一種采用白及種子進行組培育種的技術的制作方法
【專利摘要】本發明公開一種采用白及種子進行組培育種的技術，包括誘導培養基、增殖培養基和生根壯苗培養基，所述誘導培養基配方包括有：1/2MS、NAA0.5mg/L、蔗糖30g/L、瓊脂5.5g/L或者1/2MS、6?BA1.0mg/L、蔗糖30g/L、瓊脂5.5g/L，pH5.8；所述增殖培養基配方包括有：MS+6?BA3.0mg/L、NAA0.5mg/L、蔗糖30g/L、瓊脂5.5g/L或者MS+6?BA4.0mg/L、NAA0.5mg/L、蔗糖30g/L、瓊脂5.5g/L，pH5.8；所述生根壯苗培養基配方包括有：1/2MS、NAA0.4mg/L、IBA0.6mg/L、活性炭1.0g/L、蔗糖30g/L、瓊脂5.5g/L，pH5.8；該采用白及種子進行組培育種的技術具有種子萌發率高，增殖倍數高，生根快、多、粗壯，移栽成活率高，容易實現工業化的優點。
【專利說明】
一種采用白及種子進行組培育種的技術
技術領域
[0001] 本發明具體涉及一種采用白及種子進行組培育種的技術。
【背景技術】
[0002] 白及，拉丁學名【Bletilla striata(Thunb. )Reichb.f.】，為蘭科白及屬植物，另lj 名：白根、地螺絲、羊角七。具有補肺止血、消腫生肌等功能的常用中藥。主治肺結核咳血、支 氣管擴張咯血、胃潰瘍吐血、尿血、便血等癥;外用治外傷出血、燒燙傷、手足皸裂等癥。白及 止血效果很好，用白及做的膠膜塊可用于肝脾手術貼在傷口處，代替血鉗子，效果非常好， 具有快速凝血作用，多用于外科手術。主產于四川、云南、陜西、甘肅等省，全國各地有栽培。
[0003] 白及多為野生，人工種植較少，主要是因為其很難通過種子繁殖進行大批量育苗， 但白及作為名貴中藥，近年來越來越多的應用到醫藥領域，目前的白及種植現狀已不適應 發展的需求;國內對白及的繁殖技術研究頗多。
[0004] 目前，現有的采用白及種子進行組培育種的技術不能實現工業化，培養基太單一， 組培苗成活率較低，難以煉苗或移栽。
【發明內容】
[0005] 本發明要解決的技術問題是提供一種種子萌發率高，增殖倍數高，生根快、多、粗 壯，移栽成活率高，容易實現工業化的采用白及種子進行組培育種的技術。
[0006] 為解決上述問題，本發明采用如下技術方案：
[0007] -種采用白及種子進行組培育種的技術，包括誘導培養基、增殖培養基和生根壯 苗培養基，所述誘導培養基配方包括有：1/2MS、NAA0.5mg/L、蔗糖30g/L、瓊脂5.5g/L或者1/ 2MS、6-BA1. Omg/L、蔗糖30g/L、瓊脂5.5g/L，pH5.8 ;所述增殖培養基配方包括有：1^+6_ BA3 · 0mg/L、NAA0 · 5mg/L、鹿糖30g/L、瓊脂5 · 5g/L或者MS+6-BA4.0mg/L、NAA0 · 5mg/L、鹿糖 30g/L、瓊脂5.5g/L，pH5.8 ;所述所述生根壯苗培養基配方包括有：1/2MS、NAA0.4mg/L、 IBAO · 6mg/L、活性炭 1 · Og/L、鹿糖 30g/L、瓊脂 5 · 5g/L，pH5 · 8。
[0008] 所述的采用白及種子進行組培育種的技術，其特征在于:包括如下步驟：
[0009] 1)引種：選取健壯、無病蟲害危害的野生白及蒴果，先用75%的酒精表面消毒 lmin，再用O.l·%的升汞消毒 12min，之后用無菌水沖洗4-5次，再用無菌濾紙吸干果莢表皮 水分，在超凈工作臺上用已經滅菌的手術刀把果莢從中切開，取出種子，備用；
[0010] 2)白及種子萌發培養：用無菌鑷子將取出的種子均勻抖落在誘導培養基上，蓋上 瓶蓋，做好標記后，放在培養室中光照培養，培養溫度25°C，光照度25001x，光照12h/d;
[0011] 3)增殖培養:將步驟2)誘導出的幼苗接種到增殖培養基中，培養溫度25°C，光照度 25001x，光照 12h/d;
