抗氧化劑及其制備方法

專利名稱：抗氧化劑及其制備方法
技術領域：
本發明涉及來源于大豆的用于防止食品氧化的天然抗氧化劑物質及其制備方法，尤其是，通過從大豆籽原料中分離出在熱水提取物中是抗氧化劑效能的主要組分的低分子量級分而獲得的抗氧化劑，及其制備方法。
背景技術：
作為用于食品的抗氧化劑，尤其是，作為防止脂肪和油的自氧化的抗氧化劑，作為天然抗氧化劑的生育酚和L-抗壞血酸，以及作為合成抗氧化劑的BHA(丁基羥基苯甲醚)、BHT(二丁基羥基苯酚)等迄今已經為人們所知。然而，近年來，化學合成產品例如BHA和BHT不太常用于食品，因為消費者對化學合成產品具有一種擔心的感覺。另一方面，由于天然L-抗壞血酸不耐熱和堿，而生育酚價格昂貴，所以它們的使用受到限制。
作為天然來源的物質，尤其是，來源于植物或植物蛋白質的那些物質，已知的物質包括大豆粕的降解產品(JP6-287554A(1994))，這是通過用胃蛋白酶降解大豆蛋白質而獲得的一種獨特的肽(JP9-157292A(1997))，使用來源于大豆以及魚睪丸組分的蛋白質降解產品(JP10-219244A(1998))等。作為與得自植物的抗氧化劑不同的蛋白類抗氧化劑物質，已知的物質包括得自乳鐵蛋白—一種乳蛋白的肽及其衍生物(JP6-199687A(1994)，JP8-176190A(1996))。然而，由于昂貴的原料，過低的產率等原因，這些物質存在頗多問題而還不具有實用水平。
此外，Tamura等人報道了得自“okara(來源于‘豆腐’或豆乳產品的不溶殘余物)”的水溶性抗氧化劑物質(Bulletin of JapaneseFood Science Technology Society，Vol.46，No.5，303-310(1990))。這是一篇關于用沸水從脫脂“okara”中提取出來的抗氧化劑肽的報道，并且，因為活性組分是具有800-1400分子量的非常低分子量的組分，所以這種肽具有高吸濕性。另外，由于生產步驟復雜且產率低，所以這種肽不具實用性。況且，作為得自“okara”的抗氧化劑，大豆多糖據說具有抗氧化劑能力(Food Processing Technology，Vol.19，No.4，173-179(1999))。然而，由于這些得自“okara”的抗氧化劑具有不足夠的抗氧化劑能力，或者很昂貴，所有它們還沒有被投入實用。
發明公開本發明的一個目的是提供通過有效地從大豆中提取出抗氧化劑組分來實際獲得天然抗氧化劑的方法，這種天然抗氧化劑在加到食品中時可以給消費者提供安全感。
為了達到前述目的，本發明人為達到上述目的進行了深入細致的研究，作為結果，證實通過在100℃以上高溫于弱酸條件下用熱水提取大豆籽原料獲得的熱水提取物具有抗氧化劑特性，并且還發現，在這種熱水提取物中，抗氧化劑物質的抗氧化劑能力隨分子量而變化。更為特別的是，抗氧化劑能力集中于低分子量級分。如此，本發明得以完成。
就是說，本發明是生產抗氧化劑的方法，該方法包括將低分子量級分從通過在100℃以上高溫于弱酸條件下用熱水提取而由大豆籽原料獲得的熱水提取物中分離出來。優選地，所述低分子量級分的分子量為30,000或者更小。
此外，在本發明中，作為從熱水提取物中分離低分子量級分的具體實例，所述分離是通過用含水的親水性有機溶劑使高分子量級分沉淀出來，并且使低分子量級分溶解在含水的親水性有機溶劑中來進行的。優選地，親水性有機溶劑的濃度為30％或更高。此外，本發明還提供了制備抗氧化劑的方法，其中從熱水提取物中分離低分子量級分是用超濾薄膜通過薄膜分離來進行的。
另外，本發明是包含作為有效組分的熱水提取物的低分子量級分的抗氧化劑，所述熱水提取物是通過在100℃以上高溫于弱酸條件下用熱水提取大豆籽原料而獲得的。
