專利名稱：一類間苯酚環(huán)融入的大環(huán)內(nèi)酯化合物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一類間苯酚環(huán)融入的大環(huán)內(nèi)酯化合物及其應(yīng)用，屬生物農(nóng)藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
松樹的松材線蟲病是由松材線蟲(Bursaphelenchus xylophilus(Steiner &Buhrer)Nickle)寄生在松屬樹種(Pinus sp.)體內(nèi)取食營養(yǎng)而導(dǎo)致樹木迅速死亡的一種的特大毀滅性病害，屬國際重要檢疫對象，列為森林病蟲害之首，被稱為“無煙的森林火災(zāi)”。該病自1905年發(fā)現(xiàn)、1934年被報道以來，現(xiàn)已廣泛分布于日本、美國、韓國、加拿大、墨西哥、希臘、葡萄牙和中國等。日本每年用于該病的防治費用占森林病蟲害防治費用的93.6％，占林業(yè)總投資的20％，但每年因該病損失木材仍然達100萬m3左右。我國于1982年發(fā)現(xiàn)該病以來，現(xiàn)已擴展到江蘇、浙江、安徽、廣東、山東、湖北、上海、香港和臺灣等地，發(fā)生面積已超過7.3×10hm2，死亡松樹2×107株，造成林業(yè)經(jīng)濟、森林生態(tài)上的巨大損失和自然景觀的嚴重破壞，并對我國廣大適生區(qū)的松林構(gòu)成嚴重威脅。80年代以來，對松材線蟲的防治方法主要有1.施用能夠殺死松材線蟲的傳播媒介蟲——松墨天牛(Monochamusalternatus)的殺蟲劑殺螟松(MEP)、倍硫磷(MPP)、甲氨甲酸萘酯(NAC)等。這種防治方法的特點是一種依靠殺死傳病媒介來保護松樹的被動防治方法，它并不能有效地控制病情的大發(fā)生，并對地面植被有相當程度的化學(xué)藥品污染。
2.直接向樹體內(nèi)注入殺線蟲劑(mesulfenphos，tartalicacid)來防治松材線蟲。這種方法只適用于保護珍貴樹木，而且效果不理想，并且對人畜毒性大。
目前防治松材線蟲病的方法主要以噴灑殺蟲劑控制松墨天牛為主，但由于松墨天牛成蟲期長，抗藥性強，防治效果很不理想。至今尚沒有研究出能實際應(yīng)用的殺松材線蟲的高效低毒專用農(nóng)藥，也未見有兼治松材線蟲和松墨天牛的藥劑或方法的研究報道。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一類間苯酚環(huán)融入的大環(huán)內(nèi)酯化合物及其應(yīng)用。
本發(fā)明的生產(chǎn)菌株為Caryospora carllicarpa ZD2，該菌株已于2003年7月28日保存在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；保藏號為CGMCCNo.0983。
本發(fā)明的一類具有毒殺松材線蟲活性的結(jié)構(gòu)骨架為間苯酚環(huán)融入的大環(huán)內(nèi)酯化合物是從生產(chǎn)菌株的發(fā)酵培養(yǎng)物中提取分離得到3種新化合物，該3種化合物的結(jié)構(gòu)式分別如下所示(以下分別簡稱為化合物1-3)
化合物1 化合物2 化合物3本發(fā)明的活性化合物1-3的物化常數(shù)、氫譜數(shù)據(jù)和碳譜數(shù)據(jù)分別見表1、表2。
表1.化合物1-3的物化常數(shù)
表2.化合物1-3的NMR(丙酮)
本發(fā)明的活性化合物在液體浸泡法的抗線蟲活性測試中，在處理時間為36小時、化合物1-3對松材線蟲的半致死率分別為100，80，80ug/mL。因此，本發(fā)明的化合物可作為制備農(nóng)藥殺線劑應(yīng)用。
具體實施例方式實施例1化合物1-3的分離制備a.真菌Caryospora carllicarpa ZD2的種子培養(yǎng)改良的PDA培養(yǎng)基馬鈴薯200g，葡萄糖20g，酵母提取物1.0g，甘油6.0g，瓊脂17g，醫(yī)用復(fù)合維生素B和C各1片，水1000mL，制成平板，挑取菌株接入平板，25℃培養(yǎng)15天；b.將上述培養(yǎng)好的C.carllicarpa ZD2的菌絲體凍干，再用任選地的有機溶劑(例如甲醇、乙醇、丙醇，乙酸乙酯，四氫呋喃，乙腈)冷浸提取4次，將濃縮的粗提物吸收在固體吸收材料(例如粉碎的天然材料，如高嶺土、粘土、滑石，石英等；或粉碎的合成材料，如微粒狀硅膠，氧化鋁等)上，在硅膠柱中進行色譜分離，干法上樣，以石油醚/乙酸乙酯＝0-100％為洗脫劑梯度洗脫。
