一種含有苯甲酰胺類殺菌劑和生防菌的菌藥組合物、制劑及其應用
【專利摘要】本發明公開了一種含有苯甲酰胺類殺菌劑和生防菌的菌藥組合物、制劑及其應用，屬于植物保護和農藥學領域。菌藥組合物由苯甲酰胺類殺菌劑和生防菌菌粉組成，以質量比計，苯甲酰胺類殺菌劑：生防菌菌粉＝1～10:1～10，菌粉中活菌數不低于106cfu/g。生防菌優選為解淀粉芽孢桿菌ZY?9?13，保藏編號：CGMCC No.6162。苯甲酰胺類的氟吡菌胺通過作用于細胞膜的血影蛋白達到殺菌效果，苯酰菌胺通過抑制病原菌線粒體β?tubulin組裝發揮殺菌活性，該類殺菌劑與解淀粉芽孢桿菌配合使用對煙草根結線蟲病、煙草黑脛病具有優異的防治功效，防效顯著優于使用單一的苯甲酰胺類殺菌劑或解淀粉芽孢桿菌生防菌劑，且可延緩化學藥劑抗藥性的產生，特別適用于田間煙草黑脛病的防治。
【專利說明】
一種含有苯甲酰胺類殺菌劑和生防菌的菌藥組合物、制劑及 其應用
技術領域
[0001] 本發明涉及一種含有苯甲酰胺類殺菌劑和生防菌的菌藥組合物，同時還涉及包含 該菌藥組合物的制劑及其應用，屬于植物保護和農藥學領域。
【背景技術】
[0002] 煙草黑腔病(Tobacco black shank)是一種世界范圍的毀滅性土傳病害，其病原 菌為疫霉菌煙草變種[Phytophthora parasitica var nicotianae(Breda de Hann) Tuker]。煙草疫霉在煙株苗期至成株期均可侵染，主要侵染煙草莖桿，也可侵染葉片。煙草 黑脛病在莖基形成水漬狀黑斑，皮層組織變黑凹陷，并沿莖部上下擴展，髓部黑褐色壞死并 干縮呈碟片狀(萬維肖，何孝兵，曲平治，等.煙草黑脛病早期預防技術[J].植物醫生，2014
[02] : 50-50)。葉片染病后初為水浸狀暗綠色小斑，后擴大為中央黃褐色壞死，邊緣有輪紋 的膏藥狀黑斑，全株萎蔫（孫計平，李雪君，吳照輝，等.煙草黑脛病的研究進展[J].湖北農 業科學，2011，50( 16): 3253-3256)。煙草疫霉以菌絲體與厚壁孢子隨病株殘體在土壤或堆 肥中越冬，成為次年的初侵染源。病株上產生的孢子囊或釋放出來的游動孢子通過地面流 水或隨風雨進行再侵染(王萬能，肖崇剛.煙草黑脛病的綜合防治及其研究進展[J].南方農 業學報，2003(2) :42-43)。隨著20世紀80年代后期我國煙草種植面積的不斷擴大，煙草黑脛 病迅速擴展。煙草黑脛病平均發病率為10%~20%，發病率高的田塊達75%，嚴重的甚至造 成絕收(陳瑞泰，朱賢朝，王智發，等.全國16個主產煙省（區)煙草侵染性病害調研報告[J]. 中國煙草科學，1997(04):1-7)。
[0003] 化學防治是煙草黑脛病防控的重要措施，其中甲霜靈、烯酰嗎啉、氟吡菌胺等農藥 是生產中使用較為廣泛的藥劑。氟吡菌胺是由拜耳公司研發的苯甲酰胺類廣譜殺菌劑，對 病原卵菌高效，通過作用于細胞膜的血影蛋白而達到殺菌效果，其獨特的作用機制使其與 多種殺菌劑均無交互抗藥性(張鵬.氟吡菌胺與吡唑醚菌酯對馬鈴薯晚疫病菌的聯合毒力 及混配制劑研究[D].河北農業大學，2013)。氟吡菌胺具有較強的滲透性，能從葉片上表面 向下滲透，從葉基向葉尖方向傳導，對幼芽處理后能保護葉片不受病菌浸染，還能從根部沿 植株木質部向整株作物分布，但不能沿韌皮部傳導。
