高血壓的定量診斷分析的制作方法

專利名稱：高血壓的定量診斷分析的制作方法
技術領域：
本發明涉及sgk家族中人同系物的過量表達或其功能性分子修飾與高血壓之間的正相關性。本發明尤其涉及到對hsgk1基因中兩種不同的單個核苷酸多態性(單核苷酸多態性＝SNP)與遺傳決定的高血壓易感性之間的正相關性的檢測。
許多細胞外信號能引起胞內磷酸化/去磷酸化級聯，以此保證這些信號能快速通過質膜以及其受體傳遞到細胞質和細胞核。這些可逆的信號轉導級聯的特異性通過大量的獨特蛋白，尤其通過將磷酸基團轉移到獨特底物上的激酶而成為可能。
因血清和糖皮質激素而表達升高的血清-和糖皮質激素-依賴性激酶(sgk)，絲氨酸/蘇氨酸激酶，首先從鼠乳腺癌細胞中得到克隆(Webster等，1993)。sgk的人類形式被稱作hsgk1，其克隆自肝細胞(Waldegger等，1997)。已發現hsgk1的表達受細胞體積調節的影響。迄今，在鼠sgk的表達中尚未檢查到此種對細胞體積的依賴。另外，還發現大鼠激酶刺激上皮Na+通道(ENaC)(Chen等，1999；Naray-Pejes-Toth等，1999)。而ENaC在腎臟Na+排泄中扮演了決定性的角色。增高的ENaC活性導致鈉離子的腎臟潴留量增高，并因此導致高血壓的發生。
最后，另外兩個人類sgk家族成員hsgk2和hsgk3已被克隆(Kobayashi等，1999)，此兩者可以被胰島素和IGF1通過P13激酶途徑激活，hsgk1亦如此。電生理學實驗證實hsgk2和hsgk3的共表達也導致ENaC活性的顯著增高。
據DE 197 08 173 A1可知，在細胞體積的變化扮演了決定性病理生理學角色的許多疾病，例如高鈉血癥、低鈉血癥、糖尿病、腎功能不全、分解代謝過度、肝性腦病和微生物感染或病毒感染中，hsgk1具有顯著的診斷潛力。
WO 00/62781已經描述了hsgk1對內皮Na+通道的激活，這可導致腎Na+吸收的增高。因為此增高的腎Na+吸收與高血壓相關，所以認為hsgk1表達的增高應當能導致高血壓，而且hsgk1表達的降低應當最終導致低血壓。
人同系物hsgk2和hsgk3的過量表達或過高活性與ENaC的過度激活、所致的腎Na+吸收增高和最終引發的高血壓之間有類似的關系，這在未出版的、具有較早優先權的28.08.00德國申請中有描述，此申請的標題為“用作診斷和治療性靶子的hsgk2和hsgk3”(內部編號A 35 048)。另外，激酶hsgk2和hsgk3在動脈高血壓中的診斷潛力也已被論述。
本發明的任務是找到對正相關性，即人sgk家族同系物的過量表達或功能性分子修飾與高血壓之間的正關聯性的實驗性檢驗方法。
人sgk家族同系物在上面的含義中包括功能性分子修飾，其在本文中應理解為具有突變的sgk家族同系物，所述突變使相應蛋白質的性質，尤其是催化性質或者甚至是底物特異性發生了改變。
本發明的另一個任務是將人sgk家族同系物的過量表達或功能性分子修飾與高血壓之間的正相關性或關聯性用于診斷遺傳決定性高血壓的易感性的方法中。
在本發明框架中給出了對人sgk基因的過量表達或功能性分子修飾與高血壓之間的正相關性的檢測，并且針對hsgk1基因實例用實驗對此進行了具體的證明。
因此，針對上面任務的一個技術方案是在遺傳決定形式的高血壓的診斷中應用人sgk家族同系物，尤其是hsgk1基因的過量表達和功能性分子修飾與高血壓之間的這種正相關性。
具體地，上述任務因如下發現而得以實現，即在本發明的范圍內，在hsgk1基因內鑒定出兩個不同的SNP——如果它們以特定形式在hsgk1基因中出現的話，將導致患者有明確的高血壓患病傾向。這樣，可以在取自患者的身體樣本中檢測hsgk1基因或者甚至其他的sgk基因家族人同系物中這些SNP的存在，并視其為高血壓發生中遺傳決定的易感性的診斷指征。
