提取β-淀粉酶的方法

專利名稱：提取β-淀粉酶的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明和酶技術(shù)相關(guān)。更準確的說，本發(fā)明和從谷類植物中提取β-淀粉酶的方法以及所述提取過程中酶的使用相關(guān)。
背景技術(shù)：
β-淀粉酶是一種淀粉降解酶，能夠水解α-1，4鍵。它存在于如細菌和植物中，能夠從淀粉鏈的非還原端將淀粉主要分解成麥芽糖。如在谷粒中含有豐富的β-淀粉酶，在需要時它將谷物中的營養(yǎng)貯備，即淀粉轉(zhuǎn)化成糖。谷類中的淀粉主要以直鏈淀粉和支鏈淀粉的形式貯存。β-淀粉酶將所有的直鏈淀粉轉(zhuǎn)變?yōu)辂溠刻嵌鴮⒋蠹s60％的支鏈淀粉轉(zhuǎn)變成麥芽糖而將剩下的轉(zhuǎn)變成糊精。
β-淀粉酶是商業(yè)上重要的酶，如在淀粉工業(yè)中它可用來生產(chǎn)麥芽糖。含大量麥芽糖的產(chǎn)品可以用于如糖果和食品工業(yè)。人們已經(jīng)從細菌和植物中分離出β-淀粉酶。如已經(jīng)從芽孢桿菌屬(Bacillus)細菌(US 4 970 158和JP 60 126 080)和耐熱梭狀芽孢桿菌屬(Clostridium)(US 4 647 538)中得到了β-淀粉酶。從細菌中得到的β-淀粉酶除了將淀粉轉(zhuǎn)化成麥芽糖之外，還產(chǎn)生相當大量的麥芽三糖，而來自植物的β-淀粉酶產(chǎn)生相對較多的麥芽糖，因此更適于用在目的為得到盡可能甜的和\或可發(fā)酵的產(chǎn)品的方法里。而且，從細菌大規(guī)模生產(chǎn)β-淀粉酶是很困難的。工業(yè)上的β-淀粉酶是植物來源的，通常谷物，特別是大麥或小麥，以及大豆都可用作酶源。
生長的過程中β-淀粉酶在谷粒中形成并貯藏于其中。谷粒由胚芽和含有淀粉的胚乳(即，核)組成，它們被盾片隔開。胚乳由一個糊粉層包圍著，整個谷粒被果皮層、種皮層和真實外殼包圍。小麥沒有嚴格意義上的外殼，但果皮和種皮形成了堅固的外殼層。β-淀粉酶主要積累在胚乳和盾片中。人們發(fā)現(xiàn)在緊貼糊粉層下面的胚乳最外部分中β-淀粉酶最多。
對大麥β-淀粉酶已經(jīng)進行詳盡的研究。該β-淀粉酶及其生產(chǎn)的描述參見如以下出版物D.E.Briggs，Barley，Chapman & Hall，London，1978；Cook，Barley and Malt，Academic Press，London，1962；J.R.A.Pollock，Brewing Science，Academic Press，London，1979。該酶的系統(tǒng)名為1，4-α-D-葡聚糖麥芽糖水解酶(E.C 3.2.1.2)。過去分離谷類β-淀粉酶時首先將谷粒磨碎或碾碎，然后對β-淀粉酶用水或緩沖液進行提取。從這種提取物中進行酶的純化自然很困難且費力，因為除了所要的酶，提取物中還含有谷粒中一些其他的可溶性成分。人們嘗試改進溶液中β-淀粉酶的分離，如在硫酸銨的存在下用多聚體吸附酶(US 5 294 341)。有人試驗用蛋白酶將β-淀粉酶從面筋中釋放出來(JP 63 079 590)。
通過往小麥淀粉生產(chǎn)的廢液中加入藻酸鈉然后回收凝聚的酶(JP 60027 383)或者通過形成磷酸鈣凝膠吸附該酶然后將其回收(JP 63 248 389)的方法也可分離出β-淀粉酶。來自淀粉生產(chǎn)的廢液并不是好的β-淀粉酶來源，因為廢液非常稀而且含有大量別的成分，這使純化和濃縮難于進行，而導致低產(chǎn)率。
