從植物原料中分離和回收蛋白質和異黃酮的方法

專利名稱：從植物原料中分離和回收蛋白質和異黃酮的方法
技術領域：
本發明涉及從含蛋白質和異黃酮的植物原料中分離和回收蛋白質和異黃酮的方法，更具體說，本發明涉及使用離子交換從植物原料中分離和回收蛋白質和異黃酮的方法。
植物蛋白提供了世界范圍的重要營養源。例如，大豆是動物和人類的極好營養來源。大豆蛋白可從大豆中工業化提取，得到的蛋白質便宜、高營養源。分離出的大豆蛋白因其營養價值以及蛋白質提供給食品或飲料的功能特性可用于很多飲食用途中。使用大豆蛋白的一些常見食品包括肉餡、乳化肉和腌泡肉；飲料，如營養飲料、運動飲料、強化蛋白飲料、果汁、乳、乳代用品和減肥飲料；干酪，如硬質干酪和軟質干酪、乳脂干酪和酪農干酪；冷凍甜點，如冰淇凌、冰乳、低脂肪冷凍甜點和非乳冷凍甜點；酸奶；湯；布丁；焙烤制品；色拉調料；以及調味汁和涂抹料，如蛋黃醬和酸飲料(chipdip)。
某些植物如大豆、豌豆、菜豆和其它豆類中含有異黃酮和蛋白質。異黃酮是植物雌激素化合物，據發現其可提供人類各種保健作用。例如，大豆中存在的異黃酮是染料木黃酮、黃豆苷原、黃豆黃素(glycitein)、芒柄花黃素(見式1)，和其天然配糖體和配糖體共軛物(見式2)。這里所說的“Mal”為“丙二酰”且“Ac”為“乙酰”。在除大豆外的植物中發現的另一種生物活性異黃酮是生原禪寧A(見式1)。式1
式2
和異黃酮有關的保健作用有很多，并且仍在繼續發現中。例如，一些異黃酮據發現可抑制乳腺癌和前列腺癌的發育，并且可減少乳腺癌和前列腺癌細胞的編程性死亡。從大豆中提取的異黃酮還據發現可抑制動脈粥樣硬化的發展，降低總膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇的血清濃度，減少或抑制絕經癥狀，抑制阿耳茨海默氏病，抑制因骨質疏松引起的骨質流失。
異黃酮與異黃酮化合物含量明顯的豆類的苦、豆味有關。因此，人們期望從含異黃酮和蛋白質的植物原料中分離和回收去除了異黃酮的愉快味道的蛋白質原料和具保健作用的異黃酮。
現有技術中已知有從含蛋白質和異黃酮的植物材料中分離異黃酮的方法。例如，U.S.專利5,679,806提供了一種從植物材料中提取、分離和純化異黃酮的方法，該方法用醇溶劑提取植物材料以便從植物材料中提取異黃酮；讓含異黃酮的醇提取物吸附在反相基質上，接著通過梯度洗脫從基質中進行特定的異黃酮解吸，其中異黃酮從回收的洗脫液中結晶。JP專利1-258669提供了一種方法，將大豆浸泡在溫水中讓異黃酮轉變成其糖苷配基的形式；然后用含水醇從大豆原料中回流提取糖苷配基異黃酮；將提取的液體冷凝并且干燥；將干燥的原料溶解于醇并吸附于反相樹脂；并且用含水醇從樹脂中洗脫異黃酮。
這些方法盡管令人滿意地從植物材料中分離和純化了異黃酮，但沒有提供從這些含異黃酮和蛋白質二者的植物材料中回收純化的蛋白質原料和異黃酮的方法。上述兩方法均使用了醇溶劑從植物材料中提取異黃酮。植物蛋白例如大豆蛋白是基本上不溶于醇溶液的，并且被作為與其它醇不溶性植物材料如植物纖維材料一同作為醇提取的副產品殘余物留下。