實施本發明的最佳方式在本發明中任何大豆籽原料都可以使用，但利用作為在生產“豆腐”、豆乳或大豆蛋白分離物的過程中產生的“okara”，是非常有利的。由于大豆所貯藏的蛋白質和油組分已經被預先脫去了，所以“okara”適合于加工，而且還可以實現副產品的有效利用。
在100℃以上高溫，優選100℃以上且150℃以下的高溫，更優選105℃以上且130℃以下的高溫，于弱酸條件下，優選pH值3.0-7.0，更優選pH值3.0-5.0下，用熱水提取大豆原料。因為在提取中溫度超過水的沸點而產生蒸汽壓力，所以適于用耐壓反應器進行提取。當熱水提取溫度為100℃或更低時，水溶性產物的產率就非常低。這是不實用的。另一方面，當在150℃以上的高溫進行提取時，會引起副反應例如水解和聚合反應。因此，提取物的品質由于著色而下降，抗氧化劑能力在整體上就會降低。
熱水提取物中的抗氧化劑特性主要通過具有不大于30,000的分子量的低分子量級分顯示出來。為了分離和濃縮該低分子量級分，應當選擇可以以約30,000的分子量截止進行分級的方法。例如，合適的方法包括利用由于不同的分子量而在含水有機溶劑中有不同溶解度，或者使用能夠根據分子量的不同來分離級分的過濾器。
在一個優選的分級方法中，將高分子量級分用含水的親水性有機溶劑沉淀，并且低分子量級分被溶解并作為上層清液分離出來。在這種情況下，作為親水性有機溶劑，醇是適合使用的。乙醇和異丙醇是特別適宜的。對于在這些醇中的溶解度而言，能夠溶解的分子量的范圍隨著醇的濃度而變化。為了有效地分離本發明的低分子量級分，醇的濃度適宜地為30％或更高，優選30-80％。當濃度高時，就有活性組分也沉淀的可能性。當濃度低時，高分子量物質沒有被充分沉淀，因而低分子量物質的分離就會是不充分的。偶爾地，是沉淀級分的高分子量級分作為水溶性大豆多糖或水溶性大豆半纖維素而獲得，其中具有有益功能例如蛋白質的乳化作用和分散穩定作用的組分得到純化。
溶解在親水性有機溶劑中的抗氧化劑物質能夠通過將溶液冷凍干燥或者噴霧干燥而作為粉末被分離出來。如果需要，在干燥之前，于降低的壓力下通過蒸餾將親水性有機溶劑除去。然后，通過電透析或離子交換樹脂處理進行脫鹽，并進行濃縮，冷凍干燥或者噴霧干燥。在提取時所加的酸或者堿的種類沒有特別限制，鹽酸、硫酸、有機酸例如檸檬酸、乳酸等，它們的鹽，以及氫氧化鈉、氫氧化鉀等，都可以使用。
其它從熱水提取物中分離顯示抗氧化劑特性的物質的方法包括用具有約30,000的分子量截止的超濾薄膜或者作為一種超濾薄膜的陶瓷過濾器進行過濾。作為超濾薄膜，可以將由Toshiba Ceramics制備的一種陶瓷過濾器(孔徑500直徑)作為例示。具有相似功能的抗氧化劑物質也可以通過在減壓下使溶液滲透通過薄膜來濃縮，然后干燥而獲得。
如上面所述分離的抗氧化劑物質基本上由糖類和蛋白質組分構成。關于糖類組分，糖類的含量為大約25-60％，并且所包含的代表性的組成糖是半乳糖、阿拉伯糖、鼠李糖、巖藻糖、木糖、葡萄糖半乳糖醛酸。在本文里，總的糖含量用苯酚磺酸方法測量，糖醛酸用Blumenkrantz方法測量，中性糖的測量是將中性糖轉化成糖醇乙酸酯形式，然后用GLC方法分析。
本發明抗氧化劑含有15-35％重量的作為粗蛋白質的蛋白質組分。它的量可以用已知的分析方法例如含有巰基乙醇的SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳方法(在下文，SDS-PAGE)測定。每一氨基酸聚合物的分子量用標準分子量標志物的遷移率來確定，并且用光密度計進行確定也是適合的。本發明抗氧化劑中有效的氨基酸聚合物以約200-30,000的分子量范圍分布。
