可配制1000-2000kg飼料(0.2-0.5億/g)。用含此益生菌飼料添加劑喂養仔豬，可提高增重20.5％，提高飼料利用率9.5％，仔豬日增重較對照提高19.5％。制備工藝如下(1)蠟樣芽胞桿菌菌粉的制備蠟樣芽胞桿菌菌株種子液接入已經滅菌后的含有重量10％豆芽汁、0.4％葡萄糖、1％蛋白胨培養基中經32℃-36℃有氧發酵后，離心分離出的菌體加入重4倍的碳酸鈣或麥麩，混合制備成濕顆粒，在40℃-55℃條件下干燥4小時后即可得到蠟樣芽胞桿菌菌粉。
(2)干酪乳桿菌菌粉的制備干酪乳桿菌菌株種子液接入已經滅菌后的含有重量1.5％葡萄糖、1.5％蛋白胨、1％酵母浸膏培養基中經32℃-36℃厭氧發酵后，離心分離出的菌體，將占保護液重量40％的菌體加入含有重量5％的谷氨酸鈉和15％多脂奶粉凍干保護液中，混合冷凍干燥后即可得到干酪乳桿菌菌粉。
(3)屎腸球菌菌粉的制備屎腸球菌菌株種子液接入已經滅菌后的含有重量1％葡萄糖、0.5％蛋白胨、0.5％酵母浸膏、0.1％Na2HPO4、0.1％KH2PO4的培養液中，經32℃-38℃厭氧發酵后，離心分離出的菌體，將占保護液重量40％的菌體加入含有5％的谷氨酸鈉10％多脂奶粉凍干保護液中混合冷凍干燥后即可得到屎腸球菌菌粉。
(4)釀酒酵母菌菌粉的制備釀酒酵母菌菌株種子液接入已經滅菌后的含有重量10％豆芽汁、0.2％葡萄糖、0.5％蛋白胨培養液基中經32℃-36℃有氧發酵后，離心分離出的菌體，菌體加入2倍重的碳酸鈣或麥麩，混合制備成濕顆粒，在40℃-55℃條件下干燥2小時后即可得到釀酒酵母菌菌粉。
實施例2 蠟樣芽胞桿菌菌粉10g，干酪乳桿菌菌粉5g，屎腸球菌5g，釀酒酵母粉2500g，乳糖或葡萄糖10kg。按以上配方制成的益生菌添加劑，每克含有益生菌數200-500億/g。以1∶1000比例添加到飲用水中，直接供1-30日齡肉雞飲用。結果試驗組比對照組增重10.4％，生長速度提高5.12％，飼料消耗降低4.87％。制備工藝如下(1)蠟樣芽胞桿菌菌粉的制備蠟樣芽胞桿菌菌株種子液接入已經滅菌后的含有重量8％豆芽汁、0.2％葡萄糖、0.5％蛋白胨培養基中經32℃-36℃有氧發酵后，離心分離出的菌體加入2倍重量的碳酸鈣或麥麩，混合制備成濕顆粒，在40℃-55℃條件下干燥2小時后即可得到蠟樣芽胞桿菌菌粉；(2)干酪乳桿菌菌粉的制備干酪乳桿菌菌株種子液接入已經滅菌后的含有重量1％葡萄糖、0.5％蛋白胨、0.5％酵母浸膏培養基中經32℃-36℃厭氧發酵后，離心分離出的菌體，將占保護液重量25％的菌體加入含有重量3％的谷氨酸鈉和5％多脂奶粉凍干保護液中混合冷凍干燥后即可得到干酪乳桿菌菌粉；(3)屎腸球菌菌粉的制備屎腸球菌菌株種子液接入已經滅菌后的含有2％葡萄糖、1％蛋白胨、0.8％酵母浸膏、0.3％Na2HPO4、0.3％KH2PO4的培養液中經32℃-38℃厭氧發酵后，離心分離出的菌體，將占保護液重量25％的菌體加入含有3％的谷氨酸鈉、5％多脂奶粉凍干保護液中混合冷凍干燥后即可得到屎腸球菌菌粉；(4)釀酒酵母菌菌粉的制備釀酒酵母菌菌株種子液接入已經滅菌后的含有重量5％豆芽汁、0.35％葡萄糖、1％蛋白胨培養液基中經32℃-36℃有氧發酵后，離心分離出的菌體，菌體加入2倍重量的碳酸鈣或麥麩，混合制備成濕顆粒，在40℃-55℃條件下干燥2小時后即可得到釀酒酵母菌菌粉。
實施例3 蠟樣芽胞桿菌菌粉14g，干酪乳桿菌菌粉10g，屎腸球菌10g，釀酒酵母粉3000g，玉米粉或麥麩粉17kg。按以上配方制成的益生菌添加劑，每克含有益生菌數20-50億/g。直接作為精飼料喂養肉犢牛，經過40天的喂養犢牛日增中提高25.7％，飼料利用率提高23.1％，發病率下降21.7％。制備工藝如下(1)蠟樣芽胞桿菌菌粉的制備蠟樣芽胞桿菌菌株種子液接入已經滅菌后的含有重量5％豆芽汁、0.35％葡萄糖、1.5％蛋白胨培養基中經32℃-36℃有氧發酵后，離心分離出的菌體加入3倍重量的碳酸鈣或麥麩，混合制備成濕顆粒，在40℃-55℃條件下干燥3小時后即可得到蠟樣芽胞桿菌菌粉；(2)干酪乳桿菌菌粉的制備干酪乳桿菌菌株種子液接入已經滅菌后的含有重量2％葡萄糖、1％蛋白胨、0.8％酵母浸膏培養基中經32℃-36℃厭氧發酵后，離心分離出的菌體，將占保護液重量30％的菌體加入含有重量4％的谷氨酸鈉和10％多脂奶粉凍干保護液中混合冷凍干燥后即可得到干酪乳桿菌菌粉；
