一種發(fā)酵生產(chǎn)2,3－丁二醇的方法

專利名稱：一種發(fā)酵生產(chǎn)2,3－丁二醇的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及2，3-丁二醇的生產(chǎn)方法，特別涉及一種采用粘質(zhì)沙雷氏菌(Serratiamarcescens)發(fā)酵生產(chǎn)2，3-丁二醇的方法。
背景技術(shù)：
2，3-丁二醇(2，3-butanediol，簡稱BD，下同)廣泛應(yīng)用于化工、食品以及航空航天等各個領(lǐng)域。其熱值27200kJ/kg，同乙醇(29100kJ/kg)接近，可用作燃料，還可用來制備聚合物、油墨、香水、防凍劑、香熏劑、增濕劑、炸藥以及藥物的手性載體等。
它脫水成甲乙酮，可用作樹脂、油漆的溶劑；脫水成丁二烯，可用于合成橡膠；它還可以代替1，4-丁二醇，用于聚酯和聚亞安酯的合成；同甲乙酮縮合并進行加氫形成辛烷，可用來生產(chǎn)高級航空用油。2，3-丁二醇與乙酸反應(yīng)生成2，3-丁二醇二乙酸酯，此酯類可加到奶油中改善風(fēng)味；在我國2，3-丁二醇還被添到白酒中，以改善白酒的風(fēng)味。
采用粘質(zhì)沙雷氏菌發(fā)酵生產(chǎn)BD主要為meso-型。該種菌研究較少，產(chǎn)量不高，制約了產(chǎn)業(yè)化的進程，應(yīng)用前景受到挑戰(zhàn)。
發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)基成分是影響2，3-丁二醇發(fā)酵水平的關(guān)鍵因素，原始的培養(yǎng)基配方為葡萄糖5％，麥芽糖提取物0.3％，酵母粉0.3％，蛋白胨0.5％，滅菌前pH 7.2-7.5。該配方不僅產(chǎn)量低，而且副產(chǎn)物較多。因此，急需對培養(yǎng)基成份進行優(yōu)化。
發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵調(diào)控的好壞是影響2，3-丁二醇發(fā)酵水平的另一關(guān)鍵因素。由于2，3-丁二醇的發(fā)酵是屬于微耗氧培養(yǎng)，過低的供氧會導(dǎo)致有毒副產(chǎn)物的產(chǎn)生，例如乙酸、乙醇，這樣會減少生物量的形成，降低產(chǎn)量；但過量的氧會抑制產(chǎn)物形成過程中酶的活性。這就要求對發(fā)酵過程中氧的控制提出較高的要求，但是在微耗氧過程中，溶氧接近于0，這樣就使得把溶氧作為參數(shù)來控制就顯得極為不準確了。也有人曾采用氧傳遞速率作為控制參數(shù)，但是反應(yīng)器的流體動力特性對于整個反應(yīng)器氧的分配和利用有很大影響，反應(yīng)器中不同位置的氧傳遞速率是不一致的。因此對于微耗氧培養(yǎng)，采用氧傳遞速率來控制同樣也是不適合的。
因此，本領(lǐng)域迫切需要一種優(yōu)化的培養(yǎng)基以及調(diào)控方法，以實現(xiàn)2，3-丁二醇的生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明需要解決的技術(shù)問題是公開一種發(fā)酵生產(chǎn)2，3-丁二醇的方法，以克服現(xiàn)有技術(shù)存在的發(fā)酵周期長和2，3-丁二醇的產(chǎn)量低以及轉(zhuǎn)化率不高的缺陷。
本發(fā)明的構(gòu)思是這樣的通過靜態(tài)優(yōu)化，選擇合適的培養(yǎng)基，從而促進細胞生長與糖耗速度，縮短了發(fā)酵周期，提高2，3-丁二醇的產(chǎn)量；在發(fā)酵時期的不同階段，以細胞代謝流為控制點，采用合適的RQ值來控制菌體的代謝，使底物主要朝2，3-丁二醇產(chǎn)物生成途徑轉(zhuǎn)化。以克服不能有效了解菌體的需氧量，從而控制細胞的生長和代謝；通過在發(fā)酵過程中添加產(chǎn)物促進因子-乙酸鈉來提高2，3-丁二醇的產(chǎn)量。
