吲哚并吡咯并咔唑的拓撲異構酶i選擇性細胞毒素糖衍生物的制作方法

專利名稱：吲哚并吡咯并咔唑的拓撲異構酶i選擇性細胞毒素糖衍生物的制作方法
技術領域：
本發明涉及吲哚并吡咯并咔唑的氟代糖和其它糖衍生物，它們的鹽和水合物，它們顯示選擇性拓撲異構酶I活性，用于抑制腫瘤細胞增殖，并且顯示抗腫瘤作用，以及涉及它們的制備方法。
背景技術：
拓撲異構酶是重要的核酶，其功能是解決DNA中的拓撲難題，像過旋，欠旋和鏈狀排列，其正常地在復制，轉錄和可能其它的DNA過程中出現。這些酶通過形成酶-橋接鏈裂解使DNA松弛，所述裂解作為其他DNA鏈通道的暫時通道或關鍵點起作用。拓撲異構酶定向藥物顯示干擾DNA拓撲異構酶的這種裂解-復合反應。在拓撲異構酶活性試劑的存在下，一種起媒介作用的反應中間體，稱作′可裂解復合體′，蓄積并且導致復制/轉錄抑制，最終導致細胞死亡。
所以拓撲異構酶I(topo I)活性試劑的發展為癌癥臨床治療中當前使用的多種治療方案集合提供一個新的途徑。最近的文章[CancerChemother.Pharmacol 1994，34(增刊)，S41-S45]討論了臨床研究中的拓撲異構酶I活性化合物，并且發現這些是有效的臨床抗腫瘤藥物。這些臨床候選藥物結構上與喜樹堿生物堿(1)相關。其他報道涉及喜樹堿類似物(Cancer Commun. 1990,2,395；Farm. Clin.1997,14,250,253,256-258)，提出選擇性拓撲異構酶I抑制性質和可能的對各種各樣的人腫瘤的抗腫瘤活性之間的關系。另外，一些超表達人拓撲異構酶I的細胞系，包括人結腸癌細胞系，已經被證明對喜樹堿是超敏感的(Cancer Research 1992,52,525)。
最近的綜述重點突出一些非喜樹堿拓撲異構酶I活性劑(ExpertOpin.Ther.Pat.10635-666,2000)。此外，公開了與Rebeccamycin類有關的吲哚并[2，3a]咔唑衍生物，例如NB-506，(EP申請0 545 195 B 1和0,602,597 A2；Cancer Research 1993,53,490-494ibid 1995,55,1310-1315)并且聲稱顯示了抗腫瘤活性。但是，和作為選擇性拓撲異構酶I毒素的喜樹堿不一樣，據報道這些衍生物沒有選擇性，表現出另外的生物學作用，例如DNA插入(Cancer Research 1995,55,1310)，酪氨酸基酶活性(Molecular Pharmacol.1999,56,185-195)和拓撲異構酶II活性(Proc.AACR 1997,38,75)。吲哚并[2，3-a]咔唑生物堿像rebeccamycin(U.S.4,487,925和4,552，842)及其水溶性臨床活性類似物，6-(2-二乙基氨基乙基)rebeccamycin(U.S.4,785,085)，是有用的瞄向DNA的抗腫瘤藥物。也公開了相關的吲哚并咔唑(WO 9530682)并聲稱顯示了抗腫瘤活性。
此外，像WO 98/07433中描述的那些氟代吲哚并咔唑是具有拓撲異構酶I抑制活性的抗腫瘤藥物。U.S.5,468,849公開了一些作為有用的抗腫瘤藥物的氟代rebeccamycin類似物，以及通過氣生菌落糖絲菌(Saccharothrix aerocolonigenes)，優選氣生菌落糖絲菌C38，383-RK2(ATCC 39243)的rebecca mycin-生產菌株的氟代色氨酸類似物培養的它們的制備方法。
最近Prudhomme等報道都表現出所謂抗性指數低于20的從rebeccamycin衍生的一系列吲哚并咔唑(Current Medicinal Chemistry2000，7，1189)。抗性指數的定義為IC50P388CPT5/IC50P388，其中這些IC50是分別對喜樹堿和親代P388細胞抗鼠P388CPT5白血病細胞的抗增殖活性的量度。
除了這些實施例外，還有對于用于選擇性抑制拓撲異構酶I活性，從而用作抗癌藥物的新的和潛在的細胞毒素化合物的需要。
本發明概述本發明涉及吲哚并吡咯并咔唑的氟代糖和其它糖衍生物，它們的鹽和水合物，它們顯示拓撲異構酶I(topo I)活性，用于抑制腫瘤細胞增殖，并且顯示抗腫瘤作用，以及涉及它們的制備方法。
更具體地，本發明提供具有大于大約100的拓撲異構酶I選擇性指數的式I的化合物 它們的對映體，非對映體，藥學可接受鹽，水合物，前體藥物和溶劑合物；其中Ra和Rb各自獨立地選自H和O，條件是當選擇O時，Ra和Rb一起形成O；Ra’和Rb’各自獨立地選自H和O，條件是當選擇O時，Ra’和Rb’一起形成O；X1，X1′，X2和X2′各自獨立地選自F，Br和H；Q選自NH，S和O；并且R是取代的己糖基團。
本發明還提供通過調節拓撲異構酶I來治療病癥的方法，包括對需要這樣的治療的哺乳動物物種施用有效量的至少一種如上定義的式I的化合物。
本發明的詳細描述本發明包括如上定義的式(I)的吲哚并吡咯并咔唑的氟代糖和其它糖衍生物。這些化合物和它們的藥學可接受鹽和水合物表現出選擇性拓撲異構酶I(topoI)活性，用于抑制腫瘤細胞增殖，并且顯示顯著抗腫瘤作用。最重要地，本發明描述了與WO 98/07433和共同未決的美國申請編號No.08/914566(這兩篇專利文獻在此引作參考)中公開的化合物相關的拓撲異構酶I活性化合物，當與拓撲異構酶I不足或受抑制的細胞系相比，對細胞增殖所要求的拓撲異構酶I表達水平正常的一些細胞系的細胞毒性進行評價時，其顯示令人驚奇的和意料之外的選擇性指數。
所述″選擇性指數″(R/S)是通過特定化合物抗喜樹堿抗性鼠白血病細胞系P388/CPT45的細胞毒素IC50除以當使用親代P388細胞系時的IC50而得到的。結構上與先前鑒定為具有拓撲異構酶I活性的吲哚并吡咯并咔唑以及已知作為其他作用機理的結果而表現出細胞毒素作用參考試劑密切相關的化合物，證明具有寬的不可預知范圍的選擇性指數(R/S)(Proc.AACR 1997,38,75)。判斷選擇性水平在例如調節潛在的不期望的副作用和/或毒性中是有利而有益的。以不能預料和不可預知的選擇性指數為基礎，從WO 98/07433和共同未決的美國申請編號No.08/914566中一般公開的化合物中選擇本發明的化合物(參見表I和II)。從表I和II可見，根據下面給出的方法測定的表現出拓撲異構酶I活性和細胞增殖抑制作用的結構密切相關類似物其拓撲異構酶I選擇性仍然有所不同。本發明的糖基部分或吲哚并吡咯并咔唑部分的取代中的簡單變化會改變選擇性。選擇性的這種改變是本領域技術人員不可預測的。也表現出拓撲異構酶I活性和選擇性的喜樹堿類化合物沒有表現出這樣的不可預知的選擇性。當治療群體中發生人口統計變化時，特定治療所用選擇性試劑的鑒定是提供可接受治療指標的關鍵因素，并因此提高安全性和耐受性。總之，已報道的文獻中沒有提到或教導本發明選擇的吲哚并咔唑預期具有喜樹堿樣拓撲異構酶I選擇性和抗腫瘤活性。