以與氨基酸聚合物相同的質量存在的糖可以在SDS-PAGE之后，按照路徑染色法，通過染色糖類組分來確定。這樣，本發明抗氧化劑包含作為主要組分的多肽和多糖組分。不清楚在蛋白質和多糖組分存在的體系中產生了怎樣的相互作用。
在本文中，本發明抗氧化劑中有效組分的分子量的測定，是在下列條件下，用凝膠過濾方法進行的。條件)以1.0mm/min的流速進行洗脫，使用柱由Tosoh公司生產的G300PWXL(7.6mm×30cm)，洗脫劑含有1％SDS和0.2M NaCl的25mM磷酸鹽緩沖液(pH7.0)。檢測是通過測定在220nm的吸收度來進行的。把要分析的樣本溶解在0.5％(含有0.1％巰基乙醇)濃度的洗脫劑中，并且煮沸2分鐘，以便使經受分析的樣本完全溶解。分子量的確定是以具有已知分子量的標準蛋白質的洗脫時間為基礎進行的。在本發明抗氧化劑的有效組分中，具有2,000-30,000分子量的物質占據了全部峰面積的70％或者以上。
用下列方法測量本發明的抗氧化劑能力。也就是說，依據TBA方法通過測定脂肪的氧化來評價抗氧化能力，其中將TBA與丙二醛(MDA)(在酸性條件下通過過氧化脂質的降解而形成的)反應，并且測定所得紅色物質(Buege and Aust，Method in Enzymology，52，302-310(1978))。首先，將乳化劑(0.5％β-酪蛋白或2％吐溫20)預先溶解在10mM磷酸鹽緩沖液(pH7.0)中，將乳化劑和油(亞油酸甲酯)以19∶1的比例混合，將此混合物用均化器(由Nition RikakikiSeisakusyo生產)預乳化，然后通過超聲(2分鐘)來徹底乳化以獲得乳液。將具有抗氧化劑能力的物質溶解在3ml乳液中，加入0.5μM偶氮化合物或0.5μM硫酸鐵，將此混合物用接觸混合器充分攪拌，在控制于37℃的恒溫浴中開始氧化反應。24小時和48小時后，從恒溫浴中分別取出0.5ml部分。為了測量MDA的量，將0.5ml磷酸鹽緩沖液、2ml TBA試劑(15g三氯乙酸+0.375g TBA+25ml 1N HCl(在100ml水中)和60mg 2，6-二叔丁基對甲酚(在3ml乙醇中))加到0.5ml乳液中，將此混合物在95℃或者以上溫度煮沸15分鐘，然后迅速在冰水中冷卻，在531nm測定上清液。
就其所含上述抗氧化劑物質來說，本發明抗氧化劑可以呈任何形式例如水溶液、糊或者粉末。當本發明抗氧化劑被用于脂肪和油的抗氧化時，根據需要，基于在脂肪和油的重量，抗氧化劑物質以0.005-20％重量，優選0.01-5％重量的比例使用，其中所述抗氧化劑物質的量是按干的抗氧化劑物質的量計的。當比例低于0.005％重量時，僅獲得小的抗氧化效果，甚至當抗氧化劑物質以超過20％重量的量混合時，也并沒有期待到與加入的量相對應的抗氧化效果。這是不經濟的。或者，可以將本發明抗氧化劑作為具有脂肪和油以及乳化劑的O/W乳液或W/O乳液預先加入。任選地，其它物質例如蛋白質、糖類、脂肪和油，或者其它天然抗氧化劑物質可以與本發明抗氧化劑一起使用。蛋白質的實例包括來源于植物的蛋白質例如大豆蛋白質、小麥蛋白質、玉米蛋白質和大米蛋白質，來源于動物的蛋白質例如乳蛋白質、卵蛋白質、魚蛋白質、家畜肉蛋白質以及它們的肽。糖類的實例包括已知的糖類例如單糖、二糖和寡糖、糖醇，多糖例如果膠、半纖維素、纖維素、淀粉、樹膠以及它們的部分降解產物。脂肪和油的實例包括已知的脂肪和油例如來自植物的脂肪和油，例如大豆油、棉籽油、芝麻油、橄欖油、棕櫚油、油菜籽油和葵花子油，來自動物的脂肪和油例如乳脂肪、牛油、豬油和魚油。任何乳化劑都可以使用，它們的實例包括酪蛋白、卵磷脂、溶血卵磷脂；蔗糖脂肪酸酯和甘油脂肪酸酯。其它天然抗氧化劑物質的實例包括生育酚、L-抗壞血酸及其衍生物、β-胡蘿卜素、來自芝麻籽的sesamolinol and sesaminol、茶葉兒茶素所含的表沒食子兒茶精以及多酚例如異黃酮和皂草苷。除了這些抗氧化劑以外的其它組分可以單獨或兩種或多種一起使用。如上面所述，因為本發明抗氧化劑能夠對脂肪和油產生抗氧化劑能力，所以可以將其用于食品領域、化妝品和醫藥中。