[0004] 生防菌株是天然存在的生物活體，具有良好的環境相容性。利用生防菌株防治煙 草黑脛病具有防效高、安全性好、成本低等優點。公告號CN101220335B的發明專利公開的一 種防治煙草黑脛病的菌株，名稱為淡紫擬青霉ZY-19-2，保藏編號CCTCC NO:M207196，該菌 株對煙草黑脛病菌有較強的抑制作用，可定殖在煙草植株根際抵抗病菌的浸染；公告號 CN103614319B的發明專利也公開了一種用于防治煙草黑脛病的阿氏芽孢桿菌J-6,保藏編 號CCTCC N0:M2013475,該菌株能誘導煙葉拮抗黑脛病從而發揮疫霉防治效果；公告號 CN102925393B的發明專利公開的一種兼抗根結線蟲和煙草疫霉的煙草內生菌，名稱為解淀 粉芽孢桿菌ZY-9-13，保藏編號CGMCC N0:6162，該菌株對煙草根結線蟲和黑脛病均具有防 治效果，可與煙草育苗基質混合使用或在煙草植株移栽時施入根際周圍，生防效果顯著。但 是，上述專利均未涉及殺菌劑與生防菌劑聯用的內容。
[0005] 可持續發展的農業生產系統要求減少農藥的投入，而生物、化學協同防治病害可 減輕對環境的壓力，延緩對化學藥劑產生抗性，使藥效更穩定和持久(尹敬芳.生物-化學協 同防治辣椒疫病菌藥合劑初步研究[D].中國農業大學，2006)。已有研究表明，生防菌劑和 化學藥劑復配對多種病原菌均有良好的防治效果。如黃藍狀菌與甲霜錳鋅復配可防治小麥 赤霉病(毛雪琴，彭志榮，邱海萍，等.生防菌株MT-06發酵條件及復配殺菌劑對小麥赤霉病 的防效[J].浙江農業科學，2013(07) :821-824)，枯草芽胞桿菌與戊唑醇復配可防治蠶豆枯 萎病(陳志誼，任海英，劉永鋒，等.戊唑醇和枯草芽孢桿菌協同作用防治蠶豆枯萎病及增效 機理初探[J].農藥學學報，2002(4) :40-44)，枯草芽胞桿菌與苯醚甲環唑、嘧菌酯等復配可 防治蘋果輪紋病（周寒.殺菌劑和生防菌協調控制蘋果采后輪紋病及作用機制[D].安徽農 業大學，2009)，井閃霉素與枯草芽胞桿菌協同防治水稻紋枯病(陳志誼，劉永鋒，陸凡.井岡 霉素和生防菌Bs-916協同控病作用及增效機理[J].植物保護學報，2003，30(4): 429-434.) 等等，但是以上菌藥復配的防治靶標均不涉及煙草疫霉。公布號CN104381303A的發明專利 公開了一種用于防治真菌病害的菌藥組合物，由核黃素與枯草芽孢桿菌Tpb55菌粉按照質 量比1.21~2.34:97.96~98.79復配而成，相較單獨施用枯草芽孢桿菌Tpb55菌粉，該菌藥 組合物能顯著提高煙草黑脛病、赤星病等病害防治功效，增強植株抗病性，但是也僅達到與 化學藥劑相當的防治效果。
【發明內容】
[0006] 本發明的目的是提供一種含有苯甲酰胺類殺菌劑和生防菌的菌藥組合物，該組合 物對煙草根結線蟲病、煙草黑脛病具有優異的防治功效，防效顯著優于使用單一的苯甲酰 胺類殺菌劑或生防菌菌劑，且可延緩化學藥劑抗藥性的產生。
[0007] 同時，本發明還提供一種包含上述菌藥組合物的菌藥制劑。
[0008] 最后，本發明再提供一種上述菌藥組合物、菌藥制劑在防治煙草根結線蟲病和/或 煙草黑脛病中的應用。
[0009] 為了實現以上目的，本發明所采用的技術方案是：
[0010] -種菌藥組合物，由苯甲酰胺類殺菌劑和生防菌菌粉組成，以質量比計，苯甲酰胺 類殺菌劑:生防菌菌粉=1~10:1~10,菌粉中活菌數不低于l〇 6cfu/g。