為了得到更純的粗提物并避免艱難的下游處理，有人建議從完全或部分脫殼的谷粒中提取β-淀粉酶。如當大麥粒以不破損胚乳的方式去掉外殼時，胚乳最外層起一種過濾的作用而防止不溶物質(zhì)進入浸漬水中并限制了可溶性物質(zhì)的進入。最好是在還原性物質(zhì)的存在下進行提取，還原性物質(zhì)可以將β-淀粉酶從谷粒的其他蛋白中釋放出來(FI 61 516和US 4 675296)。
現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)明了從谷物中提取β-淀粉酶的方法，該方法可以縮短谷物提取時間并提高酶的產(chǎn)量。該方法實施簡單并特別適于處理脫殼的谷物，而這又方便了酶的進一步純化。
發(fā)明簡述本發(fā)明β-淀粉酶提取方法的特征是在纖維素酶存在的條件下在水性介質(zhì)中對谷物進行提取以得到含β-淀粉酶的提取物。本發(fā)明進一步和從谷物提取β-淀粉酶時纖維素酶的使用相關(guān)。
纖維素酶用于例如從磨碎的谷物進行的淀粉生產(chǎn)中以減少漿的粘度以及從蛋白質(zhì)中分離淀粉。現(xiàn)在令人驚訝的發(fā)現(xiàn)，在β-淀粉酶的提取水中加入纖維素酶能提高β-淀粉酶的產(chǎn)率并縮短提取時間。本發(fā)明優(yōu)選的實施方案見相關(guān)的權(quán)利要求。
附圖簡述

圖1描述溫度隨時間對β-淀粉酶產(chǎn)率的影響。
發(fā)明詳述本發(fā)明方法適用于提取含β-淀粉酶的不同谷物，如小麥、大麥、黑麥和大豆。優(yōu)選用于提取小麥和黑麥，特別是大麥的β-淀粉酶。沒發(fā)芽的谷粒除了β-淀粉酶不含大量的酶類，因此值得從這種谷粒中提取β-淀粉酶。該酶可以從沒去殼的谷粒中提取但優(yōu)選從去殼的、磨碎、碾碎或精加工的谷粒中提取。適宜的是去殼的黑麥和大麥。對去殼大麥粒的抽提效果是最好的。
為了防止淀粉從谷粒胚乳中進入提取物中，必須去殼以便不破壞真的活谷粒。然而，必須盡可能小心的去掉真殼。這樣做的原因是外殼太厚以致其會阻擋β-淀粉酶的透過。因此，去殼的大麥是指谷粒真殼被去除但胚乳仍完好無損的大麥。實踐中，這意味著通過去殼最多除去帶殼麥粒重量的約20％。通常10％到20％的重量作為外殼物質(zhì)被除去。在此情況下，胚乳的最外層(果皮、種皮和糊粉層)作為一種超濾器不僅防止不溶性物質(zhì)還基本上防止了可溶性物質(zhì)進入提取水中。用這種方法處理谷物而獲得的提取物相對較純，從而方便了進一步的處理，如酶的純化和濃縮。酶工業(yè)中的公知方法如加壓過濾和超濾可用于進一步的處理中。
谷物在水性介質(zhì)如水或可能地在緩沖液中進行提取。提取過程中pH通常在6.0和6.5之間。提取最好在還原條件下進行。使用的還原活性的量將使和谷粒中結(jié)構(gòu)蛋白結(jié)合的β-淀粉酶被釋放出來。還原條件根據(jù)本身已知的方式而定，實踐中時常用二氧化硫，如加入偏亞硫酸氫鈉和/或亞硫酸鈉。去殼谷粒和水性介質(zhì)的比例最好在5∶8和2∶3(重量/體積)之間。本發(fā)明方法適用于提取在鋼倉中進行的工業(yè)規(guī)模的處理，如向其中加入19噸去殼大麥和含有0.5％偏亞硫酸氫鈉和0.5％亞硫酸鈉的29m3水。
用上述方式提取大麥，如不分離留在谷粒中的水分，提取產(chǎn)量為大麥中β-淀粉酶總含量的約45％到50％。在此情況下，提取時間為約72小時。當在提取水中加入纖維素酶時，多達總量65％的谷物β-淀粉酶可以被提取出來而提取時間縮短到約60小時。
纖維素是一種線性葡萄糖多糖，其葡萄糖單元之間通過β-1，4-糖苷鍵相連。在植物細胞壁中發(fā)現(xiàn)纖維素通常與木質(zhì)素和半纖維素在一起。參與纖維素降解反應的酶被認為是纖維素酶。纖維素酶在工業(yè)上被用于如淀粉生產(chǎn)、紙的大規(guī)模加工、紡織品加工、釀酒廠中β-葡聚糖的降解和面包房中提高面粉的質(zhì)量。本發(fā)明方法中，纖維素酶能降解任何活谷粒外殼下的表面結(jié)構(gòu)。