本發(fā)明的方法包括如下步驟(1)采用常規(guī)的方法培養(yǎng)粘質(zhì)沙雷氏菌，優(yōu)選的培養(yǎng)時間為9～15小時，培養(yǎng)溫度為25℃～35℃，培養(yǎng)基其組分包括碳源、氮源、磷源和無機鹽，優(yōu)選的組分和重量含量包括葡萄糖0～3％；酵母粉0～1％；蛋白胨0～2％；(NH4)2SO40～2％；K2HPO40～3％；NaCl 0～2％；MgSO4，0～1％本發(fā)明中的所選粘質(zhì)沙雷氏菌(Serratia marcescens)是由中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心提供的，編號為粘質(zhì)沙雷氏菌CICC10187；(2)將步驟(1)的粘質(zhì)沙雷氏菌種子液基于培養(yǎng)基體積的5～7％(體積比)的接種量接種于培養(yǎng)基中，通入空氣，攪拌，RQ控制在0.9～1.2之間，在25～35℃下發(fā)酵培養(yǎng)3-6小時，OD600值為5-11之間；RQ可以通過通入的空氣流量，攪拌速度進行控制，優(yōu)選的空氣流量為20～120m3/hm3培養(yǎng)基，攪拌速度為100～500rpm；然后補入產(chǎn)物促進因子-乙酸鈉，流速為(0.1g～15g)/hm3培養(yǎng)基，補充蔗糖水溶液使得RQ控制在1.5～1.8之間，在25～35℃下發(fā)酵培養(yǎng)15-18小時，OD600值為25-30之間；RQ通過通入的空氣流量、攪拌速度、蔗糖水溶液和氨基酸粉水溶液補料量進行控制，優(yōu)選的空氣流量為100～150m3/hm3培養(yǎng)基，攪拌速度為300～800rpm，蔗糖水溶液補料量使培養(yǎng)基中的蔗糖的濃度維持在0～20g/L，蔗糖水溶液的濃度為(0.1～1g)/ml；當菌體比生長速率＜0.03時補入氨基酸粉水溶液，流速為(1g～10g)/hm3培養(yǎng)基，氨基酸粉水溶液的濃度為(0.1～0.8g)/ml，當OD600大于25～30時停止補入。
最后將RQ控制在1.9～2.2之間，在25～35℃下發(fā)酵培養(yǎng)12-20小時，OD600值為28-35之間，即獲得含有2，3-丁二醇的發(fā)酵培養(yǎng)液，2，3-丁二醇產(chǎn)量達到107g/L以上，轉(zhuǎn)化率達0.45g/g suc以上，生產(chǎn)能力為2.91g/L·h以上。RQ可以通過通入的空氣流量、攪拌速度和蔗糖水溶液補料量進行控制，優(yōu)選的空氣流量為20～150m3/hm3培養(yǎng)基，攪拌速度為200～800rpm，蔗糖水溶液補料量使培養(yǎng)基中的蔗糖的濃度維持在0～20g/L，蔗糖水溶液的濃度為(0.1～1g)/ml；此過程中無需補充氨基酸水溶液。
pH值在發(fā)酵過程中用NaOH和H2SO4控制為5.5-6.5；“RQ”的規(guī)范的技術(shù)名稱是呼吸商，指的是在一定時間內(nèi)機體呼出的CO2的量與吸入的O2量的比值(CO2/O2)，在生物化學(xué)書中有詳細的定義；“OD600”的規(guī)范的技術(shù)名稱是菌體細胞密度，指的是由于微生物的生長引起培養(yǎng)物混濁度的增高，因此通過紫外分光光度計測定在600nm波長下的吸光值，判斷微生物的生長狀況，在微生物學(xué)書中有詳細的定義；發(fā)酵培養(yǎng)基的組分和重量含量為蔗糖1～10％，蛋白胨0.5～2％，酵母粉0.1～0.5％，檸檬酸0.3～1.5％，MnSO40.002～0.01％，KH2PO40.01％～0.1％，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.001～0.01％，MgSO40.01～0.1％，以及余量的水；優(yōu)選的為蔗糖9％蛋白胨 2％酵母粉 0.5％檸檬酸 1％MnSO40.007％NaH2PO40.05％FeSO40.002％MgSO40.05％本發(fā)明采用的培養(yǎng)基是將正交實驗和《實驗設(shè)計與分析》書中公開的ResponseSurface Methodology方法相結(jié)合后所篩選的，包括如下步驟
