新型化合物的制作方法
                            
            
                            
            文檔序號：589187閱讀：396來源：國知局
            
                            
                        
            
                        
            
                        
            
                            專利名稱：新型化合物的制作方法
            
技術(shù)領(lǐng)域：
            本發(fā)明涉及多核苷酸(本文稱為“BASB047多核苷酸”、“BASB054多核苷酸”、“BASB068多核苷酸”和“BASB069多核苷酸”)、由它們編碼的多肽(本文分別稱為“BASB047”、“BASB054”、“BASB068”和“BASB069”或分別稱為“BASB047多肽”、“BASB054多肽”、“BASB068多肽”和“BASB069多肽”)、用于產(chǎn)生它們的重組材料和方法。另一方面，本發(fā)明涉及這樣的多肽和多核苷酸的使用方法，包括針對細菌感染的疫苗。又一方面，本發(fā)明涉及檢測某些病原體感染的診斷測定。
            
中非主要流行A型血清群腦膜炎球菌感染，有時達到1000/100,000/年的水平(Schwartz，B.，Moore，P.S.，Broome，C.V.Clin.Microbiol.Rev.2(增刊)，S18-S24，1989)。整體來看，幾乎所有腦膜炎球菌疾病的病例都是由A型、B型、C型、W-135型和Y型血清群腦膜炎球菌引起，并且可獲得四價A、C、W-135、Y多糖疫苗(Armand，J.，Arminjon，F(xiàn).，Maynard，M.C.，Lafaix，C.，J.Biol.Stand.10335-339，1982)。
            
目前通過將所述多糖疫苗化學(xué)綴合到載體蛋白而進行改進(Lieberman，J.M.，Chiu，S.S.，Wong，V.K.等人，JAMA 2751499-1503，1996)。
            
還沒有B型血清群疫苗可用，因為發(fā)現(xiàn)B型莢膜多糖是沒有免疫原性的，很可能是因為它與宿主成分具有結(jié)構(gòu)相似性(Wyle，F(xiàn).A.，Artenstein，M.S.，Brandt，M.L.等人，J.Infect.Dis.126514-522，1972；Finne，J.M.，Leinonen，M.，Makela，P.M.Lancet Ii.355-357，1983)。
            
許多年來已經(jīng)開始并進行發(fā)展基于腦膜炎球菌外膜的疫苗(deMoraes，J.C.，Perkins，B.，Carnargo，M.C.等人Lancet 3401074-1078，1992；Bjune，G.，Hoiby，E.A.Gronnesby，J.K.等人3381093-1096，1991)。這樣的疫苗已經(jīng)證實在較大的兒童(＞4歲)和青少年中具有57％-85％的有效率。
            
在這些疫苗中存在許多細菌外膜成分，如PorA、PorB、Rmp、Opc、Opa、FrpB，這些成分對所觀察到的保護的作用仍需要進一步的確定。使用動物抗體或人類抗體已經(jīng)確定其它細菌外膜成分可能與誘導(dǎo)保護性免疫有關(guān)，如TbpB和NspA(Martin，D.，Cadieux，N.，Hamel，J.，Brodeux，B.R.，J.Exp.Med.1851173-1183，1997；Lissolo，L.，Maitre-Wilmotte，C.，Dumas，p.等人，Inf.Immun.63884-890，1995)。保護性免疫的機制將涉及抗體介導(dǎo)的殺菌活性和調(diào)理素性吞噬作用(opsonophagocytosis)。
            
已經(jīng)使用一個菌血癥模型來組合所有抗體介導(dǎo)的機制(Saukkonen，K.，Leinonen，M.，Abdillahi，H.Poolman，J.T.Vaccine 7325-328，1989)。一般認為晚期補體成分介導(dǎo)的殺菌機制對于對抗腦膜炎球菌疾病的免疫是關(guān)鍵性的(Ross，S.C.，Rosenthal P.J.，Berberic，H.M.，Densen，P.J.Infect.Dis.1551266-1275，1987)。
            
過去幾十年來，腦膜炎奈瑟氏球菌感染的頻率急劇上升。這被歸因于多抗生素抗性菌株的出現(xiàn)以及免疫系統(tǒng)功能減弱的人口增加。分離到對部分或所有標(biāo)準(zhǔn)抗生素都具有抗性的腦膜炎奈瑟氏球菌不再是不尋常的事。這種現(xiàn)象產(chǎn)生了針對該生物的新型抗微生物劑、疫苗、藥物篩選方法和診斷測試的亟待滿足的醫(yī)療需要和需求。
            
發(fā)明簡述本發(fā)明涉及BASB047、BASB054、BASB068和BASB069，尤其是BASB047多肽、BASB054多肽、BASB068多肽和BASB069多肽以及BASB047多核苷酸、BASB054多核苷酸、BASB068多核苷酸和BASB069多核苷酸，以及用于其制備的重組材料和方法。另一方面，本發(fā)明涉及使用這樣的多肽和多核苷酸的方法，其中包括預(yù)防和治療微生物疾病。再一方面，本發(fā)明涉及檢測微生物感染有關(guān)的疾病和與這樣的感染有關(guān)的病癥的診斷測定，所述測定例如檢測BASB047、BASB054、BASB068和BASB069多核苷酸或多肽的表達或活性的測定。
            
通過閱讀下面的描述和通過閱讀本公開的其它部分，在所公開的本發(fā)明精神和范圍內(nèi)的各種變化和改進對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是非常顯而易見的。
            
發(fā)明詳述本發(fā)明涉及如下更詳細描述的BASB047、BASB054、BASB068和BASB069多肽和多核苷酸。本發(fā)明尤其涉及分別具有SEQ ID NO1、3、5、7和SEQ ID NO2、4、6、8所示核苷酸序列和氨基酸序列的BASB047、BASB054、BASB068和BASB069。需要指出的是，在下面的序列表中以“DNA”陳述的序列代表本發(fā)明一個實施方案的范例，因為一般技術(shù)人員知道，這樣的序列可以可有效用于一般多核苷酸，包括多核糖核苷酸。多肽本發(fā)明的一個方面提供腦膜炎奈瑟氏球菌的多肽，在本文中稱為“BASB047”、“BASB054”、“BASB068”和“BASB069”以及“BASB047多肽”、“BASB054多肽”、“BASB068多肽”和“BASB069多肽”以及它們在生物學(xué)上、診斷上、預(yù)防上、臨床上或治療上有用的變異體，以及包含它們的組合物。
            
本發(fā)明還提供(a)一種分離的多肽，所述多肽包含與SEQ ID NO2的氨基酸序列有至少85％同一性、更優(yōu)選有至少90％同一性、甚至更優(yōu)選有至少95％同一性、最優(yōu)選有至少97-99％同一性或完全相同的氨基酸序列；(b)一種由分離的多核苷酸編碼的多肽，所述多核苷酸包含在SEQ ID NO1的全長上與SEQ ID NO1有至少85％同一性、更優(yōu)選有至少90％同一性、更優(yōu)選有至少95％同一性、甚至更優(yōu)選有至少97-99％同一性或完全相同的核苷酸序列；(c)一種由包含多核苷酸序列的分離多核苷酸編碼的多肽，所述多核苷酸序列編碼與SEQ ID NO2的氨基酸序列有至少85％同一性、更優(yōu)選有至少90％同一性、甚至更優(yōu)選有至少95％同一性、最優(yōu)選有至少97-99％同一性或完全相同的多肽。
            
SEQ ID NO2提供的BASB043多肽是腦膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC13090的BASB047多肽。
            
本發(fā)明還提供BASB047多肽的免疫原性片段，即BASB047多肽的連續(xù)部分，所述部分具有與包含SEQ ID NO2的氨基酸序列的多肽相同或基本相同的免疫原性活性。這就是說，所述片段(如果必要，當(dāng)綴和到一種載體上時)能夠引起識別BASB047多肽的免疫反應(yīng)。這樣的免疫原性片段可以包括例如缺乏N-末端前導(dǎo)序列和/或跨膜結(jié)構(gòu)域和/或C-末端錨著結(jié)構(gòu)域的BASB047多肽。在一個優(yōu)選的方面，依照本發(fā)明的BASB047的免疫原性片段基本包含多肽的所有細胞外結(jié)構(gòu)域，所述多肽在SEQ ID NO2的全長上與SEQ ID NO2的多肽具有至少85％同一性、更優(yōu)選有至少90％同一性、甚至更優(yōu)選有至少95％同一性、最優(yōu)選有至少97-99％同一性。
            
本發(fā)明還提供(a)一種分離的多肽，所述多肽包含與SEQ ID NO4的氨基酸序列有至少85％同一性、更優(yōu)選有至少90％同一性、甚至更優(yōu)選有至少95％同一性、最優(yōu)選有至少97-99％同一性或完全相同的氨基酸序列；(b)一種由分離的多核苷酸編碼的多肽，所述分離的多核苷酸包含在SEQ ID NO3的全長上與SEQ ID NO3有至少85％同一性、更優(yōu)選有至少90％同一性、更優(yōu)選有至少95％同一性、甚至更優(yōu)選有至少97-99％同一性或完全相同的多核苷酸序列；(c)一種由包含多核苷酸序列的分離多核苷酸編碼的多肽，所述多核苷酸序列編碼與SEQ ID NO4的氨基酸序列有至少85％同一性、更優(yōu)選有至少90％同一性、甚至更優(yōu)選有至少95％同一性、最優(yōu)選有至少97-99％同一性或完全相同的多肽。
            
SEQ ID NO4提供的BASB054多肽是腦膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC13090的BASB054多肽。
            
本發(fā)明還提供BASB054多肽的免疫原性片段，即BASB054多肽的連續(xù)部分，所述部分具有與包含SEQ ID NO4的氨基酸序列的多肽相同或基本相同的免疫原性活性。這就是說，所述片段(如果必要，當(dāng)綴和到一種載體上時)能夠引起識別所述BASB054多肽的免疫反應(yīng)。這樣的免疫原性片段可以包括例如缺乏N-末端前導(dǎo)序列和/或跨膜結(jié)構(gòu)域和/或C-末端錨著結(jié)構(gòu)域的BASB054多肽。在一個優(yōu)選的方面，依照本發(fā)明的BASB054的免疫原性片段基本包含多肽的所有細胞外結(jié)構(gòu)域，所述多肽在SEQ ID NO4的全長上與SEQ ID NO4的多肽具有至少85％同一性、更優(yōu)選有至少90％同一性、甚至更優(yōu)選有至少95％同一性、最優(yōu)選有至少97-99％同一性。
            
本發(fā)明還提供(a)一種分離的多肽，所述多肽包含與SEQ ID NO6的氨基酸序列有至少85％同一性、更優(yōu)選有至少90％同一性、甚至更優(yōu)選有至少95％同一性、最優(yōu)選有至少97-99％同一性或完全相同的氨基酸序列；(b)一種由分離的多核苷酸編碼的多肽，所述多核苷酸包含在SEQ ID NO5的全長上與SEQ ID NO5有至少85％同一性、更優(yōu)選有至少90％同一性、更優(yōu)選有至少95％同一性、甚至更優(yōu)選有至少97-99％同一性或完全相同的核苷酸序列；(c)一種由包含多核苷酸序列的分離多核苷酸編碼的多肽，所述多核苷酸序列編碼與SEQ ID NO6的氨基酸序列有至少85％同一性、更優(yōu)選有至少90％同一性、甚至更優(yōu)選有至少95％同一性、最優(yōu)選有至少97-99％同一性或完全相同的多肽。
            
SEQ ID NO6提供的BASB068多肽是腦膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC13090的BASB068多肽。
            
本發(fā)明還提供BASB068多肽的免疫原性片段，即BASB068多肽的連續(xù)部分，所述部分具有與包含SEQ ID NO6的氨基酸序列的多肽相同或基本相同的免疫原性活性。這就是說，所述片段(如果必要，當(dāng)綴和到一種載體上時)能夠引起識別所述BASB068多肽的免疫反應(yīng)。這樣的免疫原性片段可以包括例如缺乏N-末端前導(dǎo)序列和/或跨膜結(jié)構(gòu)域和/或C-末端錨著結(jié)構(gòu)域的BASB068多肽。在一個優(yōu)選的方面，依照本發(fā)明的BASB068的免疫原性片段基本包含多肽的所有細胞外結(jié)構(gòu)域，所述多肽在SEQ ID NO6的全長上與SEQ ID NO6的多肽具有至少85％同一性、更優(yōu)選有至少90％同一性、甚至更優(yōu)選有至少95％同一性、最優(yōu)選有至少97-99％同一性。
            
本發(fā)明還提供
            
(a)一種分離的多肽，所述多肽包含與SEQ ID NO8的氨基酸序列有至少85％同一性、更優(yōu)選有至少90％同一性、甚至更優(yōu)選有至少95％同一性、最優(yōu)選有至少97-99％同一性或完全相同的氨基酸序列；(b)一種由分離的多核苷酸編碼的多肽，所述分離的多核苷酸包含在SEQ ID NO7的全長上與SEQ ID NO7有至少85％同一性、更優(yōu)選有至少90％同一性、更優(yōu)選有至少95％同一性、甚至更優(yōu)選有至少97-99％同一性或完全相同的多核苷酸序列；(c)一種由包含多核苷酸序列的分離多核苷酸編碼的多肽，所述多核苷酸序列編碼與SEQ ID NO8的氨基酸序列有至少85％同一性、更優(yōu)選有至少90％同一性、甚至更優(yōu)選有至少95％同一性、最優(yōu)選有至少97-99％同一性或完全相同的多肽。
            
SEQ ID NO8提供的BASB069多肽是腦膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC13090的BASB069多肽。
            
本發(fā)明還提供BASB069多肽的免疫原性片段，即BASB069多肽的連續(xù)部分，所述部分具有與包含SEQ ID NO8的氨基酸序列的多肽相同或基本相同的免疫原性活性。這就是說，所述片段(如果必要，當(dāng)綴和到一種載體上時)能夠引起識別所述BASB069多肽的免疫反應(yīng)。這樣的免疫原性片段可以包括例如缺乏N-末端前導(dǎo)序列和/或跨膜結(jié)構(gòu)域和/或C-末端錨著結(jié)構(gòu)域的BASB069多肽。在一個優(yōu)選的方面，依照本發(fā)明的BASB069的免疫原性片段基本包含多肽的所有細胞外結(jié)構(gòu)域，所述多肽在SEQ ID NO8的全長上與SEQ ID NO8的多肽具有至少85％同一性、更優(yōu)選有至少90％同一性、甚至更優(yōu)選有至少95％同一性、最優(yōu)選有至少97-99％同一性。
            
片段是具有與本發(fā)明的任何多肽的部分而非全部氨基酸序列完全相同的氨基酸序列的多肽。與BASB047、BASB054、BASB068和BASB069多肽一樣，片段可以是獨立的，或者包含于更大的多肽內(nèi)，在其中它們形成部分或區(qū)，最好是在單個更大多肽中的單個連續(xù)區(qū)。
            
優(yōu)選的片段包括例如具有SEQ ID NO2、4、6、8或它們的變異體的一部分的截短多肽，例如包括氨基末端氨基酸序列和/或羧基末端氨基酸序列的連續(xù)系列殘基。也優(yōu)選由宿主細胞中產(chǎn)生或在宿主細胞中產(chǎn)生的本發(fā)明多肽的降解形式。還優(yōu)選結(jié)構(gòu)或功能屬性特征片段，例如包含以下區(qū)的片段α-螺旋和α-螺旋形成區(qū)、β-折疊和β-折疊形成區(qū)、轉(zhuǎn)角和轉(zhuǎn)角形成區(qū)、螺旋和螺旋形成區(qū)、親水區(qū)、疏水區(qū)、α兩親區(qū)、β兩親區(qū)、柔性區(qū)、表面形成區(qū)、底物結(jié)合區(qū)和高抗原性指數(shù)區(qū)。
            
其它優(yōu)選片段包括包含具有SEQ ID NO2、4、6、8的氨基酸序列的至少15、20、30、40、50或100個連續(xù)氨基酸的氨基酸序列的分離多肽，或者包括具有SEQ ID NO2、4、6、8的氨基酸序列截短或缺失的至少15、20、30、40、50或100個連續(xù)氨基酸的氨基酸序列的分離多肽。
            
可以使用本發(fā)明的各多肽片段通過肽合成制備相應(yīng)全長多肽；因此，這些片段可以用作產(chǎn)生本發(fā)明的全長多肽的中間體。
            
特別優(yōu)選其中幾個即5-10個、1-5個、1-3個、1-2個或1個氨基酸以任何組合取代、缺失或添加的變異體。
            
本發(fā)明多肽或免疫原性片段可以是“成熟”蛋白形式，或者可以是更大的蛋白如前體或融合蛋白的一部分。包括包含以下序列的額外氨基酸序列通常是有利的分泌序列或前導(dǎo)序列、原序列(pro-sequence)、有助于純化的序列如多組氨酸殘基、或在重組產(chǎn)生過程中有利穩(wěn)定性的其它序列。此外，也可以考慮添加外源多肽或脂質(zhì)尾或多核苷酸序列以增加最終分子的免疫原性潛力。
            
一方面，本發(fā)明涉及通過遺傳工程制備可溶性融合蛋白，所述融合蛋白包含本發(fā)明多肽或其片段，以及不同免疫球蛋白亞族(IgG、IgM、IgA、IgE)重鏈或輕鏈的恒定區(qū)的不同部分。作為免疫球蛋白，優(yōu)選的是人類IgG(特別是IgG1)的重鏈的恒定部分，其中在絞鏈區(qū)融合。在一個特定實施方案中，可以通過加入可用凝血因子Xa切除的切割序列就可除去Fc部分。
            
此外，本發(fā)明涉及通過遺傳工程制備這些融合蛋白的方法，以及這些融合蛋白在藥物篩選、診斷和治療中的應(yīng)用。本發(fā)明的再一方面還涉及編碼這樣的融合蛋白的多核苷酸。在國際專利申請?zhí)朩O94/29458和WO94/22914中可以找到融合蛋白技術(shù)實例。
            
所述蛋白也可以化學(xué)綴合或表達為重組融合蛋白，以使得與未融合的蛋白相比，在表達系統(tǒng)中高水平表達。所述融合配偶體可以協(xié)助提供T輔助細胞表位(免疫融合配偶體)，最好是被人類識別的T輔助細胞表位，或者所述配偶體協(xié)助以比天然重組蛋白更高產(chǎn)量表達所述蛋白(表達增強物)。最好所述融合配偶體既是免疫融合配偶體，又是表達增強配偶體。
            
融合配偶體包括B型流感嗜血桿菌(Haemophilus influenza B)的D蛋白以及流感病毒的非結(jié)構(gòu)蛋白NS1(血凝素)。另一種免疫融合配偶體是稱為LytA的蛋白。最好使用LYTA分子的C末端部分。LytA產(chǎn)生自肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumoniae)，它合成N-乙酰-L-丙氨酸酰胺酶(酰胺酶LytA)(lytA基因編碼{Gene，43(1986)第265-272頁})即特異性降解肽聚糖主鏈中某些鍵的自溶素。LytA蛋白的C末端結(jié)構(gòu)域?qū)δ憠A或一些膽堿類似物如DEAE具有親和性。已經(jīng)利用該特性開發(fā)用于表達融合蛋白的大腸桿菌C-LytA表達質(zhì)粒。已經(jīng)描述了純化在其氨基末端包含C-LytA片段的雜種蛋白{Biotechnology10，(1992)第795-798頁}?？衫么嬖谟贚ytA分子C末端的起始于殘基178的重復(fù)部分，例如殘基188-305。
            
本發(fā)明還包括上面提到的多肽的變異體，即通過保守氨基酸取代與參比物不同的多肽，其中一個殘基由另一個具有相似特性的殘基取代。通常這樣的取代發(fā)生在Ala、Val、Leu和Ile之間；Ser和Thr之間；酸性殘基Asp和Glu之間；Asn和Gln之間；堿性殘基Lys和Arg之間；或芳香族殘基Phe和Tyr之間。
            
可以以任何合適的方法制備本發(fā)明多肽。這樣的多肽包括分離的天然多肽、重組產(chǎn)生的多肽、合成產(chǎn)生的多肽或通過這些方法的組合產(chǎn)生的多肽。用于制備這樣的多肽的方法是本領(lǐng)域眾所周知的。
            
最優(yōu)選本發(fā)明的多肽從腦膜炎奈瑟氏球菌獲得，然而，最好從同一分類屬的其它物種獲得。本發(fā)明的多肽也可以獲自例如同一分類科或分類目的生物。多核苷酸本發(fā)明目的之一是提供編碼BASB047多肽的多核苷酸，尤其是編碼本文中命名為BASB047的多肽的多核苷酸。
            
在一個本發(fā)明尤其優(yōu)選的實施方案中，所述多核苷酸包含一個編碼BASB047多肽的區(qū)段或其變異體，該區(qū)段包含包括一個完整基因的SEQ ID NO1所示的序列。
            
SEQ ID NO1提供的BASB047多核苷酸是腦膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC13090的BASB047多核苷酸。
            
本發(fā)明的再一方面提供編碼和/或表達BASB047多肽和多核苷酸、尤其是腦膜炎奈瑟氏球菌的BASB047多肽和多核苷酸的分離核酸分子，所述分離的核酸分子包括例如未加工的RNA、核酶RNA、mRNA、cDNA、基因組DNA、B-DNA和Z-DNA。本發(fā)明的其它實施方案包括在生物學(xué)上、診斷上、預(yù)防上、臨床上或治療上有用的多核苷酸和多肽，和它們的變異體，以及包含上述多核苷酸、多肽及其變異體的組合物。
            
本發(fā)明的另一方面涉及編碼具有SEQ ID NO2的推導(dǎo)氨基酸序列的BASB047多肽的分離多核苷酸以及與其密切相關(guān)的多核苷酸及其變異體，所述分離的多核苷酸包括至少一個全長基因。
            