商品化纖維素酶產(chǎn)品或者來自細菌如芽孢桿菌屬或者來自真菌如酵母(比如酵母屬(Saccharomyces))或霉菌。特別是，已經(jīng)從霉菌中分離出了大量的纖維素酶。最通常用的纖維素酶生產(chǎn)霉菌屬于腐質(zhì)霉屬(Humicola)、鐮孢霉屬(Fusarium)、毀絲霉屬(Myceliopthora)、曲霉屬(Aspergillus)、青霉屬(Penicillium)和木霉屬(Trichoderma)。有些生產(chǎn)菌株已經(jīng)進行了遺傳改良。本發(fā)明優(yōu)選使用來自霉菌，特別是木霉屬的纖維素酶。
商業(yè)用的酶制劑含有幾種酶活性并且它們的量和比例可以因為生產(chǎn)商的不同而有輕微差別。本發(fā)明中酶產(chǎn)品必需至少含有纖維素酶、半纖維素酶和β-葡聚糖酶活性。換句話說，在本上下文中纖維素酶是指至少可以分解纖維素、半纖維素和β-葡聚糖的酶制劑。申請人試驗的所有商業(yè)用纖維素酶產(chǎn)品(由Genencor International，Rhm Enzymer GmbH和NovoNordisk生產(chǎn))均能提高β-淀粉酶的產(chǎn)率。纖維素酶、半纖維素酶和β-葡聚糖活性的描述見例如Novo的實用生物技術(shù)手冊(1986年)。
纖維素酶可以分為如內(nèi)切纖維素酶、外切纖維素酶、外切纖維二糖水解酶和纖維二糖酶。內(nèi)切纖維素酶即1，4-β-D-葡聚糖葡聚糖水解酶，它能隨機切開纖維素內(nèi)部的β-1，4鍵而形成寡糖。外切纖維素酶即1，4-β-D-葡聚糖葡萄糖水解酶，它能切開分子末端的β-1，4鍵，釋放出葡萄糖。它們對纖維二糖的作用較慢。外切纖維二糖水解酶即1，4-β-D-葡聚糖纖維二糖水解酶，能在分子的非還原端切開上述的鍵，形成纖維二糖。纖維二糖酶即β-D-′葡糖苷葡萄糖水解酶，能將纖維二糖切成葡萄糖。將纖維素水解成葡萄糖需要內(nèi)切葡聚糖酶(1，4-β-D-葡聚糖葡聚糖水解酶，E.C 3.2.1.4)(它能切開該分子以及被取代的底物的內(nèi)部，但不能降解結(jié)晶態(tài)的纖維素)和纖維二糖水解酶(1，4-β-D-葡聚糖纖維二糖水解酶，EC 3.2.1.91)(它能切開結(jié)晶態(tài)的纖維素)以及β-葡萄糖苷酶(β-D-葡萄糖苷葡萄糖水解酶，EC 3.2.1.21)(它是一種纖維二糖酶，能將纖維二糖和纖維寡糖切成葡萄糖)。
有一組酶能分解半纖維素，即存在于自然界中含有戊糖的多糖如阿拉伯聚糖、半乳聚糖、甘露聚糖和木聚糖，這組酶稱為半纖維素酶。β-葡聚糖酶分解β-D-葡聚糖，即葡萄糖多聚體，此葡萄糖多聚體可能有分支且含有β-1，3和β-1，4鍵。如在谷粒胚乳細胞的細胞壁中發(fā)現(xiàn)存在β-葡聚糖。地衣多糖酶是內(nèi)切-β-葡聚糖酶(1，3·1，4-β-D-葡聚糖-4-葡聚糖水解酶)，能切開含有β-1，3和β-1，4鍵的β-葡聚糖的β-1，4鍵。昆布多糖酶(1，3-β-D-葡聚糖-3-葡聚糖水解酶)能切開只含有β-1，3鍵的β-葡聚糖如昆布多糖型碳水化合物的β-1，3鍵，外切葡聚糖酶(1，3-β-D-葡聚糖葡萄糖水解酶)能切開β-1，3-葡聚糖的β-1，3鍵而主要生成葡萄糖。
