金塔檉柳的組織培養生根方法
【專利摘要】本發明公開了金塔檉柳的組織培養生根方法，包括：(1)選擇金塔檉柳當年生嫩枝作為生根培養的外植體；(2)將外植體剪成長度為10?15cm的中段，沖洗掉表面的泥沙后做深層清洗；(3)在超凈工作臺上對外植體進行滅菌處理；(4)將外植體剪成長1.5?2.5cm的小段，接種于生根培養基(1/2MS+IBA 0.4mg/l+蔗糖25g/l)中；(5)設置培養條件：溫度24±2℃、光照強度1500?2000lx、光照時間10?14h/d。本發明的有益之處在于：金塔檉柳不僅發根早，在第5天即開始第一次發根，而且生根快，生根時間縮短至15?21天，21天后平均根長達到9cm左右，根較長，根的平均數量達到5條，毛根多，生根率達到100％，上部長勢好，育苗成本大大降低，實現了金塔檉柳的產業化生產。
【專利說明】
金塔檉柳的組織培養生根方法
技術領域
[0001] 本發明涉及一種植物的生根方法，具體涉及一種金塔檉柳的組織培養生根方法， 屬于無性繁殖技術領域。
【背景技術】
[0002] 植物組織培養是從植物體分離出符合需要的組織、器官或細胞、原生質體等的無 性繁殖方法，即通過無菌操作，在人工控制條件下進行培養以獲得完整再生植株或生產具 有經濟價值的其他產品的繁殖技術。
[0003] 在大多數苗木的繁殖過程中，傳統的有性繁殖也可以達到生根快繁的目的，但在 繁殖過程中易改變母本植物原有的優良性狀，使后代發生變異。
[0004] 作為目前應用廣泛的無性繁殖方法，組織培養不受地理環境和季節條件的限制， 能避免植物在生長過程中出現性狀分離;此外，該方法具有繁殖速率快、成本低、成活率高、 成苗速度快等特點，解決了有性繁殖中出現的一系列問題，從而獲得大量無菌生根苗。
[0005] 金塔檉柳(Tama Tamarix jintaenia)屬楊柳科柳屬，主要分布于甘肅河西走廊金 塔縣附近的丘間低地。該樹種花序茂密，花色紫紅美麗，枝葉濃綠，可作荒漠地區居民點附 近觀賞及固沙造林樹種。金塔檉柳喜光不耐陰，在遮陰處多生長不良。根系發達，既耐干又 耐水濕，抗風能力強，耐鹽堿土，能在含鹽量1.2%的鹽堿地上正常生長，對荒漠區土地改良 有很好的作用。
[0006] 但近年來，由于分布區地形、環境及氣候條件惡劣多變，金塔檉柳天然更新受到極 大的限制，實生苗正日趨減少。目前，研究者主要采取扦插方法對該樹進行繁殖，而在此過 程中出現了插穗難以保存、插穗成活率低、扦插后成苗速度慢等問題。
[0007] 因此，急需采取新的無性繁殖的方法來解決這一問題。
【發明內容】
[0008] 本發明的目的在于提供一種金塔檉柳的組織培養生根方法，該方法可使金塔檉柳 在較短時間內快速、高效的繁殖，從而創造出較高的經濟效益。
[0009] 為了實現上述目標，本發明采用如下的技術方案：
[0010] -種金塔檉柳的組織培養生根方法，其特征在于，包括以下步驟：
[0011] stepl:選擇金塔檉柳當年生嫩枝作為生根培養的外植體；
[0012] Step2:將外植體剪成長度為10-15cm的中段，沖洗掉表面的泥沙后做深層清洗； [0013] Step3:將清洗干凈的外植體置于超凈工作臺上，進行滅菌處理；
[0014] Step4:將已滅菌的外植體剪成長1.5-2.5cm的小段，接種于生根培養基中，前述生 根培養基為：1/2MS+IBA 0 · 4mg/l+蔗糖25g/l，pH值為5 · 8-6 · 0;
[0015] Step5:將接種后的外植體進行培養，培養條件為：溫度24 ±2°C、光照強度1500-20001X、光照時間 10-14h/d。
[0016]前述的金塔檉柳的組織培養生根方法，其特征在于，在Stepl中，在晴朗天氣的下 午剪取外植體。
[0017] 前述的金塔檉柳的組織培養生根方法，其特征在于，在Step2中，對外植體進行深 層清洗的方法為：
[0018] 先用洗衣粉清洗枝條，洗衣粉泡沫沖洗干凈后用玻璃棒蘸取一滴吐溫80進行深層 清洗，之后將外植體置于流水下沖洗2-6小時。
[0019] 前述的金塔檉柳的組織培養生根方法，其特征在于，在Step3中，對外植體進行滅 菌處理的方法為：
