抑制滋養層細胞合胞體融合的免疫學結合分子的制作方法

專利名稱：抑制滋養層細胞合胞體融合的免疫學結合分子的制作方法
技術領域：
本發明涉及抑制人滋養層細胞合胞體融合的蛋白質、包含這些蛋白質的藥物及其在哺乳動物中用于避孕的用途。
抑制合胞體融合是可用于避孕的作用原理。在本發明中術語“避孕”是按照臨床觀點如下定義的盡管性接觸，但仍然每月按時來月經并且沒有開始懷孕。該一般定義也適合于目前臨床上最常用的避孕。人和其它哺乳動物的避孕可通過應用各種原理或者物質來實現。已知的方法是或者通過機械的或者通過化學的手段抑制卵細胞和精子的融合。精子例如可通過使用避孕套、子宮內植入物或者殺精于物質使其失活或者阻止其受孕。此外，可以阻止婦女卵巢中卵子的成熟，這可通過激素方法達到。這些方法是本領域普通技術人員已知的。
目前常用的一大類激素類避孕藥(“避孕藥丸”)影響子宮的粘膜(子宮內膜)，使胚泡的著床不再可能，因為子宮內膜不再接受它。這些避孕的激素方法有許多問題，為了達到希望的效果必須保證精確地按時和按量攝取激素。因為激素本身僅具有短的測定半衰期(數小時至最長數天)，用這種方法成功的避孕只有每天服用或者施用儲庫制劑才是可能的。所有這些方案都存在問題，即干擾或阻止女性器官激素的內分泌周期內環境穩定。因為子宮內膜是女性器官的組成部分，所以女性器官也是發生不希望的副作用的優先地點。
因此，希望如下的方法和物質a)對植入的胚泡具有其作用點并因此另外可使對女性的器官的副作用最小化。
b)不干擾女性的器官內分泌的自身調節。


圖1表示融合測試中的流式細胞計分析的實施例。其中，方框A表示DiI(本身)的熒光，而方框C表示DiO(本身)的熒光。方框B是具有融合引起的雙倍熒光的可見細胞。
圖1A，B表示對照，其中的細胞各只用一種熒光染料染色并在測試條件下培養。圖1A表示只用DiI染色，圖1B表示只用DiO染色。對于DiI的測定值在DiO-特異性測量通道中為零；因此，這這些點與X-軸重合。
圖1C，D表示克隆PHSK04的融合實驗。圖1C表示細胞在對照條件下(在非特異性蛋白質的存在下，在相同的表達體系中表達并純化)的融合速率，圖1D表示在100nM PHSK04-蛋白質存在下的融合速率。
圖2表示在融合實驗中實施例克隆與對照(鈣調蛋白質，在相同的表達體系中表達并純化)相比的相對抑制率。所示的是三次測試的平均值。
圖3表示具有SEQ.ID Nos.1-10的本發明優選蛋白質的共有序列。在這里給出的實施方案中，接頭是序列QSSRSS。Vl和Vh的共有序列是灰底的單字母表示的克隆的具體序列。因此共有序列本身是水平讀的，而對于每一個單字母表示的位置垂直方向所示的是優選替換的氨基酸。在該處的連接線表示在相應位置與共有序列相比也可缺失。X表示在該處不存在對于Vl或Vh的共有序列部分。
在PHSK04-蛋白質存在下融合速率降低。
通過一種與雞的Vl或Vh至少80％同源并且抑制合胞體融合的蛋白質以及具有來自雞的Vl或Vh序列的至少12個連續氨基酸的片段實現本發明的目的。在優選的實施方案中，本發明的蛋白質與雞的Vl或Vh蛋白質至少85％或者至少90％同源。在優選的實施方案中，本發明的片段具有雞的Vl或Vh序列的至少20個或者30個連續氨基酸。
優選地，本發明的蛋白質Vl具有下述的氨基酸序列X0A L T Q P S S V S A N X1 G X2T V X3X4T C S G X5X6X7X8X9X10Y GW X11Q Q K X12P G S X13P X14T X15I Y X16X17X18X19R P S X20I P S R FS G S X21S G S X22X23T L T I T G F Q A X24D E A V Y X25C G X26X27X28X29X30X31X32X33X34X35X36X37X38F G A G T T L T V L G X39其中X0＝未取代的、單-或二取代的氨基或者一個或多個氨基酸；X1＝P或L或缺失；X2＝G或E或缺失；X3＝K或E或缺失；X4＝I或L或缺失；X5＝G或S或缺失；X6＝S或G或缺失；X7＝G或R或Y或缺失；