對于提取β-淀粉酶，利用如Genencor International生產(chǎn)的纖維素酶制劑Spezyme CE和GC440，已經(jīng)取得了有希望的結(jié)果。后-酶制劑來自遺傳改良過的長枝木霉(Trichoderma Congibrachiatum)菌株，其能尤其有效地分解纖維素、半纖維素和β-葡聚糖。它的活力表示為對羧甲基纖維素的分解效果(RBB-CMC)，在這種情況RBB-CMC活力至少為1400IU/g。GC440除了具有纖維素酶活性，還具有β-葡聚糖酶、β-葡糖苷酶、β-木糖苷酶、木聚糖酶和乙酰酯酶活性。通常的一批GC440含有平均大約7000到9000U/ml DNS-CMC，大約6000到8000U/ml β-葡聚糖酶，大約80到90U/ml β-葡糖苷酶，大約500到600nkat/ml β-木糖苷酶，大約1700到2000nkat/ml乙酰酯酶，大約700到1400U/ml RBB木聚糖酶和大約1900到2100 U/ml DNS木聚糖酶活力。用Rhm Enzyme GmbH生產(chǎn)的纖維素酶也得到了非常好的結(jié)果，該酶的商標名為RohalaseSep。此制劑來自里氏木霉(Trichoderma reesei)菌株，其含有相當大量的β-1，4-內(nèi)切葡聚糖酶活性(至少4700CU/g)和木聚糖酶(至少3000 XylH/g)以及較少量纖維二糖水解酶活性。它也具有β-1，3-葡聚糖酶，即昆布多糖酶活性。當使用上述酶制劑時，適宜的纖維素酶量是谷物重量的至少0.015％，優(yōu)選至少0.020％，如0.018到0.040％，特別地，0.024到0.030％。
β-淀粉酶可在20到45℃有纖維素酶存在的條件下提取。溫度優(yōu)選為25到32℃，如29到31℃。提取時間可以為30到72小時，通常至少48小時，如48到66小時，特別地，55到62小時。在30℃適宜的提取時間約為60小時。提取完成后，用如篩子將谷粒、去殼谷?；蛎娣蹚奶崛∷蟹蛛x出來，然后可以從提取水中回收β-淀粉酶，需要的話，可進行純化和/或濃縮。
提取后，用這種方法提取和分離后的谷物可以例如用來生產(chǎn)淀粉。根據(jù)本發(fā)明，β-淀粉酶被提取出來且提取物在從谷物中分級分離淀粉之前與谷物分離開來。如果酶從未破損的谷粒中提取，則將提取過的谷粒首先進行碾磨，之后淀粉的生產(chǎn)按照本身已知的方法進行，即將碾磨后的谷粒和水混合然后谷物通過過篩和離心力進行分餾。碾磨時通常加入纖維素酶和β-葡聚糖酶以減少粘性并將淀粉從蛋白質(zhì)中分離出來。
下面實施例舉例闡明本發(fā)明但本發(fā)明不局限于其中所述的實施方式。
實施例1
測定β-淀粉酶在測定谷物中β-淀粉酶總量之前，除去所有外殼，將所要分析的谷物碾磨并干燥成細面粉，取10克置于100毫升的錐形瓶中。加入100毫升0.5％(重量/體積)亞硫酸鈉溶液并適當混合。將混合物置于瓶中24小時但偶爾進行搖動。之后將其適當混合并通過薄濾紙(MN 640W)過濾。濾液用蒸餾水進行1∶50倍的稀釋，用下面描述的方法測定活力。該酶分析方法也就此用于測定下面所述實施例中提取液中β-淀粉酶的含量。
原則上，β-淀粉酶的測定按照食品化學制品規(guī)則IV，普通檢驗與設(shè)備(Food Chemical Codex IVGeneral Test and Apparatus)，485頁所描述的方法進行。
這里一個DP單位(糖化力)定義為在0.1ml的5％樣品稀釋液中能在20℃，1小時中從100ml底物產(chǎn)生足夠還原5毫升菲林溶液所需的還原糖量的酶量(測定方法和DP的定義并不一致)。