U.S.專利4,428,876(’876專利)提供了一種從含黃烷酮類化合物(flavanoid)和蛋白質的植物材料中分離植物蛋白和黃烷酮類化合物包括異黃酮在內的方法。用堿水溶液提取植物材料，形成含黃烷酮類化合物和蛋白質的提取物，并且將提取物與不可提取的和不溶的植物材料分離。將提取物就此或者經過酸化后加至非極性或弱極性吸附劑樹脂上，以便將黃烷酮類化合物吸附在樹脂上。酸化造成蛋白質從提取物中沉淀。如果經過酸化，則在將提取物施加至樹脂上之前從提取物中分離出沉淀的蛋白質。將提取物施加至樹脂上之后，用水洗脫樹脂，并且收集洗脫液得到含碳水化合物的洗脫液，如果提取物沒有經過酸化，則洗脫液中還含有蛋白質。如果在施加至樹脂之前沒有從提取物中沉淀和分離蛋白質，則將該水洗脫液酸化，沉淀和分離蛋白質。然后通過用諸如甲醇或乙醇的極性溶劑洗脫樹脂，并且收集和濃縮洗脫液，來從樹脂中分離黃烷酮類化合物。
使用’876專利的方法，由于異黃酮的性質和本方法所用樹脂和洗脫劑，異黃酮和碳水化合物/蛋白質沒有徹底分開。如式1和2所示，異黃酮是具相對極性的化合物，特別是其天然配糖體或配糖體共軛物的形式。因其極性，異黃酮微弱地吸附到非極性或弱極性樹脂上。在含水環境中，蛋白質和碳水化合物也是具相對極性的化合物，其與樹脂的結合性不很強。因此，異黃酮、碳水化合物和蛋白質與樹脂的吸附，其本身并不能有效達到用溶劑洗脫樹脂時化合物的良好分離，因為化合物容易從樹脂中置換出來，并且它們與樹脂的相互作用彼此沒有特別的差異。
由于異黃酮在洗脫劑中有相對的溶解性，’876專利的方法可將一些異黃酮與蛋白質和碳水化合物分離。例如，如果最初使用的洗脫劑是水，提取物是大豆的提取物(其中包含異黃酮染料木黃酮和黃豆苷)，則染料木黃酮會隨蛋白質和碳水化合物少量地洗脫出來，因為染料木黃酮僅微溶于水，而黃豆苷會隨蛋白質和碳水化合物洗脫出來，因為黃豆苷可溶于水。
因此，現在所需要的是一種從含異黃酮和蛋白質的植物材料中徹底分離和回收蛋白質和異黃酮的有效的、工業上可行的方法。
本發明提供一種從植物材料中分離和收集異黃酮和蛋白質的改進的方法，該方法可有效和經濟地以工業規模進行。該方法涉及分離和收集異黃酮和植物蛋白，通過將含異黃酮和蛋白質的澄清的植物蛋白提取物與極性離子交換樹脂接觸；讓異黃酮與極性離子交換樹脂結合；從離子交換樹脂中分離和回收去除了異黃酮的蛋白質提取物；并且從離子交換樹脂中分離和回收異黃酮。在優選的實施方案中，分離和回收的異黃酮被轉變成其糖苷配基形式。
本發明的一個重要特點是通過將澄清的植物蛋白提取物與極性離子交換樹脂接觸來從植物蛋白中分離異黃酮，而不是與非極性或弱極性的樹脂接觸。使用極性離子交換樹脂大大有助于徹底分離和收集蛋白質和異黃酮，因為異黃酮因其極性而穩固吸附在極性樹脂上，并且當提取物通過樹脂洗脫時很好地與蛋白質區分開。
本發明的另一個重要特點在于同時收集到去除異黃酮的蛋白質原料和異黃酮，而不僅僅是其中一種物質。本發明使用澄清的蛋白質提取物作為要與極性離子交換樹脂接觸的底物。澄清的蛋白提取物，與含異黃酮和蛋白質的植物材料醇提取物不同，同時含有大量的蛋白質和異黃酮。由于可以同時分離和回收植物材料中的兩種所需的物質，本發明的方法可以取得明顯的經濟效益。
