專利名稱：乳房炎快速診斷與藥敏試驗試劑盒的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種乳房炎快速診斷與藥敏試驗試劑盒，其可用于奶牛隱性乳房炎的快速檢測與診斷、奶牛乳房炎病原菌快速藥敏試驗、細菌藥敏試驗、藥物抑菌試驗及畜禽產品微生物檢測。
背景技術：
奶牛隱性乳房炎的發病率在25％-80％，是奶牛場最嚴重的疾病之一。可引起患病牛奶產量減少20％-30％，因而是引起損失最大，同時也是嚴重影響牛奶品質和奶牛淘汰的原因之一。其預防和治療主要依靠抗生素的使用，為此，近年來已造成抗生素的濫用，同時，抗生素殘留嚴重影響了牛奶的品質，給消費者造成損害，也影響了奶牛場的經濟效益。
引起乳房炎的病原種類已報道有130種以上，各地的病原菌特征也不同。因此，現場快速檢測和藥敏試驗對于防治該病具有重要意義。
目前國際上主要應用乳汁中體細胞數計數(SCC)和加州乳房炎試驗(CMT)，我國主要應用SCC和蘭州乳房炎試驗(LMT)及北京、河北乳房炎試驗(BMT、HMT)等進行檢測。SCC法要求專業設備和人員，很難在養殖場推廣，各種乳房炎試驗則因其簡單、快速和可以現場操作而得到廣泛應用。但上述方法只能進行定性診斷，不能分析其中微生物的多少，更不能進行藥敏試驗，目前需要在專業實驗室首先進行細菌的分離培養和純化，再進行藥敏試驗，才能指導臨床準確用藥，由于進行細菌分離需要大量采樣，因而該法費時、費力，不能現場操作，目前只在極少數大型養殖場定期使用，大多數養殖場仍然依靠獸醫憑經驗用藥。我國市場上至今沒有可進行現場快速藥敏試驗的藥盒供應。
發明內容
本發明為了解決上述背景技術中的不足之處，提供一種乳房炎快速診斷與藥敏試驗試劑盒，其診斷與檢測快速，敏感，操作簡單，無需專業技術人員操作，可進行現場測定，并且對于中藥提取物或疏水性藥物的抑菌試驗效果明顯優于常規紙片法。
為實現上述目的，本發明采用的技術方案為一種乳房炎快速診斷與藥敏試驗試劑盒，其特殊之處在于所述試劑盒內含有試劑色唑藍(MTT)和氯化三苯四氮唑(TTC)。
在進行奶牛乳房炎檢測時，同時加入奶樣和MTT或TTC試液0.1mL，室溫或37℃作用最短4-5分鐘，加入溶解顯色液，觀察結果，根據是否出現顏色進行判定。
在進行奶牛乳房炎藥敏試驗時，對于乳房炎檢測陽性奶樣，加入奶樣和藥液各0.01mL，室溫或于37℃培養8-18小時后，加入MTT，繼續培養4小時后，加入溶解顯色液，觀察結果，根據是否出現顏色進行判定。
在進行細菌藥敏試驗或藥物抑菌試驗時，對于已經純化的細菌，加入菌液0.01mL，同時加入藥液0.01mL，于37℃培養8-18小時后，加入MTT，繼續培養4小時后，加入溶解顯色液，觀察結果，根據是否出現顏色進行判定。
在進行畜禽產品微生物檢測時，將待檢畜產品樣品用無菌營養肉湯按1∶1混合勻漿，離心后取上清液0.01mL加入檢測板孔中，于37℃培養8-18小時后，加入MTT，繼續培養4小時后，加入溶解顯色液，觀察結果，根據是否出現顏色進行判定。
與現有技術相比，本發明具有的優點和效果如下1、本發明診斷與檢測快速，敏感，操作簡單，無需專業技術人員操作，可進行現場測定，對于中藥提取物或疏水性藥物的抑菌試驗效果明顯優于常規紙片法。
2、經對比試驗研究，本發明乳房炎檢測結果與SCC法和LMT法一致。
3、本發明乳房炎藥敏試驗及藥敏試驗檢測結果與微生物學常規方法(紙片法和液體試管法)結果一致。