在另一個本發(fā)明尤其優(yōu)選的實施方案中為包含SEQ ID NO2的氨基酸序列或由SEQ ID NO2的氨基酸序列組成的腦膜炎奈瑟氏球菌的BASB047多肽或其變異體。
            
使用本文提供的信息，例如SEQ ID NO1所示的多核苷酸序列，可以使用標(biāo)準(zhǔn)克隆和篩選方法獲得本發(fā)明的編碼BASB047多肽的多核苷酸，所述克隆和篩選方法例如以下這樣的方法使用腦膜炎奈瑟氏球菌細胞作為起始材料，從細菌中克隆和測序染色體DNA片段，然后獲得全長的克隆。例如，為獲得本發(fā)明的多核苷酸序列，如SEQID NO1所示的多核苷酸序列，通常用得自某一部分序列的最好17單體或更長的放射性標(biāo)記寡核苷酸，探測在大腸桿菌或一些其它合適宿主中的腦膜炎奈瑟氏球菌的染色體DNA克隆文庫。然后使用嚴(yán)格雜交條件鑒別帶有與所述探針相同DNA的克隆。使用根據(jù)原始多肽序列或多核苷酸序列設(shè)計的測序引物進行雜交而鑒定各個克隆，對克隆進行測序，因此有可能在兩個方向延伸所述多核苷酸序列以確定全長的基因序列。例如，比較方便的是使用由質(zhì)?？寺≈苽涞淖冃噪p鏈DNA進行這樣的測序。合適的方法描述于Maniatis，T.，F(xiàn)ritsch，E.F.和Sambrook等人，MOLECULAR CLONINGALABORATORY MANUAL，第二版；Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring harbor，New York(1989)。(特別參閱雜交篩選1.90和測序變性的雙鏈DNA模板13.70)。也可進行直接基因組DNA測序以獲得全長的基因序列。作為本發(fā)明的實例，在從腦膜炎奈瑟氏球菌獲得的DNA文庫中發(fā)現(xiàn)了SEQ ID NO1所示的各多核苷酸。
            
此外，SEQ ID NO1所示DNA序列包含一個可讀框，該可讀框編碼具有SEQ ID NO2所示氨基酸殘基大致數(shù)目的蛋白質(zhì)，該蛋白質(zhì)的推導(dǎo)分子量可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的氨基酸殘基分子量值計算。
            
在核苷酸1的起始密碼子和起始于SEQ ID NO1的核苷酸1201的終止密碼子之間的SEQ ID NO1多核苷酸編碼SEQ ID NO2的多肽。
            
另一方面，本發(fā)明提供分離的多核苷酸，所述多核苷酸包括以下多核苷酸或由以下多核苷酸組成(a)一種在SEQ ID NO1的全長上與SEQ ID NO1有至少85％同一性、更優(yōu)選至少90％同一性、更優(yōu)選至少95％同一性、甚至更優(yōu)選至少97-99％同一性或完全相同的多核苷酸序列；或(b)編碼一種多肽的多核苷酸序列，所述多肽在SEQ ID NO2的全長上與SEQ ID NO2的氨基酸序列有至少85％同一性、更優(yōu)選至少90％同一性、更優(yōu)選至少95％同一性、甚至更優(yōu)選至少97-99％同一性或100％相同。
            
編碼本發(fā)明的多肽的多核苷酸，包括腦膜炎奈瑟氏球菌以外物種的同系物和直向同源物(ortholog)，可以通過包括以下步驟的方法獲得在嚴(yán)格雜交條件下(例如，使用45-65℃范圍溫度和0.1-1％SDS濃度)，使用包含或由SEQ ID NO1的序列或其片段組成的標(biāo)記探針或可檢測探針篩選合適文庫；然后分離包含所述多核苷酸序列的全長基因和/或基因組克隆。
            
本發(fā)明提供在其全長上與SEQ ID NO1中的編碼序列(可讀框)相同的多核苷酸序列。本發(fā)明還提供編碼成熟多肽或其片段的編碼序列本身以及在可讀框中還有另一編碼序列的編碼成熟多肽或片段的編碼區(qū)，所述另一編碼序列如編碼分泌序列或前導(dǎo)序列、前蛋白(pre-protein)序列、原蛋白(pro-protein)序列或前原蛋白(prepro-protein)序列的序列。本發(fā)明的多核苷酸還可以包含至少一個非編碼序列，包括例如但不限于至少一個非編碼5’序列和3’序列，如轉(zhuǎn)錄但不翻譯的序列、終止信號(例如依賴于rho的終止信號和不依賴于rho的終止信號)、核糖體結(jié)合位點、Kozak序列、穩(wěn)定mRNA的序列、內(nèi)含子和聚腺苷酸化信號。所述多核苷酸序列也可以包括編碼額外氨基酸的額外編碼序列。例如，可以編碼有助于純化融合多肽的標(biāo)記序列。在本發(fā)明的某些實施方案中，所述標(biāo)記序列為pQE載體(Qiagen，Inc.)提供并在Gentz等人，Proc.Natl.Acad. Sci.USA 86821-824(1989)中描述的六組氨酸肽，或者HA肽標(biāo)記(Wilson等人，Cell 37767(1984))，這兩種標(biāo)記可以用于純化與其融合的多肽序列。本發(fā)明的多核苷酸還包括但不限于包含結(jié)構(gòu)基因和控制基因表達的與其天然結(jié)合的序列的多核苷酸。
            
編碼SEQ ID NO2的BASB047多肽的核苷酸序列可以與SEQID NO1的核苷酸1到1200包含的多肽編碼序列相同?；蛘咚梢允怯捎谶z傳密碼的豐余性(簡并性)也編碼SEQ ID NO2的多肽的序列。本文所用的術(shù)語“編碼多肽的多核苷酸”包括包含編碼本發(fā)明的多肽的序列的多核苷酸，所述多肽優(yōu)選為細菌多肽，更優(yōu)選具有SEQ ID NO2所示氨基酸序列的腦膜炎奈瑟氏球菌BASB047多肽。該術(shù)語也包括這樣的多核苷酸所述多核苷酸包含編碼所述多肽的單個連續(xù)區(qū)或多個不連續(xù)區(qū)(例如，整合噬菌體、整合插入序列、整合載體序列、整合轉(zhuǎn)座子序列或由于RNA編輯或基因組DNA重建而間斷的多核苷酸)以及額外的區(qū)段，所述額外的區(qū)段也可包含編碼序列和/或非編碼序列。
            
本發(fā)明還涉及本文描述的多核苷酸的變異體，所述變異體編碼具有SEQ ID NO2的推導(dǎo)氨基酸序列的多肽的變異體。本發(fā)明的多核苷酸的片段可以用于例如合成本發(fā)明的全長多核苷酸。
            
其它特別優(yōu)選的實施方案為編碼BASB047變異體的多核苷酸，所述BASB047變異體具有SEQ ID NO2的BASB047多肽的氨基酸序列，其中若干個、幾個、5到10個、1到5個、1到3個、2個、1個或沒有氨基酸殘基以任何組合發(fā)生取代、修飾、缺失和/或添加。其中特別優(yōu)選不改變BASB047多肽的特性和活性的沉默取代、添加和缺失。
            
本發(fā)明其它優(yōu)選的實施方案為在它們的全長上與編碼具有SEQID NO2所示氨基酸序列的BASB047多肽的多核苷酸至少85％相同的多核苷酸，以及與這樣的多核苷酸互補的多核苷酸。在該方面，在它們的全長上與上面所述多核苷酸至少90％相同的多核苷酸是特別優(yōu)選的，在這些特別優(yōu)選的多核苷酸中，至少95％相同的多核苷酸是尤其優(yōu)選的。此外，在至少95％相同的多核苷酸中，至少97％相同的多核苷酸是高度優(yōu)選的，其中至少98％和至少99％相同的多核苷酸是尤其高度優(yōu)選的，而至少99％相同的多核苷酸是更優(yōu)選的。
            
優(yōu)選的實施方案為編碼基本保留與SEQ ID NO1的DNA編碼的成熟多肽同樣的生物功能或活性的多肽的多核苷酸。
            
依照本發(fā)明某些優(yōu)選實施方案，提供與BASB047多核苷酸序列雜交、尤其是在嚴(yán)格條件下雜交的多核苷酸，例如SEQ ID NO1的各多核苷酸。
            
本發(fā)明還涉及與本文提供的多核苷酸序列雜交的多核苷酸。在這一方面，本發(fā)明尤其涉及在嚴(yán)格條件下與本文描述的多核苷酸雜交的多核苷酸。本文所用的術(shù)語“嚴(yán)格條件”和“嚴(yán)格雜交條件”是指僅當(dāng)序列間存在至少95％同一性、最好至少97％同一性時才發(fā)生雜交。嚴(yán)格雜交條件的具體實例是在包含下列組分的溶液中于42℃溫育過夜50％甲酰胺，5xSSC(150mM NaCl，15mM檸檬酸三鈉)，50mM磷酸鈉(pH7.6)，5xDenhardt氏溶液，10％葡聚糖硫酸酯以及20微克/ml變性剪切鮭魚精子DNA；然后在約65℃下在0.1xSSC中洗滌雜交支持物。雜交和洗滌條件是眾所周知的，并在下面文獻中有范例Sambrook等人，Molecular CloningA Laboratory Manual，第二版，Cold Spring Harbor，N.Y.，(1989)，特別是其中的第11章。溶液雜交也可以用于本發(fā)明提供的多核苷酸序列。
            
本發(fā)明還提供包含或由多核苷酸序列組成的多核苷酸，所述多核苷酸序列如下獲得用具有SEQ ID NO1所示的所述多核苷酸序列或其片段的序列的探針在嚴(yán)格雜交條件下篩選包括所述完整基因的合適文庫中的SEQ ID NO1所示的多核苷酸序列；然后分離所述多核苷酸序列。用于獲得這樣的多核苷酸的片段包括例如在本文其它地方充分描述的探針和引物。
            
如本文中其它地方關(guān)于本發(fā)明的多核苷酸測定所述，例如本發(fā)明的多核苷酸可以用作分離編碼BASB047的全長cDNA和基因組克隆的針對RNA、cDNA和基因組DNA的雜交探針，或者可以用作分離與BASB047基因具有高度同一性、特別高的序列同一性的其它基因的cDNA和基因組克隆的針對RNA、cDNA和基因組DNA的雜交探針。這樣的探針一般具有至少15個核苷酸殘基或堿基對。優(yōu)選這樣的探針具有至少30個核苷酸殘基或堿基對，并可以具有至少50個核苷酸殘基或堿基對。尤其優(yōu)選的探針具有至少20個核苷酸殘基或堿基對而且少于30個核苷酸殘基或堿基對。
            
使用SEQ ID NO1提供的DNA序列進行篩選可以分離BASB047基因的編碼區(qū)，以合成寡核苷酸探針。然后使用具有與本發(fā)明的基因的序列互補的序列的標(biāo)記寡核苷酸，篩選cDNA文庫、基因組DNA文庫或mRNA文庫，以確定所述探針結(jié)合所述文庫中的哪些成員。
            
本發(fā)明目的之一是提供編碼BASB054多肽的多核苷酸，尤其是編碼本文中命名為BASB054的多肽的多核苷酸。
            
在一個本發(fā)明尤其優(yōu)選的實施方案中，所述多核苷酸包含一個編碼BASB054多肽的區(qū)段或其變異體，該區(qū)段包含包括一個完整的基因的SEQ ID NO3所示序列。
            
SEQ ID NO3提供的BASB054多核苷酸是腦膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC13090的BASB054多核苷酸。
            
本發(fā)明的再一方面提供編碼和/或表達BASB054多肽和多核苷酸、尤其是腦膜炎奈瑟氏球菌BASB054多肽和多核苷酸的分離的核酸分子，所述分離的核酸分子包括例如未加工的RNA、核酶RNA、mRNA、cDNA、基因組DNA、B-DNA和Z-DNA。本發(fā)明的其它實施方案包括在生物學(xué)上、診斷上、預(yù)防上、臨床上或治療上有用的多核苷酸和多肽和它們的變異體，以及包含上述多核苷酸、多肽及其變異體的組合物。
            
本發(fā)明的再一方面涉及編碼具有SEQ ID NO4的推導(dǎo)氨基酸序列的BASB054多肽的分離多核苷酸和與之密切相關(guān)的多核苷酸以及它們的變異體，所述分離的多核苷酸包括至少一個全長基因。
            
本發(fā)明另一個尤其優(yōu)選的實施方案為包含或由SEQ ID NO4的氨基酸序列組成的腦膜炎奈瑟氏球菌的BASB054多肽或其變異體。
            
使用本文提供的信息，例如SEQ ID NO3所示的多核苷酸序列，可以使用標(biāo)準(zhǔn)克隆和篩選方法獲得本發(fā)明的編碼BASB054多肽的多核苷酸，所述克隆和篩選方法例如以下這樣的方法使用腦膜炎奈瑟氏球菌細胞作為起始材料，從細菌中克隆和測序染色體DNA片段，然后獲得全長的克隆。例如，為了獲得本發(fā)明的多核苷酸序列，如SEQID NO3所示的多核苷酸序列，通常用得自某一部分序列的最好17單體或更長的放射性標(biāo)記寡核苷酸，探測在大腸桿菌或一些其它合適宿主中的腦膜炎奈瑟氏球菌的染色體DNA克隆文庫。然后使用嚴(yán)格雜交條件鑒別帶有與所述探針相同DNA的克隆。使用根據(jù)原始多肽序列或多核苷酸序列設(shè)計的測序引物進行雜交而鑒定各個克隆，對克隆進行測序，因此有可能在兩個方向延伸所述多核苷酸序列以確定全長基因序列。例如，比較方便的是使用由質(zhì)?？寺≈苽涞淖冃噪p鏈DNA進行這樣的測序。合適的方法描述于Maniatis，T.，F(xiàn)ritsch，E.F.和Sambrook等人，MOLECULAR CLONINGA LABORATORYMANUAL，第二版；Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Springharbor，New York(1989)。(特別參閱雜交篩選1.90和測序變性的雙鏈DNA模板13.70)。也可進行直接基因組DNA測序以獲得全長的基因序列。作為本發(fā)明的實例，由腦膜炎奈瑟氏球菌獲得的DNA文庫中發(fā)現(xiàn)了SEQ ID NO3所示的各多核苷酸。
            
此外，SEQ ID NO3所示DNA序列包含一個可讀框，該可讀框編碼具有SEQ ID NO4所示的大致氨基酸殘基數(shù)目的蛋白質(zhì)，該蛋白質(zhì)的推導(dǎo)分子量可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的氨基酸殘基分子量值計算。
            
在核苷酸1的起始密碼子和起始于SEQ ID NO3的核苷酸2407的終止密碼子之間的SEQ ID NO3多核苷酸編碼SEQ ID NO4的多肽。
            
再一方面，本發(fā)明提供分離的多核苷酸，所述多核苷酸包括以下多核苷酸序列或由以下多核苷酸序列組成
            
(a)在SEQ ID NO3的全長上與SEQ ID NO3有至少85％同一性、更優(yōu)選至少90％同一性、更優(yōu)選至少95％同一性、甚至更優(yōu)選至少97-99％同一性或完全相同的多核苷酸序列；或(b)一種編碼多肽的多核苷酸序列，所述多肽在SEQ ID NO4的全長上與SEQ ID NO4的氨基酸序列有至少85％同一性、更優(yōu)選至少90％同一性、更優(yōu)選至少95％同一性、甚至更優(yōu)選至少97-99％同一性或100％相同。
            
編碼本發(fā)明的多肽的多核苷酸，包括腦膜炎奈瑟氏球菌以外物種的同系物和直向同源物，可以通過包括以下步驟的方法獲得在嚴(yán)格雜交條件下(例如，使用45-65℃范圍溫度和0.1-1％SDS濃度)，使用包含或由SEQ ID NO3的序列或其片段組成的標(biāo)記探針或可檢測探針篩選合適文庫；然后分離包含所述多核苷酸序列的全長基因和/或基因組克隆。
            
本發(fā)明提供在其全長上與SEQ ID NO3中的編碼序列(可讀框)相同的多核苷酸序列。本發(fā)明還提供編碼成熟多肽或其片段的編碼序列本身以及在可讀框中還有另一編碼序列的編碼成熟多肽或片段的編碼序列，所述另一編碼序列例如編碼分泌序列或前導(dǎo)序列、前蛋白(pre-protein)序列、原蛋白(pro-protein)序列或前原蛋白(prepro-protein)序列的序列。本發(fā)明的多核苷酸還可以包含至少一個非編碼序列，包括例如但不限于至少一個非編碼5’序列和3’序列，如轉(zhuǎn)錄但不翻譯的序列、終止信號(例如依賴于rho的終止信號和不依賴于rho的終止信號)、核糖體結(jié)合位點、Kozak序列、穩(wěn)定mRNA的序列、內(nèi)含子和聚腺苷酸化信號。所述多核苷酸序列也可以包括編碼額外氨基酸的額外編碼序列。例如，可以編碼有助于純化融合多肽的標(biāo)記序列。在本發(fā)明的某些實施方案中，所述標(biāo)記序列為pQE載體(Qiagen，Inc.)提供并在Gentz等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86821-824(1989)中描述的六組氨酸肽，或者HA肽標(biāo)記(Wilson等人，Cell 37767(1984))，這兩種標(biāo)記可以用于純化與其融合的多肽序列。本發(fā)明的多核苷酸還包括但不限于包含結(jié)構(gòu)基因和控制基因表達的與其天然結(jié)合的序列的多核苷酸。
            
編碼SEQ ID NO4的BASB054多肽的核苷酸序列可以與SEQID NO3的核苷酸1到2406包含的多肽編碼序列相同?；蛘咚梢允怯捎谶z傳密碼的豐余性(簡并性)也編碼SEQ ID NO4的多肽的序列。本文所用的術(shù)語“編碼多肽的多核苷酸”包括包含編碼本發(fā)明的多肽的序列的多核苷酸，所述多肽優(yōu)選為細菌多肽，更優(yōu)選具有SEQ ID NO4所示氨基酸序列的腦膜炎奈瑟氏球菌BASB054多肽。該術(shù)語也包括這樣的多核苷酸所述多核苷酸包含編碼所述多肽的單個連續(xù)區(qū)或多個不連續(xù)區(qū)(例如被整合噬菌體、整合插入序列、整合載體序列、整合轉(zhuǎn)座子序列或由于RNA編輯或基因組DNA重組而間斷的多核苷酸)以及額外的區(qū)段，所述額外的區(qū)段也可包含編碼序列和/或非編碼序列。
            
本發(fā)明還涉及本文描述的多核苷酸的變異體，所述變異體編碼具有SEQ ID NO4的推導(dǎo)氨基酸序列的多肽的變異體。本發(fā)明的多核苷酸的片段可以用于例如合成本發(fā)明的全長多核苷酸。
            
其它特別優(yōu)選的實施方案為編碼BASB054變異體的多核苷酸，所述BASB054變異體具有SEQ ID NO4的BASB054多肽的氨基酸序列，其中若干個、幾個、5到10個、1到5個、1到3個、2個、1個或沒有氨基酸殘基以任何組合發(fā)生取代、修飾、缺失和/或添加。其中特別優(yōu)選不改變BASB054多肽的特性和活性的沉默取代、添加和缺失。
            
本發(fā)明其它優(yōu)選的實施方案為在它們的全長上與編碼具有SEQID NO4所示氨基酸序列的BASB054多肽的多核苷酸至少85％相同的多核苷酸，以及與這樣的多核苷酸互補的多核苷酸。在這一方面，在它們的全長上與上面所述多核苷酸至少90％相同的多核苷酸是特別優(yōu)選的，在這些特別優(yōu)選的多核苷酸中，至少95％相同的多核苷酸是尤其優(yōu)選的。此外，在至少95％相同的多核苷酸中，至少97％相同的多核苷酸是高度優(yōu)選的，其中至少98％和至少99％相同的多核苷酸是尤其高度優(yōu)選的，而至少99％相同的多核苷酸是更優(yōu)選的。
            
優(yōu)選的實施方案為編碼基本保留與SEQ ID NO3的DNA編碼的成熟多肽同樣的生物功能或活性的多肽的多核苷酸。
            
依照本發(fā)明某些優(yōu)選實施方案，提供與BASB054多核苷酸序列雜交、尤其是在嚴(yán)格條件下雜交的多核苷酸，例如SEQ ID NO3的各多核苷酸。
            
本發(fā)明還涉及與本文提供的多核苷酸序列雜交的多核苷酸。在這一方面，本發(fā)明尤其涉及在嚴(yán)格條件下與本文描述的多核苷酸雜交的多核苷酸。本文所用的術(shù)語“嚴(yán)格條件”和“嚴(yán)格雜交條件”是指僅當(dāng)序列間存在至少95％同一性、最好至少97％同一性時才發(fā)生雜交。嚴(yán)格雜交條件的具體實例是在包含下列組分的溶液中于42℃溫育過夜50％甲酰胺，5×SSC(150mM NaCl，15mM檸檬酸三鈉)，50mM磷酸鈉(pH7.6)，5×Denhardt氏溶液，10％葡聚糖硫酸酯以及20微克/ml變性剪切鮭魚精子DNA；然后在約65℃下在0.1×SSC中洗滌雜交支持物。雜交和洗滌條件是眾所周知的，并在下面文獻中有范例Sambrook等人，Molecular CloningA Laboratory Manual，第二版，Cold Spring Harbor，N.Y.，(1989)，特別是其中的第11章。溶液雜交也可用于本發(fā)明提供的多核苷酸序列。
            