X8＝S或R或Y或缺失；X9＝W或S或缺失；X10＝S或K或Y或缺失；X11＝Y或F或缺失；X12＝S或A或缺失；X13＝A或T或缺失；X14＝V或D或缺失；X15＝V或L或缺失；X16＝N或V或S或D或E或缺失；X17＝N或S或缺失；X18＝N或T或D或K或缺失；X19＝K或N或缺失；X20＝D或N或缺失；X21＝K或V或缺失；X22＝T或A或缺失；X23＝A或H或N或缺失；X24＝D或E或缺失；X25＝Y或F或缺失；X26＝N或S或G或缺失；X27＝R或Y或G或缺失；X28＝D或缺失；X29＝W或缺失；X30＝D或K或A或缺失；X31＝S或T或D或缺失；X32＝S或A或G或缺失；X33＝A或G或缺失；X34＝G或R或缺失；X35＝Y或N或缺失；X36＝V或A或T或缺失；X37＝G或A或N或缺失；X38＝I或A或M或缺失；和X39＝羧基、羧基衍生物或者一個或多個氨基酸；
其中任何氨基酸的相互保守交換是允許的，只要保持合胞體融合的抑制作用。
在另一優選實施方案中，本發明的蛋白質在Vh中具有下述序列X0X1V T L D E S G G G L Q T P G X2X3L S L V C K X4S G F X5X6X7X8YX9M X10W X11R Q A P G K G L E X12V X13X14X15X16X17X18X19X20X21X22T X23Y X24X25A V X26G X27X28X29X30X31X32X33X34X35X36X37X38X39X40X41X42X43X44X45X46X47X48X49X50X51X52X53X54X55X56X57X58X59其中X0＝未取代的，單-或二取代的氨基或者一個或多個氨基酸；X1＝A或S或T或缺失；X2＝G或R或缺失；X3＝G或A或T或缺失；X4＝A或G或缺失；X5＝S或T或D或缺失；X6＝F或M或缺失；X7＝S或T或缺失；X8＝S或D或N或缺失；X9＝G或Q或A或T或缺失；X10＝N或A或Q或G或缺失；X11＝I或V或缺失；X12＝F或W或Y或缺失；X13＝A或G或缺失；X14＝G或A或R或缺失；X15＝I或M或缺失；X16＝S或N或G或缺失；X17＝S或R或N或缺失；X18＝G或缺失；X19＝F或T或S或N或缺失；X20＝G或S或A或缺失；X21＝N或S或R或缺失；X22＝R或S或Y或缺失；
X23＝G或A或N或Y或缺失；X24＝G或A或缺失；X25＝S或A或P或缺失；X26＝K或Q或缺失；X27＝R或L或缺失；X28＝A或C或缺失；X29＝T或H或缺失；X30＝I或H或缺失；X31＝S或L或缺失；X32＝R或E或缺失；X33＝D或G或缺失；X34＝N或Q或R或D或K或缺失；X35＝G或R或W或缺失；X36＝Q或A或缺失；X37＝S或E或缺失；X38＝T或H或缺失；X39＝V或S或缺失；X40＝R或E或缺失；X41＝L或A或缺失；X42＝Q或A或缺失；X43＝L或A或缺失；X44＝N或E或S或缺失；X45＝N或Q或缺失；X46＝L或P或缺失；X47＝R或Q或缺失；X48＝A或G或缺失；X49＝E或G或缺失；X50＝D或H或缺失；X51＝T或R或L或缺失；X52＝G或P或缺失；X53＝T或P或缺失；X54＝Y或T或缺失；
X55＝Y或S或缺失；X56＝C或A或缺失；X57＝A或P或缺失；X58＝K或缺失；X59＝羧基、羧基衍生物或者一個或多個氨基酸；并且其中任何氨基酸的相互保守交換是允許的，只要保持合胞體融合的抑制作用。
按照本發明，“保守交換”特別是指極性、非極性、芳族、帶電荷的氨基酸之間的交換，例如甘氨酸與丙氨酸或纈氨酸等，精氨酸或賴氨酸與組氨酸等，苯丙氨酸與酪氨酸等。
按照本發明，本發明的蛋白質可通過接頭相互連接。該接頭優選是由至少五個任意的氨基酸組成的肽鏈。這些氨基酸優選與Vl或Vh鏈不具有或僅具有不顯著的相互作用。代替肽鏈，所述接頭也可由有機化合物構成。這些有機化合物主要由碳鏈構成，也可具有雜原子。在這種情況下，接頭的長度優選至少為9埃。