首先采用單因素試驗，考察碳源、檸檬酸對發(fā)酵水平的影響，然后根據(jù)正交實驗，篩選出影響發(fā)酵水平的三個關(guān)鍵因素檸檬酸、MnSO4和酵母粉，最后是用ResponseSurface Methodology的方法，優(yōu)化檸檬酸、MnSO4和酵母粉的最適培養(yǎng)濃度；本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)檸檬酸能促進細胞生長與糖耗速度，縮短發(fā)酵周期，提高2，3-丁二醇的產(chǎn)量。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的方法的有益效果為采用單因子實驗、正交實驗、響應(yīng)面實驗相結(jié)合的靜態(tài)優(yōu)化方法，優(yōu)化了培養(yǎng)基，并首次發(fā)現(xiàn)檸檬酸能促進細胞生長與糖耗速度，縮短了發(fā)酵周期，提高2，3-丁二醇的產(chǎn)量；在發(fā)酵過程中，采用呼吸商RQ來調(diào)控生產(chǎn)2，3-丁二醇的方法。由于呼吸商RQ是反映發(fā)酵系統(tǒng)中微生物細胞生理特性情況的參數(shù)，綜合反映了菌體細胞對有關(guān)營養(yǎng)基質(zhì)代謝情況的信息，RQ＝CER/OUR。在營養(yǎng)基質(zhì)充足的條件下，在無氧條件下(1)；在有氧條件下(2)；結(jié)合電子傳遞系統(tǒng)(3)；結(jié)合(1)，(3)RQ＝1/(1/2)＝2，結(jié)合(2)，(3)RQ＝2/(1/2+1/2)＝2，發(fā)現(xiàn)無論在何種氧條件下，RQ值為2，但根據(jù)相關(guān)文獻我們知道在無氧條件下，產(chǎn)乙醇量較多，其RQ值為4，在有氧條件下產(chǎn)有機酸較多，對于產(chǎn)物生成途徑中的酶也有抑制作用，這就使我們需要把RQ值控制在2左右，來調(diào)控氧的供應(yīng)。使用本方法不僅把發(fā)酵過程控制在微耗氧的培養(yǎng)條件下，又使得碳源朝2，3-丁二醇產(chǎn)物生成途徑轉(zhuǎn)化。在營養(yǎng)物質(zhì)缺乏的情況下，RQ值會發(fā)生下降，本發(fā)明也依此來控制補料；采用了不同發(fā)酵階段不同的RQ值來調(diào)控生產(chǎn)2，3-丁二醇的方法。增加細胞量能提高2，3-丁二醇的產(chǎn)量，但它們之間又有一個最佳平衡點。通過分階段控制RQ，使第一階段，以菌體生長為主；第二階段，以菌體生長和產(chǎn)物生成相結(jié)合的生產(chǎn)模式；第三階段，以產(chǎn)物生成為主。通過分階段調(diào)控，使得2，3-丁二醇產(chǎn)量獲得大幅提高；采用了產(chǎn)物促進因子-乙酸鈉來提高2，3-丁二醇產(chǎn)量。和以往報道不同的是在粘質(zhì)沙雷氏菌培養(yǎng)過程中，乙酸鈉的加入如果沒有較好的調(diào)控手段不僅大幅度降低2，3-丁二醇產(chǎn)量的產(chǎn)量，而且會抑制菌體生長。通過在第二階段緩慢補入就能克服這一不利因素，加快乙酸鈉的代謝，大幅提高2，3-丁二醇產(chǎn)量，降低乳酸、乙酸等副產(chǎn)物的積累。
本發(fā)明的方法，可使2，3-丁二醇產(chǎn)量達到107g/L以上，轉(zhuǎn)化率達0.45g/g suc以上，生產(chǎn)能力為2.91g/L·h以上，具有工業(yè)化推廣應(yīng)用的前景。


圖1為各發(fā)酵階段RQ值的變化圖。
具體實施例方式
本發(fā)明中的所選粘質(zhì)沙雷氏菌(Serratia marcescens)是由中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心提供的，編號為粘質(zhì)沙雷氏菌CICC10187；蛋白胨、酵母粉為OXOID公司產(chǎn)品，蔗糖為海棠牌食用糖，其他試劑為國產(chǎn)分析純試劑。