本發(fā)明還提供包含或由多核苷酸序列組成的多核苷酸，所述多核苷酸序列如下獲得用具有SEQ ID NO3所示的所述多核苷酸序列或其片段的序列的探針在嚴(yán)格雜交條件下篩選包括SEQ ID NO3所示多核苷酸序列的完整基因的合適文庫；然后分離所述多核苷酸序列。用于獲得這樣的多核苷酸的片段包括例如在本文其它地方充分描述的探針和引物。
            
如本文中其它地方關(guān)于本發(fā)明的多核苷酸測定所述，例如本發(fā)明的多核苷酸可以用作針對RNA、cDNA和基因組DNA的雜交探針，以分離編碼BASB054的全長cDNA和基因組克隆的或者分離與BASB054基因具有高度同一性、特別高度序列同一性的其它基因的cDNA和基因組克隆。這樣的探針一般具有至少15個核苷酸殘基或堿基對。優(yōu)選這樣的探針具有至少30個核苷酸殘基或堿基對，并可以具有至少50個核苷酸殘基或堿基對。尤其優(yōu)選的探針具有至少20個核苷酸殘基或堿基對而且少于30個核苷酸殘基或堿基對。
            
使用SEQ ID NO3提供的DNA序列進行篩選可以分離BASB047基因的編碼區(qū)，以合成寡核苷酸探針。然后使用具有與本發(fā)明的基因的序列互補的序列的標(biāo)記寡核苷酸，篩選cDNA文庫、基因組DNA文庫或mRNA文庫，以確定所述探針結(jié)合所述文庫中的哪些成員。
            
本發(fā)明目的之一是提供編碼BASB068多肽的多核苷酸，尤其是編碼本文中命名為BASB068的多肽的多核苷酸。
            
在一個本發(fā)明尤其優(yōu)選的實施方案中，所述多核苷酸包含一個編碼BASB068多肽的區(qū)段或其變異體，該區(qū)段包含包括一個完整的基因的SEQ ID NO5所示序列。
            
SEQ ID NO5提供的BASB068多核苷酸是腦膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC13090的BASB068多核苷酸。
            
本發(fā)明的再一方面提供編碼和/或表達BASB068多肽和多核苷酸、尤其是腦膜炎奈瑟氏球菌BASB068多肽和多核苷酸的分離的核酸分子，所述分離的核酸分子包括例如未加工的RNA、核酶RNA、mRNA、cDNA、基因組DNA、B-DNA和Z-DNA。本發(fā)明的其它實施方案包括在生物學(xué)上、診斷上、預(yù)防上、臨床上或治療上有用的多核苷酸和多肽和它們的變異體，以及包含上述多核苷酸、多肽及其變異體的組合物。
            
本發(fā)明的再一方面涉及編碼具有SEQ ID NO6的推導(dǎo)氨基酸序列的BASB068多肽的分離多核苷酸和與之密切相關(guān)的多核苷酸以及它們的變異體，所述分離的多核苷酸包括至少一個全長基因。
            
本發(fā)明另一個尤其優(yōu)選的實施方案為包含或由SEQ ID NO6的氨基酸序列組成的腦膜炎奈瑟氏球菌的BASB068多肽或其變異體。
            
使用本文提供的信息，例如SEQ ID NO5所示的多核苷酸序列，可以使用標(biāo)準(zhǔn)克隆和篩選方法獲得本發(fā)明的編碼BASB068多肽的多核苷酸，所述克隆和篩選方法例如以下這樣的方法使用腦膜炎奈瑟氏球菌細胞作為起始材料，從細菌中克隆和測序染色體DNA片段，然后獲得全長的克隆。例如，為了獲得本發(fā)明的多核苷酸序列，如SEQID NO5給出的多核苷酸序列，通常用得自某一部分序列的最好17單體或更長的放射性標(biāo)記寡核苷酸，探測在大腸桿菌或一些其它合適宿主中的腦膜炎奈瑟氏球菌的染色體DNA克隆文庫。然后使用嚴(yán)格雜交條件鑒別帶有與所述探針相同DNA的克隆。使用根據(jù)原始多肽序列或多核苷酸序列設(shè)計的測序引物進行雜交而鑒定各個克隆，對克隆進行測序，因此有可能在兩個方向延伸所述多核苷酸序列以確定全長基因序列。例如，比較方便的是使用由質(zhì)粒克隆制備的變性雙鏈DNA進行這樣的測序。合適的方法描述于Maniatis，T.，F(xiàn)ritsch，E.F.和Sambrook等人，MOLECULAR CLONINGA LABORATORYMANUAL，第二版；Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Springharbor，New York(1989)。(特別參閱雜交篩選1.90和測序變性的雙鏈DNA模板13.70)。也可進行直接基因組DNA測序以獲得全長的基因序列。作為本發(fā)明的實例，由腦膜炎奈瑟氏球菌獲得的DNA文庫中發(fā)現(xiàn)了SEQ ID NO5所示的各多核苷酸。
            
此外，SEQ ID NO5所示DNA序列包含一個可讀框，該可讀框編碼具有SEQ ID NO6所示大致氨基酸殘基數(shù)目的蛋白質(zhì)，該蛋白質(zhì)的推導(dǎo)分子量可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的氨基酸殘基分子量值計算。
            
在核苷酸1的起始密碼子和起始于SEQ ID NO5的核苷酸2014的終止密碼子之間的SEQ ID NO5多核苷酸編碼SEQ ID NO6的多肽。
            
再一方面，本發(fā)明提供分離的多核苷酸，所述多核苷酸包括以下多核苷酸序列或由以下多核苷酸序列組成
            
(a)在SEQ ID NO5的全長上與SEQ ID NO5有至少85％同一性、更優(yōu)選至少90％同一性、更優(yōu)選至少95％同一性、甚至更優(yōu)選至少97-99％同一性或完全相同的多核苷酸序列；或(b)一種編碼多肽的多核苷酸序列，所述多肽在SEQ ID NO6的全長上與SEQ ID NO6的氨基酸序列有至少85％同一性、更優(yōu)選至少90％同一性、更優(yōu)選至少95％同一性、甚至更優(yōu)選至少97-99％同一性或100％相同。
            
編碼本發(fā)明的多肽的多核苷酸，包括腦膜炎奈瑟氏球菌以外物種的同系物和直向同源物，可以通過包括以下步驟的方法獲得在嚴(yán)格雜交條件下(例如，使用45-65℃范圍溫度和0.1-1％SDS濃度)，使用包含或由SEQ ID NO5的序列或其片段組成的標(biāo)記探針或可檢測探針篩選合適文庫；然后分離包含所述多核苷酸序列的全長基因和/或基因組克隆。
            
本發(fā)明提供在其全長上與SEQ ID NO5中的編碼序列(可讀框)相同的多核苷酸序列。本發(fā)明還提供編碼成熟多肽或其片段的編碼序列本身以及在可讀框中還有另一編碼序列的編碼成熟多肽或片段的編碼序列，所述另一編碼序列例如編碼分泌序列或前導(dǎo)序列、前蛋白(pre-protein)序列、原蛋白(pro-protein)序列或前原蛋白(prepro-protein)序列的序列。本發(fā)明的多核苷酸還可以包含至少一個非編碼序列，包括例如但不限于至少一個非編碼5’序列和3’序列，如轉(zhuǎn)錄但不翻譯的序列、終止信號(例如依賴于rho的終止信號和不依賴于rho的終止信號)、核糖體結(jié)合位點、Kozak序列、穩(wěn)定mRNA的序列、內(nèi)含子和聚腺苷酸化信號。所述多核苷酸序列也可以包括編碼額外氨基酸的額外編碼序列。例如，可以編碼有助于純化融合多肽的標(biāo)記序列。在本發(fā)明的某些實施方案中，所述標(biāo)記序列為pQE載體(Qiagen，Inc.)提供并在Gentz等人，Proc.Natl.Acad. Sci.USA 86821-824(1989)中描述的六組氨酸肽，或者HA肽標(biāo)記(Wilson等人，Cell 37767(1984))，這兩種標(biāo)記可以用于純化與其融合的多肽序列。本發(fā)明的多核苷酸還包括但不限于包含結(jié)構(gòu)基因和控制基因表達的與其天然結(jié)合的序列的多核苷酸。
            
編碼SEQ ID NO6的BASB068多肽的核苷酸序列可以與SEQID NO5的核苷酸1到2013包含的多肽編碼序列相同。或者它可以是由于遺傳密碼的豐余性(簡并性)也編碼SEQ ID NO6的多肽的序列。本文所用的術(shù)語“編碼多肽的多核苷酸”包括包含編碼本發(fā)明的多肽的序列的多核苷酸，所述多肽優(yōu)選為細菌多肽，更優(yōu)選具有SEQ ID NO6所示氨基酸序列的腦膜炎奈瑟氏球菌BASB068多肽。該術(shù)語也包括這樣的多核苷酸所述多核苷酸包含編碼所述多肽的單個連續(xù)區(qū)或多個不連續(xù)區(qū)(例如被整合噬菌體、整合插入序列、整合載體序列、整合轉(zhuǎn)座子序列或由于RNA編輯或基因組DNA重組而間斷的多核苷酸)以及額外的區(qū)段，所述額外的區(qū)段也可包含編碼序列和/或非編碼序列。
            
本發(fā)明還涉及本文描述的多核苷酸的變異體，所述變異體編碼具有SEQ ID NO6的推導(dǎo)氨基酸序列的多肽的變異體。本發(fā)明的多核苷酸的片段可以用于例如合成本發(fā)明的全長多核苷酸。
            
其它特別優(yōu)選的實施方案為編碼BASB068變異體的多核苷酸，所述BASB068變異體具有SEQ ID NO6的BASB068多肽的氨基酸序列，其中若干個、幾個、5到10個、1到5個、1到3個、2個、1個或沒有氨基酸殘基以任何組合發(fā)生取代、修飾、缺失和/或添加。其中特別優(yōu)選不改變BASB068多肽的特性和活性的沉默取代、添加和缺失。
            
本發(fā)明其它優(yōu)選的實施方案為在它們的全長上與編碼具有SEQID NO6所示氨基酸序列的BASB068多肽的多核苷酸至少85％相同的多核苷酸，以及與這樣的多核苷酸互補的多核苷酸。在這一方面，在它們的全長上與上面所述多核苷酸至少90％相同的多核苷酸是特別優(yōu)選的，在這些特別優(yōu)選的多核苷酸中，至少95％相同的多核苷酸是尤其優(yōu)選的。此外，在至少95％相同的多核苷酸中，至少97％相同的多核苷酸是高度優(yōu)選的，其中至少98％和至少99％相同的多核苷酸是尤其高度優(yōu)選的，而至少99％相同的多核苷酸是更優(yōu)選的。
            
優(yōu)選的實施方案為編碼基本保留與SEQ ID NO5的DNA編碼的成熟多肽同樣的生物功能或活性的多肽的多核苷酸。
            
依照本發(fā)明某些優(yōu)選實施方案，提供與BASB068多核苷酸序列雜交、尤其是在嚴(yán)格條件下雜交的多核苷酸，例如SEQ ID NO5的各多核苷酸。
            
本發(fā)明還涉及與本文提供的多核苷酸序列雜交的多核苷酸。在這一方面，本發(fā)明尤其涉及在嚴(yán)格條件下與本文描述的多核苷酸雜交的多核苷酸。本文所用的術(shù)語“嚴(yán)格條件”和“嚴(yán)格雜交條件”是指僅當(dāng)序列間存在至少95％同一性、最好至少97％同一性時才發(fā)生雜交。嚴(yán)格雜交條件的具體實例是在包含下列組分的溶液中于42℃溫育過夜50％甲酰胺，5xSSC(150mM NaCl，15mM檸檬酸三鈉)，50mM磷酸鈉(pH7.6)，5xDenhardt氏溶液，10％葡聚糖硫酸酯以及20微克/ml變性剪切鮭魚精子DNA；然后在約65℃下在0.1xSSC中洗滌雜交支持物。雜交和洗滌條件是眾所周知的，并在下面文獻中有范例Sambrook等人，Molecular CloningA Laboratory Manual，第二版，Cold Spring Harbor，N.Y.，(1989)，特別是其中的第11章。溶液雜交也可用于本發(fā)明提供的多核苷酸序列。
            
本發(fā)明還提供包含或由多核苷酸序列組成的多核苷酸，所述多核苷酸序列如下獲得用具有SEQ ID NO5所示的所述多核苷酸序列或其片段的序列的探針在嚴(yán)格雜交條件下篩選包括SEQ ID NO5所示多核苷酸序列的完整基因的合適文庫；然后分離所述多核苷酸序列。用于獲得這樣的多核苷酸的片段包括例如在本文其它地方充分描述的探針和引物。
            
如本文中其它地方關(guān)于本發(fā)明的多核苷酸測定所述，例如本發(fā)明的多核苷酸可以用作針對RNA、cDNA和基因組DNA的雜交探針，以分離編碼BASB068的全長cDNA和基因組克隆的或者分離與BASB068基因具有高度同一性、特別高度序列同一性的其它基因的cDNA和基因組克隆。這樣的探針一般具有至少15個核苷酸殘基或堿基對。優(yōu)選這樣的探針具有至少30個核苷酸殘基或堿基對，并可以具有至少50個核苷酸殘基或堿基對。尤其優(yōu)選的探針具有至少20個核苷酸殘基或堿基對而且少于30個核苷酸殘基或堿基對。
            
使用SEQ ID NO5提供的DNA序列進行篩選可以分離BASB068基因的編碼區(qū)，以合成寡核苷酸探針。然后使用具有與本發(fā)明的基因的序列互補的序列的標(biāo)記寡核苷酸，篩選cDNA文庫、基因組DNA文庫或mRNA文庫，以確定所述探針結(jié)合所述文庫中的哪些成員。
            
本發(fā)明目的之一是提供編碼BASB069多肽的多核苷酸，尤其是編碼本文中命名為BASB069的多肽的多核苷酸。
            
在一個尤其優(yōu)選的本發(fā)明實施方案中，所述多核苷酸包含一個編碼BASB069多肽的區(qū)段或其變異體，該區(qū)段包含包括一個完整的基因的SEQ ID NO7所示序列。
            
SEQ ID NO7提供的BASB069多核苷酸是腦膜炎奈瑟氏球菌菌株ATCC13090的BASB069多核苷酸。
            
本發(fā)明的再一方面提供編碼和/或表達BASB069多肽和多核苷酸、尤其是腦膜炎奈瑟氏球菌BASB069多肽和多核苷酸的分離的核酸分子，所述分離的核酸分子包括例如未加工的RNA、核酶RNA、mRNA、cDNA、基因組DNA、B-DNA和Z-DNA。本發(fā)明的其它實施方案包括在生物學(xué)上、診斷上、預(yù)防上、臨床上或治療上有用的多核苷酸和多肽和它們的變異體，以及包含上述多核苷酸、多肽及其變異體的組合物。
            
本發(fā)明的再一方面涉及編碼具有SEQ ID NO8的推導(dǎo)氨基酸序列的BASB069多肽的分離多核苷酸和與之密切相關(guān)的多核苷酸以及它們的變異體，所述分離的多核苷酸包括至少一個全長基因。
            
本發(fā)明另一個尤其優(yōu)選的實施方案為包含或由SEQ ID NO8的氨基酸序列組成的腦膜炎奈瑟氏球菌的BASB069多肽或其變異體。
            
使用本文提供的信息，例如SEQ ID NO7所示的多核苷酸序列，可以使用標(biāo)準(zhǔn)克隆和篩選方法獲得本發(fā)明的編碼BASB069多肽的多核苷酸，所述克隆和篩選方法例如以下這樣的方法使用腦膜炎奈瑟氏球菌細胞作為起始材料，從細菌中克隆和測序染色體DNA片段，然后獲得全長的克隆。例如，為了獲得本發(fā)明的多核苷酸序列，如SEQID NO7給出的多核苷酸序列，通常用得自某一部分序列的最好17單體或更長的放射性標(biāo)記寡核苷酸，探測在大腸桿菌或一些其它合適宿主中的腦膜炎奈瑟氏球菌的染色體DNA克隆文庫。然后使用嚴(yán)格雜交條件鑒別帶有與所述探針相同DNA的克隆。使用根據(jù)原始多肽序列或多核苷酸序列設(shè)計的測序引物進行雜交而鑒定各個克隆，對克隆進行測序，因此有可能在兩個方向延伸所述多核苷酸序列以確定全長基因序列。例如，比較方便的是使用由質(zhì)?？寺≈苽涞淖冃噪p鏈DNA進行這樣的測序。合適的方法描述于Maniatis，T.，F(xiàn)ritsch，E.F.和Sambrook等人，MOLECULAR CLONINGA LABORATORYMANUAL，第二版；Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Springharbor，New York(1989)。(特別參閱雜交篩選1.90和測序變性的雙鏈DNA模板13.70)。也可進行直接基因組DNA測序以獲得全長的基因序列。作為本發(fā)明的實例，由腦膜炎奈瑟氏球菌獲得的DNA文庫中發(fā)現(xiàn)了SEQ ID NO7所示的各多核苷酸。
            
此外，SEQ ID NO7所示DNA序列包含一個可讀框，該可讀框編碼具有SEQ ID NO8所示大致氨基酸殘基數(shù)目的蛋白質(zhì)，該蛋白質(zhì)的推導(dǎo)分子量可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的氨基酸殘基分子量值計算。
            
在核苷酸1的起始密碼子和起始于SEQ ID NO7的核苷酸2014的終止密碼子之間的SEQ ID NO7多核苷酸編碼SEQ ID NO8的多肽。
            
再一方面，本發(fā)明提供分離的多核苷酸，所述多核苷酸包括以下多核苷酸序列或由以下多核苷酸序列組成
            
(a)在SEQ ID NO7的全長上與SEQ ID NO7有至少85％同一性、更優(yōu)選至少90％同一性、更優(yōu)選至少95％同一性、甚至更優(yōu)選至少97-99％同一性或完全相同的多核苷酸序列；或(b)一種編碼多肽的多核苷酸序列，所述多肽在SEQ ID NO8的全長上與SEQ ID NO8的氨基酸序列有至少85％同一性、更優(yōu)選至少90％同一性、更優(yōu)選至少95％同一性、甚至更優(yōu)選至少97-99％同一性或100％相同。
            
編碼本發(fā)明的多肽的多核苷酸，包括腦膜炎奈瑟氏球菌以外物種的同系物和直向同源物，可以通過包括以下步驟的方法獲得在嚴(yán)格雜交條件下(例如，使用45-65℃范圍溫度和0.1-1％SDS濃度)，使用包含或由SEQ ID NO7的序列或其片段組成的標(biāo)記探針或可檢測探針篩選合適文庫；然后分離包含所述多核苷酸序列的全長基因和/或基因組克隆。
            
本發(fā)明提供在其全長上與SEQ ID NO7中的編碼序列(可讀框)相同的多核苷酸序列。本發(fā)明還提供編碼成熟多肽或其片段的編碼序列本身以及在可讀框中還有另一編碼序列的編碼成熟多肽或片段的編碼序列，所述另一編碼序列例如編碼分泌序列或前導(dǎo)序列、前蛋白(pre-protein)序列、原蛋白(pro-protein)序列或前原蛋白(prepro-protein)序列的序列。本發(fā)明的多核苷酸還可以包含至少一個非編碼序列，包括例如但不限于至少一個非編碼5’序列和3’序列，如轉(zhuǎn)錄但不翻譯的序列、終止信號(例如依賴于rho的終止信號和不依賴于rho的終止信號)、核糖體結(jié)合位點、Kozak序列、穩(wěn)定mRNA的序列、內(nèi)含子和聚腺苷酸化信號。所述多核苷酸序列也可以包括編碼額外氨基酸的額外編碼序列。例如，可以編碼有助于純化融合多肽的標(biāo)記序列。在本發(fā)明的某些實施方案中，所述標(biāo)記序列為pQE載體(Qiagen，Inc.)提供并在Gentz等人，Proc.Natl.Acad. Sci.USA 86821-824(1989)中描述的六組氨酸肽，或者HA肽標(biāo)記(Wilson等人，Cell 37767(1984))，這兩種標(biāo)記可以用于純化與其融合的多肽序列。本發(fā)明的多核苷酸還包括但不限于包含結(jié)構(gòu)基因和控制基因表達的與其天然結(jié)合的序列的多核苷酸。
            
編碼SEQ ID NO8的BASB069多肽的核苷酸序列可以與SEQID NO7的核苷酸1到2073包含的多肽編碼序列相同。或者它可以是由于遺傳密碼的豐余性(簡并性)也編碼SEQ ID NO8的多肽的序列。本文所用的術(shù)語“編碼多肽的多核苷酸”包括包含編碼本發(fā)明的多肽的序列的多核苷酸，所述多肽優(yōu)選為細菌多肽，更優(yōu)選具有SEQ ID NO8所示氨基酸序列的腦膜炎奈瑟氏球菌BASB069多肽。該術(shù)語也包括這樣的多核苷酸所述多核苷酸包含編碼所述多肽的單個連續(xù)區(qū)或多個不連續(xù)區(qū)(例如被整合噬菌體、整合插入序列、整合載體序列、整合轉(zhuǎn)座子序列或由于RNA編輯或基因組DNA重組而間斷的多核苷酸)以及額外的區(qū)段，所述額外的區(qū)段也可包含編碼序列和/或非編碼序列。
            
本發(fā)明還涉及本文描述的多核苷酸的變異體，所述變異體編碼具有SEQ ID NO8的推導(dǎo)氨基酸序列的多肽的變異體。本發(fā)明的多核苷酸的片段可以用于例如合成本發(fā)明的全長多核苷酸。
            
其它特別優(yōu)選的實施方案為編碼BASB069變異體的多核苷酸，所述BASB069變異體具有SEQ ID NO8的BASB069多肽的氨基酸序列，其中若干個、幾個、5到10個、1到5個、1到3個、2個、1個或沒有氨基酸殘基以任何組合發(fā)生取代、修飾、缺失和/或添加。其中特別優(yōu)選不改變BASB069多肽的特性和活性的沉默取代、添加和缺失。
            