本發明蛋白質的序列中D-氨基酸的存在是有利的，因為這可導致降解變慢。
尤其優選具有氨基酸序列SEQ ID Nos.1-10的本發明的蛋白質。
這些蛋白質通過具有序列SEQ ID No.11的共有序列進行描述，該序列同樣是本發明所涉及的。
本發明還涉及編碼本發明的蛋白質的核酸，尤其是DNA或RNA，以及含有這類核酸的質粒或載體。
本發明還涉及含有至少一種本發明的蛋白質或核酸的藥物。
按照本發明，還要求保護至少一種本發明的蛋白質或核酸用于制備用于哺乳動物避孕的藥物的用途。按照本發明的藥物典型的是按照100ng/kg-1000μg/kg體重的量施用。給藥途徑優選胃腸外、通過輸注或通過肌內或皮下注射。此外，可能的劑型包括鼻噴霧劑、栓劑、陰道施用，例如通過棉塞或其本身為醫學領域普通技術人員已知的其它合適的應用形式或通過簡單試驗可確定的形式。
胚泡成功地植入子宮內膜中不僅取決于子宮內膜的接受性。只有當處于胚泡外層的細胞，所謂的滋養層細胞，相互融合并形成合胞體時植入才是可能的。合胞體的形成是一個僅發生于人體生物學中少數部位的過程，例如已知在骨骼肌纖維形成中和在破骨細胞的形成中。
在成肌細胞的合胞體融合或破骨細胞的形成中，ADAM(aDisintegrinand ametalloproteinase；相關綜述參見Huppertz等，2001)組的分子是特別重要的，而人的滋養層利用內源逆轉錄病毒蛋白質，即syncytin(Mi等，2000)。因此，出發點是通過抑制滋養層細胞的融合達到避孕效果。滋養層融合過程對于滋養層是特異性的，因此，其抑制可用于選擇性的滋養層-特異性的避孕。
從功能上看，本發明的蛋白質的特點是其抑制滋養層細胞合胞體融合的能力。它們可被用于在雌性哺乳動物中，尤其是嚙齒類動物、寵物，例如狗和貓，和在人類中達到避孕效果。因此本發明主要包括下述組分蛋白質，其可優選以免疫結合分子的形式存在，其a)通過同源性比較可分類為非哺乳動物，尤其是雞的抗體衍生物；特別是它們的實質特征是提及的氨基酸共有序列；b)功能特征在于抑制哺乳動物滋養層細胞的合胞體融合。
免疫結合分子的結構單元在優選實施方案中，本發明的蛋白質可以免疫結合分子形式存在。在本文描述的實施例中，免疫結合分子是重組分子。在實施例中給出的免疫結合分子是“單鏈可變片段”抗體(scFv)類型，這種抗體分子只由抗體分子的輕鏈(Vl)和重鏈(Vh)的可變區構成，所述抗體分子通過重組插入的一個短的序列(接頭)相互連接。因此，scFv可被理解為免疫結合分子的最低限要求實施方案。起決定性的結合信息包含在單個可變區Vl和Vh中，而不在于其連接的方式和類型。本發明其它實施方案涉及所謂的Fab(抗原結合片段)抗體或其它任意構建的抗體分子，并且還任選非重組的天然的抗體分子，其序列中包含至少一個可變區。在也通過實施例說明的scFv實施方案中，可能涉及下述相關的組件的序列Vl-接頭-VhVh-接頭-Vl對于其它載體構建，同樣適合的是在構建體中Vl和Vh的順序不是確定的，并且構建體本身對于結合性能的貢獻不是關鍵的。本文中所用的“載體構建”是指可在其上裝配scFv抗體或這些抗體的部分的那些分子，以可通過最佳方式發現其結合配偶體。
因此，本發明尤其是涉及所有免疫結合分子及其衍生物，其特異性結合區域具有下述Vh和Vl的共有序列或其序列分別與Vl或Vh的共有序列至少80％相同，并且能抑制滋養層細胞的融合。同樣，在免疫結合分子的重組表達中是否由于技術原因引入所謂的表位標記(例如用于改進純化的HIS標記或在免疫檢測方法中使用第二抗體的myc標記等)對于本發明是不重要的。這些標記是純技術性的，不是本發明要保護的序列的組成部分。