下面通過實施例對本發(fā)明作進一步的說明，其目的是為了更好的理解本發(fā)明的內(nèi)容，因此，所列舉的實例并不限制本發(fā)明的保護范圍。
實施例1以下均為重量百分比。
將酵母粉0.5％、蛋白胨2％、檸檬酸1％、MnSO40.007％、KH2PO40.05％、MgSO40.05％加800ml水溶解；稱取FeSO4·7H2O 0.002％加20ml水溶解，加3ml濃度為1/4(v/v)的鹽酸助溶，使溶液較澄清，用無菌過濾膜過濾；將上述培養(yǎng)基混合，用5mol/l的NaOH溶液調(diào)至7.20，加水至1L，滅菌；將滅好菌的蔗糖與上述已冷卻好的培養(yǎng)基混合，獲得濃度為9％的蔗糖，即獲得發(fā)酵培養(yǎng)基。
實施例2(1)粘質(zhì)沙雷氏菌的種子培養(yǎng)培養(yǎng)時間為12小時，培養(yǎng)溫度為28℃，培養(yǎng)基的組分和重量含量為葡萄糖1％；酵母粉0.1％；蛋白胨0.2％；(NH4)2SO40.6％；K2HPO41％；NaCl 0.05％；MgSO40.05％；以NaOH調(diào)pH 7.2。
(2)發(fā)酵培養(yǎng)初始發(fā)酵培養(yǎng)基體積1.8L，采用的初始培養(yǎng)基組成如下蔗糖9％
蛋白胨2％酵母粉0.5％檸檬酸1％MnSO40.007％NaH2PO40.05％FeSO40.002％MgSO40.05％補料液各成分濃度為補料1蔗糖水溶液500g/600ml；補料2工業(yè)氨基酸粉水溶液40g/200ml；(在第二階段加入)以5％(體積比)的接種量接入粘質(zhì)沙雷氏菌種子液，30℃培養(yǎng)5小時至OD600為8，此階段RQ值控制在1.05±0.05；然后開始補入產(chǎn)物促進因子-乙酸鈉，流速為1.0g/h.m3培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速逐步升為600rpm，空氣流量逐步升為120m3/h.m3培養(yǎng)基，通過轉(zhuǎn)速、氣體流量，補入蔗糖水溶液的手段把RQ值控制在1.65±0.05，此階段培養(yǎng)至18小時，此時OD600為32，培養(yǎng)溫度為30℃；當菌體比生長速率＜0.03時補入氨基酸粉水溶液，當RQ值出現(xiàn)下降或者發(fā)酵液中靈菌紅素的量出現(xiàn)增加，則降低流速，當OD600大于28.5±2.25時停止補入。
最后進入調(diào)控后期，用上述同樣的手段把RQ值控制在2.025±0.075。將蔗糖控制在0～20g/L，此階段培養(yǎng)至35小時，此時OD600為30，培養(yǎng)溫度為30℃；pH值在發(fā)酵過程中用重量濃度為160g/L的NaOH水溶液或H2SO4水溶液控制為6；采用本發(fā)明使得2，3-丁二醇產(chǎn)量達到107g/L，轉(zhuǎn)化率達0.45g/g suc，生產(chǎn)能力為2.91g/L·h。副產(chǎn)物乙醇為5g/L，乙酸為0.5g/L，乳酸為7g/L，其它副產(chǎn)物的量也較低。圖1為各發(fā)酵階段RQ值的變化圖，箭頭處表示開始流加乙酸鈉。
實施例3使用原始培養(yǎng)基培養(yǎng)粘質(zhì)沙雷氏菌生產(chǎn)2，3-丁二醇。
培養(yǎng)基成分葡萄糖5％，麥芽糖提取物0.3％，酵母粉0.3％，蛋白胨0.5％，滅菌前pH調(diào)至7.2。
以5％(體積比)的接種量接入粘質(zhì)沙雷氏菌種子液，30℃搖床，200rpm培養(yǎng)，用NaOH和H2SO4控制培養(yǎng)過程pH為6.0。42小時后糖耗完，測得2，3-丁二醇產(chǎn)量為15g/L。
實施例4使用不加檸檬酸的培養(yǎng)基，培養(yǎng)粘質(zhì)沙雷氏菌生產(chǎn)2，3-丁二醇。
培養(yǎng)基成分蔗糖，9％；蛋白胨，2％；酵母粉，0.5％；MnSO4，0.007％；KH2PO4，0.05％；FeSO4，0.002％；MgSO4，0.05％。
