改良核酸表達的新序列的制作方法

專利名稱：：改良核酸表達的新序列的制作方法
技術領域：
：本發明涉及分子生物學和生物
技術領域：
。更特別地，本發明涉及改良可在宿主細胞中編碼蛋白質的一或多種核酸的產生的手段和方法。可以在多種宿主細胞中產生的蛋白質在生物學和生物技術學中具有廣泛應用，例如可用于生物制藥學。這種產生方法已經確立，通常是使編碼感興趣蛋白質的核酸(也稱作轉基因)在宿主細胞中表達。與轉基因的表達相關的一個問題是其是不可預知的，這是由于轉基因由于基因沉默而將變得無活性的高度可能性(McBurneyetal.，2002)，因此對于轉基因的高表達需要測試許多宿主細胞克隆。另外，一旦這種克隆已經確定，則所述轉基因的表達通常是不穩定的，在延長的宿主細胞培養期間常常觀測到轉基因表達沉默的現象。在脊椎動物細胞中，這可能是由于異染色質在轉基因座形成，阻止了轉基因的轉錄所致(Whitelawetal，2001)。轉基因沉默是隨機的，其通常可以在轉基因整合進基因組之中后立刻發生，或者只是在細胞分化之后發生。這樣在延長的培養之后產生異質細胞群，其中一些細胞持續表達高水平的重組蛋白質，而其它細胞表達低水平或者不可檢測水平的蛋白質(Martin&Whitelaw，1996，McBurneyetal.，2002)。用于產生異源蛋白質的細胞系衍生自單一細胞，通常對其按比例擴大并長期維持在1000升或更大體積的培養器中每毫升1千萬個細胞以上的密度。這些大細胞群(1014-1016個細胞)由于轉基因沉默而傾向于生產力明顯下降(Migliaccioetal.，2000，Strutzenbergeretal.，1999)。克服上述問題的一種可能性是在表達系統中應用所謂的STAR序列。多種這樣的STAR序列在WO03/004704中描述。這些序列可用于在一些類型宿主細胞中使用表達構建體而改良蛋白質生產的可預測性、產量和/或穩定性(WO03/004704；Kwaksetal，2003)。國際出版物WO03/106674描述了STAR序列在一些細胞系中表達編碼重組蛋白質的核酸的應用。國際出版物WO03/106684描述了STAR序列表達編碼多聚體蛋白質如抗體的核酸的應用。本發明提供了改良蛋白質生產的另外的手段和方法。發明概述一方面，本發明提供了包含選自如下一組的具有抗阻抑物活性的核酸序列的重組核酸分子a)SEQ.ID.NO.66，b)SEQ.ID.NO.66的片段，其中所述片段具有抗阻抑物活性，c)與a)或b)的核苷酸序列至少70％相同的序列，其中所述序列具有抗阻抑物活性，及d)與a)-c)任一序列互補的序列；所述重組核酸分子進一步包含表達盒，所述表達盒包含與感興趣核酸連接的異源啟動子，且其中所述感興趣核酸優選編碼全部或部分感興趣蛋白質。在一個優選的實施方案中，所述具有抗阻抑物活性的核酸序列位于所述表達盒中所述啟動子的上游，在其特別優選的實施方案中，所述具有抗阻抑物活性的序列和所述啟動子間隔少于2kb。在某些實施方案中，所述編碼感興趣蛋白質的核酸存在于多順反子基因中，所述多順反子基因進一步編碼可選擇標記基因。在某些實施方案中，所述分子進一步包含至少一個其它具有抗阻抑物活性的序列，所述至少一個其它序列選自a)SEQ.ID.NO.1-65任一序列；b)SEQ.ID.NO.1-65任一序列的片段，其中所述片段具有抗阻抑物活性；c)與a)或b)核苷酸序列至少70％相同的序列，其中所述序列具有抗阻抑物活性；及d)與a)-c)任一序列互補的序列。本發明還提供了包含表達盒的重組核酸分子，其包含5’-抗阻抑物序列A-啟動子-編碼全部或者部分感興趣蛋白質的核酸-抗阻抑物序列B-3’，其中抗阻抑物序列A和B可以相同或不同，并選自(i)SEQ.ID.NO.1-65任一序列；(ii)SEQ.ID.NO.1-65任一序列的片段，其中所述片段具有抗阻抑物活性；(iii)與a)或b)核苷酸序列至少70％相同的序列，其中所述序列具有抗阻抑物活性；及(iv)與(i)-(iii)任一序列互補的序列，特征在于所述表達盒在所述抗阻抑物序列A和B之間進一步包含具有抗阻抑物活性的序列，該序列選自a)SEQ.ID.NO.66；b)SEQ.ID.NO.66的片段，其中所述片段具有抗阻抑物活性；c)與a)或b)核苷酸序列至少70％相同的序列，其中所述序列具有抗阻抑物活性；及d)與a)-c)任一序列互補的序列。本發明進一步提供了包含本發明分子的細胞。優選所述細胞是哺乳動物細胞，在某些實施方案中所述細胞是CHO細胞。本發明進一步提供了一種生產感興趣蛋白質的方法，包括培養包含編碼感興趣蛋白質的重組核酸分子的細胞，以在所述細胞中表達編碼感興趣蛋白質的所述核酸，其特征在于所述重組核酸分子包含具有抗阻抑物活性的、選自如下一組的核酸序列a)SEQ.ID.NO.66，b)SEQ.ID.NO.66的片段，其中所述片段具有抗阻抑物活性，c)與a)或b)核苷酸序列至少70％相同的序列，其中所述序列具有抗阻抑物活性；及d)與a)-c)任一序列互補的序列。在一個優選的實施方案中，所述方法進一步包括分離所述感興趣蛋白質。在優選的實施方案中，所述具有抗阻抑物活性的核酸序列位于控制感興趣蛋白質表達的啟動子的上游。在其優選的實施方案中，所述具有抗阻抑物活性的序列與所述啟動子間隔少于2kb。在某些實施方案中，所述編碼感興趣蛋白質的核酸存在于多順反子基因中，所述多順反子基因進一步編碼可選擇標記基因。在某些實施方案中，所述細胞是哺乳動物細胞，例如CHO細胞。本發明還提供了選自如下一組的具有抗阻抑物活性的核酸序列在增加感興趣核酸表達中的應用a)SEQ.ID.NO.66；b)SEQ.ID.NO.66的片段，其中所述片段具有抗阻抑物活性；c)與a)或b)核苷酸序列至少70％相同的序列，其中所述序列具有抗阻抑物活性；及d)與a)-c)任一序列互補的序列。另一方面，本發明提供了一種產生表達兩種感興趣多肽的宿主細胞的方法，所述方法包括a)向宿主細胞中導入一或多種核酸分子，所述一種核酸分子或多種核酸分子一起包含(i)與編碼第一種感興趣多肽和第一種可選擇標記基因的序列功能性連接的啟動子，及(ii)與編碼第二種感興趣多肽和第二種可選擇標記基因的序列功能性連接的啟動子，及(iii)具有抗阻抑物活性的至少一個序列，選自(a)SEQ.ID.NO.1-66任一序列，(b)SEQ.ID.NO.1-66任一序列的片段，所述片段具有抗阻抑物活性，(c)與(a)或(b)至少70％相同并具有抗阻抑物活性的序列，及(d)與(a)-(c)任一序列互補的序列；b)通過基本上同時選擇表達所述第一種和第二種可選擇標記基因而選擇宿主細胞。本發明還提供了表達兩種感興趣多肽的方法，所述方法包括培養通過本發明的方法獲得的宿主細胞以表達所述第一種和第二種多肽，及任選分離所述多肽。在一個實施方案中，所述具有抗阻抑物活性的序列選自a)SEQ.ID.NO.66，b)SEQ.ID.NO.66的片段，其中所述片段具有抗阻抑物活性，c)與a)或b)核苷酸序列至少70％相同的序列，其中所述序列具有抗阻抑物活性，及d)與a)-c)任一序列互補的序列。在某些實施方案中，所述兩種多肽是多聚體蛋白質的一部分。發明詳述抗阻抑物序列本發明使用的具有抗阻抑物活性的序列是當HP1或HPC2蛋白質與DNA結合(tether)時，能至少部分抵消這些蛋白質的阻抑作用的序列。適于本發明的具有抗阻抑物活性的序列(在本文有時也稱作抗阻抑物序列或者抗阻抑物元件)在WO03/004704中揭示，其并入本文參考，在該文章中將其稱作STAR序列(在本文中無論什么情況下將一序列稱作STAR序列，則該序列具有本發明的抗阻抑物活性)。作為非限制性的例子，稱作STAR1-65的65個抗阻抑物元件的序列(見WO03/004704)在本文分別以SEQ.ID.NO.1-65表示。根據本發明，一指定抗阻抑物元件的功能性片段或衍生物當其仍具有抗阻抑物活性時，被認為與所述抗阻抑物元件等同。這種抗阻抑物活性的存在可易于由本領域技術人員例如通過下述分析而檢測。功能性片段或者衍生物可易于由分子生物學領域技術人員通過用指定的抗阻抑物序列起始產生缺失、添加、取代、翻轉等而獲得(見例如WO03/004704)。功能性片段或者衍生物還包含其它物種的直向同源物(ortholog)，其可以被本領域技術人員通過已知方法使用已知的抗阻抑物序列發現(見例如WO03/004704)。因此，本發明涵蓋抗阻抑物序列的片段，其中所述片段仍具有抗阻抑物活性。對于指定序列的片段，相同性百分比是指在該片段中發現的參考天然序列的部分。本發明還涵蓋與所述具有抗阻抑物活性的序列或其具有抗阻抑物活性的功能片段在核苷酸序列水平至少70％相同的序列，只要這些至少70％相同的序列仍具有本發明的抗阻抑物活性。優選地，所述序列與參考天然序列或其功能片段至少80％相同、更優選至少90％相同、更優選至少95％相同。根據本發明具有抗阻抑物活性的序列可以通過多種方法獲得，包括但不限于從人基因組或者另一種生物體的基因組中克隆，或者通過例如利用對序列的了解例如通過PCR從這種基因組中直接擴增已知抗阻抑物序列，或者可以部分或全部化學合成。具有抗阻抑物活性的序列或其功能片段或衍生物在本發明通過其序列在結構上加以限定，另外限定為具有抗阻抑物活性的序列進行功能性限定，使用下文所述分析確定。本發明的具有抗阻抑物活性的任何序列應至少能通過如下的功能分析(見WO03/004704，實施例1，并入本文作參考)。將人U-2OS細胞(ATCCHTB-96)用pTet-Off質粒(ClontechK1620-A)及用編碼含有LexADNA結合結構域和HP1或HPC2編碼區的LexA-阻抑物融合蛋白的核酸(當與DNA結合時抑制基因表達的果蠅Polycomb群蛋白質；該分析對任一融合蛋白質均起作用)，在Tet-Off轉錄調節系統(GossenandBuiard，1992)控制下穩定轉染。這些細胞在下文抗阻抑物活性分析中稱作報道細胞。提供潮霉素抗性的報道質粒位于四個LexA操縱基因位點與控制zeocin抗性基因的SV40啟動子之間含有一個多接頭序列。可以將測試抗阻抑物活性的序列克隆在所述多接頭中。合適的報道質粒如pSelect的構建在WO00/004704的實施例1和圖1中描述。將該報道質粒轉染進報道細胞中，將該細胞在潮霉素選擇(25μg/ml；針對報道質粒的存在而選擇)和四環素抑制(強力霉素，10ng/ml；防止LexA-阻抑物融合蛋白表達)下培養。