基于節旋藻的組合物及其用途的制作方法

專利名稱：基于節旋藻的組合物及其用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及包含節旋藻(Arthrospira)的組合物和該組合物作為殺生物劑和/或治療劑的用途。
背景技術：
節旋藻(以前稱為螺旋藻(Spirulina))是主要培養用作食物和/或蛋白質來源的藍細菌。也已描述了節旋藻的治療性用途，包括用作抗病毒劑、抗癌劑、膽固醇減少劑、糖尿病減緩劑、高血壓降壓劑和免疫調節劑。參見，例如，在位于http//www.spirulinasource.com/library.html.的Spirulina Source.com網站中所引用的參考資料。
發明概述本發明的目的是提供用作殺生物劑和/或治療劑的節旋藻組合物。
受生理應激的節旋藻具有殺生物活性本發明者已揭示，當受到生理應激時，節旋藻產生至少一種類型的具有抗真菌、細菌和大概還有病毒的活性的生物活性劑。可通過剝奪節旋藻的營養物或光照，或通過使節旋藻脫水/干燥來對節旋藻進行生理應激。節旋藻藻絲體(藻絲)受“生理應激”的跡象是當其進入復蘇狀態的時候，在該狀態中，藻絲體會集在一起并產生厚的粘液狀包衣。本發明者認為藻絲體和/或厚的粘液狀包衣包含一種或多種保護該生物體抵抗捕食者的生物活性劑。一種或多種所述生物活性劑可降解捕食生物體的細胞壁或外骨骼。一種或多種所述生物活性劑可以是例如裂解劑或修飾劑，例如殼多糖酶、殼聚糖酶或幾丁質脫乙酰酶，它們降解殼多糖、殼多糖衍生物(例如殼聚糖)或具有例如N-乙酰葡糖胺或D-葡糖胺作為聚合物亞單位的其他細胞壁聚合物。革蘭氏陽性細菌的肽聚糖是一種這樣的聚合物，其包含N-乙酰葡糖胺和N-乙酰胞壁酸。
根據本發明的第一方面，提供了用于消化或修飾殼多糖、殼多糖衍生物或具有N-乙酰基-D-葡糖胺作為聚合物亞單位的聚合物的組合物，所述組合物包含受生理應激的節旋藻。
根據本發明的第二方面，提供了用于消化或修飾殼多糖、殼多糖衍生物或具有N-乙酰基-D-葡糖胺作為聚合物亞單位的聚合物的方法，所述方法包括將殼多糖、殼多糖衍生物或具有N-乙酰基-D-葡糖胺作為聚合物亞單位的聚合物與包含受生理應激的節旋藻的組合物接觸的步驟。
所述殼多糖、殼多糖衍生物或聚合物可以任何合適的形式存在。所述殼多糖、殼多糖衍生物或聚合物可以以基本上純化的形式存在或可以為生物體的一部分例如真菌或革蘭氏陽性細菌的細胞壁，或者昆蟲的外骨骼的一部分。
根據本發明的第三方面，提供了用于鑒定來自節旋藻的生物活性劑的方法，所述方法包括下列步驟(I)將包含受生理應激的節旋藻的組合物和至少一種可被來自節旋藻的生物活性劑修飾的受試底物相組合；和(II)測定所述受試底物的修飾。
可使用任何合適類型的受試底物。可以以任何合適的方法進行關于受試底物的修飾的測定。然而，高通量篩選法是優選的。
優選地，所述生物活性劑是殼多糖酶、殼聚糖酶或幾丁質脫乙酰酶，且所述受試底物是殼多糖、殼多糖衍生物或具有N-乙酰基-D-葡糖胺作為聚合物亞單位的聚合物。優選地，使用呼吸測量法來測定殼多糖、殼多糖衍生物或其他聚合物的改修飾(即降解)。
該方法可進一步包括純化所述生物活性劑的步驟。可以以任何合適的方法進行純化。該方法也可包括克隆和表達所述生物活性劑的基因的步驟。可以以任何合適的方法進行這些步驟。例如，所述步驟可以為如Maniatis等人，Molecular CloningA Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory，1982中所描述的，所述文獻的全部內容在此引用作為交叉參考。
受生理應激的節旋藻作為殺生物劑和/或治療劑的用途在整個自然界中可發現殼多糖、殼多糖衍生物和包含葡糖胺的聚合物，其通常作為例如藻類、真菌、原生動物、纖毛蟲、刺胞動物、苔蘚動物、軟體動物、環節動物、節肢動物、鰓足動物、帚形動物、須腕動物和細菌(革蘭氏陽性細菌和根瘤菌(Rhizobia))的細胞壁或外骨骼的組分。
因此，具有針對殼多糖、殼多糖衍生物和包含葡糖胺的聚合物的裂解或修飾活性的受生理應激的節旋藻可能能夠用作抗廣譜生物的殺生物劑。此處使用的“殺生物劑”是指殺死生物體或者抑制生物體的生長或復制(即所述生物體實際上可以不被殺死)。要認識到，該殺生物劑的一些用途可為用于治療目的。
根據本發明的第四方面，提供了用作殺生物劑和/或治療劑的組合物，所述組合物包含有效量的受生理應激的節旋藻。
根據本發明的第五方面，提供用于預防或治療由生物體引起的受試者的感染或侵染的方法，所述方法包括給所述受試者施用有效量的包含受生理應激的節旋藻的組合物的步驟。
優選地，所述方法包括鑒定需要此類治療或要求此類預防的受試者的步驟。
還提供了受生理應激的節旋藻在制備用于預防或治療由生物體引起的受試者的感染或侵染的藥物中的用途。
令人驚異的是，本發明者已發現，將節旋藻從其生長環境中取出可足以使生理應激發生以及誘導一種或多種具有殺生物活性的生物活性劑的表達。即不必進行如新西蘭專利號336620和336619的說明書中所教導的對節旋藻進行生理應激的步驟和不必對節旋藻進行進一步加工(破碎、爆發式地減壓、增強(potentiate)、碾磨、在碳酸氫鈉中再水化或冷凍干燥)，以獲得殺生物活性。
此外，已發現，本發明者迄今已檢測的所有商購可獲得的節旋藻制劑(片劑、膠囊劑和粉劑)具有針對底物的活性，且該活性被認為是殺生物活性的標志。通常通過收獲節旋藻、洗滌和干燥節旋藻來制備這樣的制劑，而無需特別地對該生物體進行應激的步驟。事實上，節旋藻的商業培育者(grower)傾向于盡可能地使該生物的應激減到最低限度，因為厚的粘液狀包衣會阻塞用于加工該生物的機械裝置。