以5％(體積比)的接種量接入粘質(zhì)沙雷氏菌種子液，30℃搖床，200rpm培養(yǎng)，用NaOH和H2SO4控制培養(yǎng)過程pH為6.0。48小時后糖耗完，測得2，3-丁二醇產(chǎn)量為35g/L。
實施例5采用傳統(tǒng)發(fā)酵補料方法，目的是與例2進行對比，從而看出本發(fā)明所說的調(diào)控策略的優(yōu)點。
初始發(fā)酵體積1.8L，采用的初始培養(yǎng)基組成如下蔗糖9％蛋白胨 2％酵母粉 0.5％檸檬酸 1％MnSO40.007％NaH2PO40.05％FeSO40.002％MgSO40.05％補料液各成分濃度為補料1500g/600ml蔗糖；補料240g/200ml工業(yè)氨基酸粉；首先，以5％(體積比)的接種量接入粘質(zhì)沙雷氏菌種子液，30℃培養(yǎng)7小時至OD600為14。
然后進行補料，以補蔗糖為主(補料1)，控制發(fā)酵液中的蔗糖濃度不低于30g/L，保證蔗糖的水解速度不低于菌體代謝糖的速度。工業(yè)氨基酸粉在整個補料過程中采用恒速補料(補料2)，補料速率為12ml/h，補12小時結(jié)束。
整個發(fā)酵過程控制pH為6.0，發(fā)酵完畢后2，3-丁二醇產(chǎn)量為75g/L，轉(zhuǎn)化率為0.37g/gsuc。
實施例6采用本發(fā)明的RQ分段調(diào)控策略，補入產(chǎn)物促進因子-乙酸鈉，但在調(diào)控中期，乙酸鈉是一次性加入，目的是與例2進行對比，從而看出本發(fā)明所說的在調(diào)控中期控制補料速度的重要性。
初始發(fā)酵體積1.8L，采用的初始培養(yǎng)基組成如下蔗糖9％蛋白胨 2％酵母粉 0.5％檸檬酸 1％MnSO40.007％NaH2PO40.05％FeSO40.002％MgSO40.05％補料液各成分濃度為補料1500g/600ml蔗糖；補料240g/200ml工業(yè)氨基酸粉；以5％(體積比)的接種量接入粘質(zhì)沙雷氏菌種子液，30℃培養(yǎng)5小時至OD600為8，此階段RQ值控制在1.05±0.05，然后進入調(diào)控中期一次性補入產(chǎn)物促進因子-乙酸鈉，通過轉(zhuǎn)速、氣體流量，補入料液的手段把RQ值控制在1.65±0.05。此階段培養(yǎng)至18小時至OD600為25。
最后進入調(diào)控后期，用上述同樣的手段把RQ值控制在1.95±0.15。由于乙酸鈉不能被有效代謝，菌體生長受到抑制，3-羥基-2-丁酮的量也獲得較大積累，達到28g/L，該階段調(diào)控時間縮短，后期糖幾乎不代謝，2，3-丁二醇產(chǎn)量為60g/L。副產(chǎn)物乙酸為9g/L，乳酸為11g/L。
權(quán)利要求
1.一種發(fā)酵生產(chǎn)2，3-丁二醇的方法，其特征在于，包括如下步驟(1)采用常規(guī)的方法培養(yǎng)粘質(zhì)沙雷氏菌；(2.1)將步驟(1)的粘質(zhì)沙雷氏菌種子液基于培養(yǎng)基體積的5～7％的接種量接種于培養(yǎng)基中，通入空氣，攪拌，RQ控制在0.9～1.2之間，在25～35℃下發(fā)酵培養(yǎng)3-6小時；(2.2)然后補入產(chǎn)物促進因子—乙酸鈉，流速為(0.1g～15g)/h·m3培養(yǎng)基，RQ控制在1.5～1.8之間，在25～35℃下發(fā)酵培養(yǎng)15-18小時；(2.3)最后將RQ控制在1.9～2.2之間，在25～35℃下發(fā)酵培養(yǎng)32-36小時，即獲得含有2，3-丁二醇的發(fā)酵培養(yǎng)液；pH值在發(fā)酵過程中用NaOH和H2SO4控制為5.5-6.5。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2.1)中，空氣流量為20～120m3/h·m3培養(yǎng)基，攪拌速度為100～500rpm。