專(zhuān)利名稱(chēng)：營(yíng)養(yǎng)血液培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種營(yíng)養(yǎng)血液培養(yǎng)基，其主要成分是牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂粉、硫酸鎂、對(duì)氨苯甲酸、無(wú)菌脫纖維O型人血(或無(wú)菌脫纖維羊血或兔血)、小牛血清經(jīng)一定的工藝制成。用以供一般標(biāo)本和已使用過(guò)抗生素及磺胺藥的病人標(biāo)本分離培養(yǎng)用。利用培養(yǎng)試驗(yàn)鑒別細(xì)菌的種類(lèi)，其關(guān)鍵在于準(zhǔn)確、快速、簡(jiǎn)便。而細(xì)菌接種分離培養(yǎng)好壞，會(huì)直接影響檢測(cè)結(jié)果。往往需要將樣本通過(guò)不同方法進(jìn)行分離培養(yǎng)，來(lái)進(jìn)行細(xì)菌種類(lèi)的鑒別，這是目前微生物實(shí)驗(yàn)室最常用的手段。由于目前培養(yǎng)條件的應(yīng)用范圍所限，供一般標(biāo)本的分離培養(yǎng)用的培養(yǎng)基沒(méi)有特效的，存在所分離培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)不足、培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)、易出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性等問(wèn)題。隨著生物研究的進(jìn)展，國(guó)內(nèi)外對(duì)細(xì)菌鑒別的增菌培養(yǎng)基研究也在不斷的發(fā)展中。生物工作者一直希望能有一種能克服上述不足的分離培養(yǎng)的培養(yǎng)基----營(yíng)養(yǎng)血液培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
本發(fā)明的目的在于提供一種能克服已有鑒別培養(yǎng)基不足的營(yíng)養(yǎng)血液培養(yǎng)基。與其它同類(lèi)培養(yǎng)基相比具備下列特點(diǎn)所需接種量小，少量細(xì)菌即可迅速繁殖，在通常室溫下或37℃培養(yǎng)5-6小時(shí)即可觀察結(jié)果；不易出現(xiàn)假陽(yáng)性和假陰性；能破壞標(biāo)本中存在的抑菌物質(zhì)，使細(xì)菌生長(zhǎng)不受抑制。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的要點(diǎn)在于選擇合適的組分，并進(jìn)行合理混配，經(jīng)加溫、溶解、混合、冷卻、分裝、高溫滅菌等工藝而成一種營(yíng)養(yǎng)血液培養(yǎng)基。
本發(fā)明選擇的配方如下(組分及其重量百分比％)牛肉膏(0.3-0.5)、蛋白胨(1.0-1.5)、氯化鈉(0.4-0.6)、瓊脂粉(2.1-2.3)、49.3％硫酸鎂6-8ml、0.5％對(duì)氨苯甲酸6-8ml、無(wú)菌脫纖維O型人血(或無(wú)菌脫纖維羊血或兔血)6-8ml、小牛血清6-8ml、蒸餾水加至100ml。
本培養(yǎng)基含有豐富的營(yíng)養(yǎng)成分，如牛肉膏、蛋白胨、小牛血清、血液是培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)和支持成分，對(duì)觀察鏈球菌，葡萄球菌的溶血比較滿(mǎn)意；分離腦膜炎球菌及嗜血桿菌屬好。氯化鈉用于調(diào)整滲透壓；磷酸二氫鉀用于調(diào)節(jié)pH。。標(biāo)本接種后即計(jì)算時(shí)間，在通常室溫下或37℃培養(yǎng)，培養(yǎng)12小時(shí)后，即用劃線(xiàn)法移種到選擇性培養(yǎng)基上以分離致病菌。加入血液時(shí)溫度必須適宜，否則不利于與瓊脂混勻及觀察溶血情況。
本發(fā)明產(chǎn)品的制備方法是1)、將牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂粉、硫酸鎂、對(duì)氨苯甲酸、蒸餾水置于三角燒瓶?jī)?nèi)，混合并使液體浸濕瓊脂粉；2)、加熱溶解，趁熱矯正pH至7.4，以絨布過(guò)濾，分裝于試管或燒瓶?jī)?nèi)，后置于壓力蒸氣滅菌器內(nèi)，以1.05kg30分鐘；3)、取出后冷至50℃左右，以無(wú)菌手續(xù)加入無(wú)菌脫纖維O型人血(或無(wú)菌脫纖維羊血或兔血)和小牛血清，輕輕搖勻，傾注平板.凝固后，抽樣于37℃培養(yǎng)18~24小時(shí)，如無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，冷藏備用。