在這些條件下生長一周后，將強力霉素的濃度降低至0.1ng/ml(或更低)以誘導LexA-阻抑物基因，兩天后加入250μg/ml的zeocin。將細胞培養5周，直至對照培養物(用空白報道質粒轉染，即在多接頭中沒有克隆的抗阻抑物序列)被zeocin殺死(在這個對照質粒中，SV40啟動子被與LexA操縱位點結合的LexA-阻抑物融合蛋白抑制，導致在這種細胞中無效的zeocin表達，以在zeocin選擇中存活)。如果一個序列克隆在報道質粒的多接頭中，所述報道細胞在zeocin選擇下存活5周，則所述序列具有本發明的抗阻抑物活性。這種集落的細胞在zeocin選擇5周后仍可以在含有zeocin的新培養基上增殖，而用沒有抗阻抑物序列的報道質粒轉染的細胞在含有zeocin的新培養基上不能增殖。在這個分析中在5周后不能賦予在zeocin上這種生長的任何序列不能認為是本發明具有抗阻抑物活性的序列或者其功能片段或者功能衍生物。例如，已知的邊界序列如VanderVlag等(2000)測試的那些序列，包括果蠅scs(KellumandSchedl，1991)、雞β-球蛋白基因座的5’-HS4(Chungetal，1993，1997)或者MatrixAttachmentRegions(MARs)(Phi-Vanetal.，1990)，在這個分析中不存活。另外，當與報道基因兩側無抗阻抑物或者具有較弱的阻抑封閉序列如Drosophilascs相對比時，優選位于整合進U-2OS或CHO細胞基因組中的報道基因(例如熒光素酶，GFP)兩側的所述抗阻抑物序列或者其功能片段或者衍生物產生較高比例的報道基因過表達克隆。這可以使用例如pSDH載體或者相似的載體證實，如WO03/004704的實施例1和圖2所述。本發明的抗阻抑物元件可具有生產蛋白質的三個結果的至少一個(1)在工業可接受水平提高鑒別表達蛋白質的宿主細胞系的可預測性；(2)使得宿主細胞系的蛋白質產量增加；和/或(3)使得宿主細胞系在延長的培養期間呈現更穩定的蛋白質產生。這些特性在下文更詳細地論述(1)可預測性提高轉基因表達盒的整合可以在整個宿主細胞基因組的隨機位置發生。然而，許多基因組是轉錄沉默的異染色質。當所述表達盒在轉基因兩側包括抗阻抑物元件時，整合的位置對表達具有減弱的作用。所述抗阻抑物元件削弱相鄰異染色質使轉基因沉默的能力。因此，含有可接受表達水平的轉基因的宿主細胞比例增加。當轉染同量的DNA時，抗阻抑物序列的摻入與無抗阻抑物序列的相同轉基因相比確實導致多至10倍的集落建立。(2)產量在轉基因整合后立即測定原始重組宿主細胞群中蛋白質的表達水平。群體中的個體表達水平不同。然而，當所述轉基因被抗阻抑物元件保護時，可變性降低。這種降低的可變性在回收低水平表達的較少克隆中是最顯著的。另外，具有抗阻抑物元件的群體通常具有顯著高水平表達的個體。這些高產量的個體對于蛋白質的產生是有利的，無論對于收獲還是改變細胞或者包含這種細胞的生物體的表型均有利。(3)增加的穩定性抗阻抑物元件增加重組宿主細胞系中轉基因的穩定性，通過保證轉基因在延長的培養期間不被轉錄沉默而實現。對比試驗表明，在未被抗阻抑物元件保護的轉基因逐漸沉默的條件下(5-25傳代培養)，抗阻抑物元件保護的轉基因持續高水平表達。這在蛋白質樣分子的工業化生產期間是有利的，在此期間細胞培養時間持續延長，從幾周延長至幾個月。相似地，延長期間的表達穩定性在由于抗阻抑物保護的轉基因的重組表達而產生的表型改變的植物或動物中是有利的。STAR67本發明提供了具有抗阻抑物活性的新序列，其被稱作STAR67(SEQ.ID.NO.66)。當將這種抗阻抑物序列置于驅動感興趣基因表達的啟動子的上游時明顯增加表達，如本發明提供的實施例所揭示，而迄今為止已知的有效抗阻抑物序列如STAR6或者STAR7看起來在這種構型中不太有利(它們特別在位于在轉基因兩側時起作用，即當位于轉基因的上游和下游時)。因此，STAR67提供了已知的抗阻抑物序列的一種替代，當其被置于啟動子上游時與已知的這類抗阻抑物序列相對比時具有增加的益處。STAR67不是增強子-阻斷劑，與測試這種性質的其它抗阻抑物序列相反(Kwaksetal，2003)，其提供了STAR67與其它以前公開的抗阻抑物序列之間的另一種不同之處。STAR67可以雙向方式操縱，如實施例7所示。根據本發明，表達盒中STAR67序列的存在提供了改良的可預測性和/或產量和/或表達穩定性。本發明論證了STAR67與多種啟動子組合在不同細胞系中起作用。表達盒本發明的核酸分子，包括STAR67，可以是任何形式，例如是DNA片段，任選存在于克隆載體如質粒、優選表達載體上，并且可用于例如使用標準重組DNA技術進行克隆。在本發明優選的實施方案中，核酸包含表達盒，其可用于在例如宿主細胞中表達感興趣的序列。如本文所用，“表達盒”是指包含與希望表達的序列功能性連接的至少一個啟動子的核酸序列，希望表達的序列優選是編碼全部或部分感興趣蛋白質的開放讀框。所述啟動子優選對于所述感興趣核酸而言是異源啟動子，異源啟動子是指不是所述感興趣序列的天然啟動子的啟動子。換而言之，已經使用了一些人類干預形式例如分子克隆將異源啟動子與感興趣核酸功能組合，在本文中異源啟動子可以衍生自與感興趣序列相同或者不同的生物體。優選地，表達盒進一步含有轉錄終止和聚腺苷酸化序列。也可以包括其它調節序列如增強子。本發明的表達單位進一步包含至少一個抗阻抑物序列，如STAR67。在某些優選的實施方案中，所述抗阻抑物序列，優選STAR67，被置于所述啟動子的上游，優選所述抗阻抑物序列的3’末端與啟動子序列起始點之間間隔少于2kb。在優選的實施方案中，所述抗阻抑物序列的3’末端與啟動子序列的起始點之間間隔少于1kb，更優選少于500個核苷酸(nt)，更優選少于大約200、100、50或者30個nt。在某些優選的實施方案中，所述抗阻抑物序列直接克隆在啟動子的上游，導致抗阻抑物序列的3’末端與啟動子序列起始點之間僅間隔大約0-20個nt。為了獲得編碼重組蛋白質的核酸序列的表達，本領域技術人員熟知可以將能驅動這種表達的序列與編碼所述蛋白質的核酸序列功能性連接，產生可表達形式的編碼重組蛋白質的重組核酸分子。通常，所述啟動子序列置于編碼感興趣蛋白質的序列的上游。可用的表達載體可在本領域獲得，例如Invitrogen的pcDNA和pEF載體系列，BDSciences的pMSCV和pTK-Hyg，Stratagene的pCMV-Script等等。在編碼感興趣多肽的序列正確插入控制編碼的多肽的轉錄和翻譯的序列中的情況中，所得表達盒可用于產生感興趣蛋白質，這即稱作表達。驅動表達的序列可包括啟動子、增強子等，及其組合。這些序列應能在宿主細胞中起作用，從而驅動與其功能性連接的核酸序列的表達。本領域技術人員知道可以使用多種啟動子獲得感興趣基因在宿主細胞中的表達。啟動子可以是組成型或者被調節的，可以得自多種來源，包括病毒、原核生物或者真核生物來源，或者是人工設計的。感興趣核酸的表達可以從天然啟動子或其衍生物或者從完全異源的啟動子中表達(Kaufman，2000)。用于在真核細胞中表達的一些熟知和常用的啟動子包含衍生自病毒如腺病毒的啟動子，例如E1A啟動子，衍生自巨細胞病毒(CMV)的啟動子，如CMV立即早期(IE)啟動子(在本文稱作CMV啟動子)(可得自例如pcDNA，Invitrogen)，衍生自猿猴病毒40(SV40)的啟動子(Dasetal，1985)等等。合適的啟動子也可以衍生自真核細胞，如金屬硫蛋白(MT)啟動子，延伸因子1a(EF-1α)啟動子(Gilletal.，2001)，遍在蛋白C或UB6啟動子(Gilletal.，2001；Schorppetal，1996)，肌動蛋白啟動子，免疫球蛋白啟動子，熱激啟動子等等。適合本發明的在真核細胞中獲得表達的一些優選啟動子是CMV啟動子，哺乳動物EF1-α啟動子，哺乳動物遍在蛋白啟動子如遍在蛋白C啟動子，或者SV40啟動子(例如可得自pIRES，cat.no.631605，BDSciences)。測試啟動子功能和強度由本領域技術人員常規進行，通常可例如包括在啟動子序列之后克隆一個測試基因如lacZ、熒光素酶、GFP等，并測試該測試基因的表達。當然，啟動子可以通過對序列進行缺失、添加、突變而改變，并測試其功能性以發現新的弱化的或者改良的啟動子序列。本發明的表達盒可以是單順反子、雙順反子或者多順反子的。術語“雙順反子基因”是指能提供編碼兩種蛋白質/多肽的RNA分子的基因。術語“單順反子基因”是指能提供編碼一種蛋白質/多肽的RNA分子的基因。術語“多順反子基因”是指能提供編碼兩或多種蛋白質/多肽的RNA分子的基因，雙順反子基因因此包含在多順反子基因的范疇內。本發明所用術語“基因”可包含染色體DNA，cDNA，人工DNA，其組合等，并且也可以是其它核酸形式，例如RNA。在某些實施方案中，蛋白質表達單位包含一個多順反子基因。包含一些順反子的單位可以轉錄為單一mRNA。該RNA上存在的第二個及其它編碼區的翻譯可以多種方式實現，包括使用翻譯再引發位點或者內在核糖體進入位點，優選后者。雙或多順反子單位的一個優勢是可以易于選擇表達感興趣蛋白質的克隆，通過將編碼可選擇標記蛋白的核酸置于編碼感興趣蛋白質或多肽的核酸下游而進行。對于多聚體蛋白質的產生，可以使用兩或多個表達盒。這個實施方案經證實提供良好結果，例如抗體重鏈和輕鏈的表達。根據本發明，至少一種表達盒，但優選每種表達盒，均應包含STAR序列。在另一個實施方案中，多聚體蛋白質的不同亞單位或部分存在于一個表達盒中。代替或除了置于表達盒中啟動子上游的抗阻抑物序列的存在之外，在表達盒的兩側具有抗阻抑物序列經證實是非常有益的，這樣包含轉基因的表達盒的兩側具有兩個抗阻抑物序列，這兩個序列在某些實施方案中基本上彼此相同。當然，這也可以用STAR67進行，獲得在兩側具有兩個STAR67序列的表達盒。表達盒中一個STAR67序列的其它位置例如在轉基因之后也是可能的，優選在轉錄終止和聚腺苷酸化信號之后，STAR67序列的3’末端面對轉基因。本發明的表達盒可任選包含一個選擇標記基因。術語“選擇標記或者可選擇標記”典型用于描述其存在可以直接或者間接在細胞中檢測的基因和/或蛋白質，例如使選擇劑失活并且保護宿主細胞免于該制劑的致死或者生長抑制作用的基因和/或蛋白質(例如抗生素抗性基因和/或蛋白質)。另一種可能性是所述選擇標記誘導熒光或者顏色沉積(例如綠色熒光蛋白及衍生物，熒光素酶，lacZ，堿性磷酸酶等等)。