對于此處描述的任何一種或多種組合物，節旋藻可以是任何合適的種類或者種類或節旋藻變體的混合物，包括但不限于極大節旋藻(A.maxima)。要指出的是，節旋藻屬(Arthrospira)和螺旋藻屬(Spirulina)是兩個獨立的屬。基于許多特征，這兩個屬之間的分離已得到反復確認，所述特征包括螺旋度和藻絲(trichome)大小、細胞壁結構和孔模式、氣泡、類囊體模式、藻絲的游動性和片段化、GC含量、16S rRNA的寡核苷酸分類和在cpcB--cpcA基因座中的突變。參見，例如，J.F.Manen和J.Falquet(2002)“The cpcB--cpcAlocus as a tool for the genetic characterization of the genusArthrospira(Cyanobacteria)evidence for horizontaltransfer”.International Journal of Systematic andEvolutionary Microbiology，第52卷，861-867；和，Chapter 1Morphology，Ultrastructure and Taxonomy of Arthrospira(Spirulina)Maxima and Arthrospira(Spirulina)Platensis byLuisa Tomaselli，of Spirulina platensis(Arthrospira)Physiology，Cell-biology and Biotechnology.Taylor and Francis.Avigad Vonshak(Ed)1997。本說明書中描述的組合物不包括螺旋藻屬的物種。
所述組合物可包含完整的節旋藻藻絲體、藻絲體片段、破裂的/裂解的片段或其提取物/級分。所述組合物可包含活的節旋藻或死的節旋藻。優選地，所述組合物包含破裂的節旋藻藻絲體和片段。
可以以任何合適的方法制備基于節旋藻的組合物，只要殺生物活性未受到損害。一般地，這可包括下列步驟(I)以任何合適的方法培養節旋藻；(II)以任何合適的方法收獲培養的節旋藻；和(III)以任何合適的方法干燥節旋藻。任選的步驟包括以任何合適的方法額外地對節旋藻進行生理應激；以任何合適的方法破裂藻絲體和片段，以任何合適的方法對生物體進行滅菌，以任何合適的方法使節旋藻脫色，以任何合適的方法除去或降解葉綠素和研磨干燥的節旋藻。
上述步驟中的一些步驟例如描述于新西蘭專利號336620和336619的說明書中，以其全文在此引用作為交叉參考。例如，可通過剝奪節旋藻的必需營養物(營養減少)或光照并進行足以對其進行應激的時間，但通過控制生長條件而不殺死其，來在收獲的時候實施應激。也可通過部分失水或通過收獲節旋藻并在潮濕的條件下使其保持活著直至產生應激但不死亡，來進行應激。例如，可將節旋藻噴霧干燥以形成破裂的細胞的細粉。例如可在50-190℃下進行噴霧干燥數秒。例如可以以任何合適的方法，包括通過旋風干燥、蒸氣泵干燥(heatpump drying)、熱管干燥(heat tube drying)、耐火干燥(refractorydrying)或在大約67℃下熱干燥短暫的時間來進行干燥。例如，可使用在新西蘭專利號328013和328740(其全文在此引用作為交叉參考)中描述的碾磨或爆發式減壓來破裂藻絲體。
組合物中節旋藻的濃度可依賴于應用而變化，例如為從大約0.01％至大約100％的范圍內的任何濃度。所述組合物可包含任何合適的溶劑、載體、基質(base)、賦形劑、填充劑、粘合劑、增塑劑、乳化劑、穩定劑、潤滑劑、緩沖劑、軟化劑、增溶劑、懸浮劑、增稠劑、香料、著色劑和防腐劑。
依賴于想要的用途，所述組合物還可包含非來源于節旋藻的一種或多種活性劑，例如抗微生物劑(例如殺細菌劑或殺真菌劑)、治療劑(例如，創傷藥、類固醇)或一般營養物(例如，氨基酸、維生素)。這樣的活性劑在本領域中是已知的。
組合物可以以任何合適的形式存在。可以以任何合適的方式施用所述組合物。組合物可以是液體、凝膠或固體或者其混合物。所述組合物可以是用作噴霧劑的節旋藻的液體培養物。可選擇地，所述組合物可以是通過振動或吹送施用而均勻分布在靶位置上的粉劑。受感染或受侵染的受試者可浸泡在含有液體形式的組合物的浴液中。所述組合物和施加或施用方法可以為在新西蘭專利號336620和336619的說明書中描述的那些。
對于治療用途，可例如口服、腸胃外、通過吸入噴霧劑、局部、經直腸、經鼻、經頰或經陰道來施用或施加所述組合物。所述組合物可以是片劑、溶液、氣霧劑、噴霧劑、乳膏、軟膏、洗液、乳劑、凝膠或粉劑。所述組合物可以以浸漬有節旋藻的繃帶、敷料、絆創膏(adhesive plaster)、栓劑、陰道栓或泥罨劑的形式存在。
優選地，所述殺生物劑是抗真菌、革蘭氏陽性細菌、原生動物、病毒、甲殼動物、螨和昆蟲的活性劑，其中一些在下面進行更詳細的說明。
根據本發明的第六方面，提供了用于制備用作殺生物劑和/或治療劑的基于節旋藻的組合物的方法，所述方法包括步驟(1)對節旋藻進行生理應激；和(2)將(1)的受應激的節旋藻與合適的載體、溶劑、基質或賦形劑相組合。
根據本發明的第七方面，提供了用于制備用作殺生物劑和/或治療劑的基于節旋藻的組合物的方法，所述方法包括步驟(1)通過除去高至大約80％的其中生長有節旋藻的液體來對節旋藻進行生理應激；(2)洗滌受應激的節旋藻以除去污染物；(3)干燥經洗滌的節旋藻；和(4)將經洗滌的節旋藻與合適的載體、溶劑、基質或賦形劑相組合。
上述方法中任一種方法可用于制備一種或多種此處描述的組合物。
優選地，上述方法不包括在加入載體、溶劑、基質或賦形劑之前爆發式地使受生理應激的節旋藻減壓和/或冷凍干燥受生理應激的節旋藻的特殊步驟。
受生理應激的節旋藻作為抗真菌劑的用途根據本發明的第八方面，提供了用作抗真菌劑的組合物，所述組合物包含有效量的受生理應激的節旋藻。
根據本發明的第九方面，提供了用于預防或治療受試者的真菌感染或侵染的方法，所述方法包括給所述受試者施用有效量的包含受生理應激的節旋藻的組合物的步驟。
優選地，所述方法包括鑒定需要此類治療或要求此類預防的受試者的步驟。
還提供了受生理應激的節旋藻在制備用于預防或治療受試者的真菌感染或侵染的藥物中的用途。
受生理應激的節旋藻可用于治療至少一種下列類型的真菌接合菌亞門(Zygomycotina)、子囊菌亞門(Ascomycotina)、半知菌類(Fungi Imperfecti)、鱗斑霉屬(Malassezia)、小孢霉屬(Microsporum)、發癬菌屬(Trichophyton)和表皮癬菌屬(Epidermophyton)。
在第一個實施方案中，所述受試者是人或動物例如哺乳動物或脊椎動物。在人受試者中，所述組合物可用于治療-癬(例如，腳癬(athlete’s foot)、股癬、癬菌病(ringworm)、深甲床感染)，其主要由小孢霉屬、發癬菌屬、念珠菌屬(Candida)和表皮癬菌屬的物種引起；-真菌性口炎，其由念珠菌引起；-皮屑，其由鱗斑霉引起；-熱帶足菌病，在皮膚、肌肉組織和淋巴結中的顆粒狀蔓延生長，其由馬杜拉分支菌(Madurella)引起；-孢子絲菌病(sporothricosis)，在皮膚和淋巴結中的顆粒狀蔓延生長，其由申克孢子絲菌(Sporothrix schenkii)引起；和
