一種利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法
【專利摘要】本發明涉及生物防治領域中抑制病原菌的方法，尤其涉及一種利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法，包括：一、制備PDA平板，即將融化的PDA培養基冷卻倒板，直至培養基凝固；二、用無菌的打孔器在待測灰葡萄孢菌平板上取菌塊，并放入步驟一中的PDA平板內；三、將無菌的濾紙片放在PDA平板蓋子的內表面，在濾紙片上加入薰衣草精油；四、蓋好所述PDA平板的蓋子并將其封口，將所述PDA平板倒置，放入生化培養箱中培養，觀察測量菌落直徑并計算抑菌效果；本發明提供的薰衣草精油熏蒸法處理灰葡萄孢菌，以低劑量，達到對薰衣草精油更有效的利用，同時降低果蔬采摘后由病原菌造成的損失；該發明操作簡單易行、低劑量、高效能，具有良好的應用景及市場價值。
【專利說明】
一種利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法
技術領域
[0001] 本發明屬于生物防治領域，涉及一種利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法，具 體涉及薰衣草精油在抑制灰葡萄孢菌中的應用。
【背景技術】
[0002] 葡萄是一種重要的經濟作物，在農業經濟中的占主導地位。中國作為主要葡萄生 產國之一，種植面積和產量的居世界前列。但是，灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)作為一種 廣寄主性的、能夠引起200多種已知植物灰霉病的壞死營養型病原真菌，成為葡萄采后主要 的病原微生物，嚴重的縮短了葡萄采后的貯藏壽命，造成嚴重的經濟損失，因此精油作為一 種天然無公害的抗菌素而被人們廣泛的挖掘和研究。
[0003] 薰衣草精油，存在于芳香植體內的天然化合物，主要含有萜類化合物，包括芳樟 醇、乙酸芳樟酯、桉樹腦、B-羅勒烯(包括順式和反式）、萜-4-醇和樟腦。目前，其主要以干品 或精油形式應用于臨床和化妝品行業。它可以被用于醫學、食品和化妝品行業，具有殺菌、 抗真菌、松弛平滑肌、鎮靜、抗抑郁等作用，同時對灰葡萄孢菌引起的灰霉病的病害也有有 效的抑制作用。
[0004]傳統上人們主要對薰衣草頭狀花序部分的精油進行分析，最近的研究焦點轉移到 分析花的"香味"上，即只分析易揮發性成分而不是全部精油。對這些植物進行典型香味分 析的結果證實，法國薰農草和綿毛薰衣革的精油中樟腦含量較高，昆蟲驅避作用明顯;而狹 葉薰衣草和齒狀薰衣草精油中的樟腦含量則很低（<2% )。低樟腦含量的薰衣草屬植物中 往往萜烯（口水芹烯)和倍半萜烯(石竹烯）的含量較高。不同種薰衣草香味的微小差別是由 于所含精油成分的差異，特別是芳樟醇、乙酸芳樟酯和各種倍半萜的組成與含量不同，這種 差異將直接影響薰衣草精油對灰葡萄孢菌引起的灰霉病的抑制作用，而由于其組分的化學 及物理性質，使采用直接接觸和熏蒸法的抑制效果明顯不同。
【發明內容】
[0005] 本發明的目的是克服現有技術中利用直接接觸法抑制灰葡萄孢菌中存在的抑制 率低的問題，提供一種利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法。
[0006] 為了實現上述目的，本發明所采用的技術方案是：一種利用薰衣草精油抑制灰葡 萄孢菌的方法，用薰衣草精油對灰葡萄孢菌進行熏蒸，所述熏蒸是將薰衣草精油與灰葡萄 孢菌共置于同一密閉空間中。