[0012] 4)生根培養:將步驟3)得到的高度達到2cm的白及增殖苗分為單株，接種到生根壯 苗培養基中，放在培養室中光照培養，培養溫度25°C，光照度25001x，光照12h/d;
[0013] 5)煉苗：生根培養35-40天，待每株有須根8根以上時轉移至自然環境中煉苗5-10 天。
[0014] 6)移栽：將煉苗后的白及移栽到大田，大田的土壤條件為：有機質含量在20%以 上，濕度為20-25 % ;交通便利，灌溉方便;移栽要求:帶土移栽，移栽后蓋黑色地膜；
[0015] 7)田間管理:及時追肥，中耕除草，使用殺蟲殺菌劑防治地下害蟲和土傳病害;所 述殺蟲劑為0.06%噻蟲胺顆粒劑，畝用量20-25kg;所述殺菌劑為15%惡霉靈水劑，畝用量 300-500ml，滴管施藥。
[0016] 本發明的有益效果是：由于采用誘導培養基、增殖培養基和生根壯苗培養基，能夠 有效的提高了移栽成活率，減低培養基成本；由于只需經過白及種子萌發培養、增值培養和 生根培養三個過程的控制，就可達到煉苗移栽，培養過程比較簡單，且成活率高；同時易實 現工業化生產，提高了白及資源可持續性利用程度。
【具體實施方式】
[0017] 實施例一：
[0018] -種采用白及種子進行組培育種的技術，包括誘導培養基、增殖培養基和生根壯 苗培養基，所述誘導培養基配方包括有 ：1/215、財40.511^/1、蔗糖3(^/1^、瓊脂5.58/1^， pH5 · 8;所述增殖培養基配方包括有:MS+6-BA3 · Omg/L、ΝΑΑ0 · 5mg/L、蔗糖30g/L、瓊脂5 · 5g/ L，pH5.8;所述所述生根壯苗培養基配方包括有：1/2MS、NAAO . 4mg/L、IBAO. 6mg/L、活性炭 1 · Og/L、蔗糖 30g/L、瓊脂 5 · 5g/L，pH5 · 8。
[0019] 所述的采用白及種子進行組培育種的技術，其特征在于:包括如下步驟：
[0020] 1)引種：選取健壯、無病蟲害危害的野生白及蒴果，先用75%的酒精表面消毒 lmin，再用O.l·%的升汞消毒12min，之后用無菌水沖洗4-5次，再用無菌濾紙吸干果莢表皮 水分，在超凈工作臺上用已經滅菌的手術刀把果莢從中切開，取出種子，備用；
[0021] 2)白及種子萌發培養：用無菌鑷子將取出的種子均勻抖落在誘導培養基上，蓋上 瓶蓋，做好標記后，放在培養室中光照培養，培養溫度25°C，光照度25001x，光照12h/d;
[0022] 3)增殖培養:將步驟2)誘導出的幼苗接種到增殖培養基中，培養溫度25°C，光照度 25001x，光照 12h/d;
[0023] 4)生根培養:將步驟3)得到的高度達到2cm的白及增殖苗分為單株，接種到生根壯 苗培養基中，放在培養室中光照培養，培養溫度25°C，光照度25001x，光照12h/d;
[0024] 5)煉苗：生根培養35-40天，待每株有須根8根以上時轉移至自然環境中煉苗5-10 天。
[0025] 6)移栽：將煉苗后的白及移栽到大田，大田的土壤條件為：有機質含量在20%以 上，濕度為20-25 % ;交通便利，灌溉方便;移栽要求:帶土移栽，移栽后蓋黑色地膜；
[0026] 7)田間管理:及時追肥，中耕除草，使用殺蟲殺菌劑防治地下害蟲和土傳病害;所 述殺蟲劑為0.06%噻蟲胺顆粒劑，畝用量20-25kg;所述殺菌劑為15%惡霉靈水劑，畝用量 300-500ml，滴管施藥。
[0027] 實施例二：
[0028] -種采用白及種子進行組培育種的技術，包括誘導培養基、增殖培養基和生根壯 苗培養基，所述誘導培養基配方包括有：1/21^、6-841.〇11^/1、蔗糖3(^/1、瓊脂5.58/^， pH5 · 8;所述增殖培養基配方包括有:MS+6-BA4 · 0mg/L、ΝΑΑ0 · 5mg/L、蔗糖30g/L、瓊脂5 · 5g/ L，pH5.8;所述所述生根壯苗培養基配方包括有：1/2MS、NAAO . 4mg/L、IBAO. 6mg/L、活性炭 1 · Og/L、蔗糖 30g/L、瓊脂 5 · 5g/L，pH5 · 8。