c.收集80％-90％的石油醚/乙酸乙酯洗脫液，減壓濃縮。
d.將上述濃縮液經(jīng)Sephedex-LH20的甲醇或丙酮凝膠柱分離，即可獲得化合物1-3。
實施例2采用常規(guī)的液體浸入法檢測本發(fā)明化合物的抗線蟲活性的試驗。
1、試驗用藥劑將試驗用樣品先溶于少量有機試劑DMSO，再加入一定濃度的吐溫水溶液分別制備如表3所示濃度的樣品測試溶液。在該溶液中，DMSO的終濃度＜3％、吐溫的終濃度＜5‰。另將相同濃度的DMSO溶解于含有0.5％(V/V)的吐溫-20的水溶液作為對照。
2.松材線蟲的培養(yǎng)與制備松材線蟲B.xylophilus的培養(yǎng)方法將灰葡萄孢(Botrytis cinerea)接入PDA平板，在25℃下培養(yǎng)至長滿平板，接入一塊帶有B.xylophilus的培養(yǎng)基，在25℃下培養(yǎng)至菌絲消失，線蟲長滿平板。
使用時將載有線蟲的培養(yǎng)基挑出，放到線蟲分離器中，用無菌水將線蟲洗出后，離心濃縮，制備成線蟲懸液(每毫升500條左右)。
3.試驗方法將本發(fā)明化合物200ppm、100ppm、80ppm、50ppm濃度供試藥液2ml置于直徑為5cm的培養(yǎng)皿中，再加入活線蟲20ul(約300條)線蟲的懸液，輕輕混勻后將培養(yǎng)皿放置于25℃的培養(yǎng)箱中。分別于12，24和48小時檢查計算線蟲的死亡率。并在雙目顯微鏡下觀察，觀察線蟲體壁變化情況。
鑒定線蟲死亡的方法為在處理平板中加入1-5滴5％NaCl溶液，2分鐘后觀察，死蟲僵直，活蟲則卷曲或扭動。
死亡率％＝死線蟲數(shù)/總線蟲數(shù)×100以未加樣品的測試溶液為對照，整個實驗重復(fù)三次，取三次平均值計算出平均死亡率。
4.試驗結(jié)果表3.樣品對松材線蟲的毒殺活性測試結(jié)果
結(jié)果表明本發(fā)明的化合物1-3對松材線蟲都有較好的毒殺作用，可用于制備農(nóng)藥殺線劑用。
權(quán)利要求
1.一類間苯酚環(huán)融入的大環(huán)內(nèi)酯化合物，由生產(chǎn)菌株，采用常規(guī)固體發(fā)酵及提取分離的方法得到，其特征在于a.生產(chǎn)菌株為Caryospora carllicarpa ZD2，菌株保藏日期2003年7月28日，保存在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；保藏號為CGMCC No.0983；b.該類活性化合物包括3種化合物，其中化合物1的結(jié)構(gòu)式為 化合物2的結(jié)構(gòu)式為 化合物3的結(jié)構(gòu)式為
2.權(quán)利要求1所述的間苯酚環(huán)融入的大環(huán)內(nèi)酯類化合物的應(yīng)用，其特征在于該類化合物可應(yīng)用于制備生物殺線劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及一類間苯酚環(huán)融入的大環(huán)內(nèi)酯化合物及其應(yīng)用，屬生物農(nóng)藥技術(shù)領(lǐng)域。該類活性化合物由生產(chǎn)菌株、通過固體發(fā)酵及提取分離的方法得到。其生產(chǎn)菌株為Caryospora carllicarpa ZD2，該菌株已于2003年7月28日保存在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；保藏號為CGMCC No.0983；該類活性化合物包括3種化合物，該類活性化合物能有效地毒殺松材線蟲，可應(yīng)用于制備生物殺線劑。
文檔編號C12P7/40GK1861593SQ200610010849
公開日2006年11月15日 申請日期2006年4月26日 優(yōu)先權(quán)日2006年4月26日
發(fā)明者董錦艷, 張克勤, 周薇 申請人:云南大學(xué)