在某些實施方案中，用于本發明的選擇標記是zeocin，對于選擇第二種表達盒使用嘌呤霉素。本領域技術人員已知可以獲得及利用其它選擇標記，例如新霉素、殺稻瘟素、嘌呤霉素、博來霉素、潮霉素、dhfr等等。術語“選擇”典型是指使用選擇標記/可選擇標記和選擇劑鑒別具有特殊遺傳性質的宿主細胞的過程(例如宿主細胞含有整合進其基因組中的轉基因)。本領域技術人員明白可以將選擇標記組合。可能的抗生素例子如上文提供。特別有利的一種抗生素是zeocin，因為zeocin-抗性蛋白(zeocin-R)通過結合藥物并使其無害而起作用。因此，易于滴定測定殺死低水平表達zeocin-R的細胞的藥物量，同時使得高水平表達的細胞存活。常用的所有其它抗生素抗性蛋白是酶，并因此通過催化起作用(與藥物不是1∶1)。當進行兩步選擇時，因此優選使用具有這種1∶1結合作用模式的抗生素抗性蛋白。因此，抗生素zeocin是優選的選擇標記。為方便起見，在兩步選擇方法中，zeocin抗生素可以組合例如嘌呤霉素、殺稻瘟素或者潮霉素，例如可存在于單順反子基因中。也可以將抗生素選擇標記與提供誘導熒光或者提供顏色沉積的選擇標記組合。可以使用不同的啟動子，只要其在使用的細胞中起作用即可。在某些實施方案中，提供了一種表達盒，其在例如感興趣蛋白質的開放讀框與選擇標記開放讀框之間具有(弱)內在核糖體結合位點(IRES)作為具有降低翻譯效力的蛋白質翻譯起始位點的例子。蛋白質從IRES元件中的翻譯比帽依賴性翻譯的效力低從IRES依賴性開放讀框(ORF)中翻譯的蛋白質的量比從第一個ORF中翻譯的蛋白質的量低20％-50％(Mizuguchietal.，2000)。另外，IRES元件的突變可以使其活性弱化，并使從IRES依賴性ORF中的表達降低至低于從第一個ORF中表達的10％(LopezdeQuinto&Martinez-Salas，1998，Reesetal.，1996)。當IRES依賴性ORF編碼一種可選擇標記蛋白時，其相對低翻譯水平意味著必須存在絕對高的轉錄水平以選擇重組宿主細胞。因此，選擇的重組宿主細胞分離株必需表達高量的轉基因mRNA。因為重組蛋白質是從帽依賴性ORF中翻譯的，因此其可以大量產生，導致高產物產量。常規的表達系統是重組質粒或者重組病毒基因組形式的DNA分子。通過本領域已知方法將質粒或者病毒基因組導入(真核宿主)細胞中，并優選整合進其基因組中。在優選的實施方案中，本發明還使用這些類型的DNA分子輸送其改良的轉基因表達系統。本發明的一個優選實施方案是使用質粒DNA輸送表達系統。質粒含有許多成分本領域已知的常規成分是復制起點和可選擇標記以使得質粒在細菌細胞中增殖；在真核細胞中起作用以鑒別和分離攜帶整合的轉基因表達系統的宿主細胞的可選擇標記；編碼感興趣蛋白質的核酸，其高水平轉錄通過在真核細胞中起作用的啟動子進行(例如人巨細胞病毒主要立即早期啟動子/增強子，pCMV(Boshartetal.，1985)；及感興趣的轉基因和可選擇標記的轉錄終止子(例如SV40聚腺苷酸化位點(Kaufman&Sharp，1982)。使用的載體可以是適于克隆DNA并且可用于轉錄感興趣核酸的任何載體。當使用宿主細胞時，優選所述載體是一種整合載體。或者，所述載體可以是附加型復制載體。圖1提供了表達盒的可能構型的一些非限制性示意圖。這是質粒中以及整合進基因組中之后表達盒的DNA元件的構型。構建體A含有包含編碼蛋白質的開放讀框的一個表達單位(基因)。其位于弱化的EMCVIRES(Martinez-Salasetal1999；Mizuguchietal2000；Reesetal1996)和編碼zeocin抗性可選擇標記蛋白(zeo)的開放讀框的上游。所述基因盒在其3’末端具有SV40轉錄終止子(t)。這種雙順反子轉基因從CMV啟動子中高水平轉錄。構建體B衍生自構建體A，但是將STAR67克隆在CMV啟動子的上游。構建體C衍生自構建體B，但是將兩種抗阻抑物元件(在這種情況中是STAR7)克隆在完整表達盒的兩側。表達盒中抗阻抑物序列的組合本發明示出組合啟動子上游的第一個抗阻抑物元件及表達盒兩側的兩個其它抗阻抑物序列提供了極佳的結果。特別地，當在CHO細胞中使用SV40啟動子時，在沒有抗阻抑物序列的條件下表達已經非常高，但是當將STAR67置于所述啟動子上游及在完整表達盒兩側具有兩個抗阻抑物元件如STARβ、STAR7或STAR40時，表達顯著增強。因此，本發明的一個目的是提供包含表達盒的重組核酸分子，所述表達盒包含(從5’至3’)抗阻抑物序列A-啟動子-編碼感興趣蛋白質的核酸-抗阻抑物序列B，特征在于所述表達盒在所述抗阻抑物序列A與B之間進一步包含一個抗阻抑物序列C。在一個優選的實施方案中，所述抗阻抑物序列C存在于所述啟動子的上游，如上述標題為“表達盒”的段落中描述的構型。抗阻抑物序列A與B之間的表達盒可進一步包含如上述表達盒的元件，例如轉錄終止子序列、聚腺苷酸化信號、選擇標記基因、增強子等等，并且可以是如上述單順反子、雙順反子或者多順反子。抗阻抑物序列A、B和C的兩個或所有三個可以相同或所有三個可以不同。抗阻抑物序列A和B可以與抗阻抑物序列C相同或不同。在某些實施方案中，抗阻抑物序列A和B彼此(基本)相同。在一個實施方案中，抗阻抑物序列C是STAR67或者其功能片段或衍生物。抗阻抑物序列A和B可以是任何抗阻抑物序列，在某些實施方案中包含SEQ.ID.NO.1-65之一或其功能片段或衍生物。在某些實施方案中，表達盒含有一個多順反子基因，在其優選的實施方案中，所述多順反子基因包含編碼感興趣蛋白質和選擇標記基因的序列。或者，選擇標記基因在單獨的啟動子控制下存在。在某些實施方案中，在STAR序列A與B之間可以存在第四個抗阻抑物序列D。在這種實施方案中，所述抗阻抑物序列D優選位于編碼感興趣蛋白質的核酸的下游。再者，這個抗阻抑物序列D與重組核酸分子中的其它抗阻抑物序列可以相同或不同，其可以是任何抗阻抑物序列，在某些實施方案中其選自SEQ.ID.NO.1-66任一序列或其功能片段或衍生物。由于至少一些抗阻抑物序列可以是有方向的(WO00/004704)，因此在表達盒兩側的抗阻抑物序列(抗阻抑物序列A和B)可以彼此相反方向放置，由此這些抗阻抑物的3’末端向內面向表達盒(及彼此向內面向)。因此，在優選的實施方案中，抗阻抑物元件的5’末端面向DNA/染色質，其對轉基因的影響通過所述抗阻抑物元件而降低。對于表達盒中啟動子上游的抗阻抑物序列而言，3’末端面向啟動子。除非特別指出，則序列表中的抗阻抑物元件的序列(SEQ.ID.NO.1-66)是以5’至3’方向提供的。本發明的細胞包含本發明的STAR序列和/或表達盒的核酸分子可用于改良核酸的表達，優選在宿主細胞中的表達。術語“細胞‘V’宿主細胞”及“細胞系‘V’宿主細胞系”典型分別是指通過本領域已知的方法在細胞培養中可以保持并且具有表達異源或者同源蛋白質的能力的細胞及其同種群。本發明的宿主細胞優選是真核細胞，更優選是哺乳動物細胞，如嚙齒動物細胞或者人細胞或者不同細胞的融合體。在某些非限制性實施方案中，所述宿主細胞是U-2OS骨肉瘤、CHO(中國倉鼠卵巢)、HEK293、HuNS-1骨髓瘤、WERI-Rb-1成視網膜細胞瘤、BHK、Vero、非分泌性小鼠骨髓瘤Sp2/0-Ag14、非分泌性小鼠骨髓瘤NSO、NCI-H295R腎上腺癌或者PER.C6細胞。在本發明的某些實施方案中，宿主細胞是表達腺病毒的至少E1A、優選也表達E1B的細胞。作為非限制性的例子，這種細胞可以衍生自例如人體細胞，例如衍生自腎(例如HEK293細胞，見Grahametal，1977所述)、肺(例如A549，見例如WO98/39411所述)或者視網膜(例如HER細胞，商品名為PER.C6，見美國專利5,994,128所述)，或者衍生自羊水(例如N52.E6，見美國專利6,558,948所述)及相似地衍生自其它細胞。獲得這種細胞的方法見例如美國專利5,994,128和US6,558,948所述。本發明應用的PER.C6細胞是在ECACC保藏號為96022940的細胞的上游或下游傳代或者上游或下游傳代的后代。先前已經示出這種細胞能高水平表達蛋白質(例如WO00/63403及Jonesetal，2003所述)。表達本發明所需蛋白質的這種宿主細胞可以通過將本發明的核酸分子、優選表達盒形式導入細胞中而獲得。在另一個實施方案中，將STAR67序列定向整合進染色體區域中以改良已經整合進該基因組中的感興趣基因的表達，例如天然發生的基因，任選在靶向所述基因上游的異源啟動子控制下調節所述基因的表達。優選地，所述宿主細胞來自可以根據本領域技術人員已知的標準方法選擇和增殖的穩定克隆。這種克隆的培養物能產生感興趣的重組蛋白質。本發明的細胞優選能在無血清的培養基中懸浮生長。本發明的感興趣蛋白質可以是任何蛋白質，可以是單體蛋白質或者多聚體蛋白質。多聚體蛋白質包含至少兩個多肽鏈。感興趣蛋白質的非限制性例子是酶、激素、免疫球蛋白鏈、治療性蛋白質如抗癌蛋白質、血液凝聚蛋白如因子VIII，、多功能蛋白質如紅細胞生成素、診斷性蛋白質、或者用于接種目的的蛋白質或其片段，所有這些蛋白質均為本領域技術人員所已知。在某些實施方案中，本發明的表達盒編碼免疫球蛋白重鏈或輕鏈或其抗原結合部分、衍生物和/或相似物。在一個優選的實施方案中，提供了本發明的蛋白質表達單位，其中所述感興趣蛋白質是免疫球蛋白重鏈。在另一個優選的實施方案中，提供了本發明的蛋白質表達單位，其中所述感興趣蛋白質是免疫球蛋白輕鏈。當這兩種蛋白質表達單位存在于同一(宿主)細胞中時，裝配成多聚體蛋白質，更特別地裝配成抗體。因此在某些實施方案中，感興趣蛋白質是免疫球蛋白，如抗體，其是多聚體蛋白質。優選地，這種抗體是人或人源化抗體。在其某些實施方案中，這種抗體是IgG、IgA或者IgM抗體。免疫球蛋白可以由不同表達盒或者一個表達盒上的重鏈和輕鏈編碼，其中編碼每個鏈的基因可以在多順反子轉錄單位中單獨啟動子的控制下，或者這兩個鏈均可在多順反子基因上編碼。感興趣蛋白質可以來自任何來源，在某些實施方案中是哺乳動物蛋白質，人工蛋白質(例如融合蛋白或者突變蛋白)，優選是人蛋白質。顯而易見，當最終的目的不是生產蛋白質而是RNA自身時，也可以使用本發明的抗阻抑物序列和表達盒構型，例如從表達盒中生產增加數量的RNA，這可用于調節其它基因(例如RNAi，反義RNA)、基因治療、體外蛋白質產生等目的。生產感興趣蛋白質的方法一方面，本發明提供了一種表達感興趣序列、優選編碼感興趣蛋白質的序列的方法，通過提供具有本發明的核酸分子或者表達盒的宿主細胞、培養該細胞并表達感興趣序列而進行。