[0029] 所述的采用白及種子進行組培育種的技術，包括如下步驟：
[0030] 1)引種：選取健壯、無病蟲害危害的野生白及蒴果，先用75%的酒精表面消毒 lmin，再用O.l·%的升汞消毒12min，之后用無菌水沖洗4-5次，再用無菌濾紙吸干果莢表皮 水分，在超凈工作臺上用已經滅菌的手術刀把果莢從中切開，取出種子，備用；
[0031] 2)白及種子萌發培養：用無菌鑷子將取出的種子均勻抖落在誘導培養基上，蓋上 瓶蓋，做好標記后，放在培養室中光照培養，培養溫度25°C，光照度25001x，光照12h/d;
[0032] 3)增殖培養:將步驟2)誘導出的幼苗接種到增殖培養基中，培養溫度25°C，光照度 25001x，光照 12h/d;
[0033] 4)生根培養:將步驟3)得到的高度達到2cm的白及增殖苗分為單株，接種到生根壯 苗培養基中，放在培養室中光照培養，培養溫度25°C，光照度25001x，光照12h/d;
[0034] 5)煉苗：生根培養35-40天，待每株有須根8根以上時轉移至自然環境中煉苗5-10 天。
[0035] 6)移栽：將煉苗后的白及移栽到大田，大田的土壤條件為：有機質含量在20%以 上，濕度為20-25 % ;交通便利，灌溉方便;移栽要求:帶土移栽，移栽后蓋黑色地膜；
[0036] 7)田間管理:及時追肥，中耕除草，使用殺蟲殺菌劑防治地下害蟲和土傳病害;所 述殺蟲劑為0.06%噻蟲胺顆粒劑，畝用量20-25kg;所述殺菌劑為15%惡霉靈水劑，畝用量 300-500ml，滴管施藥。
[0037] 實施例三：
[0038] -種采用白及種子進行組培育種的技術，包括誘導培養基、增殖培養基和生根壯 苗培養基，所述誘導培養基配方包括有 ：1/215、財40.511^/1、蔗糖3(^/1^、瓊脂5.58/1^， pH5 · 8;所述增殖培養基配方包括有:MS+6-BA4 · Omg/L、ΝΑΑ0 · 5mg/L、蔗糖30g/L、瓊脂5 · 5g/ L，pH5.8;所述所述生根壯苗培養基配方包括有：1/2MS、NAAO . 4mg/L、IBAO. 6mg/L、活性炭 1 · 0g/L、蔗糖 30g/L、瓊脂 5 · 5g/L，pH5 · 8。
[0039] 所述的采用白及種子進行組培育種的技術，包括如下步驟：
[0040] 1)引種：選取健壯、無病蟲害危害的野生白及蒴果，先用75%的酒精表面消毒 lmin，再用O.l·%的升汞消毒12min，之后用無菌水沖洗4-5次，再用無菌濾紙吸干果莢表皮 水分，在超凈工作臺上用已經滅菌的手術刀把果莢從中切開，取出種子，備用；
[0041] 2)白及種子萌發培養：用無菌鑷子將取出的種子均勻抖落在誘導培養基上，蓋上 瓶蓋，做好標記后，放在培養室中光照培養，培養溫度25°C，光照度25001x，光照12h/d;
[0042] 3)增殖培養:將步驟2)誘導出的幼苗接種到增殖培養基中，培養溫度25°C，光照度 25001x，光照 12h/d;
[0043] 4)生根培養:將步驟3)得到的高度達到2cm的白及增殖苗分為單株，接種到生根壯 苗培養基中，放在培養室中光照培養，培養溫度25°C，光照度25001x，光照12h/d;
[0044] 5)煉苗:生根培養35-40天，待每株有須根8根以上時轉移至自然環境中煉苗5-10 天。
[0045] 6)移栽：將煉苗后的白及移栽到大田，大田的土壤條件為：有機質含量在20%以 上，濕度為20-25 % ;交通便利，灌溉方便;移栽要求:帶土移栽，移栽后蓋黑色地膜；
[0046] 7)田間管理:及時追肥，中耕除草，使用殺蟲殺菌劑防治地下害蟲和土傳病害;所 述殺蟲劑為0.06%噻蟲胺顆粒劑，畝用量20-25kg;所述殺菌劑為15%惡霉靈水劑，畝用量 300-500ml，滴管施藥。
[0047] 實驗例：
[0048] 以下各組試驗，提供如下不同培養階段培養基配方作對比試驗，培養條件相同， 即：培養溫度，光照度，光照時間在各培養階段相同；實驗時間為2個月。