具體實施例方式本發明在全面分析我國乳房炎病源特征和細菌代謝特點的基礎上，結合現代酶技術應用的發展，分別以色唑藍(MTT)和氯化三苯四氮唑(TTC)作為微生物代謝過程中所產生酶的底物，制成細菌檢測和藥敏試驗試劑盒，可于5分鐘內得出隱性乳房炎檢測結果，12-24小時得到藥敏試驗結果，可用于奶牛場現場操作。
工藝流程1.乳房炎檢測同時加入奶樣和MTT或TTC試液0.1mL，室溫或37℃作用最短4-5分鐘，加入溶解顯色液，觀察結果，根據是否出現顏色進行判定。
2.乳房炎藥敏試驗對于乳房炎檢測陽性奶樣，加入奶樣和藥液各0.01mL，室溫或于37℃培養8-18小時后，加入MTT，繼續培養4小時后，加入溶解顯色液，觀察結果，根據是否出現顏色進行判定。
3.細菌藥敏試驗對于已經純化的細菌，加入菌液0.01mL，同時加入藥液0.01mL，于37℃培養8-18小時后，加入MTT，繼續培養4小時后，加入溶解顯色液，觀察結果，根據是否出現顏色進行判定。
4.藥物抑菌試驗其操作過程同3；5.畜禽產品微生物檢測待檢畜產品樣品用無菌營養肉湯按1∶1混合勻漿，離心后取上清液0.01mL加入檢測板孔中，于37℃培養8-18小時后，加入MTT，繼續培養4小時后，加入溶解顯色液，觀察結果，根據是否出現顏色進行判定。
上述各試驗中，均可根據顏色深淺程度分析患病程度、藥物敏感程度，及畜禽產品污染程度，并可應用酶標儀進行定量檢測。
權利要求
1.一種乳房炎快速診斷與藥敏試驗試劑盒，其特征在于所述試劑盒內含有試劑色唑藍(MTT)和氯化三苯四氮唑(TTC)。
2.根據權利要求1所述的乳房炎快速診斷與藥敏試驗試劑盒，其特征在于在進行奶牛乳房炎檢測時，同時加入奶樣和MTT或TTC試液0.1mL，室溫或37℃作用最短4-5分鐘，加入溶解顯色液，觀察結果，根據是否出現顏色進行判定。
3.根據權利要求1所述的乳房炎快速診斷與藥敏試驗試劑盒，其特征在于在進行奶牛乳房炎藥敏試驗時，對于乳房炎檢測陽性奶樣，加入奶樣和藥液各0.01mL，室溫或于37℃培養8-18小時后，加入MTT，繼續培養4小時后，加入溶解顯色液，觀察結果，根據是否出現顏色進行判定。
4.根據權利要求1所述的乳房炎快速診斷與藥敏試驗試劑盒，其特征在于在進行細菌藥敏試驗或藥物抑菌試驗時，對于已經純化的細菌，加入菌液0.01mL，同時加入藥液0.01mL，于37℃培養8-18小時后，加入MTT，繼續培養4小時后，加入溶解顯色液，觀察結果，根據是否出現顏色進行判定。
5.根據權利要求1所述的乳房炎快速診斷與藥敏試驗試劑盒，其特征在于在進行畜禽產品微生物檢測時，將待檢畜產品樣品用無菌營養肉湯按1∶1混合勻漿，離心后取上清液0.01mL加入檢測板孔中，于37℃培養8-18小時后，加入MTT，繼續培養4小時后，加入溶解顯色液，觀察結果，根據是否出現顏色進行判定。
全文摘要
本發明涉及一種乳房炎快速診斷與藥敏試驗試劑盒，其診斷與檢測快速，敏感，操作簡單，無需專業技術人員操作，可進行現場測定，并且對于中藥提取物或疏水性藥物的抑菌試驗效果明顯優于常規紙片法。本發明試劑盒內含有試劑色唑藍(MTT)和氯化三苯四氮唑(TTC)。在進行奶牛乳房炎檢測時，同時加入奶樣和MTT或TTC試液0.1ml，室溫或37℃作用最短4－5分鐘，加入溶解顯色液，觀察結果，根據是否出現顏色進行判定。
文檔編號C12Q1/00GK1529167SQ20031010581
公開日2004年9月15日 申請日期2003年10月10日 優先權日2003年10月10日
發明者靳亞平, 王愛華, 楊明軍, 梅玉國, 林煒明, 王赟, 王晶鈺 申請人:楊凌瑞特生物技術研究所