術語“表達”典型用于描述細胞中特異的一或多種RNA產物或者特異的一或多種蛋白質的產生。在RNA產物的情況中，表達是指轉錄過程。在蛋白質產物的情況中，表達是指轉錄、翻譯及任選翻譯后修飾(例如糖基化、二硫鍵形成等)的過程。在分泌的蛋白質的情況中，表達是指轉錄、翻譯、及任選翻譯后修飾及隨后的分泌過程。導入要在細胞中表達的核酸可以通過如本領域技術人員已知的幾種方法之一進行，也依賴于導入的核酸的形式。所述方法包括但不限于轉染、感染、注射、轉化等。對細胞進行培養是使其能代謝和/或生長和/或分裂和/或產生感興趣的重組蛋白質。這種培養可以通過本領域技術人員熟知的方法實現，包括但不限于為細胞提供營養。所述方法包括附著在表面生長、懸浮生長或其組合。培養可以例如在培養皿、滾瓶或者在生物反應器中進行，使用分批培養、補料分批培養、持續系統如灌注系統等方式進行。為了達到在細胞培養期間大規模(持續)產生重組蛋白質，優選使細胞能懸浮生長，及優選使細胞能在無得自動物或人的血清或者得自動物或人的血清成分的條件下培養。生長或者繁殖細胞的條件(見例如TissueCulture，AcademicPress，KruseandPaterson，editors(1973))及表達重組產物的條件為本領域技術人員所已知。通常，使哺乳動物細胞培養物的生產力最大化的原理、方案及實踐技術可見于MammalianCellBiotechnologyaPracticalApproach(M.Butler，ed.，IRLPress，1991)所述。在一個優選實施方案中，從細胞或者培養基或者這兩者中收集(分離)表達的蛋白質。然后使用本領域技術人員通常已知的方法進一步純化，例如通過過濾、柱層析等。新的選擇方法本發明揭示了一種產生表達兩種感興趣多肽的宿主細胞的新方法，所述方法提供了令人驚奇的良好結果，不使用抗阻抑物序列則幾乎沒有或沒有集落出現，而存在抗阻抑物序列則導致克隆在選擇下存活，這些克隆通常高水平表達感興趣的兩種多肽(實施例7，圖11)。本發明因此提供了一種產生表達兩種感興趣多肽的宿主細胞的方法，所述方法包括a)向宿主細胞中導入一或多種核酸分子，所述核酸分子包含(i)與編碼第一種感興趣多肽和第一種可選擇標記基因的序列功能性連接的啟動子，及(ii)與編碼第二種感興趣多肽和第二種可選擇標記的序列功能性連接的啟動子，及(iii)至少一種抗阻抑物序列，其選自(a)SEQ.ID.NO.1-66任一序列，(b)SEQ.ID.NO.1-66任一序列的片段，所述片段具有抗阻抑物活性，(c)與(a)或(b)至少70％相同并具有抗阻抑物活性的序列，及(d)與(a)-(c)任一序列互補的序列；b)通過基本上同時選擇表達所述第一種和第二種可選擇標記基因而選擇宿主細胞。選擇的宿主細胞可便利地用于表達所述兩種多肽，通過培養所述選擇的宿主細胞進行。在一個實施方案中，兩種核酸分子用于導入宿主細胞中，所述分子之一含有(i)，另一分子含有(ii)。在這個實施方案中，每個核酸分子優選含有至少一種所述抗阻抑物序列。在另一個實施方案中，使用含有(i)和(ii)兩者的一個核酸分子，其然后必須含有至少一個所述抗阻抑物序列。在一個核酸分子上具有這兩種多肽的編碼序列的一個優勢是在將核酸導入細胞之前僅需要一種核酸制品。另外，在這種實施方案中，一次整合對于兩種多肽的編碼序列即足夠，從而避免了編碼第一種多肽的核酸與編碼第二種多肽的核酸整合位置不同或者具有不同拷貝數的可能性。在優選的實施方案中，所述兩種多肽可以形成多聚體蛋白質如免疫球蛋白的部分。所述方法因此特別適于表達抗體。所述兩個啟動子可以相同或不同，可以是前述任何啟動子。當使用含有(i)和(ii)兩者的一個核酸分子時，這一個核酸分子上的兩個轉錄單位的方向可例如是同向的或者彼此面向反向或者彼此向外反向的。在后者情況中，所述抗阻抑物序列可以置于兩個啟動子之間(例如圖HB所示)。適合本發明這方面的一個抗阻抑物序列是SEQ.ID.NO.66(見實施例7)，但是其它抗阻抑物序列也可以起作用。這可易于由本領域技術人員使用本文揭示的方法測試，因此本發明這方面使用其它抗阻抑物序列也包含在本發明范圍內。另外，抗阻抑物序列可以添加在一或兩個轉錄單位兩側。標記基因必須是不同的，可例如選自如前述的標記基因。在某些實施方案中，一種可選擇標記是zeocin，另一可選擇標記是例如嘌呤霉素。然而，應清楚可以使用其它組合，這也包含在本發明這方面范圍內。標記的表達應優選依賴于感興趣多肽的表達。這可以通過將標記基因的表達與感興趣多肽的表達聯系起來而建立，例如使用多順反子基因進行，例如使用如前述IRES序列。“基本上同時”選擇是指至少在部分時間、優選至少一天、更優選至少兩天、更優選至少五天，這兩種選擇劑均存在，這可以通過將這兩種選擇劑同時加入培養基中或者加入包含這兩種選擇劑的培養基而進行(例如實施例7所述)。應清楚在第一種選擇劑已經存在于培養基中之后只是幾小時或幾天加入第二種選擇劑在本發明仍意味著是基本上同時選擇。這種情況有別于其中將細胞首先用第一種選擇劑選擇，一旦集落形成則將細胞在加入了第二種選擇劑而沒有第一種選擇劑的新的培養基上選擇的情況(連續選擇，例如實施例5和WO03/106684所述)。通過基本上同時選擇這兩種可選擇標記，本發明令人驚奇地提供了快速和強力的選擇，從而消除了許多低產量的克隆，明顯降低了發現具有所需表達特性的克隆的工作量。這對于生物技術工業特別有利，該行業在鑒別具有高表達水平的所需克隆之前通常需要篩選幾百甚至幾千個集落。另外，該系統提供了測試抗阻抑物元件、至少STAR67但也可以是其它抗阻抑物序列在這個系統中起作用的部分的功能性的可能性。這個簡單篩選在許多情況中提供了幾乎或者甚至完全顯而易見的差異，因此有助于鑒別抗阻抑物序列的功能部分或衍生物，和/或有助于鑒定新的抗阻抑物序列。所述篩選甚至可用于發現新的抗阻抑物和/或表達增強序列(因為這種類型的篩選不是僅針對抗阻抑物活性而是針對增強表達的活性進行選擇，因此其也可以發現具有后者而非前者活性的序列)。因此，本發明的另一方面提供了一種鑒別抗阻抑物和/或表達增強序列或其功能片段或衍生物的方法，所述方法包括a)向宿主細胞中導入一或多種核酸分子，所述一種核酸分子或多種核酸分子一起包含(i)與第一種可選擇標記基因功能連接的啟動子，及(ii)與第二種可選擇標記功能連接的啟動子，及(iii)要測試抗阻抑物和/或表達增強活性的至少一個序列；b)通過基本同時選擇所述第一種和第二種可選擇標記基因的表達選擇宿主細胞。經過這種篩選存活的細胞很可能含有功能性抗阻抑物和/或表達增強元件。然后對這種元件可易于進一步分析，例如通過確定其序列和/或通過將其進行如上述抗阻抑物活性的其它功能測試而分析。在一個實施方案中，(i)和(ii)均在一個核酸分子上，例如由啟動子分隔(第一個和第二個可選擇標記向外反向)，在此之間可以克隆測試序列以進行分析。優選地，所述可選擇標記基因不是高表達的，例如通過使用相對弱啟動子直接驅動可選擇標記基因，所述相對弱啟動子是已知的和/或可以由本領域技術人員通過常規分析鑒別，或者例如使用強啟動子進行轉錄，及使用IRES、優選如前述相對弱的IRES翻譯標記基因。所述標記基因也可以便利地置于編碼多肽的核酸序列的下游，并在多順反子基因中例如通過IRES與其表達連接(例如實施例7所述，圖11示出可能的構型)。這種多肽可同樣是感興趣的多肽，由此獲得表達所述感興趣多肽的直接可用克隆，但對于篩選目的也可以是其表達可易于量化的標記，例如GFP或其衍生物、SEAP、lacZ、熒光素酶等等。在這種組合中，多肽的表達可以直接量化以挑選在同時選擇期間提供足夠的集落及提供高轉錄水平的抗阻抑物和/或表達增強元件或其片段。當“隨機”核酸(即仍未知其具有抗阻抑物或表達增強活性的核酸)，例如基因組片段形式，用作測試序列測試抗阻抑物和/或表達增強活性時，可以發現新的抗阻抑物和/或表達增強序列。當測試已知抗阻抑物序列時，這個分析可用于對其進一步鑒定。當測試已知抗阻抑物序列的片段時，所述分析將提供這種已知抗阻抑物序列的功能片段。除非特別指出，實踐本發明應用本領域技術人員已知的免疫學、分子生物學、微生物學、細胞生物學及重組DNA等常規技術。見例如Sambrook，FritschandManiatis，MolecularCloningALaboratoryManual，2ndedition，1989；CurrentProtocolsinMolecularBiology，AusubelFM，etal，eds，1987；theseriesMethodsinEnzymology(AcademicPress，Inc.)；PCR2APracticalApproach，MacPhersonMJ，HamsBD，TaylorGR，eds，1995；AntibodiesALaboratoryManual，HarlowandLane，eds，1988所述。本發明在如下實施例中得以進一步解釋。所述實施例非以任何方式限制本發明。所述實施例只是為了闡明本發明。實施例實施例1STAR67載體的構建使用如WO03/004704所述遺傳篩選方法分離到一種新的抗阻抑物序列，將這個新序列稱作STAR67(SEQ.ID.NO.66)。測試了STAR67對轉基因在哺乳動物細胞中表達的作用。在此我們描述了各種構建體的構建。材料和方法產生三種質粒(圖1)A)CMV-d2EGFP-ires-Zeo(CMV對照)，B)STAR67-CMV-d2EGFP-ires-Zeo(CMV-STAR67)，C)STAR7-STAR67-CMV-d2EGFP-ires-Zeo-STAR7(CMV-STAR677/7)構建體A的構建如下所述。將質粒pd2EGFP(Clontech6010-1)通過在BsiWI位點插入一個接頭而修飾，產生pd2EGFP-link。通過退火寡核苷酸GTACGGATATCAGATCTTTAATTAAG(SEQ.ID.NO.67)和GTACCTTAATTAAAGATCTGATAT(SEQ.ID.NO.68)產生的這一接頭導入PacI、BglII和EcoRV限制性核酸內切酶位點。這樣產生了多克隆位點MCSII用以插入STAR元件。