本發(fā)明其它優(yōu)選的實施方案為在它們的全長上與編碼具有SEQID NO8所示氨基酸序列的BASB069多肽的多核苷酸至少85％相同的多核苷酸，以及與這樣的多核苷酸互補的多核苷酸。在這一方面，在它們的全長上與上面所述多核苷酸至少90％相同的多核苷酸是特別優(yōu)選的，在這些特別優(yōu)選的多核苷酸中，至少95％相同的多核苷酸是尤其優(yōu)選的。此外，在至少95％相同的多核苷酸中，至少97％相同的多核苷酸是高度優(yōu)選的，其中至少98％和至少99％相同的多核苷酸是尤其高度優(yōu)選的，而至少99％相同的多核苷酸是更優(yōu)選的。
            
優(yōu)選的實施方案為編碼基本保留與SEQ ID NO7的DNA編碼的成熟多肽同樣的生物功能或活性的多肽的多核苷酸。
            
依照本發(fā)明某些優(yōu)選實施方案，提供與BASB069多核苷酸序列雜交、尤其是在嚴(yán)格條件下雜交的多核苷酸，例如SEQ ID NO7的各多核苷酸。
            
本發(fā)明還涉及與本文提供的多核苷酸序列雜交的多核苷酸。在這一方面，本發(fā)明尤其涉及在嚴(yán)格條件下與本文描述的多核苷酸雜交的多核苷酸。本文所用的術(shù)語“嚴(yán)格條件”和“嚴(yán)格雜交條件”是指僅當(dāng)序列間存在至少95％同一性、最好至少97％同一性時才發(fā)生雜交。嚴(yán)格雜交條件的具體實例是在包含下列組分的溶液中于42℃溫育過夜50％甲酰胺，5xSSC(150mM NaCl，15mM檸檬酸三鈉)，50mM磷酸鈉(pH7.6)，5xDenhardt氏溶液，10％葡聚糖硫酸酯以及20微克/ml變性剪切鮭魚精子DNA；然后在約65℃下在0.1xSSC中洗滌雜交支持物。雜交和洗滌條件是眾所周知的，并在下面文獻中有范例Sambrook等人，Molecular CloningA Laboratory Manual，第二版，Cold Spring Harbor，N.Y.，(1989)，特別是其中的第11章。溶液雜交也可用于本發(fā)明提供的多核苷酸序列。
            
本發(fā)明還提供包含或由多核苷酸序列組成的多核苷酸，所述多核苷酸序列如下獲得用具有SEQ ID NO7所示的所述多核苷酸序列或其片段的序列的探針在嚴(yán)格雜交條件下篩選包括SEQ ID NO7所示多核苷酸序列的完整基因的合適文庫；然后分離所述多核苷酸序列。用于獲得這樣的多核苷酸的片段包括例如在本文其它地方充分描述的探針和引物。
            
如本文中其它地方關(guān)于本發(fā)明的多核苷酸測定所述，例如本發(fā)明的多核苷酸可以用作針對RNA、cDNA和基因組DNA的雜交探針，以分離編碼BASB069的全長cDNA和基因組克隆的或者分離與BASB069基因具有高度同一性、特別高度序列同一性的其它基因的cDNA和基因組克隆。這樣的探針一般具有至少15個核苷酸殘基或堿基對。優(yōu)選這樣的探針具有至少30個核苷酸殘基或堿基對，并可以具有至少50個核苷酸殘基或堿基對。尤其優(yōu)選的探針具有至少20個核苷酸殘基或堿基對而且少于30個核苷酸殘基或堿基對。
            
使用SEQ ID NO7提供的DNA序列進行篩選可以分離BASB069基因的編碼區(qū)，以合成寡核苷酸探針。然后使用具有與本發(fā)明的基因的序列互補的序列的標(biāo)記寡核苷酸，篩選cDNA文庫、基因組DNA文庫或mRNA文庫，以確定所述探針結(jié)合所述文庫中的哪些成員。對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說，有幾種獲得全長cDNA或延伸短cDNA的方法可利用并且是眾所周知的，例如基于cDNA末端快速擴增(RACE)的方法(見例如Frohman等人，PNAS USA 85，8998-9002，1988)。最新改進的該技術(shù)例如MarathonTM技術(shù)(Clontech LaboratoryInc.)明顯簡化了對更長cDNA的搜索。在MarathonTM技術(shù)中，從由選定組織提取的mRNA制備cDNA，并將“接頭”序列連接到每個末端。然后使用混合的基因特異性寡核苷酸引物和接頭特異性寡核苷酸引物，進行核酸擴增(PCR)以擴增所述cDNA“缺失的”5’端。然后使用“嵌套”引物重復(fù)所述PCR反應(yīng)，“嵌套”引物即是設(shè)計在所擴增的產(chǎn)物內(nèi)退火的引物(通常是在所述接頭序列的遠3’端退火的接頭特異性引物和在已知基因序列的遠5’退火的基因特異性引物)。然后通過DNA測序分析該反應(yīng)的產(chǎn)物，隨后通過直接連接所述產(chǎn)物到存在的DNA產(chǎn)生完整的序列，或使用新的序列信息設(shè)計5’引物來進行另一次全長PCR，構(gòu)造全長DNA。
            
如本文關(guān)于多核苷酸測定的進一步討論，本發(fā)明的多核苷酸和多肽可以用作例如發(fā)現(xiàn)對疾病、尤其是人類疾病治療和診斷的研究試劑和材料。為得自SEQ ID NO1-8序列的寡核苷酸的本發(fā)明多核苷酸可以用于如本文所述的方法，但最好用于PCR，以確定本發(fā)明鑒定的多核苷酸是否在感染組織細菌中完整地或部分地轉(zhuǎn)錄。已知這樣的序列也可以用于診斷已經(jīng)獲得病原體的感染階段以及感染類型。
            
本發(fā)明還提供編碼多肽的多核苷酸，所述多肽是成熟蛋白+額外氨基末端氨基酸或羧基末端氨基酸，或是在所述成熟多肽內(nèi)部氨基酸(例如當(dāng)成熟形式蛋白具有一條以上多肽鏈時)。這樣的序列可能在從前體蛋白加工為成熟形式中起作用、可使得能進行蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運、可以延長或縮短蛋白的半衰期、或可有助于蛋白測定或生產(chǎn)操作。一般體內(nèi)情況細胞酶從所述成熟蛋白加工除去所述額外氨基酸。
            
對于本發(fā)明每個多核苷酸，都提供與之互補的多核苷酸。優(yōu)選這些互補多核苷酸與每一個它們與之互補的多核苷酸完全互補。
            
前體蛋白可是所述多肽的無活性形式，前體蛋白具有與一個或多個原序列(prosequence)融合的多肽的成熟形式。當(dāng)除去原序列時，這樣的無活性前體通常被激活。在激活前可以除去部分或所有的原序列。這樣的前體一般稱為原蛋白。
            
除用標(biāo)準(zhǔn)的A、G、C、T/U代表核苷酸外，還可用字母“N”描述本發(fā)明的某些多核苷酸?！癗”表示四種DNA或RNA核苷酸中的任何一種均可以存在于DNA或RNA序列中這樣的指定位置上，但優(yōu)選N不是這樣的核酸當(dāng)同時考慮相鄰核苷酸位置、以正確讀框閱讀時，具有在這樣的可讀框內(nèi)產(chǎn)生成熟前終止密碼子的作用。
            
總之，本發(fā)明的多核苷酸可以編碼成熟蛋白、成熟蛋白+前導(dǎo)序列(可以稱之為前蛋白)、編碼具有并非前蛋白的前導(dǎo)序列的一個或多個原序列的成熟蛋白的前體、或編碼前原蛋白，即具有前導(dǎo)序列和一個或多個原序列的原蛋白的前體，其中所述前導(dǎo)序列和原序列一般在產(chǎn)生所述多肽的活性成熟形式的加工步驟中除去。
            
按照本發(fā)明的一個方面，提供本發(fā)明的多核苷酸用于治療或預(yù)防目的、尤其是遺傳免疫接種的用途。
            
在遺傳免疫接種中使用本發(fā)明的多核苷酸時，最好使用合適的傳送方法，如直接肌肉注射質(zhì)粒DNA(Wolff等，Hum Mol Genet(1992)1363.Manthorpe等，Hum.Gene Ther.(1983)4419)、傳送與特異性蛋白載體復(fù)合的DNA(Wu等，J Biol Chem.(1989)26416985)、與磷酸鈣共沉淀DNA(Benvenisty和Reshef，PNAS USA，(1986)839551)、將DNA包入各種形式的脂質(zhì)體內(nèi)(Kaneda等，Science(1989)243375)、粒子轟擊(Tang等，Nature(1992)356152，Eisenbraun等，DNACell Biol(1993)12791)以及用克隆的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體進行體內(nèi)感染(Seeger等，PNAS USA(1984)815849)。載體、宿主細胞、表達系統(tǒng)本發(fā)明還涉及包含一種或多種本發(fā)明多核苷酸的載體、用本發(fā)明的載體遺傳工程存在的宿主細胞以及通過重組技術(shù)產(chǎn)生本發(fā)明的多肽。也可以使用無細胞翻譯系統(tǒng)由本發(fā)明DNA構(gòu)建物得到的RNA產(chǎn)生這樣的蛋白。
            
可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的方法，從包含表達系統(tǒng)的遺傳工程宿主細胞制備本發(fā)明的重組多肽。因此，再一方面，本發(fā)明涉及包含一種或多種本發(fā)明多核苷酸的表達系統(tǒng)、用這樣的表達系統(tǒng)遺傳工程操作的宿主細胞以及通過重組技術(shù)產(chǎn)生本發(fā)明的多肽。
            
為了重組產(chǎn)生本發(fā)明的多肽，可以遺傳工程操作宿主細胞以引入本發(fā)明的表達系統(tǒng)或其部分或多核苷酸?？梢圆捎迷S多標(biāo)準(zhǔn)實驗室手冊描述的方法將多核苷酸引入所述宿主細胞，所述實驗室手冊如Davis等，BASIC METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY，(1986)和Sambrook等，MOLECULAR CLONINGA LABORATORY MANUAL，第二版，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.(1989)，所述方法如磷酸鈣轉(zhuǎn)染、DEAE-葡聚糖介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、轉(zhuǎn)位、顯微注射、陽離子型脂質(zhì)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、電穿孔、轉(zhuǎn)導(dǎo)、scrape loading、彈道引入(ballistic introduction)及感染。
            
合適宿主的典型實例包括細菌細胞，如鏈球菌(streptococci)、葡萄球菌(staphylococci)、腸球菌(enterococci)、大腸桿菌(E.coli)、鏈霉菌屬(streptomyces)、藍細菌(cyanobacteria)、枯草桿菌(Bacillussubtilis)、粘膜炎莫拉氏菌(Moraxella catarrhalis)、流感嗜血桿菌(Haemophilus influenczae)和腦膜炎奈瑟氏球菌(Neisseria meningitidis)細胞；真菌細胞，如酵母、克魯維酵母菌屬(Kluveromyces)、酵母菌屬(Saccharomyces)、擔(dān)子菌(basidiomycete)、白假絲酵母(Candidaalbicans)和曲霉屬(Aspergillus)的細胞；昆蟲細胞，如果蠅S2(Drosophila S2)和貪夜蛾Sf9(Spodoptera)Sf9的細胞；動物細胞，如CHO、COS、HeLa、C127、3T3、BHK、293、CV-1和Bowes黑素瘤細胞；以及植物細胞，如裸子植物或被子植物的細胞。
            
可以使用各種各樣表達系統(tǒng)產(chǎn)生本發(fā)明的多肽。這樣的載體其中包括染色體衍生的載體、附加體衍生的載體和病毒衍生的載體，例如從細菌質(zhì)粒衍生的載體、從噬菌體衍生的載體、從轉(zhuǎn)座子衍生的載體、從酵母附加體衍生的載體、從插入元件衍生的載體、從酵母染色體元件衍生的載體、從病毒衍生的載體以及從它們的組合衍生的載體，如那些從質(zhì)粒和噬菌體遺傳元件衍生的載體(如粘粒和噬菌粒)，其中所述病毒如桿狀病毒、乳多空病毒(如SV40)、痘苗病毒、腺病毒、禽痘病毒、假狂犬病病毒、小核糖核酸病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒和甲病毒屬(alphavirus)。所述表達系統(tǒng)構(gòu)建物可以包含調(diào)節(jié)以及引發(fā)表達的控制區(qū)。一般來說，在這一方面，可以使用任何適于在宿主中維持、繁殖或表達多核苷酸和/或表達多肽的系統(tǒng)或載體用于表達?？梢酝ㄟ^多種眾所周知的常規(guī)技術(shù)中的任何一種將合適的DNA序列插入所述表達系統(tǒng)中，所述常規(guī)技術(shù)如Sambrook等，MOLECULARCLONING，A LABORATORY MANUAL，(見上文)所介紹的技術(shù)。
            
在真核生物重組表達系統(tǒng)中，為將翻譯后的蛋白分泌入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔、分泌入壁膜間隙或分泌入胞外環(huán)境，可以將合適的分泌信號引入所表達的多肽。這些信號對于所述多肽可以是內(nèi)源的，或者它們可以是異源信號。
            
可以用眾所周知的方法由重組細胞培養(yǎng)物回收和純化本發(fā)明多肽，所述方法包括硫酸銨沉淀或乙醇沉淀、酸提取、陰離子交換層析或陽離子交換層析、磷酸纖維素層析、疏水作用層析、親和層析、羥磷灰石層析和凝集素層析。最優(yōu)選使用離子金屬親和層析(IMAC)進行純化。當(dāng)所述多肽在胞內(nèi)合成、分離和或純化過程中變性時，可以使用眾所周知的重折疊蛋白技術(shù)重建活性構(gòu)象。
            
所述表達系統(tǒng)也可以是活的重組微生物，例如病毒或細菌。可以將目的基因插入活的重組病毒或細菌的基因組。用該活的載體接種和體內(nèi)感染將使所述抗原在體內(nèi)表達并誘導(dǎo)免疫反應(yīng)。用于該目的的病毒和細菌可以是例如痘病毒(如痘苗病毒、禽痘病毒、金絲雀痘病毒)、甲病毒屬(新培斯病毒、塞姆利基森林病毒、委瑞內(nèi)拉馬腦炎病毒)、腺病毒、腺伴隨病毒、小核糖核酸病毒(脊髓灰質(zhì)炎病毒、鼻病毒)、皰疹病毒(水痘-帶狀皰疹病毒等)、李斯特菌屬、沙門氏菌屬、志賀菌屬、奈瑟氏球菌屬、BCG。這些病毒和細菌可以是有毒力的，或者以各種方式減毒獲得活疫苗。這樣的活疫苗也構(gòu)成本發(fā)明的一部分。診斷測定、預(yù)后測定、血清分型測定以及突變測定本發(fā)明還涉及使用本發(fā)明的BASB047、BASB054、BASB068或BASB069多核苷酸及多肽作為診斷試劑的用途。檢測真核生物、尤其是哺乳動物、特別是人類中的BASB047、BASB054、BASB068或BASB069多核苷酸和/或多肽將提供用于疾病診斷、疾病分期或傳染性生物對藥物的反應(yīng)的診斷方法?？梢杂酶鞣N眾所周知的技術(shù)以及本文提供的方法在核酸或氨基酸水平，對真核生物、尤其是哺乳動物而且特別是人類、尤其是感染或懷疑感染包含BASB047、BASB054、BASB068或BASB069基因或蛋白的生物的人進行檢測。
            
可以從推測感染和/或感染的個體的機體材料獲得用于預(yù)后、診斷或其它分析的多肽和多核苷酸。其中任何一種來源的多核苷酸、尤其是DNA或RNA，可直接用于檢測，或者使用PCR或任何其它擴增技術(shù)酶促擴增后進行分析。也可以按同樣方法使用RNA(尤其是mRNA)、cDNA和基因組DNA?？梢岳脭U增，通過分析選定的生物多核苷酸的基因型，對個體中存在的傳染性生物或居留生物(resident organism)的種類和株系進行特征鑒定。與從相關(guān)生物選出的參比序列的基因型相比，以擴增產(chǎn)物大小變化可以檢測缺失或插入，其中所述相關(guān)生物最好是同一屬的不同物種或同一物種的不同株系。使擴增的DNA與標(biāo)記的BASB047、BASB054、BASB068或BASB069多核苷酸序列雜交，可以鑒定點突變?？梢酝ㄟ^DNA酶或RNA酶消化(分別對于DNA或RNA而言)、或通過檢測解鏈溫度或復(fù)性動力學(xué)的差異，區(qū)別完全配對序列或顯著配對序列與不完全錯配或更顯著錯配雙鏈體。也可以通過與參比序列相比，以多核苷酸片段在凝膠上的電泳遷移率變化檢測多核苷酸序列的差異。這可以使用或不使用變性試劑進行。也可以通過直接的DNA測序或RNA測序檢測多核苷酸差異。參閱例如Myers等，Science，2301242(1985)。也可以通過核酸酶保護分析(如RNA酶、V1和S1保護分析)或化學(xué)切割方法揭示在特定位點的序列改變。參閱例如Cotton等，Proc.Natl.Acad. Sci.，USA，854397-4401(1985)。
            
在另一實施方案中，可以構(gòu)建包含BASB047、BASB054、BASB068或BASB069核苷酸序列或其片段的寡核苷酸探針的陣列，以進行例如遺傳突變的有效篩選、血清分型、分類學(xué)分類或鑒定。陣列技術(shù)方法是眾所周知的并具有普遍應(yīng)用性，而且可以用于闡明分子遺傳學(xué)中的多種問題，包括基因表達、遺傳連鎖、以及遺傳變異性(參閱例如Chee等，Science，274610(1996))。
            
因此再一方面，本發(fā)明涉及診斷試劑盒，其中包括(a)本發(fā)明的多核苷酸，最好是SEQ ID NO1、3、5、7的核苷酸序列或其片段；(b)與(a)的核苷酸序列互補的核苷酸序列；
            
(c)本發(fā)明的多肽，最好是SEQ ID NO2、4、6、8的多肽或其片段；或(d)針對本發(fā)明的多肽的抗體，最好是針對SEQ ID NO2、4、6、8的多肽的抗體。
            
人們知道，在任何這樣的試劑盒中，(a)、(b)、(c)或(d)可以構(gòu)成實質(zhì)性組分。這樣的試劑盒將尤其在診斷疾病或診斷對疾病的易感性方面有用。
            
本發(fā)明還涉及將本發(fā)明的多核苷酸用作診斷試劑。檢測與疾病或致病性有關(guān)的突變形式的本發(fā)明多核苷酸(最好是SEQ ID NO1、3、5或7)，將提供可以幫助或確定疾病診斷、預(yù)測疾病病程、確定疾病階段、或?qū)膊〉囊赘行缘脑\斷工具，所述疾病源于所述多核苷酸的表達不足、過量表達或表達變化?？梢杂枚喾N技術(shù)如本文別處描述的技術(shù)，在多核苷酸水平上檢測在這樣的多核苷酸上帶有突變的生物、尤其是傳染性生物。
            
也可以采用多種技術(shù)，在多核苷酸或多肽水平上檢測在本發(fā)明的多核苷酸和/或多肽上帶有突變或多態(tài)性(等位基因變異)的生物細胞，以進行例如血清分型。例如可以使用RT-PCR檢測RNA突變。尤其優(yōu)選使用RT-PCR結(jié)合自動化檢測系統(tǒng)，例如GeneScan。RNA、cDNA或基因組DNA也可以用于同樣目的PCR。例如，可以使用與編碼BASB047、BASB054、BASB068或BASB069多肽的多核苷酸互補的PCR引物鑒定和分析突變。
            
本發(fā)明還提供從5’和/或3’端切除的1、2、3或4個核苷酸的引物。其中這些引物可以用于擴增由個體得到的樣品(如機體材料)分離出的BASB047、BASB054、BASB068或BASB069 DNA和/或RNA。所述引物可以用于擴增從感染個體分離的多核苷酸，以便隨后可以采用各種技術(shù)研究所述多核苷酸以闡明所述多核苷酸序列。這樣，可以檢測到所述多核苷酸序列中的突變，并用于診斷和/或預(yù)測感染或其階段或病程，或者用于對所述傳染性病原體進行血清分型和/或分類。
            
本發(fā)明還提供用于診斷疾病、優(yōu)選是細菌感染、更優(yōu)選是腦膜炎奈瑟氏球菌導(dǎo)致的感染的方法，包括確定得自個體的樣品(如機體材料)中具有SEQ ID NO1、3、5或7的序列的多核苷酸的表達水平增加?？梢允褂萌魏我环N本領(lǐng)域眾所周知的用于定量多核苷酸的方法，測定BASB047、BASB054、BASB068或BASB069多核苷酸表達的增加或降低，所述方法例如擴增、PCR、RT-PCR、RNA酶保護、RNA印跡法、光譜測定法和其它雜交方法。
            
此外，根據(jù)本發(fā)明的用于檢測與正常對照組織樣品相比，BASB047、BASB054、BASB068或BASB069多肽過量表達的診斷檢測，可以用于例如檢測是否存在感染?？梢杂脕頊y定從宿主得到的樣品(如機體材料)中BASB047、BASB054、BASB068或BASB069多肽水平的測定技術(shù)，是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。這樣的檢測方法包括放射免疫測定、競爭性結(jié)合測定、蛋白質(zhì)印跡分析、抗體夾心測定、抗體檢測和ELISA測定。
            