本發明方法所用的澄清植物蛋白提取物的制備可以是通過用pH大于蛋白質等電點的含水提取劑提取含蛋白和異黃酮的植物材料來制備，從而使蛋白質和異黃酮溶解到提取劑中。然后，將含溶解異黃酮和蛋白質的液體提取劑與不溶于提取劑的植物物質(如木酚素、纖維素、植物纖維和不溶性半纖維素)分離，形成澄清的提取物。優選，通過過濾或通過離心并且從不溶物中傾析上清提取物來將澄清的提取物與不溶植物物質分離。所得的澄清蛋白提取物中含有來自植物材料的可溶蛋白質、和至少一種選自染料木黃酮、黃豆苷原、黃豆黃素、生原禪寧A、芒柄花黃素、及其天然配糖體和配糖體共軛物的異黃酮化合物，并且基本上不含不溶性蛋白質物質。這里所說的異黃酮配糖體是指包括葡萄糖部分的化合物，其中所說的葡萄糖部分與糖苷配基異黃酮部分共價鍵合，并且異黃酮配糖體共軛物是指異黃酮配糖體酯，并且包括化合物6”-O-Mal染料木苷、6”-O-Ac染料木苷、6”-O-Mal黃豆苷、6”-O-Ac黃豆苷和6”-O-Mal大豆異黃酮。
可用于形成澄清提取物的含蛋白質和異黃酮的植物材料包括但不限于以下植物原料的一種或幾種大豆、鷹嘴豆、落花生、marama豆、刀豆、洋刀豆(jack bean)、海濱刀豆、carao豆、簇豆(cluster)、眉豆、草豆(grass pea)、四季豆、金可豆(djenko bean)、四棱豆(goa bean)、豆薯、蠶豆、earth pea、小扁豆、跳豆(jumping bean)、絨毛豆(velvetbean)、非洲角豆、其它豆類，以及這些植物原料的衍生物，包括脫脂大豆坯、大豆粉、大豆面。首選的植物原料是大豆原料或大豆的衍生物，首選的可商購獲得的是脫脂大豆坯，因為大豆中存在高含量的蛋白質和異黃酮。
在一個首選的實施方案中，制備用于本發明方法的澄清大豆蛋白提取物。使用可商購獲得的大豆粉、大豆面、大豆粗粉或脫脂大豆坯作為起始原料。優選，大豆原料經過亞硫酸鹽如亞硫酸鈉處理過，以便具有改進的流動性和改進的微生物控制性。用pH為約6-約12的水溶液提取大豆原料，優選pH為約8-約11的氫氧化鈉水溶液。提取劑與大豆原料的重量比為約3∶1至約20∶1，優選約8∶1至約16∶1。優選通過過濾、或者通過離心和從不溶物質中傾析提取物，從不溶大豆原料中分離澄清大豆蛋白提取物。
根據本發明的方法，將澄清的蛋白提取物與極性離子交換樹脂接觸，以便讓提取物中的異黃酮與樹脂結合。優選，將樹脂裝入具有入口端和出口端的柱中，其中通過從柱的入口端將提取物填充到樹脂上來使提取物與樹脂接觸，并且在柱的出口端從樹脂中收集洗脫的提取物。
優選，本方法使用陰離子交換樹脂，首選Ⅱ型大孔強堿陰離子交換樹脂，也可以使用弱堿陰離子交換樹脂。這里所說的Ⅱ型強堿陰離子交換樹脂定義為季銨型樹脂，其中氮原子上的四個取代基為乙醇基、兩個甲基和聚合芐基可商購獲得的Ⅱ型強堿陰離子交換樹脂包括Rohm& Haas的IRA 910,Independence Mall West,Philadelphia,PA 19105；Dow化學公司U.S.A.的Dowex 22,2040 Willard H.Dow Center,Midland MI 48674；和Sybron的Ionac A651,Sybron化學部，Birmingham Road,Birmingham,NJ08011。可用于本發明方法的可商購獲得的弱堿陰離子交換樹脂是Rohm& Haas的Duolite A-7。
調節極性陰離子交換樹脂的適宜方法見U.S.專利5,248,804，該專利引入作為參考。調節陰離子交換樹脂的優選技術是將樹脂暴置于可剝離樹脂表面殘余物并將樹脂轉變成氫氧化物形式的試劑中，之后將樹脂暴置于可將樹脂轉變成氯化物形式或硫酸鹽形式的試劑中，之后將樹脂暴置于可將至少一些強堿部位轉變成碳酸鹽形式和將弱堿部位轉變成游離堿形式的試劑中。剝離樹脂表面殘余物并將樹脂轉變成氫氧化物形式的適宜試劑是氫氧化鈉溶液，將樹脂轉變成氯化物形式的適宜試劑是鹽酸，優選1％鹽酸溶液，并且將樹脂轉變成硫酸鹽形式的適宜試劑是硫酸，優選1％硫酸溶液。將至少一些強堿部位轉變成碳酸鹽形式和將弱堿部位轉變成游離堿形式的適宜試劑的實例包括碳酸鈉、碳酸氫鈉和氫氧化銨。