上面的任務可以進一步通過提供對特定形式的遺傳決定性高血壓進行定量診斷的診斷方法而實現，其中，人sgk家族同系物的過量表達或這些同系物的功能性分子修飾通過定量檢測患者身體樣品中的這些同系物來檢測，所述定量檢測通過使用針對同系物蛋白質的抗體或與同系物的DNA或mRNA在嚴緊條件下雜交的多核苷酸以及適用于執行本方法的試劑盒來進行。
本發明的試劑盒優選包含所述針對hsgk1蛋白質的抗體或所述能夠與hsgk1基因在嚴緊條件下雜交的多核苷酸。
尤其是，此診斷試劑盒含有特異性針對hsgk1蛋白質的區域的抗體，所述區域包括對應于hsgk1基因中特定SNP的突變hsgk1蛋白片段。但是，試劑盒還可含有針對hsgk1基因或其他sgk家族人同系物的更高頻率等位基因的抗體，利用此抗體可定量檢測hsgk1或這些同系物的表達水平的改變。
另外，本發明的診斷試劑盒優選含有具有特定區域的多核苷酸，此特定區域包含hsgk基因中的一種或者另一種高血壓相關SNP，因此此多核苷酸適宜對患者hsgk1基因中的特定SNP通過用來自身體樣品的基因組DNA、cDNA或mRNA在嚴緊條件下雜交進行檢測。
本發明中高血壓與人sgk家族同系物之間的正相關性表明，在一些患者中hsgk1、hsgk2或hsgk3基因可能發生個體突變，從而改變激酶hsgk1、hsgk2或hsgk3的表達水平或功能性質，并因此遺傳性地導致高血壓患病傾向。例如這種突變可發生在sgk基因基因座的調節基因區域或內含子序列中并因此導致相應激酶的過量表達以及ENaC的過度激活。另一方面，sgk基因座位的遺傳構成的個體差異也可能影響基因的編碼區域。而編碼區域的突變可能導致相應激酶的功能改變，例如改變激酶的催化活性。因此，上面所述的兩種類型的突變都能引起ENaC激活的增高并因此最終在患者身上造成遺傳性原因的高血壓。
在患者身上引起遺傳決定性高血壓發生的sgk家族人同系物中的這些突變通常是所謂的單核苷酸多態性(SNP)，它們位于同系物的外顯子或內含子區域。hsgk基因外顯子中的SNP的較少頻率發生的形式(下文中稱之為突變型)可能會引起相應hsgk蛋白中的氨基酸替換從而導致激酶的功能改變。hsgk基因的內含子或調節序列中的SNP的突變型可能會引起相應激酶表達水平的改變。
在本發明的范圍內，進行相關性的研究，研究中將不同患者(雙生)的收縮壓測定值和舒張壓測定值與患者的hsgk1基因的基因型作比較，其中每種情況下血壓值為在身體處于不同姿勢(坐，站，臥)時測量的并進行了統計學評估。
因此，在本發明范圍內，證實在外顯子8的兩個等位基因上同時具有(C→T)的交換(第一SNP，參見SEQ ID NO.1)(在外顯子8的SNP上的純合TT攜帶者)雖不引起蛋白質水平的氨基酸交換(參見SEQ IDNO.2)，但引起血壓值顯著地升高并因此導致遺傳決定的高血壓患病傾向(表3)。
此外，還證實存在(T→C)改變(第二SNP)的純合形式可導致較低的血壓值并由此導致較低的遺傳決定性高壓患病傾向(表3)，所述(T→C)改變距第一SNP 5516p，位于內含子6向外顯子7過渡的供體剪接側。
因為本發明的hsgk1基因中的兩個SNP都不在蛋白質水平上引起氨基酸交換，因此由它們引起的較高或較低的高血壓遺傳易感性的基礎可能是hsgk1基因的表達水平的變化。