通過在20℃，pH4.6，30分鐘內(nèi)淀粉的水解來測定酶的活力。所得還原糖用堿性鐵氰化物滴定來測定。為了制備淀粉底物，將20克(干物質(zhì))淀粉(Baker 1130)和約50毫升水混合。加入約500ml沸水，混合物煮沸恰好2分鐘。將20毫升乙酸緩沖液(0.5M，pH 4.6)加入冷卻后的淀粉溶液中并用蒸餾水稀釋至1升。用移液管取200毫升20℃的淀粉底物加入250毫升的容量瓶中，加入10毫升稀釋過的酶樣品并混勻這些物質(zhì)。樣品在20℃水浴孵育恰好30分鐘后加入20毫升0.5N氫氧化鈉。將瓶中物質(zhì)混勻并稀釋到250毫升。作為0-樣品，用移液管取10毫升酶稀釋液和20毫升0.5N氫氧化鈉加入250毫升容量瓶中。將這些物質(zhì)混勻，加入200毫升淀粉底物并稀釋至250毫升。
0.05N鐵氰化物試劑的制備方法為將16.5克鐵氰化鉀(K3Fe(CN)6)和22克碳酸鈉(Na2CO3)溶于水中并稀釋至1升。A-P-Z溶液的制備方法為將70克氯化鉀(KCl)和20克硫酸鋅(ZnSO4×7H2O)溶于700毫升蒸餾水中并加入200毫升濃乙酸并稀釋到1升。碘化鉀溶液制備方法為將50克碘化鉀(KI)溶于100毫升蒸餾水并加入2滴50％氫氧化鈉(NaOH)。用移液管取10毫升鐵氰化物試劑和5毫升樣品置于250毫升容量瓶中。將它們混勻后沸水浴中加熱恰好20分鐘。將溶液冷卻后加入25毫升A-P-Z試劑和1毫升碘化鉀溶液?；旌衔镉?.05N硫酸鈉溶液滴定直到藍色消失(深藍色→白色)。
β-淀粉酶活力用如下公式計算

其中V0＝滴定0-樣品所消耗的量(ml)V1＝滴定樣品所消耗的量(ml)K＝稀釋倍數(shù)實施例2研究了纖維素酶對β-淀粉酶提取時間的影響。分別在不加纖維素酶和加入纖維素酶時從大麥中提取β-淀粉酶。將10千克大麥用去殼機去殼后在含有0.5％偏亞硫酸氫鈉和0.5％亞硫酸鈉的15升水中進行提取。而且，將Genencor生產(chǎn)的GC440纖維素酶加入到第二批中，纖維素酶的用量為去殼大麥重量的0.029％。提取在30℃下進行。提取中使用的谷粒的活力為155 DP°/g，其測定為根據(jù)實施例1進行。結(jié)果見表1和2。
表1.不加纖維素酶的提取

表2.加纖維素酶的提取

結(jié)果表明在提取水中加入纖維素酶可以減少β-淀粉酶的提取時間。
實施例3研究了纖維素酶對提取產(chǎn)量的影響。將10千克去殼大麥在含有0.5％偏亞硫酸氫鈉和0.5％亞硫酸鈉的15升水中進行提取，去殼大麥的β-淀粉酶活力為155DP°/克。不加纖維素酶和加入纖維素酶的提取過程都在30℃進行。
不加纖維素酶的提取時間為72小時。所用大麥的總活力為1550 kDP°。將提取物用篩子分離后得到8175毫升活力為95°DP/ml的提取物。這樣所獲提取物的總活力為776.6kDP°/ml，提取產(chǎn)率為50.1％。
在加纖維素酶的相應提取過程中加入去殼大麥重量0.025％的GC440。提取時間為60小時。所用大麥的總活力為1550kDP°。將提取物用篩子分離后得到9825毫升活力為102°DP/ml的提取物。這樣所得提取物的總活力為1002.2kDP°/ml，提取產(chǎn)率為64.7％。
結(jié)果表明往提取水中加入纖維素酶可以相當多的提高β-淀粉酶的產(chǎn)量。
實施例4研究了溫度對于提取β-淀粉酶的影響。將去殼大麥在纖維素酶存在下用前面實施例中所描述的方式在不同溫度下提取。纖維素酶GC440的用量相應于去殼大麥重量的0.027％，提取溫度分別為20℃，25℃，30℃或40℃。結(jié)果見圖1。在30℃下效果最佳。
實施例5研究了纖維素酶對來自小麥的β-淀粉酶產(chǎn)量的影響。將10千克碾磨過的小麥在含有0.5％偏亞硫酸氫鈉和0.5％亞硫酸鈉的15升水中進行提取，所述小麥的β-淀粉酶活力為128DP°/克。不加纖維素酶和加入纖維素酶的提取過程都在30℃進行。