[0020] 先用70%的乙醇浸泡10-15S，然后用無菌水沖洗3-4遍，再用0.1 %的升萊浸泡 2min，最后用無菌水再沖洗5-7遍。
[0021 ]前述的金塔檉柳的組織培養生根方法，其特征在于，在Step4中，外植體剪成小段 前，先將基部切口剪除，然后吸干外植體表面的水分。
[0022]前述的金塔檉柳的組織培養生根方法，其特征在于，在Step4中，每瓶接種一個外 植體。
[0023]本發明的有益之處在于:采用本發明的方法培養金塔檉柳時，金塔檉柳不僅發根 早，在第5天即開始第一次發根，而且生根快，生根時間縮短至15-21天，21天后平均根長達 至Ij9cm左右，根較長，根的平均數量達到5條，毛根多，生根率達到100%，上部長勢好，育苗成 本大大降低，實現了金塔檉柳的產業化生產。
【附圖說明】
[0024]圖1是外植體在JS1培養基中培養28d后根的生長情況圖；
[0025]圖2是外植體在JS1培養基中培養28d后植株的生長情況圖；
[0026]圖3是外植體在JS2培養基中培養28d后根的生長情況圖；
[0027]圖4是外植體在JS2培養基中培養28d后植株的生長情況圖；
[0028]圖5是外植體在JS3培養基中培養28d后根的生長情況圖；
[0029]圖6是外植體在JS4培養基中培養28d后根的生長情況圖；
[0030]圖7是外植體在JS4培養基中培養28d后植株的生長情況圖；
[0031]圖8是外植體在JS5培養基中培養28d后根和植株的生長情況圖；
[0032]圖9是外植體在JS6培養基中培養28d后根和植株的生長情況圖；
[0033]圖10是外植體在JS7培養基中培養28d后根和植株生長情況圖；
[0034]圖11是外植體在JS8培養基中培養28d后根的生長情況圖；
[0035]圖12是外植體在JS8培養基中培養28d后植株的生長情況圖；
[0036]圖13是外植體在JS9培養基中培養28d后根的生長情況圖；
[0037]圖14是外植體在JS10培養基中培養28d后根和植株生長情況圖；
[0038]圖15是外植體在JS11培養基中培養28d后根和植株生長情況圖；
[0039]圖16是外植體在JS12培養基中培養28d后根的生長情況圖；
[0040]圖17是外植體在JS12培養基中培養28d后植株的生長情況圖；
[00411圖18是外植體在JS13培養基中培養28d后根的生長情況圖；
[0042]圖19是外植體在JS13培養基中培養28d后植株的生長情況圖。
【具體實施方式】
[0043] 以下結合附圖和具體實施例對本發明作具體的介紹。
[0044] -、外植體的選擇
[0045] 選擇適宜的外植體是組織培養的基礎步驟。
[0046] 本發明選擇金塔檉柳當年生嫩枝作為生根培養的外植體，在晴朗天氣的下午剪不 同林齡的外植體。
[0047]二、外植體的清洗 [0048] 1、初步沖洗
[0049] 在室內，先將采集的外植體剪成長度為10-15cm的小段，之后用自來水沖洗表面的 泥沙。
[0050] 2、深層清洗
[0051]先用洗衣粉清洗枝條，洗衣粉泡沫沖洗干凈后用玻璃棒蘸取一滴吐溫80進行深層 清洗，之后將外植體置于流水下沖洗2-6小時。
[0052]三、外植體的滅菌及剪取 [0053] 1、滅菌
[0054]將清洗干凈的外植體置于超凈工作臺上，先用70%的乙醇浸泡10-15S，然后用無 菌水沖洗3-4遍，再用0.1 %的升汞浸泡2min，最后用無菌水沖洗5-7遍。
[0055] 2、剪取
[0056]將已滅菌的外植體基部切口剪除，用已滅菌的濾紙吸干外植體表面的水分，剪成 長1.5-2.5cm的小段，待用。
[0057]四、生根培養
[0058] 1、篩選培養基
[0059] 在本發明中，金塔檉柳的生根培養以MS為基本培養基(其中大量元素、微量元素、 鐵鹽、有機母液含量均沒有變化），并配以不同濃度的吲哚丁酸(IBA)、蔗糖和活性炭(AC)。
[0060] 具體實驗過程分為兩個階段，具體如下：
[0061 ]第一階段:篩選適宜金塔檉柳生根培養的最佳IBA濃度
[0062] JS1：MS；
[0063] JS2：1/2MS；