然后使用引物GATCAGATCTGGCGCGCCATTTAAATCGTCTCGCGCGTTTCGGTGATGACGG(SEQ.ID.NO.69)和(AGGCGGATCCGAATGTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGG(SEQ.ID.NO.70)擴增pd2EGFP中的一個0.37kb區域，將其插入在pIRES(Clontech6028-1)的BglII位點，產生pIRES-stuf。這樣在MCSI導入AscI和SwaI限制性核酸內切酶的位點，并且作為“填充片段”避免STAR元件與相鄰啟動子之間的潛在干擾。將pIRES-stuf用BglII和FspI消化以釋放由填充片段、CMV啟動子、IRES元件(兩側為多克隆位點MCSA和MCSB)及SV40聚腺苷酸化信號組成的DNA片段。將這個片段與通過BamHI和StuI消化產生的pd2EGFP-link的載體主鏈連接，產生pIRES-link。如下所述將zeocin抗性基因的開放讀框插入pIRES下游的BamHI/NotI位點通過使用引物GATCGGATCCTTCGAAATGGCCAAGTTGACCAGTGC(SEQ.ID.NO.71)和AGGCGCGGCCGCAATTCTCAGTCCTGCTCCTC(SEQ.ID.NO.72)經PCR從質粒pCMV/zeo(Invitrogen，cat.no.V50120)中擴增zeocin-抗性ORF，用BamHI和NotI消化，并與BamHI/NotI-消化的pIRES-link連接，產生pIRES-link-zeo。將d2EGFP報道ORF導入pIRES-link-zeo中，這通過使用引物GATCGAATTCTCGCGAATGGTGAGCAAGCAGATCCTGAAG(SEQ.ID.NO.73)和AGGCGAATTCACCGGTGTTTAAACTTACACCCACTCGTGCAGGCTGCCCAGG(SEQ.ID.NO.74)擴增pd2EGFP(Clontech6010-1)，及將EcoRI-消化的d2EGFP表達盒插入pIRES-link-zeo質粒中的EcoRI位點而進行。這樣產生構建體A，即CMV-d2EGFP-IRES-Zeo(CMV對照)。將STAR67克隆在CMV啟動子上游AscI位點(在STAR67與啟動子之間保留大約15個核苷酸)。這樣產生構建體B，即STAR67-CMV-d2EGFP-ires-Zeo(CMV-STAR67)。還將STAR67置于還含有STAR7(SEQ.ID.NO.7)的表達盒中進行了測試，所述STAR7被定向克隆在5’SalI和XbaI位點以及3’BglII和PacI位點以使STAR7位于整個表達盒的兩側。這是構建體C(CMV-STAR677/7)。實施例2在穩定轉染的CHO細胞中STAR67增強從CMV、EF1α和UB6啟動子的表達水平我們測試了CMV、EF1α和UB6啟動子鄰近存在STAR67是否影響這些啟動子在CHO細胞中的表達水平。用于這個目的的構建體是實施例1所述的構建體A和B(圖1)，它們針對各自的啟動子進行修飾1CMV-d2EGFP-ires-Zeo(CMV對照)2STAR67-CMV-d2EGFP-ires-Zeo(CMV-STAR67)3EF1α-d2EGFP-ires-Zeo(EF1α對照)4STAR67-EF1α-d2EGFP-ires-Zeo(EF1α-STAR67)5UB6-d2EGFP-ires-Zeo(UB6對照)6STAR67-UB6-d2EGFP-ires-Zeo(UB6-STAR67).材料和方法將圖1所述質粒中的CMV啟動子更換為UB6和EF1α啟動子。UB6啟動子如下克隆。如實施例1所述，將pd2EGFP質粒的0.37kbDNA填充片段經使用SEQ.ID.NO.69和70引物進行PCR擴增。將所得DNA填充片段克隆進pUB6/V5-His[InvitrogenV250-20]的BglII位點，產生pUB6-stuf。從pUB6-stuf中，將一個AscI-SacI片段克隆進CMV-d2EGFP-IRES-Zeo中，從中除去CMV啟動子。用pEF1α/V5-His[InvitrogenV920-20]作為模板使用引物GATCGGCGCGCCATTTAAATCCGAAAAGTGCCACCTGACG(SEQ.ID.NO.79)和AGGCGGGACCCCCTCACGACACCTGAAATGGAAG(SEQ.ID.NO.80)經PCR擴增EF1α啟動子。將PCR片段克隆進CMV-d2EGFP-IRES-Zeo的AscI和PpuMI位點，從中除去CMV啟動子。將中國倉鼠卵巢細胞系CHO-K1(ATCCCCL-61)在HAMS-F12培養基+10％胎牛血清及2mM谷氨酰胺、100U/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素中在37℃/5％CO2條件下培養。使用SuperFect(QIAGEN)根據廠商所述將細胞用質粒轉染。簡而言之，將細胞接種在培養容器中并生長過夜至70-90％鋪滿。將SuperFect試劑與質粒DNA以6μl/μg比率組合(例如對于10cmPetri培養皿，使用20μgDNA和120μlSuperFect)并加入細胞中。在過夜保溫后，將轉染混和物用新鮮培養基置換并進一步保溫轉染的細胞。在過夜培養后，將細胞經胰蛋白酶消化并接種在具有新鮮培養基的新鮮培養容器中。在再次過夜保溫之后，加入zeocin至濃度為50μg/ml并進一步培養細胞。過三天后，將培養基用含有zeocin(100μg/ml)的新鮮培養基置換并進一步培養。當可見各個集落時(大約轉染后10天)，除去培養基，用無zeocin的新鮮培養基更換。分離各個克隆并移至無zeocin的24孔平板中。在分離集落1天后，向培養基中加入zeocin。在轉染后大約3周評定d2EGFP報道基因的表達。兩周后測定集落中的d2EGFP表達水平。當在轉染后最初的兩周后第一次測定d2EGFP時，將集落在無zeocin或者其它抗生素的培養基中培養。這持續至實驗結束。結果圖2示出了與無STAR67的“空白”對照CMV對照相比，含有克隆在CMV啟動子上游的STAR67的構建體的轉染產生了許多表達顯著較高水平d2EGFP蛋白的CHO集落。當在轉染后25天測定時，用CMV對照質粒轉染的10個集落中d2EGFP信號平均值為34。在轉染后60天，這10個集落中d2EGFP信號平均值降低為13，表明表達隨著時間的推移是不穩定的。對比之下，當在轉染后25天測定時用STAR67-CMV質粒轉染的10個集落中d2EGFP信號的平均值為42，在轉染后60天測定時為32。因此在轉染后60天，在穩定轉染的克隆中包含STAR67的CMV構建體比CMV啟動子驅動的報道蛋白表達水平高2.5倍。重要的是在轉染25天后，在第一次測定之后，通過將集落在無zeocin的培養基中培養而除去選擇壓力。因此，含有STAR67構建體的集落在無選擇壓力的條件下與不含STAR67構建體的集落相比隨著時間的推移是更穩定的。圖3示出了與無STAR67的“空白”對照EF1α對照相比，含有克隆在EF1α啟動子上游的STAR67的構建體的轉染產生了表達顯著較高水平d2EGFP蛋白的許多CHO集落。當在轉染后25天測定時，用EF1α對照質粒轉染的10個集落中d2EGFP信號平均值為31。在轉染后60天，這10個集落中信號平均值為26。對比之下，當在轉染后25天測定時用EF1α-STAR67質粒轉染的10個集落中d2EGFP信號的平均值為60，在轉染后60天測定時為76。因此在轉染后25和60天，在穩定轉染的克隆中包含STAR67的EF1α構建體比EF1α啟動子驅動的報道蛋白表達水平高2.9倍。圖4示出了與無STAR67的“空白”對照UB6對照相比，含有克隆在UB6啟動子上游的STAR67的構建體的轉染產生了許多表達顯著較高水平d2EGFP蛋白的CHO集落。當在轉染后25天測定時，用UB6對照質粒轉染的10個集落中d2EGFP信號平均值為51。在轉染后60天，這10個集落中信號平均值為29，表明該表達隨著時間的推移是不穩定的。對比之下，當在轉染后25天測定時用UB6-STAR67質粒轉染的10個集落中d2EGFP信號的平均值為218，在轉染后60天測定時為224。因此在轉染后25天，在穩定轉染的克隆中包含STAR67的UB6構建體比UB6啟動子驅動的報道蛋白表達水平高4.3倍。在60天后高7.7倍，這是由于對照集落的表達不穩定性和UB6-STAR67集落的穩定性所致。重要的是在轉染25天后，在第一次測定后，通過將集落在無zeocin的培養基中培養而除去選擇壓力。因此，含有STAR67構建體的集落在無選擇壓力的條件下與不含有STAR67構建體的集落相比隨著時間的推移是更穩定的。總之，STAR67增加從三種不同的彼此不相關的啟動子的表達。實施例3在穩定轉染的PER.C6細胞中STAR67增強從CMV、EF1α和UB6啟動子的表達水平我們測試了在CMV、EF1α和UB6啟動子鄰近存在STAR67是否影響這些啟動子在除了CHO細胞之外的另一種細胞類型即人PER.C6細胞中的表達水平。使用如實施例1中的相同構建體。材料和方法PER.C6細胞的轉染、培養和分析將PER.Cβ細胞在DMEM培養基+吡哆醇+9％胎牛血清(非加熱而失活)、8.9mMMgCl2、100U/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素中在37℃/10％CO2條件下培養。使用Lipofectamine2000(Invitrogen)如廠商所述將細胞用質粒轉染。簡而言之，將細胞接種在6孔平板中并生長過夜至70-90％鋪滿。將Lipofectamine試劑與質粒DNA以15μl/3μ比g率組合(例如對于10cmPetri培養皿，使用20μgDNA和120μlLipofectamine)，在25℃保溫30分鐘之后加入細胞中。在保溫β小時之后，將轉染混合物用新鮮培養基置換，并進一步保溫轉染的細胞。在培養過夜后，將細胞經胰蛋白酶消化并接種于(1∶15、1∶30、1∶60、1∶120稀釋)新鮮petri培養皿(90mm)中的含有100μg/ml濃度的zeocin的新鮮培養基，進一步培養細胞。當可見集落時，通過刮擦分離各個集落并移至24孔平板中的含有zeocin的培養基中。當生長至大約70％鋪滿時，將細胞移至6孔平板中。將穩定的集落在6孔平板中擴增2周，之后在XL-MCLBeckmanCoulter流式細胞計量儀上確定d2EGFP信號。