在澄清蛋白提取物與離子交換樹脂接觸以便讓異黃酮與樹脂結合之后，從離子交換樹脂中分離和收集去除異黃酮的蛋白提取物，優選通過用調整至提取物pH的水溶液洗脫樹脂，并且收集洗脫液。在一個優選的實施方案中，澄清提取物中至少大部分的蛋白質原料被收集在洗脫液中，成為去除異黃酮的蛋白提取物。首選，澄清提取物中基本上所有的蛋白質原料被收集在洗脫液中，作為去除了異黃酮的蛋白質提取物，這里“基本上所有”定義為至少80％，更優選至少90％。如果需要，可以通過將提取物噴霧干燥，從提取物中回收去除異黃酮的蛋白原料。
在一個優選的實施方案中，可以由從離子交換樹脂分離和回收的、含去除異黃酮的蛋白質的提取物中沉淀去除異黃酮的蛋白原料。將提取物pH調整至約蛋白質的等電點，以便沉淀蛋白質。如果提取物中的蛋白質是大豆蛋白，則可以將提取物調整至pH為約4-約5來沉淀蛋白質。然后，可以通過將含沉淀蛋白的提取物的pH整至約7，來中和沉淀的蛋白質。然后，沉淀的蛋白質，無論中和過與否，通過常規方式從提取物的液體部分中分離出來，優選通過過濾，或者通過離心并從蛋白質沉淀中傾析掉提取物的液體部分。然后通過常規方式將分離的去除異黃酮的蛋白原料干燥，優選通過噴霧干燥。
在從離子交換樹脂中分離含去除異黃酮的蛋白質的提取物之后，從樹脂中分離和收集異黃酮，優選通過用溶劑洗脫樹脂，所說的溶劑選自甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、異丁醇、丁醇、乙酸乙酯、乙腈、丙酮、上述溶劑的含水混合物、二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、或上述溶劑的任意混合物，并且收集含異黃酮的洗脫液。在一個優選的實施方案中，在含異黃酮的洗脫液中從離子交換樹脂收集到澄清蛋白提取物中的至少大部分的異黃酮，并且更優選在含異黃酮的洗脫液中收集到澄清蛋白提取物中的基本上所有的異黃酮，這里“基本上所有”定義為至少80％、更優選至少90％。
通過濃縮含異黃酮的洗脫液，可以從由樹脂分離的含異黃酮的洗脫液中回收異黃酮。在一個實施方案中，將含異黃酮的洗脫液真空濃縮、加熱或者同時真空和加熱進行濃縮，以除去溶劑，得到濃縮的異黃酮剩余物。在另一個實施方案中，將洗脫液真空濃縮、加熱或者同時進行真空和加熱濃縮至原體積的約10-25％。然后向濃縮的洗脫液添加至少等體積的水，優選冷卻至約2-約15℃的水，以便沉淀異黃酮。然后，可以通過過濾或離心從洗脫液/水混合物中回收沉淀的異黃酮。
在一個首選的實施方案中，對含收集的異黃酮的洗脫液中的異黃酮進行處理，以便洗脫液中基本上所有的異黃酮是糖苷配基異黃酮。據發現，糖苷配基異黃酮比其天然配糖體或配糖體共軛物形式在保健效果中明顯更具生物活性，因此，回收其糖苷配基形式的異黃酮是可取的。糖苷配基異黃酮還比其配糖體或配糖體共軛物形式較不溶于水，因此糖苷配基異黃酮可以更容易從含異黃酮的洗脫液中分離。