[0011] 所述苯甲酰胺類殺菌劑選自氟吡菌胺、苯酰菌胺等中的任意一種或多種。如單獨 選用氟吡菌胺或苯酰菌胺，或者選用氟吡菌胺與苯酰菌胺的組合。相較使用單一一種殺菌 劑，殺菌劑復配(兩種及以上殺菌劑配合使用)具有相加作用或增效作用。并且，復配殺菌劑 (兩種及以上)與生防菌聯合使用對煙草根結線蟲病、煙草黑脛病等的防治效果優于單獨使 用化學殺菌劑或者生防菌菌劑。同時，復配殺菌劑中各組分配比可以任意選取，如氟吡菌胺 與苯酰菌胺按照質量比1~10:1~10組合，等等。其中，氟吡菌胺的殺菌機理與目前所有已 知的卵菌綱殺菌劑完全不同，主要作用于細胞膜和細胞間的特異性蛋白而表現殺菌活性， 其獨特的薄層穿透性可加強藥劑的橫向傳導性及縱向輸送力，對病原菌的各主要形態均有 很好的抑制活性，治療潛能突出。苯酰菌胺通過抑制病原菌的線粒體β-tubul in組裝發揮殺 菌活性。
[0012] 所述生防菌菌粉可參照專利（公告號CN102925393B)中方法制備。其中，生防菌優 選為解淀粉芽抱桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZY_9_13，保藏編號:CGMCC No·6162， 保藏時間：2012年05月29日，保藏單位：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心， 單位地址:北京市朝陽區北辰西路1號院3號。該菌株兼抗煙草根結線蟲和煙草疫霉，尤其能 抑制煙草黑脛病菌菌絲生長及孢子萌發，在煙草根際較好的定殖。參見專利"一種兼抗根結 線蟲和煙草疫霉的煙草內生菌及其應用"（公告號:CN102925393B)。經試驗驗證，苯甲酰胺 類殺菌劑對解淀粉芽孢桿菌(CGMCC No. 6162)的生長影響微弱，二者之間的相容性良好，可 以進行菌藥組合。
[0013] 所述菌藥組合物可采用常規方法制備成任意一種適于農業使用的劑型，如可濕性 粉劑、懸浮劑、水分散顆粒劑、乳油、水乳劑、微乳劑、水劑、微膠囊劑、可溶性粉劑等。制劑中 菌藥組合物為有效成分，其含量為制劑總質量的〇. 1~99.9%。
[0014] 菌藥制劑，包含上述菌藥組合物，以及一種或多種農藥學上可接受的助劑。所述助 劑包括潤濕分散劑、穩定劑、防凍劑、崩解劑、增稠劑、消泡劑、有機溶劑、載體等，以及其他 有益于有效成分在制劑中穩定發揮藥效的物質，是農藥制劑中常用的或允許使用的各種成 分。助劑的具體選擇和用量可根據配方要求通過常規試驗確定。
[0015] 所述潤濕分散劑可選自十二烷基硫酸鈉、十二烷基磺酸鈉、十二烷基苯磺酸鈉、十 二烷基苯磺酸鈣、木質素磺酸鈣、木質素磺酸鈉、月桂酸硫酸鈉、烷基聚氧乙烯醚磺酸鹽、烷 基酚聚氧乙烯醚甲醛縮合物、聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段共聚物、月桂醇聚氧乙烯醚硫酸鈉、烷 基萘甲醛縮合物磺酸鹽、拉開粉、十二烷基聚氧乙烯醚磷酸酯、羥甲基纖維素等中的任意一 種或多種。
[0016] 所述穩定劑可選自鄰苯三酚、BHT、BHA、檸檬酸、環氧大豆油、亞麻油、丁香酚、蓖麻 油、橄欖油、對苯二酚、水楊酸、山梨酸鈉、丁基縮水甘油醚、苯基縮水甘油醚、甲苯基縮水甘 油醚、聚乙烯基乙二醇二縮水甘油醚、二萘酚、一萘酚中的任意一種或多種。
[0017] 所述防凍劑可選自甘油、丙二醇、乙二醇、尿素、氯化鈉中的任意一種。
[0018] 所述崩解劑可選自硫酸銨、氯化鈣、氯化鎂、氯化鋁、膨潤土、磷酸二氫胺、尿素等 中的任意一種或多種。