圖1更詳細地對外顯子8上的第一SNP(C→T)進行了解釋。圖1顯示hsgk1基因的各個外顯子并按外顯子編號(外顯子ID)對每個的相關“毗連序列群”和鏈以及外顯子的起點、終點和長度進行了描述。在外顯子8的SNP框架中的(C→T)交換的確切位置用黑色標記的C標示在外顯子8中。在圖1中外顯子8上的淺色標記指示的是hsgk1基因中位于SNP側翼的序列，其明確地界定了此SNP在基因組中所處的位置。
在內含子6中的第二SNP(T→C)由直接測序鑒定，而且可以明確地表征為在hsgk1基因(包含外顯子和內含子)中準確地位于外顯子8的第一SNP上游551bp處，即，hsgk1基因的內含子6到外顯子7的供體剪接位點內，而且與T向C的交換有關。
而且，證實，在不同姿勢下身體的收縮血壓和舒張血壓測量數值都顯示對hsgk1基因的基因型有同等程度的依賴性(表4)。因此，從表4中可以看出，患者血壓測量值與患者hsgk1基因中存在的前述多態性(SNP)之間的相關性實際上有統計學顯著性。
另外，所分析的hsgk1基因中的兩個SNP顯示出在相關發生率方面有很大的不平衡(表5)。盡管外顯子8中的SNP的CC攜帶者多數也是內含子6中SNP的TT攜帶者(64％)，但反之則不是這樣(僅有2％的外顯子8的TT攜帶者也是內含子6的CC攜帶者)。
首次查明的在患者血壓與其個人hsgk1基因座位的基因型之間的相關性說明，針對hsgk1的特異性抗體或多核苷酸適用于對特定的、遺傳決定的高血壓患病傾向進行診斷。這種特定的、遺傳引起的高血壓可以由hsgk1的表達增高，即，hsgk1的過量表達或者可能地以及hsgk1的改變的功能性質來表征。
因為sgk家族的2個同源激酶，hsgk2和hsgk3，也能夠激活ENaC，所以根據本發明，針對hsgk2和hsgk3的特異性的抗體和多核苷酸同樣也適用于特定的遺傳決定性高血壓的診斷分析。
根據本發明，hsgk1基因中這2個SNP的發生與高血壓患病傾向有關的這一發現特別說明了具有hsgk1基因中的這2個SNP的一個或另一個的多核苷酸尤其適用于通過與來自患者身體樣本的內源DNA(cDNA或基因組DNA)或mRNA雜交對遺傳決定性高血壓進行診斷。
類似的，根據本發明結果，抗體也適用于對遺傳決定的高血壓易感性進行診斷，所述抗體針對hsgk1蛋白或其任一種人同系物中的特定高血壓-相關多態性(SNP)。這些SNP也在蛋白質水平上導致高血壓相關的多態性，它們特別可能與hsgk1蛋白的功能改變有關并因此造成高血壓易感性。
本發明因此涉及將正相關性，即人sgk家族同系物，尤其是hsgk1的過量表達或功能性分子修飾與高血壓之間的正關聯應用在對特定形式的遺傳決定性高血壓的定量診斷上。
具體的，將hsgk1基因中與高血壓患病傾向相關的2個SNP用于遺傳決定性高血壓的定量分析。
本發明還涉及到對遺傳決定性高血壓的定量診斷方法，其中，對sgk家族人同系物的過量表達或這些同系物的功能性分子修飾通過在患者身體樣品中定量檢測同系物來進行檢測，對同系物的定量檢測是使用針對同系物蛋白的抗體或可在嚴緊條件下與同系物的基因組DNA、cDNA或mRNA雜交的多核苷酸進行的。
在本發明的診斷方法中，使用的患者身體樣品優選為血液樣品或唾液樣品，這些樣品含有細胞材料且能以相對低廉的費用從患者身上獲得。但是，也可以使用其他也含有細胞的身體樣品，如組織樣品等。從含細胞材料的身體樣品出發，根據標準方法(Sanbrook，J.和Russel，D.W.(2001)冷泉港，NY，CSHL出版社)能夠制備基因組DNA或cDNA或甚至mRNA，而且如果需要的話可對之進行擴增，然后在嚴緊條件下和能夠與此基因組DNA、cDNA或甚至mRNA特異性地雜交的多核苷酸雜交。另外，也可以通過標準方法(Sanbrook，J.和Russel，D.W.(2001)冷泉港，NY，CSHL出版社)從含細胞材料的身體樣品(血液、唾液、組織等)中分離出蛋白提取物，然后其中的相應sgk蛋白可通過與針對此蛋白的抗體一起孵育進行定量檢測。