-組織胞漿菌病，具有蔓延性全身感染的慢性肺炎，其由夾膜組織胞漿菌(Histoplasma capsulatum)引起。
在動物受試者，所述組合物可用于治療，例如癬菌病、蹄感染(念珠菌屬、鱗斑霉屬)、皮炎和毛囊炎(小孢霉屬、發癬菌屬、鏈格孢屬(Alternaria)、鐮孢屬(Fusarium))。動物中局部真菌病狀通常由和人中相同的真菌引起。
在第二個實施方案中，所述受試者是農業或園藝產品例如植物、花卉、果實、蔬菜、谷類(cereal)、谷物(grain)、豆類、蘑菇菌種體、牧草或草坪。所述組合物可用于治理例如赤霉病和頸腐病(鐮孢屬)、面部濕疹(紙狀髓霉(Pithomyces chartarum))、灰霉病(灰葡萄孢(Botrytis cineria))、葉斑病(殼針孢屬(Septoria)、Alteria、平臍蠕孢屬(Bipolaris))、白粉病(斑點單囊殼(Sphaerotheca macularis)、白粉菌屬(Erysiphe)、薔薇單囊殼(Sphaerotheca pannosa))、褐腐病(Monilinia fruiticola)和葉/莖銹病(柄銹菌屬(Puccinia))。
在第三個實施方案中，所述受試者是土壤、木料、建筑材料或建筑物。所述組合物例如可用于建筑物中或建筑物上以治理霉菌，和用于建筑材料和電線桿上以治理真菌性木材腐爛。
令人驚奇地，本發明者已發現，受生理應激的節旋藻與專著所論述的抗真菌活性劑(制真菌劑)協同性地相互作用，從而提供范圍更廣的廣譜抗真菌活性。本發明者已發現，受應激的節旋藻可抑制真菌的生長、殺死真菌和防止真菌的再次生長。
根據本發明的第十方面，提供了抗真菌組合物，其包含受生理應激的節旋藻和至少一種制真菌劑的協同性組合。
根據本發明的第十一方面，提供了用于預防或治療受試者的真菌感染或侵染的方法，所述方法包括給所述受試者施用有效量的組合物的步驟，所述組合物包含受生理應激的節旋藻和至少一種制真菌劑的協同性組合。
優選地，所述方法包括鑒定需要此類治療或要求此類預防的受試者的步驟。
還提供了受生理應激的節旋藻與至少一種制真菌劑相組合地在制備用于預防或治療受試者的真菌感染或侵染的藥物中的用途。
可使用任何合適的制真菌劑(專著所論述的活性劑)，例如特比萘芬、聯苯芐唑、克霉唑、咪康唑、益康唑、酮康唑和托萘酯。可使用任何合適濃度的專著所論述的活性劑，并且所述濃度將依賴于組合物的想要的用途。
受生理應激的節旋藻作為抗細菌劑的用途本發明者已發現，受生理應激的節旋藻是有效的抗革蘭氏陽性細菌的抗細菌劑。抗細菌作用的模式還不清楚。可能是，革蘭氏陽性細菌的細胞壁被一種或多種來自節旋藻的生物活性劑裂解或修飾。所述細胞壁包含肽聚糖(含有N-乙酰葡糖胺和N-乙酰胞壁酸)，而肽聚糖可以被一種或多種所述生物活性劑消化。
根據本發明的第十二方面，提供了用作抗細菌劑的組合物，所述組合物包含有效量的受生理應激的節旋藻。
根據本發明的第十三方面，提供了用于預防或治療受試者的細菌感染或侵染的方法，所述方法包括給所述受試者施用有效量的包含受生理應激的節旋藻的組合物的步驟。
優選地，所述方法包括鑒定需要此類治療或要求此類預防的受試者的步驟。
還提供了受生理應激的節旋藻在制備用于預防或治療受試者的細菌感染或侵染的藥物中的用途。
優選地，所述細菌是革蘭氏陽性細菌，且可以是例如，芽孢桿菌(Bacilli)、梭菌(Clostridia)、葡萄球菌(Staphylococci)或肺炎球菌(Pneumococci)。所述細菌優選地是瘡皰丙酸桿菌(Propionibacterium acne)，其是痤瘡的致病因子。
在第一個實施方案中，所述受試者是人或動物例如哺乳動物或脊椎動物。在人受試者中，所述組合物可用于治療由革蘭氏陽性細菌導致的或感染的痤瘡、皮炎、潰瘍或傷口。所述組合物可用于治療內部感染，例如氣道內、口內、消化道內和生殖泌尿道內的感染(例如鏈球菌性咽峽炎(strep throat)、中耳感染)。
在第二個實施方案中，所述受試者是農業或園藝產品例如植物、花卉、果實、蔬菜、谷類、谷物、豆類或蘑菇菌種體。
在第三個實施方案中，所述受試者例如是其中細菌可生長的土壤、人造結構或水路。
受生理應激的節旋藻作為殺蟲劑的用途根據本發明的第十四方面，提供了用作殺蟲劑的組合物，所述組合物包含有效量的受生理應激的節旋藻。
根據本發明的第十五方面，提供了用于抑制或消除害蟲的方法，所述方法包括施用或施加有效量的包含受生理應激的節旋藻的組合物。
所述殺蟲劑可針對害蟲例如甲殼類動物和螨。所述殺蟲劑可針對昆蟲例如蠅類(例如蚋科(Simulidae)-黑蠅)、黃蜂、蚊子和白蟻。所述殺蟲劑可用于終止寄生蟲(例如引起瘧疾和其他昆蟲傳播性疾病的寄生蟲)的傳播。
在第一個實施方案中，所述組合物可配制為昆蟲驅避劑或餌劑。
在第二個實施方案中，所述組合物可用于農業或園藝產品例如植物、花卉、果實、蔬菜、谷類、谷物、豆類或蘑菇菌種體。
在第三個實施方案中，所述組合物可用于例如土壤、人造結構、建筑物、建筑材料、河流、湖或濕地。
節旋藻作為治療劑的用途當將受生理應激的節旋藻用作皮膚上的殺生物劑和/或治療劑時，本發明者已發現，節旋藻的一種或多種其他替代物與一種或多種生物活性劑協同地相互作用，從而促進皮膚的愈合。這些其他替代物可能包括β-胡蘿卜素，其給皮膚提供營養；藻藍蛋白，其是抗炎劑；其他蛋白；和其他營養物，包括維生素、礦物質、微量元素、抗氧化劑、精油(essential oil)和碳水化合物。
首先，受應激的節旋藻抑制或殺死微生物，無論其是真菌、細菌還是病毒，然后節旋藻的其他替代物修復由所述微生物造成的損傷。
本發明者發現，節旋藻即使在未受生理應激時也在皮膚病狀的治療方面和皮膚修復方面具有治療性質。
根據本發明的第十六方面，提供了用于修復或預防哺乳動物皮膚缺陷的組合物，所述組合物包含有效量的節旋藻。
優選地，所述組合物包含受生理應激的節旋藻。
根據本發明的第十七方面，提供了修復或預防哺乳動物皮膚缺陷的方法，所述方法包括施加有效量的包含節旋藻的組合物。
優選地，所述組合物包含受生理應激的節旋藻。
優選地，所述方法包括鑒定需要此類治療或要求此類預防的哺乳動物的步驟。
還提供了節旋藻(優選地，受生理應激的節旋藻)在制備用于修復或預防哺乳動物皮膚缺陷的藥物中的用途。