一般來說，本發明包括具有大于大約100的拓撲異構酶I選擇性指數的式I的化合物，
它的對映體，非對映體，藥學可接受鹽，水合物，前體藥物和溶劑合物；其中Ra和Rb各自可以是H或者一起構成O。類似地，Ra’和Rb’各自可以是H或者一起構成O。X1，X1′，X2和X2′各自獨立地選自F，Br和H；Q選自NH，S和O。最后R是取代的己糖基團。
在一個優選的實施方案中，X1是F；X1′選自F和Br；和，X2和X2′選自F和H。
在另一個優選的實施方案中，X1和X1′是F；X2和X2′是H；和Q是NH。
在另一個優選的實施方案中，X1和X1′是F；X2和X2′是H；和Q是NH；Ra和Rb一起是O；Ra′和Rb′是H；并且所述取代的己糖基團是 在另一個優選的實施方案中，X1和X1′是F；X2和X2′是H；和Q是NH；Ra′和Rb′一起是O；Ra和Rb是H；并且所述取代的己糖基團是 在另一個優選的實施方案中，本發明是化合物
在另一個優選的實施方案中，本發明是化合物 在另一個優選的實施方案中，本發明是化合物 本發明還提供了通過調節拓撲異構酶I來治療病癥的方法，包括對需要這樣治療的哺乳動物物種施用有效量的至少一種如上定義的式I的化合物。在一個優選的實施方案中，與拓撲異構酶I相關的病癥是癌癥。在另一個優選的實施方案中，該方法進一步包括結合至少一種式I的化合物(依次或者同時)對所述哺乳動物物種施用至少一種其他抗癌藥物。
要明白除非另外特別說明，本發明包括任何和所有可能的立體異構體，幾何異構體，非對映異構體，對映異構體和端基差向異構體。本發明的化合物能以藥學可接受鹽形式存在。這樣的鹽包括與無機酸的加成鹽，像，例如，鹽酸和硫酸，和與有機酸的加成鹽，像，例如，乙酸，檸檬酸，甲磺酸，甲苯磺酸，酒石酸和馬來酸。此外，在本發明化合物含有一個酸性基團的情況下，該酸性基團能以堿金屬鹽，像，例如，鉀鹽和鈉鹽；堿土金屬鹽，像，例如，鎂鹽和鈣鹽；和與有機堿的鹽，像三乙銨鹽和精氨酸鹽的形式存在。本發明的化合物可以是水合的或者非水合的。
本發明的化合物可以作為片劑，膠囊(各自包括緩釋或延遲釋放劑型)，丸劑，粉末劑，顆粒劑，酏劑，酊劑，混懸液，糖漿和乳劑這樣的口服劑量形式施用。本發明的化合物還可以靜脈內，腹膜內，皮下，或肌內施用，所有使用的劑量形式對于制藥領域的普通技術人員是公知的。可以單獨使用本發明的化合物，但是一般與以選擇的給藥途徑和標準藥學實踐為基礎而選擇的藥物載體一起使用。通過局部使用合適的鼻內賦形劑，或者通過經皮膚途徑，使用透皮貼，也可以使用鼻內形式的本發明的化合物。當經皮施用本發明的化合物時，在劑量制度自始至終劑量是連續的。
具體實施方案的描述圖解1-9詳細說明了式(I)化合物的代表性制備方法。
圖解1實施例22和28的制備
圖解2實施例17的制備
圖解3實施例11和實施例31的制備 圖解4實施例5的制備
圖解5實施例18和29的制備 圖解6實施例8的制備
圖解7實施例23的制備 圖解8實施例12的制備 圖解9實施例32和34的制備
如圖解1中的代表性程序所示方便地制備氟代吲哚并咔唑的氟代糖基取代的衍生物。通過用合適的堿，例如六甲基二硅氮烷鈉進行去質子化作用，接著用氯代糖例如4-氟代吡喃葡糖苷2處理，將氟代吲哚并咔唑核心(1)糖基化，給出N-糖基吲哚并咔唑3。通過堿-誘導水解，接著酸化給出中間體酸酐，進行過芐基化糖苷例如3的酰亞胺部分的去保護。使用合適的胺，例如用六甲基二硅氮烷和甲醇在二甲基甲酰胺中的混合物反應提供的(參考P.D.Davis，R.A.Bit TetrahedronLett.1990,31，5201)，方便地將后者轉化為酰亞胺(例如，4)。然后利用涉及使用Pearlman′s催化劑(炭上20％Pd(OH)2)氫解的常規方法進行芐基保護基團的去除，得到完全去保護的糖苷(7)。或者，通過使用乙酸酐中的碘處理相應的過芐基化糖苷(4)(參見K.P.R.Kartha，R.A.FieldTetrahedron 1997,53,11753)，接著水解中間體乙酸酐，能制備部分去保護的糖苷(5)。接著用公知的氟化試劑DAST[(二乙基氨基)硫三氟化物]處理這種選擇性去保護的糖苷，接著和以前一樣去芐基化，于是給出氟化糖苷(6)。
如圖解2所示類似的方式制備一系列脫氧糖苷。在這種情況下，使用正確選擇的反應條件將過芐基化糖苷(10)轉化為容易分離的二芐基(11)和一芐基(12)糖苷混合物。用DAST處理11，接著如上所述去保護，于是給出氟代脫氧糖苷(13)。同樣處理二元醇12，得到二氟脫氧阿洛糖苷(14)。如圖解3所示制備相關的脫氧糖苷。如上所述氫解16，得到一脫氧糖苷(17)。或者，使用先前描述的途徑，使用正確選擇的反應條件，提供部分去保護的糖苷(15)。然后將得到的伯醇活化，例如活化成它的甲磺酰酯，接著生成相應的碘化物，并且使用合適的堿例如1，8-二氮雜雙環[5.4.0]十一-7-烯(DBU)誘導去除HI部分，得到乙烯醚。然后最后的氫解步驟提供二脫氧糖苷18。
如圖解4所示，用上述方法制備的沒有保護的糖苷也可以被選擇性官能化。在標準酯化條件下使用例如二環己基碳化二亞胺(DCC)和4-二甲基氨基吡啶(DMAP)進行反應，能選擇性地將氟代糖苷(13)與保護的氨基酸，如N-芐氧羰基-L-亮氨酸偶聯。接著在標準氫解條件下去保護，則給出氨基酸酯(19)。類似地，可以如圖解7所示制備氨基酸酰胺。在標準肽偶聯/去保護條件下，氨基糖苷(27)與被保護氨基酸例如N-叔丁氧羰基-N-甲基甘氨酸的對-硝基苯酯反應，得到酰胺28。
如圖解5所示也可以制備烷基化糖苷。使用標準硅烷基化條件，例如在咪唑存在下使用合適的溶劑例如二甲基甲酰胺用叔丁基二苯基氯硅烷處理，將先前制備的二元醇(12)選擇性保護成它的一硅烷基醚。接著使用Dess-Martin過碘烷作為氧化劑方便地進行殘留的沒有保護的羥基取代基的氧化，得到中間體酮(20)。使用格氏試劑例如甲基鎂化溴進行20的反應，接著使用三乙胺三氟化氫去除甲硅烷基保護基，得到容易分離的兩種叔醇21和22的混合物。然后如上所述分別將后兩種化合物去保護，得到甲基糖苷23和甲基阿洛糖苷24。
如圖解6所示，使用和圖解1中已經描述的類似途徑和反應條件，也能制備與1相關的各種芳香核心的一氟代糖苷。
選擇的氟代糖苷例如29也可以如圖解8所示被進一步官能化。伯醇被選擇性活化成它的甲磺酰酯并且接著用在二甲基甲酰胺中的疊氮化鈉置換，得到相應的疊氮化物。然后疊氮化物在Staudinger反應條件下被還原，得到胺30。
如圖解9所示，選擇的氟代吲哚并咔唑的芳香核心也容易被還原。通過用還原氫化物例如硼氫化鈉處理，首先將酰亞胺部分還原，使用苯硒醇進一步還原得到基本上等量的相應的內酰胺32和33，是可分離的混合物。