取d2EGFP信號的平均值作為d2EGFP表達水平的量值。2周后對集落再次測量。之后將集落在無zeocin的條件下進一步培養。結果圖5示出了與無STAR67的“空白”對照CMV對照相比，含有克隆在CMV啟動子上游的STAR67的構建體的轉染產生了許多表達顯著較高水平d2EGFP蛋白的PER.C6集落。當在轉染后30天測定時，用CMV對照質粒轉染的10個集落中d2EGFP信號平均值為37。在轉染后60天，這10個集落中信號平均值降低為14，表明該表達隨著時間的推移是不穩定的。對比之下，當在轉染后30天測定時用STAR67-CMV質粒轉染的10個集落中d2EGFP信號的平均值為101，在轉染后60天測定時為45。因此在轉染后60天，在穩定轉染的克隆中包含STAR67的CMV構建體比CMV啟動子驅動的報道蛋白表達水平高3.2倍。圖6示出與無STAR67的“空白”對照EF1α對照相比，含有克隆在EF1α-啟動子上游的STAR67的構建體的轉染產生了許多表達顯著較高水平d2EGFP蛋白的PER.C6集落。在轉染30天后測定時，用EF1α對照質粒轉染的10個集落中d2EGFP信號的平均值為5。在轉染60天后這10個集落中d2EGFP信號平均值為6。對比之下，當在30天后測定時，用EF1α-STAR67質粒轉染的10個集落中d2EGFP信號平均值為25，在轉染后60天測定時為20。因此，在轉染后30和60天，在穩定轉染的克隆中包含STAR67的EF1α構建體比EF1α啟動子驅動的報道蛋白表達水平高4倍。圖7示出與無STAR67的“空白”對照UB6對照相比，含有克隆在UB6啟動子上游的STAR67的構建體的轉染產生了許多表達顯著較高水平d2EGFP蛋白的PER.C6集落。在轉染30天后測定時，用UB6對照質粒轉染的10個集落中d2EGFP信號的平均值為4。在轉染60天后這10個集落中d2EGFP信號平均值為2。對比之下，當在30天后測定時，用UB6-STAR67質粒轉染的10個集落中d2EGFP信號平均值為27，在轉染后60天測定時為18。因此，在轉染后30和60天，在穩定轉染的克隆中包含STAR67的UB6構建體比UB6啟動子驅動的報道蛋白表達水平高7-9倍。因此，與無STAR67的構建體相對比，將STAR67置于啟動子上游在PER.C6細胞中產生顯著較高的蛋白質表達水平。因此STAR67在不同的彼此不相關的細胞類型中均起作用。實施例4STAR67組合其它抗阻抑物元件的新構型在CHO細胞中增強SV40啟動子我們測試了SV40啟動子鄰近單獨存在STAR67或者存在STAR67與另一種抗阻抑物元件(在這個實施例中是STAR7)的組合是否影響這個啟動子的表達水平。用于這個目的的構建體是(見圖8)1SV40-d2EGFP-ires-Zeo(SV40Control)2STAR67-SV40-d2EGFP-ires-Zeo(SV40-STAR67)3STAR7-SV40-d2EGFP-ires-Zeo-STAR7(SV40-STAR7/7)4STAR7-STAR67-SV40--d2EGFP-ires-Zeo-STAR7(SV40-STAR677/7)材料和方法使用pIRES作模板，使用如下引物將SV40啟動子經PCR擴增TTGGTTGGGGCGCGCCGCAGCACCATGGCCTGAAATAACCTCTGAAAGAGG(SEQ.ID.NO.81)和TTGGTTGGGAGCTCAAGCTTTTTGCAAAAGCCTAGGCCTCCAAAAAAGCCTCCTC(SEQ.ID.NO.82)。將PCR片段克隆進CMV-d2EGFP-IRES-Zeo的AscI和SacI位點，從中除去CMV啟動子。如實施例2所述轉染CHO細胞、分離集落及增殖和分析。結果圖8示出了與無抗阻抑物元件的“空白”對照(SV40對照)相比，含有克隆在SV40啟動子上游的STAR67的構建體(SV40-STAR67)或者含有克隆在完整構建體兩側的STAR7的構建體(SV40-STAR7/7)的轉染不產生表達明顯較高水平d2EGFP蛋白的CHO集落。當在轉染后40天測定時，用SV40對照質粒轉染的18個集落中d2EGFP信號的平均水平為86。對比之下，當在40天后測定用SV40-STAR67質粒轉染的18個集落中d2EGFP信號的平均水平為82，在40天后測定用SV40-STAR7/7質粒轉染的18個集落中信號平均水平為91。因此，觀測到這些抗阻抑物元件對CHO細胞中SV40啟動子無明顯作用。看起來在這些細胞中從SV40啟動子的表達水平已經非常高，甚至高于用被認為是非常強的啟動子的CMV啟動子所觀察到的表達水平。這種在CHO細胞中使用SV40啟動子在無抗阻抑物元件的條件下的高背景表達，可以解釋為什么觀察到單獨的STAR67或者位于轉基因兩側的STAR7無明顯作用。然而，當在40天后測定時，用SV40-STAR677/7質粒轉染的18個集落中d2EGFP信號的平均水平為209，這比18個對照集落的平均水平(86)高2.4倍。因此，當STAR67元件與另一種抗阻抑物元件組合使用時，產生了許多示出顯著較高d2EGFP表達水平的穩定轉染的CHO集落。因此在這種新的構型中(5’-STAR序列A-STAR序列C-啟動子-編碼感興趣蛋白質的核酸-STAR序列B-3’，其中在本實施例中STAR序列A和B是STAR7，STAR序列C是STAR67)，STAR元件的功能看起來均好于迄今為止揭示的構型。我們進行了其中兩側的STAR7元件由兩側的STAR6元件(SEQ.ID.NO.6)或者兩側的STAR4元件(SEQ.ID.NO.4)置換，組合SV40啟動子上游的STAR67(分別為SV40-STAR676/6和SV40-STAR674/4，使用如上述相同命名法)的實驗，使用這些組合也觀測到改良的表達。這證實了兩側的STAR7元件可以用其它STAR序列置換，并仍觀測到具有STAR序列的表達盒的新構型的改良作用。實施例5STAR67與STAR7的組合在穩定轉染的CHO細胞中增強UB6驅動的抗體表達水平在實施例4中，我們示出STAR67與STAR7的組合增強了CHO細胞中d2EGFP蛋白的表達水平。在此我們測試了STAR67與STAR7的組合是否可用于產生抗體。我們選擇抗EpCAM分子的抗體(Hulsetal，1999)作為測試蛋白，并使用UB6啟動子。材料和方法質粒將重鏈cDNA(HC-EpCAM)克隆進包含UB6啟動子的構建體中。將HC-EpCAM通過IRES序列與Zeocin抗性基因結合。將輕鏈cDNA(LC-EpCAM)也克隆進包含UB6啟動子的構建體中。將LC-EpCAM通過IRES序列與嘌呤霉素抗性基因結合。這兩個質粒代表UB6(HC+LC)對照質粒(圖9)。為了測試STAR67和STAR7的作用，將STAR67克隆進這兩個HC+LC構建體中UB6啟動子的上游。STAR7克隆在完整表達盒的兩側5’和3’末端(圖9)。這兩個質粒代表STAR7-STAR67-UB6(HC+LC)STAR7。CHO細胞的轉染和培養將中國倉鼠卵巢細胞系CHO-K1(ATCCCCL-61)如實施例2所述轉染和培養，使用zeocin(100μg/ml)和嘌呤霉素(2.5μg/ml)進行選擇。在轉染后1天，向培養基中加入zeocin。當可見第一個集落時(大約加入zeocin7天后)，除去培養基并用含有嘌呤霉素的培養基置換。在大約7天后，分離集落并移至24孔平板中僅含有zeocin的培養基中。結果圖9示出與沒有STAR67和STAR7的“空白”對照UB6(HC+LC)對照相對比，含有克隆在UB6啟動子上游的STAR67及克隆在完整表達盒兩側的兩個STAR7元件的抗體構建體的轉染產生了大量表達顯著較高水平EpCAM抗體的CHO集落(使用抗人IgG抗體通過ELISA測定)。當在轉染后25天測定時，用UB6(HC+LC)對照質粒轉染的18個集落中EpCAM的產量平均為2.7pg/細胞/天。25天后除去選擇劑zeocin和嘌呤霉素。轉染后45天，這18個集落中EpCAM的產量平均為2.7pg/細胞/天。對比之下，當在轉染后25天測定時，用STAR7-STAR67-UB6(HC+LC)-STAR7質粒轉染的18個集落中EpCAM產量信號平均為6.7pg/細胞/天，在轉染后45天測定時是7.7pg/細胞/天。因此，在轉染30和45天后，在穩定轉染的CHO克隆中包含STAR67/STAR7的UB6構建體與UB6啟動子驅動的EpCAM表達水平相比高2.5-2.9倍。因此，與不含STAR67/STAR7的構建體相比，將STAR67置于啟動子上游及將兩個STAR7元件置于表達盒兩側導致CHO細胞中顯著較高的EpCAM抗體表達水平。實施例6STAR67不是增強子阻斷劑(enhancerblocker)，而STAR6和STAR7是增強子阻斷劑已對其性質進行了測試的迄今為止所有已知STAR元件，包括STAR6和STAR7，均是增強子阻斷劑(WO03/004704，Kwaksetal，2003)。增強子阻斷劑活性是通過將STAR元件置于強增強子和啟動子之間而測試。在此我們測試了STAR67是否是一種增強子阻斷劑。材料和方法將d2EGFP基因使用引物TTGGTTGGTCATGAATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTC(SEQ.ID.NO.75)和ATTCTCTAGACTACACATTGATCCTAGCAGAAGCAC(SEQ.ID.NO.76)經PCR擴增，并克隆進質粒pGL3-啟動子(Promega)中，使用NcoI和XbaI限制位點代替螢光素酶基因以產生質粒pGL3-promoter-GFP。將一接頭(通過退火寡核苷酸CGATATCTTGGAGATCTACTAGTGGCGCGCCTTGGGCTAGCT(SEQ.ID.NO.77)和GATCAGCTAGCCCAAGGCGCGCCACTAGTAGATCTCCAAGATATCGAGCT(SEQ.ID.NO.78)而產生)克隆進SacI和BglII位點，產生多克隆位點。原始的BglII位點基于接頭的連接而被破壞，產生接頭DNA內一新的唯一的BglII位點。使用BsaBI和BamHI將SV40-增強子從質粒pGL3-basic(Promega)中切下，并使用EcoRV和BglII位點克隆進pGL3-linker-promoter-GFP中，產生質粒pGL3-enhancer-promoter-GFP。