提高蝦夷扇貝高溫耐受的雜交育種方法
【專利摘要】本發明公開了一種可提高蝦夷扇貝高溫耐受的雜交育種方法，是以蝦夷扇貝雌貝與長肋日月貝作為親貝，在水溫18~19℃的條件下授精，精子、卵細胞受精率高，胚胎和幼蟲發育速度快，發育到D形幼蟲和稚貝的時間均顯著縮短，可提供生長快、抗逆性強的雜交貝苗種，最終獲得的扇貝以及子代雜交扇貝適應高溫環境的能力有所增強，在海水達到26℃仍沒有出現死亡現象，可擴大蝦夷扇貝的養殖范圍。
【專利說明】
提高蝦夷扇貝高溫耐受的雜交育種方法
技術領域
[0001]本發明涉及海產貝類遺傳育種領域，特別是一種提高蝦夷扇貝高溫耐受的雜交育種方法。
【背景技術】
[0002]4下夷扇貝(Pai1f1joecie/? jessoe/jsis)個體大，生長快，系我國北方沿海主要養殖經濟貝類。20世紀80年代，已成功將其自日本引入中國并實現人工擴繁技術。但由于蝦夷扇貝原產于日本北海道，其生活水溫不超過23 °C，如人工養殖水溫達到23 °C時就會發生大規模死亡現象，給養殖戶造成了巨大經濟損失，也正因為此，蝦夷扇貝目前只在遼寧大連長海等沿海養殖。
[0003]長肋日月貝jO_/et/_ro/3ecZies)隸屬雙殼綱(Bivalvia)、珍珠貝目(Pter1ida)、扇貝科(Pectinidae)、日月貝屬。長肋日月貝個體大、生長快、營養豐富、肉味鮮美，其干制品為名貴海珍品“帶子”。該貝雌雄同體，為暖水種，作為我國傳統經濟貝類，主要分布在海南、廣東沿海等區域。
[0004]蝦夷扇貝與長肋日月貝在分類上屬不同屬，不同種，長期地理隔離使二者在生物學方面存在顯著差異。迄今為止，還沒有關于蝦夷扇貝和長肋日月貝遠緣雜交育種的相關報道。
【發明內容】
[0005]本發明是為了解決現有技術所存在的上述不足，提出一種提高蝦夷扇貝高溫耐受的雜交育種方法，
本發明的技術解決方案是:一種提高蝦夷扇貝高溫耐受的雜交育種方法，其特征是按如下步驟進行:
a.選取長肋日月貝和蝦夷扇貝雌貝作為雜交親貝；
b.人工培育使雜交親貝性腺同時成熟；
c.催產得到蝦夷扇貝雌貝卵子和長肋日月貝精子；
d.將卵子和精子進行交配，產生受精卵并將受精卵孵化至D形幼蟲；
e.將D形幼蟲培育至稚貝。
[0006]當長肋日月貝生長海域海水升至24?25°C，選取2齡以上的長肋日月貝為雜交親貝；當蝦夷扇貝生長海域海水升至2?3°C，選取2齡以上的蝦夷扇貝雌貝為雜交親貝。
[0007]將雜交親貝洗凈消毒后，分別放入不同的培育池中培養，培養密度均為10?15個/m3水體，早晚各投喂一次金藻和新月菱形藻混合藻及酵母粉與鼠尾藻粉發酵液，所述混合藻每天投喂量為10?15萬個/ml水體，所述發酵液添加量為5?8 ppm/m3水體;長肋日月親貝的培育水溫從24?25°C開始，每天降溫0.5 °C，直至降溫至18±0.5 °C，恒溫培育至性腺成熟，蝦夷扇貝親貝的培育水溫從2?3°C開始，每天升溫0.5 °C，直至升溫至7±0.50C，恒溫培育至性腺成熟。
[0008]將所述性腺成熟的雜交親貝在常溫條件下陰干2h，再流水刺激雜交親貝0.5?Ih，將蝦夷扇貝雌貝放入紫外線照射的12°C海水中，將長肋日月貝放入紫外線照射的20°C海水中，分別收集蝦夷扇貝所產的卵和長肋日月貝排出的精子。