在本發明的方法中，優選使用針對hsgk1蛋白的抗體或能與hsgk1基因的基因組DNA，cDNA或mRNA雜交的多核苷酸。
在本發明的方法中，尤其使用如下多核苷酸，其能夠在嚴緊條件下與具有hsgk1基因內含子6中的一種SNP形式或hsgk1基因外顯子8中的一種SNP形式的DNA、cDNA或mRNA雜交。
在本文中，嚴緊條件下的雜交意味著在雜交溫度和雜交溶液的甲酰胺含量如相關技術文獻所述(Sanbrook，J.和Russel，D.W.(2001)冷泉港，NY，CSHL出版社)的雜交條件下進行雜交。
另外，本發明還涉及對特定形式的遺傳決定性高血壓進行定量診斷的試劑盒，此試劑盒含有針對sgk蛋白家族的人同系物的抗體或能在嚴緊條件下與sgk基因家族人同系物雜交的多核苷酸或者這些抗體和多核苷酸的聯合，它們可以用于對這些同系物的過量表達或功能性分子修飾作定量測定。
試劑盒中含有的抗體優選針對hsgk1蛋白，試劑盒中含有的多核苷酸優選能與hsgk1基因雜交。
特別優選地診斷試劑盒可以含有能與具有內含子6中的SNP(T→C)的一種形式或外顯子8中的SNP(C→T)的一種形式的基因組DNA，cDNA或mRNA雜交的多核苷酸。
本發明通過下面的實施例進行詳細的解釋。
實施例1征選75對二卵雙生子進行相關性分析(Busjahn等，J.Hypertens.1996，141195-1199；Busjahn等，Hypertension，1997，29165-170)。受試人員全部屬于德國高加索人種，來自于德國各個區域。抽取每對雙生子及其父母的血液樣品用來驗證他們是二卵雙生的并用于進一步的分子遺傳學分析。每個參加的受試人員均事先進行了醫學檢查。已知，受試人員無一患有慢性醫學疾病。5分鐘后由熟練醫生用標準的水銀血壓測量計測量受試人的坐姿血壓(進行2次測量，間隔1分鐘)。兩次測量的平均值用作血壓數值。
二卵雙生子用于相關性研究的優點是他們嚴格地同齡而且外部對于他們表型的影響可被視為最低(Martin等，Nat.Genct.，1997，17387-392)。
最近Martin等(1997)描述了雙生子研究對解釋復雜遺傳疾病的重要性。
每對雙生子是否為二卵雙生通過用聚合酶鏈反應(PCR)擴增5個微衛星標記來進行確認。在這個微衛星標記分析中，使用特定寡核苷酸通過PCR擴增脫氧核糖核酸(DNA)片段，該片段含有在不同的人類個體中高度可變的區域。在基因組的這些區域中的高可變性可以通過所擴增片段的大小的微小差異檢測到，如果基因的相應位點上有多樣性的話，則通過凝膠電泳分離PCR產物之后將形成稱作微衛星帶的雙帶(Becker等，J.Reproductive Med.1997，42260-266)。
對靶基因——此處為hsgk1基因的分子遺傳學分析，用PCR方法擴增緊鄰hsgk1基因座位的另外3個微衛星標記區域(d6s472，d6s1038，d6s270)，然后將其與另一個雙生子以及其父母的相應樣品進行比較。用這種方法可以確定就所研究的等位基因而言，此對雙生子從其父母遺傳到的等位基因是相同的還是不同的。用名為“結構方程模擬”(SEM)的模型進行相關性研究(Eaves等，Behav.Genet.1996，26519-525；Neale，1997MxStatistical modeling。Box 126 MCV，Richmond，VA 23298精神病系，第4版)。此模型的基礎是受試對的方差-協方差矩陣，其特征在于他們具有一個或兩個或完全不具有相同等位基因的可能性。與表型有關的方差被分成基于所有基因的遺傳背景的方差(A)、基于靶基因-此處為hsgk 1基因的遺傳背景的方差(Q)以及由外界影響產生的方差(E)。