如對于根據本發明的其他方面的組合物所描述的，根據本發明的第十六和第十七方面的組合物可具有一種或多種已確定的成分或性質。
優選地，通過上面描述的任一種方法來制備根據本發明的第十六和第十七方面的組合物。
皮膚缺陷可以是，例如，凹陷、痤瘡損傷、紅斑痤瘡、變紅的區域、裂縫、灼傷、水皰、牛皮癬、濕疹、剝落(scaling)、皺紋、丘疹、口炎、損傷、膿皰、傷口、乳痂、尿布疹、潰瘍、感冒瘡(cold sore)、剃須疹(shaving rash)、水痘、皮炎以及開裂的踵和肘。所述組合物可用于治療灼傷、昆蟲和動物咬傷和消除皮膚的炎癥。所述組合物可用于減少皮膚的搔癢。所述組合物可用于修復瘢痕組織、曬傷的皮膚(sun-damaged skin)和已失去其彈性的干燥的和鱗狀的皮膚。
根據下面的詳細描述，本發明的其他方面和實施方案將變得明顯。
附圖簡述

圖1顯示了通過呼吸測量法評估的受生理應激的節旋藻(AMYCOT和未加工的粉劑)對于殼多糖的活性；圖2顯示了AMYCOT對于白色念珠菌(C.albicans)的抗真菌活性；圖3顯示了通過呼吸測量法評估的AMYCOT對于瘡皰丙酸桿菌的抗細菌活性；圖4顯示了節旋藻(螺旋藻)的不同商業制劑對于紅色發癬菌(T.rubrum)的抗真菌活性；圖5顯示了節旋藻的商業制劑(Life Stream)對于黑曲霉(A.niger)的抗真菌活性；圖6顯示了AMYCOT對于犬小孢霉(M.canis)的抗真菌活性；圖7顯示了AMYCOT對于禾谷鐮孢(F.graminearum)的抗真菌活性；圖8顯示了AMYCOT對于粃糠狀鱗斑霉(M.furfur)的抗真菌活性；圖9a顯示了香波AMYCOT對于紅色發癬菌的抗真菌活性；圖9b顯示了香波AMYCOT對于白色念珠菌的抗真菌活性；圖10顯示了AMYCOT對于紙狀髓霉的抗真菌活性；圖11顯示了AMYCOT對于灰葡萄孢(B.cinerea)的抗真菌活性；圖12顯示了在使用AMYCOT和使用各種不同的專著所論述的抗真菌活性劑的情況下對于紅色發癬菌的抑制結果；圖13顯示了在使用AMYCOT和使用各種不同的專著所論述的活性劑的情況下對于須發癬菌(T.mentagrophytes)的抑制結果；圖14顯示了在使用AMYCOT和使用各種不同的專著所論述的活性劑的情況下對于白色念珠菌的抑制結果；圖15顯示了在使用專著所論述的活性劑的情況下對于白色念珠菌的抑制結果；
圖16顯示了在使用與專著所論述的活性劑相組合的AMYCOT和使用各種不同的專著所論述的活性劑的情況下對于須發癬菌的抑制結果；圖17顯示了在使用與專著所論述的活性劑相組合的AMYCOT和使用各種不同的專著所論述的活性劑的情況下對于白色念珠菌的抑制結果；圖18顯示了在使用與專著所論述的活性劑相組合的AMYCOT的情況下對于須發癬菌的抑制結果；圖19顯示了在使用與專著所論述的活性劑相組合的AMYCOT的情況下對于須發癬菌的抑制結果；圖20顯示了在使用與專著所論述的活性劑相組合的AMYCOT和使用各種不同的專著所論述的活性劑的情況下對于須發癬菌的抑制結果；圖21顯示了在使用與專著所論述的活性劑相組合的AMYCOT和使用各種不同的專著所論述的活性劑的情況下對于白色念珠菌的抑制結果；圖22顯示了在使用與專著所論述的活性劑相組合的AMYCOT的情況下對于須發癬菌的殺真菌結果；圖23顯示了在使用與專著所論述的活性劑相組合的AMYCOT的情況下對于紅色發癬菌的殺真菌結果；圖24顯示了在使用與專著所論述的活性劑相組合的AMYCOT的情況下對于須發癬菌的殺真菌結果；圖25顯示了在使用與專著所論述的活性劑相組合的AMYCOT的情況下對于須發癬菌的殺真菌結果；圖26顯示了在使用與專著所論述的活性劑相組合的AMYCOT的情況下對于須發癬菌的殺真菌結果；圖27顯示了在使用與專著所論述的活性劑相組合的AMYCOT和使用各種不同的專著所論述的活性劑的情況下對于白色念珠菌的殺真菌結果；
圖28顯示了在使用AMYCOT和使用專著所論述的活性劑的情況下對于紅色發癬菌的殺真菌結果；圖29顯示了通過呼吸測量法評估的受生理應激的節旋藻(AMYCOT)在不同溫度下對于殼多糖的活性；圖30顯示了通過呼吸測量法評估的受生理應激的節旋藻(AMYCOT)在各種不同pH條件下對于殼多糖的活性；圖31顯示了節旋藻對于須發癬菌的抗真菌活性；圖32顯示了節旋藻對于紅色發癬菌的抗真菌活性；圖33顯示了節旋藻對于褐腐病菌(M.fructicola)的抗真菌活性；和圖34顯示了“增強的AMYCOT”和“原始的AMYCOT”對于鏈格孢屬物種(Alternaria sp.)的抗真菌活性。
實施本發明的最佳模式和其他模式只作為舉例說明，參照下面的系列實施例更詳細地描述本發明的優選實施方案。
實施例1-受生理應激的節旋藻的制備通過減少營養或部分失水來對極大節旋藻(Arthrospira maxima)培養物(可從Biovite Australia Pty Ltd獲得)進行應激。對節旋藻進行脫水和干燥以形成“未加工的”的粉劑。然后使用在新西蘭專利號328013和328740中描述的方法對干燥的節旋藻進行爆發式減壓(增強)。使節旋藻重新水化，脫色，干燥和碾磨以形成干燥的“預混合粉劑”。然后將該預混合粉劑分散入合適的載體(例如商購可獲得的水性英國藥典乳膏或水)中。該預混合粉劑被稱為“AMYCOT預混合粉劑”。
實施例2-應激的節旋藻的活性的表征呼吸測量法的結果表明，受生理應激的節旋藻能夠修飾或裂解包含殼多糖、殼聚糖和/或N-乙酰基-D-葡糖胺的底物。
殼多糖底物使用標準的技術，在瓦氏呼吸計(Warburg Respirometer)中，將標準量的AMYCOT預混合粉劑和未加工的粉劑分別與4個單位的聚合物BHD殼多糖(Sigma，產品目錄號C7170)反應。將各組合物和殼多糖混合在一起，并測量釋放的氣體量。在平衡30分鐘后監測反應1小時。但在水浴中預煮沸5分鐘的相同的組合物不產生任何氣體，這表明該活性可能是酶促活性且可歸因于一種或多種類型的可變性的蛋白質。
將結果標繪于圖1中。未加工的粉劑的活性(推測為酶促活性)速率為694.9ml/g細胞材料/g底物/小時。AMYCOT預混合粉劑的活速效率為729.65ml/g細胞材料/g底物/小時。
呼吸測量法也用于鑒定對于活性的最佳溫度。將AMYCOT預混合粉劑(0.02g和0.06g)與殼多糖(0.02g)一起在20℃、30℃、33℃和40℃下溫育。還將乳膏基中的AMYCOT預混合粉劑(0.05g)與殼多糖(0.02g)一起在這些溫度下溫育。將結果標繪于圖29中。在各情況下確定對于活性的最佳溫度為33℃。