通過多種藥理學分析可以證明本發明的化合物的藥理學性質。用根據本發明的化合物或者它們的鹽進行下面的例示的藥理學分析。
拓撲異構酶I活性(體外)如下所示測定拓撲異構酶I活性。Hsiang，等，(J.Bioi.Chem.1985,260,14873-14878)描述了檢定化合物誘導的拓撲異構酶I介導的DNA單鏈裂解的程序。樣品溶解于100％DMSO，得到10μM或10mg/ml溶液，除非另有說明，在Tris-EDTA緩沖液中稀釋。海洋噬菌體PM2 DNA(Boehringer Mannheim)也在Tris-EDTA緩沖液中稀釋到0.02微克/微升的濃度。要評價的化合物的不同稀釋物與稀釋的DNA混合，并且將這種混合物加到1000單位(酶活性的一個單位定義為在37℃下在大約30分鐘內能釋放100 ng超螺旋DNA的量)2X反應緩沖液中純化的人拓撲異構酶I(Topogen)等分部分中，開始反應。化合物-DNA-酶混合物在37℃下溫育30分鐘，然后用含有十二烷基硫酸鈉和蛋白激酶K(Sigma)的溫熱的終止緩沖液終止反應。這些混合物在37℃下再溫育10分鐘，此時從水浴中取出混合物并且用氯仿/異戊醇的24∶1混合物萃取。離心分離之后，各水相等分部分被加到含有0.5微克/毫升溴化乙啡啶的Tris-硼酸鹽緩沖液中的0.9％瓊脂糖(SeaKem)凝膠孔中并且進行15小時電泳以分離不同的拓撲異構體并且將DNAs切口并斷裂。凝膠在水中退色之后，將凝膠暴露在UV照射下觀察溴化乙啡啶染色的DNA反應產物。使用光密度計對照射過的凝膠的照片底片掃描，并且為了獲得每一個樣品的單鏈DNA斷裂形成百分比計算峰下面的面積。通過在得到的劑量-效果曲線的點間插入法對每一種化合物獲得中間有效濃度(EC50)，它確定該化合物在誘導拓撲異構酶I介導的單鏈DNA斷裂中的作用的效力。下面表I給出本發明的一些化合物的拓撲異構酶I活性。
體外細胞基的細胞毒性活性如下測定抗鼠P388細胞系的增殖抑制活性。根據Cancer-Res.1988,48,4827-4833中描述的方法使用人和其他腫瘤細胞系對細胞生長和藥物感性評價可溶性四唑鎓/甲分析。細胞在96孔微量滴定板中以4000細胞/孔平板培養，24小時之后加入藥物并且連續稀釋。細胞在37℃下溫育72小時，此時加入含有吩嗪硫酸二甲酯的四唑鎓染料，XTT。活細胞中的脫氫酶將XTT還原成在450nm吸收光的形式，這可以用分光光度法定量測定。吸光度越大則活細胞數目越大。結果表示為IC50，這是將細胞增殖抑制至沒有處理過的對照細胞的50％所需要的藥物濃度(即，在450nm的吸光度)。
類似地，P338鼠白血病細胞在補充有20％胎牛血清和10μM2-巰基乙醇的RPMI 1640中保持。對喜樹堿抗性亞系，P388/CPT45，選擇對喜樹堿的抗性，并且是對這種化合物的超過1000倍的抗性(Woessner，等，Oncol.Res.1992,4,481-488)。該抗性機理表明拓撲異構酶I被還原水平。
通過MTS(3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-氧硫基)-2H-四唑鎓，內鹽)分析(Riss和Moravec，Mol.Biol.Cell 1992，3(增刊)，184a)評價組織培養細胞中體外細胞毒性。細胞在96孔微量滴定板中以8000細胞/孔平板培養，24小時之后連續稀釋試驗化合物并且加給細胞。細胞在37℃下溫育72小時，此時加入與25μM(最終濃度)電子偶聯劑吩嗪硫酸二甲酯混合的四唑鎓染料，MTS333微克/毫升(最終濃度)。活細胞中的脫氫酶將MTS還原成在492nm吸收光的形式，這可以用分光光度法定量測定。吸光度越大則活細胞數目越大。結果表示為IC50，這是將細胞增殖抑制至沒有處理過的對照細胞的50％所需要的藥物濃度(即，在492nm的吸光度)。
下面表I給出本發明的一些化合物在親本P388和喜樹堿抗性P388/CPT45細胞系中的細胞毒素活性。
選擇性指數(R/S)選擇性指數(R/S)定義為使用P388/CPT45細胞獲得的IC50值除以使用親本P388細胞獲得的IC50值得到的比例。
下面表I給出用來確定本發明的選定化合物的相對拓撲異構酶I選擇性的R/S之比。
作為比較，下面的表II給出了密切相關的非選擇性拓撲異構酶I活性氟代吲哚并咔唑的拓撲異構酶I活性，細胞毒性和選擇性指數。
表I拓撲異構酶I選擇性類似物對鼠P388白血病細胞的體外拓撲異構酶I活性和細胞毒性。
(注上面的結構式直接用來明確下面的實施例。對于所有的實施例，除了32和34，Ra和Rb一起形成O；Ra’和Rb’一起形成O。對于實施例32，Ra和Rb兩者都是H，并且Ra’和Rb’一起形成O。對于實施例34，Ra和Rb一起形成O，并且Ra’和Rb’兩者都是H。)


§上面提到的拓撲異構酶-I測定被用作篩選測定。誘導DNA底物單鏈斷裂的類似物的中間效果濃度。
類似物連續接觸已經獲得高水平喜樹堿抗性的P388鼠白血病細胞或P388/CPT45細胞3天之后中間細胞毒性濃度(IC50)。
對于P388/CPT45細胞獲得的IC50值除以對于親本P388細胞獲得的IC50值得到的比值。
表II拓撲異構酶I非選擇性類似物對鼠P388白血病細胞的體外拓撲異構酶I活性和細胞毒性。
(注上面的結構式直接地用來明確下面的實施例。)
§上面提到的拓撲異構酶-I測定被用作篩選測定。誘導DNA底物單鏈斷裂的類似物的中間效果濃度。注拓撲異構酶I活性是不可預測的。
類似物連續接觸已經獲得高水平喜樹堿抗性的P388鼠白血病細胞或P388/CPT45細胞3天之后中間細胞毒性濃度(IC50)。
對于P388/CPT45細胞獲得的IC50值除以對于親本P388細胞獲得的IC50值得到的比值。
體內抗腫瘤活性材料和方法化合物本發明的實施例是在合適的賦形劑例如cremophor/乙醇/水(10％/10％/80％)中，在生理鹽水，水/羧甲基纖維素賦形劑中施用。
在幾個劑量水平下測試所有的化合物，努力在每一次實現它們的最大耐受劑量(MTD)。MTD被定義為不引起每組8只小鼠中多于一例死亡的測試的最高劑量。最佳劑量(OD)是產生最好治療效果的劑量，并且通常，不是總是與MTD同義。
腫瘤人腫瘤(HCT-116和HT-29結腸癌)異種移植到Balb/c無胸腺(裸鼠)雌性小鼠中生長。
抗腫瘤測試.所有的腫瘤都是使用13規格的套針以3-4mm片段皮下(sc)植入。每個處理組和對照組一般有8只小鼠。當處理延遲直到腫瘤獲得一定大小(重量)，稱作分段腫瘤實驗(expt.)，選擇攜帶腫瘤的小鼠使得它們的腫瘤在特定試驗期間在限定的大小范圍之內。