使用KpnI和SacI位點將STAR40元件(SEQ.ID.NO.40)置于SV40增強子上游，以防止增強子對上游序列的作用。最后，使用SpeI和AscI限制位點將抗阻抑物元件STAR6、STAR7和STAR67置于SV40增強子和SV40最小啟動子之間。CHO細胞的轉染和培養中國倉鼠卵巢細胞系CHO-K1(ATCCCCL-61)如實施例2所述轉染。在轉染后1天，在EpicsXL流式細胞計量儀(BeckmanCoulter)上測定d2EGFP水平。結果圖10示出STAR67不是增強子阻斷劑，而STAR6和STAR7在相同分析中發揮增強子阻斷劑作用。將STAR6、STAR7和STAR67克隆在d2EGFP基因上游的SV40增強子和最小SV40啟動子之間。當在增強子與啟動子之間無STAR元件克隆時，發生強轉錄激活作用(設定為100％)。當STAR6或STAR7置于增強子與啟動子之間時，轉錄降低至背景水平，表明STAR6和STAR7是強增強子阻斷劑。相反，當STAR67克隆在增強子與啟動子之間時，相對的轉錄水平仍為對照組的80％，表明STAR67不是好的增強子阻斷劑，這與如先前所述的STAR6和STAR7以及其它抗阻抑物元件(WO03/004704，Kwaksetal，2003)相反。實施例7STAR67增強穩定轉染的CHO細胞中UB6和CMV驅動的抗體表達水平在實施例5中，我們示出使用含有重鏈和輕鏈的兩種不同的質粒，組合STAR67和STAR7增強CHO細胞中EpCAM抗體表達水平。在本實施例中，我們測試了當重鏈和輕鏈被置于一個質粒上時STAR67是否可以用于產生EpCAM抗體。我們針對每個選擇標記使用同時選擇方法。材料和方法質粒重鏈cDNA(HC-EpCAM)在UB6啟動子的控制下，并通過IRES序列與Zeocin抗性基因結合。輕鏈cDNA(LC-EpCAM)在CMV啟動子的控制下，并通過IRES序列與嘌呤霉素抗性基因結合。基本上這些是實施例5中使用的構建體。將這兩種表達盒置于一個質粒上，使這兩個表達單位的轉錄具有相反方向。在對照質粒中，UB6與CMV啟動子由一500bp填充片段間隔(EpCAM對照)(圖10)。在另一個質粒中，將STAR67置于UB6與CMV啟動子之間(EpCAMSTAR67)(圖10)。CHO細胞的轉染和培養將中國倉鼠卵巢細胞系CHO-K1(ATCCCCL-61)如實施例2所述轉染和培養，使用zeocin(100μg/ml)和嘌呤霉素(2.5μg/ml)進行選擇。在實施例5中，使用針對兩種選擇標記的相繼選擇方法。相反，在此這兩種選擇標記同時存在于培養基中。在轉染后1天，向培養基中加入zeocin和嘌呤霉素。持續存在選擇培養基直至分離集落(轉染后大約14天)。在分離集落并移至24孔平板中之后，將細胞在存在zeocin和嘌呤霉素的條件下培養。結果圖11示出含有克隆在UB6和CMV啟動子之間的STAR67的抗體構建體的轉染產生了許多表達EpCAM抗體的CHO集落(使用抗人IgG抗體通過ELISA測定)。當在轉染后25天測定時，用EpCAMSTAR67質粒轉染的19個集落中EpCAM產量的平均值為9.8pg/細胞/天。相反，令人驚奇地，用EpCAM對照質粒轉染無集落存活。當只用zeocin或者嘌呤霉素進行選擇時，EpCAM對照集落存活。然而，當通過對重鏈和輕鏈均施加選擇壓力而增加選擇壓力時，這些條件使得只有在轉染的質粒中存在STAR67的集落存活。該結果還示出摻入STAR67對置于一個STAR67元件的上游和下游的兩種啟動子(UB6和CMV啟動子)均具有有益作用。這表明STAR67可以雙向方式操縱。EpCAM對照和EpCAMSTAR67質粒之間的差異是顯著的，當選擇壓力較高時，只有EpCAMSTAR67轉染導致集落建立。這使得有機會使用這種質粒構型鑒別STAR67中介導這種作用的區域。將STAR67的較小的重疊部分置于驅動EpCAM分子的UB6和CMV啟動子之間。當STAR67的一部分有功能時，集落在zeocin和嘌呤霉素同時用作選擇劑時存活。當STAR67的一部分沒有功能時，在相同選擇條件下無集落存活。因此，將STAR67置于啟動子上游導致與沒有這種抗阻抑物元件的構建體對比在CHO細胞中明顯較高的EpCAM抗體表達水平。進行相似實驗使用SV40啟動子驅動抗-EpCAM抗體的重鏈和輕鏈的表達。在其它實驗中，將STAR67用其它STAR序列置換。在進一步的實驗中，改變編碼重鏈和輕鏈的兩個表達單位的方向，由此這兩個單位的方向一致。在另一個實驗中，將重鏈和輕鏈的表達單位分別置于不同的核酸分子上(如實施例5所述)，對所得克隆針對兩個選擇標記同時進行選擇。在另一個實驗中，改變宿主細胞類型。組合這些變化進行實驗。附圖描述圖1本發明的示意圖。A)含有(從5’至3’)轉基因(編碼例如d2EGFP基因)、IRES和可選擇標記(zeo，賦予zeocin抗性)的在CMV啟動子控制下的雙順反子基因。表達單位在其3’末端具有SV40轉錄終止子(t)。該構建體的名稱是CMV-d2EGFP-ires-Zeo(CMV對照)。B)如A的構建體，但是STAR67克隆在CMV啟動子的上游。該構建體的名稱是STAR67-CMV-d2EGFP-ires-Zeo(CMV-STAR67)。C)如B的構建體，但是上游和下游STAR7元件克隆在完整構建體的兩側。該構建體的名稱是STAR7-STAR67-CMV-d2EGFP-ires-Zeo-STAR7(CMV-STAR677/7)。圖2STAR67改良CHO細胞中CMV驅動的d2EGFP表達。對10個單獨的穩定集落的d2EGFP信號平均值針對CHO細胞中指定構建體進行繪圖。A)CMV對照；B)STAR67-CMV。X(10)10個集落的平均d2EGFP表達水平。見實施例2詳述。圖3STAR67改良CHO細胞中EF1α驅動的d2EGFP表達。與圖2相同，但是使用EF1α啟動子。A)EF1α對照；B)STAR67-EF1α。圖4STAR67改良CHO細胞中UB6驅動的d2EGFP表達。與圖2和3相同，但是使用UB6啟動子。A)UB6對照；B)STAR67-UB6。圖5STAR67改良PER.C6細胞中CMV驅動的d2EGFP表達。與圖2相同，但是是在PER.C6細胞中。A)CMV對照；B)STAR67-CMV。圖6STAR67改良PER.C6細胞中EF1α驅動的d2EGFP表達。與圖3相同，但是是在PER.C6細胞中。A)EF1α對照；B)STAR67-EF1α。圖7STAR67改良PER.Cβ細胞中UB6驅動的d2EGFP表達。與圖4相同，但是是在PER.C6細胞中。A)UBβ對照；B)STAR67-UB6。圖8STAR67組合其它STAR元件改良CHO-K1細胞中SV40驅動的d2EGFP表達。與圖2相似，但在CHO細胞中使用SV40啟動子及指定的構建體。對在轉染60天后的18-20個單獨的穩定集落的d2EGFP信號進行繪圖。A)SV40對照，SV40-STAR67，SV40-STAR7/7；B)SV40對照及SV40-STAR677/7。見實施例4詳述。圖9STAR67改良CHO-K1細胞中UB6驅動的EpCAM抗體表達水平。見實施例5詳述。A)無STAR元件的構建體；B)具有啟動子上游STAR67和兩側STAR7元件的構建體。抗-EpCAM抗體濃度以pg/細胞/天表示。X(18)18個集落的平均產生水平。圖10STAR67不是增強子阻斷劑，而STAR6和7是。見實施例6詳述。圖11STAR67增強穩定轉染的CHO細胞中UB6和CMV-驅動的抗體表達水平。見實施例7詳述。A)含有抗-EpCAM重鏈(HC)和輕鏈(LC)的DNA分子，所述重鏈和輕鏈均在啟動子之后，均與不同的可選擇標記基因連接(同時選擇用于這兩種標記)無STAR元件的構建體。未發現集落；B)相同構建體，在兩個啟動子之間具有STAR67。抗-EpCAM抗體濃度以pg/細胞/天表示。X(19)19個集落的平均產生水平。參考文獻Boshart，M，Weber，F，Jahn，G，Dorsch-Hasler，K，Fleckenstein，B，andSchaffner，W.(1985)AverystrongenhancerislocatedupstreamofanimmediateearlygeneofhumancytomegalovirusCell41，521-530.ChungJH，WhiteleyM，andFelsenfeldG.(1993)A5’elementofthechickenbeta-globindomainservesasaninsulatorinhumanerythroidcellsandprotectsagainstpositioneffectinDrosophila.Cell74505-514.ChungJH，BellAC，FelsenfeldG.(1997).Characterizationofthechickenbeta-globininsulator.ProcNatlAcadSciUSA94575-580.Das，GC，Niyogi，SK，andSalzman，NP.(1985)SV40promotersandtheirregulationProgNucleicAcidResMolBiol32，217-236.GillDR，SmythSE，GoddardCA，PringleIA，HigginsCF，ColledgeWH，andHydeSC.(2001)IncreasedpersistenceoflunggeneexpressionusingplasmidscontainingtheubiquitinCorelongationfactor1αpromoter.GeneTherapy81539-1546.GossenM，andBujardH.(1992)Tightcontrolofgeneexpressioninmammaliancellsbytetracycline-responsivepromoters.ProcNatlAcadSciUSA895547-5551.GrahamFO，SmileyJ，RussellWandNairnR.