[0019] 所述增稠劑可選自黃原膠、阿拉伯膠、聚乙烯醇、羧甲基纖維素、甲基纖維素、雜多 糖、可溶性淀粉、蔗糖、葡萄糖、海藻酸鈉、丙烯酸系聚合物、聚乙烯吡咯烷酮、松香、石膏、硫 酸鈉、骨膠、大豆蛋白、糊精、硅酸、硅酸鋁鎂等中的任意一種或多種。
[0020] 所述消泡劑可選自硅油類消泡劑、硅酮類消泡劑、C1()~2〇飽和脂肪酸類消泡劑、 脂肪醇類消泡劑中的任意一種。
[0021] 所述有機溶劑可選自甲苯、二甲苯、烷基苯、異丙醇、丁醇、乙二醇、二甘醇、三甘 醇、丙二醇、丙三醇、山梨醇、苯甲醇、環己醇、丙酮、甲基異丁基酮、環己酮、二甲基甲酰胺、 吡咯烷酮、二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、植物油等中的任意一種或多種。
[0022] 所述載體可選自石英、粘土、蒙脫土、二氧化硅、硅藻土、浮石、石膏、滑石、膨潤土、 高嶺土、陶土、白炭黑、方解石、大理石、海泡石、白云石、凹凸棒土等中的任意一種或多種。
[0023] 菌藥組合物的應用，具體為菌藥組合物在防治煙草根結線蟲和/或煙草黑脛病中 的應用。
[0024] 菌藥制劑的應用，具體為菌藥制劑在防治煙草根結線蟲和/或煙草黑脛病中的應 用。
[0025]本發明的有益效果：
[0026]本發明中菌藥組合物由苯甲酰胺類殺菌劑與解淀粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌 粉組成，其中苯甲酰胺類的氟吡菌胺通過作用于細胞膜的血影蛋白達到殺菌效果，苯酰菌 胺通過抑制病原菌線粒體β-tubul in組裝發揮殺菌活性，這類殺菌劑與解淀粉芽孢桿菌配 合使用對煙草根結線蟲病、煙草黑脛病具有優異的防治功效，防效顯著優于使用單一的苯 甲酰胺類殺菌劑或解淀粉芽孢桿菌生防菌劑，且可延緩化學藥劑抗藥性的產生，特別適用 于田間煙草黑脛病的防治。
【具體實施方式】
[0027]下述實施例僅對本發明作進一步詳細說明，但不構成對本發明的任何限制。
[0028] 實施例1
[0029]菌藥組合物，由氟吡菌胺和解淀粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌粉組成，以質量比 計，氟吡菌胺:解淀粉芽孢桿菌菌粉=1:1，菌粉中活菌數不低于106Cfu/g。
[0030] 實施例2
[0031]菌藥組合物，由苯酰菌胺和解淀粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌粉組成，以質量比 計，苯酰菌胺:解淀粉芽孢桿菌菌粉=5:1，菌粉中活菌數不低于106cfu/g。
[0032] 實施例3
[0033]菌藥組合物，由氟吡菌胺和解淀粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌粉組成，以質量比 計，氟吡菌胺:解淀粉芽孢桿菌菌粉=1:10，菌粉中活菌數不低于106Cfu/g。
[0034] 實施例4
[0035]菌藥組合物，由氟吡菌胺、苯酰菌胺和解淀粉芽孢桿菌（CGMCC No. 6162)菌粉組 成，以質量比計，氟吡菌胺:苯酰菌胺:解淀粉芽孢桿菌菌粉=1:1:8,菌粉中活菌數不低于 106cfu/g〇 [0036] 實施例5
[0037]菌藥組合物，由氟吡菌胺、苯酰菌胺和解淀粉芽孢桿菌（CGMCC No. 6162)菌粉組 成，以質量比計，氟吡菌胺:苯酰菌胺:解淀粉芽孢桿菌菌粉= 4:6:1，菌粉中活菌數不低于 106cfu/g〇
[0038] 實施例6