免疫結合分子，如本文所描述的那些，可以用雞通過把雞的所有免疫組成成分以適當的形式轉運至分子生物學文庫中而獲得。合適的技術例如描述于Barbas CF，Burton DR，Scott JK，Silverman GJ；Phage DisplayA laboratory manual，CSHL Press，New York中，如果這樣的文庫可獲得，可通過已知的技術(例如描述于上述Barbas等的文獻中)，通過分離結合可融合的滋養層細胞表面的那些抗體，能富集希望的分子，然后在DNA水平上通過分離克隆這些抗體并在DNA水平上進行序列分析。然后為了檢測其融合-抑制作用，必須在融合試驗中測試所有抗體并表征。本文所給出的共有序列很可能涵蓋了這種由隨機文庫中分離得到的融合-抑制性抗體的序列。
另外，已知序列的抗體DNA可通過上述方法在噬菌體展示中克隆雞抗體并對單個克隆隨機選取和進行序列分析而制備。雞抗體的構架序列與本文中的Vh和Vl構架序列是高度同源的并且偏離很少。結合特異性通過“互補決定區”(CDR)確證，一種抗體與另一種抗體的CDR差異很大。應用已知的分子生物學技術，通過有選擇性交換各片段，主要是CDR區，也可以這種方法修飾克隆的雞序列，構建希望序列的抗體。
實施例抗體分子在實施例中給出的scFv抗體存在于載體pAC中，由DNA編碼。這一載體是適合于大腸桿菌(E.coli)的表達載體，其由f1起始點，一種阿拉伯糖-控制的pBAD啟動子和一種帶來氨芐西林抗性的基因組成。將編碼所述免疫結合分子的DNA序列插入到該載體中，使其表達受pBAD啟動子控制。載體中包含的信號肽引導表達的蛋白質進入大腸桿菌的周質中，并且6xHIS標記與要表達的序列連接，以使通過金屬親和性色譜進行純化稱為可能。所有克隆都在表達前通過序列分析驗證，從而確保所用的DNA序列正確地構建到載體中。
所述序列可在任何適合于表達蛋白質的表達體系，例如在大腸桿菌和啤酒糖酵母(Saccharomyces cerevisiae)中，在相應的再克隆后合成為蛋白質。相應的步驟被描述于很多分子生物學和生物技術教科書中，并且原則上所有這些教科書都可適用于本發明的序列。這些技術是本領域普通技術人員已知的。在下面說明通過載體pAC在大腸桿菌(Top Ten菌株，Invitrogen，Groningen，荷蘭)中的表達和表達的蛋白質的純化和表征。
首先通過電穿孔將含有要表達的序列的pAC衍生物轉化到大腸桿菌Top Ten中，并將轉化的混合物在瓊脂板上(LB培養基，50μg/ml氨芐西林)上平板培養并在30℃溫育過夜。
在第二天，將每5ml LB培養基(組成參見Sambrook等，1989；含有50μg/ml氨芐西林)用從單個菌落獲得的細菌接種。將該培養物于37℃下，在300轉數/分鐘(rpm)的溫育搖動器上溫育過夜。第二天，將該過夜預溫育的表達培養物以1∶100的稀釋度接種并且在37℃下于Fernbach瓶中，在300rpm下培養，直至光學密度(在600nm測定OD600)達到0.5。一般情況下，約2.5小時后達到這種情況。在達到希望的OD600后，通過加入L-阿拉伯糖(至最大濃度0.02％；最佳濃度必須通過在預實驗中對于每一克隆確定)誘導表達。此時在26℃和300rpm下表達4-6小時。細菌的生長行為通過取樣和測量OD600記錄。表達期完成后，在4℃和4000xg離心該培養物20min，將沉淀重新懸浮于2ml TES緩沖液中(0.2M Tris-HCl，pH8.0；0.5mM EDTA；0.5M蔗糖)。此時，向該混懸液中慢慢加入3ml 1/5TES緩沖液(1體積份TES緩沖液+4體積雙蒸水)，進行混合并在冰上溫育30min，然后將該樣品分裝到1.5ml反應容器中并在4℃和10,000xg離心10分鐘，上清液含有周質蛋白質，因此也含有希望的表達產物。
對于后處理，將該上清液在4℃下對等滲的磷酸鹽緩沖鹽水(pH7.4，含有10mM咪唑)透析過夜。此時借助于用于鎳親和性色譜的可商購的試劑盒(例如Qiagen GmbH，Hilden，德國)可純化希望的蛋白質。純化通過凝膠電泳檢測并測定蛋白質濃度(Harlow和Lane，1988)。摩爾濃度通過濃度測定和由序列導出的分子量確定。
然后，在融合試驗中，在等摩爾條件下檢驗純化并定量分析的蛋白質是否能夠抑制人滋養層細胞的融合。
