專利名稱：一種消減雜交裝置的制作方法
技術領域：
本實用新型涉及一種消減雜交裝置。
背景技術：
消減雜交技術是利用分子雜交的原理，除去同源核酸分子中共同的序列。目前常用的物理消減雜交裝置包括1.羥基磷灰石柱首先使同源的單鏈cDNA與mRNA雜交，通過羥基磷灰石柱，由于雙鏈與層析柱具有親和性，因此雙鏈雜交分子結合在柱子上，洗脫出單鏈cDNA。但羥基磷灰石對雙鏈核酸分子吸附的特異性不強；洗脫后的體積較大，不便于進一步的操作；操作過程中mRNA易降解。2.生物素結合蛋白柱這種柱是用包裹著生物素結合蛋白的專用細小磁珠裝填的。首先是用生物素標記核酸分子，與未標記的同源分子雜交，將雜交反應混合物通過生物素結合蛋白柱，可與生物素標記的核酸雜交的分子，便被結合到柱子上，未雜交的分子便可洗脫流出。這種方法需首先制備生物素結合蛋白包被的磁珠，再填裝柱子；樣品也需生物素標記；洗脫體積較大，不便于進一步的操作。3.OligodT磁珠將OligodT結合到磁珠上，與mRNA結合后反轉錄生成cDNA，再與同源的mRNA進行雜交，未雜交的mRNA可洗脫流出。這種方法需首先制備結合了OligodT的磁珠；雜交條件不易控制；洗脫后的體積較大，不便于進一步的操作；操作過程中mRNA易降解。以上裝置都存在制作復雜，操作困難，洗脫體積較大，對低拷貝差異基因無法檢測等缺點。
實用新型內容本實用新型目的是提供一種成本低，制作簡單，操作簡便，效率高，可重復性好的消減雜交裝置。
本實用新型提供的一種消減雜交裝置，由上柱、下柱和尼龍膜組成，其中上柱和下柱均為空心柱，上柱的上半部直徑大于下半部直徑，下柱的上半部直徑大于下半部直徑，上柱的下半部與下柱的上半部呈緊密配合，尼龍膜置于下柱的上半部與下半部的連接處并由上柱的下半部壓緊。
為更好地起到密封作用，本實用新型在尼龍膜與上柱的下半部之間的接觸處設置有一密封墊圈。
本實用新型進行消減雜交時，先將核酸分子加熱變性，測定濃度后，取適量加到尼龍膜表面，因尼龍膜帶正電荷，可吸附帶負電荷的核酸分子，進一步進行紫外交聯，還可形成共價鍵，使其結合更牢固，洗脫未結合的核酸，測定濃度，計算出柱上即本實用新型消減雜交裝置上結合的核酸總量。將同源的核酸分子變性后，測定濃度，取柱上結合量的1～2％，加到柱上，放入已裝有雜交緩沖液的管中，置于60～65℃水浴，2～12小時。加入適量雜交緩沖液，吸出未雜交的核酸分子，可加到另一個柱上，再重復雜交，反復多次，最后得到差異基因，可構建消減文庫。
與目前常用的物理消減雜交裝置相比，本實用新型具有以下的特點1)材料易獲取，成本低，制作簡單；2)尼龍膜與核酸分子以共價鍵結合，結合牢固；3)在雜交過程中可控制雜交溫度和時間；4)可根據需要控制雜交輪次；5)洗脫體積可按需要控制在數十微升，便于進一步的操作；6)試驗操作簡單，可重復性好。
以下結合附圖和具體實施方式
對本實用新型作進一步的說明。
圖1為本實用新型的分解示意圖；圖2為本實用新型的組合示意圖。
具體實施方式
本實用新型消減雜交裝置，由上柱1、下柱4、尼龍膜3和密封墊圈2組成，其中上柱1和下柱4均為空心柱，上柱1的上半部1a直徑大于下半部1b直徑，下柱4的上半部4a直徑大于下半部4b直徑，上柱1的下半部1b與下柱4的上半部4a呈緊密配合，尼龍膜3置于下柱4的上半部4a與下半部4b的連接處并在其上放置密封墊圈2后由上柱1的下半部1b壓緊。
權利要求1.一種消減雜交裝置，其特征在于由上柱(1)、下柱(4)和尼龍膜(3)組成，其中上柱(1)和下柱(4)均為空心柱，上柱(1)的上半部(1a)直徑大于下半部(1b)直徑，下柱(4)的上半部(4a)直徑大于下半部(4b)直徑，上柱(1)的下半部(1b)與下柱(4)的上半部(4a)呈緊密配合，尼龍膜(3)置于下柱(4)的上半部(4a)與下半部(4b)的連接處并由上柱(1)的下半部(1b)壓緊。
2.根據權利要求1所述的消減雜交裝置，其特征在于尼龍膜(3)與上柱(1)的下半部(1b)之間的接觸處設置有一密封墊圈(2)。
專利摘要本實用新型公開了一種消減雜交裝置，由上柱、下柱、尼龍膜和密封墊圈組成，其中上柱和下柱均為空心柱，上柱的上半部直徑大于下半部直徑，下柱的上半部直徑大于下半部直徑，上柱的下半部與下柱的上半部呈緊密配合，尼龍膜置于下柱的上半部與下半部的連接處并在其上放置密封墊圈后由上柱的下半部壓緊。本實用新型具有以下的特點1)材料易獲取，成本低，制作簡單；2)尼龍膜與核酸分子以共價鍵結合，結合牢固；3)在雜交過程中可控制雜交溫度和時間；4)可根據需要控制雜交輪次；5)洗脫體積可按需要控制在數十微升，便于進一步的操作；6)試驗操作簡單，可重復性好。
文檔編號C12P19/34GK2652939SQ2003201178
公開日2004年11月3日 申請日期2003年11月7日 優先權日2003年11月7日
發明者馬文麗, 鄭文嶺, 宋艷斌 申請人:中國人民解放軍基因工程研究所