VAR＝A2+Q2+E2對于3種可能的等位基因的組合IBD0、IBD1、IBD2(IBD＝“遺傳得到的相同等位基因”；0、1或2個相同的等位基因)，受試對的協方差定義如下COV(IBD0)＝0.5A2COV(IBD1)＝0.5A2+0.5Q2COV(IBD2)＝0.5A2+Q2
為了評價hsgk1基因座位的遺傳構成與受試人血壓之間的相關性，以x2統計形式計算考慮和不考慮hsgk1靶基因的遺傳方差的兩個模型的差別。對于每一對雙生子和每一個基因座位，等位基因比率在親本基因型的基礎上用所謂的“多點”模型進行計算(MAPMAKER/SIBS；Kruglyak等，Am.J.Hum.Genet.，1995，57439-454)。
最近在模擬研究中(Fulker等，Behav.Gen.1996，26527-532)確認了基于方差-協方差估計的分析方法與上述x2統計(S.A.G.E.遺傳流行病學的統計學分析，2.2版，計算機程序包，流行病學與生物統計學學部，Case Western Reserve大學，Cleveland，OH，USA，1996)相比有更多的信息價值。為了保證相對于Lander和Kruglyak標準(Lander等，Nat.Genet.，1995，11241-246)具有顯著的相關性，而采用p＜0.01的顯著性水平。
此相關性研究的結果列于表1中。
表1
由表1可知，顯著性水平P的低值，即僅略超過或者完全沒有超過所接受的p＜0.01顯著性水平的值證明關于hsgk1基因座位的遺傳方差與表型確定的血壓測量值方差之間有正相關性。
實施例2hsgk1基因的基因組結構已被描述(Waldegger等，Genomics，51，29)，httD//wwww.ensmble.org/Homo sapiens/geneview？gene＝ENSG00000118515)。
為了鑒定與高血壓易感性相關的SNP，首先研究數據庫中公布的hsgk1基因的SNP是否是真正的SNP而不僅僅是測序錯誤，以及這些SNP是否有足夠的多態性使其能夠提供高血壓易感性的診斷檢測基礎。外顯子8中的SNP rs 1057293與C替換T有關，它滿足所要求的前提條件(http//wwww.ensmble.org/Homo sapiens/snpview？snp＝1057293；http//www.ncbi.nlm.nih.gov/SNP/snp ref.cgi？type＝rs&rs＝1057293)。另外，通過直接測序得到第二個SNP，其在hsgk1基因中距第一個SNP準確的551bp，位于內含子6到外顯子7的供體剪接位點中，而且其與T替換C相關。對內含子6(T→C)和外顯子8(C→T)中的這兩個SNP的分析如下所述。
在所有情況下，PCR擴增之后，加入1單位堿性磷酸酶和1單位核酸外切酶以降解PCR引物和使dNTP去磷酸化。在下面的條件中進行PCR在9600熱循環儀(Applied Biosystems)中95℃10分鐘，然后95℃下15秒、62℃下15秒、72℃下30秒循環35次，及72℃下10分鐘延伸步驟。
用針對內含子6的SNP(T→C)的引物5’-CTC CTT GCA GAG TCCGAA和針對外顯子8的SNP(C→T)的引物5’-ACC AAG TCA TTC TGGGTT GC進行微型測序反應。用0.15pmol的PCR純化產物作為測序PCR中的模板。對于測序PCR，用下面各步驟進行25個擴增循環在9600熱循環儀中96℃下變性10秒，50℃退火10秒，60℃下延伸步驟30秒。