呼吸測量法也用于鑒定對于活性的最佳pH。將AMYCOT預混合粉劑(0.02g)懸浮于具有不同pH的緩沖液(60-70％乙醇、30-40％水、0-0.05％酚酞、0-0.03％溴百里酚藍、0-0.02％甲基紅鈉鹽、0-0.01％氫氧化鈉和0-0.01％甲基橙鈉鹽，在pH 5、7、9和11下)中，并將其與殼多糖(0.02g)一起在33℃下溫育。結果標繪于圖30中。確定對于活性的最佳pH為6。
這些結果暗示，當所述生物活性劑局部用于皮膚時應當具有活性，因為皮膚具有相似的溫度和pH。
N-乙酰基-D-葡糖胺和殼聚糖底物將AMYCOT預混合粉劑(0.02g)分別與N-乙酰基-D-葡糖胺(0.02g，Sigma產品目錄號A8625-5G)和殼聚糖(0.02g，Sigma產品目錄號C 3646)底物一起在33℃下在瓦氏呼吸計中溫育。在平衡30分鐘后監測各反應1小時。
AMYCOT加上N-乙酰基-D-葡糖胺的結果示于下面的表中。

AMYCOT加上殼聚糖的結果示于下面的表中。

為了進行比較，AMYCOT(0.02g)加上殼多糖(0.02g)在33℃下溫育的結果示于下面的表中。

這些結果表明，受生理應激的節旋藻具有一種或多種生物活性劑，其裂解或修飾殼多糖、殼聚糖和/或N-乙酰基-D-葡糖胺，或可能地另一種類型的具有N-乙酰基-D-葡糖胺作為聚合物亞單位的聚合物。所述生物活性劑可以是例如殼多糖酶、殼聚糖酶或幾丁質脫乙酰酶。
實施例3-受應激的節旋藻的抗真菌和抗細菌活性在體外對于活的真菌和革蘭氏陽性細菌測試了AMYCOT預混合粉劑的殺生物活性。
靶病原體的活培養物來源于美國典型培養物保藏中心(ATCC)、澳大利亞微生物保藏中心(ACM)和Sullivan Niccolaides。被測試的培養物示于表4中。

讓各病原體的均一的菌苔生長在裝有馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)培養基的培養皿上。在3-4天的溫育后，用無菌的直徑為8mm的木塞打孔器在PDA培養基中切出4個小孔。將所測量的量的AMYCOT預混合粉劑和對照乳膏/粉劑置于每個孔中。在適合于各病原體的條件下培養所述培養皿，且每天觀察培養皿。
在2-4天后出現圍繞在小孔周圍的兩個同心區帶1.圍繞小孔的較小的透明環形“清除”帶。這是其中真菌已被破壞，只留下殘存的干細胞質物質(如通過光學和電子顯微鏡所看到的)的區域。
2.從清除帶的周圍延展的較大的半透明的“受影響”帶。受影響帶通過菌苔的高度較低、其密度較低和與未受影響的菌苔相比更大的透明度來識別。這是其中真菌細胞壁已被大量破壞，但一些真菌通常作為圓形的細胞質球(如通過光學和電子顯微鏡所看到的)而仍然存在的區域。
在各情況下，從小孔的外周至區帶的外周進行區帶的測量。該測量值稱為區帶距離(zonal distance)(ZD)。區帶的半徑是殺生物劑在體外抗病原體的功效的非限性量度。
體外對照結果顯示于表5中。

圖2顯示，使用AMYCOT清除了白色念珠菌(ACM 4574)，這是一種或多種殺生物劑抗真菌性口炎這種病狀的功效的證據。AMYCOT預混合粉劑處于6點鐘的位置，和在水性乳膏中具有12.5％w/wAMYCOT的“人試驗乳膏”處于12點鐘的位置(9mm的ZD)。
在引起缺氧性痤瘡(anaerobic acne)的瘡皰丙酸桿菌這種細菌的情況下，當在缺氧條件下測試時，沒有獲得清除。在實施例4中提供了該現象的解釋。
實施例4-受應激的節旋藻對于瘡皰丙酸桿菌的抗細菌活性呼吸測量法顯示，AMYCOT具有針對瘡皰丙酸桿菌的抗細菌活性。
在氧氣存在或不存在的情況下，將AMYCOT預混合粉劑(0.02g)和5g包含12.5％w/w AMYCOT的“人試驗乳膏”分別與引起缺氧性痤瘡的生物瘡皰丙酸桿菌(ACM No.5109)的培養液在瓦氏呼吸計中反應。將所得結果與包含瘡皰丙酸桿菌培養液但缺少AMYCOT的對照的結果進行比較。在氧氣不存在的情況下，無氣體釋放。在氧氣存在的情況下，有氣體釋放且各組合物具有抗細菌活性。
將在氧氣存在的情況下AMYCOT和人試驗乳膏的結果標繪于圖3中。AMYCOT預混合粉劑的速率(推測為酶促的)是626.00ml/g細胞材料/g底物/小時。人試驗乳膏的速率是12.00ml/g細胞材料/g底物/小時。
結果顯示，為了使組合物在體內用作對于瘡皰丙酸桿菌的抗細菌劑，需要氧氣的存在。因此，至少一種殺生物劑可以是氧化酶。
本發明者猜測，一種或多種抗真菌的殺生物劑可裂解或修飾真菌的細胞壁。這樣的試劑可以是殼多糖酶、殼聚糖酶或幾丁質脫乙酰酶。
盡管認為瘡皰丙酸桿菌和其他革蘭氏陽性細菌在其細胞壁內不具有殼多糖或殼聚糖，但仍猜測一種或多種殺生物劑裂解或修飾所述細菌細胞壁中的N-乙酰基-D-葡糖胺/肽聚糖。
實施例5-具有抗真菌活性的節旋藻的不同商業來源干燥的節旋藻的商業制劑(粉劑、片劑和膠囊劑)來源于不同管轄地區的不同供應商，并就抗真菌活性對其進行測試。通常通過收獲節旋藻、洗滌收獲的節旋藻和干燥經洗滌的節旋藻來制備粉劑。一些供應商研磨節旋藻同時保持潮濕。制劑不需要在收獲后特別地對節旋藻進行應激的步驟，從而節旋藻進入復蘇狀態。事實上，如前面所提到的，節旋藻的商業培育者傾向于盡可能地使該生物的應激減小到最低限度，因為厚的粘液狀包衣會阻塞用于加工該生物的機械裝置。
節旋藻(螺旋藻)粉劑獲自下列供應商1.China Spirulina-Jiangsu Cibainian Nutrition Food Co.，Ltd.China2.Febico-Far East Biotech Co.Ltd.Taiwan3.Life Stream/Earthrise-DIC.California USA4.Pacifica-Cyanotech.Hawaii USA5.Siam Algae Co.-DIC.Thailand6.Spirin-Yunnan Spirin Co.Ltd.China7.Synergy-DIC.China。
采用12.5％w/w的濃度將各粉劑混合在水性乳膏中。然后對各乳膏進行脫色。將紅色發癬菌的均一菌苔培養在培養皿中的PDA培養基上。在3-4天的培養后，用無菌的木塞打孔器在PAD培養基上切出小孔。將所測量的量的各乳膏置于各小孔中，然后將培養皿溫育2-4天。