[0009]所述收集長肋日月貝排出的精子是當長肋日月貝親貝排精時，將排精的長肋日月貝親貝浸入盛裝有紫外線照射20°C的海水容器中，長肋日月貝親貝繼續排精5?10 min,收集精子。
[0010]如向浸有長肋日月貝的紫外線照射的20°C海水中加氫氧化鈉溶液將海水pH升高至9.0?9.2，可加速長肋日月貝親貝排精。
[0011]所述收集長肋日月貝排出的精子是通過解剖方法獲得長肋日月貝雄性生殖腺，將獲得的生殖腺通過600目篩網過濾到0.2%。氨海水燒杯中，并向燒杯中加入終濃度為0.2?0.5 ppm小牛血清活化，活化20?30 min后收集精子。
[0012]所述d步驟如下:將收集卵子中的海水溫度緩慢升至18?19°C，將收集精子中的海水溫度緩慢減至18?19°C，將長肋日月貝精子和蝦夷扇貝卵細胞按10?15:1的比例混合受精，受精前將18?19°(:海水鹽度調至33.5?34.0，受精過程中以低功率造浪栗攪動水體，使精、卵細胞分布均勻并最終形成受精卵，將受精卵在孵化池中孵化至D形幼蟲，孵化期間微充氣，每小時攪水一次。
[0013]所述e步驟如下:將所述D形幼蟲用400目篩網選優，移到培育池中充氣培養，培育池中D形幼蟲培育密度為12?15 ind/ml，培育池中海水均經三級沙濾，培育水溫18?19°C，pH為8.02?8.15，鹽度為32.3?33.1，培育池每天早晚各換水一次，每天換水量為80?150%，所述D形幼蟲開口餌料為金藻，每天投喂量為1.5?2.0萬個/ml水體，待D形幼蟲平均殼長為120 pm時，開始投喂金藻和新月菱形藻，每天金藻投喂量為2.0?2.5萬個/ml水體，每天菱形藻投喂量為1.5?2.0萬個/ml水體;待D形幼蟲平均殼長為160 ym時，在所述投喂餌料的基礎上補投扁藻，扁藻每天投喂量為0.5?1.0萬個/ml水體，直至長成到稚貝。
[0014]本發明是以蝦夷扇貝雌貝與長肋日月貝作為親貝，在水溫18?19°C的條件下授精，精子、卵細胞受精率高，胚胎和幼蟲發育速度快，發育到D形幼蟲和稚貝的時間均顯著縮短，可提供生長快、抗逆性強的雜交貝苗種，最終獲得的扇貝以及子代雜交扇貝適應高溫環境的能力有所增強，在海水達到26°C仍沒有出現死亡現象，可擴大蝦夷扇貝的養殖范圍。
【具體實施方式】
[0015]本發明提高蝦夷扇貝高溫耐受的雜交育種方法，按如下步驟進行:
a.選取長肋日月貝和蝦夷扇貝雌貝作為雜交親貝:
在3月中旬，當長肋日月貝生長海域海水升至24?25°C，選取2齡以上的長肋日月貝為雜交親貝；當蝦夷扇貝生長海域海水升至2?3°C，選取2齡以上的蝦夷扇貝雌貝為雜交親貝。
[0016]b.人工培育使雜交親貝性腺同時成熟:
將雜交親貝洗凈消毒后，分別放入不同的培育池中培養，培養密度均為10?15個/m3水體，早晚各投喂一次金藻和新月菱形藻混合藻及酵母粉與鼠尾藻粉發酵液，所述混合藻每天投喂量為10?15萬個/ml水體，所述發酵液添加量為5?8 ppm/m3水體;長肋日月親貝的培育水溫從24?25°C開始，每天降溫0.5 °C，直至降溫至18±0.5 °C，恒溫培育至性腺成熟，蝦夷扇貝親貝的培育水溫從2?3°C開始，每天升溫0.5 °C，直至升溫至7±0.5 °C，恒溫培育至性腺成熟。這樣，可保證長肋日月親貝性腺和蝦夷扇貝親貝性腺同時成熟。
[0017]c.催產得到蝦夷扇貝雌貝卵子和長肋日月貝精子:
將所述性腺成熟的雜交親貝在常溫條件下陰干2 h，再流水刺激雜交親貝0.5?I h，將蝦夷扇貝雌貝放入紫外線照射的12°C海水中，將長肋日月貝放入紫外線照射的20°C海水中，分別收集蝦夷扇貝所產的卵和長肋日月貝排出的精子，即發現長肋日月貝親貝排精時，立即將排精的長肋日月貝親貝浸入盛裝有紫外線照射20°C的海水容器中，長肋日月貝親貝可繼續排精5?10 min，收集精子。
[0018]如長肋日月貝親貝排精慢，可向浸有長肋日月貝的紫外線照射的20°C海水中加氫氧化鈉溶液將海水pH升高至9.0 - 9.2,加速長肋日月貝親貝排精。
[0019]還可以通過解剖方法獲得長肋日月貝雄性生殖腺，將獲得的生殖腺通過600目篩網過濾到0.2%。氨海水燒杯中，并向燒杯中加入終濃度為0.2?0.5 ppm小牛血清活化，活化20?30 min后收集精子。
[0020]d.將卵子和精子進行交配，產生受精卵并將受精卵孵化至D形幼蟲:
將收集卵子中的海水溫度緩慢升至18?19°C，將收集精子中的海水溫度緩慢減至18?19°C，將長肋日月貝精子和蝦夷扇貝卵細胞按10?15:1的比例混合受精，受精前將18?19°(:海水鹽度調至33.5?34.0，受精過程中以低功率造浪栗攪動水體，使精、卵細胞分布均勻并最終形成受精卵，將受精卵在孵化池中孵化至D形幼蟲，孵化期間微充氣，每小時攪水一次。
[0021]e.將D形幼蟲培育至稚貝:
將所述D形幼蟲用400目篩網選優，移到培育池中充氣培養，培育池中D形幼蟲培育密度為12?15 ind/ml，培育池中海水均經三級沙濾，培育水溫18?19°C，pHS8.02?8.15，鹽度為32.3?33.1，培育池每天早晚各換水一次，每天換水量為80?150%，所述D形幼蟲開口餌料為金藻，每天投喂量為1.5?2.0萬個/ml水體，待D形幼蟲平均殼長為120 μπι時，開始投喂金藻和新月菱形藻，每天金藻投喂量為2.0?2.5萬個/ml水體，每天菱形藻投喂量為1.5?2.0萬個/ml水體;待D形幼蟲平均殼長為160 ym時，在所述投喂餌料的基礎上補投扁藻，扁藻每天投喂量為0.5?1.0萬個/ml水體，直至長成到稚貝。而普通蝦夷扇貝幼蟲最適生長發育溫度為15.0?17.5 °C，水溫到達19.0 °C存活率明顯降低。
[0022]按照常規方法對稚貝進行培育，獲得生長快、個體大、耐高溫等優良性狀的子代雜交扇貝。當海水達到26°C仍沒有出現死亡現象，所得成貝在外觀、性狀等方面接近蝦夷扇貝，可將其擴大至山東等沿海水域養殖，擴大了蝦夷扇貝的養殖范圍。
【主權項】
1.一種提高蝦夷扇貝高溫耐受的雜交育種方法，其特征是按如下步驟進行: a.選取長肋日月貝和蝦夷扇貝雌貝作為雜交親貝； b.人工培育使雜交親貝性腺同時成熟； c.催產得到蝦夷扇貝雌貝卵子和長肋日月貝精子； d.將卵子和精子進行交配，產生受精卵并將受精卵孵化至D形幼蟲； e.將D形幼蟲培育至稚貝。2.根據權利要求1所述的提高蝦夷扇貝高溫耐受的雜交育種方法，其特征是所述a步驟如下:當長肋日月貝生長海域海水升至24?25°C，選取2齡以上的長肋日月貝為雜交親貝；當蝦夷扇貝生長海域海水升至2?3°C，選取2齡以上的蝦夷扇貝雌貝為雜交親貝。3.