[0039] 菌藥制劑，由以下質量份數的原料制成：氟吡菌胺35份，解淀粉芽孢桿菌 (CGMCCNo.6162)菌粉5份(菌粉中活菌數不低于10 6cfu/g)，十二烷基磺酸鈉6份，木質素磺 酸鈣8份，蔗糖8份，硅藻土20份;制備方法為:按照質量份數準確取各原料，混合均勻，得到 可濕性粉劑。
[0040] 實施例7
[0041] 菌藥制劑，由以下質量份數的原料制成：苯酰菌胺10份，解淀粉芽孢桿菌 (CGMCCNo.6162)菌粉45份(菌粉中活菌數不低于10 6cfu/g)，十二烷基萘磺酸鈉10份，拉開 粉5份，淀粉3份，硫酸鈉2份，黃原膠5份，鹿糖10份，膨潤土 15份，娃藻土20份;制備方法為： 按照質量份數準確取各原料，混合均勻后造粒，干燥、篩分，得到懸浮劑。
[0042] 實施例8
[0043] 菌藥制劑，由以下質量份數的原料制成：氟吡菌胺15份，解淀粉芽孢桿菌 (CGMCCNo.6162)菌粉15份(菌粉中活菌數不低于106cfu/g)，木質素磺酸鈉5份，二丁基萘磺 酸鈉2份，十二烷基苯磺酸鈉3份，聚乙烯吡咯烷酮4份，淀粉3份，蔗糖5份，硅藻土18份;制備 方法為:按照質量份數準確取各原料，混合均勻后超微氣流粉碎，造粒，得到水分散顆粒劑。
[0044] 實施例9
[0045] 菌藥制劑，由以下質量份數的原料制成:氟吡菌胺15份，苯酰菌胺15份，解淀粉芽 孢桿菌(CGMCC如.6162)菌粉10份(菌粉中活菌數不低于10 6(^11/^)，十二烷基磺酸鈉5份， 木質素磺酸鈣7份，蔗糖9份，硅藻土22份;制備方法同實施例6。
[0046]上述各實施例中解淀粉芽孢桿菌（CGMCC No.6162)菌粉參照專利（公告號 CN102925393B)【具體實施方式】中方法制備成可濕性粉劑。
[0047] 在本發明的其他實施例中，還可將菌藥制劑制成水乳劑、水劑、微膠囊劑等劑型， 助劑采用本領域常規助劑即可。
[0048] 在本發明的其他實施例中，還可將兩種及以上的殺菌劑復配后與生防菌菌粉組合 或制成菌藥制劑。
[0049] 試驗例
[0050] 1、菌藥組合物的協同增效作用測定
[0051 ]采用菌絲生長速率法測定煙草黑脛病菌對殺菌劑、解淀粉芽孢桿菌和菌藥組合物 的藥劑敏感性。處理組中殺菌劑原藥(未加解淀粉芽孢桿菌)的供試濃度為〇. 1 Syg/mL，解淀 粉芽孢桿菌(CGMCC NO.6162)菌懸液的濃度為101()Cfu/mL，菌藥組合物(殺菌劑原藥0.15μg/ mL+解淀粉芽孢桿菌(CGMCC No. 6162) 101()Cfu/mL)，復配形式見下表1。將直徑5mm菌碟置于 含藥的燕麥培養基中央，每藥劑處理重復3次，以無藥處理為對照，采用十字交叉法測量菌 落直徑，計算不同處理對煙草黑脛病菌的抑制率，評價菌藥組合物對黑脛病菌的抑制作用， 結果見下表1。
[0052] 采用Abbott數學模型計算菌藥組合物對病原菌的抑制效果（Colby S， Calculatingsynergistic and antagonistic responses of herbicide combinations [J].Weeds，1967)〇
[0053] 藥劑對煙草黑脛病菌的理論抑制率計算公式如下：
[0054] Ε=(Χι+Χ2+···)-Χι · Χ2 · ···/!〇〇;
[0055] 式中:Ε代表藥劑對煙草黑脛病菌的預期(理論)抑制率，X^Xr·分別代表藥劑Α、藥 劑Β···對煙草黑脛病菌的抑制率。