本發(fā)明的多核苷酸可以用作多核苷酸陣列、最好是高密度陣列或網(wǎng)格的成分。這些高密度陣列對于診斷和預(yù)測目的特別有用。例如，有一組點，每個點包括不同的基因，并且還包含一種或多種本發(fā)明多核苷酸，該組點可以利用從機體樣品獲得或衍生的探針用于探測例如使用雜交或核酸擴增，確定個體中特定多核苷酸序列或相關(guān)序列的存在與否。這樣一種存在可能說明存在病原體、尤其是腦膜炎奈瑟氏球菌，并可以用于診斷和/或預(yù)測疾病或病程。優(yōu)選包括大量SEQ ID NO1、3、5或7的多核苷酸序列的變異體的網(wǎng)格。還優(yōu)選包括大量編碼SEQ ID NO2、4、6或8的多肽序列的多核苷酸的變異體的網(wǎng)格?？贵w本發(fā)明的多肽和多核苷酸或其變異體、或表達它們的細胞可以用作免疫原，產(chǎn)生分別對這樣的多肽或多核苷酸的免疫專一性抗體。
            
在本發(fā)明某些優(yōu)選的實施方案中，提供抗BASB047、BASB054、BASB068或BASB069多肽或多核苷酸的抗體。
            
可以使用常規(guī)方法，給予動物(最好不是人類)本發(fā)明的多肽和/或多核苷酸、或二者之一或二者帶有表位的片段、二者之一或二者的類似物、或表達之一或二者的細胞，獲得針對本發(fā)明的多肽或多核苷酸產(chǎn)生的抗體。為了制備單克隆抗體，可以使用提供由連續(xù)細胞系培養(yǎng)物產(chǎn)生的抗體的本領(lǐng)域任何技術(shù)。實例包括各種技術(shù)，如以下文獻中的技術(shù)Kohler，G.和Milstein，C.，Nature 256495-497(1975)；Kozbor等，Immunology Today 472(1983)；Cole等，MONOCLONAL ANTIBODIES AND CANCER THERAPY，第77-96頁，Alan R.Liss，Inc.(1985)。
            
可以改進用于制備單鏈抗體的技術(shù)(美國專利第4,946,778號)，以產(chǎn)生針對本發(fā)明的多肽或多核苷酸的單鏈抗體。此外，可以使用轉(zhuǎn)基因小鼠、或其它生物或動物(如其它哺乳動物)表達對本發(fā)明的多肽或多核苷酸免疫專一性的人源化抗體。
            
另一方面，可以利用噬菌體展示技術(shù)，或者從根據(jù)帶有抗BASB047、BASB054、BASB068或BASB069而篩選出的人淋巴細胞的PCR擴增的v基因的所有組成成分中、或者從原初文庫(naivelibrary)中，選擇對本發(fā)明的多肽有結(jié)合活性的抗體基因(McCafferty等，(1990).Nature 348，552-554；Marks等，(1992)Biotechnology 10，779-783)。也可以通過例如鏈改組提高這些抗體的親和力(Clackson等，(1991)Nature 352628)。
            
可以使用上述抗體來分離或鑒定表達本發(fā)明的多肽或多核苷酸的克隆，以采用例如親和層析純化所述多肽或多核苷酸。
            
因此，其中可以使用抗BASB047、BASB054、BASB068或BASB069多肽或BASB047、BASB054、BASB068或BASB069多核苷酸的抗體來治療感染，尤其是細菌感染。
            
多肽變異體包括在抗原上、表位上或免疫上等同的變異體，這些構(gòu)成本發(fā)明一個具體的方面。
            
最好修飾所述抗體及其變異體，使其在個體中的免疫原性較低。例如，假如所述個體是人，那么最好“人源化”所述抗體，其中將雜交瘤產(chǎn)生的抗體的一個或多個complimentarity決定區(qū)移植到人單克隆抗體中，例如Jones等(1986)，Nature 321，522-525或Tempest等，(1991)Biotechnology 9，266-273中所述。拮抗劑和激動劑-測定和分子也可以使用本發(fā)明的多肽和多核苷酸，評估小分子底物與在例如細胞、無細胞制備物、化學(xué)文庫以及天然產(chǎn)物混合物中的配體的結(jié)合。這些底物和配體可以是天然底物和配體，或者可以是結(jié)構(gòu)模擬物或功能模擬物。參閱例如Coligan等，Current Protocols inImmunology I(2)第5章(1991)。
            
使用與候選化合物直接或間接結(jié)合的標(biāo)記，篩選方法就可以測量所述候選化合物與所述多肽或多核苷酸的結(jié)合、或所述候選化合物與帶有所述多肽或多核苷酸的細胞或膜的結(jié)合、或所述候選化合物與帶有所述多肽的融合蛋白的細胞或膜的結(jié)合。或者，所述篩選方法涉及與標(biāo)記競爭物的競爭。此外，使用對于包含所述多肽或多核苷酸的細胞合適的檢測系統(tǒng)，這些篩選方法可以測試所述候選化合物是否導(dǎo)致由于所述多肽或多核苷酸的激活或抑制而產(chǎn)生的信號。一般在一種已知激動劑的存在下測定激活的抑制物，并觀察所述候選化合物的存在對所述激動劑的激活作用的影響。組成型活性多肽和/或組成型表達的多肽和多核苷酸可以用于篩選逆向激動劑或抑制劑的篩選方法在缺乏激動劑或抑制物的情況下，根據(jù)具體情況測試所述候選化合物是否導(dǎo)致對所述多肽或多核苷酸的激活的抑制。此外，所述測試方法可以僅包括以下步驟將候選化合物與含有本發(fā)明的多肽或多核苷酸的溶液混合，形成混合物，測定所述混合物中BASB047、BASB054、BASB068或BASB069多肽和/或多核苷酸活性，并將所述混合物的BASB047、BASB054、BASB068或BASB069多肽和/或多核苷酸活性與標(biāo)準(zhǔn)品活性比較。也可以使用融合蛋白，例如如前文所述由Fc部分和BASB047、BASB054、BASB068或BASB069多肽制成的融合蛋白，進行高通量篩選測定，以鑒定本發(fā)明多肽的拮抗劑、以及系統(tǒng)發(fā)育上和/或功能上相關(guān)多肽的拮抗劑(參閱D.Bennett等，J Mol Recognition，852-58(1995)；和K.Johanson等，J Biol Chem，270(16)9459-9471(1995))。
            
也可以使用所述多核苷酸、多肽以及結(jié)合本發(fā)明多肽和/或與本發(fā)明多肽相互作用的抗體來構(gòu)建篩選方法，以測試添加的化合物對細胞中mRNA和/或多肽的產(chǎn)生的影響。例如，使用單克隆抗體和多克隆抗體，通過本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)方法，可以構(gòu)建ELISA測定以測定多肽的分泌水平或細胞結(jié)合水平。這可以用于從適當(dāng)操作的細胞或組織中發(fā)現(xiàn)可能抑制或增強多肽產(chǎn)生的物質(zhì)(也分別稱為拮抗劑或激動劑)。
            
本發(fā)明還提供篩選化合物的方法，以鑒定增強(激動劑)或阻斷(拮抗劑)BASB047、BASB054、BASB068或BASB069多肽或多核苷酸的作用的化合物，尤其是鑒定制菌和/或殺菌的化合物。所述篩選方法可涉及高通量技術(shù)。例如，為了篩選激動劑或拮抗劑，在存在或不存在可能是BASB047、BASB054、BASB068或BASB069激動劑或拮抗劑的候選分子的情況下，將包含BASB047、BASB054、BASB068或BASB069多肽的合成反應(yīng)混合物、細胞區(qū)室(如膜、胞外被膜或細胞壁、或它們中任何一種的制備物)與所述多肽的標(biāo)記底物或配體一起溫育。候選分子激動或拮抗BASB047、BASB054、BASB068或BASB069多肽的能力表現(xiàn)為結(jié)合標(biāo)記配體減少或所述底物產(chǎn)生的產(chǎn)物減少。無作用的結(jié)合分子，即不誘導(dǎo)BASB047、BASB054、BASB068或BASB069多肽作用的分子很有可能是良好的拮抗劑。很好結(jié)合并且根據(jù)具體情況增加底物產(chǎn)生產(chǎn)物的速率、增加信號轉(zhuǎn)導(dǎo)或增加化學(xué)通道活性的分子是激動劑。使用報道系統(tǒng)，可以根據(jù)具體情況檢測增強底物產(chǎn)生產(chǎn)物、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)或化學(xué)通道活性的速率或水平。在這一方面可能有用的報告系統(tǒng)包括但不限于比色法、轉(zhuǎn)化成產(chǎn)物的標(biāo)記底物、應(yīng)答B(yǎng)ASB047、BASB054、BASB068或BASB069多核苷酸或多肽的活性變化的報告基因以及本領(lǐng)域已知的結(jié)合測定。
            
測定BASB047、BASB054、BASB068或BASB069激動劑的另一個實例是競爭性測定，即將BASB047、BASB054、BASB068或BASB069和潛在激動劑與BASB047、BASB054、BASB068或BASB069結(jié)合分子、重組BASB047、BASB054、BASB068或BASB069結(jié)合分子、天然底物或配體、或底物或配體模擬物在合適條件下混合，以進行競爭性抑制分析。可以采用如放射性或顯色化合物來標(biāo)記BASB047、BASB054、BASB068或BASB069，以便可以準(zhǔn)確測定與結(jié)合分子結(jié)合或轉(zhuǎn)化成產(chǎn)物的BASB047、BASB054、BASB068或BASB069分子數(shù)量，以評估所述潛在拮抗劑的有效性。
            
潛在拮抗劑其中包括結(jié)合本發(fā)明的多核苷酸和/或多肽并因此抑制或消除其活性或表達的小有機分子、肽、多肽以及抗體。潛在拮抗劑還可以是小有機分子、肽、多肽，如結(jié)合在結(jié)合分子(如結(jié)合分子)上相同位點的密切相關(guān)的蛋白或抗體，而不誘導(dǎo)BASB047、BASB054、BASB068或BASB069所誘導(dǎo)的活性，  因此使BASB047、BASB054、BASB068或BASB069多肽和/或多核苷酸不能結(jié)合而阻止BASB047、BASB054、BASB068或BASB069多肽和/或多核苷酸的作用或表達。
            
潛在拮抗劑包括這樣的小分子所述小分子結(jié)合并占據(jù)所述多肽的結(jié)合位點，因此防止其結(jié)合到細胞結(jié)合分子，從而阻止正常生物活性。小分子的實例包括但不限于小有機分子、肽或肽樣分子。其它潛在拮抗劑包括反義分子(參閱Okano，J.Neurochem.56560(1991)；OLIGODEOXYNUCLEOTIDES AS ANTISENSE INHIBITORSOF GENE EXPRESSION，CRC Press，Boca Raton，F(xiàn)L(1988)，關(guān)于這些分子的介紹)。優(yōu)選的潛在拮抗劑包括與BASB047、BASB054、BASB068或BASB069相關(guān)的化合物以及BASB047、BASB054、BASB068或BASB069的變異體。
            
再一方面，本發(fā)明涉及遺傳工程制備的可溶性融合蛋白，該融合蛋白包含本發(fā)明的多肽或其片段，以及不同亞類免疫球蛋白(IgG、IgM、IgA、IgE)的重鏈或輕鏈的恒定區(qū)的不同部分。作為免疫球蛋白優(yōu)選人類IgG(尤其是IgG1)的重鏈的恒定部分，其中在絞鏈區(qū)融合。在一個具體實施方案中，可以通過插入能用凝血因子Xa切割的切割序列就可除去Fc部分。此外，本發(fā)明涉及采用遺傳工程制備這些融合蛋白的方法，以及所述融合蛋白用于藥物篩選、診斷和治療的應(yīng)用。本發(fā)明的另一方面還涉及編碼這樣的融合蛋白的多核苷酸。融合蛋白技術(shù)的實例可見于國際專利申請第WO94/29458號和第WO94/22914號。
            
本文提供的每一種多核苷酸序列都可以用于發(fā)現(xiàn)和研制抗菌化合物。表達后，所編碼的蛋白可以用作篩選抗細菌藥物的靶。此外，相應(yīng)的mRNA上編碼所述編碼蛋白氨基末端區(qū)的多核苷酸序列、或Shine-Delgarno或其它有利于翻譯的序列可以用于構(gòu)建控制目的編碼序列表達的反義序列。
            
本發(fā)明還提供使用本發(fā)明的多肽、多核苷酸、激動劑或拮抗劑來干擾一種病原體或多種病原體與真核宿主、最好是哺乳動物宿主之間導(dǎo)致感染后續(xù)結(jié)果的初始物理作用。具體來說，本發(fā)明的分子可以用于防止細菌、尤其是革蘭氏陽性和/或革蘭氏陰性細菌附著到留置裝置上真核生物、最好是哺乳動物的細胞外基質(zhì)蛋白，或附著到傷口中的細胞外基質(zhì)蛋白；阻斷介導(dǎo)組織損傷的真核生物、最好是哺乳動物的細胞外基質(zhì)蛋白與細菌BASB047、BASB054、BASB068或BASB069蛋白間的細菌附著，和/或；阻止植入留置裝置或其它外科技術(shù)以外引發(fā)的感染發(fā)病機理的正常進行。
            
按照本發(fā)明的再一方面，提供BASB047、BASB054、BASB068或BASB069激動劑和拮抗劑，最好是制菌或殺菌的激動劑和拮抗劑。
            
本發(fā)明的拮抗劑和激動劑可以用于例如預(yù)防、抑制和/或治療疾病。
            
再一方面，本發(fā)明涉及本發(fā)明多肽的mimotope。mimotope是與天然肽足夠相似(序列上或結(jié)構(gòu)上)的肽序列，能夠被識別天然肽的抗體識別；或者當(dāng)偶聯(lián)到合適載體時，能夠產(chǎn)生識別天然肽的抗體。
            
可以通過添加、缺失或取代選定的氨基酸而設(shè)計肽mimotope用于特定用途。因此，可以為了易于綴合于蛋白載體而修飾所述肽。例如，一些化學(xué)綴合方法最好包括一個末端半胱氨酸。此外，與蛋白載體綴合的肽最好在所述肽綴合末端遠處包括一個疏水末端，以便所述肽游離的未結(jié)合末端保持與載體蛋白的表面結(jié)合。因此使所述肽呈現(xiàn)出這樣的構(gòu)象所述構(gòu)象與在完整的天然分子中發(fā)現(xiàn)的所述肽的構(gòu)象最密切相似。例如，可以改變所述肽使其具有一個N末端半胱氨酸和一個C末端疏水性酰胺化尾?；蛘?，可以進行一個或多個氨基酸的D-立體異構(gòu)體的添加或取代，以產(chǎn)生有益的衍生物，例如增強所述肽的穩(wěn)定性。
            
或者，使用如噬菌體展示技術(shù)(EP 0 552 267 B1)的技術(shù)，用本身能夠結(jié)合本發(fā)明多肽的抗體，可以鑒定肽mimotope。該技術(shù)產(chǎn)生了大量模擬天然肽的結(jié)構(gòu)并因此能夠結(jié)合抗天然肽抗體的肽序列，但所述肽序列本身并不一定與所述天然多肽具有顯著的序列同一性。疫苗本發(fā)明的另一方面涉及在個體、特別是哺乳動物、最好是人類誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的方法，包括用足以產(chǎn)生抗體和/或T細胞免疫應(yīng)答的BASB047、BASB054、BASB068或BASB069多核苷酸和/或多肽或它們的片段或變異體接種所述個體，以保護所述個體免受感染，尤其是細菌感染，更特別是腦膜炎奈瑟氏球菌感染。還提供的是這樣的方法用這種方法產(chǎn)生的所述免疫應(yīng)答減慢細菌的復(fù)制。而本發(fā)明的再一方面涉及在個體中誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的方法，包括傳遞核酸載體、序列或核酶給這樣的個體，來指導(dǎo)BASB047、BASB054、BASB068或BASB069多核苷酸和/或多肽、或其片段或變異體的表達，以在體內(nèi)表達BASB047、BASB054、BASB068或BASB069多核苷酸和/或多肽、或其片段或變異體，誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，如產(chǎn)生抗體和/或T細胞免疫應(yīng)答(包括例如產(chǎn)生細胞因子的T細胞或細胞毒性T細胞)，來保護所述個體(最好是人類)抵抗疾病，而不論該疾病是否已經(jīng)在所述個體內(nèi)產(chǎn)生。給予所述基因的一個實例是以顆粒的包被物或者非顆粒包被物加速其進入所需細胞。這樣的核酸載體可以包括DNA、RNA、核酶、修飾核酸、DNA/RNA雜種、DNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物或RNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物。
            
本發(fā)明的再一方面涉及免疫組合物，當(dāng)所述免疫組合物引入個體、最好是人體時，由于所述免疫組合物能夠在所述個體中誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，因此在所述個體中誘導(dǎo)針對BASB047、BASB054、BASB068或BASB069多核苷酸和/或由其編碼的多肽的免疫應(yīng)答，其中所述組合物包含重組BASB047、BASB054、BASB068或BASB069多核苷酸和/或由其編碼的多肽，和/或所述組合物包括編碼和表達所述BASB047、BASB054、BASB068或BASB069多核苷酸的抗原的DNA和/或RNA、由其編碼的多肽、或其它本發(fā)明的多肽。所述免疫應(yīng)答可以用于治療或為預(yù)防目的，并采用抗體免疫和/或細胞免疫的形式，如CTL或CD4+T細胞產(chǎn)生的細胞免疫。
            
BASB047、BASB054、BASB068或BASB069多肽或其片段可以與輔蛋白(co-protein)或化學(xué)部分融合，所述化學(xué)部分本身可能產(chǎn)生抗體或不產(chǎn)生抗體，但能夠穩(wěn)定所述第一種蛋白并產(chǎn)生具有抗原性和/或免疫原性的特性、最好是保護特性的融合或修飾蛋白。因此，融合的重組蛋白最好還包含一種抗原性輔蛋白，或任何其它增溶所述蛋白并有利于其生產(chǎn)和純化的較大輔蛋白，其中所述抗原性輔蛋白如流感嗜血桿菌的脂蛋白D、谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GST)或β-半乳糖苷酶。此外，所述輔蛋白可以作為佐劑在提供對接受所述蛋白生物的免疫系統(tǒng)的普通性刺激的意義上起作用。所述輔蛋白可以連接到第一種蛋白的氨基端或者羧基端。
            
在依照本發(fā)明的疫苗組合物中，BASB047、BASB054、BASB068或BASB069多肽和/或多核苷酸或其片段、或mimotope、或變異體可以為一種載體，例如上面描述的活重組載體，例如活細菌載體。
            
BASB047、BASB054、BASB068或BASB069多肽的非活載體也是合適的，例如細菌膜外小泡或“囊泡(bleb)”。OM囊泡獲自格蘭氏陰性細菌雙層膜的外膜，并且根據(jù)文獻在許多種格蘭氏陰性細菌中存在(Zhou，L等人，1998.FEMS Microbiol.Lett.163223-228)，包括沙眼衣原體(C.trachomatis)和鸚鵡熱衣原體(C.psittaci)。據(jù)報道產(chǎn)生囊泡的細菌病原體的不完全一覽表包括百日咳博德特氏菌(Bordetella pertussis)、布氏疏螺旋體(Borrelia burgdorferi)、馬爾他布魯氏菌(Brucella melitensis)、羊氏布魯氏菌(Brucella ovis)、大腸桿菌(Esherichia coli)、流感嗜血桿菌、嗜肺軍團桿菌(Legionellapneumophila)、淋病奈瑟氏球菌(Neisseria gonorrhoeae)、腦膜炎奈瑟氏球菌、綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa)和小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌(Yersinia enterocolitica)。
            
囊泡具有能以其天然構(gòu)象提供外膜蛋白的優(yōu)勢，因此對于疫苗尤其有用。也可以通過工程操作所述細菌而改善囊泡用于疫苗的應(yīng)用，以便改善一個或多個外膜分子的表達。因此可以引入或正調(diào)節(jié)(如通過改變啟動子)例如所需免疫原性蛋白如BASB047、BASB054、BASB068或BASB069多肽在外膜上的表達。或者或此外，可以下調(diào)節(jié)或者非相關(guān)(如非保護性抗原或免疫顯性但變化的蛋白)、或者有害(如毒性分子如LPS或自身免疫反應(yīng)潛在誘導(dǎo)劑)的外膜分子的表達。這些方法在下面詳細討論。
            
BASB047、BASB054、BASB068或BASB069基因的非編碼側(cè)翼區(qū)包含在所述基因的表達中重要的調(diào)節(jié)元件。這種調(diào)節(jié)作用可發(fā)生于轉(zhuǎn)錄和翻譯水平。可以通過DNA測序獲得在所述基因的可讀框上游或下游的這些區(qū)段的序列。該序列信息使得可以確定潛在調(diào)節(jié)基序，例如不同的啟動子元件、終止子序列、誘導(dǎo)序列元件、阻抑物、相變元件、SD序列、具有涉及調(diào)節(jié)的潛在二級結(jié)構(gòu)的區(qū)以及其它類型的調(diào)節(jié)基序或序列。
            
該序列信息使得能夠調(diào)節(jié)BASB047、BASB054、BASB068或BASB069基因的天然表達。通過改變啟動子、SD序列、潛在阻抑物或操縱基因元件或任何其它涉及的元件，可以成功正調(diào)節(jié)所述基因的表達。同樣，通過相似類型的改進可以完成表達的下調(diào)節(jié)?；蛘?，通過改變相變序列，可以將所述基因的表達置于相變控制之下，或者可以使其與這種調(diào)節(jié)作用無關(guān)。在另一種方法中，可以將所述基因的表達置于一種或多種誘導(dǎo)元件的控制下，以允許進行調(diào)節(jié)表達。這樣的調(diào)節(jié)實例包括但不限于通過溫度變化、加入誘導(dǎo)物底物如選定的糖或它們的衍生物、微量元素、維生素、輔因子、金屬離子等等進行誘導(dǎo)。
            