圖4顯示了12.5％w/w Siam Algae Co.(3點鐘的位置)、12.5％w/w Life Stream(6點鐘的位置)和12.5％w/w China Spirulina(9點鐘的位置)的抗真菌活性。
結果顯示，所有經測試的商業粉劑具有一定的抗真菌活性。呼吸測量法確證了，當與殼多糖一起溫育時，所有受試商業粉劑也具有活性(推測為酶促活性)(結果未顯示)。
隨機選擇一種粉劑(Life Stream)以12.5％w/w的濃度與不需處方可以出售的水性乳膏相混合而不進行進一步的加工，并測試抗黑曲霉(Aspergillus niger)的抗真菌活性。所述乳膏產生4mm的清除，如在圖5中在12、3、6和9點鐘的位置上看到的。這表明，可能所有干燥的節旋藻的商業制劑具有一定的抗真菌活性水平，而不需要額外的應激步驟或進一步加工步驟例如藻絲體破裂。
實施例6-受應激的節旋藻抗哺乳動物真菌疾病的活性在體外測試AMYCOT抗不同的哺乳動物真菌疾病的抗真菌活性。下列病原體來源于Department of Primary Industries，Departmentof Agriculture，ACM和育種場(nurseries)●白色念珠菌●犬小孢霉●須發癬菌●紅色發癬菌●絮狀表皮癬菌●禾谷鐮孢●鏈格孢屬物種●粃糠狀鱗斑霉。
將各病原體的均一菌苔培養在PDA培養基上。在1-2天的溫育后，用無菌的直徑為8mm的木塞打孔器在PDA培養基中切出小孔。將所測量的量的AMYCOT置于各小孔中。依賴于病原體將板在合適的溫度下培養。每天觀察被打孔的板。2-3天后測量清除。從小孔的外周至區帶的外周對區帶進行測量。
該區帶沒有活的真菌細胞證明了AMYCOT針對靶病原體的功效。
12.5％w/w AMYCOT乳膏產生8mm的病原體紅色發癬菌的清除。紅色發癬菌是蹄感染和癬菌病的致病因子。
12.5％w/w AMYCOT乳膏產生15mm的病原體須發癬菌的清除。須發癬菌是蹄感染和癬菌病的致病因子。
圖6顯示了一個孔，其中12.5％w/w AMYCOT乳膏產生3mm的病原體犬小孢霉的清除。犬小孢霉是蹄感染和癬菌病的致病因子。
12.5％w/w AMYCOT乳膏產生3mm的病原體絮狀表皮癬菌的清除。絮狀表皮癬菌是蹄感染和癬菌病的致病因子。
12.5％w/w AMYCOT乳膏產生4.5mm的病原體白色念珠菌的清除。白色念珠菌是癬菌病和皮炎的致病因子。
圖7顯示了一個孔，其中12.5％w/w AMYCOT乳膏產生12mm的病原體禾谷鐮孢的清除。禾谷鐮孢是蹄感染的致病因子。
圖8顯示了其中12.5％w/w AMYCOT乳膏產生病原體粃糠狀鱗斑霉的清除的孔。粃糠狀鱗斑霉是皮屑的致病因子。
圖9a顯示了其中5％w/w AMYCOT香波產生3mm的病原體紅色發癬菌的清除的孔。
圖9b顯示了其中5％w/w AMYCOT香波產生4mm的病原體白色念珠菌的清除的孔。
實施例7-受應激的節旋藻抗植物真菌疾病的活性在體外測試AMYCOT抗不同的植物真菌疾病的抗真菌活性。下列病原體來源于Department of Primary Industries，Department ofAgriculture，ACM和育種場●禾谷鐮孢●紙狀髓霉●灰葡萄孢●鏈格孢屬物種。
將各病原體的均一菌苔培養在PDA培養基上。在1-2天的溫育后，用無菌的直徑為8mm的木塞打孔器在PDA培養基中切出小孔。將所測量的量的AMYCOT置于各小孔中。依賴于病原體將板在合適的溫度下培養。每天觀察經打孔的板。
2-3天后測量清除。從小孔的外周至區帶的外周對區帶進行測量。
該區帶沒有活的真菌細胞證明了AMYCOT針對靶病原體的功效。
12.5％w/w AMYCOT乳膏產生13mm的病原體禾谷鐮孢的清除。禾谷鐮孢是小粒谷物(small grain)中赤霉病和頸腐病的致病因子。
圖10顯示一個孔，其中12.5％w/w AMYCOT乳膏產生10mm的病原體紙狀髓霉的清除。紙狀髓霉是綿羊、牛中面部濕疹的致病因子。
12.5％w/w AMYCOT乳膏產生8mm的病原體灰葡萄孢的清除。灰葡萄孢是果實中灰霉病的致病因子。
12.5％w/w AMYCOT乳膏產生9mm的病原體鏈格孢屬物種的清除。鏈格孢屬物種是果實中葉斑病的致病因子。
實施例8-AMYCOT作為噴霧劑對于植物真菌病原體的作用的測試在體外測試以抗真菌噴霧劑形式存在的AMYCOT針對常見的植物病原體(灰葡萄孢)的作用。用水水化5％w/w AMYCOT粉劑，但其只是略微溶解。
將灰葡萄孢的均一菌苔培養在培養皿中的PDA培養基上。將噴霧劑噴灑在培養皿的右手側并讓其在室溫下放置24小時。培養皿的左手側未經噴灑。圖11顯示，培養皿的經噴灑側具有死亡的真菌。該噴霧劑在消除灰霉病和抑制進一步孢子形成中是有效的。
實施例9-使用受應激的節旋藻和專著所論述的活性劑進行的體外抗微生物測試在本實施例和其他實施例中測試各種不同的不需處方可以出售的抗真菌和抗細菌乳膏(包括LamisilTM、Dakta GoldTM、CanestenTM、TinadermTM、DaktarinTM、Tripod LabsTM、Resolve TineaTM、ResolveBalmTM、Resolve PlusTM、ClearasilTM、Benzac WTM)以及AMYCOT的抗真菌和抗細菌活性。
在本實施例中，由獨立的實驗室(ConMac Laboratory Services)測試各種不同的不需處方可以出售的乳膏和AMYCOT針對靶病原體須發癬菌、絮狀表皮癬菌、紅色發癬菌和瘡皰丙酸桿菌的抗真菌和抗細菌活性。
結果顯示于表6中。

結果顯示，只有AMYCOT具有抗各病原體的活性。顯示活性的乳膏的僅有的其他例子是LamisilTM抗紅色發癬菌。
實施例10-使用專著所論述的活性劑及與AMYCOT的組合的體外測試抗真菌劑例如咪康唑、托萘酯、聯苯芐唑和克霉唑通過抑制特定蛋白質的產生、阻止正常功能例如復制來發揮功能。抗真菌劑特比萘芬通過阻止至關重要的固醇的形成來發揮作用。
這些體外測試的第一個目的是確定各種不同的不需處方可以出售的乳膏或其活性劑作為真菌抑制劑的功效，和比較AMYCOT的功效。第二個目的是確定與一種或多種不需處方可以出售的乳膏或其活性劑相組合的AMYCOT作為真菌抑制劑的功效。
用所選擇的病原體接種沙氏液體培養基。然后在28℃下溫育培養液一周。將無菌拭子浸入病原體的培養液中，通過對板以直角進行劃線來接種PDA培養基板，確保板具有均勻的菌苔。