用測徑器測量腫瘤，并且通過下式計算腫瘤重量長度(mm)乘以(x)寬(mm)2/2＝腫瘤重量(mg)。以沒有處理的對照(C)小鼠達到預期腫瘤目標大小(例如500毫克)的中間時間(以天計)相對于處理的(T)小鼠達到相同的目標大小的時間計算作為T-C值。T-C值除以腫瘤體積的二倍(TVDT)，并且乘以3.32，得到總的對數細胞殺死(LCK)值，[即，(T-C)/TVDTx3.32＝LCK]。
如果等于10xTVDT后處理(Rx)的時間之后沒有觸摸得出的腫瘤則認為小鼠被治愈。
表III說明代表性實施例，但是不局限于該表中評價的那些。
表III拓撲異構酶I選擇性類似物對人結腸癌細胞的體內活性
a＝8只中有1只被治愈b＝8只中有2只被治愈c＝可能治愈對數細胞殺滅(LCK)等于(T-C)/(TVDTx3.32)。
以每千克毫克計的試驗的最佳或最大耐受劑量水平。
考慮下面的實施例，更全面顯示構成本發明的化合物和它們的制備方法，給出實施例只是詳細說明的目的，不構成以任何方式限制本發明的范圍。
中間體的合成制備式I的最終產物使用的幾種中間體化合物以及其他常規起始物一般在文獻中已知或者可以商購。這里給出式I化合物的另外的實施例，其可以通過對WO 98/07433和共同未決的美國申請編號No.08/914566(這兩篇專利文獻在此引作參考)中提到的先前合成方法加以改進而合成，式I化合物中的取代基除非另有說明如式I中所述。不管怎樣這里下面給出這些化合物中的一些的代表性合成。
所有的無水反應都是在氮氣或氬氣氣氛中使用商購無水溶劑或新蒸餾的溶劑進行的。使用Thomas-Hoover熔點測量儀在開口毛細管中測定熔點，沒有校正。使用EM Science硅膠60(230-400目)進行柱色譜法，使用指定的溶劑體系作為洗脫劑。在E.Merck硅膠60 F254板(0.5mm)上進行薄層色譜法。使用帶有SPD-I0AV UV-Vis檢測器和下面的柱子之一的Shimadzu LC-I0AS進行HPLC純度測定YMCCombiscreen ODS-A(4.6×50mm)，或HP Zorbax SB-C18(4.6×750mm)；或者帶有二極管陣列檢測器的HP 1090 DR5，和WatersNova-Pak CIS柱(3.9×150mm)。做成薄膜或KBr顆粒，在NicoletProtgé 460 FTIR上記錄紅外光譜。在Bruker AMX-400或BrukerARX-500NMR分光儀上記錄1HNMR波譜，并且以每百萬的份數(ppm或δ)表示化學位移，使用的溶劑用作內標。以赫茲(Hz)給出偶合常數，并且如下表示多重峰單峰(s)，雙重峰(d)，三重峰(t)，四重峰(q)，多重峰(m)，和寬峰(br)。在以陰離子模式操作的Finnigan Matt TSQ-7000三階四極分光計(正/負ESI)上測定低分辨率質譜。
所有的化合物展示令人滿意的IR，MS，1H和13C NMR，元素分析和/或，在可行的情況下，高分辨率質譜。
實施例412-[6-脫氧-6-氟-β-D-吡喃半乳糖基]-3，9-二氟-12，13-二氫-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7(6H)-二酮
對于C26H18F3N3O6的LRMS(負ESI，M-H-)是m/z 524。
實施例512-[4，6-二脫氧-6-氟-2-O-亮氨酰-β-D-吡喃葡糖基]-2，3，9，10-四氟-12，13-二氫-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7(6H)-二酮 向5毫升THF中的12-[4，6-二脫氧-6-氟-β-D-吡喃葡糖基]-2，3，9，10-四氟-12，13-二氫-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7(6H)-二酮(0.100g，0.18mmol)溶液加入1mL THF中的Z-Leu-OH(0.057g，0.216mmol)溶液，接著加入DMAP(0.026g，0.216mmol)和DCC(0.045g，0.216mmol)。將得到的混合物在室溫下攪拌18小時后用乙酸乙酯稀釋，洗滌(冷的1N HCl，H2O，鹽水)，干燥(MgSO4)并蒸發。殘余物經閃蒸色譜法(SiO2/2-30％乙酸乙酯-己烷)得到保護的亮氨酰酯(0.112g，70％)，為黃色固體，它直接在下面的步驟中使用。
向30mL無水THF中的保護的亮氨酰酯(0.300g，0.38mmol)和20％Pd(OH)2/C(0.3g)加入二噁烷(0.45mL，1.8mmol)中的4M HCl，將得到的混合物氫化(1大氣壓)16小時。然后過濾混合物(微孔，0.22μm)并且蒸發濾液，得到基本上純標題化合物(0.243g，92％)的鹽酸化物；對于C32H27F5N4O6的LRMS(負ESI，M-H-)是m/z 657。
實施例813-[6-二脫氧-6-氟-β-D-吡喃葡糖基]-2，3，9，10-四氟-5H，13H-苯并[b]噻吩基[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7(6H)-二酮 C26H15F5N2O6S的LRMS(負ESI，M-H-)是m/z 577；HRMS(正ESI，M+H+)，對于C26H15F5N2O6S的計算值是m/z 579.064780；實測值是579.06476。
實施例912-[4，6-二脫氧-6-氟-β-D-吡喃葡糖基]-2，3，9，10-四氟-5H，13H-苯并[b]噻吩基[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7(6H)-二酮 C26H15F5N2O5S的LRMS(負ESI，M-H-)是m/z 561。
實施例1112-[4，6-二脫氧-β-D-吡喃葡糖基]-3，9-二氟-12，13-二氫-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7(6H)-二酮