[0049] 實驗組1:實施例一的采用白及種子進行組培育種的技術所用的方法；
[0050] 實驗組2:實施例二的采用白及種子進行組培育種的技術所用的方法；
[0051] 實驗組3:實施例三的采用白及種子進行組培育種的技術所用的方法；
[0052] 對照組1:除省略步驟2)之外，按實施例一相同的實施方式進行實施；
[0053] 對照組2:除省略步驟3)之外，按實施例二相同的實施方式進行實施；
[0054]對照組3:除省略步驟4)之外，按實施例三相同的實施方式進行實施；
[0055] 表一:對比實驗結果：
[0056]
?〇〇57?~由表1表明接種2個月后，采用誘導培養基、增殖培養基和生根壯苗培養基可使培_ 養成活率提高90%以上，甚至可達到97%，效果佳，容易實現工業化，具有較好的應用前景。 [0058]本發明的有益效果是：由于采用誘導培養基、增殖培養基和生根壯苗培養基，能夠 有效的提高了移栽成活率，減低培養基成本；由于只需經過白及種子萌發培養、增值培養和 生根培養三個過程的控制，就可達到煉苗移栽，培養過程比較簡單，且成活率高；同時易實 現工業化生產，提高了白及資源可持續性利用程度。
[0059]以上所述，僅為本發明的【具體實施方式】，但本發明的保護范圍并不局限于此，任何 不經過創造性勞動想到的變化或替換，都應涵蓋在本實用新保護范圍為準。
【主權項】
1. 一種采用白及種子進行組培育種的技術，其特征在于:包括誘導培養基、增殖培養基 和生根壯苗培養基，所述誘導培養基配方包括有 ：1/21^、財40.511^/1、蔗糖3(^/^、瓊脂 5.5g/L或者1 /2MS、6-BA1. Omg/L、蔗糖30g/L、瓊脂5.5g/L，pH5.8;所述增殖培養基配方包括 有:MS+6-BA3 · 0mg/L、NAA0 · 5mg/L、蔗糖 30g/L、瓊脂 5 · 5g/L 或者 MS+6-BA4 · 0mg/L、NAA0 · 5mg/ L、蔗糖30g/L、瓊脂5.5g/L，pH5.8;所述生根壯苗培養基配方包括有：1/2MS、NAA0.4mg/L、 IBAO · 6mg/L、活性炭 1 · Og/L、鹿糖 30g/L、瓊脂 5 · 5g/L，pH5 · 8。2. 如權利要求1所述的采用白及種子進行組培育種的技術，其特征在于：包括如下步 驟： 1) 引種:選取健壯、無病蟲害危害的野生白及蒴果，先用75%的酒精表面消毒lmin，再 用0.1 %的升汞消毒12min，之后用無菌水沖洗4-5次，再用無菌濾紙吸干果莢表皮水分，在 超凈工作臺上用已經滅菌的手術刀把果莢從中切開，取出種子，備用； 2) 白及種子萌發培養:用無菌鑷子將取出的種子均勻抖落在誘導培養基上，蓋上瓶蓋， 做好標記后，放在培養室中光照培養，培養溫度25°C，光照度25001x，光照12h/d; 3) 增殖培養：將步驟2)誘導出的幼苗接種到增殖培養基中，培養溫度25 °C，光照度 25001x，光照 12h/d; 4) 生根培養:將步驟3)得到的高度達到2cm的白及增殖苗分為單株，接種到生根壯苗培 養基中，放在培養室中光照培養，培養溫度25°C，光照度25001x，光照12h/d; 5) 煉苗:生根培養35-40天，待每株有須根8根以上時轉移至自然環境中煉苗5-10天。 6) 移栽:將煉苗后的白及移栽到大田，大田的土壤條件為：有機質含量在20%以上，濕 度為20-25 % ;交通便利，灌溉方便;移栽要求:帶土移栽，移栽后蓋黑色地膜； 7) 田間管理:及時追肥，中耕除草，使用殺蟲殺菌劑防治地下害蟲和土傳病害;所述殺 蟲劑為0.06 %噻蟲胺顆粒劑，畝用量20-25kg;所述殺菌劑為15 %惡霉靈水劑，畝用量300-500ml，滴管施藥。
【文檔編號】A01H4/00GK105993964SQ201610620391
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年7月29日
【發明人】徐志明
【申請人】衢州康源生物科技有限公司