[0007] 上述一種利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法，所述用薰衣草精油對灰葡萄孢 菌進行熏蒸，具體包括如下步驟： 步驟一、制備PDA平板，即將融化的PDA培養基冷卻倒板，直至PDA培養基凝固； 步驟二、用無菌的打孔器在待測灰葡萄孢菌平板上取菌塊，并放入所述步驟一中的PDA 平板內； 步驟三、將無菌的濾紙片放入所述roA平板蓋子的內表面中并在濾紙片上加入薰衣草 精油； 步驟四、蓋好所述PDA平板的蓋子并將其封口，將所述PDA平板倒置； 步驟五、將所述倒置后的PDA平板放入生化培養箱中培養，觀察抑菌效果。
[0008] 上述一種利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法，所述步驟二中的待測病原菌在 培養七天后方進行取菌塊動作，所述菌塊的直徑為5mm。
[0009] 上述一種利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法，所述步驟五中的生化培養箱的 溫度為28 °C，培養時間為7天。
[0010] 上述一種利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法，所述步驟一中的融化的PDA培 養基冷卻倒板溫度為45°C至60°C。
[0011] 本發明的有益效果:本發明提供的這種利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法， 薰衣草精油熏蒸法處理灰葡萄孢菌，以低劑量達到對薰衣草精油更有效的利用，同時降低 果蔬采摘后由病原菌造成的損失；薰衣草精油作為一種廣譜高效、抑菌性強、安全無毒、性 能穩定的天然抑菌物質，自然成為生物防治研究的重要內容;該發明的優點在于:操作簡單 易行、低劑量、高效能，具有良好的應用前景及市場價值。
【附圖說明】
[0012] 下面通過附圖并結合實施例具體描述本發明，本發明的優點和實現方式將會更加 明顯，其中附圖所示內容僅用于對本發明的解釋說明，而不構成對本發明的任何意義上的 限制。
[0013] 圖1是本發明中薰衣草精油的熏蒸法和直接接觸法處理灰葡萄孢菌的精油用量與 抑制率的對比折線圖。
【具體實施方式】
[0014] 下面對本發明的實施例作詳細說明：本實施例在以本發明技術方案為前提下進行 實施，給出了詳細的實施方式和具體的操作過程。應當指出的是，對本領域的普通技術人員 來說，在不脫離本發明構思的前提下，還可以做出若干變型和改進，這些都屬于本發明保護 范圍。
[0015] 實施例1: 薰衣草精油熏蒸對灰葡萄孢菌菌落的抑制：用薰衣草精油對灰葡萄孢菌進行熏蒸，所 述熏蒸是將薰衣草精油與灰葡萄孢菌置于同一密閉空間，所述薰衣草精油對灰葡萄孢菌進 行熏蒸，具體包括如下步驟： 步驟一、制備兩組roA平板，即將融化的TOA培養基冷卻至50°C倒板，直至PDA培養基凝 固，兩組PDA平板分別命名為A組PDA平板和B組PDA平板，每組中設置三個PDA平板，分別為 A1、A2、A3和B1、B2、B3; 步驟二、用無菌的打孔器在培養7天的待測灰葡萄孢菌平板上打取六塊直徑均為5mm的 菌塊，并分別放入所述步驟一中的兩組PDA平板內； 步驟三、取六片相同規格的無菌濾紙片，并分別放在所述兩組PDA平板的六個蓋子的內 表面； 步驟四、在所述步驟三中的A組PDA平板內的三片濾紙片上各加入lul薰衣草精油，B組 PDA平板內的三片濾紙片上不加薰衣草精油； 步驟五、蓋好兩組TOA平板的蓋子并將其封口，將兩組TOA平板倒置，放入28°c的生化 培養箱中培養； 步驟六、培養7天后，測量A組PDA平板內Al、A2、A3和B組PDA平板內Bl、B2、B3中各自的菌 落直徑，通過抑制率公式分別對應計算抑制率，和抑制率的平均值，抑制率公式如下： 抑制率=(c-t)/cX100%， 其中，t為A組PDA平板中的菌落直徑，即經過薰衣草精油熏蒸處理后的菌落直徑，c為B 組PDA平板中菌落直徑，即沒有經過薰衣草精油熏蒸處理的菌落直徑。