根據權利要求1所述的提高蝦夷扇貝高溫耐受的雜交育種方法，其特征是所述b步驟如下:將雜交親貝洗凈消毒后，分別放入不同的培育池中培養，培養密度均為10?15個/m3水體，早晚各投喂一次金藻和新月菱形藻混合藻及酵母粉與鼠尾藻粉發酵液，所述混合藻每天投喂量為10?15萬個/ml水體，所述發酵液添加量為5?8 ppm/m3水體;長肋日月親貝的培育水溫從24?25°C開始，每天降溫0.5 °C，直至降溫至18±0.5 °C，恒溫培育至性腺成熟，蝦夷扇貝親貝的培育水溫從2?3°C開始，每天升溫0.5 °C，直至升溫至7±0.5 °C，恒溫培育至性腺成熟。4.根據權利要求3所述的提高蝦夷扇貝高溫耐受的雜交育種方法，其特征是所述c步驟如下:將所述性腺成熟的雜交親貝在常溫條件下陰干2 h，再流水刺激雜交親貝0.5?I h，將蝦夷扇貝雌貝放入紫外線照射的12°C海水中，將長肋日月貝放入紫外線照射的20°C海水中，分別收集蝦夷扇貝所產的卵和長肋日月貝排出的精子。5.根據權利要求4所述的提高蝦夷扇貝高溫耐受的雜交育種方法，其特征在于:所述收集長肋日月貝排出的精子是當長肋日月貝親貝排精時，將排精的長肋日月貝親貝浸入盛裝有紫外線照射20°C的海水容器中，長肋日月貝親貝繼續排精5?10 min，收集精子。6.根據權利要求4所述的提高蝦夷扇貝高溫耐受的雜交育種方法，其特征在于:向浸有長肋日月貝的紫外線照射的20°C海水中加氫氧化鈉溶液將海水pH升高至9.0?9.2。7.根據權利要求4所述的提高蝦夷扇貝高溫耐受的雜交育種方法，其特征在于:所述收集長肋日月貝排出的精子是通過解剖方法獲得長肋日月貝雄性生殖腺，將獲得的生殖腺通過600目篩網過濾到0.2%。氨海水燒杯中，并向燒杯中加入終濃度為0.2?0.5 ppm小牛血清活化，活化20?30 min后收集精子。8.根據權利要求4、5、6、7所述的提高蝦夷扇貝高溫耐受的雜交育種方法，其特征是所述d步驟如下:將收集卵子中的海水溫度緩慢升至18?19°C，將收集精子中的海水溫度緩慢減至18?19°C，將長肋日月貝精子和蝦夷扇貝卵細胞按10?15:1的比例混合受精，受精前將18?19°C海水鹽度調至33.5?34.0,受精過程中以低功率造浪栗攪動水體，使精、卵細胞分布均勻并最終形成受精卵，將受精卵在孵化池中孵化至D形幼蟲，孵化期間微充氣，每小時攪水一次。9.根據權利要求8所述的提高蝦夷扇貝高溫耐受的雜交育種方法，其特征是所述e步驟如下:將所述D形幼蟲用400目篩網選優，移到培育池中充氣培養，培育池中D形幼蟲培育密度為12?15 ind/ml，培育池中海水均經三級沙濾，培育水溫18?19°C，pHS8.02?.8.15，鹽度為32.3?33.1，培育池每天早晚各換水一次，每天換水量為80?150%，所述D形幼蟲開口餌料為金藻，每天投喂量為1.5?2.0萬個/ml水體，待D形幼蟲平均殼長為120 μm時，開始投喂金藻和新月菱形藻，每天金藻投喂量為2.0?2.5萬個/ml水體，每天菱形藻投喂量為1.5?2.0萬個/ml水體;待D形幼蟲平均殼長為160 ym時，在所述投喂餌料的基礎上補投扁藻，扁藻每天投喂量為0.5?1.0萬個/ml水體，直至長成到稚貝。
【文檔編號】A01K61/00GK105875453SQ201610274831
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2016年4月28日
【發明人】常亞青, 寧軍號, 張偉杰, 湛垚垚, 宋堅
【申請人】大連海洋大學