通過在可有效產生轉變的溫度和pH下將含異黃酮的洗脫液處理一段時間，可以將含異黃酮洗脫液中的異黃酮配糖體共軛物轉變成異黃酮配糖體。用于含異黃酮洗脫液中異黃酮配糖體共軛物轉變成異黃酮配糖體的pH范圍是約6至約13.5。應當將含異黃酮洗脫液的pH調整至所需的pH值，如果必要，用適宜的堿性或酸性試劑來調整。據發現，異黃酮配糖體共軛物轉變成異黃酮配糖體是堿催化的，所以首選使用高pH來達到快速轉變。用于異黃酮配糖體共軛物轉變成異黃酮配糖體的首選pH值是約9-約11。
用于含異黃酮洗脫液中異黃酮配糖體共軛物轉變成異黃酮配糖體的溫度范圍是約2至約121℃。轉變容易發生的溫度范圍取決于含異黃酮洗脫液的pH。當含異黃酮的洗脫液pH相對高時轉變在較低溫度下發生。例如，在pH約11時溫度為約5-約50℃下轉變快速而有效地發生。在pH約9時，轉變在約45-約75℃的溫度范圍內容易發生。當含異黃酮的洗脫液pH相對低時轉變在較高溫度下發生。例如，在pH約6時發生轉變的溫度范圍為約80-約121℃。在一個首選的實施方案中，在pH約11且溫度約35℃下進行轉變。
異黃酮配糖體共軛物轉變成異黃酮配糖體所需要的時間期限主要取決于進行轉變所用的pH和溫度范圍。轉變時間為約15分鐘至數小時或更長。轉變在較高pH和在較高溫度下較快發生。在一個最優選的實施方案中，在pH約11且溫度約35下于約30分鐘至約1小時間，基本上所有的異黃酮配糖體共軛物轉變成異黃酮配糖體。
通過在選定的溫度和pH下用β-葡糖苷酶與含異黃酮洗脫液中的異黃酮配糖體接觸一段時間，可以將含異黃酮洗脫液中的異黃酮配糖體轉變成其相應的糖苷配基異黃酮，優選在異黃酮配糖體共軛物轉變成異黃酮配糖體之后，其中β葡糖苷酶可有效分解1,4-糖苷鍵。這種酶可以得自例如黑曲霉、米曲霉、乳酸克魯維酵母、和脆壁克魯維酵母。有效用于異黃酮配糖體轉變成糖苷配基異黃酮的特別優選的可商購酶是Biopectinase 100L(優選在pH約3-約6下使用)、Biopectinase 300L(最佳pH約3-約6)、Biopectinase OK70L(最佳pH約3-約6)、Biolactase 30,000(最佳pH約3-約6)和NeutralLactase(最佳pH約6-約8)，所有均購自Quest International,1833 57thStreet,Post Office Box 3917,Sarasota,Florida 34243。還特別優選Lactase F(優選使用pH約4-約6)、和Lactase 50,000(最佳pH約4-約6)，兩者購自Amano International Enzyme Co.,Inc.,Post Office Box 1000,Troy,Virginia 22974。其它特別優選的酶包括Lactozyme 3000L(優選使用pH約6-約8)、α-Gal 600L(優選使用pH約4-約6.5)，購自Novo NordiskBioindustrials Inc.,33 Turner Road,Danbury,Connecticut 06813；Maxilact L2000(優選使用pH約4-約6)，購自Gist Brocades FoodIngredients Inc.,King of Prussia,Pennsylvania,19406；NeutralLactase(優選使用pH約6-約8)，購自Pfizer Food Science Group,205East 42nd Street,New York,New York 10017；以及Enzeco FungalLactase Concentrate(優選使用pH約4-約6)，購自Enzyme DevelopmentCorporation,2 Penn Plaza,Suite 2439,New York,New York 10121。