[0016] 實施例2: 在實施例1的基礎上，另制備四組PDA平板，每組均設置三個PDA平板，與實施例1不同之 處在，步驟四中，另制備的四組PDA平板中濾紙片上加入的薰衣草精油分別為2ul、3ul、4ul、 5ul，培養7天后分別與實施例1中的B組PDA平板進行對比，并分別計算出另制備的四組PDA 平板中每一組分別對應的抑制率和抑制率的平均值，五組PDA平板的試驗結果如表1所示：
表1 實施例3: 直接接觸法處理灰葡萄孢菌的具體步驟如下： 融化的roA培養基冷卻到50°C左右，加入一定體積的薰衣草精油到培養基中使其充分 混合并倒板，制作5組PDA平板，其濃度分別為100ul/L、200ul/L、300ul/L、400ul/L、500ul/ L，每一濃度均準備三個相同的PDA平板，待PDA平板內的培養基凝固后，在每個PDA平板中央 放入直徑均為5mm的灰葡萄孢菌菌塊，另準備三個培養基中不添加薰衣草精油的PDA平板為 對照，之后將所有TOA平板放入28°C生化培養箱中培養7天后觀察抑菌效果，以實施例1步驟 六中的抑制率公式計算每一組抑制率和抑制率平均值，試驗結果如表2所示：
表2 試驗結論:熏蒸法中每個培養基的體積為30ml，添加薰衣草精油分別為lul、2ul、3ul、 4ul、5ul;直接接觸法中薰衣草精油加入培養基中配成濃度分別為100ul/L、200ul/L、 300ul/L、400ul/L、500ul/L的Η)Α平板，每個PDA平板的體積為30ml，經換算每個Η)Α平板內 添加薰衣草精油分別為3ul、6ul、9ul、12ul、15ul，即直接接觸法添加薰衣草精油為熏蒸法 的三倍，兩者抑菌效果對比折線圖如圖1所示，經對比可知薰衣草精油熏蒸法能夠以低劑 量，高功效達到抑菌效果。
[0017]以上內容是結合具體的優選實施方式對本發明所作的進一步詳細說明，不能認定 本發明的具體實施只局限于這些說明。對于本發明所屬技術領域的普通技術人員來說，在 不脫離本發明構思的前提下，還可以做出若干簡單推演或替換，都應當視為屬于本發明的 保護范圍。
【主權項】
1. 一種利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法，其特征在于：用薰衣草精油對灰葡萄 孢菌進行熏蒸，所述熏蒸是將薰衣草精油與灰葡萄孢菌共置于同一密閉空間中。2. 根據權利要求1所述的一種利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法，其特征在于:所 述用薰衣草精油對灰葡萄孢菌進行熏蒸，具體包括如下步驟： 步驟一、制備PDA平板，即將融化的PDA培養基冷卻倒板，直至PDA培養基凝固； 步驟二、用無菌的打孔器在待測灰葡萄孢菌平板上取菌塊，并放入所述步驟一中的HM 平板內； 步驟三、將無菌的濾紙片放在所述PDA平板蓋子的內表面，在濾紙片上加入薰衣草精 油； 步驟四、蓋好所述PDA平板的蓋子并將其封口，將所述PDA平板倒置； 步驟五、將所述倒置后的PDA平板放入生化培養箱中培養，觀察抑菌效果。3. 根據權利要求2所述的一種利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法，其特征在于:所 述步驟二中的待測灰葡萄孢菌在培養七天后方進行取菌塊動作，所述菌塊的直徑為5mm。4. 根據權利要求2所述的一種利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法，其特征在于:所 述步驟五中的生化培養箱的溫度為28°C，培養時間為7天。5. 根據權利要求2所述的一種利用薰衣草精油抑制灰葡萄孢菌的方法，其特征在于:所 述步驟一中的融化的PDA培養基冷卻倒板溫度為45 °C至60 °C。
【文檔編號】A01N65/22GK105901023SQ201610291164
【公開日】2016年8月31日
【申請日】2016年5月5日
【發明人】任雪艷, 宋丹丹, 孔慶軍, 土麗丹, 江國山, 翟欣, 尹雪峰
【申請人】陜西師范大學