實施例下面實施例對本發明做進一步的詳細說明，但本發明并不受這些實施例的限制。實施例中所有的百分比都以重量計。
實施例1(抗氧化劑物質A)將2倍的水(200份)加到100份在大豆蛋白質分離生產步驟中獲得的“okara”(水80％)中，用鹽酸把pH值調節至4.5，然后在120℃將此混合物熱提取1.5小時。冷卻后，將此混合物離心(10,000G×30min)分離成上清液和沉淀級分。將如此分離的沉淀級分進一步用相等重量的水洗滌，離心，把該上清液與上面的上清液合并，用Toshiba Ceramics制備的陶瓷過濾器(孔徑500直徑)進行超濾，將所得濾液在減壓下濃縮至10倍濃度，然后冷凍干燥獲得抗氧化劑物質A。相對于原料“okara”的干燥重量，產率為5.6％。當將該分子量用Tosoh Corporation生產的HPLC柱測量時，抗氧化劑物質A的分子量分布范圍是2,000-28,000。當把干燥產品放置在室中時，沒有觀察到潮解現象。
實施例2(抗氧化劑物質B)在制備抗氧化劑物質A的過程中，固體-液體分離后，將99％的異丙醇加到上清液中，以使最終異丙醇的濃度為70％。用離心法(10,000G×30min)除去所得沉淀，在減壓下除去異丙醇，然后冷凍干燥殘余物獲得抗氧化劑物質B。相對于原料“okara”的干燥重量，產率為6.3％。用Tosoh Corporation生產的HPLC柱(G3000PWXL(7.6mm×30cm))確定分子量，抗氧化劑物質B的分子量的范圍是30,000或更小。
實施例3(抗氧化劑物質C)按照與制備抗氧化劑物質B相同的方法，獲得抗氧化劑物質C，只是最終的異丙醇濃度是60％。相對于原料“okara”的干燥重量，產率為6.5％。用HPLC確定的分子量范圍是28,000或更小。
實施例4(抗氧化劑物質D)按照與制備抗氧化劑物質B相同的方法，獲得抗氧化劑物質D，只是最終的異丙醇濃度是50％。相對于原料“okara”的干燥重量，產率為6.2％。用HPLC確定的分子量范圍是26,000或更小。
實施例5(抗氧化劑物質E)按照制備抗氧化劑物質B的方法，獲得抗氧化劑物質E，只是最終的異丙醇濃度是40％。相對于原料“okara”的干燥重量，產率為5.8％。用HPLC確定的分子量范圍是26,000-25,000。
實施例6(抗氧化劑物質F)按照與制備抗氧化劑物質B相同的方法，獲得抗氧化劑物質F，只是最終的異丙醇濃度是35％。相對于原料“okara”的干燥重量，產率為5.1％。用HPLC確定的分子量范圍是2,000-22,000。
比較實施例1(抗氧化劑物質G)按照與制備抗氧化劑物質B相同的方法，獲得抗氧化劑物質G，只是最終的異丙醇濃度是20％。相對于原料“okara”的干燥重量，產率為29.1％。當用HPLC確定分子量的分布時，甚至發現分子量的范圍是大約1,200,000。
比較實施例2(抗氧化劑物質H)在制備抗氧化劑物質A的過程中，在未用陶瓷過濾器過濾的情況下冷凍干燥獲得抗氧化劑物質H。相對于原料“okara”的干燥重量，產率為41.5％。當用HPLC確定分子量的分布時，發現分子量的范圍甚至是大約2,000,000。
對于用上述方法制備的抗氧化劑物質，通過貯存24小時和48小時以后，用TBA方法測量MDA的量，確定其對亞油酸甲酯的抗氧化作用。加到系統中的抗氧化劑物質的量為1.0％。因為數值比較小，被氧化的脂質的量比較小，因而可以確定抗氧化劑具有較強的抗氧化劑能力。