可以使用某些葡糖淀粉酶來取代或者附加于前述的酶。能進行轉變的可商購獲得的葡糖淀粉酶是可購自Enzyme Development Corporation的G-ZymeG990(優選在pH約4-約6下使用)。優選，向含異黃酮的洗脫液添加約0.1wt％-約10wt％的酶原料，來進行轉變。
用于含異黃酮洗脫液中異黃酮配糖體轉變成糖苷配基異黃酮的pH范圍是約3至9。所用的pH主要取決于所用酶的類型，并且應當依此進行選擇。一般來說，酶在約6-8的中性pH范圍內、或在約3-6的酸性pH范圍內具活性。可以用常規的酸性或堿性試劑將含異黃酮洗脫液的pH調整至適合的pH范圍。
用于異黃酮配糖體轉變成糖苷配基異黃酮的溫度范圍是約5-約75℃。溫度明顯地影響著酶的活性，因此影響轉變速率，較高溫度增加轉變的速率。酶可以在70℃以上具活性，例如α-Gal 600L在75℃下有活性，然而優選在較低溫度下進行轉變，優選約50-約65℃，以避免酶的失活。
進行異黃酮配糖體轉變成糖苷配基異黃酮所需要的時間取決于酶有關的因素，具體說是酶活性和濃度，以及系統的溫度和pH。優選，在5小時內基本上所有的異黃酮配糖體轉變成糖苷配基異黃酮，更優選約1-2小時。
所得的糖苷配基異黃酮可以如上所述從含異黃酮的洗脫液中分離。用冷卻水更容易從含濃縮異黃酮的洗脫液中分離糖苷配基異黃酮，因為糖苷配基異黃酮較相應的異黃酮配糖體共軛物或異黃酮配糖體不易溶于水。
在不背離本發明的實質和范圍的前提下，本領域技術人員可以顯而易見地作出如這里所述本發明優選實施方案的各種改變，本發明的范圍將由以下權利要求書定義。
權利要求
1．一種從含蛋白質和異黃酮的植物材料中分離和回收異黃酮和植物蛋白的方法，該方法包括將含異黃酮的澄清植物蛋白提取物與極性離子交換樹脂接觸，讓所述異黃酮與該離子交換樹脂接觸并結合由此在蛋白質提取物中去除所說的異黃酮，從離子交換樹脂中分離和回收去除了異黃酮的含蛋白質提取物，并且從所述離子交換樹脂中分離和回收所述異黃酮。
2．一種從含蛋白質和異黃酮的植物材料中分離和回收異黃酮和植物蛋白的方法，該方法包括制備含溶解植物蛋白和異黃酮的澄清蛋白質提取物，該提取物基本上不含不溶性蛋白原料；將澄清蛋白質提取物與極性離子交換樹脂接觸；讓所述異黃酮與所述離子交換樹脂結合，由此在所說的蛋白質提取物中去除所說的異黃酮；從所述離子交換樹脂中分離和回收所述去除了異黃酮的蛋白質提取物；并且從所述離子交換樹脂中分離和回收所述異黃酮。
3．權利要求2的方法，其中所說的澄清蛋白質提取物的制備優選通過用pH大于所說蛋白質等電點的含水提取劑提取含蛋白質和異黃酮的植物材料，從而使所說的蛋白質和所說的異黃酮溶解到所說的提取劑中；之后將含溶解蛋白和異黃酮的液體提取劑與不溶性植物物質分離。
4．權利要求3的方法，其中所說的植物材料選自大豆坯、大豆粉、大豆面、大豆粗粉、大豆或其混合物；所說的含水提取劑的pH為約6-約12；并且所說的澄清蛋白質提取物是大豆蛋白質提取物。
5．權利要求1或2的方法，還包括將所說去除了異黃酮的含蛋白質提取物的pH調整至約蛋白質等電點的步驟，由此使蛋白質沉淀。