將15毫升二氯甲烷中的3，9-二氟-12-(2，3-二-O-芐基-4-脫氧-β-D-吡喃葡糖基)-6，7，12，13-四氫-(5H)吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7-二酮(0.312g，0.45mmol)和新活化的磨成粉的4A分子篩(0.5g)的混合物在氬氣下于5℃冷卻，然后依次加入三乙胺(0.095mL，0.68mmol)和甲磺酰氯(0.039mL，0.50mmol)。將混合物在相同的溫度下攪拌3小時后用10％飽和的NaHCO3水溶液使混合物驟冷，用乙酸乙酯稀釋后過濾。濾液經洗滌(H2O，鹽水)，干燥(Na2SO4)和蒸發，得到黃色玻璃狀物質。將這種物質溶解于15mL丙酮，加入NaI(0.675g，4.50mmol)，并且將混合物在氬氣下加熱回流17小時。然后將冷卻的混合物蒸發至干，并且將殘余物溶解于乙酸乙酯，洗滌(H2O，鹽水)，干燥(Na2SO4)和蒸發。得到的固體經色譜法(SiO2/乙酸乙酯-己烷，1∶1)處理得到3，9-二氟-12-(2，3-二-O-芐基-4，6-二脫氧-6-碘-β-D-吡喃葡糖基)-6，7，12，13-四氫(5H)吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7-二酮(0.276 g，總計77％)，為黃色玻璃狀物質。向10mL無水THF中的冰冷卻的這種碘化物的溶液中加入DBU(0.157mL，1.05mmol)，并且該溶液在室溫下保持5天。用飽和NH4Cl水溶液使得到的混合物驟冷，用乙酸乙酯稀釋后洗滌(H2O，鹽水)，干燥(Na2SO4)和蒸發，得到產物(0.232g，99％)，為黃色玻璃狀物質。向這種物質的無水THF中的溶液加入20％Pd(OH)2/C，并且氫化混合物(氣球壓力)，直到TLC監測反應完全。然后過濾混合物(Celite)，蒸發濾液，得到黃色玻璃狀物質。經柱色譜法(Sephadex LH-20/甲醇)得到純的標題化合物，為黃色固體C26H19F2N3O5的LRMS(負ESI，M-H-)是m/z 490。
實施例1212-[6-氨基-4，6-二脫氧-4-氟-β-D-吡喃葡糖基]-2，3，9，10-四氟-5H，13H-苯并[b]噻吩基[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7(6H)-二酮 12-[4-脫氧-4-氟-β-D-吡喃葡糖基]-2，3，9，10-四氟-5H，13H-苯并[b]噻吩基[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7(6H)-二酮(0.20g，0.35mmol)在室溫下氮氣下溶解于無水吡啶(10mL)中，并且用火焰干燥的磨成粉末的4分子篩(3.0g)處理。混合物冷卻到-30℃15分鐘之后，只加入甲磺酰氯(0.030mL，0.38mmol.)。混合物在-30℃攪拌15分鐘之后經15分鐘溫熱至0℃，最后用乙酸乙酯和乙醇驟冷。將得到的混合物過濾(Celite)并且真空濃縮濾液。殘余物溶解于乙酸乙酯和四氫呋喃，洗滌(0.1NHCl，飽和的碳酸氫鈉，鹽水)，干燥并蒸發。得到12-[4-脫氧-4-氟-6-O-(甲磺酰基)-β-D-吡喃葡糖基]-5H，13H-苯并[b]噻吩基[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7(6H)-二酮，為黃色固體，其足夠純，可以在下面的步驟中直接使用；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ 11.61(br s，1H)，9.76-9.66(2m，1H)，9.01-8.94(2m，1H)，8.22-8.19(m，1H)，8.12-8.00(2m，1H)，7.58-7.48(2m，2H)，6.33和6.6.23(2d，J＝8.8，9.1Hz，1H)，5.72-5.15(一系列，3H)，4.66-4.53(m，2H)，4.07-3.98(m，2H)，3.62-3.56(m，2H)，3.13和3.10(2s，3H)；MS(-ESI，M-H-)m/z655.
向攪拌的12-[4-脫氧-4-氟-6-O-(甲磺酰基)-β-D-吡喃葡糖基]-5H，13H-苯并[b]噻吩基[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7(6H)-二酮(0.230g，0.351mmol)的無水二甲基甲酰胺(90mL)溶液加入疊氮化鈉(0.228g，3.51mmol)，并且將混合物加熱至140℃反應4小時。混合物冷卻至室溫之后用四氫呋喃-乙酸乙酯和水稀釋。分離出有機相，洗滌(飽和碳酸氫鈉溶液，鹽水)，干燥并蒸發。用乙酸乙酯反萃取水相(x3)，并且和以前一樣處理有機萃取物。殘余物經閃蒸色譜法(SiO2/10％甲醇的氯仿溶液)得到12-[6-疊氮基-4，6-二脫氧-4-氟-β-D-吡喃葡糖基]-2，3，9，10-四氟-5H，13H-苯并[b]噻吩基[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7(6H)-二酮，為黃色固體；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)d 11.60(br s，1H)，9.76-9.60(2m，1H)，9.09-8.98(2m，1H)，8.18-8.15(3m，1H)，8.01-7.91(m，1H)，6.28和6.20(2d，J＝8.9和9.4Hz，1H)，5.64-5.14(m，1H)，5.06-4.76(一系列m，1H)，4.35-3.95(一系列m，3H)，3.86-3.31(m，3H)；MS(-ESI，M-H-)m/z 602.
氮氣下將12-[6-疊氮基-4，6-二脫氧-4-氟-β-D-吡喃葡糖基]-2，3，9，10-四氟-5H，13H-苯并[b]噻吩基[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7(6H)-二酮(0.100g，0.166mmol)和三苯基膦(0.130g，0.497mmol)在四氫呋喃(15mL)和水(2mL)的混合物中的混合物加熱至50℃16小時。然后在50℃下用濃氫氧化銨溶液(10mL)將冷卻的混合物處理1小時。冷卻至室溫之后，用四氫呋喃稀釋混合物并且預先吸附到硅膠上。通過閃蒸色譜法純化殘余物(SiO2/二氯甲烷-四氫呋喃-甲醇，7∶2.5∶0.5然后6∶2∶2)得到標題化合物，為黃色固體。將這種物質溶解于THF，加入甲醇HCl，并且蒸發混合物，得到鹽酸化物(0.015g，16％)，是黃色固體顆粒物；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ 11.66(br s，1H)，9.86-9.82(2m，1H)，9.11-9.06(2m，1H)，8.49-8.46(m，1H)，8.29-8.25(m，1H)，8.19(br s，3H)，6.32和6.1277(2d，J＝8.9，9.4Hz，1H)，5.74-5.70(2m，1H)，5.22-5.10(3m，2H)，4.40-4.01(一系列m，7H)；LRMS(neg.ESI，M-H-)對于C26H16F5N3O5S是m/z 576.