(表1)貯存過程中MDA的量的變化

盡管認識到在每一從“okara”中提取的熱水提取物中具有一定的抗氧化劑能力，但還是需要30％重量或更高濃度的異丙醇用以分離具有高純度抗氧化劑功能的級分。當濃度低于這一范圍，就不能獲得具有足夠抗氧化劑能力的高純度的級分，盡管由于多糖組分雜質而使產率得以改進。通過用陶瓷過濾器制備的抗氧化劑物質具有與用60％異丙醇沉淀制備的抗氧化劑相同的功能。
按照實與施例3和實施例5相同的方法，獲得抗氧化劑物質，只是所使用的親水性溶劑由異丙醇變為乙醇。獲得與使用異丁醇所獲得的幾乎相同的結果。具有抗氧化劑能力的物質的產率分別為5.3％和6.6％，并且在這兩種情況下中分子量分布都是30,000或更小。
按照實施例3，將用于從熱水提取物中制備抗氧化劑物質的異丙醇濃度設定為60％，并且通過用“okara”作為原料以及改變熱水提取溫度，對抗氧化劑的制備進行研究。
實施例7(抗氧化劑物質I)按照與制備抗氧化劑物質C相同的方法，獲得抗氧化劑物質I，只是獲得熱水提取物的溫度為110℃。相對于原料“okara”的干燥重量，抗氧化劑物質的產率為5.2％。用HPLC確定的分子量范圍是30,000或者更小。
實施例8(抗氧化劑物質J)按照與制備抗氧化劑物質C相同的方法，只是獲得熱水提取物的溫度為130℃，獲得抗氧化劑物質J。相對于原料“okara”的干燥重量，抗氧化劑物質的產率為6.6％。
實施例9(抗氧化劑物質K)按照與制備抗氧化劑物質C相同的方法，只是獲得熱水提取物的溫度為140℃，獲得抗氧化劑物質K。相對于原料“okara”的干燥重量，抗氧化劑物質的產率為7.1％。
實施例10(抗氧化劑物質L)按照與制備抗氧化劑物質C相同的方法，只是獲得熱水提取物的溫度為150℃，獲得抗氧化劑物質L。相對于原料“okara”的干燥重量，抗氧化劑物質的產率為7.5％。
比較實施例3(抗氧化劑物質M)按照與制備抗氧化劑物質C相同的方法，只是獲得熱水提取物的溫度為98℃，獲得抗氧化劑物質M。相對于原料“okara”的干燥重量，抗氧化劑物質的產率為1.1％。用HPLC確定的分子量范圍為32,000或者更小。
關于用上述方法制備的抗氧化劑物質，通過貯存24小時和48小時以后，用TBA方法測量MDA的量，確定其對亞油酸甲酯的抗氧化作用。加到系統中的抗氧化劑物質的量為1.0％。此外，還對所制備的抗氧化劑的色調加以評估。因為數值比較小，被氧化的脂質的量比較小，因而可以確定抗氧化劑具有較強的抗氧化劑能力。
(表2)貯存過程中MDA的量的變化

(*○灰白色，△深棕色，×深褐色，-未評估)在抗氧化劑能力上，根據獲得熱水提取物的溫度，功能有很大不同。也就是說，雖然在100℃或者更低的溫度下觀察到很小的抗氧化劑特性，但是作為抗氧化劑這樣的抗氧化劑特性被認為不充分的。而且，產率顯著降低。另一方面，當在超過100℃的溫度進行提取時，產率高，并觀察到強烈的抗氧化劑特性。然而，在140℃或者更高的溫度下，發生褐變，因而在某種程度上被認為是不實用的。
按照上面[由“okara”1制備抗氧化劑物質]所描述的方法，對實施例3的抗氧化劑物質、市場上可以買到的大豆蛋白質分離物“FUJIPRO-E(商品名；由Fuji Oil Company，Limited生產)”(比較實施例4)以及酶降解的大豆肽“HINEUT S(商品名；由Fuji OilCompany，Limited生產)”(比較實施例5)的抗氧化劑能力進行評估。因為數值比較小，被氧化的脂質的量比較小，因而可以確定抗氧化劑具有較強的抗氧化劑能力。