(3)屎腸球菌菌粉的制備屎腸球菌菌株種子液接入已經滅菌后的含有2％葡萄糖、1％蛋白胨、0.8％酵母浸膏、0.3％Na2HPO4、0.3％KH2PO4的培養液中經32℃-38℃厭氧發酵后，離心分離出的菌體，將占保護液重量25-40％的菌體加入含有4％的谷氨酸鈉、10％多脂奶粉凍干保護液中混合冷凍干燥后即可得到屎腸球菌菌粉；(4)釀酒酵母菌菌粉的制備釀酒酵母菌菌株種子液接入已經滅菌后的含有重量8％豆芽汁、0.35％葡萄糖、1％蛋白胨培養液基中經32℃-36℃有氧發酵后，離心分離出的菌體，菌體加入3倍重量的碳酸鈣或麥麩，混合制備成濕顆粒，在40℃-55℃條件下干燥3小時后即可得到釀酒酵母菌菌粉。
權利要求
1.一種益生康飼料添加劑，其特征在于含有按重量配比的蠟樣芽胞桿菌粉5-15份，干酪乳桿菌粉5-15份，屎腸球菌粉5-15份，釀酒酵母菌粉2000-3000份。
2.如權利要求1所說的飼料添加劑，其特征在于還加有玉米粉或麥麩粉10000-20000份。
3.一種用于改善禽畜腸道免疫力的益生康飼料添加劑生產工藝，按重量配比取蠟樣芽胞桿菌粉5-15份、干酪乳桿菌粉5-15份、屎腸球菌粉5-15份、釀酒酵母菌粉2000-3000份，菌粉制備工藝如下(1)蠟樣芽胞桿菌菌粉的制備蠟樣芽胞桿菌菌株種子液接入已經滅菌后的含有重量5-10％豆芽汁、0.2-0.5％葡萄糖、0.5-1.5％蛋白胨培養基中經32℃-36℃有氧發酵后，離心分離出的菌體加入2-4倍重量的碳酸鈣或麥麩，混合制備成濕顆粒，在40℃-55℃條件下干燥2-4小時后即可得到蠟樣芽胞桿菌菌粉；(2)干酪乳桿菌菌粉的制備干酪乳桿菌菌株種子液接入已經滅菌后的含有重量1％-3％葡萄糖、0.5-1.5％蛋白胨、0.5-1％酵母浸膏培養基中經32℃-36℃厭氧發酵后，離心分離出的菌體，將占保護液重量25-40％的菌體加入含有重量3-5％的谷氨酸鈉和5-15％多脂奶粉凍干保護液中混合冷凍干燥后即可得到干酪乳桿菌菌粉；(3)屎腸球菌菌粉的制備屎腸球菌菌株種子液接入已經滅菌后的含有1％-3％葡萄糖、0.5-1.5％蛋白胨、0.5-1％酵母浸膏、0.1-0.5％Na2HPO4、0.1-0.5％KH2PO4的培養液中經32℃-38℃厭氧發酵后，離心分離出的菌體，將占保護液重量25-40％的菌體加入含有3-5％的谷氨酸鈉、5-15％多脂奶粉凍干保護液中混合冷凍干燥后即可得到屎腸球菌菌粉；(4)釀酒酵母菌菌粉的制備釀酒酵母菌菌株種子液接入已經滅菌后的含有重量5-10％豆芽汁、0.2-0.5％葡萄糖、0.5-1.5％蛋白胨培養液基中經32℃-36℃有氧發酵后，離心分離出的菌體，菌體加入2-4倍重量的碳酸鈣或麥麩，混合制備成濕顆粒，在40℃-55℃條件下干燥2-4小時后即可得到釀酒酵母菌菌粉。
全文摘要
用于改善禽畜腸道免疫力的益生康飼料添加劑及工藝，按重量配比的蠟樣芽胞桿菌粉5－15份，干酪乳桿菌粉5－15份，屎腸球菌粉5－15份，釀酒酵母菌粉2000－3000份混合而成；上述4種菌經30－45℃分別發酵，24hr－36hr，離心分離菌體，50℃下干燥或冷凍干燥獲得干燥菌粉，按比例添加到玉米粉或麥麩粉中，喂養禽畜能調節腸內菌群，提高飼料利用率，增重效果明顯，增強動物免疫力。
文檔編號C12R1/225GK101028038SQ20061004595
公開日2007年9月5日 申請日期2006年3月1日 優先權日2006年3月1日
發明者康白, 袁杰利 申請人:大連森佰澳科技有限公司