可以采用幾種不同方法引入如上所述的修飾。通過隨機誘變并隨后篩選所需表型，可以在體內(nèi)進行涉及基因表達的序列的修飾。另一種方法包括分離目的區(qū)段并通過隨機誘變或定點置換、插入或缺失突變而進行修飾。隨后可以將所述修飾區(qū)段通過同源重組再引入細菌基因組中，并且評估對基因表達的影響。在另一種方法中，可以使用目的區(qū)段的序列信息取代或缺失所有或部分天然調(diào)節(jié)序列。在這種情況下，分離目標(biāo)調(diào)節(jié)區(qū)并進行修飾，以包含另一基因的調(diào)節(jié)元件、不同基因調(diào)節(jié)元件的組合、合成的調(diào)節(jié)區(qū)或任何其它調(diào)節(jié)區(qū)，或者分離目標(biāo)調(diào)節(jié)區(qū)并進行修飾以缺失所述野生型調(diào)節(jié)序列的選定部分。隨后可以將這些修飾序列再引入細菌，并通過同源重組進入基因組中?？梢杂糜谡{(diào)節(jié)基因表達的優(yōu)選啟動子的不完全一覽表包括腦膜炎奈瑟氏球菌或淋病奈瑟氏球菌的啟動子porA、porB、lbpB、tbpB、pllO、lst、hpuAB；ompCD、copB、lbpB、ompE、UspA1；UspA2；粘膜炎莫拉氏菌的TbpB；流感嗜血桿菌的p1、p2、p4、p5、p6、lpD、tbpB、D15、Hia、Hmw1、Hmw2。
            
在一個實施例中，可以通過將所述基因的啟動子換為一個更強的啟動子(通過分離所述基因的上游序列，體外改變該序列，然后通過同源重組再引入基因組)而調(diào)節(jié)所述基因的表達。可以用所述細菌和由所述細菌脫落(或產(chǎn)生)的外膜小泡獲得正調(diào)節(jié)的表達。
            
在其它實施例中，可以使用所述方法產(chǎn)生具有疫苗應(yīng)用改善特性的重組細菌株。這些株可以是但不限于減毒株、選定抗原表達增加的株、干擾免疫反應(yīng)的基因失去作用(或表達降低)的株、免疫顯性蛋白的表達受到調(diào)節(jié)的株、外膜小泡的脫落受到調(diào)節(jié)的株。
            
因此，本發(fā)明還提供BASB047、BASB054、BASB068或BASB069基因的修飾上游區(qū)，所述修飾上游區(qū)包含改變位于外膜的BASB047、BASB054、BASB068或BASB069蛋白表達水平的異源調(diào)節(jié)元件。依照本發(fā)明這一方面的上游區(qū)包括BASB047、BASB054、BASB068或BASB069基因上游的序列。所述上游區(qū)起始于BASB047、BASB054、BASB068或BASB069基因的直接上游，通常延伸到從所述基因的ATG起始密碼子上游1000bp以內(nèi)的位置。在位于多順反子序列(操縱子)中的基因的情況下，所述上游區(qū)可以緊接于目的基因之前起始，或在所述操縱子中第一個基因之前。依照本發(fā)明的修飾上游區(qū)最好在ATG上游500bp到700bp之間的某個位置包含一個異源啟動子。
            
因此，本發(fā)明以修飾的細菌囊泡提供BASB047、BASB054、BASB068或BASB069多肽。本發(fā)明還提供能夠產(chǎn)生非活的基于膜的囊泡載體的修飾的宿主細胞。本發(fā)明還提供包含BASB047、BASB054、BASB068或BASB069基因的核酸載體，所述BASB047、BASB054、BASB068或BASB069基因具有包含一個異源調(diào)節(jié)元件的上游修飾區(qū)。
            
本發(fā)明還提供制備依照本發(fā)明的宿主細胞和細菌囊泡的方法。
            
本發(fā)明提供組合物，尤其是疫苗組合物，以及包含本發(fā)明的多肽和/或多核苷酸以及免疫刺激性DNA序列的方法，所述免疫刺激性DNA序列如Sato，Y.等Science 273352(1996)中所述序列。
            
本發(fā)明還提供使用所述多核苷酸或其特定片段的方法，其中在腦膜炎奈瑟氏球菌感染的動物模型中證實，在所述遺傳免疫實驗中使用的多核苷酸構(gòu)建物中，所述多核苷酸或其特定片段編碼細菌細胞表面蛋白的非可變區(qū)。這樣的實驗對于鑒定能夠激發(fā)預(yù)防性或治療性免疫應(yīng)答的蛋白質(zhì)表位特別有用。相信該方法將使得此后能夠制備特別有用的單克隆抗體，以開發(fā)針對在哺乳動物、尤其是人類細菌感染(尤其是腦膜炎奈瑟氏球菌感染)的預(yù)防劑或治療療法，其中所述單克隆抗體得自成功抵御或清除感染的動物的要求器官。
            
本發(fā)明還包括疫苗制劑，所述疫苗制劑包括本發(fā)明的免疫原性重組多肽和/或多核苷酸以及合適的載體，如藥學(xué)上可接受的載體。由于所述多肽和多核苷酸可能在胃中分解，因此它們中的每一種最好胃腸外給予，包括例如皮下給予、肌內(nèi)給予、靜脈內(nèi)給予或皮內(nèi)給予。適于胃腸外給予的制劑包括水性和非水性無菌注射溶液，所述溶液可以包含抗氧化劑、緩沖劑、制菌化合物和使得所述制劑與個體的體液(最好是血液)等滲的溶質(zhì)；以及水性和非水性無菌懸浮液，所述懸浮液可以包括懸浮劑或增稠劑。所述制劑可以盛裝在單位劑量或多劑量容器(如密封安瓿和管形瓶)中，并可以在凍干條件下保存，只需要在使用前加入無菌液體載體。
            
本發(fā)明的疫苗制劑也可以包括增強所述制劑的免疫原性的佐劑系統(tǒng)。所述佐劑系統(tǒng)最好增強TH1型反應(yīng)。
            
免疫反應(yīng)可以主要分為兩大類體液免疫應(yīng)答或細胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答(傳統(tǒng)上其特征分別在于保護性抗體機制和效應(yīng)細胞機制)。這兩類免疫反應(yīng)稱為TH1型反應(yīng)(細胞免疫反應(yīng))以及TH2型免疫反應(yīng)(體液免疫反應(yīng))。
            
非常典型的TH1型免疫反應(yīng)特征在于產(chǎn)生抗原特異性單倍型限制性細胞毒性T淋巴細胞以及天然殺傷細胞反應(yīng)。在小鼠中，TH1型反應(yīng)通常特征在于產(chǎn)生IgG2a亞型抗體，而在人類中這些抗體相當(dāng)于IgG1型抗體。TH2型免疫反應(yīng)特征在于產(chǎn)生各種各樣的免疫球蛋白同種型，在小鼠包括IgG1、IgA和IgM。
            
可以認為產(chǎn)生這兩種類型免疫反應(yīng)的驅(qū)動力是細胞因子。高水平的TH1型細胞因子往往促進誘導(dǎo)對給定抗原的細胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，而高水平的TH2型細胞因子傾向于促進誘導(dǎo)對抗原的體液免疫反應(yīng)。
            
TH1型免疫反應(yīng)和TH2型免疫反應(yīng)的區(qū)別并不是絕對的。實際上，有個別人支持將免疫反應(yīng)描述為主要是TH1型或主要是TH2型的免疫反應(yīng)。然而，按照Mosmann和Coffman描述鼠CD4+veT細胞克隆時采用的細胞因子家族分類來考慮細胞因子家族通常是合適的(Mosmann，T.R.和Coffman，R.L.(1989)TH1和TH2細胞不同模式的淋巴因子分泌產(chǎn)生不同的功能特性.Annual Review of Immunology，7，第145-173頁)。傳統(tǒng)上，TH1型反應(yīng)與T淋巴細胞產(chǎn)生的IFN-γ和IL-2細胞因子有關(guān)。其它常常與誘導(dǎo)TH1型免疫反應(yīng)有關(guān)的細胞因子如IL-12并不是T細胞產(chǎn)生的。相反，TH2型反應(yīng)與IL-4、IL-5、IL-6和IL-13分泌有關(guān)。
            
已知某些疫苗佐劑特別適于刺激TH1型或TH2型細胞因子反應(yīng)。傳統(tǒng)上，在免疫接種或感染后免疫反應(yīng)的TH1∶TH2平衡的最佳指標(biāo)包括在體外用抗原再刺激后直接測量T細胞產(chǎn)生的TH1或TH2細胞因子，和/或測量抗原特異性抗體反應(yīng)的IgG1∶IgG2a比例。
            
因此，TH1型佐劑是在體外用抗原再刺激時優(yōu)先刺激分離的T細胞群體產(chǎn)生高水平TH1型細胞因子而且促進產(chǎn)生CD8+細胞毒性T淋巴細胞以及與TH1型同種型有關(guān)的抗原特異性免疫球蛋白反應(yīng)的佐劑。
            
國際專利申請?zhí)朩O 94/00153和WO 95/17209中描述了能夠優(yōu)先刺激TH1細胞反應(yīng)的佐劑。
            
3脫氧?；瘑瘟柞Ｖ|(zhì)A(3D-MPL)就是一種這樣的佐劑。這可從GB 222021l(Ribi)得知。在化學(xué)上它是具有4、5或6個?；湹?脫氧?；瘑瘟柞Ｖ|(zhì)A的混合物，由Ribi Immunochem，Montana生產(chǎn)。3脫氧?；瘑瘟柞Ｖ|(zhì)A的優(yōu)選形式公開于歐洲專利0 689 454B1(SmithKline Beecham Biologicals SA)。
            
3D-MPL的顆粒最好小得足以使其可以無菌濾過0.22微米的膜(歐洲專利號0 689 454)。3D-MPL劑量范圍為每劑10μg-100μg、最好25-50μg，其中所述抗原的劑量范圍通常為每劑2-50μg。
            
另一種優(yōu)選的佐劑包含QS21，即一種從Quillaja Saponaria Molina的樹皮得到的Hplc純化無毒部分?？蛇x地將QS21與3脫氧?；瘑瘟柞Ｖ|(zhì)A(3D-MPL)混合，可選地還與另一種載體混合。
            
美國專利號5,057,540公開了制備QS21的方法。
            
以前已經(jīng)描述了包含QS21的非反應(yīng)性佐劑制劑(WO96/33739)。已經(jīng)證實包含QS21和膽固醇的這類制劑當(dāng)與抗原一起配制時是成功的TH1刺激佐劑。
            
TH1細胞反應(yīng)優(yōu)先刺激物的其它佐劑包括免疫調(diào)制性寡核苷酸，例如在WO 96/02555中公開的非甲基化CpG序列。
            
還考慮組合諸如上述的不同TH1刺激佐劑，以提供屬于TH1細胞反應(yīng)優(yōu)選刺激物的佐劑。例如QS21可以與3D-MPL一起配制。QS21∶3D-MPL的比例通常約為1∶10到10∶1；最好是1∶5到5∶1，而實際上常常是1∶1。最佳協(xié)同作用的最優(yōu)范圍是2.5∶1到1∶1的3D-MPL∶QS21。
            
依照本發(fā)明的疫苗組合物中最好還存在一種載體。所述載體可以是水包油乳劑，或者是一種鋁鹽，如磷酸鋁或氫氧化鋁。
            
優(yōu)選的水包油乳劑包含一種可代謝的油如鯊烯、α-生育酚和Tween 80。在一個特別優(yōu)選的方面，用這樣的乳劑將本發(fā)明疫苗組合物的抗原與QS21和3D-MPL混合。此外所述水包油乳劑可以含有Span 85和/或卵磷脂和/或三辛酸甘油酯。
            
給予人時，通常疫苗中的QS21和3D-MPL含量范圍為每劑1μg-200μg，如10-100μg，最好是10μg-50μg。而水包油乳劑通常含有2-10％的鯊烯、2-10％的α-生育酚和0.3-3％的Tween 80。鯊烯α-生育酚的比例最好是等于或小于1，因為這樣的比例提供更穩(wěn)定的乳濁液。Span 85含量也可以為1％。在某些情況下，本發(fā)明的疫苗另外含有一種穩(wěn)定劑是有利的。
            
無毒的水包油乳劑最好在水溶液載體中含有一種無毒的油，如角沙烷或角鯊烯，以及一種乳化劑如Tween 80。所述水溶液載體可以是例如磷酸緩沖鹽溶液。
            
WO 95/17210中描述了一種特別有效的佐劑制劑，該制劑為包含QS21、3D-MPL和生育酚的水包油乳劑。
            
本發(fā)明還提供多價疫苗組合物，所述多價疫苗組合物包含本發(fā)明的疫苗制劑以及其它抗原，尤其是用于治療癌癥、自身免疫性疾病和相關(guān)病癥的抗原。這樣的一種多價疫苗組合物可以包括如前面所述的TH-1誘導(dǎo)佐劑。
            
雖然已經(jīng)參考某些BASB047、BASB054、BASB068或BASB069多肽和多核苷酸介紹了本發(fā)明，但應(yīng)當(dāng)知道，本發(fā)明包括天然多肽和多核苷酸的片段，以及帶有添加、缺失或取代的相似多肽和多核苷酸，其中所述添加、缺失或取代基本不影響所述重組多肽或多核苷酸的免疫原性特性。
            
所述抗原也可以完整細菌(死細菌或活細菌)形式或亞細胞組分給予，但是這些可能性不包括腦膜炎萘瑟氏球菌本身。組合物、試劑盒以及使用方法本發(fā)明的再一方面，提供用于給予單細胞生物或多細胞生物的包含BASB047、BASB054、BASB068或BASB069多核苷酸和/或BASB047、BASB054、BASB068或BASB069多肽的組合物。
            
本發(fā)明還涉及包含本文所討論的多核苷酸和/或多肽或它們的激動劑或拮抗劑的組合物。本發(fā)明的多肽和多核苷酸可以與非無菌或無菌的一種載體或多種載體組合使用以用于細胞、組織或生物，所述載體如適于給予個體的藥用載體。這樣的組合物包括例如媒介添加物(media additive)或治療有效量的本發(fā)明的多肽和/或多核苷酸以及藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。這樣的載體可以包括但不限于鹽水、緩沖鹽水、葡萄糖、水、甘油、乙醇以及它們的組合物。所述制劑應(yīng)當(dāng)適合所述給藥方式。本發(fā)明還涉及診斷用和藥用包裝和試劑盒，所述包裝和試劑盒包括一個或多個容器，所述容器中裝有前文所述本發(fā)明的組合物的一種或多種成份。
            
本發(fā)明的多肽、多核苷酸和其它化合物可以單獨使用或與其它化合物如治療化合物聯(lián)合使用。
            
所述藥用組合物可以以任何有效、方便的方式給予，所述方式其中包括例如局部應(yīng)用、口服、肛門、陰道、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、鼻內(nèi)或皮內(nèi)途徑給予。
            
在治療或用作預(yù)防藥時，可以將所述活性藥物以注射組合物給予個體，例如為無菌水性分散體，所述分散體最好是等滲的。
            
另一方面，本發(fā)明提供藥用組合物，所述藥用組合物包括治療有效量的多肽和/或多核苷酸(如可溶形式的本發(fā)明多肽和/或多核苷酸)、激動劑肽或拮抗劑肽或小分子化合物和藥學(xué)可接受的載體或賦形劑。這樣的載體包括但不限于鹽水、緩沖鹽水、葡萄糖、水、甘油、乙醇以及它們的組合物。本發(fā)明還涉及藥用包裝和試劑盒，所述藥用包裝和試劑盒包括一個或多個容器，所述容器中裝有前文所述本發(fā)明的組合物的一種或多種成份。
            
本發(fā)明的多肽、多核苷酸和其它化合物可以單獨使用或與其它化合物如治療化合物結(jié)合使用。
            
可以改變所述組合物以適應(yīng)給藥途徑，所述給藥途徑如系統(tǒng)性途徑或口服途徑。系統(tǒng)性給藥的優(yōu)選形式包括注射，一般是通過靜脈內(nèi)注射。可以使用其它注射途徑，如皮下注射、肌內(nèi)注射或腹膜內(nèi)注射。用于系統(tǒng)性給藥的其它可選方法包括使用滲透劑經(jīng)粘膜和經(jīng)皮給藥，所述滲透劑如膽汁酸鹽或梭鏈孢酸或其它去污劑。此外，如果本發(fā)明的多肽或其它化合物可以配制為腸溶制劑或膠囊化制劑中，那么口服給藥也是可以的。這些化合物也可以是以藥膏、糊劑、凝膠、溶液、粉劑等形式表面和/或局部給予。
            
為了給予哺乳動物、尤其是人類，預(yù)期所述活性藥物的每日劑量為0.01mg/kg到10mg/kg，一般是1mg/kg左右。在任何情況下，醫(yī)師將確定最適于個體的實際劑量，并且該劑量將隨著特定個體的年齡、體重和反應(yīng)而不同。上面的劑量代表一般情況。當(dāng)然，個別情況更高或更低劑量范圍是有益的，而這些情況也屬于本發(fā)明范疇。
            
所需的劑量范圍取決于選擇的肽、給藥途徑、制劑的性質(zhì)、患者病癥的性質(zhì)以及執(zhí)業(yè)醫(yī)師的判斷。然而，合適的劑量范圍為0.1-100μg/kg患者體重。
            
疫苗組合物方便地采用注射形式?？梢允褂贸Ｒ?guī)佐劑增強免疫應(yīng)答。用于疫苗接種的合適單位劑量是0.5-5微克/kg的抗原，并且最好以1-3周的間隔給予這樣的劑量1-3次。使用所述劑量范圍，對于本發(fā)明的化合物將不會觀察到阻止將它們給予合適個體的不利毒理學(xué)作用。
            
然而，考慮到可用的化合物的多樣性以及各種給藥途徑的不同效率，預(yù)期所需劑量將有很大變化。例如，預(yù)期口服將比通過靜脈內(nèi)注射給予需要更高劑量。使用本領(lǐng)域熟知的優(yōu)化標(biāo)準(zhǔn)經(jīng)驗方法，可以調(diào)整這些劑量水平上的變化。序列數(shù)據(jù)庫、有形媒介序列以及算法多核苷酸和多肽序列構(gòu)成有價值的信息資源，使用這樣的資源可確定它們的2維和3維結(jié)構(gòu)，并鑒定具有相似同源性的其它序列。通過將序列儲存在計算機可讀媒介中，然后使用已知大分子結(jié)構(gòu)程序的存儲數(shù)據(jù)，或采用眾所周知的檢索工具如GCG程序包檢索序列數(shù)據(jù)庫，最有利于這些方法。
            
本發(fā)明還提供的是字符序列或字符串(string)、尤其是基因序列或所編碼的蛋白序列的分析方法。優(yōu)選的序列分析方法包括例如序列同源性分析的方法(如同一性和相似性分析)、DNA、RNA和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析、序列裝配、種系發(fā)生分析、序列基序分析、確定可讀框、核酸堿基調(diào)入(nucleic acid base calling)、密碼子選擇分析、核酸堿基修整(nucleic acid base trimming)以及序列色譜峰分析。
            
為進行同源性鑒定提供基于計算機的方法。該方法包括下列步驟以計算機可讀媒介提供包含本發(fā)明多核苷酸序列的第一個多核苷酸序列；將所述第一個多核苷酸序列與至少一個第二多核苷酸或多肽序列比較，鑒定同源性。
            
還為進行同源性分析提供基于計算機的方法，所述方法包括下列步驟在計算機可讀媒介中提供包含本發(fā)明多肽的序列的第一個多肽序列；將所述第一個多肽序列與至少一種第二個多核苷酸或多肽序列比較，鑒定同源性。
            
在本說明書中引用的所有出版物和參考資料(包括但不限于專利和專利申請)通過引用完整地結(jié)合到本文中，就象具體單獨地指出各個個出版物或參考資料完全通過引用結(jié)合到本文中。同時以出版物和參考資料的上述方式將本申請要求獲得優(yōu)先權(quán)的任何專利申請通過引用完整地結(jié)合到本文中。定義“同一性”，如本領(lǐng)域所知，是指根據(jù)情況，通過比較序列而確定的兩種或兩種以上多肽序列或兩種或兩種以上多核苷酸序列之間的關(guān)系。在本領(lǐng)域內(nèi)，“同一性”也指根據(jù)情況，通過匹配所述多肽或多核苷酸序列的字符串而確定的多肽或多核苷酸的序列之間的序列相似程度。采用已知方法可以容易地計算出“同一性”，所述方法包括但不限于以下文獻中描述的方法Computational MolecularBiology，Lesk，A.M.編輯，Oxford University Press，New York，1988；BiocomputingInformatics and Genome Projects，Smith，D.W.編輯，Academic Press，New York，1993；Computer Analysis of Sequence Data，第1部分，Griffin，A.M.和Griffin，H.G.編輯，Humana Press，New Jersey，1994；Sequence Analysis in Molecular Biology，von Heine，G.，AcademicPress，1987；和Sequence Analysis Primer，Gribskov，M.和Devereux，J.，編輯，M Stockton Press，New York，1991；以及Carillo，H.和Lipman，D.，SIAM J. Applied Math.，481073(1988)。設(shè)計測定同一性的方法用來獲得所測試序列之間的最大匹配。此外，測定同一性的方法可用公眾可得到的計算機程序編纂。用于測定兩序列間同一性的計算機程序方法包括但不限于GCG程序包中的GAP程序(Devereux，J.等，Nucleic Acids Research 12(1)387(1984))、BLASTP、BLASTN(Altschul，S.F.等，J.Molec.Biol.215403-410(1990))以及FASTA(Pearson和Lipman Proc.Natl.Acad.Sci.USA 852444-2448(1988)。公眾可以從NCBI和其它來源公開地得到BLAST程序系列(BLAST Manual，Altschul，S.等，NCBI NLM NIH Bethesda，MD 20894；Altschul，S.等，J.Mol.Biol.215403-410(1990)。也可以使用眾所周知的SmithWaterman算法測定同一性。
            