[0056]評價方法為:期望(理論)抑制率與實際測定抑制率相比較，當理論值 < 實際值時， 表現為增效作用；當理論值=實際值時，表現為相加作用；當理論值>實際值時，表現為拮 抗作用。
[0057]表1苯甲酰胺類殺菌劑與解淀粉芽孢桿菌對煙草黑脛病菌菌絲生長的抑制效果
[0058]
[0059] 從表1可以看出，相較化學殺菌劑或者解淀粉芽孢桿菌對煙草黑脛病菌的抑制效 果，菌藥組合物表現出協同增效作用。
[0060] 2、菌藥制劑對煙草黑脛病菌的溫室藥效試驗
[0061] 通過溫室接種煙草黑脛病菌，并噴施實施例6~9制備的菌藥制劑，具體方法如下： 參照董瑜的方法制備菌谷接種物，將20個直徑5mm的菌餅加入500g滅菌的谷子中，28 °C培養 14d，混合均勻后備用（董瑜.防治煙草黑脛病緩釋型殺菌劑研究[D].中國農業科學院， 2015);將中煙100煙苗種植在10 X 10cm的營養缽中，營養土與蛭石的比例為1:1，待煙苗長 至6~7片真葉時，進行藥劑灌根處理，每個營養缽加藥液50mL，每個處理5株煙苗，以不施加 藥劑、加50mL清水的處理作為對照。試驗設三次重復，施藥3d后于煙株根部接種菌谷10g/ 株，施藥7d后進行病害調查，按照以下公式計算防治效果：
[0062] 防治效果（％ )=(對照病情指數-處理病情指數)/對照病情指數X 100%。
[0063] 煙草黑脛病分級標準參照中華人民共和國煙草行業標準(YC/T39-1996)，試驗結 果見下表2。表2中，72%甲霜?錳鋅可濕性粉劑購自浙江禾本科技有限公司，687.5g/L銀法 利(氟菌?霜霉威)購自拜耳公司，解淀粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌劑參照專利(公告號 CN102925393B)【具體實施方式】中方法制備，以上均為對照組。
[0064] 表2菌藥制劑對煙草黑脛病的防治效果
[0065]
[0066] 從表2可以看出，實施例6~9中菌藥制劑對煙草黑脛病均具有優異的防治效果，防 效達80%以上，優于市售的化學藥劑及解淀粉芽孢桿菌菌劑，為黑脛病的防治提供了新型 備選藥劑，通過與市售藥劑輪換使用，可降低抗藥性的產生。
【主權項】
1. 菌藥組合物，其特征在于：由苯甲酰胺類殺菌劑和生防菌菌粉組成，以質量比計，苯 甲酰胺類殺菌劑:生防菌菌粉=1~10:1~10,菌粉中活菌數不低于10 6cfU/g。2. 根據權利要求1所述的菌藥組合物，其特征在于:所述苯甲酰胺類殺菌劑選自氟吡菌 胺、苯酰菌胺中的任意一種或兩種。3. 根據權利要求1或2所述的菌藥組合物，其特征在于:所述生防菌為解淀粉芽孢桿菌 ZY-9-13,保藏編號:CGMCC No.6162。4. 包含如權利要求1~3中任一項所述菌藥組合物的菌藥制劑。5. 根據權利要求4所述的菌藥制劑，其特征在于:還包含一種或多種農藥學上可接受的 助劑。6. 如權利要求1~3中任一項所述菌藥組合物在防治煙草根結線蟲和/或煙草黑脛病中 的應用。7. 如權利要求4或5所述菌藥制劑在防治煙草根結線蟲和/或煙草黑脛病中的應用。
【文檔編號】A01N43/40GK106035381SQ201610509320
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年6月27日
【發明人】牟文君, 宋紀真, 薛超群, 奚家勤, 胡利偉, 張艷玲, 孟慶華, 劉陽, 郭建華, 董洪旭
【申請人】中國煙草總公司鄭州煙草研究院