(表3)貯存過程中MDA的量的變化

從上面的結果，可以看到本發明抗氧化劑物質具有較好的抗氧化劑能力。
實施例11將100g 5％重量的在上述實施例中獲得的抗氧化劑物質C的水溶液、100g純化的大豆油和2g聚甘油縮合的蓖麻油酸酯(由SakamotoYakuhin Kogyo生產，商品名“SY Glyster CRS-75”)的混合物用均化器在40℃以10,000rpm攪拌并混合3分鐘，制備W/O-型乳液。基于大豆油重量，將乳液以2％重量的量(抗氧化劑物質500ppm)加到大豆油中，然后在110℃下進行變質加速試驗。
比較實施例6按照與實施例11相同的方法，只是用生育酚代替抗氧化劑物質C，進行變質加速試驗。用CDM試驗(由Metrohm-Sibata Ltd.生產，“Lanshimat E679型”)測定抗氧化能力，結果顯示于表4。
(表4)對大豆油的抗氧化能力

結果顯示，隨著誘導時間的延長，抗氧化劑能力相應增強。
從表4可以看出，本發明抗氧化劑物質顯示較好的抗氧化劑能力，并且與加入生育酚的產品比較，具有幾乎相同的有效水平。
實施例12加入上面實施例獲得的抗氧化劑物質C，制備具有下面表5(實施例12)所示配方的人造奶油(實施例12)。
比較實施例7按照與實施例12相同的方法，只是加入脫脂奶粉來代替抗氧化劑物質C，制備人造奶油(比較實施例7)。
(表5)人造奶油配方(％重量)

通過AOM試驗來測量直至POV達到100的時間，評估每一所得人造奶油的氧化穩定性。作為結果，在使用脫脂奶粉的比較實施例7中，時間為41小時，而在使用抗氧化劑物質C的實施例12中，時間為66小時。因此，其中混合了抗氧化劑物質C的人造奶油在氧化穩定方面是優良的。
工業實用性按照本發明，對包含于大豆原料的熱水提取物中的抗氧化劑物質，可以容易地予以分離和濃縮，提供具有高穩定性的新的天然抗氧化劑成為可能，并且可以通過實用的方法將之應用于食品、脂肪和油等。
權利要求
1.生產抗氧化劑的方法，該方法包括將低分子量級分從通過在100℃以上高溫于弱酸條件下用熱水提取而由大豆籽原料獲得的熱水提取物中分離出來。
2.按照權利要求1的方法，其中所述低分子量級分的分子量為30,000或者更小。
3.按照權利要求1或2的方法，其中從熱水提取物中分離低分子量級分是通過用含水的親水性有機溶劑使高分子量級分沉淀，并且將低分子量級分溶解在含水的親水性有機溶劑中來進行的。
4.按照權利要求3的方法，其中在含水的親水性有機溶劑中親水性有機溶劑的濃度為30％或者更高。
5.按照權利要求1或者2的方法，其中從熱水提取物中分離低分子量級分是用超濾薄膜通過薄膜分離來進行的。
6.包含作為有效組分的熱水提取物的級分的抗氧化劑，所述熱水提取物的級分是通過在100℃以上高溫于弱酸條件下用熱水提取大豆籽原料獲得的，并且具有30,000或者更小分子量。
7.按照權利要求6的抗氧化劑，其中具有30,000或者更小分子量的級分包含糖類和蛋白質組分。
全文摘要
本發明提供了通過從大豆中有效地提取抗氧化劑組分而實際獲得天然抗氧化劑的方法，這種天然抗氧化劑在加到食品中時可以給消費者提供安全感。可以確定，通過在100℃以上高溫于弱酸條件下用熱水提取大豆籽獲得的熱水提取物具有抗氧化劑效果。通過利用在含水的有機溶劑中的溶解度差異，或者使用適于分子量大小的適當過濾器，對所述熱水提取物的低分子量級分進一步分級，來有效地提供高抗氧化劑級分。
文檔編號A23L3/3463GK1685033SQ0382267
公開日2005年10月19日 申請日期2003年7月22日 優先權日2002年7月23日
發明者中村彰宏, 吉田隆治, 前田裕一, 古田均, 松村康生, 森友彥 申請人:不二制油株式會社