將還沒有存在于乳膏基中的專著所論述的活性劑與各自的乳膏基混合。將選擇的乳膏置于直徑為10mm的濾紙圓片上并將該圓片置于新接種的板上。將多至4個不同的圓片置于板上。然后依賴于病原體在合適的溫度下溫育板24-48小時。然后，在24-48小時結束時拍攝照片。
抑制測試結果顯示于圖12-21和下面的表7-16中。










與通常使用的醑劑(spirit)基相反，圖21中的專著所論述的活性劑存在于水性乳膏基中。
在體外測試中，咪康唑和克霉唑被視為病理性真菌的最有效的抑制劑，(見圖12-21)。圖16和17以及表11和12證實，咪康唑是有效的真菌抑制劑。AMYCOT也作為抑制劑起作用，但只有克霉唑和咪康唑的有效性的大約40％(見圖12-14)。圖18-21以及表13-16表明，當與特比萘芬和托萘酯相比較時，AMYCOT+咪康唑和AMYCOT+克霉唑的組合是最有效的體外真菌抑制劑。
這些體外測試的第三個目的是確定各種不同的不需處方可以出售的乳膏或其活性劑作為殺真菌劑的功效，和比較AMYCOT的功效。第四個目的是確定與專著所論述的活性劑相組合的AMYCOT的功效。
殺真菌測試包括在PDA培養基板上生長病原體的菌苔2-3天，然后將成熟的病原體暴露于抗真菌劑。這可通過在覆蓋菌苔的瓊脂上切出小孔，然后取出瓊脂并用乳膏填充小孔來進行。
殺真菌測試結果顯示于圖22-28和下面的表17-23中。








與通常使用的醑劑基相反，圖28中的專著所論述的活性劑存在于水性乳膏基中。
結果支持，現有的不需處方可以出售的抗真菌劑和專著所論述的活性劑是制真菌劑而不是殺真菌劑。圖22-28和表17-23證明，AMYCOT是有效的殺真菌劑，即使當與專著所論述的活性劑相組合時亦如此。
AMYCOT與咪康唑或克霉唑的組合沒有大大地降低兩者中任一種的功效。該組合增加了抑制效果(見圖17-21)。這產生了非常有效的廣譜產品。
AMYCOT與克霉唑的組合略微抑制了AMYCOT的抗真菌活性(見圖22-28)，但AMYCOT與咪康唑的組合沒有對該組合乳膏的抑制或殺真菌活性產生大的有害影響(見圖17-26)。
由于咪康唑的抑制性質和AMYCOT的抑制和殺真菌活性，AMYCOT與咪康唑的組合乳膏作為廣譜產品比兩者中任一種更有效。
組合乳膏作為抑制劑起作用，并且然后“保持不變”，而單獨用咪康唑獲得的清除逐漸通過再次生長而被侵占，如在病原體須發癬菌的情況下那樣(參見圖20)。
還發現，組合乳膏AMYCOT與2％咪康唑限制了在小孔周圍在清除后病原體的再次生長。
實施例11-節旋藻對于各種皮膚病狀的試驗受試者患有晚期腳癬，在腳趾之間具有深的損傷。受試者報告，在第一次使用12.5％w/w AMYCOT乳膏的15分鐘內由真菌引起的搔癢停止。在12小時內炎癥減輕，并且在一些情況下完全消失。在24小時內損傷開始閉合，并且在4-5天內完全愈合。
在痤瘡的情況下重復這些觀察，受試者記錄到，相關的炎癥消失，并且其皮膚恢復正常的顏色并開始變軟和圓滑，和新的皮膚一樣。膿皰也干枯了。
本發明者相信，一種或多種殺生物劑(例如殼多糖酶、殼聚糖酶、幾丁質脫乙酰酶)協同地與節旋藻的其他組分相互作用以產生治療效果。真菌感染中的搔癢是消化性酶或代謝物從真菌釋放的標志。一旦正常的真菌代謝由于細胞壁破裂而中斷，搔癢就停止了。
當將所述乳膏用于與真菌無關的病狀，用在干燥且開裂的踵和肘、紅斑痤瘡、濕疹、曬傷的皮膚和牛皮癬上時獲得相似的結果。受試者報告，幾乎立即緩解了皮炎中的搔癢。
實施例12-使用“未加工的”粉劑時受應激的節旋藻的抗真菌活性實施例5支持，干燥的節旋藻的商業制劑可能具有一定水平的抗真菌活性而無需額外的應激步驟或收獲后的加工步驟例如藻絲體破裂。實施例12進一步支持了該發現。
極大節旋藻的干燥制劑來源于商業培育者。將所述制劑以12.5％w/w的濃度與不需處方可以出售的水性乳膏相混合而不進行進一步的加工，并且就抗須發癬菌、紅色發癬菌和M.fructicola的抗真菌活性對其進行測試(如實施例5中所描述的)。
如在圖31中所看到的，所述乳膏在12、3、6和9點鐘的位置上產生了抗須發癬菌的清除。
如在圖32中所看到的，所述乳膏在6點鐘的位置上產生了抗紅色發癬菌的清除。
如在圖33中所看到的，所述乳膏在6點鐘的位置上產生了抗M.fructicola的清除。
這些發現支持，為了產生具有殺真菌活性的節旋藻，不一定要進行收獲后的步驟例如爆發式減壓、冷凍干燥、脫色和研磨。
實施例13-未進行爆發式減壓的節旋藻的抗真菌活性該實施例進一步支持，為了產生具有殺真菌活性的節旋藻并不要求進行爆發式減壓(增強)的收獲后步驟。
極大節旋藻的干燥制劑來源于商業培育者。在一種情況下，使用在新西蘭專利號328013和328740中描述的方法通過爆發式減壓(增強)來破裂干燥的節旋藻。使該節旋藻再水化，脫色，干燥和研磨以形成干燥的“預混合粉劑”。然后將該預混合粉劑懸浮于合適的載體中(12.5％)，將其稱作“增強的AMYCOT”。
在另一種情況下，所述制劑不包括在新西蘭專利號328013和328740中描述的爆發式減壓方法，將該制劑稱作“原始的AMYCOT”。
如在圖34中所看到的，“原始的AMYCOT”和“增強的AMYCOT”分別在12和7點鐘的位置上產生幾乎相同的抗鏈格孢屬物種的清除。因此，對于產生具有殺真菌活性的節旋藻來說，爆發式減壓不是必需的收獲后步驟。
還要認識到，對上面例舉的組合物、使用方法和制劑可以進行許多改變而不背離本發明的廣泛界限和范圍。
術語“包含”和該術語的變體例如“包括”或“含有”在此處用于表示包括所述的整體(integer)但不排除任何其他的整體，除非在上下文或用法中要求該術語的排除性的解釋。
此處對于出版物的任何引用不是承認所述公開內容在澳大利亞中構成了公知常識。
權利要求
1.用于消化或修飾殼多糖、殼多糖衍生物或具有N-乙酰基-D-葡糖胺作為聚合物亞單位的聚合物的組合物，所述組合物包含受生理應激的節旋藻。
2.用于消化或修飾殼多糖、殼多糖衍生物或具有N-乙酰基-D-葡糖胺作為聚合物亞單位的聚合物的方法，所述方法包括將殼多糖、殼多糖衍生物或具有N-乙酰基-D-葡糖胺作為聚合物亞單位的聚合物與包含受生理應激的節旋藻的組合物接觸的步驟。
3.用于鑒定來自節旋藻的生物活性劑的方法，所述方法包括下列步驟(I)將包含受生理應激的節旋藻的組合物和至少一種可被來自節旋藻的生物活性劑修飾的受試底物相組合；和(II)測定所述受試底物的修飾。
