專利名稱：一種利用酶切分析技術將核酸應用于防偽的方法
技術領域：
本發(fā)明公開一種利用酶切分析技術將核酸應用于防偽的方法，屬于生物防偽技術領域。
常用的防偽技術包括激光全息防偽、磁性防偽、條形碼防偽、熒光防偽、隱形防偽、核隱形防偽、等離子隱形防偽、紫外光防偽、噴碼防偽、溫致變防偽、計算機編碼防偽等等。
傳統(tǒng)的防偽標記大多是物理或化學性質的制品，如光學變色膜、圖象擾頻、熱變油墨、磁條、軟件等。
目前國際上開始將生物技術利用于防偽上，形成了多樣的生物防偽技術和相應的生物防偽標記。這些防偽技術主要采用抗原抗體反應原理，比一般的防偽技術準確、靈敏。由于抗原抗體是蛋白質，穩(wěn)定性較差，尤其在高溫環(huán)境中容易失活，從而降低防偽的靈敏度和可靠性。此外，抗原抗體反應變化少，一旦知道其中一種成分，就容易被仿制。
本發(fā)明的一個目的是在生物防偽的技術領域克服已有標記容易被仿制的缺陷，設計出將核酸酶切分析技術應用于防偽的方法。
本發(fā)明的另一個目的是提供一種新的防偽標記及檢測其真?zhèn)蔚姆椒ā?br>
本發(fā)明提供了一種新的防偽技術和防偽標記，其核心是生物大分子——核酸。一切生命的基本遺傳物質(基因)都是核酸，也就是脫氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)核酸是由四種堿基交互排列組成，其排列組合的差異，形成地球上生命類型的多樣性。一條含有1000個堿基對(1kb)的DNA鏈就可能有10603種排列組合方式。現(xiàn)在自然界的生物種類(動植物和微生物)在一百萬種以上，因此可以利用作防偽的天然生物基因數(shù)不勝數(shù)。每個物種基因級的長度一般均大于104至106kb。假若設定用1kb長度的核酸作防偽標記，則可供選擇的核酸密碼就有105×(104--106)＝1010--1012之多。因此核酸中所包含的的海量信息為防偽技術提供了取之不盡的來源。利用核酸密碼序列這樣巨大的信息量可以有數(shù)以億萬計的密碼可用于防偽標記。
酶切的原理為限制性內切酶可以特異識別DNA分子上4～6個具有回文對稱性質的堿基，在這個識別位點處切斷DNA。不同的DNA分子經同一種限制性內切酶處理產生的片段大小不同，這些片段可以通過瓊脂糖凝膠電泳而分離，經染色顯示出不同的條帶，即為不同大小的酶切片段，與標準分子量標記物Marker比較即可確定各個片段的大小。
不同的限制性內切酶識別位點不同，在同一DNA分子上的酶切位點不同，產生的DNA片段不同。一段DNA序列往往可以包含多種限制性內切酶的酶切位點，從而可以以多種限制性內切酶加以鑒定，保證了鑒定結果的可靠性。
本發(fā)明是將篩選的一段核酸(可以是DNA，或是RNA)，以一定量(可少到10-8克)固定到固相載體上。固相載體可以是各種各樣的材料，如各種天然或人造纖維制成的紙張或薄膜、多孔顆?；蚍勰?，天然或合成的皮革、塑料或各種有機或無機多聚體和樹脂、固體石臘、天然或合成的無機物質如陶瓷、玻璃、水晶、金屬、硅藻土等。各種油墨和涂料也可作為防偽核酸的載體。
為了達到保護固相載體上作為防偽標記的核酸的目的，可以在含有核酸的固相載體表面加上保護層，例如可用塑料薄膜，海藻糖等制成保護層。這種核酸防偽標記可固定在商品或物件上或其包裝物及附屬物上。
當需要檢驗辨別真?zhèn)螘r，將本發(fā)明的防偽標記揭去保護層，將核酸溶于一定量的緩沖液中，在加入特定的限制性內切酶和反應緩沖液后，在37℃水浴中進行酶切反應1～2小時。反應結束后取出一部分反應液進行電泳分析。其產物應是幾個預定大小的DNA片段，可用瓊脂糖凝膠電泳分離，然后用溴乙錠染色，紫外燈下觀察和鑒定。