用于多肽序列比較的參數(shù)包括以下參數(shù)算法Needleman和Wunsch，J.Mol Biol.48443-453(1970)比較矩陣Henikoff和Henikoff的BLOSSUM62，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.8910915-10919(1992)空位罰分8空位長度罰分2可使用這些參數(shù)的程序可以“空位(gap)”程序從GeneticsComputer Group，Madison WI公開獲得。上述參數(shù)是進行多肽比較(同時對末端空位沒有罰分)的默認參數(shù)。
            
用于多核苷酸比較的參數(shù)包括下列參數(shù)
            
算法Needleman和Wunsch，J.Mol Biol.48443-453(1970)比較矩陣匹配＝+10，錯配＝0空位罰分50空位長度罰分3可從Genetics Computer Group，Madison WI得到“空位”程序。這些參數(shù)是進行核酸比較的默認參數(shù)。
            
根據(jù)情況，下面的(1)和(2)提供多核苷酸和多肽的“同一性”優(yōu)選意義。
            
(1)多核苷酸實施方案還包括分離的多核苷酸，所述分離的多核苷酸包括與SEQ ID NO1的參比序列有至少50、60、70、80、85、90、95、97或100％同一性的多核苷酸序列，其中所述多核苷酸序列可以與SEQ ID NO1的參比序列相同，或者與所述參比序列相比，包括多至某一整數(shù)的核苷酸改變，其中所述改變選自至少一個核苷酸缺失、取代(包括堿基轉(zhuǎn)換和堿基顛換)或插入，并且其中所述改變可以發(fā)生在所述參比核苷酸序列的5′或3′末端位置或兩個末端位置間的任何地方，或者各自單獨散置于參比序列的核苷酸，或者散置于參比序列的一個或多個連續(xù)組，而且所述核苷酸改變的數(shù)量如下確定SEQ ID NO1核苷酸總數(shù)乘以定義同一性百分率的整數(shù)(除以100)，隨后從所述SEQ ID NO1核苷酸總數(shù)減去該乘積，或nn≤xn-(xn·y)其中nn是核苷酸改變的數(shù)目，xn是SEQ ID NO1核苷酸總數(shù)，y是0.50(50％)、0.60(60％)、0.70(70％)、0.80(80％)、0.85(85％)、0.90(90％)、0.95(95％)、0.97(97％)、1.00(100％)等，而·為乘法運算符號，其中將xn和y的任何非整數(shù)乘積從xn減去之前，將該乘積下舍到最近的整數(shù)。編碼SEQ ID NO2多肽的多核苷酸序列改變可能在該編碼序列中產(chǎn)生無義、錯義或移碼突變，并因此在這樣的改變后改變由所述多核苷酸編碼的多肽。
            
舉例來說，本發(fā)明的多核苷酸序列可以與SEQ ID NO1的參比序列相同，即可以100％相同，或者與所述參比序列比較，該序列包括多至某一整數(shù)的核酸改變，以致同一性百分率小于100％同一性。這樣的改變選自至少一個核苷酸缺失、取代(包括堿基轉(zhuǎn)換和堿基顛換)或插入，其中所述改變可以發(fā)生在所述參比多核苷酸序列的5’或3’末端位置或那些末端位置間的任何地方，或者各自單獨散置于參比序列的核苷酸，或者散置于參比序列的一個或多個連續(xù)組。如下確定給定百分率的核酸改變的數(shù)目SEQ ID NO1核酸總數(shù)乘以定義同一性百分率的整數(shù)(除以100)，隨后從所述SEQ ID NO1核酸總數(shù)減去該乘積，或nn≤xn-(xn·y)其中nn是核酸改變的數(shù)目，xn是SEQ ID NO1中核酸的總數(shù)，y是例如0.70(70％)、0.80(80％)、0.85(85％)等等，而·是乘法運算符號，其中將xn和y的任何非整數(shù)乘積從xn減去之前，將該乘積下舍入為最接近的整數(shù)。
            
(2)多肽實施方案還包括分離的多肽，所述分離的多肽包括與SEQ ID NO2的多肽參比序列有至少50、60、70、80、85、90、95、97或100％同一性的多肽，其中所述多肽序列可以與SEQ ID NO2的參比序列相同，或者與所述參比序列相比，包括多至某一整數(shù)的氨基酸改變，其中所述改變選自至少一個氨基酸缺失、取代(包括保守取代和非保守取代)或插入，并且所述改變可以發(fā)生在所述參比多肽序列的氨基末端或羧基末端位置或兩個末端位置間的任何地方，或者各自單獨散置于參比序列的氨基酸中，或者散置于參比序列的一個或多個連續(xù)的組，其中如下確定所述氨基酸改變的數(shù)量SEQID NO2氨基酸總數(shù)乘以定義同一性百分率的整數(shù)(除以100)，然后從所述SEQ ID NO2氨基酸總數(shù)中減去該乘積，或na≤xa-(xa·y)其中na是氨基酸改變的數(shù)目，xa是SEQ ID NO2中氨基酸的總數(shù)，y是0.50(50％)、0.60(60％)、0.70(70％)、0.80(80％)、0.85(85％)、0.90(90％)、0.95(95％)、0.97(97％)或1.00(100％)，而·是乘法運算符號，其中將xa和y的任何非整數(shù)乘積從xa減去之前，將該乘積下舍入為最接近的整數(shù)。
            
舉例來說，本發(fā)明的多肽序列可以與SEQ ID NO2的參比序列相同，即可以100％相同，或者與所述參比序列比較，該序列包括多至某一整數(shù)的氨基酸改變，以致同一性百分率小于100％同一性。這樣的改變選自至少一個氨基酸缺失、取代(包括保守取代和非保守取代)或插入，并且所述改變可以發(fā)生在所述參比多肽序列的氨基末端或羧基末端位置或這兩個末端位置間的任何地方，或者各自單獨散置于參比序列的氨基酸中，或者散置于參比序列的一個或多個連續(xù)的組，其中如下確定給定百分率同一性的氨基酸改變的數(shù)量SEQID NO2氨基酸總數(shù)乘以定義同一性百分率的整數(shù)(除以100)，然后從所述SEQ ID NO2氨基酸總數(shù)中減去該乘積，或na≤xa-(xa·y)其中na是氨基酸改變的數(shù)目，xa是SEQ ID NO2的氨基酸總數(shù)，y是例如0.70(70％)、0.80(80％)、0.85(85％)等等，而·是乘法運算符號，其中將xa和y的任何非整數(shù)乘積從xa減去之前，將該乘積下舍入為最接近的整數(shù)。
            
“個體”，當(dāng)在本文內(nèi)用以指生物時，是指多細胞真核生物，包括但不限于后生動物、哺乳動物、羊科動物(ovid)、牛科動物(bovid)、猿、靈長類動物和人類。
            
“分離”是指自然狀態(tài)的“人為”改變，即如果發(fā)生分離，那么其自然環(huán)境已改變、或已經(jīng)從其自然環(huán)境中分離出來、或者兩者兼而有之。例如作為本文使用的此術(shù)語，在活的生物中天然存在的多核苷酸或多肽并不是“分離的”，但與其天然狀態(tài)共存的物質(zhì)分開的相同多核苷酸或多肽是“分離的”。此外，通過轉(zhuǎn)化、遺傳操作或通過任何其它重組方法引入生物中的多核苷酸或多肽是“分離的”，即使它仍然存在于所述生物中，而所述生物可以是活的或非活的。
            
“多核苷酸”一般指任何多核糖核苷酸或多脫氧核糖核苷酸，它們可以是包括單鏈和雙鏈區(qū)的未修飾RNA或DNA或修飾的RNA或DNA。
            
“變異體”是指與參比多核苷酸或多肽不同但保持原有基本特性的多核苷酸或多肽。典型多核苷酸變異體的核苷酸序列與另一參比多核苷酸不同。變異體核苷酸序列的變化可以改變或可以不改變參比多核苷酸編碼的多肽的氨基酸序列。如下文所論述，核苷酸改變可能導(dǎo)致參比序列編碼的多肽的氨基酸取代、添加、缺失、融合和截短。典型多肽變異體的氨基酸序列與另一參比多肽不同。一般來說，差異是有限的，以便所述參比多肽和所述變異體的序列在總體上非常相似并在許多區(qū)是相同的。變異體和參比多肽可能由于任何組合的一個或多個取代、添加、缺失而氨基酸序列不同。取代或插入的氨基酸殘基可以是或可以不是由遺傳密碼編碼的氨基酸殘基。多核苷酸或多肽的變異體可以是天然存在變異體如等位基因變異體，或者所述變異體可以是未知的天然變異體。可以通過誘變技術(shù)或通過直接合成制備多核苷酸和多肽的非天然變異體。
            
“疾病”指任何由細菌感染引起或與細菌感染有關(guān)的疾病，包括例如上呼吸道感染以及侵入性細菌疾病，例如菌血癥和腦膜炎。
            
腦膜炎奈瑟氏球菌菌株保藏物在本文內(nèi)稱為“保藏菌株”或“保藏菌株的DNA”。
            
所述保藏菌株包含全長BASB047、BASB054、BASB068和BASB069基因。包含在所述保藏菌株內(nèi)的多核苷酸的序列以及其編碼的任何多肽的氨基酸序列在與本文序列的任何描述發(fā)生沖突的情況下，都作為對照(controlling)。
            
所述保藏菌株已經(jīng)根據(jù)國際承認用于專利程序的微生物保存布達佩斯條約的條款保藏。在專利頒發(fā)時，所述保藏菌株將不可撤回并且無限制或無條件地發(fā)放給公眾。提供所述保藏菌株僅僅是為了方便本領(lǐng)域的技術(shù)人員，而不是承認需要保藏物能夠?qū)崿F(xiàn)(enablement)，例如根據(jù)35 U.S.C.§112的要求。
            
說明書的核苷酸和氨基酸序列序列表<110>SmithKline Beecham Biologicals S.A.
            
<120>新型化合物<130>BM45352<160>8<170>FastSEQ for Windows Version 3.0<210>1<211>1203<212>DNA<213>腦膜炎奈瑟氏菌<400>1atgcgtcatt cccactattt tcaatggtta tctttgcctt tactaagtgt ggcagtaact  60cagcagttgt acgctcaacc caatgagtca ttaccaacgg ttgaattaga gcctgtggtt 120attaccattg ataagagcgg tatggcactt gccaatcgta tcacgcaaat gccccatacc 180accaaagtta tttatgaaga gcaaattcaa gagcaagcaa caggctctcg acagcttgcc 240gatgtgatgg cacagctcat tccaagtttg ggggtaagta gtggcactac cagtaacttt 300gggcaaacca tgcacggtcg tcaagtgcaa tttttgttaa atggcgtgcc tttgacaggt 360tcgcgagaca tctctagaca gcttaatagt atcaatccca atcaagtggc tagaattgaa 420gttttatcag gagcaaccag tatttatggg tctggagcaa caggcggttt gattaatatc 480gttactaagt ctgatttgga agaggagcaa tttgaaaccc gcatcggtgt acatggtagt 540aaattatcca gtgaaggtat cggttatcag gtaggtcaga gtgtagcagg tgtcagcgaa 600aatggtaatg tccttgcacg acttgatgtc gactatcgca ccacaggagg ggcatttgat 660gctaacggta aacgcatcgc tcctgagcct gcccaaactg ataagcaaga cagcaaaagc 720ctaagtgtca atacaaatgt tgattggcaa cttgacgaca agcaaaatat caatctggca 780ttgacgcatt ataacgacaa acaagatacc gattatgcac ctgattatgg taatcgcctt 840gcggtgttgt ttggagaaaa gccttcatta aatgccatca aaggcttatc attatcagaa 900cagccaaaaa ccaccaaaag cacctttaat atcaactatc atcatgatga tttgtggggt 960aacaccatca ataccaatgc ttattatcgc agagagaaag gcagatttta tccctttgtt1020gccccgtttt cgatcgccaa agccctgcct attttacaaa gcatgaattt gccatcagcc1080actttggatg cttataccaa ggctccacaa gctcgcgcct atggggtgtt acaatccgaa1140tctaaggcag aggtactagg gcgtgtccct aatttgaata agcccaaaag agccctattt1200taa  1203<210>2<211>400<212>PRT<213>腦膜炎奈瑟氏菌<400>2Met Arg His Ser His Tyr Phe Gln Trp Leu Ser Leu Pro Leu Leu Ser1   5  10  15Val Ala Val Thr Gln Gln Leu Tyr Ala Gln Pro Asn Glu Ser Leu Pro20  25  30Thr Val Glu Leu Glu Pro Val Val Ile Thr Ile Asp Lys Ser Gly Met
            
35  40  45Ala Leu Ala Asn Arg Ile Thr Gln Met Pro His Thr Thr Lys Val Ile50 55  60Tyr Glu Glu Gln Ile Gln Glu Gln Ala Thr Gly Ser Arg Gln Leu Ala65  70  75  80Asp Val Met Ala Gln Leu Ile Pro Ser Leu Gly Val Ser Ser Gly Thr85  90  95Thr Ser Asn Phe Gly Gln Thr Met His Gly Arg Gln Val Gln Phe Leu100 105 110Leu Asn Gly Val Pro Leu Thr Gly Ser Arg Asp Ile Ser Arg Gln Leu115 120 125Asn Ser Ile Asn Pro Asn Gln Val Ala Arg Ile Glu Val Leu Ser Gly130 135 140Ala Thr Ser Ile Tyr Gly Ser Gly Ala Thr Gly Gly Leu Ile Asn Ile145 150 155 160Val Thr Lys Ser Asp Leu Glu Glu Glu Gln Phe Glu Thr Arg Ile Gly165 170 175Val His Gly Ser Lys Leu Ser Ser Glu Gly Ile Gly Tyr Gln Val Gly180 185 190Gln Ser Val Ala Gly Val Ser Glu Asn Gly Asn Val Leu Ala Arg Leu195 200 205Asp Val Asp Tyr Arg Thr Thr Gly Gly Ala Phe Asp Ala Asn Gly Lys210 215 220Arg Ile Ala Pro Glu Pro Ala Gln Thr Asp Lys Gln Asp Ser Lys Ser225 230 235 240Leu Ser Val Asn Thr Asn Val Asp Trp Gln Leu Asp Asp Lys Gln Asn245 250 255Ile Asn Leu Ala Leu Thr His Tyr Asn Asp Lys Gln Asp Thr Asp Tyr260 265 270Ala Pro Asp Tyr Gly Asn Arg Leu Ala Val Leu Phe Gly Glu Lys Pro275 280 285Ser Leu Asn Ala Ile Lys Gly Leu Ser Leu Ser Glu Gln Pro Lys Thr290 295 300Thr Lys Ser Thr Phe Asn Ile Asn Tyr His His Asp Asp Leu Trp Gly305 310 315 320Asn Thr Ile Asn Thr Asn Ala Tyr Tyr Arg Arg Glu Lys Gly Arg Phe325 330 335Tyr Pro Phe Val Ala Pro Phe Ser Ile Ala Lys Ala Leu Pro Ile Leu340 345 350Gln Ser Met Asn Leu Pro Ser Ala Thr Leu Asp Ala Tyr Thr Lys Ala355 360 365Pro Gln Ala Arg Ala Tyr Gly Val Leu Gln Ser Glu Ser Lys Ala Glu370 375 380Val Leu Gly Arg Val Pro Asn Leu Asn Lys Pro Lys Arg Ala Leu Phe385 390 395 400<210>3<211>2409<212>DNA<213>腦膜炎奈瑟氏菌<400>3ttggctcgtt tattttcact caaaccactg gtgctggcat tgggcttctg cttcggcacg 60cattgcgccg ccgccgatgc cgttgcggcg gaggaaacgg acaatccgac cgccggagga120agtgttcgga gcgtgtccga acccatgcag cctgccggcc tgagcctcgg ttcgacctgc180ctgttttgca gtaacgaaag cggcaaaccc gaaaaaaccg aatctgccgt caaaggaagc 240ggcgaagggc ctgtgcccga aaaccacacg cgaattgtcg ccgacaaggt ggaagggcag 300tcgcaggtca aggtacgcgc ggagggcggc gtcgttgtcg aacgcaaccg gacgaccctt 360aatgccgact gggcggatta cgaccagtcg ggcgacaccg ttaccgtagg cgaccggttc 420gccctccaac aggacggtac gctgattcgg ggcgaaaccc tgacctacaa tctcgagcag 480cagaccggcg aagcgcacaa cgtccgcatg gaaaccgaac aaggcggacg gcggctgcaa 540agcgtcagcc gcaccgccga aatgttgggc gaagggcatt acaaactgac ggaaacccaa 600ttcaacacct gttccgccgg cgatgccggc tggtatgtca aggcagcctc tgtcgaagcc 660gatcgggaaa aaggcatagg cgttgccaaa cacgccgcct tcgtgttcgg cggcgttcct 720attttctaca ccccttgggc ggacttcccg cttgacggca accgcaaaag cggcctgctt 780gttccctcac tgtccgccgg ttcggacggc gtttcccttt ccgttcccta ttatttcaac 840cttgccccca atctcgatgc cacgttcgcg cccagcgtga tcggcgaacg cggcgcggtc 900tttgacgggc aggtacgcta cctgcggccg gattatgccg gccagtccga cctgacctgg 960ctgccgcacg acaagaaaag cggcaggaat aaccgctatc aggcgaaatg gcagcatcgg1020cacgacattt ccgacacgct tcaggcgggt gtcgatttca accaagtctc cgacagcggc1080tactaccgcg acttttacgg caacaaagaa atcgccggca acgtcaacct caaccgccgt1140gtatggctgg attatggcgg cagggcggcg ggcggcagcc tgaatgccgg cctttcggtt1200ctgaaatacc agacgctggc aaaccaaagc ggctacaaag acaaaccgta tgccctgatg1260ccgcgccttt ccgccgattg gcgcaaaaac accggcaggg cgcaaatcgg cgtgtccgca1320caatttaccc gcttcagcca cgacagccgc caagacggca gccgcctcgt cgtctatccc1380gacatcaaat gggatttcag caacagctgg ggttacgtcc gtcccaaact cggactgcac1440gccacctatt acagcctcaa ccgcttcggc agccaagaag cccgacgcgt cagccgcact1500ctacccatcg tcaacatcga cagcggcatg accttcgaac gcaatacgcg gatgttcggc1560ggagaagtcc tgcaaaccct cgagccgcgc ctgttctaca actatattcc tgccaaatcc1620caaaacgacc tgcccaattt tgattcgtcg gaaagcagct tcggctacgg gcagcttttt1680cgtgaaaacc tctattacgg caacgacagg attaacaccg caaacagcct ttccgccgcc1740gtgcaaagcc gtattttgga cggcgcgacg ggggcagagc gtttccgcgc cggcatcggg1800cagaaattct acttcaaaaa cgacgcagtc atgcttgacg gcagtgtcgg caaaaaaccg1860cgcagccgtt ccgactgggt ggcattcgcc tccagcggca tcggcagccg cttcatcctc1920gacagcagca tccactacaa ccaaaacgac aaacgcgccg agaactacgc cgtcggtgca1980agctaccgtc ccgcacaggg caaagtgctg aacgcccgct acaaatacgg gcgcaacgaa2040aaaatctacc tgaagtccga cggttcctat ttttacgaca aactcagcca gctcgacctg2100tccgcacaat ggcccctgac gcgcaacctg tcggccgtcg tccgttacaa ctacggtttt2160gaagccaaaa aaccgataga ggtgctggcg ggtgcggaat acaaaagcag ttgcggctgc2220tggggcgcgg gcgtgtacgc ccaacgctac gttaccggcg aaaacaccta caaaaacgct2280gtctttttct cacttcagtt gaaagacctc agcagtgtcg gcagaaaccc cgcagacagg2340atggatgtcg ccgttcccgg ctatatcccc gcccactctc tttccgccgg acgcaacaaa2400cggccctga2409<210>4<211>802<212>PRT<213>腦膜炎奈瑟氏菌<400>4Met Ala Arg Leu Phe Ser Leu Lys Pro Leu Val Leu Ala Leu Gly Phe1   5  10  15Cys Phe Gly Thr His Cys Ala Ala Ala Asp Ala Val Ala Ala Glu Glu20  25  30Thr Asp Asn Pro Thr Ala Gly Gly Ser Val Arg Ser Val Ser Glu Pro35  40  45Met Gln Pro Ala Gly Leu Ser Leu Gly Ser Thr Cys Leu Phe Cys Ser50  55  60Asn Glu Ser Gly Lys Pro Glu Lys Thr Glu Ser Ala Val Lys Gly Ser65  70  75  80Gly Glu Gly Pro Val Pro Glu Asn His Thr Arg Ile Val Ala Asp Lys85  90  95Val Glu Gly Gln Ser Gln Val Lys Val Arg Ala Glu Gly Gly Val Val100 105 110Val Glu Arg Asn Arg Thr Thr Leu Asn Ala Asp Trp Ala Asp Tyr Asp115 120 125Gln Ser Gly Asp Thr Val Thr Val Gly Asp Arg Phe Ala Leu Gln Gln130 135 140Asp Gly Thr Leu Ile Arg Gly Glu Thr Leu Thr Tyr Asn Leu Glu Gln145 150 155 160Gln Thr Gly Glu Ala His Asn Val Arg Met Glu Thr Glu Gln Gly Gly165 170 175Arg Arg Leu Gln Ser Val Ser Arg Thr Ala Glu Met Leu Gly Glu Gly180 185 190His Tyr Lys Leu Thr Glu Thr Gln Phe Asn Thr Cys Ser Ala Gly Asp195 200 205Ala Gly Trp Tyr Val Lys Ala Ala Ser Val Glu Ala Asp Arg Glu Lys210 215 220Gly Ile Gly Val Ala Lys His Ala Ala Phe Val Phe Gly Gly Val Pro225 230 235 240Ile Phe Tyr Thr Pro Trp Ala Asp Phe Pro Leu Asp Gly Asn Arg Lys245 250 255Ser Gly Leu Leu Val Pro Ser Leu Ser Ala Gly Ser Asp Gly Val Ser260 265 270Leu Ser Val Pro Tyr Tyr Phe Asn Leu Ala Pro Asn Leu Asp Ala Thr275 280  285Phe Ala Pro Ser Val Ile Gly Glu Arg Gly Ala Val Phe Asp Gly Gln290 295 300Val Arg Tyr Leu Arg Pro Asp Tyr Ala Gly Gln Ser Asp Leu 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515 520 525Pro Arg Leu Phe Tyr Asn Tyr Ile Pro Ala Lys Ser Gln Asn Asp Leu530 535 540Pro Asn Phe Asp Ser Ser Glu Ser Ser Phe Gly Tyr Gly Gln Leu Phe545 550 555 560Arg Glu Asn Leu Tyr Tyr Gly Asn Asp Arg Ile Asn Thr Ala Asn Ser565 570 575Leu Ser Ala Ala Val Gln Ser Arg Ile Leu Asp Gly Ala Thr Gly Ala580 585 590Glu Arg Phe Arg Ala Gly Ile Gly Gln Lys Phe Tyr Phe Lys Asn Asp595 600 605Ala Val Met Leu Asp Gly Ser Val Gly Lys Lys Pro Arg Ser Arg Ser610 615 620Asp Trp Val Ala Phe Ala Ser Ser Gly Ile Gly Ser Arg Phe Ile Leu625 630 635 640Asp Ser Ser Ile His Tyr Asn Gln Asn Asp Lys Arg Ala Glu Asn Tyr645 650 655Ala Val Gly Ala Ser Tyr Arg Pro Ala Gln Gly Lys Val Leu Asn Ala660 665 670Arg Tyr Lys Tyr Gly Arg Asn Glu Lys Ile Tyr Leu Lys Ser Asp Gly675 680 685Ser Tyr Phe Tyr Asp Lys Leu Ser Gln Leu Asp Leu Ser Ala Gln Trp690 695 700Pro Leu Thr Arg Asn Leu Ser Ala Val Val Arg Tyr Asn Tyr Gly Phe705 710 715 720Glu Ala Lys Lys Pro Ile Glu Val Leu Ala Gly Ala Glu Tyr Lys Ser725 730 735Ser Cys Gly Cys Trp Gly Ala Gly Val Tyr Ala Gln Arg Tyr Val Thr740 745 750Gly Glu Asn Thr Tyr Lys Asn Ala Val Phe Phe Ser Leu Gln Leu Lys755 760 765Asp Leu Ser Ser Val Gly Arg Asn Pro Ala Asp Arg Met Asp Val Ala770 775 780Val Pro Gly Tyr Ile Pro Ala His Ser Leu Ser Ala Gly Arg Asn Lys785 790 795 800Arg Pro<210>5<211>2016<212>DNA<213>腦膜炎奈瑟氏菌<400> 5atgaaactcg aagcaagcaa gcaagcaagc aagcagaagt ttaaaaaatc atttattata  60agtctatttt tttctattct ttatacctct ccgcttttgg ctgttgatta cgtttacgac 120aaaaccaagc tcactgatga tgaaattacc cgcttaaaaa aactccgcga tagaaatagt 180gaatattgga aagaagaaac ttatcacata aaaagtaaca accgagttta tccaaacatt 240cccgcattat tccctaaaca tcctttcgat ccattcgaaa acatcaataa ttcaaaaagg 300atttcttttt atgacaaaga atacactgaa gattaccttg ttggttttgc tcaaggttta 360ggcgttgcaa aaagaaatgg ggaaacagaa aaaccaatac ggcaatattt taaggaatgt 420ttaaacactg ggaaatatag tgatgatact tgcaaatctc aacaatctat tcctacagta 480agaagtgata ttttcgccct aaatacgaaa ataaaaaata gccatatcaa cagcgaaatt 540ttcgctgtcg gtaattatac aaaattgatg tactcagccc aacatcattc tatttggtca 600gagcatctct attccaattc agaattatct cttgacgttg ataactcaca cgttatcgga 660caaacgattg atttgggagc attagaatta acaaattctc tatgggaacc ccgttggaac 720tctaatattg attatttaat aacaaaaaat gctgaaattc gttttaacac taaaagtgaa 780agtttactcg taaaagaaga ttatgctggc ggagctcgtt ttcgttttgc ttacggtcta 840aaagataaag tccctgaaac accaatttta acttttgaaa aaaatataac tggcacatca 900gatattattt ttgagggaaa agcgttggat aatttaaaac acctagacgg gcatcaaatt 960atcaaagtaa atggcacagc agataaacac gcattccgtc tttctggcaa acaccaaaag1020ggaatttata cgctttcttt acaacaacgc ccagagggct tttttaccaa agtgcaagaa1080cgcgatgata ttgcgattta tgcacaacaa gcccaagccg ccaatacctt attcgccttg1140cgtttaaacg acaaaaacag cgatattttt gaccgcactt taccgcgcaa aggcttgtgg1200ttacgtgtga ttgacggaca ttccagccaa tgggtacaag gcaaaacggc accagtagaa1260ggaaatcgta aaggcataca acttggtggc gatgttttct cattgcaaaa tcacaactat1320caactttccg ttggcttaat gggcggacaa gcagaacaac gcagtacttt ccgcaaccca1380gatacagaca atcttacaac gggaaatgtg aaaggctttg gtgcaggcgt ttacgccact1440tggcatcagc ttcaggacaa acagacaggt gcgtatgcgg atagctgggt acaatatcaa1500cgtttccgcc accgtatcaa cactgaagat ggtacagaac gttttacttc aaaaggtatt1560actgcctcaa ttgaagcagg ttacaacgct ttattggcgg aacacgtaac taaaaagggc1620aacagccttc gtgtttacct acaaccacag gcgcaattga cttatttggg ggtaaacgga1680aaattcagcg atagcgaaaa tgcccacgtg aatttacttg gctctcgcca attacaaagc1740cgagtgggcg ttcaagctaa agctcaattt gctttcacta atggcgtcac tttccaacca1800tttgtttccg tcaattcaat ctaccaacaa aaacctttcg gggtagaaat ggacggagaa1860cgtcgagtga taaacaacaa aaccgcgatt gaaagccaat taggcgttgc ggtaaaaatt1920aaatctcact taactttaca agcaacattc aaccgccaaa caggcaaaca tcatcaagct1980aaacaaggcg cattgaattt acagtggacg ttttaa  2016<210>6<211>671<212>PRT<213>腦膜炎奈瑟氏菌<400>6Met Lys Leu Glu Ala Ser Lys Gln Ala Ser Lys Gln Lys Phe Lys Lys1   5  10  15Ser Phe Ile Ile Ser Leu Phe Phe Ser Ile Leu Tyr Thr Ser Pro Leu20  25  30Leu Ala Val Asp Tyr Val Tyr Asp Lys Thr Lys Leu Thr Asp Asp Glu35  40  45Ile Thr Arg Leu Lys Lys Leu Arg Asp Arg Asn Ser Glu Tyr Trp Lys50  55  60Glu Glu Thr Tyr His Ile Lys Ser Asn Asn Arg Val Tyr Pro Asn Ile65  70  75  80Pro Ala Leu Phe Pro Lys His Pro Phe Asp Pro Phe Glu Asn Ile Asn85  90  95Asn Ser Lys Arg Ile Ser Phe Tyr Asp Lys Glu Tyr Thr Glu Asp Tyr100 105 110Leu Val Gly Phe Ala Gln Gly Leu Gly Val Ala Lys Arg Asn Gly Glu115 120 125Thr Glu Lys Pro Ile Arg Gln Tyr Phe Lys Glu Cys Leu Asn Thr Gly130 135 140Lys Tyr Ser Asp Asp Thr Cys Lys Ser Gln Gln Ser Ile Pro Thr Val145 150 155 160Arg Ser Asp Ile Phe Ala Leu Asn Thr Lys Ile Lys Asn Ser His Ile165 170 175Asn Ser Glu Ile Phe Ala Val Gly Asn Tyr Thr Lys Leu Met Tyr Ser180 185 190Ala Gln His His Ser Ile Trp Ser Glu His Leu Tyr Ser Asn Ser Glu
            
