專利名稱：一種快速測定原料乳細菌總數的方法
技術領域：
本發明涉及的是一種檢測方法，具體地說是一種應用于原料乳細菌總數檢測的快速測定方法。
背景技術：
牛乳營養豐富，易受微生物的污染，原料乳中細菌數量與產品質量密切相關，因而細菌總數是衡量原料乳質量的重要指標，對其進行在線檢測有助于控制原料乳質量，保證產品安全。
目前用于乳品行業的細菌總數的檢測方法很多，如標準平板計數法、直接顯微鏡計數法、還原試驗法、流式細胞計數法等。各種方法各有所長和不足，國內應用最多的是標準平板計數法，該法存在操作繁瑣、檢測結果嚴重滯后的缺點，不能滿足在線檢測的要求。大型企業應用丹麥進口的FOSS鮮乳細菌檢測儀器，檢測速度快，但是儀器價格昂貴，檢測成本高。因此，經濟實用、操作簡便的原料乳細菌總數快速方法的確立有著重大的理論與現實意義。
20世紀40年代開始，還原法就被用來檢測原料乳細菌總數。細菌中存在還原酶，與處氧化與還原態時顏色不同的氧化還原型試劑共存時，會使該試劑發生還原反應，引起顏色變化。混合后可以根據單位時間混合溶液的顏色變化來判定細菌總數，也可根據達到一定顏色所需的時間進行判定。目前國內外在乳品行業應用該原理檢測細菌總數仍停留在目測比色階段，結果的判定具有主觀性，且不能定量表示。
發明內容本發明的目的在于提供一種客觀、準確、迅速，檢測的靈敏度與精確度高的快速測定原料乳細菌總數的方法。
本發明的目的是這樣實現的1、在透明器皿中加入定量原料乳溶液，37℃±1℃預熱2～10分鐘，并保持測定過程始終保持恒溫37℃±1℃；2、向乳中按比例加入氧化還原試劑，通入氮氣混勻10秒鐘～4分鐘；3、混勻后，馬上應用顏色傳感器采集混合樣品顏色信息；4、2～15分鐘后，再次采集混合樣品顏色信息；5、用計算機處理、分析兩次顏色的色差值，與標準比對，讀取待測乳樣的細菌總數。
本發明的方法還可以包括1、所述的氧化還原試劑是美蘭、刃天青、紅四氮唑或其它任何處于氧化狀態時與處于還原狀態時顏色不同的無毒或微毒試劑中的一種。
2、預熱同時進行光照處理。
3、氧化還原試劑的加入量為0.1～1ml。
本發明重點研究了美蘭與刃天青等兩種試劑的還原速度，比較發現同一原料乳樣品引起的刃天青顏色變化要比美蘭的顏色變化快。
儀器需要恒溫工作，且溫度影響細菌的代謝速度，不同溫度的樣品也需調整溫度達到一致。本發明通過比較不同溫度樣品的試劑還原速度以確定檢測溫度。結果表明，在37℃條件下，試劑還原速度最快，因此，儀器工作溫度設定為37℃左右。
樣品的溶解氧濃度對試劑的還原速度影響很大，本發明通過比較不同溶解氧濃度樣品的試劑還原速度以確定檢測溫度。結果表明，在溶解氧濃度接近0時，試劑還原速度最快，因此，在測定過程中樣品的混勻采用通氣方式，一方面可減少氧濃度差異帶來的檢測誤差，另一方面可達到快速檢測的目的。
試劑的濃度與加入量也影響檢測速度，本發明比較了原料乳加入一定量的刃天青后，混合溶液單位時間內色差值，發現當刃天青終濃度為0.0005％左右時，色差值最大。因此需要限定試劑的加入濃度與體積以達到最快的檢測速度。
本發明改進了傳統的還原法測定原料乳細菌總數的方式，具有以下優點1、檢測速度快。5～30分鐘即可定量測定原料乳的細菌總數。
2、檢測限低。可達5萬/mL。