4.權利要求3的方法，其中所述生物活性劑是殼多糖酶、殼聚糖酶或幾丁質脫乙酰酶，且所述受試底物是殼多糖、殼多糖衍生物或具有N-乙酰基-D-葡糖胺作為聚合物亞單位的聚合物。
5.用作殺生物劑和/或治療劑的組合物，所述組合物包含有效量的受生理應激的節旋藻。
6.用于預防或治療由生物體引起的受試者的感染或侵染的方法，所述方法包括給所述受試者施用有效量的包含受生理應激的節旋藻的組合物的步驟。
7.權利要求6的方法，其還包括首先鑒定需要此類治療或要求此類預防的受試者的步驟。
8.用于制備基于節旋藻的組合物的方法，所述組合物用作殺生物劑和/或治療劑，所述方法包括下列步驟(1)對節旋藻進行生理應激；和(2)將(1)的受應激的節旋藻與合適的載體、溶劑、基質或賦形劑相組合。
9.權利要求8的方法，其中所述方法不包括在加入載體、溶劑、基質或賦形劑之前爆發式地使受生理應激的節旋藻減壓和/或冷凍干燥受生理應激的節旋藻的步驟。
10.通過權利要求9的方法制備的基于節旋藻的組合物。
11.用于制備基于節旋藻的組合物的方法，所述組合物用作殺生物劑和/或治療劑，所述方法包括下列步驟(1)通過除去高至大約80％的其中生長有節旋藻的液體來對節旋藻進行生理應激；(2)洗滌受應激的節旋藻以除去污染物；(3)干燥經洗滌的節旋藻；和(4)將經洗滌的節旋藻與合適的載體、溶劑、基質或賦形劑相組合。
12.權利要求11的方法，其中所述方法不包括在加入載體、溶劑、基質或賦形劑之前爆發式地使受生理應激的節旋藻減壓和/或冷凍干燥受生理應激的節旋藻的步驟。
13.通過權利要求12的方法制備的基于節旋藻的組合物。
14.用作抗真菌劑的組合物，所述組合物包含有效量的受生理應激的節旋藻。
15.用于預防或治療受試者的真菌感染或侵染的方法，所述方法包括給所述受試者施用有效量的包含受生理應激的節旋藻的組合物的步驟。
16.權利要求15的方法，其還包括首先鑒定需要此類治療或要求此類預防的受試者的步驟。
17.權利要求16的方法，其中所述受試者選自人、動物、農業或園藝產品、土壤、人造結構和水路。
18.抗真菌組合物，其包含受生理應激的節旋藻和至少一種制真菌劑的協同性組合。
19.權利要求18的抗真菌組合物，其中所述制真菌劑選自特比萘芬、聯苯芐唑、克霉唑、咪康唑、益康唑、酮康唑和托萘酯。
20.用于預防或治療受試者的真菌感染或侵染的方法，所述方法包括給所述受試者施用有效量的組合物的步驟，所述組合物包含受生理應激的節旋藻和至少一種制真菌劑的協同性組合。
21.權利要求20的方法，其還包括首先鑒定需要此類治療或要求此類預防的受試者的步驟。
22.權利要求20的方法，其中所述制真菌劑選自特比萘芬、聯苯芐唑、克霉唑、咪康唑、益康唑、酮康唑和托萘酯。
23.用于制備權利要求18的組合物的方法，所述方法包括下列步驟(1)對節旋藻進行生理應激；和(2)將(1)的受應激的節旋藻與至少一種制真菌劑與合適的載體、溶劑、基質或賦形劑相組合。
24.權利要求23的方法，其中所述方法不包括在加入載體、溶劑、基質或賦形劑之前爆發式地使受生理應激的節旋藻減壓和/或冷凍干燥受生理應激的節旋藻的步驟。
25.用作抗細菌劑的組合物，所述組合物包含有效量的受生理應激的節旋藻。
26.用于預防或治療受試者的細菌感染或侵染的方法，所述方法包括給所述受試者施用有效量的包含受生理應激的節旋藻的組合物的步驟。
27.權利要求26的方法，其還包括首先鑒定需要此類治療或要求此類預防的受試者的步驟。
28.權利要求27的方法，其中所述細菌是瘡皰丙酸桿菌。
29.權利要求27的方法，其中所述受試者選自人、動物、農業或園藝產品、土壤、人造結構和水路。
30.用于制備權利要求25的組合物的方法，所述方法包括下列步驟(1)對節旋藻進行生理應激；和(2)將(1)的受應激的節旋藻與合適的載體、溶劑、基質或賦形劑相組合。
31.權利要求30的方法，其中所述方法不包括在加入載體、溶劑、基質或賦形劑之前爆發式地使受生理應激的節旋藻減壓和/或冷凍干燥受生理應激的節旋藻的步驟。
32.用作殺蟲劑的組合物，所述組合物包含有效量的受生理應激的節旋藻。
33.用于抑制或消除害蟲的方法，所述方法包括施用或施加有效量的包含受生理應激的節旋藻的組合物。
34.權利要求33的方法，其中所述害蟲選自甲殼動物、螨、昆蟲和寄生蟲。
35.用于制備權利要求32的組合物的方法，所述方法包括下列步驟(1)對節旋藻進行生理應激；和(2)將(1)的受應激的節旋藻與合適的載體、溶劑、基質或賦形劑相組合。
36.權利要求35的方法，其中所述方法不包括在加入載體、溶劑、基質或賦形劑之前爆發式地使受生理應激的節旋藻減壓和/或冷凍干燥受生理應激的節旋藻的步驟。
37.用于修復或預防哺乳動物皮膚缺陷的組合物，所述組合物包含有效量的節旋藻。
38.權利要求37的組合物，其中所述組合物包含受生理應激的節旋藻。
39.修復或預防哺乳動物皮膚缺陷的方法，所述方法包括施加有效量的包含節旋藻的組合物。
40.權利要求39的方法，其中所述組合物包含受生理應激的節旋藻。
41.權利要求39的方法，其還包括首先鑒定需要此類治療或要求此類預防的哺乳動物的步驟。
42.用于制備權利要求38的組合物的方法，所述方法包括下列步驟(1)對節旋藻進行生理應激；和(2)將(1)的受應激的節旋藻與合適的載體、溶劑、基質或賦形劑相組合。
43.權利要求42的方法，其中所述方法不包括在加入載體、溶劑、基質或賦形劑之前爆發式地使受生理應激的節旋藻減壓和/或冷凍干燥受生理應激的節旋藻的步驟。
44.權利要求40的方法，其中所述皮膚缺陷選自凹陷、痤瘡損傷、紅斑痤瘡、變紅的區域、裂縫、灼傷、水皰、牛皮癬、濕疹、剝落、皺紋、丘疹、口炎、損傷、膿皰、傷口、乳痂、尿布疹、潰瘍、感冒瘡、剃須疹、水痘、皮炎以及開裂的踵和肘。
45.權利要求9的方法，其中所述節旋藻是極大節旋藻。
全文摘要
本發明涉及用作殺生物劑和/或治療劑的包含受生理應激的極大節旋藻(Arthrospira maxima)的組合物。本發明還涉及用于預防或治療由生物體引起的受試者的感染或侵染的方法，其中所述方法包括給所述受試者施用有效量的包含受生理應激的節旋藻(Arthrospira)的組合物的步驟。
文檔編號C12N9/36GK101068917SQ200580041415
公開日2007年11月7日 申請日期2005年11月3日 優先權日2004年11月3日
發明者K·W·鄧肯, P·O·約翰斯頓, A·M·布朗 申請人:碧澳維特澳大利亞股份有限公司