[0064] JS3:1/2MS+IBA 0.2mg/l+蔗糖30g/l;
[0065] JS4:1/2MS+IBA 0.4mg/l+蔗糖30g/l;
[0066] JS5:1/2MS+IBA 0.6mg/l+蔗糖30g/l;
[0067] JS6:1/2MS+IBA 0.8mg/l+蔗糖30g/l;
[0068] JS7:1/2MS+IBA 1.0mg/l+蔗糖 30g/l。
[0069] 以上各培養基的pH值均在5.8-6.0范圍內。
[0070] 將長度為1.5-2.5cm的外植體小段接種于上述培養基中，每瓶接種一個外植體。 [0071] 培養條件設置:溫度24 ± 2°C、光照強度1500-20001X、光照時間10-14h/d。
[0072]接種后分別調查已接種外植體的生根情況，主要包括第一次發根時間、根長、根的 數量、根系及植株生長情況。
[0073] 調查結果如下：
[0074]
[0075] 通過上述表格和附圖我們發現，金塔檉柳生根時間最早且植株長勢最好的培養基 為JS4:1/2MS+IBA 0.4mg/l+蔗糖30g/l。
[0076] 這一階段培養基中蔗糖的含量保持30g/l不變，只是調整生長素IBA的含量，發現 當1/2MS培養基中加入0.4mg/l的IBA時，金塔檉柳在第6d就可以生根，且毛根很多，上部植 株長勢良好。
[0077] 第二階段:調整蔗糖與活性炭的濃度篩選最佳的培養基配方
[0078] 研究表明，適當減少蔗糖的含量和在培養基中加入適量的活性炭(AC)有利于組織 培養過程中外植體的生根培養，因此在第二階段培養中我們仍以MS為基本培養基，在第一 階段篩選出的最佳生長素濃度（IBA0.4mg/l)的基礎上，調整蔗糖與活性炭(AC)的濃度，進 一步篩選最佳激素組合的培養基配方。
[0079] JS8:1/2MS+IBA 0.4mg/l+蔗糖5g/l;
[0080] JS9:1/2MS+IBA 0.4mg/l+蔗糖 10g/l;
[0081] JS10:1/2MS+IBA 0.4mg/l+蔗糖 15g/l;
[0082] JS11:1/2MS+IBA 0.4mg/l+蔗糖20g/l;
[0083] JS12:1/2MS+IBA 0.4mg/l+蔗糖25g/l;
[0084] JS13:1/2MS+IBA 0.4mg/l+蔗糖30g/l;
[0085] JS14:1/2MS+IBA 0.4mg/l+蔗糖30g/l+AC 0.5g/l;
[0086] JS15:1/2MS+IBA 0.4mg/l+蔗糖30g/l+AC l.Og/1;
[0087] JS16:1/2MS+IBA 0.4mg/l+蔗糖30g/l+AC 2.0g/l;
[0088] JS17:1/2MS+IBA 0.4mg/l+蔗糖30g/l+AC 5.0g/l。
[0089] 以上各培養基的pH值均在5.8-6.0范圍內。
[0090] 將長度為1.5-2.5cm的外植體小段接種于上述培養基中，每瓶接種一個外植體。 [0091] 培養條件設置:溫度24 ± 2°C、光照強度1500-20001X、光照時間10-14h/d。
[0092]接種后分別調查已接種外植體的生根情況，主要包括第一次發根時間、根長、根的 數量、根系及植株生長情況。
[0093]調查結果如下：
[0094]
[0095] 通過上述表格和附圖我們發現，金塔檉柳在^12:1/21^+1840.411^/1+蔗糖25 8/1 培養基中培養時，生根效果最好，主要表現為第一次生根時間較早(5d)，主根發達，根毛較 多，根上部植株長勢良好，顏色嫩綠，生根率為100 %。
[0096] 通過兩個不同階段的培養，我們最終篩選出了最適合金塔檉柳外植體生根的培養 基配方，具體如下：
[0097] 1/2MS+IBA 0.4mg/l+蔗糖25g/l(JS12)。
[0098] 2、接種
[0099] 將長度為1.5-2.5cm的外植體小段接種于最終篩選出來的生根培養基中，該生根 培養基的配方為：1/2MS+IBA 0.4mg/l+蔗糖25g/l，每瓶接種一個外植體。
[0100] 3、培養
