專利名稱：一種核酸分子雜交的方法
技術領域：
本發明涉及一種核酸分子雜交的方法。
核酸包括核糖核酸(RNA)及脫氧核糖核酸(DNA)。核酸的基本單位是含堿基的核苷酸。相互補的核酸分子鏈通過堿基配對構成雙鏈的分子結構，這一過程叫分子雜交。當已知序列的單鏈核酸與另一核酸鏈形成雙鏈結構時，可根據已知的堿基序列推解出與之互補的分子鏈的堿基序列。這一分子識別方法可用于遺傳檢測、醫療診斷、環境監控和保護以及促進社會治安等。一種廣泛使用的核酸分子雜交方法是把已知序列的核酸樣品固定于固體物質上，所被固定的已知核酸稱為固相探針。然后把溶于水相的核酸樣品(稱液相樣品)與固相探針接觸，使液相樣品中的互補核酸分子與固相探針形成雜交分子，根據雜交分子發出信號的位置及信號的強弱判斷液相樣品核酸分子的結構特征及其量的信息。一般情況下核酸分子為雙鏈或部分雙鏈結構，在高溫下雙鏈分子會分裂成單鏈的分子，這一過程叫作變性。在進行分子雜交前，液體樣品必須進行變性處理以使液相樣品中的單鏈核酸分子與固樣的單鏈探針分子雜交。在大多情況下經變性處理后液相樣品中的互補分子鏈可相互雜交，因而減少了與固相探針雜交的機會，造成了雜交信號弱，檢測的靈敏度低。
本發明的目的是提供一種核酸分子雜交的方法，它能克服現有技術的上述不足。
一種核酸分子雜交的方法，包括對液相樣品進行變性處理，并使液相的核酸樣品與固相探針接觸，形成固相雙鏈雜交分子，其特征是在雜交過程中，液相樣品被移離固相樣品，進行變性處理，并重復雜交過程。
本發明的優點是減少液相樣品中雙鏈雜交分子的形成，增加固相雜交分子的數量，從而提高信號強度和分子檢測的靈敏度。
下面通過實施例說明本發明。
一密封式基因芯片，其內有檢測甲、乙、丙三種肝炎病毒的DNA固相探針，該芯片有二個開口，液體樣品可由這二個開口出入芯片。用此芯片對一病人血樣進行檢測。首先把核酸從血樣中提純出來，把核酸中的靶分子進行擴增，并用熒光素對靶分子進行標記。把標記后的樣品溶于緩沖液中，把這液相樣品加熱至95℃進行變性處理，10分鐘后冷卻致45℃，然后把這樣品注入芯片內與固相探針進行分子雜交。10分鐘后，把液相樣品抽出，重復上述加熱及冷卻過程，再把重復變性的液相樣品注入芯片。不斷重復上述熱變性和雜交過程，二小時后把液相樣品清除，用緩沖液清洗去非特異性雜交的核酸分子。最后用激光掃描儀檢測芯片內的雜交分子信號，并得出診斷結論。
權利要求
1.一種核酸分子雜交的方法，包括對液相樣品進行變性處理，并使液相的核酸樣品與固相探針接觸，形成固相雙鏈雜交分子，其特征是在雜交過程中，液相樣品被移離固相樣品，進行變性處理，并重復雜交過程。
全文摘要
一種核酸分子雜交的方法,包括對液相樣品進行變性處理,并使液相的核酸樣品與固相探針接觸,形成固相雙鏈雜交分子,其特征是在雜交過程中,液相樣品被移離固相樣品,進行變性處理,并重復雜交過程。本發明的優點是減少液相樣品中雙鏈雜交分子的形成,增加固相雜交分子的數量,從而提高信號強度和分子檢測的靈敏度。
文檔編號C12Q1/68GK1351175SQ0012398
公開日2002年5月29日 申請日期2000年10月28日 優先權日2000年10月28日
發明者吳昌, 吳明 申請人:吳昌, 吳明