實施例1712-[3，6-二氟-3，4，6-三脫氧-β-D-吡喃阿洛糖基]-2，3，9，10-四氟-12，13-二氫-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7(6H)-二酮 對于C26H15F6N3O4的LRMS(負ESI，M-H-)是m/z 546。
實施例18和1912-[4-脫氧-3-甲基-β-D-吡喃葡糖基]-2，3，9，10-四氟-12，13-二氫-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7(6H)-二酮(IbX1＝X1′＝X2＝X2′＝F；R6＝H；R2＝R5＝OH；R3＝OH，CH3，R4＝H2；Q＝NH)和12-[4-脫氧-3-甲基-β-D-吡喃阿洛糖基]-2，3，9，10-四氟-12，13-二氫-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7(6H)-二酮 向12-[4-脫氧-2，3，6-三-O-芐基-β-D-吡喃葡糖基]-2，3，9，10-四氟-12，13-二氫-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7(6H)-二酮(6.49g，7.97mmol)的90mL乙酸酐溶液加入固體I2(0.406g，1.6mmol)，并且將該混合物在室溫下攪拌16小時。得到的混合物用乙酸乙酯稀釋，洗滌(30％Na2S2O3水溶液，飽和的NaHCO3水溶液，H2O，鹽水)，干燥(MgSO4)并蒸發。殘余物溶解于甲醇(150mL)，加入15mL濃NH4OH，該混合物在室溫下攪拌18小時。然后將混合物蒸發至干，殘余物經色譜法(SiO2/己烷-乙酸乙酯，95∶5至1∶1)處理，得到12-[4-脫氧-2，3-二-O-芐基-β-D-吡喃葡糖基]-2，3，9，10-四氟-12，13-二氫-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7(6H)-二酮(2.35g，41％)，接著得到12-[4-脫氧-2-O-芐基-β-D-吡喃葡糖基]-2，3，9，10-四氟-12，13-二氫-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7(6H)-二酮(2.40g，48％)，兩者都是黃色固體。
5℃氬氣下，向12-[4-脫氧-2-O-芐基-β-D-吡喃葡糖基]-2，3，9，10-四氟-12，13-二氫-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7(6H)-二酮(0.500g，0.79mmol)的6mL無水DMF溶液加入叔丁基二苯基甲硅烷基氯(0.205mL，0.79mmol)和咪唑(0.161g，2.37mmol)。該混合物在室溫下攪拌20小時之后再次于5℃冷卻并且再加入叔丁基二苯基甲硅烷基氯(0.205mL，0.79mmol)和咪唑(0.161g，2.37mmol)。得到的混合物在室溫下攪拌2.5小時之后用乙酸乙酯稀釋，洗滌(1M NaHCO3，鹽水)，干燥(MgSO4)并蒸發。殘余物經色譜法(SiO2/20-35％乙酸乙酯-己烷)得到12-[4-脫氧-6-O-(叔丁基二苯基甲硅烷基)-2-O-芐基-β-D-吡喃葡糖基]-2，3，9，10-四氟-12，13-二氫-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7(6H)-二酮(0.474g，69％)；MS(ESI-)m/e 870(M-H)-。
向這種物質一部分(0.050g，0.057mmol)的2mL二氯甲烷中的溶液加入3mL二氯甲烷中的Dess-Martin過碘烷(0.048g，0.114mmol)中的懸浮液，并且將混合物攪拌30分鐘。混合物然后用乙酸乙酯稀釋，洗滌(冷的30％Na2S2O3水溶液，1M NaHCO3，H2O，鹽水)，干燥(MgSO4)并且蒸發。殘余物經制備TLC(SiO2/乙酸乙酯-己烷，2∶3)得到12-[4-脫氧-6-O-(叔丁基二苯基甲硅烷基)-2-O-芐基-3-氧代-β-D-吡喃葡糖基]-2，3，9，10-四氟-12，13-二氫-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7(6H)-二酮(0.035g，70％)，為膠狀物，放置固化；MS(ESI-)m/e 868(M-H)-。
-78℃氬氣下向5mL無水THF溶液中的這種物質的溶液滴加MeMgBr(1.4M的THF-甲苯溶液，0.49mL，0.69mmol)。得到的混合物在-78℃下攪拌2小時后經2小時溫熱至-20℃。然后用1mL的1M NaHCO3將混合物驟冷，然后用乙酸乙酯(20mL)和1M NaHCO3(5mL)分配。分離出有機相，洗滌(H2O，鹽水)，干燥(MgSO4)并蒸發。殘余物經閃蒸色譜法(SiO2/2-28％乙酸乙酯-己烷)得到12-[4-脫氧-6-O-(叔丁基二苯基甲硅烷基)-2-O-芐基-3-甲基-β-D-吡喃阿洛糖基]-2，3，9，10-四氟-12，13-二氫-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7(6H)-二酮(0.052g，43％)，接著得到12-[4-脫氧-6-O-(叔丁基二苯基甲硅烷基)-2-O-芐基-3-甲基-β-D-吡喃葡糖基]-2，3，9，10-四氟-12，13-二氫-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7(6H)-二酮(0.028g，23％)；MS(ESI-)m/e 884(M-H)-。
氬氣下向冷的(5℃)12-[4-脫氧-6-O-(叔丁基二苯基甲硅烷基)-2-O-芐基-3-甲基-β-D-吡喃阿洛糖基]-2，3，9，10-四氟-12，13-二氫-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7(6H)-二酮(0.050g，0.056mmol)的5mL MeCN溶液加入Et3N.3HF(0.091mL，0.56mmol)，并且該混合物在室溫下攪拌2天。得到的混合物用乙酸乙酯稀釋，洗滌(1M NaHCO3，H2O，鹽水)，干燥(MgSO4)并蒸發。殘余物通過制備TLC(SiO2/乙酸乙酯-己烷，3∶2)純化，得到12-[4-脫氧-2-O-芐基-3-甲基-β-D-吡喃阿洛糖基]-2，3，9，10-四氟-12，13-二氫-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7(6H)-二酮(0.026g，72％)，是黃色固體；MS(ESI-)m/e 646(M-H)-。
將6mL氯仿-甲醇(1∶1)中的這種物質(0.025g，0.039mmol)和20％Pd(OH)2/C(0.025g)的混合物氫化(1大氣壓)18小時之后過濾，濾餅用THF洗滌。將濾液蒸發，殘余物通過制備TLC(SiO2/THF-己烷，1∶1)純化，得到12-[4-脫氧-3-甲基-β-D-吡喃阿洛糖基]-2，3，9，10-四氟-12，13-二氫-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7(6H)-二酮(0.010g，45％)，為黃色固體；LRMS(負ESI，M-H-)對于C27H19F4N3O6是m/z 556。
以相似方式將12-[4-脫氧-6-O-(叔丁基二苯基甲硅烷基)-2-O-芐基-3-甲基-β-D-吡喃阿葡糖基]-2，3，9，10-四氟-12，13-二氫-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7(6H)-二酮去保護，得到12-[4-脫氧-3-甲基-β-D-吡喃葡糖基]-2，3，9，10-四氟-12，13-二氫-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7(6H)-二酮，為黃色固體，總產率57％；LRMS(負ESI，M-H-)對于C27H19F4N3O6是m/z 556。
實施例2012-[4-脫氧-β-D-吡喃阿洛糖基]-3，9-二氟-12，13-二氫-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7(6H)-二酮 LRMS(負ESI，M-H-)對于C26H19F2N3O6是m/z 506。
實施例2212-[4，6-二氟-4，6-二脫氧-β-D-吡喃葡糖基]-2，3，9，10-四氟-12，13-二氫-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7(6H)-二酮 LRMS(負ESI，M-H-)對于C26H15F6N3O5是m/z 562；HRMS(負ESI，M-H-)對于C26H15F6N3O5計算值是562.0837；實測值是562.0815。
實施例2312-[6-脫氧-6-[(N-甲基甘氨酰)氨基]-β-D-吡喃葡糖基]-3，9-二氟-5H，13H-苯并[b]噻吩基[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7(6H)-二酮 氮氣下將N-叔丁氧羰基-N-甲基甘氨酸(4-硝基苯基)酯(0.150g，0.390mmol)的無水THF(3mL)溶液加到冷的(-70℃)無水THF(20mL)中的12-[6-氨基-6-脫氧-β-D-吡喃葡糖基]-3，9-二氟-5H，13H-苯并[b]噻吩基[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7(6H)-二酮(0.200g，0.369mmol)，HOBT(0.050g，0.369mmol)，HMPA(1.0mL)和二異丙基乙胺(0.10mL，1.04mmol)的懸浮液。混合物在-70℃下攪拌15分鐘后在室溫下攪拌2.5小時。得到的混合物用乙酸乙酯稀釋，洗滌(飽和的碳酸氫鈉水溶液，鹽水)，干燥(Na2SO4)并蒸發。殘余物通過閃蒸色譜法(SiO2/8％甲醇-氯仿)純化，得到12-[6-[(N-叔丁氧羰基-N-甲基甘氨酰)氨基]-6-脫氧-β-D-吡喃葡糖基]-3，9-二氟-5H，13H-苯并[b]噻吩基[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7(6H)-二酮(0.231g，80％)，為黃色泡沫狀物質；1H NMR(500MHz，DMSO-d6，rotomeric)δ11.61和11.59(2s，1H)，9.79-9.71(2m，1H)，9.04-8.95(2m，1H)，8.32-8.28(m，1H)，8.09-8.03(m，1H)，7.96-7.92(m，1H)，7.58-7.51(m，2H)，6.31和6.12(d和m，J＝8.9Hz，1H)，5.60-5.20(brm，3H)，4.22-3.36(一系列m，8H)，2.72和2.67(2s，3H)，1.33，1.11和1.10(3s，9H).