6．權利要求5的方法，其中所說的蛋白質是大豆蛋白，并且pH值調整至約4-約5來沉淀蛋白質。
7．權利要求5的方法，其中從提取物的液體部分分離沉淀的蛋白質。
8．權利要求7的方法，其中將從提取物液體部分分離的沉淀蛋白質中和。
9．權利要求7的方法，其中將從提取物液體部分分離的沉淀蛋白質干燥。
10．權利要求1或2的方法，其中極性離子交換樹脂是陰離子交換樹脂。
11．權利要求10的方法，其中陰離子交換樹脂是選自弱堿和強堿陰離子交換樹脂的Ⅱ型大孔陰離子交換樹脂。
12．權利要求1或2的方法，其中，在將澄清的蛋白質提取物與離子交換樹脂接觸之前，通過將樹脂置于將樹脂轉變成氫氧化物形式的試劑中，用將氫氧化物形式的樹脂轉變成氯化物形式或硫酸鹽形式的試劑處理氫氧化物形式的樹脂，并且用將樹脂的至少一些強堿部位轉變成碳酸鹽形式的試劑處理氯化物或硫酸鹽形式的樹脂，來調節離子交換樹脂。
13．權利要求1或2的方法，其中所說的異黃酮包括選自染料木黃酮、黃豆苷原、黃豆黃素、生原禪寧A、芒柄花黃素、及其天然配糖體和配糖體共軛物的至少一種異黃酮化合物。
14．權利要求1或2的方法，其中在從所說的離子交換樹脂中分離和收集所說的去除了異黃酮的含蛋白提取物之后，從所說的離子交換樹脂中分離和收集所說的異黃酮。
15．權利要求14的方法，其中從所說的離子交換樹脂中分離所說的異黃酮是通過用溶劑從所說的樹脂中洗出所說的異黃酮，所說的溶劑選自甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、異丁醇、丁醇、乙酸乙酯、乙腈、丙酮、二氯甲烷、氯仿、四氯化碳或其混合物。
16．權利要求1或2的方法，還包括在有效將異黃酮配糖體共軛物轉變成異黃酮配糖體的溫度和pH下處理所說的分離異黃酮一段時間。
17．權利要求1或2的方法，還包括在有效將異黃酮配糖體轉變成糖苷配基異黃酮的溫度和pH下將所說的分離異黃酮與β葡糖苷酶接觸一段時間。
18．權利要求1或2的方法，其中在所說的去除了異黃酮的含蛋白質提取物中從所說的離子交換樹脂分離和回收所說澄清植物蛋白提取物中的至少大部分所說蛋白質。
19．權利要求18的方法，其中在所說的去除了異黃酮的含蛋白質提取物中從所說的離子交換樹脂分離和回收所說澄清植物蛋白提取物中的基本上所有所說的蛋白質。
20．權利要求1或2的方法，其中從所說的離子交換樹脂中分離和回收所說澄清植物蛋白提取物中的至少大部分所說的異黃酮。
21．權利要求20的方法，其中從所說的離子交換樹脂中分離和回收所說澄清植物蛋白提取物中的基本上所有的所說異黃酮。
全文摘要
一種從含蛋白質和異黃酮的植物材料中分離和收集異黃酮和蛋白質的改進的方法。制備植物材料的澄清蛋白提取物,并且與極性離子交換樹脂接觸,讓提取物中的異黃酮與極性離子交換樹脂結合,并且去除異黃酮的提取物。從離子交換樹脂中分離去除了異黃酮的蛋白質提取物,并且從去除了異黃酮的提取物中回收去除了異黃酮的蛋白質原料。在從樹脂中除去去除了異黃酮的提取物之后,從離子交換樹脂中分離和回收異黃酮。回收的異黃酮配糖體和異黃酮配糖體共軛物可以轉變成其相應的糖苷配基異黃酮形式。
文檔編號A23J1/14GK1321640SQ0011805
公開日2001年11月14日 申請日期2000年4月30日 優先權日2000年4月19日
發明者G·A·貝茨, B·A·布瑞恩 申請人:蛋白質技術國際公司