本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)(1)所需接種量小，培養(yǎng)時(shí)間短，少量細(xì)菌即可迅速繁殖，在通常室溫下或37℃培養(yǎng)8-12小時(shí)即可觀察結(jié)果；(2)不易出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性；(3)能破壞病人標(biāo)本中存在的抗生素及磺胺藥的抑菌作用。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明按照下表所列數(shù)據(jù)(重量百分比％)及其所述步驟進(jìn)行配置配方一牛肉膏 0.3-0.5蛋白胨 1.0-1.5氯化鈉 0.4-0.6瓊脂粉 2.1-2.3硫酸鎂(49.3％) 6-8ml對(duì)氨苯甲酸(0.5％)6-8ml無(wú)菌脫纖維O型人血(或無(wú)菌脫纖維羊血或兔血)6-8ml小牛血清 6-8ml蒸餾水 加至100ml
配方二牛肉膏 0.3-0.4蛋白胨 1.0-1.4氯化鈉 0.4-0.5瓊脂粉 2.1-2.2硫酸鎂(49.3％) 6-7ml對(duì)氨苯甲酸(0.5％)6-7ml無(wú)菌脫纖維O型人血(或無(wú)菌脫纖維羊血或兔血)6-7ml小牛血清 6-7ml蒸餾水 加至100ml
配方三牛肉膏 0.4-0.5蛋白胨 1.2-1.5氯化鈉 0.5-0.6瓊脂粉 2.2-2.3硫酸鎂(49.3％) 7-8ml對(duì)氨苯甲酸(0.5％)7-8ml無(wú)菌脫纖維O型人血(或無(wú)菌脫纖維羊血或兔血)7-8ml小牛血清 6-8ml蒸餾水 加至100m1
配方四牛肉膏 0.35-0.45蛋白胨 1.1-1.4氯化鈉 0.5-0.55瓊脂粉 2.2-2.3硫酸鎂(49.3％) 6.5-7.5ml對(duì)氨苯甲酸(0.5％)6.5-7.5ml無(wú)菌脫纖維O型人血(或無(wú)菌脫纖維羊血或兔血)6.5-7.5ml小牛血清 6.5-7.5ml蒸餾水 加至100ml
權(quán)利要求
1.一種營(yíng)養(yǎng)血液培養(yǎng)基，是以牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂粉、硫酸鎂、對(duì)氨苯甲酸、無(wú)菌脫纖維O型人血(或無(wú)菌脫纖維羊血或兔血)、小牛血清為主要成分；其特征在于具有如下配方(組分及其重量百分比％)牛肉膏(0.3-0.5)、蛋白胨(1.0-1.5)、氯化鈉(0.4-0.6)、瓊脂粉(2.1-2.3)、49.3％硫酸鎂6-8ml、0.5％對(duì)氨苯甲酸6-8ml、無(wú)菌脫纖維O型人血(或無(wú)菌脫纖維羊血或兔血)6-8ml、小牛血清6-8ml、蒸餾水加至100ml。
2.一種權(quán)利要求1所述營(yíng)養(yǎng)血液培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于具有如下的步驟1)、將牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂粉、硫酸鎂、對(duì)氨苯甲酸、蒸餾水置于三角燒瓶?jī)?nèi)，混合并使液體浸濕瓊脂粉；2)、加熱溶解，趁熱矯正pH至7.4，以絨布過(guò)濾，分裝于試管或燒瓶?jī)?nèi)，后置于壓力蒸氣滅菌器內(nèi)，以1.05kg30分鐘；3)、取出后冷至50℃左右，以無(wú)菌手續(xù)加入無(wú)菌脫纖維O型人血(或無(wú)菌脫纖維羊血或兔血)和小牛血清，輕輕搖勻，傾注平板.凝固后，抽樣于37℃培養(yǎng)18~24小時(shí)，如無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，冷藏備用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種營(yíng)養(yǎng)血液培養(yǎng)基，其主要成分是牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂粉、硫酸鎂、對(duì)氨苯甲酸、無(wú)菌脫纖維O型人血(或無(wú)菌脫纖維羊血或兔血)、小牛血清經(jīng)一定的工藝制成。用以供一般標(biāo)本和已使用過(guò)抗生素及磺胺藥的病人標(biāo)本分離培養(yǎng)用。本培養(yǎng)基含有豐富的營(yíng)養(yǎng)成分，如牛肉膏、蛋白胨、小牛血清、血液是培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)和支持成分，對(duì)觀察鏈球菌，葡萄球菌的溶血比較滿(mǎn)意；分離腦膜炎球菌及嗜血桿菌屬好。氯化鈉用于調(diào)整滲透壓；磷酸二氫鉀用于調(diào)節(jié)pH。標(biāo)本接種后即計(jì)算時(shí)間，在通常室溫下或37℃培養(yǎng)，培養(yǎng)12小時(shí)后，即用劃線(xiàn)法移種到選擇性培養(yǎng)基上以分離致病菌。加入血液時(shí)溫度必須適宜，否則不利于與瓊脂混勻及觀察溶血情況。本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)(1)所需接種量小，培養(yǎng)時(shí)間短，少量細(xì)菌即可迅速繁殖，在通常室溫下或37℃培養(yǎng)8－12小時(shí)即可觀察結(jié)果；(2)不易出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性；(3)能破壞病人標(biāo)本中存在的抗生素及磺胺藥的抑菌作用。
文檔編號(hào)C12N1/20GK101089190SQ200610044869
公開(kāi)日2007年12月19日 申請(qǐng)日期2006年6月16日 優(yōu)先權(quán)日2006年6月16日
發(fā)明者闞方琦, 曲奕 申請(qǐng)人:闞方琦, 曲奕