對于同一個已確定了hsgkl基因的SNP基因型的患者，測量其在躺姿、站姿和坐姿時的收縮血壓和舒張血壓數值，以確定hsgk1基因的SNP基因型與血壓之間的相關性。
表2顯示雙生子的一些人口統計學數據以及hsgk1基因座位的遺傳構成與血壓測量值之間的相關性分析結果。在受試人員中證實每種姿勢的血壓測量值都受到強烈的遺傳影響。
表2
表3顯示本發明相關性研究的其他結果。外顯子8中的SNP的等位基因頻率是C為91％、T為9％，而對于內含子6中的SNP則是T為79％、C為21％(兩個多態性都保持Hardy-Weinberg平衡)。
每個姿勢(坐姿、臥姿和站姿)的血壓測量值都顯示同樣的趨勢。外顯子8中的SNP的純合CC攜帶者和雜合CT攜帶者在血壓數值上未顯示有任何差異，但是他們確實比外顯子8中的SNP的純合TT攜帶者有低得多的收縮血壓和舒張血壓數值。
與外顯子8中的SNP相比，對于內含子6中的SNP，相關性研究的相應結果較不一致。但是，發現內含子6中的SNP的純合CC攜帶者通常比內含子6中的SNP的純合TT攜帶者和雜合TC攜帶者有低的血壓數值。
表3
表4詳細地顯示了不管在哪一種姿勢下測量血壓(坐姿、站姿、臥姿)，內含子6中的SNP的遺傳構成對于收縮血壓和舒張血壓數值有實質上等同的顯著性。外顯子8中的SNP的遺傳構成的顯著性結果與此類似，但是與內含子6中的SN P相比不同姿勢下收縮血壓測量值與舒張血壓測量值之間的顯著性關聯卻要稍小一些。
表4
如表5所示，在分析的2個SNP之間有強相關性平衡盡管外顯子8中的SNP的多數CC攜帶者也是內含子6中的SNP的TT攜帶者(64％)，但反之卻不是這樣(外顯子8的TT攜帶者中僅有2％也是內含子6的CC攜帶者)。
表5
序列表<110>弗洛里安·朗(FLORIANLANG)<120>高血壓的定量診斷分析<130>L61882<140>DE 101 13 876.8<141>2001-03-21<160>2<170>PatentIn version 3.1<210>1<211>2354<212>DNA<213>homo sapiens<220>
<221>CDS<222>(43)..(1335)<223>
<220>
<221>變異<222>(762)..(762)<223>第一SNP(C到T)，沉默突變，即，SNP的兩種形式均在第240位氨基酸位置處導致氨基酸Asp<400>1ggtctttgag cgctaacgtc tttctgtctc cccgcggtgg tg atg acg gtg aaa 54Met Thr Val Lys1act gag gct gct aag ggc acc ctc act tac tcc agg atg agg ggc atg102Thr Glu Ala Ala Lys Gly Thr Leu Thr Tyr Ser Arg Met Arg Gly Met5 10 15 20gtg gca att ctc atc gct ttc atg aag cag agg agg atg ggt ctg aac150Val Ala Ile Leu Ile Ala Phe Met Lys Gln Arg Arg Met Gly Leu Asn25 30 35gac ttt att cag aag att gcc aat aac tcc tat gca tgc aaa cac cct198Asp Phc Ilc Gln Lys Ile Ala Asn Asn Ser Tyr Ala Cys Lys His Pro40 45 