3、儀器具有良好的性價比。本檢測應用儀器的成本不超過5000元，檢測樣品的試劑成本不超過0.5元，即使中小型乳品企業也有能力應用本方法進行檢測。比較而言，國內大型乳品企業進口的丹麥FOSS公司據流式細胞檢測原理設計的原料乳細菌總數檢測儀器，檢測速度快(15min左右)，但是儀器價格昂貴(10萬美元)，檢測成本4、操作簡便。環境要求低，無需無菌環境，人員無需專門培訓，操作簡便。
具體實施方式
下面舉例對本發明作更詳細的描述實施例1操作步驟(1)在比色皿中加入1.8ml原料乳溶液，37℃±1℃預熱5分鐘，預熱同時光照處理。
(2)測定過程始終保持恒溫37℃±1℃。
(3)在乳中加入0.005％刃天青試劑0.2ml，通入氮氣混勻1分鐘。
(4)混勻后，馬上應用顏色傳感器采集混合樣品顏色信息。
(5)10分鐘后，采集混合樣品顏色信息。
(6)計算機處理、分析顏色變化前后的色差值，與標準比對，讀取待測乳樣的細菌總數。
實施例2操作步驟(1)在比色皿中加入1.9ml原料乳溶液，37℃±1℃預熱3分鐘，預熱同時光照處理。
(2)測定過程始終保持恒溫37℃±1℃。
(3)在乳中加入0.01％刃天青試劑0.1ml，通入氮氣混勻2分鐘。
(4)混勻后，馬上應用顏色傳感器采集混合樣品顏色信息。
(5)8分鐘后，采集混合樣品顏色信息。
(6)計算機處理、分析顏色變化前后的色差值，與標準比對，讀取待測乳樣的細菌總數。
權利要求
1.一種快速測定原料乳細菌總數的方法，其特征是(1)、在透明器皿中加入定量原料乳溶液，37℃±1℃預熱2～10分鐘，并保持測定過程始終保持恒溫37℃±1℃；(2)、向乳中按比例加入氧化還原試劑，通入氮氣混勻10秒鐘～4分鐘；(3)、混勻后，馬上應用顏色傳感器采集混合樣品顏色信息；(4)、2～15分鐘后，再次采集混合樣品顏色信息；(5)、用計算機處理、分析兩次顏色的色差值，與標準比對，讀取待測乳樣的細菌總數。
2.根據權利要求1所述的一種快速測定原料乳細菌總數的方法，其特征是所述的氧化還原試劑是美蘭、刃天青、紅四氮唑或其它任何處于氧化狀態時與處于還原狀態時顏色不同的無毒或微毒試劑中的一種。
3.根據權利要求2所述的一種快速測定原料乳細菌總數的方法，其特征是原料乳量為0.5～5ml，氧化還原試劑的加入量為0.1～1ml。
4.根據權利要求3所述的一種快速測定原料乳細菌總數的方法，其特征是原料乳量為1.8ml，氧化還原試劑是0.005％刃天青試劑0.2ml。
5.根據權利要求3所述的一種快速測定原料乳細菌總數的方法，其特征是原料乳量為1.9ml，氧化還原試劑是0.01％刃天青試劑0.1ml。
6.根據權利要求1-5任何一項所述的一種快速測定原料乳細菌總數的方法，其特征是氧化還原試劑是預熱同時進行光照處理。
全文摘要
本發明提供的是一種快速測定原料乳細菌總數的方法。(1)在透明器皿中加入定量原料乳溶液，37℃±1℃預熱2～10分鐘，并保持測定過程始終保持恒溫37℃±1℃；(2)向乳中按比例加入氧化還原試劑，通入氮氣混勻10秒鐘～4分鐘；(3)混勻后，馬上應用顏色傳感器采集混合樣品顏色信息；(4)2～15分鐘后，再次采集混合樣品顏色信息；(5)用計算機處理、分析兩次顏色的色差值，與標準比對，讀取待測乳樣的細菌總數。本發明具有檢測速度快、檢測限低、儀器具有良好的性價比、操作簡便等優點。
文檔編號C12Q1/06GK1824794SQ20051012734
公開日2006年8月30日 申請日期2005年12月16日 優先權日2005年12月16日
發明者霍貴成, 田波, 姜瞻梅, 王玉堂, 劉麗波 申請人:東北農業大學