專利名稱：旋光純腺甘甲硫氨酸制備的方法
技術領域：
本發明涉及生物化學、微生物發酵、微生物藥學中有機化合物的制備方法，特別涉及一種旋光純腺甘甲硫氨酸制備的方法。
背景技術：
SAMe又名腺甘甲硫氨酸，腺甘蛋氨酸，活性甲硫腺甘，是生物體內甲基化反應的供體。具有抗氧化、保肝、抗抑郁、治療關節炎、癌癥等多種疾病的用途。已廣泛用于醫藥臨床、食品保健。
許多有機化合物以旋光性結構形式存在，也就是，它們有能力使水平極化光的平面旋轉。在描述一種旋光性化合物時，前綴D和L或R和S用于表示分子手性中心的絕對構造。具有旋光特性的化合物在生物活性方面具有較大的差異，一個典型的例子是β腎上腺素調節物的左旋結構體，即心得安，已經知道它的藥效是其右旋結構體的100多倍。
SAMe具有(R，S)和(S，S)兩種光學結構，試驗證明，(R，S)-SAMe不但沒有生物活性，而且對(S，S)-SAMe具有抑制作用美國專利 申請號20020025926。因此，采用旋光純的(S，S)-SAMe在醫藥應用上具有顯而易見的好處。
商業上使用的SAMe可以通過發酵技術獲得，其純度為60-80％。(即，最終產物包括60-80％活性成份或者(S，S)-SAMe和20-40％的非活性成份或者(R，S)-SAM e.)(Gross，A.，Geresh，S.，and Whitesides，Gm(1983)Appl.Biochem.Biotech.8，415.)。據報到生物酶合成方法可以集中產生超過60％的非活性異構體。(Matos，JR，Rauschel FM，Wong，CH.S-Adenosylmethionine關于化學和酶催化合成的研究。Biotechnology and Applied Biochemistry 9，39-52(1987)。已有報到光學異構體的分離技術可以解決活性異構體SAMe的純度問題(Matos，JR，Rauschel FM，Wong，CH.S-Adenosylmethionine關于化學和酶催化合成的研究。Biotechnology and Applied Biochemistry 9，39-52(1987)；現有解決SAMe光學純度的技術由于成本太高而不具有商業價值。另外，可以想到運用立體選擇性合成方法合成生物活性異構體但是這種方法現今還沒有成熟。
發明內容
本發明需要解決的技術問題是在發酵培養基中添加B族維生素，改變微生物發酵的代謝過程，從而可以廉價獲得旋光純的(S，S)-SAMe的旋光純腺甘甲硫氨酸制備的方法。
本發明的技術方案是旋光純腺甘甲硫氨酸制備的方法，包括1、產SAMe的微生物培養基中加入0.2‰～1‰的B族維生素2、產SAMe的微生物在上述培養基中發酵3、發酵產物用酸提取4、提取液采用陽離子樹脂吸附5、吸附后的樹脂用1N對甲苯磺酸洗脫6、洗脫液經過脫色介質脫色7、濃縮液經冷凍干燥或其它干燥工藝干燥，即得目的產物。
培養基可以是大腸桿菌標準培養基LB、酵母標準培養基YPD或其他微生物培養基，微生物可以是大腸桿菌、枯草桿菌、酵母、霉菌或其它可以產生SAMe的微生物。
本發明的有益效果是由于在在發酵培養基中添加B族維生素，改變微生物發酵的代謝過程，使得本發明的制備方法簡單易行，而且成本低廉。
具體實施例方式
以下為本發明的2個應用實例，2個實例是為了更好闡述本發明，而不僅僅是限于2個實例。
實施例1旋光純腺甘甲硫氨酸制備的方法，包括1、大腸桿菌菌株ATCC2385接種到LB斜面培養基，37攝氏度培養過夜。
2、從上述斜面接種ATCC2385到100毫升含0.5‰維生素B6的LB液體培養液中，37攝氏度振蕩培養36小時，(S，S)-SAMe含量為3mg/ml.
3、5000rpm離心收集細胞，用飽和生理鹽水洗滌兩次。
4、加入1.5N的高氯酸10毫升，懸浮沉淀，提取細胞中的(S，S)-SAMe，注意要經常振蕩，提取率為95％。
5、離心收集上清液，提取液用10g陽離子樹脂732吸附，用0.01N的醋酸洗到洗脫OD260＜0.1，用去離子水30毫升洗柱。
6、用1N的對甲苯磺酸洗脫，收集洗脫液致OD260＜0.1，得洗脫液50毫升，(S，S)-SAMe含量為5mg/ml，總收率為83％。
7、用5g活性碳對洗脫液脫色，洗脫液有淡黃色轉為無色，用去離子水25毫升分次洗活性炭，洗脫液合并為74毫升。
8、洗脫液中加入0.4g對甲基苯磺酸，冷凍干燥，得(S，S)-SAMe對甲苯磺酸鹽0.68g。總收率為80％。(S，S)-SAMe活性成份含量為35.3％實施例2菌種采用畢赤酵母，培養基為YPD，培養溫度為30度，時間為72小時，培養基中維生素B12含量為0.8‰，其余與實施例1相同。
權利要求
1.旋光純腺甘甲硫氨酸制備的方法，采用微生物發酵方法，發酵方法包括制造(S，S)-SAMe的培養基，培養基可以是大腸桿菌標準培養基LB、酵母標準培養基YPD或其他微生物培養基，其發酵和發酵產物的后續處理工藝包括產SAMe的微生物在上述培養基中發酵；發酵產物用酸提取；提取液采用陽離子樹脂吸附；吸附后的樹脂用1N對甲苯磺酸洗脫；洗脫液經過脫色介質脫色；濃縮液經冷凍干燥或其它干燥工藝干燥，即得目的產物，其特征是培養基中含有0.2‰～1‰的B族維生素。
2.根據權利要求1所述的旋光純腺甘甲硫氨酸制備的方法，其特征是優選的B族維生素含量為0.5‰～0.8‰。
3.根據權利要求1所述的旋光純腺甘甲硫氨酸制備的方法，其特征是微生物可以是大腸桿菌、枯草桿菌、酵母、霉菌或其它可以產生SAMe的微生物。
全文摘要
本發明涉及生物化學、微生物發酵、微生物藥學中有機化合物的制備方法，特別涉及一種旋光純腺甘甲硫氨酸制備的方法。解決了已有的手性分離和選擇性合成旋光純腺甘甲硫氨酸成本太高的缺陷。技術解決方案是旋光純腺甘甲硫氨酸制備的方法，采用微生物發酵方法，發酵方法包括制造(S，S)－SAMe的培養基，培養基可以是大腸桿菌標準培養基LB、酵母標準培養基YPD或其他微生物培養基，其發酵和發酵產物的后續處理工藝包括產SAMe的微生物在上述培養基中發酵；發酵產物用酸提取；提取液采用陽離子樹脂吸附；吸附后的樹脂用1N對甲苯磺酸洗脫；洗脫液經過脫色介質脫色；濃縮液經冷凍干燥或其它干燥工藝干燥，即得目的產物，其特征是培養基中含有0.2‰～1‰的B族維生素。主要用于旋光純的(S，S)－SAMe的制備。
文檔編號C12N1/20GK1483828SQ0213701
公開日2004年3月24日 申請日期2002年9月16日 優先權日2002年9月16日
發明者黃曉惠 申請人:上海青瑞生物醫藥技術有限公司