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2.2)中，空氣流量為100～150m3/h·m3培養(yǎng)基，攪拌速度為300～800rpm，蔗糖水溶液補料量使培養(yǎng)基中的蔗糖的濃度維持在0～20g/L。當菌體比生長速率＜0.03時補入氨基酸粉水溶液，當RQ值出現(xiàn)下降或者發(fā)酵液中靈菌紅素的量出現(xiàn)增加，則降低流速，當OD600大于25～30時停止補入。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2.3)中，空氣流量為20～150m3/h·m3培養(yǎng)基，攪拌速度為200～800rpm，蔗糖水溶液補料量使培養(yǎng)基中的蔗糖的濃度維持在0～20g/L，此階段不補入氨基酸粉水溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1～4任一項所述的方法，其特征在于，發(fā)酵培養(yǎng)基的組分和重量含量為蔗糖1～10％，蛋白胨0.5～2％，酵母粉0.1～0.5％，檸檬酸0.3～1.5％，MnSO40.002～0.01％，KH2PO4 0.01％～0.1％，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.001～0.01％，MgSO4 0.01～0.1％，以及余量的水。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，培養(yǎng)基的篩選包括如下步驟首先采用單因素試驗，考察碳源、檸檬酸對發(fā)酵水平的影響。其次根據(jù)正交實驗，篩選出影響發(fā)酵水平的三個關(guān)鍵因素檸檬酸、MnSO4和酵母粉。最后是用ResponseSurface Methodology的方法，優(yōu)化檸檬酸、MnSO4和酵母粉的最適培養(yǎng)濃度。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，培養(yǎng)基制備方法包括如下步驟(1).將酵母粉、蛋白胨、檸檬酸、MnSO4、KH2PO4、MgSO4加水溶解；(2)稱取FeSO4·7H2O加20ml水溶解，加3ml濃度為1/4(v/v)的鹽酸助溶，使溶液較澄清，用無菌過濾膜過濾；(3)將步驟1和2的產(chǎn)物混合，用3～7mol/l的NaOH溶液調(diào)至7.20，按照比例加水，滅菌；(4)將滅好菌的蔗糖與步驟3已冷卻好的培養(yǎng)基混合。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種發(fā)酵生產(chǎn)2，3－丁二醇的方法。將粘質(zhì)沙雷氏菌種子液接種于培養(yǎng)基中，通入空氣，攪拌，RQ控制在0.9～1.2之間；然后補入產(chǎn)物促進因子，補充蔗糖水溶液和氨基酸水溶液，RQ控制在1.5～1.8之間；最后補入蔗糖水溶液將RQ控制在1.9～2.2之間，發(fā)酵培養(yǎng)，即獲得含有2，3－丁二醇的發(fā)酵培養(yǎng)液。本發(fā)明的方法采用單因子實驗、正交實驗、響應(yīng)面實驗相結(jié)合的靜態(tài)優(yōu)化方法，優(yōu)化了培養(yǎng)基，并采用RQ來調(diào)控生產(chǎn)2，3－丁二醇的生產(chǎn)，通過分階段調(diào)控，使得2，3－丁二醇產(chǎn)量獲得大幅提高，2，3－丁二醇產(chǎn)量達到107g/L以上，轉(zhuǎn)化率達0.45g/g suc以上，生產(chǎn)能力為2.91g/L·h以上，具有工業(yè)化推廣應(yīng)用的前景。
文檔編號C12R1/425GK1884560SQ20061002714
公開日2006年12月27日 申請日期2006年5月31日 優(yōu)先權(quán)日2006年5月31日
發(fā)明者沈亞領(lǐng), 魏東芝, 曹學(xué), 李元芳, 朱虎, 王學(xué)東 申請人:華東理工大學(xué)