不加纖維素酶的提取時間為72小時。所用小麥的總活力為1280kDP°。將提取物用篩子分離后得到9175毫升活力為55°DP/ml的提取物。這樣所得提取物的總活力為504.6kDP°/ml，提取產(chǎn)率為39.4％。
在有纖維素酶的相應提取過程中向碾磨后的小麥中加入去殼谷粒重量0.036％的GC440纖維素酶。提取時間為60小時。所用小麥的總活力為1280kDP°。將提取物用篩子分離后得到10080毫升活力為72°DP/ml的提取物。這樣所得提取物的總活力為725.8kDP°/ml，提取產(chǎn)率為56.7％。
結(jié)果表明往提取水中加入纖維素酶可以相當多的提高β-淀粉酶的產(chǎn)量。
實施例6研究了纖維素酶對來自精加工小麥的β-淀粉酶產(chǎn)量的影響。將小麥用精米機通過破壞表面并除去最外層部分(即大部分果皮被除去且種皮有輕微的損壞)進行精加工。將10千克精加工的小麥在含有0.5％偏亞硫酸氫鈉和0.5％亞硫酸鈉的15升水中進行提取，所述小麥的β-淀粉酶活力為128DP°/g。不加纖維素酶和加入纖維素酶的提取過程都在30℃進行。
不加纖維素酶的提取時間為72小時。所用小麥的總活力為1280kDP°。將提取物用篩子分離后得到9780毫升活力為15°DP/ml的提取物。這樣所得提取物的總活力為146.7kDP°/ml，提取產(chǎn)率為11.5％。
在有纖維素酶的相應提取過程中向碾磨后的小麥中加入精加工小麥重量0.036％的GC440纖維素酶。提取時間為60小時。所用小麥的總活力為1280kDP°。將提取物用篩子分離后得到9250毫升活力為35°DP/ml的提取物。這樣所得提取物的總活力為323.8kDP°/ml，提取產(chǎn)率為25.3％。
結(jié)果表明往提取水中加入纖維素酶可以相當多的提高β-淀粉酶的產(chǎn)量。
權(quán)利要求
1.從谷物中提取β-淀粉酶的方法，其特征是在纖維素酶存在的條件下在水性介質(zhì)中提取谷物以得到含有β-淀粉酶的提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征是β-淀粉酶提取自大麥或小麥。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的方法。其特征是β-淀粉酶提取自去殼大麥。
4.根據(jù)權(quán)利要求1到3的任何一個的方法，其特征是提取在還原條件下進行。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征是去殼大麥在含有二氧化硫的水中提取，去殼大麥與含二氧化硫的水的比例為5∶8到2∶3。
6.根據(jù)前面權(quán)利要求的任何一個的方法，其特征是提取在25℃到33℃溫度下進行，優(yōu)選在29到31℃下進行。
7.根據(jù)前面權(quán)利要求的任何一個的方法，其特征是提取時間為48到66小時，優(yōu)選55到62小時。
8.根據(jù)前面權(quán)利要求的任何一個的方法，其特征是使用霉菌纖維素酶。
9.根據(jù)前面權(quán)利要求的任何一個的方法，其特征是使用木霉屬霉菌的纖維素酶。
10.纖維素酶在谷物β-淀粉酶的提取中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及通過纖維素酶提取β－淀粉酶的方法。本發(fā)明進一步涉及β－淀粉酶提取過程中纖維素酶的使用。
文檔編號C12N9/26GK1491279SQ02804602
公開日2004年4月21日 申請日期2002年1月30日 優(yōu)先權(quán)日2001年2月6日
發(fā)明者P·凱基, P 凱基 申請人:達尼斯科制糖公司