將防偽標記上核酸酶切分析出的結果與已知的酶切分析結果比較，即能判定防偽標記的真假。如果兩者酶切得到的片斷在大小、數(shù)量上一致，則認為防偽標記為真，否則為假。
利用核酸制作防偽標記有如下優(yōu)點1.不可仿制性首先核酸密碼無色，肉眼難以看到，其次，密碼來自自然界龐大的基因庫，即使知道是基因的密碼但不知是哪一種，仿冒者也無法破譯和仿造。而對檢驗人員來說，只要以專用的分析方法測試，真?zhèn)蝿t一目了然。
2.可靠性只有按預定的核酸密碼設計的探針或PCR引物進行檢驗，才有可能探測出密碼的存在與密碼的種類，所以核酸密碼具有極高的專一性。
3.多樣性可以很容易設計出千萬種核酸密碼作為防偽標記，每種都有自身相應的探針和引物，互不通用。所以核酸密碼可為多種多樣的商品和物件分別提供獨特的防偽標記體系。
4.穩(wěn)定性核酸(特別是DNA)穩(wěn)定，特別是干燥的DNA存放經久，不易分解，適于一些長期保存物件的防偽。
5.廣泛的適用性核酸密碼只需極微量(10-8-10-10克)存在于商品或物件中即可探測出來，因此適用于種類貴重的商品和物件。如科學儀器和家用電器；高檔服裝、家具及文體、文娛用品；高級煙酒、食品及營養(yǎng)品；農業(yè)和園藝的珍奇或重要種子；重要的證件和文件；經鑒定的珍貴文物和藝術品等等，幾乎所有固態(tài)的物件上都可適用。
本發(fā)明提供一張附圖
圖1為酶切分析技術所獲得的核酸信息，大小不同的片斷是酶切的結果。
下面結合附圖就利用酶切分析技術將核酸應用于防偽提出一項實施例。
2.反應溫度和時間37℃水浴1～2小時。
3.電泳分離取10微升反應液，置2％瓊脂糖凝膠(含溴乙錠染料)中，用100V直流電壓電泳，電泳后將瓊脂糖凝膠取出，置于250～300nm波長紫外燈下觀察并攝影。
4.鑒定如圖2所示顯示預定大小的DNA酶切片段，以這些條帶是否存在和大小是否正確來鑒別物件的真?zhèn)巍Ｎ达@示條帶或條帶大小不對則為贗品。
權利要求
1.一種利用酶切分析技術將核酸應用于防偽的方法，其特征在于將核酸或其片斷，固定在固相載體上用來作為防偽標記，利用酶切分析技術檢驗真?zhèn)巍?br>
2.如權利要求1所述的防偽標記，其特征在于所述的防偽標記可直接固定在任何固態(tài)的物體上。
3.如權利要求1所述的防偽標記，其特征在于所述的防偽標記可以加覆塑料薄膜或海藻糖等保護層。
4.如權利要求1所述的固相載體，其特征在于所述的固相載體可以是天然或人造纖維、紙張、薄膜、皮革、塑料、多孔顆粒、粉末、樹脂、固體石臘、陶瓷、玻璃等有機或無機的固態(tài)材料。
5.如權利要求1所述的檢驗防偽標記真?zhèn)蔚姆椒?，其特征在于根據防偽標記上核酸的酶切分析結果與已知的核酸酶切結果比較，即能判定防偽標記的真假。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種新的將核酸應用于防偽的方法,將核酸制成防偽標記并利用酶切分析技術檢測出真?zhèn)巍１景l(fā)明還公開了以此技術制作防偽標記的方法。本發(fā)明還公開了這種新方法的用途。
文檔編號C12Q1/68GK1368554SQ0012549
公開日2002年9月11日 申請日期2001年1月31日 優(yōu)先權日2001年1月31日
發(fā)明者毛裕民, 謝毅 申請人:上海博德基因開發(fā)有限公司