(1977).CharacteristicsofahumancelllinetransformedbyDNAfromhumanadenovirustype5.J.Gen.Virol.36，59-72.HulsGA，HeijnenIAFM，CuomoME，KoningsbergerJC，WiegrnanL，BoelE，vanderVuurst-deVriesA-R，LoysonSAJ，HelfrichW，vanBergeHenegouwenGP，vanMeijerM，deKruifJ，LogtenbergT.(1999).Arecombinant，fullyhumanmonoclonalantibodywithantitumoractivityconstructedfromphage-displayedantibodyfragments.NatBiotechnol.17，276-281.JonesD，KroosN，AnemaR，VanMontfortB，VooysA，VanDerKraatsS，VanDerHelmE，SmitsS，SchoutenJ，BrouwerK，LagerwerfF，VanBerkelP，OpsteltenD-J，LogtenbergT，BoutA(2003)High-levelexpressionofrecombinantIgGinthehumancelllinePER.C6.Biotechnol.Prog.19163-168.Kaufman，RJ.(2000)OverviewofvectordesignformammaliangeneexpressionMolBiotechnol16，151-160.Kaufman，RJ，andSharp，PA.(1982)ConstructionofamodulardihydrofolatereductasecDNAgeneanalysisofsignalsutilizedforefficientexpressionMolCellBiol2，1304-1319.KellumR，andSchedlP.(1991)Aposition-effectassayforboundariesofhigherorderchromosomaldomains.Cell64941-950.KwaksTH，BarnettP，HemrikaW，SiersmaT，SewaltRG，SatijnDP，BronsJF，vanBloklandR，KwakmanP，KruckebergAL，KelderA，OtteAP.(2003)Identificationofanti-repressorelementsthatconferhighandstableproteinproductioninmammaliancells.NatBiotechnol21，553-558.ErratuminNatBiotechnol21，822(2003).Phi-VanL，VonKreisJP，OstertagW，andStrtlingWH.(1990)Thechickenlysozyme5’matrixattachmentregionincreasestranscriptionfromaheterologouspromoterinheterologouscellsanddampenspositioneffectsontheexpressionoftransfectedgenes.Mol.Cell.Biol.102302-2307.LopezdeQuinto，S，andMartinez-Salas，E.(1998)ParametersinfluencingtranslationalefficiencyinaphthovirusIRES-basedbicistronicexpressionvectorsGene217.51-56.Martin，DI，andWhitelaw，E.(1996)ThevagariesofvariegatingtransgenesBioessays18，919-923.Martinez-Salas，E.(1999)InternalribosomeentrysitebiologyanditsuseinexpressionvectorsCurrOpinBiotechnol10，458-464.McBumey，MW，Mai，T，Yang，X，andJardine，K.(2002)Evidenceforrepeat-inducedgenesilencinginculturedMammaliancellsinactivationoftandemrepeatsoftransfectedgenesExpCellRes274，1-8.Migliaccio，AR，Bengra，C，Ling，J，Pi，W，Li，C，Zeng，S，Keskintepe，M，Whitney，B，Sanchez，M，Migliaccio，G，andTuan，D.(2000)StableandunstabletransgeneintegrationsitesinthehumangenomeextinctionoftheGreenFluorescentProteintransgeneinK562cellsGene256，197-214.Mizuguchi，H，Xu，Z，Ishii-Watabe，A，Uchida，E，andHayakawa，T.(2000)IRES-dependentsecondgeneexpressionissignificantlylowerthancap-dependentfirstgeneexpressioninabicistronicvectorMolTher1，376-382.Rees，S，Coote，J，Stables，J，Goodson，S，Harris，S，andLee，MG.(1996)Bicistronicvectorforthecreationofstablemammaliancelllinesthatpredisposesallantibiotic-resistantcellstoexpressrecombinantproteinBiotechniques20，102-104，106，108-110.Schorpp，M，Jager，R，Schellander，K，Schenkel，J，Wagner，EF，Weiher，H，andAngel，P.(1996)ThehumanubiquitinCpromoterdirectshighubiquitousexpressionoftransgenesinmiceNucleicAcidsRes24，1787-8.Strutzenberger，K，Borrh，N，Kunert，R，Steinfellner，W，andKatinger，H.(1999)Changesduringsubclonedevelopmentandageingofhumanantibody-producingrecombinantCHOcellsJBiotechnol69，215-26.VanderVlag，J，denBlaauwen，JL，Sewalt，RG，vanDriel，R，andOtte，AP.(2000)Transcriptionalrepressionmediatedbypolycombgroupproteinsandotherchromatin-associatedrepressorsisselectivelyblockedbyinsulatorsJBiolChem275，697-704.Whitelaw，E，Sutherland，H，Kearns，M，Morgan，H，Weaving，L，andGarrick，D.(2001)EpigeneticeffectsontransgeneexpressionMethodsMolBiol158，351-68.序列表<110>科羅邁吉尼科斯公司<120>改良核酸表達的新序列<130>O111WO00ORD<150>PCT/EP2004/051405<151>2004-07-08<160>82<170>PatentInversion3.2<210>1<211>749<212>DNA<213>Homosapiens<220><221>misc_feature<223>sequenceofSTAR1<400>1atgcggtgggggcgcgccagagactcgtgggatccttggcttggatgtttggatctttct60gagttgcctgtgccgcgaaagacaggtacatttctgattaggcctgtgaagcctcctgga120ggaccatctcattaagacgatggtattggagggagagtcacagaaagaactgtggcccct180ccctcactgcaaaacggaagtgattttattttaatgggagttggaatatgtgagggctgc240aggaaccagtctccctccttcttggttggaaaagctggggctggcctcagagacaggttt300tttggccccgctgggctgggcagtctagtcgaccctttgtagactgtgcacacccctaga360agagcaactacccctatacaccaggctggctcaagtgaaaggggctctgggctccagtct420ggaaaatctggtgtcctggggacctctggtcttgcttctctcctcccctgcactggctct480gggtgcttatctctgcagaagcttctcgctagcaaacccacattcagcgccctgtagctg540aacacagcacaaaaagccctagagatcaaaagcattagtatgggcagttgagcgggaggt600gaatatttaacgcttttgttcatcaataactcgttggctttgacctgtctgaacaagtcg660agcaataaggtgaaatgcaggtcacagcgtctaacaaatatgaaaatgtgtatattcacc720ccggtctccagccggcgcgccaggctccc749<210>2<211>883<212>DNA<213>Homosapiens<220><221>misc_feature<223>sequenceofSTAR2<400>2gggtgcttcctgaattct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