50gaa gtt cag tcc atc ttg aag atc tcc caa cct cag gag cct gag ctt246Glu Val Gln Ser Ile Leu Lys Ile Ser Gln Pro Gln Glu Pro Glu Leu55 60 65atg aat gcc aac cct tct cct cca cca agt cct tct cag caa atc aac294Met Asn Ala Asn Pro Ser Pro Pro Pro Ser Pro Set Gln Gln Ile Asn70 75 80
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權利要求
1.sgk家族人同系物的過量表達或功能性分子修飾與高血壓之間的正相關性在定量診斷特定形式的遺傳決定性高血壓中的用途。
2.根據權利要求1的用途，其特征在于sgk家族人同系物是hsgk1基因。
3.根據權利要求2的用途，其特征在于過量表達或功能性修飾是由hsgk1基因中內含子6內的核苷酸多態性(SNP)(T→C)引起的。
4.根據權利要求2的用途，其特征在于過量表達或功能性修飾是由hsgk1基因中外顯子8內的核苷酸多態性(SNP)(C→T)引起的。
5.用于對特定形式的遺傳決定性高血壓進行定量診斷的試劑盒，其含有針對sgk蛋白家族的人同系物的抗體或能夠在嚴緊條件下與sgk基因家族的人同系物雜交的多核苷酸或這些抗體和多核苷酸的聯合以用于定量確定這些同系物的過量表達或功能性分子修飾。
6.根據權利要求5的試劑盒，其特征在于sgk家族人同系物是hsgk1基因。
7.根據權利要求6的試劑盒，其特征在于所述抗體針對由SNP引起的突變hsgk1蛋白或所述多核苷酸可在嚴緊條件下與由SNP引起的突變hsgk1基因雜交。
8.根據權利要求7的試劑盒，其特征在于所述多核苷酸能在嚴緊條件下與由內含子6中的SNP(T→C)引起的突變hsgk1基因雜交。
9.根據權利要求7的試劑盒，其特征在于所述多核苷酸能在嚴緊條件下與由外顯子8中的SNP(C→T)引起的突變hsgk1基因雜交。
10.對特定形式的遺傳決定性高血壓進行定量診斷的方法，其中對sgk家族人同系物的過量表達或這些同系物的功能性分子修飾進行檢測，方式是用針對這些同系物蛋白的抗體或者用可在嚴緊條件下與這些同系物的DNA或mRNA雜交的多核苷酸定量檢測患者身體樣品中的這些同系物。
11.根據權利要求10的方法，其特征在于sgk家族人同系物為hsgk1基因。
12.根據權利要求10的方法，其特征在于所述多核苷酸能在嚴緊條件下與具有hsgk1基因內含子6內的SNP(T→C)的一種形式的DNA或mRNA雜交。
13.根據權利要求10的方法，其特征在于所述多核苷酸能在嚴緊條件下與具有hsgk1基因外顯子8內的SNP(C→T)的一種形式的DNA或mRNA雜交。
全文摘要
本發明涉及人sgk家族同系物的過量表達或功能性分子修飾與高血壓之間的正相關性在特定形式的遺傳決定性高血壓的定量診斷中的應用。本發明尤其涉及hsgk1基因中2種不同的單核苷酸多態性與遺傳決定的高血壓易感性之間的正關聯。本發明還涉及提供含有可用于檢測診斷性靶子hsgk1、hsgk2和hsgk3的抗體或多核苷酸的診斷試劑盒。
文檔編號C12Q1/68GK1503848SQ02808648
公開日2004年6月9日 申請日期2002年3月21日 優先權日2001年3月21日
發明者弗洛里安·朗, A·布斯耶恩, F·C·盧夫特, 盧夫特, 弗洛里安 朗, 掛 申請人:弗洛里安·朗, 弗洛里安 朗