IR(KBr，cm-1)3424，3 102，2977，2932，1763，1709，1678，1603，1566，1482，1463，1426，1394，1370，1322，1257，1198，1155，1079,915，887，807，765，742.MS(+ESI，M+H+，M+NH3+)m/z 711和728.
將冷的(0℃)鹽酸的二噁烷溶液(4M，5mL)加給12-[6-[(N-叔丁氧羰基-N-甲基甘氨酰)氨基]-6-脫氧-β-D-吡喃葡糖苷]-3，9-二氟-5H，13H-苯并[b]噻吩基[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7(6H)-二酮(0.095g，0.133mmol)在THF(0.1mL)中的懸浮液。使混合物經1.5小時溫熱至室溫，然后真空濃縮并且用乙酸乙酯稀釋。將得到的懸浮液過濾，得到標題化合物(0.087g，100％)，為黃色固體；1H NMR(500MHz，DMSO-d6，rotomeric)δ11.61和11.59(2s，1H)，9.76和9.71(2dd，J＝11.5，2.5Hz和11.3，2.5Hz，1H)，9.02和8.96(2dd，J＝9.7，2.6和9.6，2.7Hz，1H)，8.71(br s，1H)，8.55-8.53(m，1H)，8.34和8.28(2dd，J＝8.8，5.2和8.8，5.2Hz，1H)，8.09和8.06(2dd，J＝9.4，4.3和10.4，4.5Hz，1H)，7.58-7.55(m，1H)，7.53-7.50(m，1H)，6.30和6.13(2d，J＝8.9和9.4Hz，1H)，5.55-5.20(一系列m，3H)，4.11-3.53(一系列m，8H)，2.44和2.38(2s，3H).
IR(KBr，cm-1)3412，3070，1745，1702，1686，1623，1602，1567，1481，1464, 1426，1324，1258，1196，1077，915，826，764，742.
LRMS(負ESI，M-H-)對于C29H24F2N4O7S是m/z609和LRMS(正ESI，M+H+)對于C29H24F2N4O7S是m/z611.
實施例2412-[4-脫氧-4-氟-β-D-吡喃葡糖基]-3，9-二氟-12，13-二氫-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7(6H)-二酮
LRMS(負ESI，M-H-)對于C26H18F3N3O6是m/z 524。
實施例2512-[4，4-二氟-4-脫氧-β-D-吡喃葡糖基]-3，9-二氟-12，13-二氫-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7(6H)-二酮 LRMS(負ESI，M-H-)對于C26H17F4N3O6是m/z 542。
實施例2612-[4，4-二氟-4，6-二脫氧-β-D-吡喃葡糖基]-2，3，9，10-四氟-5H，13H-苯并[b]噻吩基[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7(6H)-二酮
LRMS(負ESI，M-H-)對于C26H14F6N2O5S是m/z 579，實施例2812-[4-脫氧-4-氟-β-D-吡喃葡糖基]-2，3，9，10-四氟-12，13-二氫-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7(6H)-二酮 HRMS(負ESI，M-H-)對于C26H16F5N3O6的計算值是m/z 560.08807；實測值是560.08660實施例3012-[4，4-二氟-4-脫氧-β-D-吡喃葡糖基]-2，3，9，10-四氟-5H，13H-苯并[b]噻吩基[2，3-a]吡咯并]咔唑-5，7(6H)-二酮
LRMS(負ESI，M-H-)對于C26H14F6N2O6S是m/z 595。
實施例3112-[4-脫氧-β-D-吡喃葡糖基]-3 9-二氟-12，13-二氫-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7(6H)-二酮 LRMS(負ESI，M-H-)對于C26H19F2N3O6是m/z 506。
實施例32和3412-[4-脫氧-4-氟-β-D-吡喃葡糖基]-3，9-二氟-12，13-二氫-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5(6H)-酮和12-[4-脫氧-4-氟-β-D-吡喃葡糖基]-3，9-二氟-12，13-二氫-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-7(6H)-酮
向11mL的乙醇-THF(10∶1)中的12-[4-脫氧-4-氟-β-D-吡喃葡糖基]-3，9-二氟-12，13-二氫-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7(6H)-二酮(0.180g，0.34mmole)溶液一次加入NaBH4(0.065g，1.7mmol)，該混合物在氬氣下在室溫下攪拌4天。得到的混合物用EtOAc稀釋，洗滌(飽和NH4Cl水溶液，鹽水)，干燥(Na2SO4)并蒸發。得到的淺黃色固體溶解于10mL無水THF，然后加入對甲苯磺酸一水合物(0.007g)和苯基硒醇(0.253mL，2.38mmol)。室溫下攪拌混合物直到通過TLC監測反應完全，然后將混合物蒸發至干。殘余物用乙醚研磨，并且通過柱色譜(Sephadex LH-20/甲醇)純化乙醚不溶解的級分，得到兩個主要級分。級分1被鑒定是12-[4-脫氧-4-氟-β-D-吡喃葡糖基]-3，9-二氟-12，13-二氫-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-7(6H)-酮；LRMS(負ESI，M-H-)對于C26H20F3N3O5是m/z 510。
級分2被鑒定是12-[4-脫氧-4-氟-β-D-吡喃葡糖基]-3，9-二氟-12，13-二氫-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5(6H)-酮；LRMS(負ESI，M-H-)對于C26H20F3N3O5是m/z 510。
實施例3312-[4-脫氧-4-氟-β-D-吡喃葡糖基]-2，3，9，10-四氟-5H，13H-苯并[b]噻吩基[2，3-a]吡咯并[3，4-c]咔唑-5，7(6H)-二酮
LRMS(負ESI，M-H-)對于C26H15F5N2O6S是m/z 577；HRMS(正ESI，M+H+)對于C26H15F5N2O6S是m/z 579.064226；實測值是579.06420。
權利要求
1.具有大于大約100的拓撲異構酶I選擇性指數的式I的化合物 它的對映體，非對映體，藥學可接受鹽，水合物，前體藥物和溶劑合物；其中Ra和Rb各自獨立地選自H和O，條件是當選擇O時，Ra和Rb一起形成O；Ra′和Rb′各自獨立地選自H和O，條件是當選擇O時，Ra′和Rb′一起形成O；X1，X1′，X2和X2′各自獨立地選自F，Br和H；Q選自NH，S和O；并且R是取代的己糖基團。