195 200 205Leu Ser Leu Asp Val Asp Asn Ser His Val Ile Gly Gln Thr Ile Asp210 215 220Leu Gly Ala Leu Glu Leu Thr Asn Ser Leu Trp Glu Pro Arg Trp Asn225 230 235 240Ser Asn Ile Asp Tyr Leu Ile Thr Lys Asn Ala Glu Ile Arg Phe Asn245 250 255Thr Lys Ser Glu Ser Leu Leu Val Lys Glu Asp Tyr Ala Gly Gly Ala260 265 270Arg Phe Arg Phe Ala Tyr Gly Leu Lys Asp Lys Val Pro Glu Thr Pro275 280 285Ile Leu Thr Phe Glu Lys Asn Ile Thr Gly Thr Ser Asp Ile Ile Phe290 295 300Glu Gly Lys Ala Leu Asp Asn Leu Lys His Leu Asp Gly His Gln Ile305 310 315 320Ile Lys Val Asn Gly Thr Ala Asp Lys His Ala Phe Arg Leu Ser Gly325 330 335Lys His Gln Lys Gly Ile Tyr Thr Leu Ser Leu Gln Gln Arg Pro Glu340 345 350Gly Phe Phe Thr Lys Val Gln Glu Arg Asp Asp Ile Ala Ile Tyr Ala355 360 365Gln Gln Ala Gln Ala Ala Asn Thr Leu Phe Ala Leu Arg Leu Asn Asp370375 380Lys Asn Ser Asp Ile Phe Asp Arg Thr Leu Pro Arg Lys Gly Leu Trp385 390 395 400Leu Arg Val Ile Asp Gly His Ser Ser Gln Trp Val Gln Gly Lys Thr405 410 415Ala Pro Val Glu Gly Asn Arg Lys Gly Ile Gln Leu Gly Gly Asp Val420 425 430Phe Ser Leu Gln Asn His Asn Tyr Gln Leu Ser Val Gly Leu Met Gly435 440 445Gly Gln Ala Glu Gln Arg Ser Thr Phe Arg Asn Pro Asp Thr Asp Asn450 455 460Leu Thr Thr Gly Asn Val Lys Gly Phe Gly Ala Gly Val Tyr Ala Thr465 470 475 480Trp His Gln Leu Gln Asp Lys Gln Thr Gly Ala Tyr Ala Asp Ser Trp485 490 495Val Gln Tyr Gln Arg Phe Arg His Arg Ile Asn Thr Glu Asp Gly Thr500 505 510Glu Arg Phe Thr Ser Lys Gly Ile Thr Ala Ser Ile Glu Ala Gly Tyr515 520 525Asn Ala Leu Leu Ala Glu His Val Thr Lys Lys Gly Asn Ser Leu Arg530 535 540Val Tyr Leu Gln Pro Gln Ala Gln Leu Thr Tyr Leu Gly Val Asn Gly545 550 555 560Lys Phe Ser Asp Ser Glu Asn Ala His Val Asn Leu Leu Gly Ser Arg565 570 575Gln Leu Gln Ser Arg Val Gly Val Gln Ala Lys Ala Gln Phe Ala Phe580 585 590Thr Asn Gly Val Thr Phe Gln Pro Phe Val Ser Val Asn Ser Ile Tyr595 600 605Gln Gln Lys Pro Phe Gly Val Glu Met Asp Gly Glu Arg Arg Val Ile610 615 620Asn Asn Lys Thr Ala Ile Glu Ser Gln Leu Gly 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Leu Gly Ser65  70  75  80Asn Thr Arg Ser Thr Lys Ile Gly Asp Asp Ala Asp Phe Ser Phe Ser85  90  95Asp Lys Pro Lys Pro Gly Thr Ser His Tyr Phe Ser Ser Gly Lys Thr100 105 110Asp Gln Asn Ser Ser Glu Tyr Gly Tyr Asp Glu Ile Asn Ile Gln Gly115 120 125Lys Asn Tyr Asn Ser Gly Ile Leu Ala Val Asp Asn Met Pro Val Val130 135 140Lys Lys Tyr Ile Thr Asp Thr Tyr Gly Asp Asn Leu Lys Asp Ala Val145 150 155 160Lys Lys Gln Leu Gln Asp Leu Tyr Lys Thr Arg Pro Glu Ala Trp Glu165 170 175Glu Asn Lys Lys Arg Thr Glu Glu Ala Tyr Ile Glu Gln Leu Gly Pro180 185 190Lys Phe Ser Ile Leu Lys Gln Lys Ash Pro Asp Leu Ile Asn Lys Leu195 200 205Val Glu Asp Ser Val Leu Thr Pro His Ser Asn Thr Ser Gln Thr Ser210 215 220Leu Asn Asn Ile Phe Asn Lys Lys Leu His Val Lys Ile Glu Asn Lys225 230 235 240Ser His Val Ala Gly Gln Val Leu Glu Leu Thr Lys Met Thr Leu Lys245 250  255Asp Ser Leu Trp Glu Pro Arg Arg His Ser Asp Ile His Thr Leu Glu260 265 270Thr Ser Asp Asn Ala Arg Ile Arg Leu Asn Thr Lys Asp Glu Lys Leu275 280 285Thr 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450 455 460Ser Arg Leu Ala Ile Gly Val Met Gly Gly Arg Ala Gly Gln His Ala465 470 475 480Ser Val Asn Gly Lys Gly Gly Ala Ala Gly Ser Tyr Leu His Gly Tyr485 490 495Gly Gly Gly Val Tyr Ala Ala Trp His Gln Leu Arg Asp Lys Gln Thr500 505 510Gly Ala Tyr Leu Asp Gly Trp Leu Gln Tyr Gln Arg Phe Lys His Arg515 520 525Ile Asn Asp Glu Asn Arg Ala Glu Arg Tyr Lys Thr Lys Gly Trp Thr530 535 540Ala Ser Val Glu Gly Gly Tyr Asn Ala Leu Val Ala Glu Gly Val Val545 550 555 560Gly Lys Gly Asn Asn Val Arg Phe Tyr Leu Gln Pro Gln Ala Gln Phe565 570 575Thr Tyr Leu Gly Val Asn Gly Gly Phe Thr Asp Ser Glu Gly Thr Ala580 585 590Val Gly Leu Leu Gly Ser Gly Gln Trp Gln Ser Arg Ala Gly Ile Arg595 600 605Ala Lys Thr Arg Phe Ala Leu Arg Asn Gly Val Asn Leu Gln Pro Phe610 615 620Ala Ala Phe Asn Val Leu His Arg Ser Lys Ser Phe Gly Val Glu Met625 630 635 640Asp Gly Glu Lys Gln Thr Leu Ala Gly Arg Thr Ala Leu Glu Gly Arg645 650 655Phe Gly Ile Glu Ala Gly Trp Lys Gly His Met Ser Ala Arg Ile Gly660 665 670Tyr Gly Lys Arg Thr Asp Gly Asp Lys Glu Ala Ala Leu Ser Leu Lys675 680 685Trp Leu Phe690
            
權(quán)利要求
            
1.一種分離的多肽，它包含與選自SEQ ID NO2、SEQ ID NO4、SEQ ID NO6、SEQ ID NO8的氨基酸序列有至少85％同一性的氨基酸序列。
            
2.權(quán)利要求1要求保護的分離多肽，其中所述氨基酸序列與選自SEQ ID NO2、SEQ ID NO4、SEQ ID NO6、SEQ ID NO8的氨基酸序列有至少95％同一性。
            
3.權(quán)利要求1要求保護的多肽，所述多肽包含選自SEQ ID NO2、SEQ ID NO4、SEQ ID NO6、SEQ ID NO8的氨基酸序列。
            
4.一種分離的多肽，它為SEQ ID NO2、SEQ ID NO4、SEQ IDNO6或SEQ ID NO8的多肽。
            
5.權(quán)利要求1到4任一項要求保護的多肽的免疫原性片段，其中所述免疫原性片段的免疫原性活性基本上與SEQ ID NO2、SEQ IDNO4、SEQ ID NO6或SEQ ID NO8的多肽的免疫原性活性相同。
            
6.一種分離的多核苷酸或與該分離的多核苷酸互補的核苷酸序列，所述分離的多核苷酸包含這樣的核苷酸序列它編碼分別在SEQID NO2、4、6或8的全長上與SEQ ID NO2、4、6或8的氨基酸序列有至少85％同一性的多肽。
            
7.一種分離的多核苷酸或與該分離的多核苷酸互補的核苷酸序列，所述分離的多核苷酸包含這樣的核苷酸序列它在整個編碼區(qū)上與編碼SEQ ID NO2、4、6或8多肽的核苷酸序列有至少85％同一性。
            
8.一種分離的多核苷酸或與該分離的多核苷酸互補的核苷酸序列，所述分離的多核苷酸包含分別在SEQ ID NO1、3、5或7的全長上與SEQ ID NO1、3、5或7的核苷酸序列有至少85％同一性的核苷酸序列。
            
9.權(quán)利要求6到8任一項要求保護的分離的多核苷酸，其中與SEQ ID NO1、3、5或7的同一性至少為95％。
            
10.一種分離的多核苷酸，它包含編碼SEQ ID NO2、SEQ ID NO4、SEQ ID NO6或SEQ ID NO8的多肽的核苷酸序列。
            
11.一種分離的多核苷酸，它包含SEQ ID NO1、SEQ ID NO3、SEQ ID NO5或SEQ ID NO7的多核苷酸。
            
12.一種分離的多核苷酸，它包含編碼SEQ ID NO2、SEQ ID NO4、SEQ ID NO6或SEQ ID NO8的多肽的核苷酸序列，所述核苷酸序列可以通過在嚴(yán)格雜交條件下使用具有SEQ ID NO1、SEQ ID NO3、SEQ ID NO5、SEQ ID NO7的序列或其片段的標(biāo)記探針篩選合適文庫而獲得。
            
13.一種表達載體或重組活微生物，它們包含依照權(quán)利要求6到12任一項的分離多核苷酸。
            
14.一種包含權(quán)利要求13的表達載體的宿主細胞或所述宿主細胞的亞細胞部分或膜，它們表達一種分離多肽，所述分離多肽包含與選自SEQ ID NO2、SEQ ID NO4、SEQ ID NO6、SEQ ID NO8的氨基酸序列有至少85％同一性的氨基酸序列。
            
15.一種產(chǎn)生多肽的方法，所述多肽包含與選自SEQ ID NO2、SEQ ID NO4、SEQ ID NO6、SEQ ID NO8的氨基酸序列有至少85％同一性的氨基酸序列，所述方法包括在足以產(chǎn)生所述多肽的條件下培養(yǎng)權(quán)利要求14的宿主細胞，然后從培養(yǎng)基中回收所述多肽。
            
16.一種表達權(quán)利要求6到12任一項的多核苷酸的方法，所述方法包括用包含至少一種所述多核苷酸的表達載體轉(zhuǎn)化宿主細胞，然后在足以表達任何一種所述多核苷酸的條件下培養(yǎng)所述宿主細胞。
            
17.一種疫苗組合物，它包含有效量的權(quán)利要求1到5任一項的多肽以及一種藥學(xué)上可接受的載體。
            
18.一種疫苗組合物，它包含有效量的權(quán)利要求6到12任一項的多肽以及一種藥學(xué)上可接受的載體。
            
19.依照權(quán)利要求17或18中任一項的疫苗組合物，其中所述組合物包含至少一種其它腦膜炎奈瑟氏球菌抗原。
            
20.一種抗體，它為權(quán)利要求1到5任一項要求保護的多肽或免疫片段的免疫特異性抗體。
            
21.一種診斷腦膜炎奈瑟氏球菌感染的方法，所述方法包括用懷疑受到這樣的感染的動物的生物樣品，鑒定權(quán)利要求1到5任一項要求保護的多肽或該多肽的免疫特異性抗體的含量。
            
22.一種組合物在制備用于在動物體內(nèi)產(chǎn)生免疫應(yīng)答的藥物中的用途，所述組合物包含免疫有效量的權(quán)利要求1到5任一項要求保護的多肽。
            
23.一種組合物在制備用于在動物體內(nèi)產(chǎn)生免疫應(yīng)答的藥物中的用途，所述組合物包含免疫有效量的權(quán)利要求6到12任一項要求保護的多核苷酸。
            
24.一種用于治療患有腦膜炎奈瑟氏球菌病的病人的治療組合物，該組合物包含至少一種針對權(quán)利要求1到5的多肽的抗體以及一種合適的藥用載體。
            
全文摘要
            
本發(fā)明提供BASB047、BASB054、BASB068和BASB069多肽,編碼BASB047、BASB054、BASB068和BASB069多肽的多核苷酸以及通過重組技術(shù)產(chǎn)生這樣的多肽的方法。還提供診斷、預(yù)防和治療用途。
            
文檔編號C12N5/10GK1375006SQ00805181 
            
公開日2002年10月16日 申請日期2000年1月19日 優(yōu)先權(quán)日1999年1月22日
            
發(fā)明者J·L·呂勒 申請人:史密絲克萊恩比徹姆生物有限公司
            
                        
            
                        
            
                        
            
                            
                        
            

                        
                            
                    
            
                    
                    


                     
                        
                        
                    

                
            

                
                
            
                    
            
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