下面列舉了在實施例中表達和分析的克隆以及對比給出由DNA序列翻譯的氨基酸序列。
融合實驗，操作和結果抑制融合作用的驗證是應用自發融合的人滋養層細胞系AC-1M17進行的。這一細胞系的細胞在接種于新的培養容器后立刻顯示出初始的融合速率為20-30％。
使這一細胞系的細胞首先增殖至足夠數量，然后分成兩部分，用不同的商購熒光染料(DiI和DiO，按照供應商Molecular ProbesBV，Leiden，Netherlands的說明染色)染色。
在對細胞進行充分洗滌(5×10分鐘)，以洗去任何可能附著的沒有整合到細胞膜中的染料殘余物之后，將兩部分細胞混合并一起，并且共同在低細胞密度、標準培養條件(5％二氧化碳，38℃，濕度大于90％)下于Ham′s F12(10％胎牛血清和抗生素)中溫育24小時。在培養期后，用胰蛋白質酶將細胞從培養瓶底分離下來，懸浮，并用流式細胞計測定存在多少細胞通過融合而具有雙倍的熒光。圖1示出這種融合實驗評價的實例，圖2概述了在實施例中測定的對于各個scFv克隆，這些滋養層細胞的融合的抑制率。該圖同樣顯示了在各種克隆中融合抑制作用的濃度依賴性。
文獻列表Harlow E，Lane D(1988)AntibodiesA laboratory manual.Cold Spring HarborLaboratory，Cold Spring Harbor，NYHuppertz B，Tews DS，Kaufmann P(2001)Apoptosis and syncytial fusion inhuman placental trophoblast and skeletal muscle.Int Rev Cytol 205215-253Mi S，Lee X，Li X，Veldman GM，Finnerty H，Racie L，LaVallie E，Tang X-Y，Edouard P，Howes S，Keith JC，McCoy JM(2000)Syncytin is a captiveretroviral envelope protein involved in human placental morphogenesis.Nature403785-789Sambrook J，Fritsch EF，Maniatis T(1989)Molecular cloninga laboratorymanual，2nd ed.edn.Cold Spring Harbor Laboratory，Cold Spring Harbor，N.Y
權利要求
1.一種與雞的V1或Vh至少80％同源并且抑制合胞體融合的蛋白質以及具有來自雞的V1或Vh序列的至少12個連續氨基酸的片段。
2.按照權利要求1的蛋白質，其中V1具有下述序列X0ALTQPSSVSANX1GX2TVX3X4TCSGX5X6X7X8X9X10YGWX11QQKX12PGSX13PX14TX15IYX16X17X18X19RPSX20IPSRFSGSX21SGSX22X23TLTITGFQAX24DEAVYX25CGX26X27X28X29X30X31X32X33X34X35X36X37X38FGAGTTLTVLGX39其中X0＝未取代的，單-或二取代的氨基或者一個或多個氨基酸；X1＝P或L或缺失；X2＝G或E或缺失；X3＝K或E或缺失；X4＝I或L或缺失；X5＝G或S或缺失；X6＝S或G或缺失；X7＝G或R或Y或缺失；X8＝S或R或Y或缺失；X9＝W或S或缺失；X10＝S或K或Y或缺失；X11＝Y或F或缺失；X12＝S或A或缺失；X13＝A或T或缺失；X14＝V或D或缺失；X15＝V或L或缺失；X16＝N或V或S或D或E或缺失；X17＝N或S或缺失；X18＝N或T或D或K或缺失；X19＝K或N或缺失；X20＝D或N或缺失；X21＝K或V或缺失；X22＝T或A或缺失；X23＝A或H或N或缺失；X24＝D或E或缺失；X25＝Y或F或缺失；X26＝N或S或G或缺失；X27＝R或Y或G或缺失；X28＝D或缺失；X29＝W或缺失；X30＝D或K或A或缺失；X31＝S或T或D或缺失；X32＝S或A或G或缺失；X33＝A或G或缺失；X34＝G或R或缺失；X35＝Y或N或缺失；X36＝V或A或T或缺失；X37＝G或A或N或缺失；X38＝I或A或M或缺失；和X39＝羧基、羧基衍生物或者一個或多個氨基酸；并且其中任何氨基酸的相互的保守交換是允許的，只要保留抑制合胞體融合的作用。