2.根據權利要求1的化合物，其中X1是F；X1′選自F和Br；以及，X2和X2′選自F和H。
3.根據權利要求1的化合物，其中X1和X1′是F；X2和X2′是H；Q是NH；Ra和Rb一起形成O；和Ra′和Rb′一起形成O。
4.根據權利要求1的化合物，其中X1和X1′是F；X2和X2′是H；Q是NH；Ra和Rb一起形成O；Ra′和Rb′是H；并且所述取代的己糖基團是
5.根據權利要求1的化合物，其中X1和X1′是F；X2和X2′是H；Q是NH；Ra′和Rb′一起形成O；Ra和Rb是H；并且所述取代的己糖基團是
6.根據權利要求1的化合物，其中X1，X1′，X2和X2′是F；Q是S；Ra和Rb一起形成O；Ra′和Rb′一起形成O；并且所述取代的己糖基團是
7.根據權利要求1的化合物，其中X1和X1′是F；X2和X2′是H；Q是NH；Ra和Rb一起形成O；Ra′和Rb′一起形成O；并且所述取代的己糖基團是
8.根據權利要求1的化合物，其中X1，X1′，X2和X2′是F；Q是S；Ra和Rb一起形成O；Ra′和Rb′一起形成O；并且所述取代的己糖基團是
9.根據權利要求1的化合物，其中X1，X1′，X2和X2′是F；Q是NH；Ra和Rb一起形成O；Ra′和Rb′一起形成O；并且所述取代的己糖基團是
10.根據權利要求1的化合物，其中X1，X1′，X2和X2′是F；Q是NH；Ra和Rb一起形成O；Ra′和Rb′一起形成O；并且所述取代的己糖基團是
11.根據權利要求1的化合物，其中X1和X1′是F，X2和X2′是H；Q是NH；Ra和Rb一起形成O；Ra′和Rb′一起形成O；并且所述取代的己糖基團是
12.根據權利要求1的化合物，其中X1，X1′，X2和X2′是F；Q是S；Ra和Rb一起形成O；Ra′和Rb′一起形成O；并且所述取代的己糖基團是
13.根據權利要求1的化合物，其中X1和X1′是F，X2和X2′是H；Q是NH；Ra和Rb一起形成O；Ra′和Rb′一起形成O；并且所述取代的己糖基團是
14.根據權利要求1的化合物，其中X1和X1′是F，X2和X2′是H；Q是S；Ra和Rb一起形成O；Ra′和Rb′一起形成O；并且所述取代的己糖基團是
15.根據權利要求1的化合物，其中X1，X1′，X2和X2′是F；Q是NH；Ra和Rb一起形成O；Ra′和Rb′一起形成O；并且所述取代的己糖基團是
16.根據權利要求1的化合物，其中X1，X1′，X2和X2′是F；Q是NH；Ra和Rb一起形成O；Ra′和Rb′一起形成O；并且所述取代的己糖基團是
17.根據權利要求1的化合物，其中X1和X1′是F，X2和X2′是H；Q是NH；Ra和Rb一起形成O；Ra′和Rb′一起形成O；并且所述取代的己糖基團是
18.根據權利要求1的化合物，其中X1，X1′，X2和X2′是F；Q是NH；Ra和Rb一起形成O；Ra′和Rb′一起形成O；并且所述取代的己糖基團是
19.根據權利要求1的化合物，其中X1，X1′，X2和X2′是F；Q是NH；Ra和Rb一起形成O；Ra′和Rb′一起形成O；并且所述取代的己糖基團是
20.根據權利要求1的化合物，其中X1是F，X1′是Br，X2和X2′是H；Q是O；Ra和Rb一起形成O；Ra′和Rb′一起形成O；并且所述取代的己糖基團是
21.根據權利要求1的化合物，其中X1和X1′是F，X2和X2′是H；Q是NH；Ra和Rb一起形成O；Ra′和Rb′一起形成O；并且所述取代的己糖基團是
22.根據權利要求1的化合物，其中X1，X1′，X2和X2′是F；Q是NH；Ra和Rb一起形成O；Ra′和Rb′一起形成O；并且所述取代的己糖基團是
23.根據權利要求1的化合物，其中X1和X1′是F，X2和X2′是H；Q是S；Ra和Rb一起形成O；Ra′和Rb′一起形成O；并且所述取代的己糖基團是
24.根據權利要求1的化合物，其中X1，X1′，X2和X2′是F；Q是S；Ra和Rb一起形成O；Ra′和Rb′一起形成O；并且所述取代的己糖基團是
25.根據權利要求1的化合物，其中X1和X1′是F，X2和X2′是H；Q是NH；Ra和Rb一起形成O；Ra′和Rb′一起形成O；并且所述取代的己糖基團是
26.根據權利要求1的化合物，其中X1和X1′是F，X2和X2′是H；Q是NH；Ra和Rb一起形成O；Ra′和Rb′一起形成O；并且所述取代的己糖基團是
27.根據權利要求1的化合物，其中X1，X1′，X2和X2′是F；Q是S；Ra和Rb一起形成O；Ra′和Rb′一起形成O；并且所述取代的己糖基團是
28.根據權利要求1的化合物，其中X1，X1′，X2和X2′是F；Q是S；Ra和Rb一起形成O；Ra′和Rb′一起形成O；并且所述取代的己糖基團是
29.根據權利要求1的化合物，其中X1和X1′是F，X2和X2′是H；Q是NH；Ra和Rb一起形成O；Ra′和Rb′一起形成O；并且所述取代的己糖基團是
30.根據權利要求1的化合物，其中X1和X1′是F，X2和X2′是H；Q是S；Ra和Rb一起形成O；Ra′和Rb′一起形成O；并且所述取代的己糖基團是
31.根據權利要求1的化合物，其中X1，X1′，X2和X2′是F；Q是NH；Ra和Rb一起形成O；Ra′和Rb′一起形成O；并且所述取代的己糖基團是
32.根據權利要求1的化合物，其中X1和X1′是F，X2和X2′是H；Q是NH；Ra和Rb一起形成O；Ra′和Rb′一起形成O；并且所述取代的己糖基團是
33.根據權利要求1的化合物，其中X1和X1′是F，X2和X2′是H；Q是S；Ra和Rb一起形成O；Ra′和Rb′一起形成O；并且所述取代的己糖基團是
34.根據權利要求1的化合物，其中X1和X1′是F，X2和X2′是H；Q是NH；Ra和Rb一起形成O；Ra′和Rb′一起形成O；并且所述取代的己糖基團是
35.根據權利要求1的化合物，其中X1和X1′是F，X2和X2′是H；Q是NH；Ra和Rb一起形成O；Ra′和Rb′一起形成O；并且所述取代的己糖基團是
36.根據權利要求1的化合物，其中所述拓撲異構酶I選擇性指數大于大約1000。
37.化合物
38.化合物
39.化合物
40.一種通過調節拓撲異構酶I來治療病癥的方法，包括對需要這樣的治療的哺乳動物物種施用有效量的至少一種如權利要求1要求的式I的化合物。
41.根據權利要求8的方法，其中所述病癥是癌癥。
42.權利要求9的方法，進一步包括對所述哺乳動物物種聯合施用至少一種其它抗腫瘤藥物。
全文摘要
本發明涉及表現出選擇性拓撲異構酶I(topo I)活性的吲哚并吡咯并咔唑的氟代糖和其它糖衍生物，它們的鹽和水合物，用于抑制腫瘤細胞增殖，并且顯示抗腫瘤作用，以及涉及它們的制備方法。
文檔編號C12N1/12GK1509335SQ02810232
公開日2004年6月30日 申請日期2002年3月22日 優先權日2001年3月22日
發明者E·H·呂迪格爾, M·G·紹尼爾, F·貝奧利厄, C·巴錢德, N·巴盧蘇布拉馬尼安, B·H·龍, D·B·弗倫尼森, K·齊默曼, N·B·奈杜, K·斯托范, D·R·圣勞倫特, E H 呂迪格爾, 呂, 圣勞倫特, 奈杜, 弗倫尼森, 紹尼爾, 蟹, 詹祭 砟嵐, 龍 申請人:布里斯托爾-邁爾斯斯奎布公司