[0101] 生根培養條件設置:溫度24 ± 2°C、光照強度1500-20001X、光照時間10-14h/d。 [0102] 4、觀察
[0103] 觀察結果:在第5天開始第一次發根(發根早），在第21天平均根長達到9cm左右(生 根快、根較長），根的平均數量達到5條，毛根多，上部長勢好，生根率達到100%。
[0104] 由此可見，本發明采用的無性繁殖方法保持了原有品種的優良性狀，所提出的最 適合生根的培養基使得金塔檉柳外植體出根時間早、整齊、出根量大、生根苗粗壯、葉子嫩 綠、長勢好。
[0105] 此外，本發明方法還具有繁殖速度快、繁殖系數大、管理方便、生產成本低、成苗率 高、培養周期短、可周年生產和有利于實現工廠化生產、不受季節的限制的特點和優點，可 為大規模工廠化生產提供有利條件。
[0106] 由于該樹種根系發達，又具有良好的抗風蝕能力及耐鹽堿性，該發明中組培生根 培養基的研究可為荒漠化綜合防治及荒漠區土地改良提供充足、優質的種苗來源。
[0107] 綜上所述，組織培養方法是無性繁殖領域進行物種快速繁殖的重要方法，進年來 在苗木、花卉、藥材快速繁殖方面已廣泛應用并已取得顯著效果，而利用組織培養快速生根 的方法在金塔檉柳無性繁殖研究中還沒有涉及。本發明利用無性繁殖領域的組織培養方 法，通過兩個階段的篩選確定了適合金塔檉柳組培生根的基本培養基配方與激素組合，實 現了金塔檉柳在較短時間內快速、高效的繁殖，突破了在金塔檉柳無性繁殖過程中單獨采 用扦插繁殖的方法，大大提高了該樹種的繁殖速度和效果，有效解決了金塔檉柳生根難的 問題，這對該屬植物其它品種及其扦插繁殖難以生根物種起到很好的參考與借鑒作用。
[0108]需要說明的是，上述實施例不以任何形式限制本發明，凡采用等同替換或等效變 換的方式所獲得的技術方案，均落在本發明的保護范圍內。
【主權項】
1. 一種金塔檉柳的組織培養生根方法，其特征在于，包括以下步驟： Stepl:選擇金塔檉柳當年生嫩枝作為生根培養的外植體； Step2:將外植體剪成長度為10-15cm的中段，沖洗掉表面的泥沙后做深層清洗； Step3:將清洗干凈的外植體置于超凈工作臺上，進行滅菌處理； Step4:將已滅菌的外植體剪成長1.5-2.5cm的小段，接種于生根培養基中，所述生根培 養基為：1/2MS+IBA 0 · 4mg/l+蔗糖25g/l，pH值為5 · 8-6 · 0; Step5 :將接種后的外植體進行培養，培養條件為：溫度24 ±2 °C、光照強度1500-20001X、光照時間 10-14h/d。2. 根據權利要求1所述的金塔檉柳的組織培養生根方法，其特征在于，在Stepl中，在晴 朗天氣的下午剪取外植體。3. 根據權利要求1所述的金塔檉柳的組織培養生根方法，其特征在于，在Step2中，對外 植體進行深層清洗的方法為： 先用洗衣粉清洗枝條，洗衣粉泡沫沖洗干凈后用玻璃棒蘸取一滴吐溫80進行深層清 洗，之后將外植體置于流水下沖洗2-6小時。4. 根據權利要求1所述的金塔檉柳的組織培養生根方法，其特征在于，在Step3中，對外 植體進行滅菌處理的方法為： 先用70%的乙醇浸泡10-15s，然后用無菌水沖洗3-4遍，再用0.1 %的升汞浸泡2min，最 后用無菌水再沖洗5-7遍。5. 根據權利要求1所述的金塔檉柳的組織培養生根方法，其特征在于，在Step4中，外植 體剪成小段前，先將基部切口剪除，然后吸干外植體表面的水分。6. 根據權利要求1所述的金塔檉柳的組織培養生根方法，其特征在于，在Step4中，每瓶 接種一個外植體。
【文檔編號】A01H4/00GK106069782SQ201610637864
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年8月5日 公開號201610637864.3, CN 106069782 A, CN 106069782A, CN 201610637864, CN-A-106069782, CN106069782 A, CN106069782A, CN201610637864, CN201610637864.3
【發明人】王方琳, 馬俊梅, 張錦春, 柴成武, 劉有軍
【申請人】甘肅省治沙研究所