3.按照權利要求1的蛋白質，其中Vh具有下述序列X0X1VTLDESGGGLQTPGX2X3LSLVCKX4SGFX5X6X7X8YX9MX10WX11RQAPGKGLEX12VX13X14X15X16X17X18X19X20X21X22TX23YX24X25AVX26GX27X28X29X30X31X32X33X34X35X36X37X38X39X40X41X42X43X44X45X46X47X48X49X50X51X52X53X54X55X56X57X58X59其中X0＝未取代的，單-或二取代的氨基或者一個或多個氨基酸；X1＝A或S或T或缺失；X2＝G或R或缺失；X3＝G或A或T或缺失；X4＝A或G或缺失；X5＝S或T或D或缺失；X6＝F或M或缺失；X7＝S或T或缺失；X8＝S或D或N或缺失；X9＝G或Q或A或T或缺失；X10＝N或A或Q或G或缺失；X11＝I或V或缺失；X12＝F或W或Y或缺失；X13＝A或G或缺失；X14＝G或A或R或缺失；X15＝I或M或缺失；X16＝S或N或G或缺失；X17＝S或R或N或缺失；X18＝G或缺失；X19＝F或T或S或N或缺失；X20＝G或S或A或缺失；X21＝N或S或R或缺失；X22＝R或S或Y或缺失；X23＝G或A或N或Y或缺失；X24＝G或A或缺失；X25＝S或A或P或缺失；X26＝K或Q或缺失；X27＝R或L或缺失；X28＝A或C或缺失；X29＝T或H或缺失；X30＝I或H或缺失；X31＝S或L或缺失；X32＝R或E或缺失；X33＝D或G或缺失；X34＝N或Q或R或D或K或缺失；X35＝G或R或W或缺失；X36＝Q或A或缺失；X37＝S或E或缺失；X38＝T或H或缺失；X39＝V或S或缺失；X40＝R或E或缺失；X41＝L或A或缺失；X42＝Q或A或缺失；X43＝L或A或缺失；X44＝N或E或S或缺失；X45＝N或Q或缺失；X46＝L或P或缺失；X47＝R或Q或缺失；X48＝A或G或缺失；X49＝E或G或缺失；X50＝D或H或缺失；X51＝T或R或L或缺失；X52＝G或P或缺失；X53＝T或P或缺失；X54＝Y或T或缺失；X55＝Y或S或缺失；X56＝C或A或缺失；X57＝A或P或缺失；X58＝K或缺失；X59＝羧基、羧基衍生物或者一個或多個氨基酸；并且其中任何氨基酸的相互的保守交換是允許的，只要保留抑制合胞體融合的作用。
4.按照權利要求1的蛋白質，其中所述蛋白質具有通過接頭相互連接的權利要求2和3的序列。
5.按照權利要求4的蛋白質，其中所述接頭是由至少5個任意氨基酸組成的肽鏈。
6.按照權利要求1-5任一項的蛋白質，其中在所述序列中包含D-氨基酸。
7.按照權利要求1-6任一項的蛋白質，其具有氨基酸序列SEQ IDNos.1至10。
8.一種蛋白質，其具有序列SEQ ID No.11(共有序列)。
9.一種編碼權利要求1-8任一項的蛋白質的核酸，尤其是DNA或RNA。
10.含有權利要求9的核酸的質粒或載體。
11.一種藥物，其含有至少一種權利要求1-8任一項的蛋白質或至少一種權利要求9的核酸。
12.至少一種權利要求1-8任一項的蛋白質或至少一種權利要求9的核酸用于制備用于哺乳動物避孕的藥物的用途。
全文摘要
本發明涉及抑制合胞體融合、與雞的V1或Vh至少80％同源的蛋白質，以及具有來自雞的V1或Vh序列的至少12個連續氨基酸的片段。
文檔編號C12N15/63GK1656120SQ02813510
公開日2005年8月17日 申請日期2002年7月3日 優先權日2001年7月4日
發明者H·－G·弗蘭克, P·考夫曼, U·施密茨 申請人:阿普拉根有限責任公司